CN105535273A - 裸花紫珠颗粒在抗肠病毒方面的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，具体涉及裸花紫珠颗粒在制备抗肠病毒方面药物的应用。所述肠病毒选自（包括但不限于）：小儿麻痹病毒、柯萨奇A病毒、柯萨奇B病毒、伊科病毒等；优选为柯萨奇B病毒。

Description

裸花紫珠颗粒在抗肠病毒方面的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及裸花紫珠颗粒的新应用。

背景技术

裸花紫珠(CallicarpanudifloraHook.etArn.)为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属植物，主产于我国海南，是一种海南地道药材，我国广东、广西也有分布。目前有研究表明裸花紫珠药材的主要成分为黄酮类、鞣质、萜类、挥发油类等，其中萜类和黄酮能增加血小板的数量，缩短出血和凝血时间，对纤溶系统具有显著的抑制作用，收缩血管、止血效果显著，对炎症早期的渗出、肿胀有明显的抑制作用，加快创面渗出的吸收，促进伤口的愈合，对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、肺炎双球菌、绿脓杆菌等均有较强的抑菌作用；而鞣质能使创面的微血管收缩，具有局部止血作用。临床上常用于治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，消化道出血等疾病。

裸花紫珠颗粒是江西普正药业有限公司研发的中药制剂，临床应用中在抗炎止血方面取得非常好的疗效，并已经列入了国家药品部颁标准。其制备方法为取裸花紫珠干浸膏，加蔗糖粉适量，混匀，用60％乙醇制成颗粒，干燥，制成。

肠病毒是一群病毒的总称，包括小儿麻痹病毒、柯萨奇A病毒、柯萨奇B病毒、伊科病毒、肠病毒。由于这些病毒都栖息于人体消化道，在生化特性、流行病学及致病原因上也具有共同点而被归纳在一起。现在，小儿麻痹病毒已有疫苗可以预防，因此，现在的孩子不受到小儿麻痹病毒的威胁。流行在孩子中间的病剩下柯萨奇病毒、伊科病毒、肠病毒等。

肠病毒引发的疾病十分广泛，不同型的病毒可能会有相同症状。典型的症状包括疱疹性咽峡炎、手足口病、无菌性脑膜炎。而心肌炎、心包膜炎、病毒性脑膜炎、肢体麻痹症候群是属于较严重的疾病。并不是所有受到肠病毒感染的人都会有症状，因免疫力不同，约50%～80%是无症状感染，有部分的人会有轻微类似感冒或肠胃炎症状。

发明内容

本发明的一个目的是裸花紫珠颗粒在制备抗肠病毒方面药物的应用。所述肠病毒选自（包括但不限于）：小儿麻痹病毒、柯萨奇A病毒、柯萨奇B病毒、伊科病毒等；优选为柯萨奇B病毒。

在本发明中，所述裸花紫珠颗粒可以通过商业渠道获得，也可以自行制备。其制备方法为：

1）取裸花紫珠，加水煎煮两次，每次加10倍量水，第一次2小时，第2次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.30～1.35（80℃）的稠膏，干燥成干浸膏，

2）取裸花紫珠干浸膏，加蔗糖粉适量，混匀，用60％乙醇制成颗粒，干燥，制成。

在本发明中，所述的抗肠病毒方面，其不仅是指裸花紫珠颗粒可以治疗受肠病毒感染的个体，并且裸花紫珠颗粒也可以预防和减轻肠病毒对机体的感染；尤其是降低机体对肠病毒的易感性。

本发明通过研究发现，裸花紫珠颗粒在体外实验中具有明显的抗病毒作用，并且在体内实验中裸花紫珠颗粒可以降低小鼠对病毒的感染、缩短小鼠的发病时间并且极大的提高了小鼠生存率。

具体实施方式

下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。

在本发明实施例中，所使用的裸花紫珠颗粒均购自江西普正药业有限公司，每袋重量3g，含裸花紫珠提取物0.8g.

实施例1裸花紫珠颗粒体外抗病毒实验

Hep-2细胞株冻存管从液氮罐取出，立即投入37℃~42℃温水中融化（遵循慢冻速溶原则），超净工作台内将冻存管中液体移入离心管中，1000r/min，5min，弃冻存液，加入8ml浓度10%的1640细胞培养液轻轻将下层沉淀细胞吹打混匀，用移液管转移到培养瓶内，在37℃、5%CO₂恒温培养箱中培养。待细胞长成单层后进行传代。

将COXB₁病毒接种于己经长成单层的Hep-2细胞上，加1640维持液8ml置37℃、5%CO₂病毒培养箱中培养，并设细胞对照，逐日观察。待细胞出现80%以上的病变时，反复冻融3次，用吸管轻轻吹打，1000r/min，5min，取上清液定量分装于小青瓶中，胶布封口，放于－80℃冰箱冻存备用。

病毒毒力的测定： 将病毒用1640维持液做10倍比系列稀释不同浓度，纵向重复4孔，依次接种于己长成单层的Hep-2细胞的96孔板中，同时设细胞对照。37℃、5%CO₂病毒培养箱中培养，倒置显微镜下逐日观察，连续观察5d，将板孔内液体吸弃，加1%中性红μl50μl，37℃、5%CO₂培养箱中1小时，弃染液，用洗液将多余染料充分洗漆，加脱色液μl100μl，室温脱色l0min，用酶标仪在540mn波长测定OD值。根据Reed-Muench公式计算病毒液的半数感染浓度TCID₅₀。

细胞存活率=各组OD值/正常细胞OD值×100%

细胞病变率=1－细胞存活率

细胞比距=(高于50%病变率－50%)/(高于50%病变率－低于50%病变率)×100%

TCID₅₀=Antilog(Iog高于50%CPE百分率病毒稀释度+比距×稀释因子对数)

结果表明：RSV病毒TCID₅₀为10^-3.51；因此将病毒原液稀释1000倍用于实验。

药物对细胞毒性测定： 将待测药物用1640维持液按二倍比稀释7个浓度梯度，依次接种于己经长成单层的Hep-2细胞的96孔板中，并设4个复孔及细胞对照孔；37℃、5%CO₂

培养箱中培养，逐日观察细胞病变，连续观察3d，计算药物的最大无毒浓度。细胞出现病变者判为药物毒性，中性红染色，用酶标仪在540nm波长测定OD值，应用Reed-Muench公式计算药物半数中毒浓度(TC₅₀)，并确定最小无毒浓度(TC₀)。

TC₅₀=[Antilog(log高于50%CPE百分率病毒稀释度+比距)]×C

抗病毒实验： 待测药物从无毒浓度起用RPMI1640二倍比系列稀释7个浓度，每孔50μl接种于已长成单层Hep-2细胞的96板孔中，每孔再加入50μlCOXB1病毒液，同时设利巴韦林阳性对照组、板蓝根颗粒对照组、病毒对照组及空白细胞对照组，每组4个复孔；病毒对照组和空白细胞组加入等量的空白培养基。5%CO₂培养箱中培养，观察细胞病变，待病毒对照出现90%以上的病变时，1%中性红染色，并用酶标仪在540nm波长测定OD值。应用Reed-Muench方法计算药物半数有效浓度(EC50)和治疗指数(TI)。

EC50=[Antilog(log高于50%CPE百分率病毒稀释度的值-比距)]×C

TI=半数毒性浓度(TC50)/半数有效浓度(EC50)

具体结果如下：

病毒感染24小时后病毒组开始出现病变，药物组也开始显现病变，细胞在无毒浓度范围内随着药物浓度的降低，COXB₁感染细胞表现明显，脱落或细胞间融合，变圆、肿胀、破碎，48小时病毒对照组90%病变，药物组几个浓度梯度孔被完全保护；各组药物的治疗指数如下：

还需要指出的是，本实施例对裸花紫珠颗粒的抑制柯萨奇病毒B2、3和5的活性作用进行了研究，结果表明裸花紫珠颗粒对COXB2、3和5的TI值均大于32。

实施例2

取BALB/C小鼠，随机分组，分为正常对照组、模型组和给药组，以4倍TCID₅₀病毒量（COXB1）对大鼠进行腹腔注射，正常组给予等量生理盐水，1小时后立即灌胃给药裸花紫珠颗粒或板蓝根颗粒100mg/kg，模型组和正常组给予等量生理盐水；连续给药14天，14天后处死存活小鼠，眼眶取血测定LDH、SOD和MDA。

具体结果如下：

裸花紫珠颗粒对COXB1病毒感染小鼠存活率的影响

血清学指标：

实施例3

于医院门诊收集柯萨奇B病毒阳性心肌炎患者90例，ELISA检测柯萨奇B病毒阳性，其中男性47例，女性43例，平均年龄32岁左右，心功能II级76例，心功能III级14例；随机分为治疗组和对照组，治疗组给予裸花紫珠颗粒，每次1袋（每袋含裸花紫珠提取物0.8g）；每日3次，对照组给予病毒唑口服，0.1g/次，每日4次，两组病例若出现心律失常情况给予抗心律失常药物予以治疗，主要有普罗帕酮，异搏定等，30天为一个疗程并观察患者症状改善情况。

疗效标准：

显效：症状与体征完全消失，心电图恢复正常，心肌酶谱正常。

有效：症状与体征改善，心电图及心肌酶谱好转。

无效：症状与体征无明显改善。

具体结果如下：

本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims (4)

1.裸花紫珠颗粒在制备抗肠病毒方面药物的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠病毒选自（包括但不限于）：小儿麻痹病毒、柯萨奇A病毒、柯萨奇B病毒、伊科病毒等。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肠病毒选自柯萨奇B病毒。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，裸花紫珠颗粒可以治疗受肠病毒感染的个体，并且裸花紫珠颗粒也可以预防和减轻肠病毒对机体的感染；尤其是降低机体对肠病毒的易感性。