CN108410771A - 红球菌yc915及其吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的应用 - Google Patents

红球菌yc915及其吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一株红球菌YC915及其吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的应用，红球菌YC915分类名为Rhodococcus sp.，已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏日期为2018年2月22日，保藏编号为CCTCC M 2018094。本发明提供的红球菌YC915对土壤DBP和DEHP复合污染具有高效的降解效果，在邻苯二甲酸酯污染土壤修复领域具有广泛的应用前景。

Description

红球菌YC915及其吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的 应用
技术领域
本发明属于微生物修复污染土壤的技术领域，特别涉及一株红球菌YC915及其吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的应用。
背景技术
邻苯二甲酸酯(phthalic acid esters，PAEs)又名酞酸酯，是一类重要的人工合成有机化合物，多为无色透明油状液体，难溶于水，易溶于有机溶剂，难挥发且具高脂溶性。在塑料、化肥、农药、玩具、化妆品、清洁剂及涂料等行业中均有广泛应用，大约有85％左右PAEs用于聚氯乙烯(PVC)的加工制造，作为增塑剂提高塑料制品的延展性和柔软度。由于含邻苯二甲酸酯类产品的广泛使用，PAEs的残留物在土壤、水体、空气、城市污泥、生活垃圾、化肥中和沉积物等多种基质中被检测出，成为全球性的主要环境污染物。土壤中邻苯二甲酸酯的主要人为来源包括农用塑料薄膜、农用化学品、污水灌溉、市政污泥和工业排放。国内众多研究者对我国不同地区农业土壤、设施菜地的邻苯二甲酸酯进行检测分析，一系列数据表明，我国农业土壤的邻苯二甲酸酯污染水平已远远超过相关标准。其中，邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate，DBP)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(Di-(2-ethylhexylPhthalate，DEHP)是土壤中检出率最高且含量较高的两种邻苯二甲酸酯类化合物，被美国环保署列为“优先控制的有毒污染物”，被我国列为环境优先污染物，DBP为与人类健康有关的非致癌物质，DEHP为致癌物质。土壤中邻苯二甲酸酯不仅影响土壤质量、植物的生长和品质、而且还在作物中具有一定的生物累积效应，对生态系统和人体健康构成严重威胁。因此，修复农田土壤邻苯二甲酸酯污染对保护我国农田土壤质量，保障农产品安全、生态安全和人体健康具有十分重要的现实意义。
邻苯二甲酸酯在环境中的降解途径主要有两类：一种是邻苯二甲酸酯在环境中通过自然界本身存在的修复能力自发地进行水解，光降解。已有研究表明，邻苯二甲酸酯在水中的降解半衰期从几年到几百年不等，光解半衰期在2-12年之间，单纯依靠邻苯二甲酸酯在环境中自发降解从而去除污染是不现实的。另一种是靠生物降解尤其是微生物降解，所需费用低而且对环境不会造成二次污染，是解决有机物污染的一种理想的方法。针对土壤邻苯二甲酸酯污染问题，国内外学者已经从污染土壤、污泥等不同环境介质中筛选出多株高效降解菌，并证实其对邻苯二甲酸酯具有良好的降解效果，然而，目前尤其是在干旱半干旱地区仍缺少对DBP和DEHP都能实现高效降解的降解菌。在实际应用中，由于土壤环境条件复杂且降解过程一些次生代谢物和中间降解产物的毒性较大，游离菌表现出单位体积内有效降解菌浓度低、与土著菌竞争处于弱势、抗毒性侵害能力差等特点。采用微生物固定化技术对筛选出的高效降解菌进行固定有利于屏蔽土著菌、噬菌体和毒性物质对微生物体的恶性竞争、吞噬和毒害，使其在复杂的土壤环境中也可以稳定地发挥高效能。因此，通过吸附、包埋等方法将高效降解菌进行固定化后施用于污染土壤将会更好地提高外源菌对邻苯二甲酸酯的降解效果。
专利201510418972.7公开了一种邻苯二甲酸二丁酯降解菌的固定化微球及其制备方法和应用，专利以海藻酸钠、膨润土、壳聚糖和氯化钙为固定化材料制备微球，修复效果为28天土壤中DBP降解率约80％。然而固定化微球的制备过程较为繁琐，而且该方法仅是针对土壤DBP污染问题，而没有涉及到土壤中更难降解的DEHP污染问题。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的是提供一株针对邻苯二甲酸酯(特别是DBP和DEHP)具有高效降解能力的菌株，进而提供一种降解土壤中DBP、DEHP的吸附菌剂制备方法，且该吸附菌剂制备方法操作简单，适宜广泛应用，能够解决农田土壤邻苯二甲酸酯污染的问题。
本发明中所涉及的邻苯二甲酸酯为邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)，为两者的复合污染。
(1)邻苯二甲酸酯降解菌的筛选：本发明经过一系列筛选得到一株红球菌YC915，分类名为Rhodococcus sp. YC915，已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏日期为2018年2月22日，保藏编号为CCTCC NO：M2018094。
(2)菌悬液的制备：将DBP、DEHP降解菌培养至对数生长期，用生理盐水将菌体洗净后，再用生理盐水将菌体调配成菌悬液，使菌悬液的OD600＝0.8-1.2；所述DBP、DEHP 降解菌为红球菌YC915，分类名为Rhodococcus sp. YC915，已保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏日期为2018年2月22日，保藏编号为CCTCC NO： M 2018094。具体情况下，所述生理盐水为已灭菌的0.9％NaCl溶液。
(3)吸附菌剂制备方法：选择花生壳200～700℃炭化得到的生物炭作为吸附材料，按照吸附材料与步骤(2)的菌悬液1:20～30的比例充分混合，放置于温度20～40℃、转速175r/min的摇床振荡培养12～48h，过滤并用无菌水清洗至中性，即得到吸附菌剂。
进一步地，所述红球菌YC915的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，组份为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，加水定容至1000mL。
进一步地，所述红球菌YC915的培养条件为：25-30℃、pH6.5-7.5、150-200r/min恒温震荡培养24-72h。优选28℃、pH7.0、175r/min恒温震荡培养24h。
进一步地，所述步骤(2)中清洗菌体的方法为：将红球菌YC915的培养液于 3500-4500rpm离心5-15min，弃上清液，用灭菌的生理盐水重悬沉淀后，重复离心及重悬沉淀的步骤1-3次。
上述红球菌YC915吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的应用。
进一步地，所述红球菌YC915应用的形式为吸附菌剂，用量为0.5-10ml/10g干土，降解过程中保持土壤含水量为田间最大持水量的55-65％。
进一步地，所述吸附材料生物炭以花生壳为原材料在马弗炉200～700℃条件下炭化 4h获得，使用前灭菌。
进一步地，所述步骤(3)制备好的吸附菌剂用无菌蒸馏水冲洗干净，4℃保存。
本发明的优点在于：
(1)本发明提供的红球菌YC915对土壤DBP和DEHP复合污染具有高效的降解效果，在邻苯二甲酸酯污染土壤修复领域具有广泛的应用前景。
(2)本发明采用生物炭作为吸附材料通过吸附方法制备降解DBP、DEHP的菌剂，制备方法操作简单。
(3)降解菌的固定化效果好，对土壤中DBP、DEHP的降解效率更高，适宜于大面积的农田土壤邻苯二甲酸酯污染原位修复。施用吸附菌剂培养7天后对土壤中DBP、 DEHP的降解率达到87.9％和40.8％；相比之下，空白对照组DBP、DEHP的降解率为 18.3％和2.8％，游离菌处理组介于两组之间，DBP和DEHP的降解率达到45.3％和15.6％。
附图说明
图1红球菌YC915的划线培养结果；
图2pH值对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响；
图3接种量对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响；
图4温度对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响；
图5转速对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响；
图6在不同保存条件下吸附菌剂的活菌量；
图7实施例3制备的吸附菌剂对土壤中DBP的降解性能；
图8实施例3制备的吸附菌剂对土壤中DEHP的降解性能。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例中所用到的培养基如下：
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，加水定容至1000mL， 121℃下灭菌30min。
无机盐培养基：K2HPO4·3H2O：1g，NaCl：1g，NH4NO3：0.5g，MgSO4·7H2O：0.4g，CaCl2：0.1g，FeCl3·6H2O：0.01g，加水定容至1000mL，121℃下灭菌30min。
DBP/DEHP无机盐培养基：各移取1ml浓度为5g/L的DBP和DEHP丙酮溶液于完成灭菌的100ml无机盐培养基中，置于通风橱内。丙酮完全挥发后，即可得到浓度为 100mg/L的DBP/DEHP无机盐培养基(DBP、DEHP均为50mg/L)。
实施例1邻苯二甲酸酯降解菌的筛选与鉴定
(1)邻苯二甲酸酯降解菌的筛选
在银川市郊区的蔬菜大棚中采集一定量的土样，准确秤取10g新鲜土样，加入盛有90mL蒸馏水和10mL玻璃珠的三角瓶中，置于摇床中30℃、175rpm振荡混匀，静置待用。
按1％的接种量从以上混合液中取1mL，加入到100mL初始浓度为100mg/L邻苯二甲酸酯(DBP、DEHP均为50mg/L)的无机盐培养液中，置于摇床中30℃、175rpm避光条件下进行振荡培养7d。每次转接逐渐增加邻苯二甲酸酯浓度(包括200mg/L、500 mg/L、800mg/L、1000mg/L、1500mg/L和2000mg/L)，每七天作为一个驯化周期转接一次，共经过6个驯化周期持续进行培养。
取100μL终期驯化液，涂布于2000mg/L邻苯二甲酸酯(DBP和DEHP均为1000 mg/L)的无机盐固体平板上，然后置于30℃生化培养箱中静置培养。待长出肉眼可见菌落后，观察其生长特征，筛选出长势最好的菌株，挑取单菌落将其反复划线接种于新的无机盐固体培养基上，直至镜检纯化为止。
(2)邻苯二甲酸酯降解菌的鉴定
①对筛选到的单菌落YC915进行形态观察，其培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、隆起形状、透明度、颜色、迁移性、质地、形态、边缘特征及光泽度等。菌株YC915在牛肉膏蛋白胨培养基平板上培养数天后。菌落呈圆形，粉红色，黏质不透明，边缘整齐，表面隆起，湿润光滑，直径一般在0.1～0.3mm。具体形态见图1。
②将菌株YC915送往上海生工生物股份有限公司进行分子生物学鉴定，经序列比对，其与红球菌(Rhodococcus sp.)(GenBank登录号CP022915.1)的同源性达到99％。综合菌株的形态特征及16SrDNA序列分析结果(SEQ ID NO.1)，初步鉴定菌株YC915为红球菌(Rhodococcus sp.)。
实施例2红球菌YC915对邻苯二甲酸酯降解能力检测
菌悬液的制备：挑取光滑完整的红球菌YC915菌落，接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在摇床中28℃、170r/min恒温震荡培养24h。取出牛肉膏蛋白胨液体培养基后，将培养液装于已灭菌的离心管中，在室温条件下，于4000r/min离心分离10min，收集湿菌体。然后用灭菌的生理盐水(0.9％的NaCl溶液)洗涤三次。最后，再用生理盐水将菌体调配成菌悬液，使其在波长λ＝600nm条件下的吸光度值OD＝1。
DBP/DEHP无机盐培养基中DBP/DEHP残留量的测定：向100ml的DBP/DEHP无机盐培养基中加入乙酸乙酯30ml，振荡30min，然后转移至分液漏斗振荡5min后分液，再用10ml的乙酸乙酯冲洗三次，将乙酸乙酯溶液全部转移到平底烧瓶中。用玻璃层析柱 (1.2cm×30cm)依次加入4g无水硫酸钠、6g弗罗里硅土和4g无水硫酸钠，先用10ml 的乙酸乙酯预洗柱子，弃去该淋洗液，将平底烧瓶中的乙酸乙酯萃取液分3次转移到层析柱中，再用50ml的乙酸乙酯进行洗脱。收集全部洗脱液于鸡心瓶中，35℃经旋转蒸发浓缩至恰好蒸干后，用用色谱级甲醇定容至2.0mL后，过有机系0.22μm滤膜后进行气相色谱质谱分析。
采用气相色谱质谱连用法对DBP和DEHP进行测定。色谱条件为：色谱柱：Rtx-5MS石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；载气：氦气；进样口温度：280℃；柱箱温度 70℃；流速：1ml/min；进样量1ul；分流进样。升温程序：70℃，保持1分钟；以15℃/min 速率升温至200℃，保持2min；以5℃/min速率升温至250℃，保持5min；以15℃/min 速率升温至300℃，保持5min。质谱条件为：EL离子源，离子源温度250℃，四极杆温度150℃，接口温度280℃，溶剂延迟时间3min；全扫描定性分析的扫描范围50-90amu，选择离子检测SCAN模式对化合物进行定量分析。
(1)pH值对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响
DBP/DEHP初始浓度均为50mg/L的DBP/DEHP无机盐培养基，用0.1mol/L HCl和0.1mol/L NaOH调节培养基的pH值分别为pH＝5.0、pH＝6.0、pH＝7.0、pH＝8.0、pH＝9.0，灭菌。在菌悬液接种量1％(体积比)、温度25℃、转速150r/min的条件下振荡培养3 天，测定DBP/DEHP残留量并计算降解率。
降解率计算公式：降解率(％)＝((邻苯二甲酸酯初始浓度—邻苯二甲酸酯残留浓度)/邻苯二甲酸酯初始浓度)×100％。
图2的结果表明：YC915菌株对邻苯二甲酸酯的降解能力随着pH值的升高而先升高后降低，当pH＝7时，YC915对DBP和DEHP降解率最高，分别为98.78％和85.28％。因此，菌株降解DBP和DEHP的最佳pH条件为7。
(2)接种量对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响
DBP/DEHP初始浓度均为50mg/L的DBP/DEHP无机盐培养基灭菌后分别加入0、0.5％、1％、1.5％、2％(体积比)的菌悬液，在pH＝9、温度25℃、转速150r/min的条件下振荡培养3天，测定DBP/DEHP残留量并计算降解率。
图3的结果表明：
在菌悬液接种量为1.5％的条件下，菌株YC915对DBP和DEHP的降解率最高，分别达到93.17％和75.8％。因此，菌株降解DBP和DEHP的最佳菌悬液接种量为1.5％。
(3)温度对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响
DBP/DEHP初始浓度均为50mg/L的DBP/DEHP无机盐培养基灭菌后，在菌悬液接种量为1.5％(体积比)、pH＝9、转速150r/min条件下，分别在温度为15℃、20℃、25℃、 30℃、35℃条件下振荡培养3天，测定DBP/DEHP残留量并计算降解率。
图4的结果表明：
在温度为30℃的条件下，菌株YC915对DBP和DEHP降解率最高，分别达到97.68％和89.75％。因此，菌株降解DBP和DEHP的最佳温度为30℃。
(4)转速对红球菌YC915降解DBP和DEHP的影响
DBP/DEHP初始浓度均为50mg/L的DBP/DEHP无机盐培养基灭菌后，在菌悬液接种量为1.5％(体积比)、pH＝9、温度35℃条件下，分别在0、100r/min、150r/min、175r/min、200r/min的转速条件下振荡培养3天，测定DBP/DEHP残留量并计算降解率。
图5的结果表明：在转速为175r/min的条件下，菌株YC915对DBP和DEHP的降解率最高，分别达到92.51％和77.92％。因此，菌株降解DBP和DEHP的最佳转速为 175r/min。
实施例3吸附菌剂制备条件的优化
(1)菌悬液的制备：将菌种YC915接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于28℃，170r/min的条件下培养24h。取出液体培养基后，将液体分装于50mL的无菌离心管中，于4000rpm下离心10min。弃去上清液后，用灭菌后的生理盐水重悬后再次离心，清洗两次后，用生理盐水将菌体调配成菌悬液，使其OD600＝1.0。
(2)吸附菌剂的制备方法：准确称取一定量的吸附材料生物炭倒入锥形瓶，加入一定体积的OD600＝1.0左右的菌悬液，摇匀后放置于不同温度、转速175r/min的摇床振荡培养一定时间，过滤并用无菌水清洗至中性，即得到吸附菌剂。
本实施例为了确定吸附菌剂最佳的制备条件，选择了固液比、吸附时间、吸附温度、吸附材料种类为因素，每个因素3个水平，以吸附率作为目标，采取正交实验设计方法(见表1)优化制备条件。
表1L9(34)正交实验设计
注：PSB200、PSB450和PSB700分别表示花生壳在200℃、450℃和700℃条件下炭化得到的生物炭。
正交实验结果见表2。由表中极差R值的大小可以看出，各因素对吸附率的影响程度从大到小依次为A>B>D>C，即在固液比为1:20、吸附时间为24h、吸附温度为30℃、吸附材料为PSB700的条件下，固定化材料吸附的菌液含量最高，即为最佳制备条件。在最佳制备条件下，吸附菌剂的吸附率为67.9％。
表2L9(34)正交实验结果
实施例4保存条件对吸附菌剂活菌量的影响
利用实施例1确定的最优化条件制备吸附菌剂，分别在冷藏、常温条件下保存吸附菌剂，并分别在3天、5天、7天后测定吸附菌剂的活菌量(图6)。
随着保存时间的延长，2种保存条件下吸附菌剂的活菌量均有所提高，相比常温保存条件，冷藏条件下吸附菌剂的活菌数更高，说明在短时间内冷藏条件更有利于降解菌的存活。
实施例5吸附菌剂对土壤中邻苯二甲酸酯的降解效果
利用实施例3确定的最优化条件制备吸附菌剂，分别测试游离的菌悬液及本实施例中制备的吸附菌剂对土壤中DBP、DEHP的降解效果，设空白对照。
每份称取200g污染土壤样品(DBP、DEHP含量各为50mg/kg)于棕色样品瓶中。游离菌组：向土壤样品中加入OD600＝1.0的菌悬液20mL(菌悬液接种量为10％)；吸附菌剂组：向土壤样品中加入上述制备得到的吸附菌剂1.5g(相当于20ml菌悬液的活菌量)；空白对照组：不添加游离菌和吸附菌剂。再向各组中加入灭菌去离子水，使土壤含水量为田间最大持水量的60％，封口后放入25℃生化培养箱中暗培养，分别在培养到第3、5、7天时取样进行分析。
经过7天的室内培养，在施加吸附菌剂处理组中，DBP、DEHP的降解率分别达到87.9％、40.8％；相比之下，空白对照组DBP、DEHP的降解率分别为18.3％和2.8％，游离菌处理组介于两组之间，DBP、DEHP的降解率达到45.3％和15.6％(图7、图8)。说明本发明的吸附菌剂能够显著提高对DBP、DEHP的降解率。
应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
序列表
<110> 宁夏大学
<120> 红球菌YC915及其吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1476
<212> DNA
<213> Rhodococcus sp.
<400> 1
acctggctca ggacgaacgc tggcggcgtg cttaacacat gcaagtagaa cgatgaagcc 60
acctggctca ggtggattag tggcgaacgg gtgagtaaca cgtgggtgat ctgccctgca 120
ctctgggata agcctgggaa actgggtcta ataccggata tgacctcggg atgcatgttc 180
tggggtggaa agtttttcgg tgcaggatga gcccgcggcc tatcagcttg ttggtggggt 240
aatggcctac caaggcgacg acgggtagcc ggcctgagag ggcgaccggc cacactggga 300
ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtggg gaatattgca caatgggcgc 360
aagcctgatg cagcgacgcc gcgtgaggga tgacggcctt cgggttgatt acctctttca 420
cccatgacga agcgcaagtg acggtagtgg gagaagaagc accggccaac tacgtgccag 480
cagccgcggt aatacgtagg gtgcggacgt tgtccggaat tactgggcgt aaagagctcg 540
taggcggttt gtcgcgtcgt ctgtgaaatc ccgcagctca actgcgggct tgcaggcgat 600
acgggcagac tcgagtactg caggggagac tggaattcct ggtgtagcgg tgaaatgcgc 660
agatatcagg aggaacaccg gtggcgaagg cgggtctctg ggcagtaact gacgctgagg 720
agatatcagg tgggtagcga acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacggtg 780
ggcgctaggt gtgggtttcc ttccacggga tccgtgccgt agccaacgca ttaagcgccc 840
cgcctgggga gtacggccgc aaggctaaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag 900
cggcggagca tgtggattaa ttcgatgcaa cgcgaagaac cttacctggg tttgacatgt 960
accggacgac tgcagagatg tggtttccct tgtggccggt agacaggtgg tgcatggctg 1020
tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttgtcct 1080
gtgttgccag cacgtgatgg tggggactcg caggagactg ccggggtcaa ctcggaggaa 1140
ggtggggacg acgtcaagtc atcatgcccc ttatgtccag ggcttcacac atgctacaat 1200
ggtcggtaca gagggctgcg ataccgtgag gtggagcgaa tcccttaaag ccggtctcag 1260
ttcggatcgg ggtctgcaac tcgaccccgt gaagtcggag tcgctagtaa tcgcagatca 1320
gcaacgctgc ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac gtcatgaaag 1380
tcggtaacac ccgaagccgg tggcctaacc cctcgtggga gggagccgtc gaaggtggga 1440
tcggcgattg ggacgaagtc gtaacaagtt aagccg 1476

Claims (7)

1.一株红球菌YC915，其特征在于，分类名为Rhodococcus sp.，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏日期为2018年2月22日，保藏编号为CCTCC M 2018094。
2.根据权利要求1所述的红球菌YC915，其特征在于，所述红球菌YC915的16SrDNA序列分析结果如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的红球菌YC915，其特征在于，所述红球菌YC915的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，组份为：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，加水定容至1000mL。
4.根据权利要求1所述的红球菌YC915，其特征在于，所述红球菌YC915的培养条件为：25-30℃、pH6.5-7.5、150-200r/min恒温震荡培养24-72h。
5.一种降解土壤中DBP、DEHP的吸附菌剂，通过以下制备方法制得：
(1)菌悬液的制备：将DBP、DEHP降解菌培养至对数生长期，用生理盐水将菌体洗净后，再用生理盐水将菌体调配成菌悬液，使菌悬液的OD600＝0.8-1.2；所述DBP、DEHP降解菌为红球菌YC915，分类名为Rhodococcus sp.，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏日期为2018年2月22日，保藏编号为CCTCC M2018094；
(2)吸附菌剂制备方法：选择花生壳200～700℃炭化得到的生物炭作为吸附材料，按照吸附材料与步骤(1)的菌悬液1:20～30的比例充分混合，放置于温度20～40℃、转速175r/min的摇床振荡培养12～48h，过滤并用无菌水清洗至中性，即得到吸附菌剂。
6.根据权利要求5所述的吸附菌剂在降解土壤邻苯二甲酸酯中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，吸附菌剂用量为0.5-10ml/10g干土，降解过程中保持土壤含水量为田间最大持水量的55-65％。
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