CN108403858A - 一种治疗手足口病的裸花紫珠提取物组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中药领域，具体提供一种具有治疗手足口病作用的组合物，该组合物按照重量份计，由22‑40份裸花紫珠总黄酮、20‑26份裸花紫珠总酚酸和40‑50份裸花紫珠总苯乙醇苷组成。本发明还公开了该组合物的应用。本发明采用三种组分均提取自裸花紫珠，其成分明确，各组分间协同发挥作用，具有良好的治疗和/或预防手足口病的疗效。

Description

一种治疗手足口病的裸花紫珠提取物组合物及其应用
技术领域
本发明涉及一种裸花紫珠提取物组合物及其应用，具体涉及一种具有治疗手足口病作用的裸花紫珠提取物组合物及其应用。
背景技术
手足口病(HFMD)是一种儿科常见的急性传染病，常发生于学龄前儿童，临床常表现为发热、咽痛、口腔疱疹、手和/或足或其他部位出现皮疹、疱疹或小溃疡，可在7天左右痊愈。但仍有一部分患儿可出现脑炎、肺水肿等严重的并发症，手足口病对小年龄组儿童及婴幼儿的主要危害是重型及危重型手足口病的高病死率及高致残率，尤其是出现脑干脑炎、神经源性肺水肿以及心肺衰竭的手足口病患者。HFMD传染性强，传播途径广，在短期可造成大范围流行。自2008年我国将手足口病纳入法定丙类传染病以来，其发病率和死亡率位于我国丙类传染病之首，是儿童主要传染病。
HFMD可引起很多系统的并发症，如心血管系统并发症、神经系统并发症和呼吸系统并发症等。其中心血管系统并发症主要可造成患者心肌损伤和心肌炎，临床表现为心律失常，血压浮动大，心肌酶谱与心肌肌钙蛋白变高，少数HFMD重症患者合并川崎病。神经系统并发症可造成急性弛缓性麻痹、脑膜炎或脑炎等，临床表现为全身发热、肢体共济失调、急性松弛性麻痹、惊厥、眼球震颤等。呼吸系统并发症主要表现为合并支气管炎、肺水肿或肺炎，临床表现为咳嗽、痰多以及呼吸困难等。因此掌握手足口病并发症及其诊断方法尤为关键。
人类肠道病毒属于微小核糖核酸病毒科肠道病毒属，包含以下四种病毒：脊髓灰质炎病毒(P)、埃可病毒(E)、柯萨奇病毒(CV)和新型肠道病毒(EV)。能导致手足口病的病原体主要为柯萨奇病毒A类(CVA)，包括CVA2、CVA4、CVA5、CVA6、CVA7、CVA9、CVA10、CVA16型，柯萨奇病毒B类(CVB)，其中CVB类有CVB1、CVB2、CVB3、CVB4、CVB5型，埃可病毒，肠道病毒71(EV71)型等。在这些病毒中CVA16和EV71是过去几十年来最为多见的病原体，但自2010年之后从手足口病患者标本中分离出来的CVA6和CVA10逐渐增长。近年来随着手足口病病原学深入研究，手足口病的病原谱也出现了新的变化，除检测EV71和CVA16以外，需要进一步增加对其他肠道病毒的分型检测，对未定型的肠道病毒也要引起足够的重视，为临床诊断和疫情防控提供科学的依据。
裸花紫珠(Callicarpa Nudiflora)是马鞭草科紫珠属植物，其药用部位为地上干燥部分，是一种海南大宗性道地药材，同时也是海南黎族医生常用药材之一。其中的有效成分有环烯醚萜类、黄酮类、醌类、挥发油、木聚糖类、有机酸类等，目前裸花紫珠的药理活性主要分为以下五个方面：(1)止血(2)抗炎(3)抑菌(4)细胞毒活性(5)增强免疫。
由该味药材浸膏组成的中成药裸花紫珠制剂，如裸花紫珠片、裸花紫珠胶囊、裸花紫珠颗粒等，在临床上应用较广泛，主要用于治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，呼吸道及消化道等腔道出血等症。部分研究表明裸花紫珠在抗病毒方面也具有一定的疗效，专利申请CN105535273A中公开了裸花紫珠颗粒在抗肠病毒方面的应用，专利申请CN105395712A公开了裸花紫珠颗粒在抗呼吸性病毒方面的应用，专利申请CN104906266A公开了裸花紫珠具有抗柯萨奇病毒的作用。但上述现有技术中裸花紫珠相关制剂服用剂量大，有效成分不明确、质量标准可控性差等缺点，难于满足药物“安全、有效、可控、稳定”的要求。
发明内容
基于上述现有技术的缺陷，本发明对裸花紫珠进行有效成分的提取纯化，并通过合理的组合，提供一种组分明确的裸花紫珠提取物组合物，该组合物各组分间相互发挥作用，能够显著抑制肠病毒，为手足口病的临床诊断和治疗提供科学依据。
本发明提供一种治疗手足口病的组合物，按照重量份数计，所述组合物由22-40份裸花紫珠总黄酮、20-26份裸花紫珠总酚酸和40-50份裸花紫珠总苯乙醇苷组成。
进一步地，所述组合物按照重量份数计，由25-35份裸花紫珠总黄酮、21-23份裸花紫珠总酚酸和43-47份裸花紫珠总苯乙醇苷组成。
更进一步地，所述组合物按照重量份数计，由31份裸花紫珠总黄酮、22份裸花紫珠总酚酸和45份裸花紫珠总苯乙醇苷组成。
进一步地，所述组合物中组分均分离自裸花紫珠水提物。
进一步地，所述裸花紫珠水提物的制备方法为：裸花紫珠加水煎煮1-3次，合并滤液，浓缩至浸膏状，即得裸花紫珠水提物。
进一步地，所述裸花紫珠水提取的制备方法为：裸花紫珠加水100-110℃提取1-3次，每次加8-12倍水，第一次提取1-2.5h，第二次提取0.5-3h，合并滤液，过滤，60-90℃减压浓缩至相对密度1.30～1.35的浸膏状，于60-75℃干燥成干浸膏，即得裸花紫珠水提物。
进一步地，所述裸花紫珠总黄酮的制备方法为：
(1)裸花紫珠水提取，加乙醇溶解，得裸花紫珠乙醇溶液；
(2)裸花紫珠乙醇溶液通过AB-8树脂，乙醇为洗脱液，收集洗脱液，真空干燥即得裸花紫珠总黄酮。
更进一步地，所述裸花紫珠总黄酮的制备方法为：
(1)裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.5-1mg/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
(2)裸花紫珠乙醇溶液通过AB-8树脂(径高比为1:8-1:15)，85-95％乙醇为洗脱液，进样速率为1.5-3mL/min，洗脱速率为20-30滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总黄酮含量测定后，确定含量最高的馏分，加入裸花紫珠水提物质量1-1.5倍的氯化锌，在pH6.0-7.0的条件下沉淀，过滤，沉淀物真空干燥即得裸花紫珠总黄酮。
进一步地，所述裸花紫珠总酚酸的制备方法为：
(1)裸花紫珠水提取，加乙醇溶解，得裸花紫珠乙醇溶液；
(2)将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，浓缩干燥后，得到裸花紫珠乙酸乙酯相；
(3)将裸花紫珠乙酸乙酯相浓缩后通过D101大孔树脂，用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，真空干燥即得裸花紫珠总酚酸。
更进一步地，裸花紫珠总酚酸的制备方法为：
(1)裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.5-1g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
(2)将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入2-3倍体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取每种试剂萃取2-3次，浓缩干燥后，保留乙酸乙酯相；
(3)裸花紫珠乙酸乙酯相加水复溶后，配制为0.5-1mg/mL的溶液，通过D101大孔树脂(径高比为1:8-1:20)，用50-80％乙醇溶液洗脱，进样速率为1.5-3mL/min，洗脱速率为20-30滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总酚酸含量测定后，确定含量最高的馏分，真空干燥即得裸花紫珠总酚酸。
进一步地，所述裸花紫珠总苯乙醇苷的制备方法为：
(1)裸花紫珠水提取，加乙醇溶解，得裸花紫珠乙醇溶液；
(2)将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，浓缩干燥后，得到裸花紫珠正丁醇相；
(3)将裸花紫珠正丁醇相复溶后，依次通过硅胶柱和HPD100树脂柱，洗脱液浓缩后冷冻干燥即得。
更进一步地，所述裸花紫珠总苯乙醇苷的制备方法为：
(1)裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.5-1g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
(2)将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入2-3倍体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取每种试剂萃取2-3次，浓缩干燥后，保留正丁醇相；
(3)裸花紫珠正丁醇相加乙醇复溶，配制为0.5-1mg/mL的溶液，通过硅胶柱(径高比为1:10-1:15，硅胶粒径为200-300μm)，以甲醇-二氯甲烷溶剂系统进行洗脱，甲醇-二氯甲烷体积比为0:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0依次进行洗脱，进样速率为1.2-3mL/min，洗脱速率为8-15滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩干燥后，得馏分1；
(4)馏分1加水复溶，配制为0.5-1mg/mL的溶液，通过HPD100树脂(径高比为1:3-1:9)，水洗脱，进样速率为1.2-3mL/min，洗脱速率为8-15滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩后冷冻干燥即得裸花紫珠总苯乙醇苷。
本发明还提供一种治疗手足口病的药物制剂，由上述的组合物和药学上可接受的辅料组成。
进一步地，所述制剂为口服液、颗粒冲剂、胶囊、片剂、分散剂。
本发明进一步提供所述治疗手足口病组合物在制备治疗和/或预防手足口病中的应用。
进一步地，所述组合物在制备治疗和/或预防由CVA6和/或CVA10引起的手足口病药物中的应用。
本发明的有益效果为：
(1)对裸花紫珠中的有效成分进行提取和提纯，选取裸花紫珠总黄酮、裸花紫珠总酚酸和裸花紫珠总苯乙醇苷进行合理的组合，制备的组合物通过影响病毒的复制周期，表现为在抑制肠病毒方面相比于裸花紫珠水提取、醇提取具有更好的作用，具有良好的治疗儿童手足口病的疗效。
(2)裸花紫珠总黄酮、裸花紫珠总酚酸和裸花紫珠总苯乙醇苷三种组分相互协同发挥作用，并对其含量进行调整，其治疗手足口病的疗效明显优于单一组分或裸花紫珠提取物。
(3)本发明提供的裸花紫珠提取物组合物，其成分和含量明确，疗效显著，质量稳定，制备方法简单，克服了单纯水提取、醇提物等组分不明确，治病机理不清楚的问题。
具体实施方式
实施例1裸花紫珠总黄酮、总酚酸和苯乙醇苷的提取
(1)裸花紫珠水提物的制备：
裸花紫珠加水100℃提取3次，每次加8倍水，第一次提取2.5h，第2和3次提取0.5h，合并滤液，过滤，60℃减压浓缩至相对密度1.30～1.35的浸膏状，于60℃干燥成干浸膏，备用；
(2)裸花紫珠总黄酮的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.5mg/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②裸花紫珠乙醇溶液通过AB-8树脂(径高比为1:15)，95％乙醇为洗脱液，进样速率为1.5mL/min，洗脱速率为20滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总黄酮含量测定后，确定含量最高的馏分，加入裸花紫珠水提物质量1.5倍的氯化锌，在pH7.0的条件下沉淀，过滤，沉淀物真空干燥即得裸花紫珠总黄酮。
(3)裸花紫珠总酚酸的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.5-1g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入2倍体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取每种试剂萃取2次，浓缩干燥后，保留乙酸乙酯相；
③乙酸乙酯相加水复溶后，配制为0.5mg/mL的溶液，通过D101大孔树脂(径高比为1:8)，用50％乙醇溶液洗脱，进样速率为1.5mL/min，洗脱速率为20滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总酚酸含量测定后，确定含量最高的馏分，真空干燥即得裸花紫珠总酚酸。
(4)裸花紫珠总苯乙醇苷的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为1g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入2倍体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取每种试剂萃取2次，浓缩干燥后，保留正丁醇相；
③正丁醇相加乙醇复溶，配制为0.5mg/mL的溶液，通过硅胶柱(径高比为1:10，硅胶粒径为200-300μm)，以甲醇-二氯甲烷溶剂系统进行洗脱，甲醇-二氯甲烷体积比为0:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0依次进行洗脱，进样速率为1.2mL/min，洗脱速率为8滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩干燥后，得馏分1；
④馏分1加水复溶，配制为0.5mg/mL的溶液，通过HPD100树脂(径高比为1:3)，水洗脱，进样速率为1.2mL/min，洗脱速率为8滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩后冷冻干燥即得裸花紫珠总苯乙醇苷。
实施例2裸花紫珠总黄酮、总酚酸和苯乙醇苷的提取
(1)裸花紫珠水提物的制备：
裸花紫珠加水105℃提取2次，每次加10倍水，第一次提取2h，第二次提取1h，合并滤液，过滤，80℃减压浓缩至相对密度1.30～1.35的浸膏状，于70℃干燥成干浸膏，备用；
(2)裸花紫珠总黄酮的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.8mg/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②裸花紫珠乙醇溶液通过AB-8树脂(径高比为1:10)，90％乙醇为洗脱液，进样速率为2mL/min，洗脱速率为25滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总黄酮含量测定后，确定含量最高的馏分，加入裸花紫珠水提物质量1.5倍的氯化锌，在pH6.5的条件下沉淀，过滤，沉淀物真空干燥即得裸花紫珠总黄酮。
(3)裸花紫珠总酚酸的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.5-1g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入3倍体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取每种试剂萃取3次，浓缩干燥后，保留乙酸乙酯相；
③乙酸乙酯相加水复溶后，配制为1mg/mL的溶液，通过D101大孔树脂(径高比为1:15)，用65％乙醇溶液洗脱，进样速率为2mL/min，洗脱速率为25滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总酚酸含量测定后，确定含量最高的馏分，真空干燥即得裸花紫珠总酚酸。
(4)裸花紫珠总苯乙醇苷的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为1g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入3倍体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取每种试剂萃取3次，浓缩干燥后，保留正丁醇相；
③正丁醇相加乙醇复溶，配制为1mg/mL的溶液，通过硅胶柱(径高比为1:12，硅胶粒径为200-300μm)，以甲醇-二氯甲烷溶剂系统进行洗脱，甲醇-二氯甲烷体积比为0:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0依次进行洗脱，进样速率为1.5mL/min，洗脱速率为10滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩干燥后，得馏分1；
④馏分1加水复溶，配制为1mg/mL的溶液，通过HPD100树脂(径高比为1:6)，水洗脱，进样速率为2mL/min，洗脱速率为13滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩后冷冻干燥即得裸花紫珠总苯乙醇苷。
实施例3裸花紫珠总黄酮、总酚酸和苯乙醇苷的提取
(1)裸花紫珠水提物的制备：
裸花紫珠加水110℃提取1次，每次加12倍水，第一次提取1h，第二次提取3h，合并滤液，过滤，90℃减压浓缩至相对密度1.30～1.35的浸膏状，于75℃干燥成干浸膏，备用；
(2)裸花紫珠总黄酮的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为1mg/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②裸花紫珠乙醇溶液通过AB-8树脂(径高比为1:8)，85％乙醇为洗脱液，进样速率为3mL/min，洗脱速率为30滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总黄酮含量测定后，确定含量最高的馏分，加入裸花紫珠水提物质量1倍的氯化锌，在pH6.0的条件下沉淀，过滤，沉淀物真空干燥即得裸花紫珠总黄酮。
(3)裸花紫珠总酚酸的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为1g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入3倍体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取每种试剂萃取3次，浓缩干燥后，保留乙酸乙酯相；
③乙酸乙酯相加水复溶后，配制为1mg/mL的溶液，通过D101大孔树脂(径高比为1:20)，用80％乙醇溶液洗脱，进样速率为3mL/min，洗脱速率为30滴/min，收集洗脱液，洗脱液经总酚酸含量测定后，确定含量最高的馏分，真空干燥即得裸花紫珠总酚酸。
(4)裸花紫珠总苯乙醇苷的制备：
①裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，配制为0.5g/mL的裸花紫珠乙醇溶液；
②将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入3倍体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取每种试剂萃取3次，浓缩干燥后，保留正丁醇相；
③正丁醇相加乙醇复溶，配制为1mg/mL的溶液，通过硅胶柱(径高比为1:15，硅胶粒径为200-300μm)，以甲醇-二氯甲烷溶剂系统进行洗脱，甲醇-二氯甲烷体积比为0:100、20:80、40:60、60:40、80:20、100:0依次进行洗脱，进样速率为3mL/min，洗脱速率为15滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩干燥后，得馏分1；
④馏分1加水复溶，配制为1mg/mL的溶液，通过HPD100树脂(径高比为1:9)，水洗脱，进样速率为3mL/min，洗脱速率为15滴/min，洗脱液经苯乙醇苷含量测定，确定含量最高的馏分，浓缩后冷冻干燥即得裸花紫珠总苯乙醇苷。
实施例4-9治疗手足口病的裸花紫珠提取物组合物
实施例4-9的组合物配方参见下表。
上述组合物可按照常规方法添加相应辅料，制备为口服液、颗粒冲剂、胶囊、片剂或分散剂。
对比例1-4治疗手足口病的裸花紫珠提取物组合物
对比例1-4的组合物配方参见下表。
上述组合物可按照常规方法添加相应辅料，制备为口服液、颗粒冲剂、胶囊、片剂或分散剂。
对比例5裸花紫珠水提物
取裸花紫珠，加水煎煮两次，每次加10倍量水，第一次2小时，第2次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩，干燥成干浸膏即得裸花紫珠水提物。
裸花紫珠水提物可按照常规方法添加辅料，制备为口服液、颗粒冲剂、胶囊、片剂或分散剂。
对比例6裸花紫珠醇提物
取裸花紫珠，加95％乙醇50℃回流浸提3h，滤过，滤液浓缩，干燥成干浸膏即得裸花紫珠醇提物。
裸花紫珠醇提物可按照常规方法添加辅料，制备为口服液、颗粒冲剂、胶囊、片剂或分散剂。
实施例10裸花紫珠提取物组合物的体外抗病毒研究
待测药物选取实施例6-7、对比例1-6的组合物制备的颗粒制剂，以及市售裸花紫珠颗粒(江西普正药业)进行研究。
待测病毒选取CVA16、EV71、CVA6和CVA10。
10.1病毒的培养
Hep-2细胞株冻存管从液氮罐取出，立即投入37℃～42℃温水中融化，超净工作台内将冻存管中液体移入离心管中，1000r/min离心5min，弃冻存液，加入8ml浓度为10％的1640细胞培养液轻轻将下层沉淀细胞吹打混匀，用移液管转移到培养瓶内，在37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。待细胞长成单层后进行传代。
将病毒分别接种于己经长成单层的Hep-2细胞上，加RPMI-1640维持液8ml置37℃、5％CO2病毒培养箱中培养，并设细胞对照，逐日观察。待细胞出现80％以上的病变时，反复冻融3次，用吸管轻轻吹打，1000r/min离心5min，取上清液定量分装于小青瓶中，胶布封口，放于-80℃冰箱冻存备用。
10.2病毒毒力的测定
将病毒用RPMI-1640维持液做10倍比系列稀释不同浓度，纵向重复4孔，依次接种于己长成单层的Hep-2细胞的96孔板中，同时设细胞对照。37℃、5％CO2病毒培养箱中培养，倒置显微镜下逐日观察，连续观察5d，将板孔内液体吸弃，加1％中性红50μL，37℃、5％CO2培养箱中1小时，弃染液，用洗液将多余染料充分洗漆，加脱色液100μL，室温脱色l0min，用酶标仪在540mn波长测定OD值。根据Reed-Muench公式计算病毒液的半数感染浓度TCID50。
细胞存活率＝各组OD值/正常细胞OD值×100％
细胞病变率＝1－细胞存活率
细胞比距＝(高于50％病变率－50％)/(高于50％病变率－低于50％病变率)×100％
TCID50＝Antilog(Iog高于50％CPE百分率病毒稀释度+比距×稀释因子对数)
根据TCID50结果，将病毒原液稀释至10-6-10-7使用。
10.3药物对细胞毒性测定
将待测药物用RPMI-1640维持液按二倍比稀释7个浓度梯度，依次接种于己经长成单层的Hep-2细胞的96孔板中，并设4个复孔及细胞对照孔；37℃、5％CO2培养箱中培养，逐日观察细胞病变，连续观察3d，计算药物的最大无毒浓度。细胞出现病变者判为药物毒性，中性红染色，用酶标仪在540nm波长测定OD值，应用Reed-Muench公式计算药物半数中毒浓度(TC50)，并确定最小无毒浓度(TC0)。
TC50＝[Antilog(log高于50％CPE百分率病毒稀释度+比距)]×C
10.4抗病毒实验
待测药物从无毒浓度起用RPMI-1640二倍比系列稀释7个浓度，每孔50μL接种于已长成单层Hep-2细胞的96板孔中，每孔再加入50μL病毒液，同时设利巴韦林阳性对照组、病毒对照组及空白细胞对照组，每组4个复孔；病毒对照组和空白细胞组加入等量的空白培养基。5％CO2培养箱中培养，观察细胞病变，待病毒对照出现90％以上的病变时，1％中性红染色，并用酶标仪在540nm波长测定OD值。应用Reed-Muench方法计算药物半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI)。
EC50＝[Antilog(log高于50％CPE百分率病毒稀释度的值-比距)]×C
TI＝半数毒性浓度(TC50)/半数有效浓度(EC50)
10.5实验结果
表1不同裸花紫珠药物对CVA16、EV71、CVA6和CVA10病毒的治疗指数
TI CVA16 EV71 CVA6 CVA10
实施例6 58.3a 62.1a 75.4a 77.8a
实施例7 60.5a 60.2a 80.4a 82.1a
对比例1 29.7b 40.7b 40.2b 44.3b
对比例2 36.4b 38.5b 45.3b 47.2b
对比例3 29.5b 43.4b 41.9b 39.1c
对比例4 45.8c 48.1c 57.1c 57.9d
对比例5 39.4b 42.3b 52.8b 51.3d
对比例6 35.2b 36.1b 54.8c 44.3b
市售裸花紫珠颗粒 43.2c 46.7c 57.2c 54.8d
利巴韦林阳性对照组 68.3a 69.4d 70.2d 76.5a
注：同一列中不同字母间代表具有显著性差异。
由表1可知，本发明提供的裸花紫珠提取物组合物抗CVA6和CVA10病毒方面的效果优于抗CVA16和EV71病毒。在治疗以上4种手足口病病毒中，本发明提供的裸花紫珠组合物的组分缺一不可，对比例1-3中分别缺少了裸花紫珠总黄酮、裸花紫珠总酚酸和裸花紫珠总苯乙醇苷，其抗病毒效果均显著下降，说明三种组分之间存在相互协同的作用。另外，本发明提供的裸花紫珠提取物组何物的含量是经过严格筛选和配比得到的，对比例4中调整了三者的配比，其抗病毒的效果显著下降。
裸花紫珠通过常规的水提法和醇提法得到的提取物以及市售的裸花紫珠颗粒，其成分复杂，含量不明确，无法发挥最大的效果，因此其抗病毒的作用也不如本发明提供的组合物。
实施例11裸花紫珠提取物组合物治疗CVA6和CVA10感染的小鼠
取BALB/C小鼠，随机分组，分为正常对照组、模型组和给药组(实施例6-7、对比例1-6的组合物制备的颗粒制剂、市售裸花紫珠颗粒组)，以4倍TCID50病毒量对大鼠进行腹腔注射，正常组给予等量生理盐水，1小时后立即灌胃给药，模型组和正常组给予等量生理盐水；连续给药14天，14天后处死存活小鼠，眼眶取血测定LDH、SOD和MDA。
表2裸花紫珠提取物对CVA6病毒感染小鼠血清指标的影响
LDH(U/L) SOD(U/L) MDA(umol/L)
空白组 661.3±143.2a 287.3±64.3a 12.1±1.4a
病毒组 1578.1±516.7b 117.6±55.8b 30.4±5.7b
实施例6 771.3±243.6a 254.7±32.8a 14.9±4.3a
实施例7 721.4±286.9a 267.3±47.1a 13.1±2.5a
对比例1 1123.4±463.2c 167.5±55.2d 22.4±3.4c
对比例2 1231.2±241.2d 197.6±57.8c 24.1±4.6c
对比例3 1410.1±117.5b 147.3±61.6d 20.5±5.1d
对比例4 884.3±126.4c 234.7±43.3c 16.9±5.8d
对比例5 1057.5±245.3c 201.4±41.8c 21.3±2.8c
对比例6 1047.5±264.1d 182.4±54.1c 18.6±4.6d
裸花紫珠颗粒 899.3±241.1c 222.5±62.7c 16.4±3.7d
注：同一列中不同字母间代表具有显著性差异。
表3裸花紫珠提取物对CVA10病毒感染小鼠血清指标的影响
注：同一列中不同字母间代表具有显著性差异。
由表2-3可知，实施例7在治疗CVA6和CVA10病毒感染的小鼠方面的效果最好，与对比例1-6以及市售裸花紫珠相比具有显著性差异，充分说明本发明提供的裸花紫珠提取物组合物，通过纯化后进行合理的含量配比，其相互协同发挥作用，大大提高了其抑制CVA6和CVA10病毒的效果。
实施例12裸花紫珠提取物组合物临床治疗疗效
于医院门诊收集手足口病患者100例，其中男性52例，女性48例，平均年龄5岁左右，心功能II级84例，心功能III级12例；随机分为治疗组(实施例6-7、对比例1-6制备的裸花紫珠颗粒和市售裸花紫珠颗粒组)和对照组，治疗组每次1袋；每日3次，对照组给予病毒唑口服，0.1g/次，每日4次，两组病例若出现心律失常情况给予抗心律失常药物予以治疗，主要有普罗帕酮，异搏定等，30天为一个疗程并观察患者症状改善情况。
疗效标准：
显效：症状与体征完全消失，心电图恢复正常，心肌酶谱正常。
有效：症状与体征改善，心电图及心肌酶谱好转。
无效：症状与体征无明显改善。
表4裸花紫珠颗粒治疗手足口病结果
由表4可知，本发明提供的裸花紫珠提取物的组合物，在治疗手足口病方面的疗效与病毒唑相当，通过调整相关组分种类和含量后，其治疗疗效均明显下降，并且对于裸花紫珠提取物和市售裸花紫珠颗粒，其成分复杂，含量未知，治疗的疗效也相应的下降。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种治疗手足口病的组合物，其特征在于，所述组合物按照重量份数计，由22-40份裸花紫珠总黄酮、20-26份裸花紫珠总酚酸和40-50份裸花紫珠总苯乙醇苷组成。
2.根据权利要求1所述的一种治疗手足口病的组合物，其特征在于，所述组合物中组分均通过裸花紫珠水提物纯化得到。
3.根据权利要求1所述的治疗手足口病的组合物，其特征在于，所述裸花紫珠水提物的制备方法为：裸花紫珠加水煎煮1-3次，合并滤液，浓缩至浸膏状，即得裸花紫珠水提物。
4.根据权利要求3所述的治疗手足口病的组合物，其特征在于，所述裸花紫珠总黄酮的制备方法包括以下步骤：
(1)裸花紫珠水提取，加乙醇溶解，得裸花紫珠乙醇溶液；
(2)裸花紫珠乙醇溶液通过AB-8树脂，乙醇为洗脱液，收集洗脱液，真空干燥即得裸花紫珠总黄酮。
5.根据权利要求3所述的治疗手足口病的组合物，其特征在于，所述裸花紫珠总酚酸的制备方法包括以下步骤：
(1)裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，得裸花紫珠乙醇溶液；
(2)将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取，浓缩干燥后，得到裸花紫珠乙酸乙酯相；
(3)将裸花紫珠乙酸乙酯相浓缩后通过D101大孔树脂，用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，真空干燥即得裸花紫珠总酚酸。
6.根据权利要求3所述的治疗手足口病的组合物，其特征在于，所述裸花紫珠总苯乙醇苷的制备方法包括以下步骤：
(1)裸花紫珠水提物，加乙醇溶解，得裸花紫珠乙醇溶液；
(2)将裸花紫珠乙醇溶液，依次加入石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，浓缩干燥后，得到裸花紫珠正丁醇相；
(3)将裸花紫珠正丁醇相复溶后，依次通过硅胶柱和HPD100树脂柱，洗脱液浓缩后冷冻干燥即得。
7.一种包括权利要求1-6任一项所述的治疗手足口病的药物制剂，其特征在于，所述制剂由权利要求1-6任一项所述的组合物和药学上可接受的辅料组成。
8.根据权利要求7所述的药物制剂，其特征在于，所述制剂为口服液、颗粒冲剂、胶囊、片剂、分散剂。
9.权利要求1-6任一项所述的组合物在制备治疗和/或预防手足口病药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述组合物在制备治疗和/或预防由CVA6和/或CVA10引起的手足口病药物中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108686045A (zh) * 2018-07-03 2018-10-23 江西普正制药有限公司 一种裸花紫珠组合物及其治疗咽炎的应用
CN111671827A (zh) * 2020-06-11 2020-09-18 江西普正制药股份有限公司 一种裸花紫珠提取物在制备溃疡性结肠炎药物中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101623394A (zh) * 2009-01-22 2010-01-13 九芝堂股份有限公司 一种裸花紫珠提取物及其制备方法、制剂和用途
CN102000147A (zh) * 2009-08-28 2011-04-06 江春艳 一种防治高原反应及冠心病的药物配方及其制剂
CN105535273A (zh) * 2015-12-24 2016-05-04 普正药业股份有限公司 裸花紫珠颗粒在抗肠病毒方面的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101623394A (zh) * 2009-01-22 2010-01-13 九芝堂股份有限公司 一种裸花紫珠提取物及其制备方法、制剂和用途
CN102000147A (zh) * 2009-08-28 2011-04-06 江春艳 一种防治高原反应及冠心病的药物配方及其制剂
CN105535273A (zh) * 2015-12-24 2016-05-04 普正药业股份有限公司 裸花紫珠颗粒在抗肠病毒方面的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
余娜等: "臭牡丹地上部分抗肿瘤活性的筛选", 《湖南中医杂志》 *
潘争红等: "裸花紫珠提取物及其主要成分抗氧化活性研究", 《裸花紫珠提取物及其主要成分抗氧化活性研究》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108686045A (zh) * 2018-07-03 2018-10-23 江西普正制药有限公司 一种裸花紫珠组合物及其治疗咽炎的应用
CN108686045B (zh) * 2018-07-03 2020-04-03 江西普正制药股份有限公司 一种裸花紫珠组合物及其治疗咽炎的应用
CN111671827A (zh) * 2020-06-11 2020-09-18 江西普正制药股份有限公司 一种裸花紫珠提取物在制备溃疡性结肠炎药物中的应用
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