CN108431229A - 糖转运蛋白修饰的酵母菌株和用于生物制品生产的方法 - Google Patents
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Abstract
描述了具有能够转运诸如麦芽酮糖的非葡萄糖的糖的异源糖转运蛋白的遗传修饰的酵母。所述异源糖转运蛋白可以是根据SEQ ID NO:44或与SEQ ID NO:44具有相似性的蛋白质。还描述了其中所述酵母能够消耗所述非葡萄糖的糖的使用酶处理的淀粉的发酵方法。所述工程改造的酵母可用于生产期望的生物制品，诸如高乙醇，其中在培养基中具有少量残余糖。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年12月17日提交的美国临时专利申请号62/268,932的优先权，所述专利申请据此以引用的方式整体并入。
序列表
在2016年12月16日创建，并且具有270千字节大小的标题为“N00309_Sequence_Listing.txt”的ASCII文本文件的全部内容以引用方式并入本文。
发明领域
本发明涉及能够消耗麦芽酮糖的遗传修饰的酵母、具有异源糖转运蛋白的遗传修饰的酵母以及用于使用遗传修饰的酵母生产乙醇的方法。
背景
通过发酵生产乙醇是熟知的工业过程。然而提高乙醇产量在技术上可能是困难的。存在各种因素使微生物在为提高乙醇产量而设计的发酵条件下生长具有挑战性。例如，发酵培养基可具有增加的底物浓度以促进乙醇生产，但这些条件可能对细胞生长具有负面影响。而且，增加的乙醇浓度和不期望的副产物的积聚可能对细胞健康不利。已选择了酵母菌株耐受这些条件，其可导致乙醇产量的提高。具体地，酵母酿酒酵母的乙醇耐受性菌株已在工业环境中用作生产乙醇的主力微生物。
发酵培养基的组分可能对乙醇生产具有重大影响。在发酵过程中，碳水化合物或碳水化合物混合物存在于培养基中。淀粉是一种广泛可得的且便宜的碳水化合物来源，并且可从各种植物来源(诸如玉米、小麦、大米、大麦等)获得。许多用于发酵的生物体不能直接代谢淀粉，或者缓慢且低效地代谢淀粉。因此，常见的是在将淀粉供给于发酵过程中之前对其进行处理，以便将其分解成生物体可容易地发酵的单糖。
通常，淀粉被水解以形成含有葡萄糖(右旋糖)的淀粉水解产物的混合物，所述葡萄糖是主要的单体糖，并且是发酵生物体优选的。淀粉水解通常使用强酸进行，并且将产生包含淀粉降解产物的组合物。然后可用碱中和组合物以提高pH。由于使用酸将淀粉完全水解成葡萄糖可能是困难且昂贵的，因此经常不运行到完成，从而产生部分水解的淀粉组合物。然后经常通过加入α-淀粉酶来处理部分水解的淀粉组合物，所述α-淀粉酶可裂解淀粉分子内部区域中的1,4-键，从而导致组合物的粘度降低。然而，即使用α-淀粉酶处理后，仍然存在一些糖低聚物。如此，可进一步用葡糖淀粉酶处理酸和α-淀粉酶处理的淀粉组合物以促进这些糖低聚物的降解。
化学和酶促处理淀粉组合物以制备发酵原料的步骤可导致形成低分子量的发酵不良的糖。例如，在遵循酸处理和然后中和组合物的条件下，可能发生低分子量糖产物的异构化。这些异构化可能导致形成诸如某些二糖的产物，这些产物不能被酵母很好地利用，或者难以转化为有用的产物。而且，葡糖淀粉酶的存在可能有助于产生低聚糖，所述低聚糖由葡糖淀粉酶将葡萄糖逆转化为葡萄糖低聚物而产生。在发酵期间，此类产物可在发酵培养基中积累并且可能损害发酵过程。
发明概要
本发明涉及发酵方法、工程改造的酵母和生物制品(诸如乙醇)的生产。本发明的方法使用包含淀粉产品(诸如部分水解的淀粉)的发酵培养基，所述淀粉产品包含一种或多种低聚糖(诸如麦芽酮糖、异麦芽糖和/或潘糖)。低聚糖可在中性pH下在部分水解的淀粉组合物中形成，或者其包含葡糖淀粉酶以形成可发酵的碳水化合物组合物。本发明的工程改造的酵母包含异源糖转运蛋白，并且能够在发酵过程期间使碳水化合物组合物发酵，同时使低聚糖的积聚最小化。
在一个实施方案中，本发明提供了一种发酵方法，其包括以下步骤：(a)提供一种发酵培养基，其包含含有麦芽酮糖的水解淀粉组合物和含有异源二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白的工程改造的酵母，其中在第一时间点，麦芽酮糖以0.5g/L或更大的第一浓度存在；以及(b)在一段时间内将碳水化合物组合物发酵至第二时间点，在此第二时间点麦芽酮糖处于第二浓度。麦芽酮糖的第二浓度小于使用确实具有异源糖转运蛋白但在其他方面与工程改造的酵母相同的酵母并且在相同的发酵条件下获得的麦芽糖的浓度。
本发明的工程改造的酵母的益处可理解为其在使用麦芽酮糖作为主要碳源的培养基中生长的能力。因此，在另一方面，本发明提供了一种包含异源糖转运蛋白的遗传修饰的酵母，其中所述酵母能够以0.02或更大的速率在改性的标准酵母培养基上生长，并且在标准条件下生长，所述改性的标准酵母培养基包含含有浓度为至少97％(重量)的麦芽酮糖的碳水化合物组合物。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种遗传修饰的Crabtree阳性酵母，其包含与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的异源多肽(其是二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白)。除异源糖转运蛋白之外，工程改造的酵母还可包含其他遗传修饰，诸如增加α-葡萄糖解糖酶(例如，细胞内异麦芽糖酶)活性的遗传修饰，和/或异源淀粉降解多肽(诸如葡糖淀粉酶)。
在实施方案中，将工程改造的酵母在用于生产乙醇的发酵方法(诸如其中乙醇在发酵培养基中以80g/L至140g/L范围内的浓度生产)中使用。
当用于发酵已用淀粉分解酶(诸如葡糖淀粉酶)处理的部分水解的淀粉组合物时，本发明的方法和工程改造的细胞可提供特别的益处。已发现低分子量的非葡萄糖的糖(诸如麦芽酮糖、异麦芽糖和潘糖)在酶处理的淀粉产品组合物中大量形成。低分子量糖(例如，麦芽酮糖等)随着DE的增加而增加。这些糖还可在具有中性pH的水解淀粉组合物中形成。已发现这些类型的糖在发酵培养基中特别是在发酵的后期不是期望的组分。这些低分子量糖不仅通过妨碍发酵，还通过与发酵产物反应而干扰产物产量。虽然可向淀粉水解产物中加入酶以将非葡萄糖的糖转化为葡萄糖，但已发现向具有高葡萄糖浓度的淀粉水解产物材料中加入这种酶往往会使所述酶不太有效。
本发明提供了一种在发酵期间有效利用这些低分子量非葡萄糖的糖(诸如麦芽酮糖)的稳健方法。本发明的工程改造的生物体可消耗存在于发酵液中的这些非葡萄糖的糖，并且防止其积聚，否则所述积聚将损害发酵过程的各个方面。此外，工程改造的细胞还可包含一种或多种遗传修饰，所述遗传修饰提供一旦转运到细胞中便促进非葡萄糖的糖转化为葡萄糖的酶。
在一个方面，本公开提供了一种发酵方法，其包括：用包含葡糖淀粉酶(GA)表达基因的遗传工程改造的酵母发酵包含葡萄糖低聚物的液体培养基，其中发酵中产生的乙醇的量在接种后36小时或更长时间为至少80g/L，发酵期间培养基的葡萄糖浓度不超过70g/L，并且与使用酵母且在接种10小时或更短时间内具有超过80g/L的葡萄糖浓度的发酵过程相比，发酵期间产生的乙醛总量减少。在一些实施方案中，遗传工程改造的酵母是本文所述的任何酵母。在一些实施方案中，发酵期间培养基的葡萄糖浓度不超过80、75、70、65、60、55、50、45或40g/L，并且与使用酵母且具有超过80、95、90、95、100或105g/L的葡萄糖浓度的发酵过程相比，发酵期间产生的乙醛总量减少。在一些实施方案中，培养基的右旋糖当量(DE)在接种5小时或更短时间内小于20、25、30、35、40、45或50。在一些实施方案中，在接种后36小时或更长时间，发酵中产生的乙醇的量为至少85、90、95、100或105g/L。在一些实施方案中，在发酵期间培养基的葡萄糖浓度不超过75、70、65、60、55、50、45、40、35、30、25或20g/L。
在一些实施方案中，与其中GA活性是1X GA活性的至少0.8倍的过程相比，发酵期间产生的乙醛的总量减少。在一些实施方案中，当二氧化碳释放速率(CER)为100mmol CO2/(L-h)或更大时，在发酵流出物气体中排放的乙醛的总量小于250、225、200、175、150、125、100或75ppm。在一些实施方案中，当二氧化碳释放速率(CER)为50或更大时，在发酵流出物气体中排放的乙醛的总量小于250、225、200、175、150或125ppm。在一些实施方案中，与使用酵母且在接种10小时或更短时间内葡萄糖浓度超过90g/L的发酵过程相比，发酵中产生的乙醛的总量减少了30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
在一些实施方案中，所述过程的总GA活性小于1X GA活性的0.8倍。在一些实施方案中，所述过程的总GA活性在1X GA活性的0.675至0.8倍的范围内。在一些实施方案中，所述过程的总GA活性是1X GA活性的至少0.5、0.55、0.6、0.65或0.7倍，并且小于1X GA活性的0.8倍。
还应理解，如本领域技术人员将理解的，上述过程、方法或组合物的任何实施方案的要素或方面可应用于任何其他实施方案。
附图简述
图1是示出菌株1和菌株1-4中的异麦芽糖酶活性的图。
图2是在异麦芽糖选择板上生长的酵母的照片。
图3是在异麦芽糖选择板上生长的酵母的照片。
图4是示出在使用菌株1、1-8和1-9的用95DE原料的2L补料分批发酵中葡萄糖消耗随时间推移的图。
图5是示出在使用菌株1、1-8和1-9的用95DE原料的2L补料分批发酵中乙醇生产随时间推移的图。
图6是示出在使用菌株1、1-8和1-9的用95DE原料的2L补料分批发酵中异麦芽糖消耗随时间推移的图。
图7是示出在使用菌株1、1-8和1-9的用95DE原料的2L补料分批发酵中麦芽糖消耗随时间推移的图。
图8是示出在使用菌株1、1-8和1-9的用95DE原料的2L补料分批发酵中潘糖消耗随时间推移的图。
图9是示出同时糖化和发酵(SSF)摇瓶中的葡萄糖消耗和乙醇生产的图。
图10是示出使用菌株1-15、1-18和1-20的SSF摇瓶中异麦芽糖消耗随时间推移的图。
图11是示出使用菌株1-15、1-18和1-20的SSF摇瓶中麦芽酮糖消耗随时间推移的图。
图12是示出在2L Benchtop Biostat B发酵罐中对菌株1-15、1-18和1-21使用SSF的异麦芽糖消耗随时间推移的图。
图13是示出在2L Benchtop Biostat B发酵罐中对菌株1-15、1-18和1-21使用SSF的麦芽酮糖消耗随时间推移的图。
图14是示出在2L Benchtop Biostat B SSF发酵中的菌株1-15、1-18和1-21的甘油随时间推移的图。
图15是示出从菌株1和1-23的SSF废气产生乙醛的图。
图16是示出SSF方法中菌株1和1-23的CER曲线(对于每种条件下的每种菌株示出一个重复)的图。
图17是示出在SSF过程中，在导致菌株1和1-23达到峰值CER的两种不同CER水平下的乙醛产生的图。
图18是示出在SSF过程中菌株1和1-23的乙醇生产相对于时间的图。
图19是示出在SSF过程中菌株1和1-23的葡萄糖水平相对于时间的图。
具体实施方式
本发明以下所描述的实施方案并不意图是详尽的或者将本发明限于在以下详细描述中公开的精确形式。相反，所选择和描述的实施方案的目的是使得本领域技术人员对本发明的原理和实践的认识和理解可变得容易。
本发明的实施方案涉及发酵方法和表达二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白的工程改造的酵母菌株，其能够在由水解(例如，葡糖淀粉酶处理)淀粉形成的发酵培养基中发酵碳水化合物组合物，其中碳水化合物组合物包含一种或多种低聚糖，诸如麦芽酮糖、异麦芽糖和/或潘糖。
在优选的实施方案中，遗传修饰的酵母可以是表达异源多肽的酵母，所述异源多肽是二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白并且与SEQ ID NO:44(一种先前未表征的蛋白质)具有90％或更大同一性。除异源糖转运蛋白之外，工程改造的酵母还可包含其他遗传修饰，诸如增加细胞内异麦芽糖酶活性，和/或异源淀粉降解多肽，诸如葡糖淀粉酶的遗传修饰。
如本文所用的术语“外源性”意指引入到宿主生物体中的分子(诸如核酸)或活性(诸如酶活性)。外源性核酸可通过熟知的技术引入到宿主生物体中，并且可维持在宿主染色体物质外部(例如，维持在非整合载体上)或者可诸如通过重组事件整合到宿主的染色体中。外源性核酸可编码对于宿主生物体是同源的或异源的酶或其部分。
术语“异源性”是指与参考生物体中天然发现的分子、活性或基因排列不同的分子、活性或基因排列。因此，与参考生物体异源的基因或蛋白质可以是在所述生物体中不存在的基因或蛋白质，诸如来自不同生物体的基因或蛋白质或者为引入到生物体中的天然基因或蛋白质的修饰形式的基因或蛋白质。在本公开的上下文中，“异源二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白”是指与宿主生物体天然的二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白多肽(如果存在于宿主生物体中)不同的二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白多肽。例如，在第一真菌物种中发现的并且外源地引入到作为宿主生物体的第二真菌物种中的特定的二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白基因对第二真菌生物体是“异源的”。
使用表达异源二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白基因的宿主细胞的发酵可在酶促处理的含有淀粉植物材料的存在下进行。含有淀粉的植物材料可从任何植物和植物部分(例如块茎、根、茎、叶和种子)获得。含有淀粉的植物材料可从谷物(诸如大麦、小麦、玉米、黑麦、高粱、小米、大麦、马铃薯、木薯或稻及其任何组合)中获得。植物材料可诸如通过诸如碾磨、麦芽制造或部分麦芽制造的方法进行加工。在一些实施方案中，淀粉材料来自玉米粉、磨碎的玉米胚乳、高粱粉、大豆粉、小麦粉、生物质衍生的淀粉、大麦粉或其组合。
可使用多种技术从植物材料获得淀粉。在一种技术中，可使用玉米湿磨法来提供浸渍水，其可提供用于发酵的淀粉组合物。可将玉米粒浸渍并且然后碾磨，并分离成其主要组分级分。淡浸渍水是浸渍过程的副产品，并且含有可溶性蛋白质、氨基酸、有机酸、碳水化合物、维生素和矿物质的混合物。
本公开的发酵方法通常使用处理的淀粉。含有淀粉的组合物在其被引入到发酵培养基中之前、其在发酵培养基中之时，或者其在发酵培养基中之前和之时被处理。
本公开的发酵方法还可利用部分水解的淀粉。部分水解的淀粉及其制备在本领域中是熟知的。部分水解的淀粉是指右旋糖当量(“DE”)小于100的淀粉。如果使用部分水解的淀粉，则其优选地具有小于约75或小于约70，并且优选地大于约15、大于约25、大于约35或大于约45或在这些数字组的上限与下限之间的任何范围内的DE。例如，部分水解的淀粉组合物可具有约45至约75或约50至约70范围内的DE。部分水解的淀粉可包括高分子量糊精和高分子量麦芽糖糊精。部分水解的淀粉可通过在高温下加热淀粉与酸(诸如盐酸或硫酸)，并且然后用合适的碱(诸如碳酸钠)中和水解混合物来制备。部分水解的淀粉是一种类型的“淀粉产品”。
在酸水解后，水解淀粉组合物的pH可用碱中和。在中性pH条件下，可能发生低分子量糖产物的异构化。这些异构化可能导致形成诸如某些二糖的产物，这些产物不能被酵母很好地利用，或者难以转化为可用的产物，但可有利地与本公开的工程改造的酵母一起利用。
在一些实践模式中，可用淀粉降解酶处理含有淀粉的组合物。可在发酵过程期间的一个或多个点(诸如在工程改造的细胞的存在下)将淀粉降解酶加入到发酵培养基中。例如，可将呈纯化或部分纯化形式的淀粉降解酶加入到发酵培养基中以促进淀粉或淀粉产品的降解以及低分子量糖的形成以供发酵期间工程改造的酵母消耗。淀粉降解酶(诸如淀粉酶)可商购获得或可通过本领域已知技术制备。向发酵培养基中加入淀粉降解酶的过程可称为淀粉降解酶的“外部”添加。在一些实践模式中，将淀粉降解酶加入到部分水解的淀粉组合物(诸如具有约50至约70范围内的DE的淀粉组合物)中。
在其他实践模式中，淀粉降解酶可由发酵培养基中的微生物产生。例如，淀粉降解酶可由微生物产生，所述微生物可以是具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母，或不同的另一种微生物，诸如可分泌淀粉分解酶的第二酵母菌株。因此，在一些实施方案中，工程改造的酵母包含遗传修饰，所述遗传修饰包括异源糖转运蛋白，以及通过从工程改造的酵母分泌淀粉分解酶进入培养基而导致发酵培养基中淀粉降解增加的遗传修饰。从工程改造的酵母分泌的淀粉分解酶可以是对酵母细胞内源或外源的淀粉分解酶。本发明的发酵方法还可包括除从发酵培养基中的酵母分泌的淀粉降解酶之外还添加外部纯化的淀粉降解酶的那些方法。
淀粉降解酶可以是主要作用于1,4-键的内切淀粉酶和主要作用于1,4-键的外切淀粉酶、主要作用于淀粉中1,6-键的脱支酶和通过催化主要环化和歧化反应来降解淀粉的环糊精糖基转移酶。
内切淀粉酶(也称为糖原酶)裂解淀粉分子内部区域中的1,4-键。α-淀粉酶EC3.2.1.1包括引起含有淀粉的组合物溶液的粘度快速降低的熟知内切淀粉酶。根据底物水解程度，内切淀粉酶可分为液化淀粉酶和糖化淀粉酶两类。淀粉的内切淀粉酶降解可提供不同长度的低聚糖。
外切淀粉酶通过从淀粉非还原性末端裂解化学键而在外部起作用。外切淀粉酶β-淀粉酶(EC 3.2.1.3)能够从还原性末端裂解淀粉中的1,4-键。葡糖淀粉酶(EC 3.2.1.3)也能够从还原性末端裂解淀粉中的1,4-键，但还裂解1,6-键。因此，使用外切淀粉酶仅从淀粉产生低分子量产物，例如麦芽糖和葡萄糖(Wind,1997)。
支链淀粉酶(EC 3.2.1.41)和异淀粉酶(EC 3.2.1.68)是对淀粉中的1,6-键特异的脱支酶。一些支链淀粉酶也能够裂解1,4-糖苷键。环糊精糖基转移酶(CGT酶，EC2.4.1.19)通过催化糖基转移的分子内和分子间反应从淀粉产生环糊精(由-1,4-键结合的6、7或8个葡萄糖单元组成的环)。
可使用α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡糖淀粉酶、支链淀粉酶、异淀粉酶和环糊精糖基转移酶中的任何一种或多种来处理含有淀粉的组合物以提供根据本发明的发酵培养基。在本公开的实施方案中，这些淀粉降解酶中的任何一种或多种可从外部加入到含有淀粉或淀粉产品的组合物中，或者可从发酵培养基中的微生物分泌以引起淀粉降解。如果从微生物分泌，则微生物可以是具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母，或者可由不同微生物分泌，无论其是天然存在的微生物还是遗传工程改造的微生物。
示例性方法包括提供一种发酵培养基，所述发酵培养基包含具有DE在约50至约70范围内的部分水解淀粉的可发酵碳水化合物组合物；并且然后在分泌葡糖淀粉酶的工程改造的酵母存在下发酵所述组合物。发酵培养基中的葡糖淀粉酶可将已部分水解的淀粉有效地消化成降解产物(包括低分子量糖(如葡萄糖))，其通常是处理的组合物中的主要糖。在更高水平的葡萄糖存在下，葡糖淀粉酶可促进逆转反应并且引起诸如异麦芽糖、麦芽酮糖、潘糖和麦芽糖的糖的形成和浓度增加。增加进料中的DE增加了进入发酵的游离葡萄糖的浓度，这可能导致逆转反应，诸如通过葡糖淀粉酶将葡萄糖和果糖转化为麦芽酮糖。
发酵培养基或可发酵碳水化合物组合物(诸如用淀粉酶进一步酶促消化的部分水解的淀粉组合物)可根据一种或多种淀粉降解产物(葡萄糖、麦芽酮糖、异麦芽糖、潘糖、麦芽糖等)的量来描述。可根据需要来描述淀粉降解产物的量，诸如根据发酵培养基中存在的产物的量、作为起始淀粉材料的量的百分比的产物的量、不同降解产物相对于彼此的量等。
能够被酵母消耗并且用于发酵的糖可构成发酵培养基中的“可发酵碳水化合物”。可发酵碳水化合物包括葡萄糖、麦芽糖、异麦芽糖、麦芽酮糖和潘糖，以及可在发酵培养基中分解成可被酵母消耗的单糖和二糖的较长低聚糖分子(诸如淀粉、麦芽糖糊精和直链淀粉)。
在一些实践模式中，发酵培养基中葡萄糖的量可以是至少10g/L、至少15g/L、至少20g/L、至少25g/L，诸如在约10g/L至约100g/L范围内。在发酵期间，可将含有淀粉或水解淀粉产品的进料组合物加入到发酵培养基中。如果淀粉降解酶存在于发酵培养基中，则可通过对淀粉或水解淀粉的酶促作用产生葡萄糖，并且可在发酵期间不断补充对工程改造的酵母可用的葡萄糖的量以提供期望的水平从而支持细胞和生物制品生产的最佳增长。优选地，在生长条件下，存在不限制细胞生长的葡萄糖量，其可称为“非生长限制量”。
发酵培养基还可包含一定量的源于淀粉或淀粉水解产物的酶促降解的低分子量非葡萄糖的糖。这些低分子量的非葡萄糖的糖可包括二糖(诸如麦芽糖、异麦芽糖、麦芽酮糖、潘糖等)，其可称为基于二或三吡喃葡糖基的糖。
麦芽酮糖(4-α-D-吡喃葡糖基-D-果糖)是由通过(1→4)键连接到β-D-呋喃果糖的α-D-吡喃葡糖基残基组成的糖基果糖二糖。
麦芽酮糖可通过在淀粉的酶液化期间进行还原性末端葡萄糖单元的化学异构化，并且在用形成作为产物之一的麦芽酮糖的淀粉葡糖苷酶进行后续糖化期间水解而形成。麦芽酮糖耐受葡糖淀粉酶和α-淀粉酶的水解。
本公开的工程改造的酵母在麦芽酮糖上生长的能力可通过以下来证明：用碳水化合物组合物(其中麦芽酮糖以至少97％(重量)的量存在于合成酵母培养基中)代替碳源(葡萄糖)，并且确定工程改造的酵母是否将在标准酵母生长条件下在此培养基中生长。在30℃下，同时在有氧条件下以250RPM摇动，工程改造的酵母可在这种“合成培养基”(6.7g/L无氨基酸的酵母氮源、1.9g/L无尿嘧啶的合成完全缺陷混合物、2.5g/L至少97％纯度的麦芽酮糖、9.5g/L MES缓冲液、用5M氢氧化钾调节至pH6.0)中培养。在这些条件下，如果倍增时间(1/速率)不大于约50小时(速率为0.02或更大)，则工程改造的酵母被认为表现出“生长”
优选地，工程改造的酵母具有约0.05或更大、约0.07或更大、约0.10或更大、约0.12或更大、约0.14或更大、约0.15或更大、约0.16或更大、约0.17或更大、约0.18或更大、约0.19或更大、约0.20或更大，诸约0.10至约0.40、约0.15至约0.35或约0.20至约0.30范围内的生长速率。
在本公开的实施方案中，在发酵培养基中，麦芽酮糖可以至少0.5g/L，诸如0.5g/L至5g/L或1.0g/L至5g/L或1.25g/L至3g/L范围内的浓度存在。在发酵期间，具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母可利用培养基中存在的麦芽酮糖并且因此减少其在培养基中的积聚。例如，在发酵和连续添加淀粉产品期间，根据工程改造的酵母消耗麦芽酮糖的能力，可将麦芽酮糖的量保持低于约5g/L、低于约4.5g/L、低于约4g/L、低于约3.5g/L、低于约3.0g/L、低于约2.5g/L、低于约2.0g/L、低于约1.5g/L或低于约1.0。
异麦芽糖(O-α-D-吡喃葡糖基-α[1-6]-α-D-吡喃葡萄糖苷)是与麦芽糖类似的二糖，但具有α-(1-6)-键而不是α-(1-4)-键。
异麦芽糖可通过葡萄糖的再聚合形成，并且各种酵母不能同化异麦芽糖或有效利用它。然而，除能够消耗麦芽酮糖之外，本公开的工程改造的酵母还能够在发酵过程期间有利地消耗异麦芽糖。
在本公开的实施方案中，在发酵培养基中，异麦芽糖可以至少0.5g/L，诸如0.5g/L至5g/L、或1.0g/L至5g/L、或1.25g/L至3g/L范围内的浓度存在。在发酵期间，具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母可利用培养基中存在的异麦芽糖并且因此可防止否则将对发酵过程不利的异麦芽糖在培养基中的显著积聚。例如，在发酵和连续添加淀粉产品期间，根据工程改造的酵母消耗异麦芽糖的能力，可将异麦芽糖的量保持低于约5g/L、低于约4.5g/L、低于约4g/L、低于约3.5g/L、低于约3.0g/L、低于约2.5g/L、低于约2.0g/L、低于约1.5g/L或低于约1.0。
潘糖(O-α-D-吡喃葡糖基-[1-6]-O-α-D-吡喃葡糖基-[1-4]-α-吡喃葡萄糖)是由具有α-(1-4)和α-(1-6)-键的三个葡萄糖单元组成的三糖。
除能够消耗麦芽酮糖之外，本公开的工程改造的酵母还能够在发酵过程期间有利地消耗潘糖。
在本公开的实施方案中，在发酵培养基中，潘糖可以至少0.5g/L，诸如0.5g/L至5g/L或1.0g/L至5g/L或1.25g/L至3g/L范围内的浓度存在。在发酵期间，具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母可利用培养基中存在的潘糖并且因此可防止否则将对发酵过程不利的潘糖在培养基中的显著积聚。例如，在发酵和连续添加淀粉产品期间，根据工程改造的酵母消耗潘糖的能力，可将潘糖的量保持低于约5g/L、低于约4.5g/L、低于约4g/L、低于约3.5g/L、低于约3.0g/L、低于约2.5g/L、低于约2.0g/L、低于约1.5g/L或低于约1.0。
麦芽糖(麦芽糖(maltobiose)，4-O-α-D-吡喃葡糖基-D-葡萄糖)是用α(1→4)键连接两个葡萄糖单位而形成的二糖。
在本公开的实施方案中，在发酵培养基中，麦芽糖可以至少0.5g/L，诸如0.5g/L至5g/L或1.0g/L至5g/L或1.25g/L至3g/L范围内的浓度存在。在发酵期间，具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母可利用培养基中存在的麦芽糖并且因此可防止否则将对发酵过程不利的麦芽糖在培养基中的显著积聚。例如，在发酵和连续添加淀粉产品期间，根据工程改造的酵母消耗麦芽糖的能力，可将麦芽糖的量保持低于约5g/L、低于约4.5g/L、低于约4g/L、低于约3.5g/L、低于约3.0g/L、低于约2.5g/L、低于约2.0g/L、低于约1.5g/L或低于约1.0。
发酵培养基包含水并且优选地包含营养物质，诸如氮源(诸如蛋白质)、维生素和盐。缓冲剂也可存在于发酵培养基中。其他组分也可在发酵一段时间后存在于发酵培养基中，诸如可能随发酵进程而积聚的发酵产物，以及其他代谢物。任选地，发酵培养基可用碱(诸如氢氧化钙或碳酸钙、氨或氢氧化铵、氢氧化钠或氢氧化钾)进行缓冲，以便维持生物体在其下良好起作用的pH。
本公开的实施方案提供了一种包含二和三吡喃葡糖基糖转运蛋白(本文也称为“糖转运蛋白”)的工程改造的酵母，其能够将诸如麦芽酮糖、异麦芽糖、潘糖和麦芽糖的糖转运到细胞中。在本公开的实施方案中，工程改造的酵母包含异源核酸，所述异源核酸编码具有与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的氨基酸序列的糖转运蛋白，所述SEQ ID NO:44是来自酵母的先前未知的蛋白质。在优选的实施方案中，工程改造的酵母表达具有与SEQID No:44具有91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更大同一性的氨基酸序列的糖转运蛋白。
在一些实施方案中，糖转运蛋白具有一个或多个氨基酸取代、缺失或添加，这些导致所述序列与SEQ ID NO:44不同，但同时保留某些序列特征。也就是说，如果糖转运蛋白被修饰，则其在对糖转运蛋白活性保守和/或重要的区域之外的一个或多个氨基酸位置处被修饰。可将SEQ ID NO:44与其他糖转运蛋白进行比较以了解同一性区域，以及允许取代、缺失或添加的序列区域。使用如本文所述的序列比对工具可理解SEQ ID NO:44与其他糖转运蛋白之间的多肽序列同一性区域。
来自两种或更多种糖转运蛋白的“对应”氨基酸的确定可通过其全部或部分氨基酸序列的比对来确定。序列比对和序列同一性的产生包括通常使用计算方法的全局比对和局部比对。为了提供全局比对，使用了跨越所有查询序列的整个长度的全局优化强制序列比对。通过比较，在局部比对中，识别出长序列内的较短的相似区域。
如本文所用，“等同位置”意指基于一种糖转运蛋白的氨基酸序列的比对或根据三维结构的比对，两个序列(例如，SEQ ID NO:44和具有期望取代的不同糖转运蛋白序列)所共有的位置。因此可使用序列比对或结构比对或两者来确定等同性。
在一些实践模式中，使用BLAST算法来比较和确定序列相似性或同一性。此外，可确定序列中可被分配权重或分数的空位的存在或意义。这些算法还可用于确定核苷酸序列相似性或同一性。用于确定相关性的参数是基于用于计算统计相似性和确定的匹配的显著性的本领域已知方法来计算的。预期相关的基因产物具有高度相似性，诸如大于50％的序列同一性。用于使用BLAST算法确定两个或更多个序列的相关性的示例性参数可如下。
检查两种核酸或两种多肽的核酸或氨基酸序列将揭示比较的序列之间的序列同一性和相似性。序列比对和序列同一性的产生包括使用计算方法进行的全局比对和局部比对。可使用具有默认参数的BLAST(国家生物信息中心(NCBI)基本局部比对搜索工具)版本2.2.31软件进行比对。氨基酸序列之间的氨基酸序列同一性％可使用具有以下默认参数的标准蛋白质BLAST测定：最大靶序列：100；短查询：自动调整短输入序列的参数；预期阈值：10；字长：6；查询范围内的最大匹配数：0；矩阵：BLOSUM62；空位成本：(存在：11，延伸：1)；组成调整：条件式组成得分矩阵调整；过滤器：没有选择；掩码：没有选择。核酸序列之间的核酸序列同一性％可使用具有以下默认参数的标准核苷酸BLAST测定：最大靶序列：100；短查询：自动调整短输入序列的参数；预期阈值：10；字长：28；查询范围内的最大匹配数：0；匹配/不匹配分数：1，-2；空位成本：线性；过滤器：低复杂度区域；掩码：仅用于查找表的掩码。认为使用具有默认参数的NCBI BLAST版本2.2.31算法相对于参考序列具有XX％(例如，80％)的同一性分数的序列与参考序列至少XX％相同或等同、与参考序列具有XX％序列同一性。
保守结构域可使用Blast比对和良好表征的蛋白质来识别。使用这种方法，可识别存在哪些核心保守结构域，诸如几乎所有次级转运蛋白中存在的核心主要协助转运蛋白超家族(MFS)结构域(cd06174)。核心MFS结构域位于SEQ ID NO:44的残基111-550之间，在MFS结构域内位于易位孔内的残基。易位孔内的残基可被改变，使得转运被改善、减少或不受影响。SEQ ID NO:44中可能的易位孔取代可在以下位点中的任何一个或多个处引入：124、127、128、129、133、134、160、163、164、167、171、172、174、175、221、222、225、226、229、230、233、245、246、249、250、256、380、383、384、387、388、390、404、408、412、415、419、476、479、480、483、499、500、503、504、507、508、511。结果，可获得与SEQ ID NO:44具有小于100％同一性的转运蛋白。
如果使用SEQ ID NO:44的变体，则全局比对可用于将与例如SEQ ID NO:44具有显著同一性的序列进行比对，以便确定靶序列(例如，糖转运蛋白直系同源物)中的哪些对应的氨基酸位置可被所述氨基酸中的一个或多个取代。
在其他实施方案中，异源糖转运蛋白序列任选地包含不存在于天然糖转运蛋白多肽中的另外的序列。另外的序列可向糖转运蛋白提供天然多肽中不存在的功能。另外的功能包括例如，其他蛋白质或材料的蛋白酶位点或结合位点。
可能不存在于天然糖转运蛋白多肽中但可添加的另外序列的实例是标签序列。标签序列可位于糖转运蛋白序列的C端、N端或两端，并且此类蛋白质可以如下注释：[ST]-[TC]等，其中“TC”表示提供C端标签序列的一个或多个氨基酸，或[TN]-[ST]等，其中“TN”表示提供N端标签序列的一个或多个氨基酸。示例性肽标签包含多至5、10、15或20个氨基酸。肽标签可用于多种目的中的任何一种或多种。例如，标签可允许通过标签结合成员与标签特异性相互作用的能力从培养基中纯化转运蛋白。标签还可允许使用具有可检测标记的标签结合成员来检测或识别蛋白质。示例性短肽标签是poly-Arg、FLAG、poly-His、c-myc、S和Strep II。(参见例如，Terpe,K.(2003)Appl.Microbiol.Biotechnol.60:523–533).
可使用编码糖转运蛋白(诸如具有与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的氨基酸序列的转运蛋白)的一种或多种异源核酸制备工程改造的酵母。涵盖示例性核酸，包括诸如编码SEQ ID NO:44的SEQ ID NO:14的那些核酸，以及编码与SEQ ID NO:44具有90％-99％之间同一性的氨基酸序列的那些核酸。
在一些实施方案中，工程改造的酵母可具有编码异源糖转运蛋白的核酸的多个拷贝。在这些实施方案中，细胞可根据编码异源糖转运蛋白的核酸的拷贝数来描述。例如，工程改造的酵母可具有两个或更多个的异源糖转运蛋白核酸拷贝数，诸如2至24个范围内的拷贝数。然而，技术人员可使用本领域已知的技术用异源糖转运蛋白核酸的多于24个拷贝来工程改造的酵母。例如，工程改造的酵母可具有两个或更多个的异源糖转运蛋白核酸拷贝数，诸如2至24、2至16或4至16范围内的拷贝数。例如，工程改造的酵母可具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、或16、17、18、19、20、21、22、23或24个异源糖转运蛋白核酸的核酸拷贝数，它们彼此相同或彼此不同，并且可编码相同的异源糖转运蛋白多肽或不同的异源糖转运蛋白多肽。
如果酵母被工程改造的以包含异源糖转运蛋白基因的多个拷贝，则拷贝可在细胞中的核酸位点处以串联方向放置，诸如作为串联重复整合到酵母染色体的期望基因座中。拷贝还可放置在细胞中的多个核酸位点中，诸如整合到酵母染色体的多个基因座中。
在一些实践模式中，编码糖转运蛋白的核酸序列包括序列SEQ ID NO:44，以及SEQID NO:44的密码子优化的序列和密码子变体，以及任何调控序列(例如，终止子、启动子等)和载体序列(例如，包括选择标记、整合标记、复制序列等)可使用已知的分子技术来制备。用于制备DNA构建体的方法(例如，用于包括编码SEQ ID NO:44的基因的DNA构建体)的一般指导可见于Sambrook等人Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold SpringHarbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1989；和Ausubel等人CurrentProtocols in Molecular Biology,Greene Publishing and Wiley-Interscience,NewYork,N.Y.,1993。
PCR技术可用于制备或修饰糖转运蛋白核酸序列，诸如在糖转运蛋白核酸序列中引入一个或多个突变以提供变体。PCR技术描述于例如，Higuchi,(1990)in PCRProtocols,第177-183页,Academic Press；Ito等人(1991)Gene 102:67-70；Bernhard等人(1994)Bioconjugate Chem.5:126-132；和Vallette等人(1989)Nuc.Acids Res.17:723-733。所述技术可任选地包括先前制备的编码糖转运蛋白多肽的DNA的定点(或寡核苷酸介导的)诱变、PCR诱变和盒诱变。
可替代地，核酸分子可由定制基因合成提供者诸如IDT(Coralville,IA)、DNA2.0(Menlo Park,CA)或GeneArt(Life Technologies,Thermo Fisher Scientific)产生。
可构建表达载体以包含可操作地连接至在宿主生物体中起作用的表达控制序列的糖转运蛋白核酸序列。适用于宿主生物体的表达载体包括例如质粒、附加体和人工染色体。载体可包括可操作用于稳定整合到宿主染色体中的选择序列或标记。另外，载体可包含一种或多种选择性标记基因和适当的表达控制序列。还可包括选择性标记基因，例如，提供对抗生素或毒素的抗性、补充营养缺陷型缺陷或提供培养基没有中的关键营养物质。表达控制序列可包括本领域熟知的组成型和诱导型启动子、转录增强子、转录终止子等。
在一些实施方案中，可对编码引入到宿主酵母中的糖转运蛋白或任何其他多肽的核酸进行密码子优化。用于表达糖转运蛋白的核酸模板可以是编码糖转运蛋白的天然DNA序列，或者所述模板可以是为了在所期望宿主细胞中表达而优化的密码子优化形式。就这一点而言，可使用特定的密码子优化方案。在宿主生物体中使用优选的密码子可能引起活性增加，例如由于基因表达的改善而引起的活性增加。例如，可制备编码SEQ ID NO:44或与此序列具有约90％或更大、约95％或更大、约97％或更大序列同一性的多肽的密码子优化的DNA构建体，并且将其插入到期望的宿主细胞中。
提供关于特定宿主生物体中所期望密码子使用的信息的数据库是本领域已知的。在一些实施方案中，将糖转运蛋白核酸进行密码子优化以用于在工业酵母菌株中表达。
根据本公开的一个实施方案，包含糖转运蛋白基因的DNA构建体可操作地连接至启动子序列，其中启动子序列在选择的宿主细胞中起作用。在一些实施方案中，启动子在酵母宿主细胞中显示转录活性，并且可源于编码与宿主细胞同源或异源的蛋白质的基因。在一些实施方案中，启动子序列是选自以下的强启动子：翻译延伸因子启动子(pTEF)、丙酮酸脱羧酶(PDC)启动子、醇脱氢酶(ADH1)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(pGPD/TDH3)以及烯醇酶(ENO)启动子。可用于驱动表达的其他启动子包括细胞色素c启动子(pCYC)和磷酸甘油酸激酶启动子(PGK)。任选地，控制表达的另外的因素(诸如增强子等)也可被包含在所述载体上。
包含糖转运蛋白基因的表达载体还可包含在宿主细胞中起作用的任何启动子和终止子序列。例如，启动子序列和终止子序列对于宿主细胞可以是内源的，或者启动子序列和终止子序列可来自对宿主细胞外源的生物体，但仍然在宿主细胞中起作用。
可使用载体将DNA构建体引入到宿主细胞中。载体可以是当引入到宿主细胞中时稳定维持的任何载体。在一些实施方案中，载体被整合到宿主细胞基因组中并且被复制。载体包括克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、噬菌体颗粒、盒等。在一些实施方案中，载体是包含可操作地连接至糖转运蛋白编码序列的调控序列的表达载体。
包含糖转运蛋白基因的DNA构建体还可包含选择性标记，从而便于在宿主细胞中进行选择。例如，选择性标记可用于转化的酵母。酵母选择性标记的实例包括通常用于选择转化的酵母细胞的标记。营养缺陷型标记可使用控制营养缺陷的基因来使用，这意味着所述基因能够使酵母产生酵母生长所需的营养物质。控制营养缺陷的酵母基因的实例包括亮氨酸营养缺陷(LEU2)，组氨酸营养缺陷(HIS3)、尿嘧啶营养缺陷(URA3、URA5)和色氨酸营养缺陷(TRP1)。在酵母中编码α-半乳糖苷酶(melibiase)的MEL5可用作显性选择标记以选择α-半乳糖苷酶阴性酵母菌株的转化体。用一种或多种选择性标记对酵母进行遗传修饰可使酵母利用某些底物。
DNA构建体可以是整合到基因组中并且与已整合到其中的染色体一起复制的构建体。例如，酵母细胞可用编码糖转运蛋白的DNA构建体转化，并且以一个或多个拷贝将DNA构建体整合到宿主染色体中。这种整合通常被认为是有利的，因为DNA序列更可能被稳定地维持。可根据常规方法将DNA构建体整合到宿主染色体中，诸如通过同源重组或随机整合。
在一种实践模式中，包含糖转运蛋白基因的一种或多种DNA构建体被整合到基因座上，其中整合对细胞的健康没有显著的不利影响。例如，整合可在不是已知具有任何多肽编码序列的基因组的基因座处，或在具有在期望的生长条件(诸如在使用淀粉产品作为能源的发酵条件)下的功能不是必需的基因的基因组的基因座处。在酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中，大量关于其基因组中开放阅读框(ORF)的重要性的信息是可用的。例如，参见http://www-sequence.stanford.edu/group/yeast_deletion_project/deletions3.html。此信息可用作理解酵母菌株中基因的必要性并且相应地工程改造的此类菌株的指导。鉴于本领域已知的信息，技术人员可选择一种或多种非必需基因作为整合包含糖转运蛋白基因的一种或多种DNA构建体的靶标。基因是否是“必需的”可在使用富含葡萄糖的培养基的生长条件下确定。
在一些实施方案中，除糖转运蛋白修饰之外，工程改造的酵母还包含一种或多种另外的遗传修饰。一种或多种另外的遗传修饰可影响发酵性能的其他方面，诸如淀粉降解和非葡萄糖的糖的消耗。
在一些实施方案中，工程改造的酵母除糖转运蛋白修饰之外还包含一种或多种遗传修饰，所述遗传修饰促进消耗基于二或三吡喃葡糖基的糖、使用基于二或三吡喃葡糖基的糖作为前体加工或形成生物制品。此类修饰可引起酶活性被引入到细胞中、引起细胞中酶的量增加和/或引起酶活性的增加。例如，异源核酸在宿主(其野生型形式不具有所述核酸)中的表达可称为被引入的表达。如果酶的表达量高于在天然宿主中表达的酶的量，则可将基因表达称为上调的。引入或上调的表达可由在天然宿主中不存在的修饰引起。如果酶(诸如呈改变形式的酶)表现出比呈天然形式的酶活性更大的活性，则酶活性可称为增强的。
可使用一种或多种类型的遗传修饰引起引入或上调的表达或增强的活性。例如，可通过添加或修饰上调所期望基因的表达的调控元件(启动子、终止子等)引起增强的活性。还可通过增加所期望基因的拷贝数引起增强的活性。还可通过对核酸序列或蛋白质进行一种或多种遗传修饰引起增强的活性，否则这些核酸序列或蛋白质可能起到抑制期望增强其活性的基因的表达的作用。
作为实例，通过将基因置于异源启动子控制下来上调基因的表达以在细胞中提供更大量的酶，所述异源启动子驱动比当基因由其天然启动子驱动时更大水平的表达。异源启动子是与特定基因的天然启动子不同的启动子。处于异源启动子控制下的基因可以是对宿主细胞天然的基因(即，内源基因)，或对宿主非天然的基因。
酵母细胞可具有异源遗传修饰，从而导致期望的酶在工程改造的酵母中具有增强的活性。异源修饰的实例包括但不限于将外源基因引入到酵母中、或修饰内源基因和/或其周围的遗传元件，诸如表达调控元件。异源修饰可包括以下中的一种或多种：使用与期望基因的天然启动子不同的启动子；使用与期望基因的天然终止子不同的终止子；将基因引入到基因组中与其天然位置不同的位置；引入期望基因的多个拷贝。
修饰可包括调控元件的变化，所述调控元件可上调或下调基因的表达；基因拷贝数的增加；以及消除表达、减少表达或者增加基因或基因产物的表达或活性的缺失或突变。
可包含在工程改造的酵母中的另外的遗传修饰是改变或引入将低分子量非葡萄糖的糖转化为葡萄糖的酶活性。例如，一种任选的另外的遗传修饰影响或引入工程改造的酵母中的异麦芽糖酶活性。异麦芽糖酶可通过水解异麦芽糖中的1,6醚键将异麦芽糖转化为葡萄糖。异麦芽糖酶还可表现出用于水解麦芽糖中的1,4醚键的交叉活性。遗传修饰可引起异麦芽糖酶活性被引入到细胞中、引起细胞中异麦芽糖酶的量增加和/或引起异麦芽糖酶活性的增加。
在一些实施方案中，除了异源糖转运蛋白，工程改造的细胞还包含异源异麦芽糖酶基因或处于异源启动子控制下的异麦芽糖酶基因，所述基因在细胞中提供增加的表达或在细胞中以多个拷贝存在。例如，处于异源启动子(诸如PDC启动子)控制下的异麦芽糖酶(IMA)基因可被工程改造的到酵母中。
可引入到工程改造的酵母中的异麦芽糖酶基因的实例包括但不限于酿酒酵母IMA1(P53051)、酿酒酵母IMA2(Q08295)、酿酒酵母IMA3(P0CW40)、酿酒酵母IMA4(P0CW41)、酿酒酵母IMA5(P40884)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)malL(O06994)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)malL(P21332)、凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)malL(Q45101)、芽孢杆菌属种(Bacillus sp.)malL(P29093)等。优选地，异麦芽糖酶基因编码与登录号NP011803.3(酿酒酵母IMA1)的氨基酸序列具有大于80％、85％、90％、95％、98％或99％序列同一性的多肽。
在一些实施方案中，除了异源糖转运蛋白外，工程改造的酵母还包含影响淀粉降解多肽的遗传修饰。例如，遗传修饰可以是将编码异源淀粉降解多肽的核酸引入到酵母中的遗传修饰。遗传修饰还可以是诸如通过以下方式增加细胞中内源或外源(异源)淀粉降解多肽的量的遗传修饰：将基因置于强启动子的控制下，或在细胞中以多个拷贝(诸如整合到基因组中的基因的多个拷贝或存在于非染色体构建体(例如，质粒)上的多个拷贝)提供基因。
在一些实施方案中，淀粉降解酶是葡糖淀粉酶。葡糖淀粉酶(E.C.3.2.1.3)是淀粉分解酶，其从低聚糖和多糖链的非还原性末端相继水解1,4-连接的α-D-葡糖基残基并且释放D-葡萄糖。葡糖淀粉酶还可裂解支链淀粉分支点上的α-1,6键。如本文所用，关于异源葡糖淀粉酶的术语“淀粉分解活性”涉及这些酶促机制。葡糖淀粉酶多肽可以是天然存在的葡糖淀粉酶的变体、或天然存在的葡糖淀粉酶的一部分(诸如在其N端、其C端或两端截短的葡糖淀粉酶)，其中葡糖淀粉酶多肽保持淀粉分解活性。
来自各种真菌和细菌物种的葡糖淀粉酶还通常包括天然的“信号序列”。通常，信号序列是位于新合成蛋白质的氨基端处的短氨基酸链(通常为5-30个氨基酸范围内的长度)。大多数信号肽包括碱性N端区域(n区域)、中心疏水区域(h区域)和极性C端区域(c区域)(例如参见，von Heijne,G.(1986)Nucleic Acids Res.14,4683-4690)。信号序列可将蛋白质靶向细胞的某个部分，或者可靶向用于从细胞分泌的蛋白质。例如，已证明，糖化酵母(S.diastaticus)葡糖淀粉酶STAI基因的天然N端信号序列可将其靶向分泌装置的内质网(例如参见，Yamashita,I.等人,(1985)J.Bacteriol.161,567-573)。葡糖淀粉酶分泌信号可促进从工程改造的酵母分泌葡糖淀粉酶以促进淀粉的酶促分解。
在一些实施方案中，工程改造的酵母包含编码葡糖淀粉酶的核酸，诸如酿酒酵母STA1(P04065)；酿酒酵母STA2(P29760)；泡盛曲霉(Aspergillus awamori)GLAA(P69327)；米曲霉(Aspergillus oryzae)(菌株ATCC 42149/RIB 40)glaA(P36914)；米根霉(Rhizopusoryzae)amyB(NRRL 395、ABB77799.1)；许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)GAM1(P22861)；白曲霉(Aspergillus kawachii)gaI(P23176)；Aspergillus shirousami glaA(P22832)；白假丝酵母(Candida albicans)(菌株SC5314/ATCC MYA-2876)GAM1(O74254)；粟酒裂殖酵母meu17(O60087)；扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)GLA1(P26989)；扣囊复膜酵母GLU1(P08017.1)；或扣囊复膜酵母Glm(CAC83969)。
在一个实施方案中，工程改造的酵母还包含至少一种葡糖淀粉酶多肽，其与来自酵母菌株扣囊复膜酵母IFO 0111的Glm葡糖淀粉酶具有至少90％的同一性。Hostinova等人(Archives of Biochemistry and Biophysics,411:189–195,2003)描述了酵母菌株扣囊复膜酵母IFO 0111中的葡糖淀粉酶基因Glm的核苷酸序列。根据Hostinova等人，将扣囊复膜酵母Glm基因转录成编码515个氨基酸的蛋白质的1.7kb RNA转录物。在515个氨基酸长的多肽链中，26个N端氨基酸残基构成信号肽并且随后489个氨基酸残基构成成熟蛋白质。缺失信号序列且长489个氨基酸的成熟Glm具有呈去糖基化形式的54,590Da的预测分子量。美国专利申请序列号62/139,312(2015年3月27日提交)描述了工程改造的酵母菌株，其包含异源扣囊复膜酵母Glm基因的多个拷贝。
在一些方面，工程改造的酵母对发酵培养基中的较高量的生物来源产物诸如(乙醇)具有耐受性。在一些实施方案中，工程改造的酵母是“工业酵母”，其是指在乙醇发酵中常规使用的任何酵母。实例包括清酒酵母(sake yeast)、烧酒酵母(shochu yeast)、葡萄酒酵母(wine yeast)、啤酒酵母、面包酵母等。清酒酵母展示出高乙醇发酵能力和高乙醇抗性以及遗传稳定性。通常，工业酵母具有高乙醇抗性，并且优选地在乙醇浓度为10％或更大时存活。
在示例性实施方案中，宿主细胞是酿酒酵母。一些酿酒酵母对乙醇具有高耐受性。各种乙醇耐受性酵母的菌株可商购获得，诸如RED STARTM和ETHANOL REDTM酵母(Fermentis/Lesaffre,USA)、FALITM(Fleischmann's Yeast,USA)、SUPERSTARTTM和THERMOSACCTM酵母(Ethanol Technology,Wis.,USA)、BIOFERMTM AFT和XRTM(NABC--NorthAmerican Bioproducts Corporation,GA,USA)、GERT STRANDTM(Gert Strand AB,Sweden)以及FERMIOLTM(DSM Specialties)。
工业酵母通常是原养型的，并且因此不具有适用于选择转化体的营养缺陷型标记。如果宿主细胞不具有本来有助于在转化时选择或保留细胞内的糖转运蛋白基因的遗传背景，则可将宿主细胞进行工程改造以引入一个或多个基因突变从而建立标记基因与细胞中的糖转运蛋白基因相关联并且维持其的用途。例如，可在将糖转运蛋白基因引入到细胞中之前对可商购获得的乙醇耐受性酵母细胞进行遗传修饰。
通过破坏控制营养缺陷的基因可提供不同营养缺陷的标记。在一种实践模式中，将酵母的乙醇耐受性菌株进行工程改造以破坏控制营养缺陷的一个或多个基因(诸如LYS2、LEU2、HIS3、URA3、URA5和TRP1)的拷贝。在提供尿嘧啶营养缺陷的情况下，例如，可用从尿嘧啶营养缺陷型突变体(例如，酿酒酵母MT-8菌株)获得的ura3-片段代替乙醇耐受性酵母的正常ura3基因以破坏正常URA3基因。在URA3破坏的菌株的情况下，通过利用URA3基因破坏的菌株能够在含有5-氟乳清酸(5-FOA)的培养基中生长而正常URA3菌株(野生型酵母或普通工业酵母)不能生长这一事实，可容易地识别或选择标记的存在/不存在。在LYS2基因破坏的菌株的情况下，通过利用LYS2破坏的菌株能够在含有α-氨基已二酸的培养基中生长而正常LYS2菌株(野生型酵母或普通工业酵母)不能生长这一事实，可容易地识别或选择标记的存在/不存在。取决于所采用的营养缺陷，可使用破坏营养缺陷控制基因和选择性分离营养缺陷控制基因突变体的方法。可替代地，可采用显性选择标记，诸如来自构巢曲霉(Aspergillus nidulans)的amdS(美国专利号5,876,988)，其允许在作为唯一氮源的乙酰胺上生长；或ARO4-OFP，其允许在氟-苯丙氨酸存在下生长(Fukuda等人)。这些标记可使用可回收利用的的cre-loxP系统被重复使用，或者可替代地可用于产生允许利用另外标记的营养缺陷型菌株(美国专利号4,959,317)。
在一些实施方案中，将异源糖转运蛋白引入到不具有天然(内源)异麦芽糖糖转运蛋白的酵母中。例如，所述酵母可以是不具有与酿酒酵母MAL11(P53048)具有任何显著同一性(例如，大于90％)的基因的酵母。与本公开相关的实验还发现，一些乙醇耐受性酵母菌株不具有天然异麦芽糖转运蛋白。
在酵母已被工程改造以提供用于引入糖转运蛋白基因的所期望遗传背景后，将一种或多种基因构建体引入到细胞中以整合到基因组中或稳定地维持并实现表达。用于将基因构建体引入到宿主细胞中的方法包括转化、转导、转染、共转染、电穿孔。具体地，酵母转化可使用乙酸锂方法、原生质体法等进行。待引入的基因构建体可以质粒的形式、或通过插入到宿主的基因中或通过与宿主的基因的同源重组来并入到染色体中。基因构建体引入到其中的转化的酵母可使用选择性标记(例如，如上所提及的营养缺陷型标记)来选择。进一步的确认可通过测量所表达的蛋白质的活性来进行。
可使用本领域熟知的方法确认包含糖转运蛋白基因的外源核酸序列的转化。此类方法包括例如：核酸分析，诸如RNA印迹或mRNA的聚合酶链式反应(PCR)扩增；或用于基因产物表达的免疫印迹法；或测试所引入核酸序列或其对应基因产物的表达的其他合适的分析方法。本领域技术人员应理解，外源性核酸以足以产生所需产物的量表达，并且应进一步理解，表达水平可被优化以使用本领域熟知且本文所公开的方法来获得足够的表达。
表达异源糖转运蛋白的工程改造的酵母菌株，任选地具有一种或多种其他遗传修饰，可用于发酵过程中以制备产物。发酵产物(在本文中也称为“生物制品”)可以是可通过以下方式制备的任何产物：由葡糖淀粉酶对淀粉材料进行酶促降解，并且形成葡萄糖和非葡萄糖的糖，且由本公开的工程改造的酵母通过发酵使用这些糖。在实施方案中，发酵产物选自由以下项构成的组：氨基酸、有机酸、醇、二醇、多元醇、脂肪酸、单甘油酯、二酰基甘油酯、三酰基甘油酯、甜味剂、槐糖脂及其混合物。在优选的实施方案中，本公开的发酵方法产生乙醇作为生物制品。作为有机酸或氨基酸的其他示例性生物制品包括乳酸、柠檬酸、丙二酸、羟基丁酸、己二酸、赖氨酸、酮戊二酸、戊二酸、3-羟基-丙酸、琥珀酸、苹果酸、富马酸、衣康酸、粘康酸、甲基丙烯酸和乙酸及其衍生物和盐。
工程改造的酵母在可发生发酵的条件下进行培养。尽管条件可根据具体的生物体和期望的发酵产物而变化，但典型的条件包括约20℃或更高、并且更典型地约30℃至约50℃范围内的温度。在发酵期间，反应混合物可被混合或搅拌。在一些实践模式中，混合或搅拌可通过将气体喷射到发酵液的机械作用而发生。可替代地，可在发酵期间使用诸如通过叶轮或其他手段实现的直接机械搅拌。
在一些情况下，在工业容量的发酵罐中进行发酵，以便实现商业规模的经济益处和控制。在一个实施方案中，在容量为约5,000加仑或更大的发酵罐中进行发酵。在另一个实施方案中，所述过程以至少25,000加仑的发酵液量进行。在又一个实施方案中，进行分批处理以生产多个批次的至少25,000加仑的最终发酵液。在连续过程中，可使用至少200,000加仑的容器。在一些实践模式中，发酵作为单个批次进行直至完成。
可调节发酵培养基的pH以提供用于糖转运蛋白活性、细胞生长和发酵活性的最佳条件从而提供期望产物，诸如乙醇。例如，可将溶液的pH调节到3至5.5的范围内。在一种实践模式中，发酵培养基的pH在4至4.5的范围内。
在其他实践模式中，发酵以补料分批发酵过程进行。在这种实践模式中，将待发酵的淀粉材料总量的第一部分加入到发酵培养基中作为发酵底物。将另外的淀粉材料以一个或多个部分加入以为培养基中的工程改造的酵母提供更多底物。可调节淀粉的添加，并且可监测葡萄糖的形成以提供有效的发酵。
在一些实践模式中，发酵是以连续的运行模式进行的。在这种模式下，多个发酵罐串联运行，其中在第一发酵罐中供应淀粉材料，将所述材料进料至第二发酵罐等直至淀粉水解产物转化为乙醇。连续运行可使用2-7个之间的发酵罐进行操作。
在一些实践模式中，使用可变速率添加系统将淀粉材料总量的一部分(诸如部分水解的淀粉)加入到发酵液中。此类系统的实例包括变速泵或可操作地连接到泵的计量阀(诸如节流阀)，所述泵或阀可用于随时间改变引入到发酵液中的淀粉材料的量。在一些实践模式中，在添加淀粉材料中的一部分期间，通过实时监测系统监测葡萄糖浓度。
实时监测系统包括直接监测葡萄糖浓度的系统和间接监测葡萄糖浓度的系统。通常直接监测葡萄糖浓度的实时监测系统的实例包括基于红外(IR)光谱学的系统、近红外(NIR)光谱学系统、傅立叶变换红外(FTIR)系统、基于折射率的系统、基于酶的自动化测量系统(诸如由YSI Life Sciences systems出售的YSI 2950生物化学分析仪)、基于高效液相色谱(HPLC)的系统、基于气相色谱(GC)的系统以及本领域技术人员已知的其他实时监测系统。另外可通过确定特定发酵过程中典型的碳分布并且将发酵液中存在的葡萄糖浓度与发酵所表现出的另一个参数相关联(例如像存在于发酵液中的葡萄糖水平与二氧化碳释放速率的测量值以及来自发酵容器的废气流中存在的二氧化碳量的相关性)来开发间接监测/测量发酵过程的葡萄糖浓度的实时监测系统。可通过使用质谱仪或其他合适的仪器技术容易地测量二氧化碳以用于测量废气流的组分。在优选的实施方案中，通过使用红外光谱学的实时监测系统监测葡萄糖浓度。在另一个实施方案中，通过使用近红外光谱学的实时监测系统监测葡萄糖浓度。实时监测系统与控制将淀粉材料引入到发酵培养基中以调节发酵培养基中葡萄糖形成至期望浓度的设备连接。
可使用各种分析技术来鉴定和定量存在于发酵培养基中的单糖和二糖。一般而言，可使用诸如以下的技术：尺寸排阻色谱法；其中单糖和二糖可与金属抗衡离子形成复合物的配体转化；其中某些单糖和二糖具有在固定相(或水相)中分配趋势的分配(正相)；其中某些单糖和二糖具有交换阴离子趋势的阴离子交换；其中某些单糖和二糖具有与硼酸盐复合以交换阴离子趋势的硼酸盐复合阴离子交换。在一种分析模式中，可取发酵培养基样品并且通过具有折射率的HPLC和具有ELSD检测的UPLC分析代谢物浓度
如上所述，本发酵过程使用表达异源糖转运蛋白并且任选地包含其他遗传修饰的遗传修饰的酵母。发酵培养基中的工程改造的酵母可与淀粉降解酶一起存在，所述淀粉降解酶被加入到发酵培养基中，或从发酵培养基中的酵母(诸如工程改造的酵母)中释放。因此这些淀粉降解酶直接暴露于培养基条件并且影响发酵培养基中的碳水化合物组合物。在发酵培养基中，葡糖淀粉酶可通过裂解α-(1,4)和α-(1,6)糖苷键从淀粉或相关的低聚糖和多糖分子的非还原性末端引起D-葡萄糖的水解和释放。发酵培养基中还可能形成低分子量的非葡萄糖的糖，诸如麦芽酮糖、异麦芽糖和潘糖。
可在发酵期间两个或更多个不同时间的发酵培养基中化合物的浓度以及此类浓度之间的差异方面来描述本公开的方法。例如，可在发酵开始时的第一时间点测量糖浓度，并且然后在发酵过程期间的稍后的第二时间点测量糖浓度。第一与第二时间点之间的时间段可定义发酵期。在实施方案中，发酵期为约30小时或更长、约40小时或更长、约50小时或更长、或约60小时或更长，诸如约40至约120小时或50至约110小时范围内的时间段。
出于说明本公开方面的目的，可相对于对照发酵条件来描述糖的浓度。一种对照发酵条件是使用不具有异源糖转运蛋白的酵母进行发酵。对照酵母可以是与工程改造的酵母遗传上相同的酵母，区别在于其缺少编码异源糖转运蛋白的基因。菌株1-9是缺少异源糖转运蛋白的对照酵母的实例，并且菌株1-8是表达异源糖转运蛋白，但具有与菌株1-9相同的遗传背景的酵母的实例。
可通过工程改造的酵母降低发酵期间可能积聚的低聚糖浓度的能力来理解使用本公开酵母的优点。在发酵方法中，具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母可在第一时间点(例如，T0)与葡萄糖以及诸如在约0.5g/L至约5g/L范围内(即，低聚糖的第一浓度)的一定量的低聚糖(诸如麦芽酮糖、异麦芽糖、麦芽糖和潘糖)一起存在于发酵培养基中。在第一时间点T0，发酵培养基可具有很少(例如，小于10g/L、或小于5g/L)或不具有诸如乙醇的生物制品。具有相同碳水化合物含量但具有不表达异源糖转运蛋白的对照酵母的发酵培养基可用于比较目的。可使用具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母和对照酵母，诸如通过连续添加包含部分水解的淀粉组合物的进料在相同条件下进行发酵。在发酵期间，酵母消耗葡萄糖并且产生积聚在发酵培养基中的生物制品(诸如乙醇)。在发酵过程中，低聚糖可与部分水解的淀粉进料一起被引入，和/或可在发酵培养基中诸如通过由葡糖淀粉酶将葡萄糖逆转化为葡萄糖低聚物而形成。具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母提供低聚糖的消耗，使得在发酵一段时间后低聚糖的浓度与对照酵母相比更低(即，在第二时间点的第二浓度)。
工程改造的酵母的能力可以一种或多种方式反映出来，诸如在发酵期结束时低聚糖的浓度、与对照酵母相比低聚糖量的减少百分比和/或与发酵开始时的量相比发酵结束时的低聚糖的量。
例如，使用对照酵母并且在发酵期间，麦芽酮糖的量可从第一浓度增加至第二浓度。在相同条件下，使用表达异源糖转运蛋白的酵母的麦芽酮糖积聚不如对照发酵中那么大，其中麦芽酮糖积聚的量低于在对照发酵中形成的量。例如，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，在第二时间点的麦芽酮糖量可小于对照发酵中第二时间点的麦芽酮糖量的约90％、小于约85％、小于约80％或小于约75％，诸如对照发酵中第二时间点的麦芽酮糖量的50％-85％。
还可相对于发酵开始时存在的麦芽酮糖量来表示麦芽酮糖水平。例如，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，第二时间点的麦芽酮糖量可不大于第一时间点的浓度的四倍、不大于第一时间点的浓度的三倍或不大于第一时间点的浓度的两倍。
第二时间点的麦芽酮糖浓度可表示为绝对值。例如，在第二时间点，在发酵培养基中，麦芽酮糖可以不大于1.5g/L、不大于1.4g/L或不大于1.3g/L的量存在。
考虑到酵母在发酵一段时间后降低其他低聚糖(诸如异麦芽糖、麦芽糖和潘糖)的量的能力，也可理解表达异源糖转运蛋白的工程改造的酵母所提供的发酵益处。
例如，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，第二时间点的异麦芽糖量可小于对照发酵中第二时间点的麦芽酮糖量的约75％、小于约50％、小于约30％或小于约20％，诸如对照发酵中第二时间点的麦芽酮糖量的15％-75％。
可描述发酵期间不同时间点的其他二糖的量。例如，可相对于发酵开始时存在的异麦芽糖的量来表示第二时间点的异麦芽糖量。例如，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，第二时间点的异麦芽糖量可小于第一时间点的量、小于第一时间点的量的75％或小于第一时间点的量的50％。
第二时间点的异麦芽糖浓度也可表示为绝对值。例如，在第二时间点，在发酵培养基中，异麦芽糖可以不大于1.0g/L、不大于0.75g/L或不大于0.5g/L的量存在。
作为另一个实例，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，第二时间点的麦芽糖量可小于对照发酵中第二时间点的麦芽糖量的约75％、小于约50％、小于约35％或小于约25％，诸如对照发酵中第二时间点的麦芽糖量的20％-75％。
还可相对于发酵开始时存在的麦芽糖量来表示麦芽糖水平。例如，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，第二时间点的麦芽糖量可小于第一时间点的量、小于第一时间点的量的75％或小于第一时间点的量的55％。
第二时间点的麦芽糖浓度也可简单地为绝对值。例如，在第二时间点，在发酵培养基中，麦芽糖可以不大于1.5g/L、不大于1.25g/L或不大于1.0g/L的量存在。
作为另一个实例，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，第二时间点的潘糖量可小于对照发酵中第二时间点的潘糖量的约75％、小于约50％、小于约40％或小于约30％，诸如对照发酵中第二时间点的潘糖量的25％-75％。
还可相对于发酵开始时存在的潘糖量来表示潘糖水平。例如，使用表达异源糖转运蛋白的酵母，第二时间点的潘糖量可小于第一时间点的量、小于第一时间点的量的85％或小于第一时间点的量的75％。
第二时间点的潘糖浓度也可表示为绝对值。例如，在第二时间点，在发酵培养基中，潘糖可以不大于1.0g/L、不大于0.85g/L或不大于0.75g/L的量存在。可在发酵期间消耗一类糖的速率方面描述本公开的方法。可描述通常为处理的组合物中的主要糖的葡萄糖以及其他糖(包括异麦芽糖、麦芽酮糖、潘糖和麦芽糖)的消耗速率。
使用以下公式定义诸如麦芽酮糖的“底物的消耗速率”：
也就是说，消耗的底物除以批次时间和发酵结束时的发酵体积的乘积。“底物的消耗速率”通常以克每升每小时(g/(L-h))表示。将“消耗的总底物”定义为“添加的总底物”减去“残余底物”。将其以克(g)为单位表示。
“添加的总底物”是接种时存在于发酵培养基中的除添加或形成的任何另外底物(例如，由于在发酵结束之前水解淀粉而形成葡萄糖或非葡萄糖的糖)的质量之外的底物质量。“添加的总底物”通常以克(g)为单位表示。
“残余底物”是发酵结束时存在于发酵液中的底物质量。“残余底物”通常以克(g)为单位表示。以这种方式，可计算“麦芽酮糖消耗速率”或“麦芽酮糖的消耗速率”。其他示例性消耗速率可包括“葡萄糖消耗速率”或“糖消耗速率”。在一些实施方案中，发酵方法提供一种发酵方法，其中
乙醇在峰值发酵期间以至少5g/L*h的速率产生，并且，葡萄糖以1g/L*hr至25g/L*hr范围内，或更具体地5g/L*hr至10g/L*hr范围内的速率消耗。
在一些实施方案中，发酵方法提供一种发酵方法，其中异麦芽糖以0.005g/L*hr至1.0g/L*hr范围内，或更具体地0.01g/L*hr至0.05g/L*hr范围内的速率消耗。
在一些实施方案中，发酵方法提供一种发酵方法，其中麦芽酮糖以0.005g/L*hr至0.1g/L*hr范围内，或更具体地0.01g/L*hr至0.05g/L*hr范围内的速率消耗。
在一些实施方案中，发酵方法提供一种发酵方法，其中潘糖以0.005g/L*hr至0.1g/L*hr范围内，或更具体地0.01g/L*hr至0.05g/L*hr范围内的速率消耗。
在一些实施方案中，发酵方法提供一种发酵方法，其中麦芽糖以0.005g/L*hr至0.1g/L*hr范围内，或更具体地0.01g/L*hr至0.05g/L*hr范围内的速率消耗。
在一些实施方案中，本公开提供了一种通过发酵生产乙醇的方法，其中乙醇以80g/L或更大的浓度存在于发酵培养基中。在此方法中，对包含淀粉材料和具有异源糖转运蛋白的工程改造的酵母的液体培养基进行发酵。发酵可在液体培养基中提供约80g/L或更大，诸如约90g/L至约140g/L范围内、约90g/L至约140g/L范围内、约100g/L至约140g/L范围内或约110g/L至约140g/L范围内的乙醇浓度。
在本公开的实施方案中，在期望的发酵期后，发酵培养基在液体培养基中具有约80g/L或更大的乙醇浓度，以及低于约5g/L、低于约4.5g/L、低于约4g/L、低于约3.5g/L、低于约3.0g/L、低于约2.5g/L、低于约2.0g/L、低于约1.5g/L或低于约1.0的麦芽酮糖浓度。
在本公开的实施方案中，在期望的发酵期后，发酵培养基在液体培养基中具有约80g/L或更大的乙醇浓度，以及低于约5g/L、低于约4.5g/L、低于约4g/L、低于约3.5g/L、低于约3.0g/L、低于约2.5g/L、低于约2.0g/L、低于约1.5g/L或低于约1.0的异麦芽糖浓度。
在本公开的实施方案中，在期望的发酵期后，发酵培养基在液体培养基中具有约80g/L或更大的乙醇浓度，以及低于约5g/L、低于约4.5g/L、低于约4g/L、低于约3.5g/L、低于约3.0g/L、低于约2.5g/L、低于约2.0g/L、低于约1.5g/L或低于约1.0的潘糖浓度。
还可根据工程改造的酵母的生长速率来描述本公开的工程改造的酵母。酵母的生长速率可由L＝log(数量)定义，其中数量是每单位体积(mL)形成的酵母细胞的数量，相对于T(时间)。在本公开的实施方案中，包含异源糖转运蛋白的遗传修饰的酵母能够促进麦芽酮糖的摄取和发酵，其中所述细胞能够以大于0.02的速率在具有麦芽酮糖的液体培养基中生长。
在一些实践模式中，可从发酵液中回收发酵产物。完成这种回收的方式将取决于特定的产物。然而，在一些实践模式中，通常通过过滤步骤或离心步骤将生物体与液相分离，并且通过例如蒸馏、萃取、结晶、膜分离、渗透、反渗透或其他合适的技术回收产物。
可首先用一种或多种试剂的处理系统处理发酵产物。然后可将处理的发酵产物送入蒸馏系统。在蒸馏系统中，发酵产物可被蒸馏并且脱水成乙醇。在一些实施方案中，从发酵培养基移除的组分包括水、可溶性组分、油和未发酵固体。其中一些组分可用于其他目的，诸如用于动物饲料产品。可从釜馏物中回收其他副产品，例如糖浆。
回流是在蒸馏过程中除去生物制品(诸如醇)之后的剩余发酵液。洗涤器水是从洗涤器收集的液体。本公开的常用术语的定义可见于The Alcohol Textbook,第4版.1995。
本公开还提供了一种用于生产诸如以下的食品、饲料或饮料产品的方法：酒精或非酒精饮料，诸如基于谷物或麦芽的饮料(如啤酒或威士忌酒)，诸如红酒、苹果酒、醋、米酒、酱油或果汁，所述方法包括用如本文所述的组合物处理含有淀粉和/或糖的植物材料的步骤。
在一个方面，本发明涉及一种生产乙醇同时产生比其他发酵过程更低量乙醛的发酵方法。乙醛是通常在发酵过程的废气中排放的不期望的发酵副产物。已令人惊讶地发现，本文所述的基因工程改造的酵母的一些实施方案产生比其他酵母菌株显著更少的乙醛，同时产生相似或甚至更大量的乙醇。
在另一方面，本发明涉及导致发酵期间乙醛产生减少的某些发酵参数范围或值。在一些实施方案中，这些发酵参数范围可用于利用本文所述的任何遗传工程改造的酵母的发酵过程。在一些实施方案中，这些发酵参数范围可用于利用任何商业上相关的酿酒酵母(例如但不限于ETHANOL REDTM酵母或TRANSFERMTM酵母)的发酵过程。与减少的乙醛产生相关联的发酵参数包括发酵培养基中部分水解的淀粉的DE、发酵培养基的葡萄糖浓度和/或发酵过程的GA活性。预期在发酵期间将这些将这些参数设定和/或维持在本文所述的值或范围内可导致与当前的商业乙醇发酵过程相比更低的乙醛量。此外，与其他酵母相比，当使用本发明的基因工程改造的酵母时，减少乙醛的效果可更大。
在一些实施方案中，用于本文所述发酵方法的部分水解淀粉的DE在接种后小于20。在一些此类实施方案中，DE在接种的1h、2h、3h、4h或5h内小于20。在一些实施方案中，本文所述发酵方法中使用的部分水解淀粉的DE在接种后5h内小于25、小于30、小于35、小于40、小于45或小于50。
在一些实施方案中，发酵期间的葡萄糖浓度小于约80g/L。在一些实施方案中，对于发酵的至少初始部分，葡萄糖浓度例如在接种的1h、2h、3h、4h或5h内不超过80g/L。在一些实施方案中，发酵期间培养基的葡萄糖浓度不超过80、75、70、65、60、55、50、45或40g/L，并且与使用酵母且具有超过80、95、90、95、100或105g/L的葡萄糖浓度的发酵过程相比，发酵期间产生的乙醛总量减少。在一些此类实施方案中，发酵期间培养基的葡萄糖浓度不超过70g/L，并且与使用酵母且具有超过80、95、90、95、100或105g/L的葡萄糖浓度的发酵过程相比，发酵期间产生的乙醛总量减少。
在一些实施方案中，与其他乙醇发酵过程相比，发酵期间所述发酵培养基中的GA活性较低。在一些实施方案中，GA活性小于被称为“1X GA活性”的标准GA活性的0.8倍、0.75倍、0.7倍、0.65倍、0.6倍、0.55倍或0.5倍。“1X GA活性”意指将在接种后9h通过水解淀粉产生135g/L葡萄糖的接种时加入的最小酶剂量，加或减5％。在一些实施方案中，GA活性在1XGA活性的0.675至0.8倍的范围内。
与其他发酵过程(例如在接种10小时或更短的时间内葡萄糖浓度超过90g/L的过程)相比，以上参数范围(单独或组合)可将发酵中产生的乙醛总量减少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。在一些实施方案中，为了比较在两种不同发酵过程中产生的乙醛的量，测量以给定二氧化碳释放速率(CER)产生的乙醛的总量是有用的。如本领域技术人员将理解的，出于比较目的，可使用在相同或类似的CER下比较发酵过程来代替时间以标准化发酵过程的进程。根据本领域已知的方法确定二氧化碳释放速率(CER)。CER基于供应至发酵的所有气体的流速、离开发酵的所有气体的流速、所有这些气流的相对CO2浓度以及发酵培养基的体积。CER的测量单位为mmol L- 1h-1。
实施例#1.酿酒酵母基础菌株构建。
用SEQ ID NO 1转化菌株1。SEQ ID NO 1含有以下元件：i)来自酿酒酵母(ARO4-OFP)的对应于核苷酸479-2647的突变形式的3-脱氧-D-阿拉伯-庚酮糖酸-7-磷酸(DAHP)合酶基因的表达盒；ii)对应于核苷酸445-478和2648-2681的loxP序列，和iii)用于靶向染色体整合到整合基因座A中的侧翼DNA，其中核苷酸1-436对应于整合基因座A5’侧翼区，并且核苷酸2691-3182对应于整合基因座A3’侧翼区。在含有3.5g/L对氟苯丙氨酸和1g/L L-酪氨酸(ScD-PFP)的合成完全培养基上选择转化体。将所得转化体在ScD-PFP上划线进行单菌落分离。选择单菌落。在单菌落中通过PCR验证将SEQ ID NO:1正确整合到基因座A的一个等位基因中。将PCR验证的分离株命名为菌株1-1。
用SEQ ID NO 2转化菌株1-1。SEQ ID NO 2含有以下元件：i)来自构巢曲霉的对应于核苷酸638-2284的乙酰胺酶(amdS)基因的密码子优化的表达盒，其中TEF1启动子对应于核苷酸2285-2740并且TEF1终止子对应于核苷酸478-637；ii)对应于核苷酸444-477和2741-2774的loxP序列，和iii)用于靶向染色体整合到整合基因座A中的侧翼DNA，其中核苷酸1-435对应于整合基因座A5’侧翼区，并且核苷酸2783-3275对应于整合基因座A3’侧翼区。在含有80mg/L尿嘧啶和1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上选择转化体。将所得转化体在含有80mg/L尿嘧啶和1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上划线进行单菌落分离。选择单菌落。在单菌落中通过PCR验证将SEQ IDNO 2正确整合到基因座A的第二等位基因中。将PCR验证的分离株命名为菌株1-2。
用SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4共转化菌株1-2。SEQ ID NO 3含有以下元件：i)来自P1噬菌体的对应于核苷酸53-1084的cre重组酶的开放阅读框，和ii)与SEQ ID NO 4同源的对应于核苷酸1-47和1086-1132的侧翼DNA。SEQ ID NO 4含有以下元件：i)对应于核苷酸2195-3350的2μ复制起点；ii)来自酿酒酵母的对应于核苷酸3785-4901的URA3选择性标记；和iii)来自酿酒酵母的含有对应于核苷酸5791-6376的PGK启动子和对应于核苷酸10-199的CYC1终止子的侧翼DNA。对于SEQ ID NO 4的剩余部分，pUC复制起点对应于核苷酸386-1053；并且氨苄青霉素抗性基因对应于核苷酸1204-2061。在缺乏尿嘧啶(ScD-Ura)的合成缺陷培养基上选择转化体。将所得转化体在YPD上划线进行单菌落分离。选择单菌落。在ScD-PFP以及含有80mg/L尿嘧啶和1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上筛选分离菌落的生长。通过PCR验证ARO4-OFP和amdS基因的丢失。将PCR验证的分离株划线至ScD-Ura以验证复制质粒的丢失。将PCR验证的分离株命名为菌株1-3。
实施例#2.在菌株1-3中过表达天然异麦芽糖酶以产生菌株1-4
用SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6转化菌株1-3。SEQ ID NO 5含有与整合基因座B的5’同源性、天然IMA1的表达盒和amdS标记的表达盒的一部分。SEQ ID NO 6含有amdS选择标记的一部分，和与整合基因座B的3’同源性。在YNB+乙酰胺上选择转化体。将所得转化体划线至YPD以用于单菌落分离。选择单菌落。通过PCR确认整合的存在。将单菌落命名为菌株1-4。
实施例#3.测量菌株1-4中的异麦芽糖酶活性。
在30℃和250RPM下，使菌株1和菌株1-4在包含在标准挡板式250ml摇瓶中的补充有40mg/L尿嘧啶的50ml YPD 100g/L葡萄糖中生长过夜。将整个烧瓶以4000RPM离心10分钟，并且弃去上清液。在储存在-80℃下之前，用10ml冰冷的100mM磷酸钾(pH7.0)洗涤沉淀。在测定之前，将沉淀各自重新悬浮在1ml冰冷的100mM磷酸钾(pH7.0)中，并且转移到含有0.5ml体积约500微米无菌玻璃珠粒的2.0ml螺旋盖试管中。在珠磨机中两次连续1分钟的循环(在其间冰上1分钟)之后，在4℃下以14,000RPM将碎片沉淀10分钟。使用96孔微量滴定板的两步方案，将所得上清液用于酶分析。第一反应含有10μl无细胞提取物(CFE)、10μl100mM异麦芽糖和80μl 100mM磷酸钾(pH7.0)。在30℃下温育30分钟后，将20μl第一反应物加入到180μl HXK/G6PDH主混合物(Sigma目录号G3293)中。使用具有已知葡萄糖浓度的样品的标准曲线来计算样品中消耗的异麦芽糖的量。使用Advanced Protein Assay(Cytoskeleton公司，目录号ADV01-A)测定蛋白质浓度。将一个单位定义为每分钟催化1微摩尔底物转化的酶的量。
图1中的结果显示与菌株1相比，菌株1-4具有更高的异麦芽糖酶活性。
实施例#4.用潜在的异麦芽糖转运蛋白转化菌株1-3。
用分别与SEQ ID NO.13组合的SEQ ID NO.7至12转化菌株1-3(表1)。SEQ ID NO 7至12含有潜在的异麦芽糖转运蛋白的开放阅读框，以及小的突出端以促进与SEQ ID NO 13的同源重组。SEQ ID NO 13含有1)对应于核苷酸4-227bp的CYC1终止子，2)允许对应于核苷酸2485-3003bp的稳定复制的着丝粒(CEN6)，和3)对应于核苷酸3262-4359bp的乳清苷-5’-磷酸脱羧酶(URA3)的表达盒)，和4)对应于核苷酸5090-5835bp的ADH1启动子。SEQ ID NO13还包含对应于核苷酸1496-2352bp的氨苄青霉素抗性基因。在含有10g/L异麦芽糖(TCI#I0231)的ScD-Ura或Sc-Ura上选择转化体。对于每次转化，在30℃下3天后，ScD-Ura选择获得大约500-1000个转化体(未示出)。在30℃下7天后，在Sc-Ura 10g/L异麦芽糖上获得可变数量的转化体，如图2所示。
表1中示出的结果表明ScMAL11、ScMPH2、DhMAL11(DEHA2A08140g)、DhMAL11(DEHA2E00550g)和TdMAL11在菌株1-3中起作用并且能够转运异麦芽糖，而SpSUT1和空载体未能产生能够在异麦芽糖上生长的任何可见菌落。
表1.
实施例#5.用另外的转运蛋白转化菌株1-5。
从Invitrogen酵母基因缺失文库获得菌株1-5(目录号95401.H2，记录号7294)。用分别与SEQ ID NO 13组合的SEQ ID NO 14-29转化菌株1-5。SEQ ID NO 14-29含有表2中描述的每个单独转运蛋白的完整开放阅读框，其针对酿酒酵母进行了密码子优化，具有5’和3’同源性以能够与SEQ ID NO 13重组。从ERGO数据库获得SEQ ID NO 14-29。在含有10g/L异麦芽糖(Tokyo Chemical公司，目录号I0231)的ScD-Ura或Sc-Ura上选择转化体。对于在30℃下3天后ScD-Ura选择的每个转化，转化是成功的。在30℃下7天后，几种转化在Sc-Ura10g/L异麦芽糖上成功，如图3所示。
图3中的结果显示SmMAL11-1、SmMAL11-2、SpMAL11和三种ScMAL11变体补充了无效表型(尽管ScMAL11-CBS7690产生了很少的转化体)。
表2.实施例5中描述的转运蛋白的描述
实施例#6.构建在稳定复制质粒上含有异源转运蛋白的菌株
用SEQ ID NO 13和SEQ ID NO 14转化菌株1-3。在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。将单菌落保存为菌株1-6。
用SEQ ID NO 30转化菌株1-3。SEQ ID NO 30含有以下元件：i)对应于核苷酸195至1292的URA3表达盒，ii)对应于核苷酸4305至4823的允许稳定复制的着丝粒(CEN6)。对于SEQ ID NO 30的剩余部分，pUC复制起点对应于核苷酸2495至3168；并且氨苄青霉素抗性基因对应于核苷酸3316至4173。
在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。将单菌落保存为菌株1-7。
用SEQ ID NO 13和SEQ ID NO 14转化菌株1-4。在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。将单菌落保存为菌株1-8。
用SEQ ID NO 30转化菌株1-4。在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。将单菌落保存为菌株1-9。
实施例#7.使用95DE原料进行2L补料分批发酵，将菌株1-8和菌株1-9与菌株1进行比较
在含有100mL ScD-Ura培养基的500mL带挡板烧瓶中开始种子烧瓶。用来自ScD-Ura板的单个菌落接种烧瓶，并且在30℃和250rpm下温育20-24小时。制成两种分开的发酵培养基原液。第一种培养基原液含有278ml 95DE(95％水解淀粉)、456ml无菌淡浸渍水、1.9g尿素，通过顶板中的汲取管将其加入到灭菌的2L Benchtop Biostat B中。将其从种子烧瓶接种成0.2OD600的初始间距(0.06g/l细胞干重)。第二种培养基原液含有1000ml 95DE和100g葡萄糖，取出750ml所述培养基并且在接种后以不同的速率加入直至用尽(在66小时时间点之前)。在16小时时，使用100g/L原液将2g/L异麦芽糖掺入到发酵中。将温度控制在30℃下，将发酵液在100-150rpm的搅拌下进行搅动，并且将空气以0.38slpm喷入培养基中。一旦达到这些设定点，则校准溶解氧(DO)探针并且监测发酵的DO％。还监测了发酵的pH但未加以控制。还监测了废气中的CO2产生、O2消耗和乙醇蒸发。在发酵期间取样并且通过具有折射率的UPLC和具有ELSD检测的HPLC分析发酵液中的代谢物浓度。
结果清楚地显示，相对于对照菌株1-9和原始野生型菌株1，菌株1-8能够还原95DE中的三种主要低聚糖：异麦芽糖(图6)、麦芽糖(图7)和潘糖(图8)。乙醇生产和葡萄糖消耗在菌株之间是相似的(图4和图5)。
表3.用95DE原料进行2L补料分批发酵的汇总结果
| ID | 菌株1 | 菌株1-9 | 菌株1-8 |
| 发酵时间(h) | 66 | 66 | 66 |
| 最大EtOH滴度(g/L) | 127.45 | 125.56 | 126.21 |
| 速率(g/L/h) | 1.90 | 1.89 | 1.89 |
| 残余异麦芽糖(g/L) | 2.46 | 3.32 | 0.42 |
| 残余麦芽糖(g/L) | 2.96 | 3.82 | 0.83 |
| 残余潘糖(g/L) | 1.97 | 2.65 | 0.65 |
实施例#8.产生含有整合到菌株1-3的基因组中的两个异源ScIMA1和SmMAL11-1拷贝的菌株
用SEQ ID NO 31转化菌株1-3。SEQ ID NO 31含有与基因座C的5’同源性、ScIMA1的表达盒、URA3标记的表达盒、SmMAL11-1的表达盒以及与整合基因座C的3’同源性。在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证基因座C处整合的存在。将PCR验证的分离株保存为菌株1-10。
用SEQ ID NO 32转化菌株1-10。SEQ ID NO 32含有与整合基因座C的5’同源性、ScIMA1的表达盒、构巢曲霉乙酰胺酶基因(amdS)的表达盒、SmMAL11-1的表达盒以及与基因座C的3’同源性。在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上选择转化体。将所得转化体在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证在基因座C的剩余等位基因处正确整合SEQID NO 32。将PCR验证的分离株命名为菌株1-11。
实施例#9.转化菌株1-3以产生比较酵母菌株1-11，其缺乏ScIMA1和SmMAL11-1过表达。
用SEQ ID NO 33转化菌株1-3。SEQ ID NO 33含有与整合基因座C的5’同源性、GFP(绿色荧光蛋白)的表达盒、天然URA3的表达盒以及与基因座C的3’同源性。在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证基因座C处整合的存在。将PCR验证的分离株保存为菌株1-12。
用SEQ ID NO 34转化菌株1-12。SEQ ID NO 34含有与整合基因座C的5’同源性、GFP的表达盒、构巢曲霉乙酰胺酶基因(amdS)的表达盒以及与基因座C的3’同源性。在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上选择转化体。将所得转化体在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证在基因座C的剩余等位基因处正确整合SEQ ID NO 34。将PCR验证的分离株命名为菌株1-13。将菌株1-13用于研究不存在ScIMA1和SmMAL11-1时在基因座C处缺失基因所引起的效应。
实施例10.产生含有四个扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶拷贝的菌株
用SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36共转化菌株1-3。SEQ ID NO:35含有以下元件：i)与天然CYB2基因的5’区同源的DNA；和ii)扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶的独特密码子优化变体的表达盒，其处于TDH3启动子和CYC1终止子的控制下；以及iii)URA3启动子以及URA3基因的一部分。SEQ ID NO:36含有以下元件：i)URA3基因的一部分和终止子；和ii)扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶的独特密码子优化变体的表达盒，其处于PGK启动子和RPL3终止子的控制下；以及iii)与天然CYB2基因的3’区同源的DNA。在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证在CYB2的一个等位基因处正确整合SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36。将PCR验证的分离株命名为菌株1-14。
用SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38共转化菌株1-14。SEQ ID NO:37含有以下元件：i)与整合基因座B的5’区同源的DNA；和ii)扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶的独特密码子优化变体的表达盒，其处于TDH3启动子和CYC1终止子的控制下；以及iii)TEF1启动子和构巢曲霉乙酰胺酶基因(amdS)的一部分。SEQ ID NO:38含有以下元件：i)构巢曲霉乙酰胺酶基因(amdS)的一部分和ADH1终止子；和ii)扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶的独特密码子优化变体的表达盒，其处于PGK启动子和RPL3终止子的控制下；以及iii)与整合基因座B的3’区同源的DNA。在含有80mg/L尿嘧啶和1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上选择转化体。将所得转化体在含有80mg/L尿嘧啶和1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证在整合基因座B的剩余等位基因处正确整合SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38。将PCR验证的分离株命名为菌株1-15。
用SEQ ID NO:39转化菌株1-15。SEQ ID NO:39含有以下元件：i)来自酿酒酵母(ARO4-OFP)的突变形式的3-脱氧-D-阿拉伯-庚酮糖酸-7-磷酸(DAHP)合酶基因的表达盒；2)来自P1噬菌体的cre重组酶的表达盒；3)含有天然URA3的表达盒，以及4)酿酒酵母CEN6着丝粒。在含有3.5g/L对氟苯丙氨酸和1g/L L-酪氨酸(ScD-PFP)的合成完全培养基上选择转化体。将所得转化体在ScD-PFP上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证URA3和amdS基因的丢失。将PCR验证的分离株命名为菌株1-16。
实施例#11.用酿酒酵母IMA1的两个拷贝和Saccharomyces mikatae MAL11-1的两个拷贝转化菌株1-16。
用SEQ ID NO 31转化菌株1-16。SEQ ID NO 31含有与整合基因座C的5'同源性、ScIMA1的表达盒、URA3标记的表达盒、SmMAL11-1的表达盒以及与整合基因座C基因座的3’同源性。在ScD-Ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-Ura上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证基因座C处整合的存在。将PCR验证的分离株保存为菌株1-17。
用SEQ ID NO:32转化菌株1-17。SEQ ID NO 32含有与整合基因座C的5’同源性、ScIMA1的表达盒、构巢曲霉乙酰胺酶基因(amdS)的表达盒、SmMAL11-1的表达盒以及与整合基因座C的3’同源性。在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上选择转化体。将所得转化体在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证在基因座C的剩余等位基因处正确整合SEQ ID NO:32。将PCR验证的分离株命名为菌株1-18。
实施例#12.转化菌株1-16以产生比较酵母菌株1-18，其缺乏ScIMA1和SmMAL11-1过表达。
使菌株1-16生长过夜并且用SEQ ID NO 40转化。SEQ ID NO 40含有与整合基因座C的5’同源性、URA3的表达盒以及与基因座C的3’同源性。在ScD-Ura琼脂板上选择转化体。将所得转化体在YPD上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR确认整合的存在。将PCR验证的分离株命名为菌株1-19。
用SEQ ID NO 41转化菌株1-19。SEQ ID NO 41含有与整合基因座C的5’同源性、与URA3的上游区域的同源性、构巢曲霉乙酰胺酶基因(amdS)的表达盒、与URA3的下游区域的同源性以及与整合C基因座的3’同源性。在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上选择转化体。将所得转化体在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证在基因座C的剩余等位基因处正确整合SEQ ID NO:41。将PCR验证的分离株命名为菌株1-20。将菌株1-20用于研究不存在ScIMA1和SmMAL11但存在扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶时在基因座C处缺失基因所引起的效应。
用SEQ ID NO 42转化菌株1-19。SEQ ID NO 42含有与整合基因座C的5’同源性、构巢曲霉乙酰胺酶基因(amdS)的表达盒以及与整合C基因座的3’同源性。在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上选择转化体。将所得转化体在含有1g/L乙酰胺作为唯一氮源的酵母氮源(无硫酸铵或氨基酸)上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证在基因座C的剩余等位基因处正确整合SEQ ID NO:42。将PCR验证的分离株命名为菌株1-21。将菌株1-21用于研究不存在ScIMA1和SmMAL11但存在扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶时在基因座C处缺失基因所引起的效应。
实施例#13.在摇瓶中同时糖化和发酵(SSF)以便使菌株过表达Sf GA、ScIMA1和SmMAL11-1
将菌株1-15、1-18和1-20划线至YPD板并且在30℃下温育直至单菌落可见(1-2天)。将来自YPD板的细胞刮入无菌摇瓶培养基中，并且测量光密度(OD600)。使用Genesys20型分光光度计(Thermo Scientific)在600nm波长和1cm路径长度下测量光密度。用细胞浆液接种摇瓶以达到0.1-0.3的初始OD600。在即将接种之前，将50mL摇瓶培养基加入到配有包含透气密封件(corning 1395-45LTMC)的螺旋盖的250mL无挡板摇瓶(Corning 4995-250)中。摇瓶培养基含有625g部分水解玉米淀粉、150g过滤的淡浸渍水、150g水、25g葡萄糖和1g尿素。将每种菌株的一式两份烧瓶在30℃下以100rpm的回转式摇动在摇动下温育48小时。在发酵期间取样并且通过具有折射率的UPLC和具有ELSD检测的HPLC分析发酵液中的代谢物浓度。
图10和11中显示的结果表明菌株1-18中改善的异麦芽糖和麦芽酮糖消耗。
实施例#14.菌株1-15、1-18和1-21在2L Benchtop Biostat B发酵罐中的同时糖化和发酵
将在250mL带有挡板摇瓶中的含有50mL酵母菌发酵液的菌株1-15、1-18和1-21的种子烧瓶从新鲜的YPD板接种至OD600为大约0.2。将摇瓶在30℃下温育约22小时并且以250rpm搅拌。计算接种体积以达到0.2OD600的初始间距(0.06g/l细胞干重)。用菌株1-18接种一式两份的发酵罐。在无菌罩中进行培养基准备，并且在转移到各个发酵罐之前在先前灭菌的容器中混合。为了制备培养基，加入液化液(Liquefact)材料，随后加入95DE(95％水解淀粉)、淡浸渍水(LSW)和回流(BS)。以每个发酵罐大约1.5L培养基的最终体积为目标(表4)。在加入到接种物中之前，将尿素溶解在少量无菌水中。在无菌水中制备100g/l异麦芽糖溶液并且加入到每个发酵罐中以将起始异麦芽糖浓度提高1g/l异麦芽糖(TCI#I0231)。由于原料的可变性，每种材料的准确量是可变的。通过顶板中的汲取管将培养基泵入无菌容器中。通过顶板中的口使每个发酵罐接种大约25ml过夜种子培养物。将温度控制在30℃下，将发酵液在175rpm的搅拌下进行搅动，并且将空气以0.38slpm喷入培养基中。一旦达到这些设定点，则校准溶解氧(DO)探针并且监测发酵的DO％。还监测了发酵的pH但未加以控制。还监测了废气中的CO2产生、O2消耗和乙醇蒸发。在发酵期间取样并且通过具有折射率的UPLC和具有ELSD检测的HPLC分析发酵液中的代谢物浓度。
表4.每个发酵罐培养基配方
| 组分 | 每个发酵罐 |
| 液化液(mL) | 851 |
| 95DE(水解淀粉95％)(mL) | 300 |
| LSW(mL) | 337 |
| BS(mL) | 12 |
| 尿素(g) | 0.32 |
| 异麦芽糖(g) | 1.5 |
| 总计 | 1500 |
表5.菌株1-15、1-18和1-21在2L Benchtop Biostat B发酵罐中SSF的汇总结果
实施例#15.回收菌株1-18中的选择性标记并且将整合基因座A恢复为野生型。
用SEQ ID NO:39转化菌株1-18。在含有3.5g/L对氟苯丙氨酸和1g/L L-酪氨酸(ScD-PFP)的合成完全培养基上选择转化体。将所得转化体在ScD-PFP上划线进行单菌落分离。选择单菌落。通过PCR验证整合基因座C处URA3和amdS基因的丢失。将PCR验证的分离株命名为菌株1-22。
用SEQ ID NO:43转化菌株1-22。SEQ ID NO:43含有以下元件：天然URA3的表达盒、与菌株1-22中破坏的URA3基因座具有5’和3’同源性。在ScD-ura上选择转化体。将所得转化体在ScD-ura上划线进行单菌落分离。选择单菌落。将PCR验证的分离株命名为菌株1-23。
实施例#16.在4L发酵罐中用于菌株1-23和菌株1的SSF发酵。
将在250mL带有挡板摇瓶中的含有50mL酵母菌发酵液的种子烧瓶从新鲜的YPD板接种至起始OD600为大约0.2。将摇瓶在30℃下温育约22小时并且以250rpm搅拌。计算接种体积以达到0.2OD600的初始间距(0.06g/l细胞干重)。使用New Brunswick Bioflo 310发酵单元进行发酵。将4L发酵在30℃下进行，其中搅拌设定为100rpm，并且喷雾空气设定为每体积培养基(VVM)0.25体积空气。表6中列出了发酵培养基组分。游离氨基氮(FAN)水平的目标为600ppm(500ppm来自原始淡浸渍水并且100ppm来自尿素)。还监测了废气中的CO2产生和O2消耗。在发酵期间取样并且通过具有折射率的UPLC和具有ELSD检测的HPLC分析发酵液中的代谢物浓度。还监测了废气中的CO2产生、O2消耗和乙醇蒸发。此外，在相同的CER水平下采集气袋样品以测量挥发性有机化合物。对每种菌株进行一式两份发酵。将1.17ml商业葡糖淀粉酶(Dupont Distillase)加入到菌株1发酵中。在发酵期间取样并且通过具有折射率的UPLC和具有ELSD检测的HPLC分析发酵液中的代谢物浓度。
表8中的结果显示，相对于未经遗传修饰的菌株，菌株1-23能够还原麦芽糖、异麦芽糖、麦芽酮糖、麦芽三糖和潘糖。图15中的结果还显示菌株1-23比菌株1产生更少的乙醛。图15示出在发酵的连续阶段，以废气中的ppm乙醛对CER(二氧化碳释放速率)作图。CER为比较发酵相似阶段中的不同菌株提供了标准化度量。最后，表7中示出的结果显示菌株1-23能够以比菌株1更高的产率生产乙醇。
表6.发酵培养基组成
表7.数据汇总
表8.发酵结束时的代谢物水平(g/L)
实施例#17特定的有氧生长速率
测定上述菌株中的一些的特定有氧生长速率。使用含有6.7g/L无氨基酸的酵母氮源、1.9g/L无尿嘧啶的合成完全缺陷混合物、2.5g/L麦芽酮糖、9.5g/L MES缓冲液、用5M氢氧化钾调节至pH6.0的合成培养基。将含有4ml培养基的过夜15ml falcon活扣帽管接种至起始OD600为0.5，并且在250RPM的搅拌下放置在30℃下的摇动培养箱中。在16小时后，测量OD600并且将细胞在25ml包含在125ml带有挡板摇瓶中的新鲜培养基中稀释至OD600为0.05，在250RPM的搅拌下在30℃下的摇动培养箱中温育。监测OD600四小时。使用最少四个取样点，将生长速率报告为拟合成用对数标度绘制的OD600数据的趋势线的指数。
如表9所示，在含有SmMAL11-1转运蛋白的菌株中，麦芽酮糖的生长速率显著较高。
表9.在麦芽酮糖上的生长速率
| 菌株 | 生长速率 |
| 1 | <0.01 |
| 1-13 | <0.01 |
| 1-11 | 0.27 |
| 1-15 | <0.01 |
| 1-21 | <0.01 |
| 1-18 | 0.28 |
| 1-23 | 0.25 |
| 1-6 | 0.22 |
| 1-7 | <0.01 |
| 1-8 | 0.20 |
| 1-9 | <0.01 |
表10.序列表
实施例#18SSF发酵改变菌株1和菌株1-23的GA剂量。
将在250mL带有挡板摇瓶中的含有50mL酵母菌发酵液的种子烧瓶从甘油原液接种。将摇瓶在30℃下温育约16小时并且以250rpm搅拌。计算接种体积以达到0.03OD600的初始间距。使用8个2L Biostat B发酵单元进行发酵。将1.5L发酵在30℃下进行，其中搅拌设定为175rpm，并且喷雾空气设定为每体积培养基(VVM)0.25体积空气。发酵培养基组分在表11中列出。游离氨基氮(FAN)水平的目标为600ppm(500ppm来自淡浸渍水并且100ppm来自尿素)。在发酵期间取样并且通过具有折射率的HPLC分析发酵液中的代谢物浓度。监测了废气中的CO2产生、O2消耗和乙醇蒸发。此外，在三个等效的CER水平下采集气袋样品以测量挥发性有机化合物(接种后8至15小时之间)。对每种菌株和每种条件进行一式两份发酵。向菌株1发酵中加入三种水平的商业葡糖淀粉酶(DuPont Distillase)(参见下表12)。一个葡糖淀粉酶单位(GAU)是将在GAU测定条件下从可溶性淀粉底物每小时释放1克还原糖(以葡萄糖计算)的酶的量。
GAU测定的定义：1)向50ul 1％淀粉溶液(溶解在50ml近沸水中的0.5g Sigma可溶性淀粉)中加入50ul酶(或其稀释液)，然后用1ml 3M NaOAc(pH 5)调节pH。在30C下温育期望的时间(15分钟至1小时之间)。在PCR板中执行此步骤。2)加入100ul的DNS试剂(溶解在50ml水中的1g DNS，加入30g酒石酸钾钠，然后加入20ml 2N NaOH，使体积达到100ml)。在PCR仪中于在99C下温育板10分钟。冷却至室温。3)将100ul转移至新鲜的96孔平底并且在540nm读取abs。制备葡萄糖浓度为0至2.5g/L的标准曲线以产生回归线从而计算实际葡糖淀粉酶活性。一个葡糖淀粉酶单位(GAU)是每小时将从每升可溶性淀粉释放1克葡萄糖的酶的量。
图16示出每种条件下一个重复的发酵期间的CER曲线。收集并分析了三个气袋样品，其中两个在峰值CER之前，并且一个在峰值CER处。图17示出与菌株1相比，在菌株1-23的所有三个时间点处废气中乙醛的减少。另外，降低菌株1中的GA剂量也可减少废气中的乙醛。图18和19示出乙醇和葡萄糖曲线。菌株1具有多至15小时的等效乙醇生产速率，此时发酵对于具有0.5X和0.625X GA剂量的菌株1发酵成为葡萄糖限制的。具有0.5X和0.625X GA剂量的菌株1未能在指定时间内完成发酵。
表11.发酵培养基配方
表12.Distillase剂量
序列表
<110> 嘉吉公司
C·米勒
A·内格雷特-雷蒙德
J·维尔多豪斯
A·瓦什
B·拉什
<120> 糖转运蛋白修饰的酵母菌株和用于生物制品生产的方法
<130> N00309-PCT-US
<150> 62/268,932
<151> 2015-12-17
<160> 45
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 3182
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座A-loxP-ARO4-OFP整合片段
<400> 1
cctactgcgc caattgatga caatacagac gatgataaca aaccgaagtt atctgatgta 60
gaaaaggatt aaagatgcta agagatagtg atgatatttc ataaataatg taattctata 120
tatgttaatt accttttttg cgaggcatat ttatggtgaa ggataagttt tgaccatcaa 180
agaaggttaa tgtggctgtg gtttcagggt ccataaagct tttcaattca tctttttttt 240
ttttgttctt ttttttgatt ccggtttctt tgaaattttt ttgattcggt aatctccgag 300
cagaaggaag aacgaaggaa ggagcacaga cttagattgg tatatatacg catatgtggt 360
gttgaagaaa catgaaattg cccagtattc ttaacccaac tgcacagaac aaaaacctgc 420
aggaaacgaa gataaagcgg ccgcataact tcgtataatg tatgctatac gaagttatct 480
gccagtatac agctagcctt gaaagtgatg gaaaacattg tcatcggcac ataaataaaa 540
aaattatgaa tcacgtgatc aacagcaaat tatgtactcg tatatatgca agcgcattcc 600
ttatattgac actctttcat tgggcatgag gctgtgtaaa cataagctgt aacggtctca 660
cggaacactg tgtagttgca ttactgtcag gcagttatgt tgcttaatat aaaggcaaag 720
gcatggcaga atcactttaa aacgtggccc cacccgctgc accctgtgca ttttgtacgt 780
tactgcgaaa tgactcaacg atgaaatgaa aaaattttgc ttgaaatttt gaaaaaaaga 840
tgtgcgggac gcattgttag ctcattgaat acatcgtgat cgaatccaat caatgtttaa 900
tttcatatta atacagaaac tttttctcat actttcttct tcttttcatt ggtatattat 960
ctatatatcg tgttaattcc tctttcgtca tttttagcat cgttataaga gtaattaaga 1020
ataactagaa gagtctctct ttatattcgt ttattttata tatttaaccg ctaaatttag 1080
taaacaaaag aatctatcag aaatgagtga atctccaatg ttcgctgcca acggcatgcc 1140
aaaggtaaat caaggtgctg aagaagatgt cagaatttta ggttacgacc cattagcttc 1200
tccagctctc cttcaagtgc aaatcccagc cacaccaact tctttggaaa ctgccaagag 1260
aggtagaaga gaagctatag atattattac cggtaaagac gacagagttc ttgtcattgt 1320
cggtccttgt tccatccatg atctagaagc cgctcaagaa tacgctttga gattaaagaa 1380
attgtcagat gaattaaaag gtgatttatc catcattatg agagcatact tggagaagcc 1440
aagaacaacc gtcggctgga aaggtctaat taatgaccct gatgttaaca acactttcaa 1500
catcaacaag ggtttgcaat ccgctagaca attgtttgtc aacttgacaa atatcggttt 1560
gccaattggt tctgaaatgc ttgataccat ttctcctaaa tacttggctg atttggtctc 1620
cttcggtgcc attggtgcca gaaccaccga atctcaactg cacagagaat tggcctccgg 1680
tttgtctttc ccagttggtt tcaagaacgg taccgatggt accttaaatg ttgctgtgga 1740
tgcttgtcaa gccgctgctc attctcacca tttcatgggt gttactaagc atggtgttgc 1800
tgctatcacc actactaagg gtaacgaaca ctgcttcgtt attctaagag gtggtaaaaa 1860
gggtaccaac tacgacgcta agtccgttgc agaagctaag gctcaattgc ctgccggttc 1920
caacggtcta atgattgact actctcacgg taactccaat aaggatttca gaaaccaacc 1980
aaaggtcaat gacgttgttt gtgagcaaat cgctaacggt gaaaacgcca ttaccggtgt 2040
catgattgaa tcaaacatca acgaaggtaa ccaaggcatc ccagccgaag gtaaagccgg 2100
cttgaaatat ggtgtttcca tcactgatgc ttgtataggt tgggaaacta ctgaagacgt 2160
cttgaggaaa ttggctgctg ctgtcagaca aagaagagaa gttaacaaga aatagatgtt 2220
tttttaatga tatatgtaac gtacattctt tcctctacca ctgccaattc ggtattattt 2280
aattgtgttt agcgctattt actaattaac tagaaactca atttttaaag gcaaagctcg 2340
ctgacctttc actgatttcg tggatgttat actatcagtt actcttctgc aaaaaaaaat 2400
tgagtcatat cgtagctttg ggattatttt tctctctctc cacggctaat taggtgatca 2460
tgaaaaaatg aaaaattcat gagaaaagag tcagacatcg aaacatacat aagttgatat 2520
tcctttgata tcgacgacta ctcaatcagg ttttaaaaga aaagaggcag ctattgaagt 2580
agcagtatcc agtttaggtt ttttaattat ttacaagtaa agaaaaagag aatgccggtc 2640
gttcacgata acttcgtata atgtatgcta tacgaagtta tgcggccgcg agaagatgcg 2700
gccagcaaaa ctaaaaaact gtattataag taaatgcatg tatactaaac tcacaaatta 2760
gagcttcaat ttaattatat cagttattac ccgggaatct cggtcgtaat gatttctata 2820
atgacgaaaa aaaaaaaatt ggaaagaaaa agcttcatgg cctttataaa aaggaactat 2880
ccaatacctc gccagaacca agtaacagta ttttacgggg cacaaatcaa gaacaataag 2940
acaggactgt aaagatggac gcattgaact ccaaagaaca acaagagttc caaaaagtag 3000
tggaacaaaa gcaaatgaag gatttcatgc gtttgtactc taatctggta gaaagatgtt 3060
tcacagactg tgtcaatgac ttcacaacat caaagctaac caataaggaa caaacatgca 3120
tcatgaagtg ctcagaaaag ttcttgaagc atagcgaacg tgtagggcag cgtttccaag 3180
ag 3182
<210> 2
<211> 3275
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座A-loxP-TEF1-An amdS整合片段
<400> 2
cctactgcgc caattgatga caatacagac gatgataaca aaccgaagtt atctgatgta 60
gaaaaggatt aaagatgcta agagatagtg atgatatttc ataaataatg taattctata 120
tatgttaatt accttttttg cgaggcatat ttatggtgaa gaataagttt tgaccatcaa 180
agaaggttaa tgtggctgtg gtttcagggt ccataaagct tttcaattca tcattttttt 240
tttattcttt tttttgattc cggtttcctt gaaatttttt tgattcggta atctccgaac 300
agaaggaaga acgaaggaag gagcacagac ttagattggt atatatacgc atatgtagtg 360
ttgaagaaac atgaaattgc ccagtattct taacccaact gcacagaaca aaaatctgca 420
ggaaacgaag ataaagcggc cgcataactt cgtatagcat acattatacg aagttatcgc 480
ctgttaagat ataactgaaa aaagagggga atttttagat actgaaatga tattttagaa 540
taaccagact atatataagg ataaattaca aaaaattaac taatagataa gatttaaata 600
taaaagatat gcaactagaa aagtcttatc aatctcctta tggagtgacg acgttaccca 660
acaatttacc gacttcttcg gcgatagcca aagttctctc ttcggacaat cttctaccaa 720
taacttgaac agcaacagga gcaccgtgat aagcctctgg gtcgtattct tcttgaacca 780
aagcatccaa ttcggaaaca gctttaaaag attcgttctt cttatcaata ttcttatcag 840
cgaaagtgac tgggacgaca acagaggtga aatccaataa gttaataacg gaggcgtaac 900
cgtagtatct gaattgatcg tgtctgacag cggcggtagg agtaattgga gcgataatag 960
cgtccaattc cttaccagct ttttcttcag cttcacgcca cttttccaag tattccattt 1020
gatagttcca cttttgtaaa tgagtgtccc acaattcgtt catgttaaca gccttaatat 1080
ttgggttcaa caagtcctta atgttaggga tggctggctc accagaggca gaaatgtctc 1140
tcatgacgtc ggcagaacca tcagcagcat agatgtggga aatcaagtca tgaccgaaat 1200
catgcttgta tggagtccat ggagtaacgg tgtgaccagc cttggccaaa gcggcaacgg 1260
tagtttcgac accacgtaaa attggtgggt gtggcaagac gttaccgtcg aaattgtaat 1320
aaccaatgtt caaaccacca ttcttaatct tagaggcaat gatgtcagat tcagattgtc 1380
tccatggcat tgggatgacc ttagagtcgt acttccaagg ttcttgaccc aagacagatt 1440
tggtgaacaa tctcaagtct tcgacggagt gagtgatagg accaacgacg gagtgaacgg 1500
tttcttgacc ttccatagag ttagccattt tagcatatgg caatctaccg tgagatggtc 1560
tcaaaccgta taaaaagttg aaagcagctg ggactctaat ggaaccacca atgtcagtac 1620
cgacaccaat aacaccacct ctaataccaa caatagcacc ttcaccacca gaagaaccac 1680
cacaggacca atttttgttt cttggattga cagttctacc aatgatgttg ttgacggttt 1740
cacagaccat caaggtttgt gggacagagg tcttaacgta gaaaacagca ccagcttttc 1800
tcaacatggt ggttaagacg gaatcacctt catcgtattt gtttaaccag gaaatgtaac 1860
ccatggaggt ttcgtaaccc ttaacacgca attggtcctt taaagagatt ggtaaaccgt 1920
gtaatggacc aactggtctc ttatgcttag cgtagtattc atctaattct ctagcttgag 1980
ctaaagcagc atctgggaag aattcgtgag cacagttggt taattgttga gcaatagcag 2040
ctctcttaca aaaagccaaa gtgacttcaa cagaagtcaa ctcaccagcg gccaacttgg 2100
agaccaaatc agcagcagag gcttcggtaa tcttcaattc agcctcagac aaaataccgg 2160
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caggaatggt tttagccaaa cgggcacgtt tgtcggcggc caattcttcc caggattgtg 2280
gcattttgta attaaaactt agattagatt gctatgcttt ctttctaatg agcaagaagt 2340
aaaaaaagtt gtaatagaac aagaaaaacg aaactgaaac ttgagaaatt gaagaccatt 2400
tattaactta aatatcaatg ggaggtcatc gaaagagaaa aaaatcaaaa aaaaaatttt 2460
tcaagaaaaa gaaacgtgat aaaaattttt attgcctttt tcgacgaaga aaaagaaacg 2520
aggcggtctc ttttttcttt tccaaacctt tagtacgggt aattaacgcc accctagagg 2580
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cggagtccga gaaaatctgg aagagtaaaa aaggagtaga aacattttga agctatggtg 2700
tgtgggggat cacttgtggg ggattgggtg tgatgtaagg ataacttcgt atagcataca 2760
ttatacgaag ttatgcggcc gcgagaagat gcggccagca aaactaaaaa actgtattat 2820
aagtaaatgc atgtatacta aactcacaaa ttagagcttc aatttaatta tatcagttat 2880
tacccgggaa tctcggtcgt aatgattttt ataatgacga aaaaaaaaaa attggaaaga 2940
aaaagcttca tggcctttat aaaaaggaac catccaatac ctcgccagaa ccaagtaaca 3000
gtattttacg gggcacaaat caagaacaat aagacaggac tgtaaagatg gacgcattga 3060
actccaaaga acaacaagag ttccaaaaag tagtggaaca aaagcaaatg aaggatttca 3120
tgcgtttgta ctctaatctg gtagaaagat gttttacaga ctgtgtcaat gacttcacaa 3180
catcaaagct aaccaataag gaacaaacat gcatcatgaa gtgctcagaa aagttcttga 3240
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<210> 3
<211> 1132
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> cre重组酶
<400> 3
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tttacttact gttcaccaaa acttgcctgc attaccagtt gacgcaacct ccgatgaagt 120
cagaaagaac cttatggata tgtttagaga tagacaagct ttctccgaac atacttggaa 180
aatgttatta tccgtttgta gatcctgggc cgcttggtgt aaacttaaca atagaaaatg 240
gtttcctgct gaaccagaag acgtcagaga ttacttactt tacttacaag ctagaggttt 300
ggctgttaaa actatccaac aacacttagg tcaattgaat atgttacaca gaagatccgg 360
tttaccaaga ccatccgatt ccaacgcagt ttcccttgtt atgagaagaa ttagaaaaga 420
aaatgttgac gctggtgaaa gagctaaaca agcattagca tttgaaagaa ccgatttcga 480
tcaagttaga tccttaatgg aaaattccga tagatgtcaa gatattagaa acttagcttt 540
cttaggtatt gcttacaaca cattattaag aatcgctgaa attgctagaa ttagagttaa 600
agatatttca agaaccgatg gcggtagaat gttaatccac attggcagaa caaaaacctt 660
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ttggatttcc gtttccggtg ttgcagatga cccaaacaac tacttattct gtcgtgttag 780
aaaaaatggt gttgccgctc cttccgctac ctcacaatta tccacaagag cattagaagg 840
catttttgaa gctacccaca gacttattta tggtgcaaaa gacgattccg gtcaaagata 900
tttagcttgg tctggtcatt ccgctagagt tggtgccgca agagacatgg caagagctgg 960
tgtttctatt cctgaaatta tgcaagccgg tggttggact aatgttaaca ttgttatgaa 1020
ctatatcaga aacttagatt ccgaaacagg tgctatggtt agattacttg aagacggtga 1080
ttaagctagc taagatccgc tctaaccgaa aaggaaggag ttagacaacc tg 1132
<210> 4
<211> 6376
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CYC1 t-pUC ori-ampR-2uori-URA3-pPGK整合片段
<400> 4
ctagctaaga tccgctctaa ccgaaaagga aggagttaga caacctgaag tctaggtccc 60
tatttatttt tttatagtta tgttagtatt aagaacgtta tttatatttc aaatttttct 120
tttttttctg tacagacgcg tgtacgcatg taacattata ctgaaaacct tgcttgagaa 180
ggttttggga cgctcgaaga tccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg 240
cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt 300
tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat ccacagaatc 360
aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa 420
aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa 480
tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc 540
ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc 600
cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag 660
ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga 720
ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc 780
gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac 840
agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat ttggtatctg 900
cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca 960
aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa 1020
aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa 1080
ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt 1140
aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag 1200
ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat 1260
agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc 1320
cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa 1380
ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca 1440
gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa 1500
cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt 1560
cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc 1620
ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact 1680
catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc 1740
tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg 1800
ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct 1860
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cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag 1980
cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac 2040
acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg 2100
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座B-pPGK-ScIMA1-GAL10t-loxP-pTEF1-An amdS整合片段
<400> 5
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<213> 人工序列
<220>
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<212> DNA
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<220>
<223> ScMPH2
<400> 8
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgaagaactt atctttcttg 60
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ttgatcatgg aaggttacga tactgccatt ttaggtgctt tctacgcttt gcctattttc 420
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ccatccgttg atttagttgg taacagatat actttgatta ttgctttgtt ctttttggct 600
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tgtccattgg ccttgagata ctacttgact acttactcca acttgtgttg gttattcggt 780
caattgttcg ctgccggtat catgaaaaac tctcaaaaaa aatacgctga ttccgaattg 840
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<211> 1815
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<213> 人工序列
<220>
<223> DhMAL11-1
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caagacttga gaagaaccag aattgctgct attgtttggg tttcccaaaa cttaactggt 1080
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agaaacgctt acaacattgc tggtattgtt gttgctatta tcactccata catgttgaat 1500
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aacttcgagg tcgacccaac tgctgataaa gatattaacg actacattga aaagtttttg 180
gatatctccg acaacgctag aaacaacgac aagcaagaaa aagaaatgtc tttgttggaa 240
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aaatttggta tgttcgagcc atcctcccaa tcctaccaaa ttccagctaa gtaccaaacc 420
attatgggta cttgtggtaa cgcttcttct atcattggtt tgtggttcgc tggtattttg 480
gctgatcgtt ttggttacag aaagactatc atcgctaact tgatcttagt tgctattttt 540
atctttattg ttttttttgc caaaaacatt ggtatgttga tggccggtaa tatcttattg 600
ggtttccctt ggggtgcctt ccaaactttg tccgttgctt acgcttctga agtctgccca 660
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ttgtctgctg gtgttatgag agcctttgtt acttctactt ccgaacaatc ttacaaggtt 780
ccattcgcta tccaatgggt ttggccagtc ccaatcatta ttggtgtttt tttcgctcca 840
gaatccccat actggttggt caaaaacgac aagtataagg aagctaagag atctatcgaa 900
agattgatta ctgaaaataa aaacgtcgat aaaaacatct tatctgaagc tatgttgcaa 960
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<210> 14
<211> 1961
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> SmMAL11-1
<400> 14
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgaagaactt catatcactg 60
gtgaacaaga aaaagggtac cctggatgat aggaatagta gcgttccgga atcttccagt 120
ggtataatac accaacgtgg agctttaaac actgaggatt ttgaagaagg aaagaaagat 180
ggtgcattcg aattgggtca cctcgaattc accaccaatt cagcccaatt gggtgattca 240
gacgatgata atgataatgc aattaagata gcgaatgctg ccactgatga agccaatgag 300
gctaatagtg aagaaaaaag catgacctta aggcaagctt tgagaaaata tccaaaggca 360
gccctatggt ccatcttggt gtctactacc ttagtcatgg aaggttatga tactgcgctt 420
ttgagtgcac tttatgcatt accggttttc cagaggaaat tcggtactat gaatgcggaa 480
ggctcctacg aaattacctc gcagtggcaa attggtttga acatgtgtgt cctttgtggt 540
gaaatgattg gtttacagat gaccacttac atggtcgagt tcatgggtaa tcgttacaca 600
atgattacgg cgctcggctt gttgactgct tatattttta tcctttacta ctgcaaaagt 660
ttggccatga tcgctgtagg gcaaattctg tctgctatgc catggggttg cttccagagt 720
ctggctgtta cctatgcttc ggaggtttgc cccctagcgc tgagatatta catgaccagt 780
tactccaata tttgttggtt gtttggtcaa attttcgctt ctggtatcat gaaaaactcc 840
caggagaatt tgggagactc cgatttaggc tacaagttgc catttgcctt acaatggatc 900
tggcctgcac ctttgattat tggtatcttc tttgctcctg agtcgccttg gtggctggtg 960
agaaagaata agattgcgga ggccaaaaag tccttgaata gaatcctgag cggcactgct 1020
gccgagaggg agattcaagt ggatatcact ttaaagcaaa ttgagatgac cattgagaag 1080
gagagacttc tggcatctaa atcagggtcg ttcttcaact gtttcaaagg cgttgatgga 1140
agaagaacaa ggcttgcgtg tttgacttgg gttgctcaaa acagtagtgg tgccgtttta 1200
ctaggttact cgacgtattt ctttgaaagg gcagggatgg ccactgacaa ggcgtttact 1260
ttctcgctta tccagtactg tctaggttta gcaggcactc tttgttcctg ggtgatatct 1320
ggccgtgttg gtagatggag tatcctggct tatggtcttg catttcaaat ggtgtgtcta 1380
ttcatcattg gtggaatggg gtttgcatcc ggaagcaatg ccagtaatgg tgctggtggt 1440
ctactgctgg ctttatcgtt cttttacaac gctggtatcg gagctgtcgt ttactgtatt 1500
gtggctgaaa ttccgtctgc agaattaagg accaaaacta ttgtaatggc tcgtatttgc 1560
tataatttga tggccgtcat caatgccatt ttaacgccat atatgctgaa cgtgagtgac 1620
tggaactggg gtgctaaaac cggcctatac tggggtggtt tcactgcagt cactttggct 1680
tgggttatca ttgatttgcc tgagacaact ggtagaacat ttagcgaaat taatgagctt 1740
ttcaatcaag gtgtccctgc tagaaaattt gcatctactg tagttgatcc tttcgggaag 1800
ggacagcgtc aaaatgattc gcaagtggat aacgtcattg accagtcctc aagcgcaatg 1860
cagcaagagc taaatgaagc taacgaattc taattaatta aacaggcccc ttttcctttg 1920
tcgatatcat gtaattagtt atgtcacgct tacattcacg c 1961
<210> 15
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<212> DNA
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<220>
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<210> 17
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<212> DNA
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<220>
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caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgaaaaatat catctcgctg 60
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ttgaaaggtg tcacttctat ggctgaaact ccaaattcct acagaattcc tttcgctgtt 780
caatgggttt ggccaattcc tttgttcatt ggtgtttact tggctccaga atccccatgg 840
ttcttggtta agagaggtag agacgaagaa gctaagagat ctttgaagag attgttgtcc 900
gaaaactctc acatgccaga caaggacgtt ttggctcaag ccatgttggc taagattcaa 960
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actaatttca gacgtaccag aatcgctgcc ttcacttggt tatttcaatc tatcactggt 1080
tcctccttga tgggttattc cactatcttc taccaacaag ctggtttggc tgtttccatg 1140
tcctttactt tctccattat ccaatactgt ttgggtatta ttggtaccgt cggttcttgg 1200
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tattgtattg ttgctgaaat cccatcttct aagttgagaa ccaagaccgt catgttgtct 1440
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cacgttgata aggctgaaga agaagaaatt tttgaaaagg cctaattaat taaacaggcc 1800
ccttttcctt tgtcgatatc atgtaattag ttatgtcacg cttacattca cgc 1853
<210> 20
<211> 1859
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PsMAL11
<400> 20
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgtcgactga gtacgttgaa 60
gacaacaaga acccagataa gtcaaccaca gttggctcta tcaccaaaaa aattctttca 120
gatgactctt ccaccaactc ggtagacgac tatgtcgcca agtttttgga catgtcaaat 180
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<210> 21
<211> 1853
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ps MAL11
<400> 21
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgagctcggt gtttgttgaa 60
gatataaaaa atccagaaaa ggtcgtcata gtgaactcag ttgctaaaaa ggcctctgat 120
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<212> DNA
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<220>
<223> Hp MAL11
<400> 22
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<213> 人工序列
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<223> Ca MAL11
<400> 23
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgactattga agagtacaga 60
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<212> DNA
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<400> 24
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> Ao MAL11
<400> 25
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<210> 26
<211> 1754
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Af MAL11
<400> 26
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tgtgccatca tcatggaggg ctatgatgtc gtcctgatcg gctctttctt cgcttacccc 300
caattcaacc agaagtacgg ccatatcatg tcggacggaa actacggtct cgctgccaag 360
tggcaagcgg ccttgaccaa ctcgatgagc tgcggccaga ttatcggcct gttcatcaac 420
ggcgtcgtct cggaacgttt cgggtaccgg cggaccctca tggcttgcct agccgcgaca 480
gtggggtttg tgttcatttt gttctttgcg cccaacatcg agaccctcgt ggccggcgag 540
ctgctcatgg ggatccccct cggcgtgtac cagaccctca ccgtcaccta tgcatcggaa 600
gtatgtcccg tcgctattcg gggctatctc actacctatg tgaacctgtg ctgggtccta 660
ggtcaactga ttgcctccgg tgtcctaaag ggcttacagg ggcgcacgga tgagtggggc 720
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tcgttctgca cctgctgttt gatctgggcg ttcttccgca tcccggagcc caagggtcgg 1560
tcctatgccg agctggatat tctgtttgag cgtagagtcc gcacgcggga gtttgcaact 1620
gccgagacgg gcttggtgga ggggagaagc gattacaagg ttgatccact tgctgttagg 1680
gtttaattaa ttaaacaggc cccttttcct ttgtcgatat catgtaatta gttatgtcac 1740
gcttacattc acgc 1754
<210> 27
<211> 1958
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sc ZTW MAL11
<400> 27
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgaaaaatat catttcattg 60
gtaagcaaga agaaggctgc ctcaaaaaat gaggataaaa acatttctga gtcttcaaga 120
gatattgtaa accaacagga ggttttcaat actgaagatt ttgaagaagg gaaaaaggat 180
agtgcctttg agctagacca cttagagttc accaccaatt cagcccagtt aggagattct 240
gacgaagata acgagaatgt gattaatgag atgaacgcta ctgatgatgc aaatgaagct 300
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gagaatttag ggaactccga cttgggctat aaattgccat ttgctttaca atggatttgg 900
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ggttactcga catatttttt tgaaagagca ggtatggcca ccgacaaggc gtttactttt 1260
tctctaattc agtactgtct tgggttagcg ggtacacttt gctcctgggt aatatctggc 1320
cgtgttggta gatggacaat actgacctat ggtcttgcat ttcaaatggt ctgcttattt 1380
attattggtg gaatgggttt tggttctgga agcagcgcta gtaatggtgc cggtggttta 1440
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aactggggtg ccaaaactgg tctatactgg ggtggtttca cagcagtcac tttagcttgg 1680
gtcatcatcg atctgcctga gacaactggt agaaccttca gtgaaattaa tgaacttttc 1740
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atatcatgta attagttatg tcacgcttac attcacgc 1958
<210> 28
<211> 1853
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sc CBS7690 MAL11
<400> 28
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgaaaaatat catttcattg 60
gtaagcaaga agaaggctgc ctcaaaaaat gaggataaaa acatttctga gtcttcaaga 120
gatattgtaa accaacagga ggttttcaat actgaaaatt ttgaagaagg gaaaaaggat 180
agtgcctttg agctagacca cttagagttc accaccaatt cagcccagtt aggagattct 240
gacgaagata acgagaatgt gattaatgag acgaacgcta ctgatgatgc aaatgaagct 300
aacagcgagg aaaaaagcat gactttaaag caggcgttgc taatatatcc aaaagcagcc 360
ctgtggtcca tattagtgtc tactaccctg gttatggaag gttatgatac cgcactactg 420
aacgcactgt atgccctgcc agtttttcag agaaaattcg gtactttgaa cggggagggt 480
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atgattggtt tgcaaatcac gccttatatg gttgaattta tggggaatcg ttatacgatg 600
attacagcac ttggtttgtt aactgcttat atctttatcc tctactactg taaaagttta 660
gctatgattg ctgtgggaca agttctctca gctatgccat ggggttgttt ccagggtttg 720
actgttactt atgcttcgga agtttgccct ttagcattaa gatattacat gaccagttac 780
tccaacattt gttggttatt tggtcaaatc ttcgcctctg gtattatgaa aaactcacaa 840
gagaatttag ggaactctga cttgggctat aaattgccat ttgctttaca atggatttgg 900
cctgctcctt taatgatcgg tatctttttc gctcctgagt cgccctggtg gttggtgaga 960
aaggataggg tcgctgaggc aagaaaatct ttaagcagaa ttttgagtgg taaaggcgcc 1020
gagaaggaca ttcaaattga tcttacttta aagcagattg aattgactat tgaaaaagaa 1080
agacttttag catctaaatc aggatcattc tttgattgtt tcaagggagt taatggaaga 1140
agaacgagac ttgcatgttt agcttgggta gctcaaaata ctagcggtgc ctgtttactt 1200
ggttactcga catatttttt tgaaagagca ggtatggcca ccgacaaggc gtttactttt 1260
tctgtaattc agtactgtct tgggttagcg ggtacacttt gctcctgggt aatatctggc 1320
cgtgttggta gatggacaat actgacctat ggtcttgcat ttcaaatggt ctgcttattt 1380
gttattggtg gaatgggttt tggttctgga agcggcgcta gtaatggtgc cggtggttta 1440
ttgctggctt tatcattctt ttacaatgct ggtatcggtg cagttgttta ctgtatcgta 1500
actgaaattc catcagcgga gttgagaact aagactatag tgctggcccg tatttgctac 1560
aatatcatgg ccgttatcaa cgctatatta acgccctata tgctaaacgt gagcgattgg 1620
aactggggtg ccaaaactgg tctatactgg ggtggtttca cagcagtcac tttagcttgg 1680
gtcatcatcg atctgcctga gacaagtggt agaaccttca gtgaaattaa tgaacttttc 1740
aacccagggg gttcctgcca gaaaatttgc atctactgtg gataattaat taaacaggcc 1800
ccttttcctt tgtcgatatc atgtaattag ttatgtcacg cttacattca cgc 1853
<210> 29
<211> 1679
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sc FO MAL11
<400> 29
caagctatac caagcataca atcaactatc tcatatacaa tgactttaaa gcaggcgttg 60
ctaatatatc caaaagcagc cctgtggtcc atattagtgt ctactaccct ggttatggaa 120
ggttatgata ccgcactact gaacgcactg tatgccctgc cagtttttca gagaaaattc 180
ggtactttga acggggaggg ttcttacgaa attacttccc aatggcagat tggtttaaac 240
atgtgtgtcc aatgtggtga gataattggt ttgcaaatca cgccttatat ggttgaattt 300
atggggaatc gttatacgat gattacagca cttggtttgt taactgctta tgtctttatc 360
ctctactact gtaaaagttt agctatgatt gctgtgggac aagttctctc agctatgcca 420
tggggttgtt tccagggttt gactgttact tatgcttcgg aagtttgccc tttagcatta 480
agatattata tgaccagtta ctccaacatt tgttggttat ttggtcaaat cttcgcctct 540
ggtattatga aaaactcaca agagaattta gggaactctg acttgggcta taaattgcca 600
tttgctttac aatggatttg gcctgctcct ttaatgatcg gtatcttttt cgctcctgag 660
tcgccctggt ggttggtgag aaaggatagg gtcgctgagg caagaaaatc tttaagcaga 720
attttgagtg gtaaaggcgc cgagaaggac attcaaattg atcttacttt aaagcagatt 780
gaattgacta ttgaaaaaga aagactttta gcatctaaat caggatcatt ctttgattgt 840
ttcaagggag ttaatggaag aagaacgaga cttgcatgtt taacttgggt agctcaaaat 900
actagcggtg cctgtttact tggttactcg acatattttt ttgaaagagc aggtatggcc 960
accgacaagg cgtttacttt ttctgtaatt cagtactgtc ttgggttagc gggtacactt 1020
tgctcctggg taatatctgg ccgtgttggt agatggacaa tactgaccta tggtcttgca 1080
tttcaaatgg tctgcttatt tattattggt ggaatgggtt ttggttctgg aagcggcgct 1140
agtaatggtg ccggtggttt attgctggct ttatcattct tttacaatgc tggtatcggt 1200
gcagttgttt actgtatcgt aactgaaatt ccatcagcgg agttgagaac taagactata 1260
gtgctggccc gtatttgcta caatatcatg gccgttatca acgctatatt aacgccctat 1320
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agtgaaatta atgaactttt caaccaaggg gttcctgcca gaaaatttgc atctactgtg 1500
gttgatccat tcggaaaggg aaaaactcaa catgattcgc tagatgatga gagtatcagt 1560
cagtcctcaa gcataaaaca gcgagaatta aatgcagctg ataaatgcta attaattaaa 1620
caggcccctt ttcctttgtc gatatcatgt aattagttat gtcacgctta cattcacgc 1679
<210> 30
<211> 4887
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> URA3-lacZ-AmpR-CEN6整合片段
<400> 30
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accacgcttt tcaattcaat tcatcatttt ttttttattc ttttttttga tttcggtttc 240
tttgaaattt ttttgattcg gtaatctccg aacagaagga agaacgaagg aaggagcaca 300
gacttagatt ggtatatata cgcatatgta gtgttgaaga aacatgaaat tgcccagtat 360
tcttaaccca actgcacaga acaaaaacct gcaggaaacg aagataaatc atgtcgaaag 420
ctacatataa ggaacgtgct gctactcatc ctagtcctgt tgctgccaag ctatttaata 480
tcatgcacga aaagcaaaca aacttgtgtg cttcattgga tgttcgtacc accaaggaat 540
tactggagtt agttgaagca ttaggtccca aaatttgttt actaaaaaca catgtggata 600
tcttgactga tttttccatg gagggcacag ttaagccgct aaaggcatta tccgccaagt 660
acaatttttt actcttcgaa gacagaaaat ttgctgacat tggtaataca gtcaaattgc 720
agtactctgc gggtgtatac agaatagcag aatgggcaga cattacgaat gcacacggtg 780
tggtgggccc aggtattgtt agcggtttga agcaggcggc agaagaagta acaaaggaac 840
ctagaggcct tttgatgtta gcagaattgt catgcaaggg ctccctatct actggagaat 900
atactaaggg tactgttgac attgcgaaga gcgacaaaga ttttgttatc ggctttattg 960
ctcaaagaga catgggtgga agagatgaag gttacgattg gttgattatg acacccggtg 1020
tgggtttaga tgacaaggga gacgcattgg gtcaacagta tagaaccgtg gatgatgtgg 1080
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ctaaggtaga gggtgaacgt tacagaaaag caggctggga agcatatttg agaagatgcg 1200
gccagcaaaa ctaaaaaact gtattataag taaatgcatg tatactaaac tcacaaatta 1260
gagcttcaat ttaattatat cagttattac cctgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt 1320
aaggagaaaa taccgcatca ggaaattgta aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta 1380
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aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca 1500
ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc 1560
ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta 1620
aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg 1680
gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg 1740
gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcg 1800
cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg ggcctcttcg 1860
ctattacgcc agctggcgaa ggggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca 1920
gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg aattgtaata cgactcacta 1980
tagggcgaat tggagctcca ccgcggtggc ggccgctcta gaactagtgg atcccccggg 2040
ctgcaggaat tcgatatcaa gcttatcgat accgtcgacc tcgagggggg gcccggtacc 2100
cagcttttgt tccctttagt gagggttaat tccgagcttg gcgtaatcat ggtcatagct 2160
gtttcctgtg tgaaattgtt atccgctcac aattccacac aacataggag ccggaagcat 2220
aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgagt gaggtaactc acattaattg cgttgcgctc 2280
actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg 2340
cgcggggaga ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct 2400
gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt 2460
atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc 2520
caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctcggcc cccctgacga 2580
gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata 2640
ccaggcgttc ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac 2700
cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcaat gctcacgctg 2760
taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc 2820
cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag 2880
acacgactta tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt 2940
aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt 3000
atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg 3060
atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac 3120
gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca 3180
gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac 3240
ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac 3300
ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt 3360
tcgttcatcc atagttgcct gactgcccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt 3420
accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt 3480
atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc 3540
cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa 3600
tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg 3660
tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt 3720
gtgaaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc 3780
agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt 3840
aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg 3900
gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac 3960
tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc 4020
gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt 4080
tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg 4140
aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag 4200
catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa 4260
acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgggtcct tttcatcacg 4320
tgctataaaa ataattataa tttaaatttt ttaatataaa tatataaatt aaaaatagaa 4380
agtaaaaaaa gaaattaaag aaaaaatagt ttttgttttc cgaagatgta aaagactcta 4440
gggggatcgc caacaaatac taccttttat cttgctcttc ctgctctcag gtattaatgc 4500
cgaattgttt catcttgtct gtgtagaaga ccacacacga aaatcctgtg attttacatt 4560
ttacttatcg ttaatcgaat gtatatctat ttaatctgct tttcttgtct aataaatata 4620
tatgtaaagt acgctttttg ttgaaatttt ttaaaccttt gtttattttt ttttcttcat 4680
tccgtaactc ttctaccttc tttatttact ttctaaaatc caaatacaaa acataaaaat 4740
aaataaacac agagtaaatt cccaaattat tccatcatta aaagatacga ggcgcgtgta 4800
agttacaggc aagcgatccg tcctaagaaa ccattattat catgacatta acctataaaa 4860
ataggcgtat cacgaggccc tttcgtc 4887
<210> 31
<211> 8086
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座C-Sc pPGK-IMA1-GAL10t-loxP-Sc URA3-Sc
pADH1--SmMAL11-1-CYC1t整合片段
<400> 31
ccgggaaacc atccacttca cgagactgat ctcctctgcc ggaacaccgg gcatctccaa 60
cttataagtt ggagaaataa gagaatttca gattgagaga atgaaaaaaa aaaaaaaaga 120
cagaggagag cataaaaatg gggttcactt tttggtaaag ctatagcatg cctatcacat 180
ataaatagag tgccagtagc gacttttttc acactcgaaa tactcttact actgctctct 240
tgttgttttt atcacttctt gtttcttctt ggtaaataga atatcaagct acaaaaagca 300
tacctcgagg ccagaaaaag gaagtgtttc cctccttctt gaattgatgt taccctcata 360
aagcacgtgg cctcttatcg agaaagaaat taccgtcgct cgtgatttgt ttgcaaaaag 420
aacaaaactg aaaaaaccca gacacgctcg acttcctgtc ttcctgttga ttgcagcttc 480
caatttcgtc acacaacaag gtcctagcga cggctcacag gttttgtaac aagcaatcga 540
aggttctgga atggcgggaa agggtttagt accacatgct atgatgccca ctgtgatctc 600
cagagcaaag ttcgttcgat cgtactgtta ctctctctct ttcaaacaga attgtccgaa 660
tcgtgtgaca acaacagcct gttctcacac actcttttct tctaaccaag ggggtggttt 720
agtttagtag aacctcgtga aacttacatt tacatatata taaacttgca taaattggtc 780
aatgcaagaa atacatattt ggtcttttct aattcgtagt ttttcaagtt cttagatgct 840
ttctttttct cttttttaca gatcatcaag gaagtaatta tctacttttt acaagtctag 900
aatgactatc tcttctgctc acccagaaac tgaaccaaag tggtggaaag aggcaacttt 960
ttaccaaatc tacccagctt cattcaagga ctccaatgat gatggttggg gtgatatgaa 1020
aggtattgct tccaaattag aatacattaa ggaattaggt gccgatgcta tttggatttc 1080
tccattctat gattctccac aagacgatat gggttatgac atcgctaact atgaaaaggt 1140
ttggccaacc tatggcacta atgaggactg ttttgcatta attgagaaaa cccacaagtt 1200
gggcatgaag ttcattactg atcttgtcat taatcattgt tcatccgaac atgaatggtt 1260
caaggaatcc agatcctcca aaactaatcc aaaaagagat tggtttttct ggagaccacc 1320
taagggttat gatgctgaag gtaagccaat tccaccaaac aattggaagt cttactttgg 1380
tggttccgca tggaccttcg acgaaaagac ccaagagttt tacttgagat tattctgctc 1440
cacccaacca gatttgaact gggaaaatga agattgtaga aaagcaatct acgaatctgc 1500
agttggctat tggttagatc acggtgttga tggtttcaga attgatgttg gttcacttta 1560
ctcaaaggtt gttggtttgc cagatgcacc agttgttgat aaaaactcta catggcaatc 1620
ttctgaccca tacactctta atggtcctag aatccatgaa tttcatcaag agatgaacca 1680
gttcattaga aatagagtta aggatggtag agaaattatg accgttggtg aaatgcaaca 1740
tgcatctgat gaaactaaga gattatacac atcagcctcc cgtcacgaat tgtctgaatt 1800
attcaacttt tcacacacag acgttggcac atccccatta ttccgttata acttggttcc 1860
attcgaattg aaggactgga aaatcgcatt ggcagaattg tttagatata tcaatggtac 1920
tgattgttgg tctaccatct acttggaaaa ccacgaccaa ccaagatcca tcactagatt 1980
cggtgatgac tctcctaaaa accgtgtcat ttctggtaag ttactttctg tcttattatc 2040
cgccttaacc ggtactttgt acgtctatca aggccaggaa ttgggtcaaa ttaactttaa 2100
gaattggcca gtcgaaaagt atgaagatgt cgaaatcaga aacaactaca atgcaattaa 2160
ggaggaacat ggtgaaaatt cagaggaaat gaaaaagttt ttggaagcta ttgctcttat 2220
ttccagagat cacgctagaa ccccaatgca atggtcaaga gaggaaccta acgctggttt 2280
ctctggtcct tccgccaagc cttggtttta cttaaacgac tccttcagag aaggtattaa 2340
cgttgaagat gaaattaagg acccaaattc cgtccttaac ttctggaagg aagcattgaa 2400
gtttagaaag gcccataagg atattaccgt ttatggttat gactttgagt ttatcgattt 2460
ggataacaaa aagttattct cattcactaa aaagtataac aacaagacct tattcgctgc 2520
tttaaacttc tcttctgatg ctactgattt caaaattcct aatgacgatt cctctttcaa 2580
gttggagttt ggtaactacc caaagaagga agttgacgca tcttctcgta cattgaagcc 2640
ttgggaaggt agaatctaca tctccgagta acctgcaggt ttgccagctt actatccttc 2700
ttgaaaatat gcactctata tcttttagtt cttaattgca acacatagat ttgctgtata 2760
acgaatttta tgctattttt taaatttgga gttcagtgat aaaagtgtca cagcgaattt 2820
cctcacatgt agggaccgaa ttgtttacaa gttctctgta ccaccatgga gacatcaaaa 2880
attgaaaatc tatggaaaga tatggacggt agcaacaaga atatagcacg agccggcgac 2940
tagtaacggc cgccagtgtg ctggaattcg gccggccata acttcgtata atgtatgcta 3000
tacgaagtta tggcaacggt tcatcatctc atggatctgc acatgaacaa acaccagagt 3060
caaacgacgt tgaaattgag gctactgcgc caattgatga caatacagac gatgataaca 3120
aaccgaagtt atctgatgta gaaaaggatt agagatgcta agagatagtg atgatatttc 3180
ataaataatg taattctata tatgttaatt accttttttg cgaggcatat ttatggtgaa 3240
ggataagttt tgaccatcaa agaaggttaa tgtggctgtg gtttcagggt ccataaagct 3300
tttcaattca tctttttttt tttgttcttt tttttgattc cggtttcttt gaaatttttt 3360
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座C-Sc pPGK-IMA1-GAL10t-loxP-Sc TEFt--An amdS-Sc
TEF1t-loxP-Sc CYC1t-Sm MAL11整合片段
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 基因座C-Sc pPGK-Dasher GFP-Sc CYC1t-loxP-Io URA3-loxP整合片段
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acaattcata cgttttgaat agcttatact acctactggt agataacaaa aacagatata 2760
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<210> 38
<211> 4771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> An amdS-Sc ADH1t-loxP-Sc pPGK-Sf GA-Sc RPL3t-基因座B整合片段
<400> 38
ggccgcgaag gtgctattgt tggtattaga ggtggtgtta ttggtgtcgg tactgacatt 60
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<210> 39
<211> 8719
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sc pTEF1-Sc ARO4-OFP-Sc pPGK-cre重组酶-Sc CYC1t-Sc URA3-Amp R
整合片段
<400> 39
atcacatagg aagcaacagg cgcgttggac ttttaatttt cgaggaccgc gaatccttac 60
atcacaccca atcccccaca agtgatcccc cacacaccat agcttcaaaa tgtttctact 120
ccttttttac tcttccagat tttctcggac tccgcgcatc gccgtaccac ttcaaaacac 180
ccaagcacag catactaaat ttcccctctt tcttcctcta gggtgtcgtt aattacccgt 240
actaaaggtt tggaaaagaa aaaagagacc gcctcgtttc tttttcttcg tcgaaaaagg 300
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gctgatttgg tctccttcgg tgccattggt gccagaacca ccgaatctca actgcacaga 1080
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aatgttgctg tggatgcttg tcaagccgct gctcattctc accatttcat gggtgttact 1200
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acataagttg atattccttt gatatcgacg actactcaat caggttttaa aagaaaagag 1980
gcagctattg aagtagcagt atccagttta ggttttttaa ttatttacaa gtaaagaaaa 2040
agagaatgcc ggtcgttcac ggcggccgcg ccagaaaaag gaagtgtttc cctccttctt 2100
gaattgatgt taccctcata aagcacgtgg cctcttatcg agaaagaaat taccgtcgct 2160
cgtgatttgt ttgcaaaaag aacaaaactg aaaaaaccca gacacgctcg acttcctgtc 2220
ttcctattga ttgcagcttc caatttcgtc acacaacaag gtcctagcga cggctcacag 2280
gttttgtaac aagcaatcga aggttctgga atggcgggaa agggtttagt accacatgct 2340
atgatgccca ctgtgatctc cagagcaaag ttcgttcgat cgtactgtta ctctctctct 2400
ttcaaacaga attgtccgaa tcgtgtgaca acaacagcct gttctcacac actcttttct 2460
tctaaccaag ggggtggttt agtttagtag aacctcgtga aacttacatt tacatatata 2520
taaacttgca taaattggtc aatgcaagaa atacatattt ggtcttttct aattcgtagt 2580
ttttcaagtt cttagatgct ttctttttct cttttttaca gatcatcaac tcttttttac 2640
agatcatcaa ggaagtaatt atctactttt tacaagaatt catgtctaat ttacttactg 2700
ttcaccaaaa cttgcctgca ttaccagttg acgcaacctc cgatgaagtc agaaagaacc 2760
ttatggatat gtttagagat agacaagctt tctccgaaca tacttggaaa atgttattat 2820
ccgtttgtag atcctgggcc gcttggtgta aacttaacaa tagaaaatgg tttcctgctg 2880
aaccagaaga cgtcagagat tacttacttt acttacaagc tagaggtttg gctgttaaaa 2940
ctatccaaca acacttaggt caattgaata tgttacacag aagatccggt ttaccaagac 3000
catccgattc caacgcagtt tcccttgtta tgagaagaat tagaaaagaa aatgttgacg 3060
ctggtgaaag agctaaacaa gcattagcat ttgaaagaac cgatttcgat caagttagat 3120
ccttaatgga aaattccgat agatgtcaag atattagaaa cttagctttc ttaggtattg 3180
cttacaacac attattaaga atcgctgaaa ttgctagaat tagagttaaa gatatttcaa 3240
gaaccgatgg cggtagaatg ttaatccaca ttggcagaac aaaaacctta gtctccacag 3300
caggcgtcga aaaagcatta tcattaggtg ttactaaatt agttgaacgt tggatttccg 3360
tttccggtgt tgcagatgac ccaaacaact acttattctg tcgtgttaga aaaaatggtg 3420
ttgccgctcc ttccgctacc tcacaattat ccacaagagc attagaaggc atttttgaag 3480
ctacccacag acttatttat ggtgcaaaag acgattccgg tcaaagatat ttagcttggt 3540
ctggtcattc cgctagagtt ggtgccgcaa gagacatggc aagagctggt gtttctattc 3600
ctgaaattat gcaagccggt ggttggacta atgttaacat tgttatgaac tatatcagaa 3660
acttagattc cgaaacaggt gctatggtta gattacttga agacggtgat taagctagct 3720
aagatccgct ctaaccgaaa aggaaggagt tagacaacct gaagtctagg tccctattta 3780
tttttttata gttatgttag tattaagaac gttatttata tttcaaattt ttcttttttt 3840
tctgtacaga cgcgtgtacg catgtaacat tatactgaaa accttgcttg agaaggtttt 3900
gggacgctcg aaggagctcc aattcgccct atagtgagtc gtattacaat tcactggccg 3960
tcgttttaca acgtcgtgac tgggaaaacc ctggcgttac ccaacttaat cgccttgcag 4020
cacatccccc cttcgccagc tggcgtaata gcgaagaggc ccgcaccgat cgcccttccc 4080
aacagttgcg cagcctgaat ggcgaatggc gcgacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg 4140
cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg 4200
ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc 4260
taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa 4320
aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc 4380
ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac 4440
tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt 4500
ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgt 4560
ttacaatttc ctgatgcggt attttctcct tacgcatctg tgcggtattt cacaccgcag 4620
ggtaataact gatataatta aattgaagct ctaatttgtg agtttagtat acatgcattt 4680
acttataata cagtttttta gttttgctgg ccgcatcttc tcaaatatgc ttcccagcct 4740
gcttttctgt aacgttcacc ctctacctta gcatcccttc cctttgcaaa tagtcctctt 4800
ccaacaataa taatgtcaga tcctgtagag accacatcat ccacggttct atactgttga 4860
cccaatgcgt ctcccttgtc atctaaaccc acaccgggtg tcataatcaa ccaatcgtaa 4920
ccttcatctc ttccacccat gtctctttga gcaataaagc cgataacaaa atctttgtcg 4980
ctcttcgcaa tgtcaacagt acccttagta tattctccag tagataggga gcccttgcat 5040
gacaattctg ctaacatcaa aaggcctcta ggttcctttg ttacttcttc tgccgcctgc 5100
ttcaaaccgc taacaatacc tgggcccacc acaccgtgtg cattcgtaat gtctgcccat 5160
tctgctattc tgtatacacc cgcagagtac tgcaatttga ctgtattacc aatgtcagca 5220
aattttctgt cttcgaagag taaaaaattg tacttggcgg ataatgcctt tagcggctta 5280
actgtgccct ccatggaaaa atcagtcaag atatccacat gtgtttttag taaacaaatt 5340
ttgggaccta atgcttcaac taactccagt aattccttgg tggtacgaac atccaatgaa 5400
gcacacaagt ttgtttgctt ttcgtgcatg atattaaata gcttggcagc aacaggacta 5460
ggatgagtag cagcacgttc cttatatgta gctttcgaca tgatttatct tcgtttcctg 5520
caggtttttg ttctgtgcag ttgggttaag aatactgggc aatttcatgt ttcttcaaca 5580
ctacatatgc gtatatatac caatctaagt ctgtgctcct tccttcgttc ttccttctgt 5640
tcggagatta ccgaatcaaa aaaatttcaa agaaaccgaa atcaaaaaaa agaataaaaa 5700
aaaaatgatg aattgaattg aaaagcgtgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc 5760
gcatagttaa gccagccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt 5820
ctgctcccgg catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag 5880
aggttttcac cgtcatcacc gaaacgcgcg agacgaaagg gcctcgtgat acgcctattt 5940
ttataggtta atgtcatgat aataatggtt tcttaggacg gatcgcttgc ctgtaactta 6000
cacgcgcctc gtatctttta atgatggaat aatttgggaa tttactctgt gtttatttat 6060
ttttatgttt tgtatttgga ttttagaaag taaataaaga aggtagaaga gttacggaat 6120
gaagaaaaaa aaataaacaa aggtttaaaa aatttcaaca aaaagcgtac tttacatata 6180
tatttattag acaagaaaag cagattaaat agatatacat tcgattaacg ataagtaaaa 6240
tgtaaaatca caggattttc gtgtgtggtc ttctacacag acaagatgaa acaattcggc 6300
attaatacct gagagcagga agagcaagat aaaaggtagt atttgttggc gatcccccta 6360
gagtctttta catcttcgga aaacaaaaac tattttttct ttaatttctt tttttacttt 6420
ctatttttaa tttatatatt tatattaaaa aatttaaatt ataattattt ttatagcacg 6480
tgatgaaaag gacccaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt 6540
atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct gataaatgct 6600
tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg cccttattcc 6660
cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg tgaaagtaaa 6720
agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc tcaacagcgg 6780
taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca atgatgagca cttttaaagt 6840
tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat tgacgccggg caagagcaac tcggtcgccg 6900
catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca gtcacagaaa agcatcttac 6960
ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata accatgagtg ataacactgc 7020
ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt tttttcacaa 7080
catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg aagccatacc 7140
aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt agcaatggca acaacgttgc gcaaactatt 7200
aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta atagactgga tggaggcgga 7260
taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta ttgctgataa 7320
atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc cagatggtaa 7380
gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac gggcagtcag gcaactatgg atgaacgaaa 7440
tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt cagaccaagt 7500
ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt 7560
gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg 7620
agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt 7680
aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca 7740
agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac 7800
tgtccttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag caccgcctac 7860
atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct 7920
taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg 7980
gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga gatacctaca 8040
gcgtgagcat tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt 8100
aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggga acgcctggta 8160
tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc 8220
gtcagggggg ccgagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc 8280
cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa 8340
ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag 8400
cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg cccaatacgc aaaccgcctc tccccgcgcg 8460
ttggccgatt cattaatgca gctggcacga caggtttccc gactggaaag cgggcagtga 8520
gcgcaacgca attaatgtga gttacctcac tcattaggca ccccaggctt tacactttat 8580
gcttccggct cctatgttgt gtggaattgt gagcggataa caatttcaca caggaaacag 8640
ctatgaccat gattacgcca agctcggaat taaccctcac taaagggaac aaaagctggg 8700
taccgggccc cccctcgag 8719
<210> 40
<211> 1980
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座C-Sc URA3整合片段
<400> 40
agatgctata tactaatata ggcatacttg ataatgaaaa ctataaatcg taaagacata 60
agagatccgc tcactatagg gcgaattggg ccctctagat gcatgctcga gcggccgcca 120
gtgtgatgga tatctgcaga attcgccctt gctagcggca acggttcatc atctcatgga 180
tctgcacatg aacaaacacc agagtcaaac gacgttgaaa ttgaggctac tgcgccaatt 240
gatgacaata cagacgatga taacaaaccg aagttatctg atgtagaaaa ggattagaga 300
tgctaagaga tagtgatgat atttcataaa taatgtaatt ctatatatgt taattacctt 360
ttttgcgagg catatttatg gtgaaggata agttttgacc atcaaagaag gttaatgtgg 420
ctgtggtttc agggtccata aagcttttca attcatcttt tttttttttg ttcttttttt 480
tgattccggt ttctttgaaa tttttttgat tcggtaatct ccgagcagaa ggaagaacga 540
aggaaggagc acagacttag attggtatat atacgcatat gtggtgttga agaaacatga 600
aattgcccag tattcttaac ccaactgcac agaacaaaaa cctgcaggaa acgaagataa 660
atcatgtcga aagctacata taaggaacgt gctgctactc atcctagtcc tgttgctgcc 720
aagctattta atatcatgca cgaaaagcaa acaaacttgt gtgcttcatt ggatgttcgt 780
accaccaagg aattactgga gttagttgaa gcattaggtc ccaaaatttg tttactaaaa 840
acacatgtgg atatcttgac tgatttttcc atggagggca cagttaagcc gctaaaggca 900
ttatccgcca agtacaattt tttactcttc gaagacagaa aatttgctga cattggtaat 960
acagtcaaat tgcagtactc tgcgggtgta tacagaatag cagaatgggc agacattacg 1020
aatgcacacg gtgtggtggg cccaggtatt gttagcggtt tgaagcaggc ggcggaagaa 1080
gtaacaaagg aacctagagg ccttttgatg ttagcagaat tgtcatgcaa gggctcccta 1140
gctactggag aatatactaa gggtactgtt gacattgcga agagcgacaa agattttgtt 1200
atcggcttta ttgctcaaag agacatgggt ggaagagatg aaggttacga ttggttgatt 1260
atgacacccg gtgtgggttt agatgacaag ggagacgcat tgggtcaaca gtatagaacc 1320
gtggatgatg tggtctctac aggatctgac attattattg ttggaagagg actatttgca 1380
aagggaaggg atgctaaggt agagggtgaa cgttacagaa aagcaggctg ggaagcatat 1440
ttgagaagat gcggccagca aaactaaaaa actgtattat aagtaaatgc atgtatacta 1500
aactcacaaa ttagagcttc aatttaatta tatcagttat tacccgggaa tctcggtcgt 1560
aatgattttt ataatgacga aaaaaaaaaa attggaaaga aaaagcttca tggcctttat 1620
aaaaaggaac catccaatac ctcgccagaa ccaagtaaca gtattttacg gggcacaaat 1680
caagaacaat aagacaggac tgtaaagatg gacgcattga actccaaaga acaacaagag 1740
ttccaaaaag tagtggaaca aaagcaaatg aaggatttca tgcgtttgcc gcgggcggcc 1800
gcaagggcga attccagcac actggcggcc gttactagtg gatccgagct cggtaccaag 1860
cttgatgcat agcttgagta ttctatagtg tcacctaaat agcttggcgt aatcatggtc 1920
atagctgtgt gtattacgat atagttaata gttgatagtt gattgtatgc tttttgtagc 1980
<210> 41
<211> 3476
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座C-Sc URA3-loxP-Sc TEF1t-An amdS-Sc pTEF1-loxP -Sc URA3
整合片段
<400> 41
ggtaaataga atatcaagct acaaaaagca tacaatcaac tatcaactat taactatatc 60
gtaatacaca cagctatgac catgattacg ccaagcttgg taccgagctc ctactgcgcc 120
aattgatgac aatacagacg atgataacaa accgaagtta tctgatgtag aaaaggatta 180
aagatgctaa gagatagtga tgatatttca taaataatgt aattctatat atgttaatta 240
ccttttttgc gaggcatatt tatggtgaag aataagtttt gaccatcaaa gaaggttaat 300
gtggctgtgg tttcagggtc cataaagctt ttcaattcat catttttttt ttattctttt 360
ttttgattcc ggtttccttg aaattttttt gattcggtaa tctccgaaca gaaggaagaa 420
cgaaggaagg agcacagact tagattggta tatatacgca tatgtagtgt tgaagaaaca 480
tgaaattgcc cagtattctt aacccaactg cacagaacaa aaatctgcag gaaacgaaga 540
taaagcggcc gcataacttc gtatagcata cattatacga agttatcgcc tgttaagata 600
taactgaaaa aagaggggaa tttttagata ctgaaatgat attttagaat aaccagacta 660
tatataagga taaattacaa aaaattaact aatagataag atttaaatat aaaagatatg 720
caactagaaa agtcttatca atctccttat ggagtgacga cgttacccaa caatttaccg 780
acttcttcgg cgatagccaa agttctctct tcggacaatc ttctaccaat aacttgaaca 840
gcaacaggag caccgtgata agcctctggg tcgtattctt cttgaaccaa agcatccaat 900
tcggaaacag ctttaaaaga ttcgttcttc ttatcaatat tcttatcagc gaaagtgact 960
gggacgacaa cagaggtgaa atccaataag ttaataacgg aggcgtaacc gtagtatctg 1020
aattgatcgt gtctgacagc ggcggtagga gtaattggag cgataatagc gtccaattcc 1080
ttaccagctt tttcttcagc ttcacgccac ttttccaagt attccatttg atagttccac 1140
ttttgtaaat gagtgtccca caattcgttc atgttaacag ccttaatatt tgggttcaac 1200
aagtccttaa tgttagggat ggctggctca ccagaggcag aaatgtctct catgacgtcg 1260
gcagaaccat cagcagcata gatgtgggaa atcaagtcat gaccgaaatc atgcttgtat 1320
ggagtccatg gagtaacggt gtgaccagcc ttggccaaag cggcaacggt agtttcgaca 1380
ccacgtaaaa ttggtgggtg tggcaagacg ttaccgtcga aattgtaata accaatgttc 1440
aaaccaccat tcttaatctt agaggcaatg atgtcagatt cagattgtct ccatggcatt 1500
gggatgacct tagagtcgta cttccaaggt tcttgaccca agacagattt ggtgaacaat 1560
ctcaagtctt cgacggagtg agtgatagga ccaacgacgg agtgaacggt ttcttgacct 1620
tccatagagt tagccatttt agcatatggc aatctaccgt gagatggtct caaaccgtat 1680
aaaaagttga aagcagctgg gactctaatg gaaccaccaa tgtcagtacc gacaccaata 1740
acaccacctc taataccaac aatagcacct tcaccaccag aagaaccacc acaggaccaa 1800
tttttgtttc ttggattgac agttctacca atgatgttgt tgacggtttc acagaccatc 1860
aaggtttgtg ggacagaggt cttaacgtag aaaacagcac cagcttttct caacatggtg 1920
gttaagacgg aatcaccttc atcgtatttg tttaaccagg aaatgtaacc catggaggtt 1980
tcgtaaccct taacacgcaa ttggtccttt aaagagattg gtaaaccgtg taatggacca 2040
actggtctct tatgcttagc gtagtattca tctaattctc tagcttgagc taaagcagca 2100
tctgggaaga attcgtgagc acagttggtt aattgttgag caatagcagc tctcttacaa 2160
aaagccaaag tgacttcaac agaagtcaac tcaccagcgg ccaacttgga gaccaaatca 2220
gcagcagagg cttcggtaat cttcaattca gcctcagaca aaataccgga cttctttggg 2280
aaatcaataa cggaatcttc ggcaggcaaa gtttgaacct tccattcgtc aggaatggtt 2340
ttagccaaac gggcacgttt gtcggcggcc aattcttccc aggattgtgg cattttgtaa 2400
ttaaaactta gattagattg ctatgctttc tttctaatga gcaagaagta aaaaaagttg 2460
taatagaaca agaaaaacga aactgaaact tgagaaattg aagaccattt attaacttaa 2520
atatcaatgg gaggtcatcg aaagagaaaa aaatcaaaaa aaaaattttt caagaaaaag 2580
aaacgtgata aaaattttta ttgccttttt cgacgaagaa aaagaaacga ggcggtctct 2640
tttttctttt ccaaaccttt agtacgggta attaacgcca ccctagagga agaaagaggg 2700
gaaatttagt atgctgtgct tgggtgtttt gaagtggtac ggcgatgcgc ggagtccgag 2760
aaaatctgga agagtaaaaa aggagtagaa acattttgaa gctatggtgt gtgggggatc 2820
acttgtgggg gattgggtgt gatgtaagga taacttcgta tagcatacat tatacgaagt 2880
tatgcggccg cgagaagatg cggccagcaa aactaaaaaa ctgtattata agtaaatgca 2940
tgtatactaa actcacaaat tagagcttca atttaattat atcagttatt acccgggaat 3000
ctcggtcgta atgattttta taatgacgaa aaaaaaaaaa ttggaaagaa aaagcttcat 3060
ggcctttata aaaaggaacc atccaatacc tcgccagaac caagtaacag tattttacgg 3120
ggcacaaatc aagaacaata agacaggact gtaaagatgg acgcattgaa ctccaaagaa 3180
caacaagagt tccaaaaagt agtggaacaa aagcaaatga aggatttcat gcgtttgtac 3240
tctaatctgg tagaaagatg ttttacagac tgtgtcaatg acttcacaac atcaaagcta 3300
accaataagg aacaaacatg catcatgaag tgctcagaaa agttcttgaa gcatagcgaa 3360
cgtgtagggc agcgtttcca agagggccca attcgcccta tagtgagcgg atctcttatg 3420
tctttacgat ttatagtttt cattatcaag tatgcctata ttagtatata gcatct 3476
<210> 42
<211> 2662
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 基因座C-loxP-Sc TEF1t-An amdS-Sc pTEF1-loxP整合片段
<400> 42
ggtaaataga atatcaagct acaaaaagca tacaatcaac tatcaactat taactatatc 60
gtaatacaca cagctatgac catgattacg ccaagcttgg taccgagctc ggatccacta 120
gtaacggccg ccagtgtgct ggaattcgcc cttatattag cggccgcata acttcgtata 180
gcatacatta tacgaagtta tcgcctgtta agatataact gaaaaaagag gggaattttt 240
agatactgaa atgatatttt agaataacca gactatatat aaggataaat tacaaaaaat 300
taactaatag ataagattta aatataaaag atatgcaact agaaaagtct tatcaatctc 360
cttatggagt gacgacgtta cccaacaatt taccgacttc ttcggcgata gccaaagttc 420
tctcttcgga caatcttcta ccaataactt gaacagcaac aggagcaccg tgataagcct 480
ctgggtcgta ttcttcttga accaaagcat ccaattcgga aacagcttta aaagattcgt 540
tcttcttatc aatattctta tcagcgaaag tgactgggac gacaacagag gtgaaatcca 600
ataagttaat aacggaggcg taaccgtagt atctgaattg atcgtgtctg acagcggcgg 660
taggagtaat tggagcgata atagcgtcca attccttacc agctttttct tcagcttcac 720
gccacttttc caagtattcc atttgatagt tccacttttg taaatgagtg tcccacaatt 780
cgttcatgtt aacagcctta atatttgggt tcaacaagtc cttaatgtta gggatggctg 840
gctcaccaga ggcagaaatg tctctcatga cgtcggcaga accatcagca gcatagatgt 900
gggaaatcaa gtcatgacag aaatcatgct tgtatggagt ccatggagta acggtgtgac 960
cagccttggc caaagcggca acggtagttt cgacaccacg taaaattggt gggtgtggca 1020
agacgttacc gtcgaaattg taataaccaa tgttcaaacc accattctta atcttagagg 1080
caatgatgtc agattcagat tgtctccatg gcattgggat gaccttagag tcgtacttcc 1140
aaggttcttg acccaagaca gatttggtga acaatctcaa gtcttcgacg gagtgagtga 1200
taggaccaac gacggagtga acggtttctt gaccttccat agagttagcc attttagcat 1260
atggcaatct accgtgagat ggtctcaaac cgtataaaaa gttgaaagca gctgggactc 1320
taatggaacc accaatgtca gtaccgacac caataacacc acctctaata ccaacaatag 1380
caccttcacc accagaagaa ccaccacagg accaattttt gtttcttgga ttgacagttc 1440
taccaatgat gttgttgacg gtttcacaga ccatcaaggt ttgtgggaca gaggtcttaa 1500
cgtagaaaac agcaccagct tttctcaaca tggtggttaa gacggaatca ccttcatcgt 1560
atttgtttaa ccaggaaatg taacccatgg aggtttcgta acccttaaca cgcaattggt 1620
cctttaaaga gattggtaaa ccgtgtaatg gaccaactgg tctcttatgc ttagcgtagt 1680
attcatctaa ttctctagct tgagctaaag cagcatctgg gaagaattcg tgagcacagt 1740
tggttaattg ttgagcaata gcagctctct tacaaaaagc caaagtgact tcaacagaag 1800
tcaactcacc agcggccaac ttggagacca aatcagcagc agaggcttcg gtaatcttca 1860
attcagcctc agacaaaata ccggacttct ttgggaaatc aataacggaa tcttcggcag 1920
gcaaagtttg aaccttccat tcgtcaggaa tggttttagc caaacgggca cgtttgtcgg 1980
cggccaattc ttcccaggat tgtggcattt tgtaattaaa acttagatta gattgctatg 2040
ctttctttct aatgagcaag aagtaaaaaa agttgtaata gaacaagaaa aacgaaactg 2100
aaacttgaga aattgaagac catttattaa cttaaatatc aatgggaggt catcgaaaga 2160
gaaaaaaatc aaaaaaaaaa tttttcaaga aaaagaaacg tgataaaaat ttttattgcc 2220
tttttcgacg aagaaaaaga aacgaggcgg tctctttttt cttttccaaa cctttagtac 2280
gggtaattaa cgccacccta gaggaagaaa gaggggaaat ttagtatgct gtgcttgggt 2340
gttttgaagt ggtacggcga tgcgcggagt ccgagaaaat ctggaagagt aaaaaaggag 2400
tagaaacatt ttgaagctat ggtgtgtggg ggatcacttg tgggggattg ggtgtgatgt 2460
aaggataact tcgtatagca tacattatac gaagttatgc ggccgctaat ataagggcga 2520
attctgcaga tatccatcac actggcggcc gctcgagcat gcatctagag ggcccaattc 2580
gccctatagt gagcggatct cttatgtctt tacgatttat agttttcatt atcaagtatg 2640
cctatattag tatatagcat ct 2662
<210> 43
<211> 1684
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Sc URA3
<400> 43
ggccgccagt gtgatggata tctgcagaat tcgcccttgc tagcggcaac ggttcatcat 60
ctcatggatc tgcacatgaa caaacaccag agtcaaacga cgttgaaatt gaggctactg 120
cgccaattga tgacaataca gacgatgata acaaaccgaa gttatctgat gtagaaaagg 180
attagagatg ctaagagata gtgatgatat ttcataaata atgtaattct atatatgtta 240
attacctttt ttgcgaggca tatttatggt gaaggataag ttttgaccat caaagaaggt 300
taatgtggct gtggtttcag ggtccataaa gcttttcaat tcatcttttt tttttttgtt 360
cttttttttg attccggttt ctttgaaatt tttttgattc ggtaatctcc gagcagaagg 420
aagaacgaag gaaggagcac agacttagat tggtatatat acgcatatgt ggtgttgaag 480
aaacatgaaa ttgcccagta ttcttaaccc aactgcacag aacaaaaacc tgcaggaaac 540
gaagataaat catgtcgaaa gctacatata aggaacgtgc tgctactcat cctagtcctg 600
ttgctgccaa gctatttaat atcatgcacg aaaagcaaac aaacttgtgt gcttcattgg 660
atgttcgtac caccaaggaa ttactggagt tagttgaagc attaggtccc aaaatttgtt 720
tactaaaaac acatgtggat atcttgactg atttttccat ggagggcaca gttaagccgc 780
taaaggcatt atccgccaag tacaattttt tactcttcga agacagaaaa tttgctgaca 840
ttggtaatac agtcaaattg cagtactctg cgggtgtata cagaatagca gaatgggcag 900
acattacgaa tgcacacggt gtggtgggcc caggtattgt tagcggtttg aagcaggcgg 960
cggaagaagt aacaaaggaa cctagaggcc ttttgatgtt agcagaattg tcatgcaagg 1020
gctccctagc tactggagaa tatactaagg gtactgttga cattgcgaag agcgacaaag 1080
attttgttat cggctttatt gctcaaagag acatgggtgg aagagatgaa ggttacgatt 1140
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atagaaccgt ggatgatgtg gtctctacag gatctgacat tattattgtt ggaagaggac 1260
tatttgcaaa gggaagggat gctaaggtag agggtgaacg ttacagaaaa gcaggctggg 1320
aagcatattt gagaagatgc ggccagcaaa actaaaaaac tgtattataa gtaaatgcat 1380
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tcggtcgtaa tgatttttat aatgacgaaa aaaaaaaaat tggaaagaaa aagcttcatg 1500
gcctttataa aaaggaacca tccaatacct cgccagaacc aagtaacagt attttacggg 1560
gcacaaatca agaacaataa gacaggactg taaagatgga cgcattgaac tccaaagaac 1620
aacaagagtt ccaaaaagta gtggaacaaa agcaaatgaa ggatttcatg cgtttgccgc 1680
gggc 1684
<210> 44
<211> 617
<212> PRT
<213> Saccharomyces mikatae
<400> 44
Met Lys Asn Phe Ile Ser Leu Val Asn Lys Lys Lys Gly Thr Leu Asp
1 5 10 15
Asp Arg Asn Ser Ser Val Pro Glu Ser Ser Ser Gly Ile Ile His Gln
20 25 30
Arg Gly Ala Leu Asn Thr Glu Asp Phe Glu Glu Gly Lys Lys Asp Gly
35 40 45
Ala Phe Glu Leu Gly His Leu Glu Phe Thr Thr Asn Ser Ala Gln Leu
50 55 60
Gly Asp Ser Asp Asp Asp Asn Asp Asn Ala Ile Lys Ile Ala Asn Ala
65 70 75 80
Ala Thr Asp Glu Ala Asn Glu Ala Asn Ser Glu Glu Lys Ser Met Thr
85 90 95
Leu Arg Gln Ala Leu Arg Lys Tyr Pro Lys Ala Ala Leu Trp Ser Ile
100 105 110
Leu Val Ser Thr Thr Leu Val Met Glu Gly Tyr Asp Thr Ala Leu Leu
115 120 125
Ser Ala Leu Tyr Ala Leu Pro Val Phe Gln Arg Lys Phe Gly Thr Met
130 135 140
Asn Ala Glu Gly Ser Tyr Glu Ile Thr Ser Gln Trp Gln Ile Gly Leu
145 150 155 160
Asn Met Cys Val Leu Cys Gly Glu Met Ile Gly Leu Gln Met Thr Thr
165 170 175
Tyr Met Val Glu Phe Met Gly Asn Arg Tyr Thr Met Ile Thr Ala Leu
180 185 190
Gly Leu Leu Thr Ala Tyr Ile Phe Ile Leu Tyr Tyr Cys Lys Ser Leu
195 200 205
Ala Met Ile Ala Val Gly Gln Ile Leu Ser Ala Met Pro Trp Gly Cys
210 215 220
Phe Gln Ser Leu Ala Val Thr Tyr Ala Ser Glu Val Cys Pro Leu Ala
225 230 235 240
Leu Arg Tyr Tyr Met Thr Ser Tyr Ser Asn Ile Cys Trp Leu Phe Gly
245 250 255
Gln Ile Phe Ala Ser Gly Ile Met Lys Asn Ser Gln Glu Asn Leu Gly
260 265 270
Asp Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Leu Pro Phe Ala Leu Gln Trp Ile Trp
275 280 285
Pro Ala Pro Leu Ile Ile Gly Ile Phe Phe Ala Pro Glu Ser Pro Trp
290 295 300
Trp Leu Val Arg Lys Asn Lys Ile Ala Glu Ala Lys Lys Ser Leu Asn
305 310 315 320
Arg Ile Leu Ser Gly Thr Ala Ala Glu Arg Glu Ile Gln Val Asp Ile
325 330 335
Thr Leu Lys Gln Ile Glu Met Thr Ile Glu Lys Glu Arg Leu Leu Ala
340 345 350
Ser Lys Ser Gly Ser Phe Phe Asn Cys Phe Lys Gly Val Asp Gly Arg
355 360 365
Arg Thr Arg Leu Ala Cys Leu Thr Trp Val Ala Gln Asn Ser Ser Gly
370 375 380
Ala Val Leu Leu Gly Tyr Ser Thr Tyr Phe Phe Glu Arg Ala Gly Met
385 390 395 400
Ala Thr Asp Lys Ala Phe Thr Phe Ser Leu Ile Gln Tyr Cys Leu Gly
405 410 415
Leu Ala Gly Thr Leu Cys Ser Trp Val Ile Ser Gly Arg Val Gly Arg
420 425 430
Trp Ser Ile Leu Ala Tyr Gly Leu Ala Phe Gln Met Val Cys Leu Phe
435 440 445
Ile Ile Gly Gly Met Gly Phe Ala Ser Gly Ser Asn Ala Ser Asn Gly
450 455 460
Ala Gly Gly Leu Leu Leu Ala Leu Ser Phe Phe Tyr Asn Ala Gly Ile
465 470 475 480
Gly Ala Val Val Tyr Cys Ile Val Ala Glu Ile Pro Ser Ala Glu Leu
485 490 495
Arg Thr Lys Thr Ile Val Met Ala Arg Ile Cys Tyr Asn Leu Met Ala
500 505 510
Val Ile Asn Ala Ile Leu Thr Pro Tyr Met Leu Asn Val Ser Asp Trp
515 520 525
Asn Trp Gly Ala Lys Thr Gly Leu Tyr Trp Gly Gly Phe Thr Ala Val
530 535 540
Thr Leu Ala Trp Val Ile Ile Asp Leu Pro Glu Thr Thr Gly Arg Thr
545 550 555 560
Phe Ser Glu Ile Asn Glu Leu Phe Asn Gln Gly Val Pro Ala Arg Lys
565 570 575
Phe Ala Ser Thr Val Val Asp Pro Phe Gly Lys Gly Gln Arg Gln Asn
580 585 590
Asp Ser Gln Val Asp Asn Val Ile Asp Gln Ser Ser Ser Ala Met Gln
595 600 605
Gln Glu Leu Asn Glu Ala Asn Glu Phe
610 615
<210> 45
<211> 515
<212> PRT
<213> 扣囊复膜酵母
<400> 45
Met Ile Arg Leu Thr Val Phe Leu Thr Ala Val Phe Ala Ala Val Ala
1 5 10 15
Ser Cys Val Pro Val Glu Leu Asp Lys Arg Asn Thr Gly His Phe Gln
20 25 30
Ala Tyr Ser Gly Tyr Thr Val Ala Arg Ser Asn Phe Thr Gln Trp Ile
35 40 45
His Glu Gln Pro Ala Val Ser Trp Tyr Tyr Leu Leu Gln Asn Ile Asp
50 55 60
Tyr Pro Glu Gly Gln Phe Lys Ser Ala Lys Pro Gly Val Val Val Ala
65 70 75 80
Ser Pro Ser Thr Ser Glu Pro Asp Tyr Phe Tyr Gln Trp Thr Arg Asp
85 90 95
Thr Ala Ile Thr Phe Leu Ser Leu Ile Ala Glu Val Glu Asp His Ser
100 105 110
Phe Ser Asn Thr Thr Leu Ala Lys Val Val Glu Tyr Tyr Ile Ser Asn
115 120 125
Thr Tyr Thr Leu Gln Arg Val Ser Asn Pro Ser Gly Asn Phe Asp Ser
130 135 140
Pro Asn His Asp Gly Leu Gly Glu Pro Lys Phe Asn Val Asp Asp Thr
145 150 155 160
Ala Tyr Thr Ala Ser Trp Gly Arg Pro Gln Asn Asp Gly Pro Ala Leu
165 170 175
Arg Ala Tyr Ala Ile Ser Arg Tyr Leu Asn Ala Val Ala Lys His Asn
180 185 190
Asn Gly Lys Leu Leu Leu Ala Gly Gln Asn Gly Ile Pro Tyr Ser Ser
195 200 205
Ala Ser Asp Ile Tyr Trp Lys Ile Ile Lys Pro Asp Leu Gln His Val
210 215 220
Ser Thr His Trp Ser Thr Ser Gly Phe Asp Leu Trp Glu Glu Asn Gln
225 230 235 240
Gly Thr His Phe Phe Thr Ala Leu Val Gln Leu Lys Ala Leu Ser Tyr
245 250 255
Gly Ile Pro Leu Ser Lys Thr Tyr Asn Asp Pro Gly Phe Thr Ser Trp
260 265 270
Leu Glu Lys Gln Lys Asp Ala Leu Asn Ser Tyr Ile Asn Ser Ser Gly
275 280 285
Phe Val Asn Ser Gly Lys Lys His Ile Val Glu Ser Pro Gln Leu Ser
290 295 300
Ser Arg Gly Gly Leu Asp Ser Ala Thr Tyr Ile Ala Ala Leu Ile Thr
305 310 315 320
His Asp Ile Gly Asp Asp Asp Thr Tyr Thr Pro Phe Asn Val Asp Asn
325 330 335
Ser Tyr Val Leu Asn Ser Leu Tyr Tyr Leu Leu Val Asp Asn Lys Asn
340 345 350
Arg Tyr Lys Ile Asn Gly Asn Tyr Lys Ala Gly Ala Ala Val Gly Arg
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Tyr Pro Glu Asp Val Tyr Asn Gly Val Gly Thr Ser Glu Gly Asn Pro
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Trp Gln Leu Ala Thr Ala Tyr Ala Gly Gln Thr Phe Tyr Thr Leu Ala
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Tyr Asn Ser Leu Lys Asn Lys Lys Asn Leu Val Ile Glu Lys Leu Asn
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Tyr Asp Leu Tyr Asn Ser Phe Ile Ala Asp Leu Ser Lys Ile Asp Ser
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Ser Tyr Ala Ser Lys Asp Ser Leu Thr Leu Thr Tyr Gly Ser Asp Asn
435 440 445
Tyr Lys Asn Val Ile Lys Ser Leu Leu Gln Phe Gly Asp Ser Phe Leu
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Lys Val Leu Leu Asp His Ile Asp Asp Asn Gly Gln Leu Thr Glu Glu
465 470 475 480
Ile Asn Arg Tyr Thr Gly Phe Gln Ala Gly Ala Val Ser Leu Thr Trp
485 490 495
Ser Ser Gly Ser Leu Leu Ser Ala Asn Arg Ala Arg Asn Lys Leu Ile
500 505 510
Glu Leu Leu
515
Claims (66)
1.一种发酵方法，其包括：
提供一种发酵培养基，所述发酵培养基包含含有麦芽酮糖的水解淀粉组合物和含有异源二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白的工程改造的酵母，其中在第一时间点，麦芽酮糖以0.5g/L或更大的第一浓度存在；以及
在一段时间内使所述培养基中的可发酵碳水化合物组合物发酵至第二时间点，其中麦芽酮糖以第二浓度存在于所述培养基中，并且所述第二浓度小于使用不具有所述异源糖转运蛋白的在其它方面相同的酵母在相同发酵条件下在所述第二时间点获得的麦芽酮糖的浓度。
2.如权利要求1所述的发酵方法，其中所述工程改造的酵母能够以大于0.02的速率在所述培养基中生长。
3.如权利要求1或2所述的发酵方法，其中所述麦芽酮糖在所述第一时间点以0.5g/L至5g/L范围内的浓度存在于所述培养基中。
4.如权利要求1-3中任一项所述的发酵方法，其中在所述第一时间点(a)异麦芽糖以至少0.5g/L的浓度存在于所述液体培养基中，(b)潘糖以至少0.5g/L的浓度存在于所述液体培养基中，或(a)和(b)两者。
5.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中所述遗传修饰的酵母由不具有糖转运蛋白的酵母或由不具有在麦芽酮糖上生长的能力的酵母制备，所述糖转运蛋白与功能性异麦芽糖转运蛋白ScMAL11(SEQ ID NO:7)具有90％或更大同一性。
6.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中所述遗传修饰的酵母是酿酒酵母。
7.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中所述遗传修饰的酵母包含与SEQ IDNO:44具有90％或更大同一性的异源多肽。
8.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中在所述第一时间点异麦芽糖的量在所述可发酵碳水化合物的0.25％-5％(重量)范围内。
9.如权利要求8所述的发酵方法，其中在所述第一时间点异麦芽糖的量在所述可发酵碳水化合物的0.5％–1.5％(重量)范围内。
10.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中在所述第二时间点的麦芽酮糖浓度不超过在所述第一时间点的浓度的四倍。
11.如权利要求11所述的发酵方法，其中在所述第二时间点的麦芽酮糖浓度不超过在所述第一时间点的浓度的两倍。
12.如权利要求1所述的发酵方法，其中在所述第二时间点的麦芽酮糖浓度不超过1g/L。
13.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中所述遗传修饰的酵母产生生物制品。
14.如权利要求13所述的发酵方法，其中所述生物制品为乙醇。
15.如权利要求14所述的发酵方法，其在所述第二时间点在所述液体培养基中提供80g/L或更大的乙醇浓度。
16.如权利要求15所述的发酵方法，其在所述第二时间点在所述液体培养基中提供80–140g/L范围内的乙醇浓度。
17.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中遗传修饰的酵母还包含以高于未修饰酵母的水平表达的异源异麦芽糖酶或内源异麦芽糖酶。
18.如权利要求17所述的发酵方法，其中所述内源异麦芽糖酶是酿酒酵母异麦芽糖酶。
19.如权利要求18所述的发酵方法，其中所述内源异麦芽糖酶选自由IMA1、IMA2、IMA3、IMA4和IMA5组成的组。
20.如权利要求18或19所述的发酵方法，其中所述内源异麦芽糖酶处于异源启动子的控制下，在所述工程改造的酵母中以多个拷贝存在，或两者兼有。
21.如前述权利要求中任一项所述的发酵方法，其中所述遗传修饰的酵母还包含异源淀粉降解酶。
22.如权利要求21所述的发酵方法，其中异源淀粉降解酶是葡糖淀粉酶。
23.如权利要求22所述的发酵方法，其中所述异源葡糖淀粉酶为选自由以下项组成的组的葡糖淀粉酶：扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、里氏木霉葡糖淀粉酶、瓣环栓菌葡糖淀粉酶、草酸青霉葡糖淀粉酶、米根霉葡糖淀粉酶、泡盛曲霉葡糖淀粉酶和埃默森篮状菌葡糖淀粉酶。
24.如权利要求22所述的发酵方法，其中所述异源葡糖淀粉酶与SEQ ID NO:45(SfGlm)具有90％或更大的序列同一性。
25.如权利要求22所述的发酵方法，其中所述异源葡糖淀粉酶包含异源分泌序列。
26.一种发酵方法，其包括：
使用包含与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的异源多肽的遗传修饰的酵母发酵包含可发酵碳水化合物组合物的液体培养基，所述可发酵碳水化合物组合物以0.5g/L可发酵碳水化合物或更大的量包含麦芽酮糖、异麦芽糖和/或潘糖中的一种或多种。
27.一种包含异源二或三吡喃葡糖基糖转运蛋白的遗传修饰的酵母，其中在标准条件下生长的所述酵母能够在包含碳水化合物组合物的合成培养基上以0.02或更大的速率生长，其中所述碳水化合物组合物中的麦芽酮糖以至少97％(重量)的量存在。
28.一种遗传修饰的Crabtree阳性酵母，其包含与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的异源多肽。
29.如权利要求28所述的遗传修饰的酵母，其中所述多肽与SEQ ID NO:44具有91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更大同一性。
30.如权利要求29所述的遗传修饰的酵母，其包含SEQ ID NO:44。
31.如权利要求28-30中任一项所述的遗传修饰的酵母，其是酵母属的种。
32.如权利要求31所述的遗传修饰的酵母，其是酿酒酵母。
33.如权利要求27-32中任一项所述的遗传修饰的酵母，其由不具有糖转运蛋白的酵母或由不具有在麦芽酮糖上生长的能力的酵母制备，所述糖转运蛋白与功能性异麦芽糖转运蛋白Sc MAL11(SEQ ID NO:7)具有90％或更大同一性。
34.如权利要求27-33中任一项所述的遗传修饰的酵母，其还包含一种遗传修饰，所述遗传修饰提供比没有所述遗传修饰的酵母更高的细胞内异麦芽糖酶活性。
35.如权利要求34所述的遗传修饰的酵母，其中所述内源异麦芽糖酶是酿酒酵母异麦芽糖酶。
36.如权利要求35所述的遗传修饰的酵母，其中所述内源异麦芽糖酶选自由IMA1、IMA2、IMA3、IMA4和IMA5组成的组。
37.如权利要求35或36所述的遗传修饰的酵母，其中所述内源异麦芽糖酶处于异源启动子的控制下，在所述工程改造的酵母中以多个拷贝存在，或两者兼有。
38.如权利要求27-37中任一项所述的遗传修饰的酵母，其还包含异源淀粉降解多肽。
39.如权利要求38所述的遗传修饰的酵母，其中所述异源淀粉降解多肽是葡糖淀粉酶。
40.如权利要求38所述的遗传修饰的酵母，其中所述异源葡糖淀粉酶为选自由以下项组成的组的葡糖淀粉酶：扣囊复膜酵母葡糖淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、里氏木霉葡糖淀粉酶、瓣环栓菌葡糖淀粉酶、草酸青霉葡糖淀粉酶、米根霉葡糖淀粉酶、泡盛曲霉葡糖淀粉酶和埃默森篮状菌葡糖淀粉酶。
41.如权利要求39所述的遗传修饰的酵母，其中所述异源葡糖淀粉酶与SEQ ID NO:45(Sf Glm)具有90％或更大的序列同一性。
42.如权利要求39-41中任一项所述的遗传修饰的酵母，其中所述异源葡糖淀粉酶包含异源分泌序列。
43.一种核酸构建体，其包含编码与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的多肽的核酸序列和一个或多个异源核酸调控序列。
44.如权利要求43所述的核酸构建体，其中所述异源核酸调控序列包括选自由以下项组成的组的启动子：ADH1、PGK1、TDH3、TPI1、TEF1、TEF2、GPD1、CYC1、PDC1、SSA3、ADH2。
45.一种核酸构建体，其包含编码与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的多肽的核酸序列和来自酿酒酵母的核酸序列。
46.一种载体，其包含编码与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的多肽的核酸。
47.如权利要求46所述的载体，其包含用于在酵母中进行选择的营养缺陷型基因标记。
48.一种宿主细胞，其包含如权利要求43–47中任一项所述的核酸或载体。
49.一种发酵培养基，其包含如权利要求27-42中任一项所述的遗传修饰的酵母。
50.如权利要求49所述的发酵培养基，其包含浓度为约80g/L或更高的乙醇。
51.如权利要求50所述的发酵培养基，其包含浓度在80g/L至140g/L范围内的乙醇。
52.如权利要求27-42中任一项所述的遗传修饰的酵母用于生产发酵产物的用途。
53.一种遗传修饰的酿酒酵母阳性酵母，其包含
(a)与SEQ ID NO:44具有90％或更大同一性的异源多肽；
(b)与处于异源启动子控制下的IMA1、IMA2、IMA3、IMA4和IMA5具有90％或更大同一性的多肽，其在所述工程改造的酵母中以多个拷贝存在；以及
(c)异源葡糖淀粉酶，
其中所述酵母能够在具有大于80g/L乙醇的培养基中生长。
54.一种发酵方法，其包括：
用包含葡糖淀粉酶(GA)表达基因的遗传工程改造的酵母发酵包含葡萄糖低聚物的液体培养基，
其中在接种后36小时或更长时间，所述发酵中产生的乙醇的量为至少80g/L。
发酵期间所述培养基的葡萄糖浓度不超过70g/L，并且
与使用酵母且在接种10小时或更短时间内葡萄糖浓度超过80g/L的发酵过程相比，所述发酵期间产生的乙醛的总量减少。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述培养基的右旋糖当量(DE)在接种5小时或更短时间内小于20，
56.如权利要求54-55中任一项所述的方法，其中在接种后36小时或更长时间，所述发酵中产生的乙醇的量为至少85、90、95、100或105g/L。
57.如权利要求54-56中任一项所述的方法，其中发酵期间所述培养基的所述葡萄糖浓度不超过75、70、60、50、40、30或20g/L。
58.如权利要求54-57中任一项所述的方法，其中所述过程的总GA活性小于1X GA活性的0.8倍。
59.如权利要求54-58中任一项所述的方法，其中与其中所述GA活性是所述1X GA活性的至少0.8倍的过程相比，所述发酵期间产生的乙醛的总量减少。
60.如权利要求54-59中任一项所述的方法，其中当二氧化碳释放速率(CER)为100mmolCO2/(L-h)或更大时，发酵流出物气体中排放的乙醛的总量小于250ppm。
61.如权利要求54-60中任一项所述的方法，其中当所述二氧化碳释放速率(CER)为50或更大时，所述发酵流出物气体中排放的乙醛的总量小于250ppm。
62.如权利要求54-61中任一项所述的方法，其中当所述二氧化碳释放速率(CER)为50或更大时，所述发酵流出物气体中排放的乙醛的总量小于225、200、175、150或125ppm。
63.如权利要求54-62中任一项所述的方法，其中所述过程的所述总GA活性在所述1XGA活性的0.675至0.8倍的范围内。
64.如权利要求54-63中任一项所述的方法，其中所述过程的所述总GA活性是所述1XGA活性的至少0.5、0.55、0.6、0.65或0.7倍，并且小于所述1X GA活性的0.8倍。
65.如权利要求54-64中任一项所述的方法，其中与使用酵母且在接种10小时或更短时间内葡萄糖浓度超过90g/L的发酵过程相比，所述发酵中产生的乙醛的总量减少了30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％。
66.如权利要求54-65中任一项所述的方法，其中所述遗传工程改造的酵母是如权利要求27-42中任一项所述的酵母。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113795503A (zh) * | 2019-03-14 | 2021-12-14 | 丹尼斯科美国公司 | 细胞色素b2在酵母中过表达用于增加乙醇生产 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2812674T3 (es) | 2014-12-23 | 2021-03-17 | Carlsberg Breweries As | Levadura para preparar bebidas alcohólicas |
| BR112019002238A2 (pt) | 2016-08-05 | 2019-05-14 | Cargill, Incorporated | polipeptídeo e célula manipulados, e, método de fermentação. |
| CA3036837A1 (en) | 2016-09-16 | 2018-03-22 | Cargill, Incorporated | Genetically modified lactate-consuming yeasts and fermentation processes using such genetically modified yeasts |
| CN110582567B (zh) | 2017-05-04 | 2024-03-08 | 嘉吉公司 | 经遗传修饰的表达海藻糖酶的酵母及使用此类经遗传修饰的酵母的发酵方法 |
| CN111971379A (zh) * | 2018-02-28 | 2020-11-20 | 嘉吉公司 | 葡糖淀粉酶工程化酵母和发酵方法 |
| MX2021000717A (es) * | 2018-07-19 | 2021-12-10 | Xylogenics Inc | Materiales y métodos para generar cepas de saccharomyces cerevisiae que muestran una capacidad aumentada para fermentar oligosacáridos. |
| PL3835426T3 (pl) * | 2019-12-13 | 2022-11-21 | Weissbiotech Gmbh | Sposób wytwarzania fermentowalnej kompozycji cukru i jej fermentacja |
| WO2021146509A1 (en) * | 2020-01-17 | 2021-07-22 | Cargill, Incorporated | Fermentation method |
| CN113025455B (zh) * | 2021-03-12 | 2023-08-08 | 四川大学 | 一种苹果酒的两段式发酵方法 |
| WO2024040001A1 (en) | 2022-08-17 | 2024-02-22 | Cargill, Incorporated | Genetically modified yeast and fermentation processes for the production of ethanol |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1069768A (zh) * | 1991-05-17 | 1993-03-10 | 索尔维酶有限公司 | 制备乙醇的方法 |
| CN101952425A (zh) * | 2008-09-09 | 2011-01-19 | 三得利控股株式会社 | 葡萄糖诱导性失活及降解抗性转运蛋白基因及其用途 |
| CN103814134A (zh) * | 2011-06-21 | 2014-05-21 | 先正达参股股份有限公司 | 表达agt1的重组酵母 |
| CN104560847A (zh) * | 2008-01-10 | 2015-04-29 | 味之素株式会社 | 利用发酵法生产目的物质的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU4013295A (en) * | 1994-10-27 | 1996-05-23 | Genencor International, Inc. | A method for improved raw material utilization in fermentation processes |
| US20040110295A1 (en) * | 2002-05-28 | 2004-06-10 | Maxygen, Inc., A Delaware Corporation | Nucleic acid vectors |
| ES2563040T3 (es) * | 2007-12-23 | 2016-03-10 | Gevo, Inc. | Organismo de levadura que produce isobutanol a un alto rendimiento |
| US9562081B2 (en) * | 2009-05-04 | 2017-02-07 | Carnegie Institution Of Washington | Sugar transporters |
| CN106559996A (zh) * | 2014-06-18 | 2017-04-05 | 嘉吉公司 | 一种利用遗传工程改造的酵母发酵生产糖的方法 |
-
2016
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1069768A (zh) * | 1991-05-17 | 1993-03-10 | 索尔维酶有限公司 | 制备乙醇的方法 |
| CN104560847A (zh) * | 2008-01-10 | 2015-04-29 | 味之素株式会社 | 利用发酵法生产目的物质的方法 |
| CN101952425A (zh) * | 2008-09-09 | 2011-01-19 | 三得利控股株式会社 | 葡萄糖诱导性失活及降解抗性转运蛋白基因及其用途 |
| CN103814134A (zh) * | 2011-06-21 | 2014-05-21 | 先正达参股股份有限公司 | 表达agt1的重组酵母 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| P. DARAN-LAPUJADE等: "Role of Transcriptional Regulation in Controlling Fluxes in Central Carbon Metabolism of Saccharomyces cerevisiae", 《THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY》 * |
| R. LAGUNAS: "Sugar transport in Saccharomyces cerevisiae", 《FEMS MICROBIOLOGY REVIEWS》 * |
| 李云成等: ""组学"技术在燃料乙醇生产用酿酒酵母菌株构建中的应用", 《中国生物工程杂志》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113795503A (zh) * | 2019-03-14 | 2021-12-14 | 丹尼斯科美国公司 | 细胞色素b2在酵母中过表达用于增加乙醇生产 |
Also Published As
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