CN108403725A - 用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用 - Google Patents

用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108403725A
CN108403725A CN201810494610.XA CN201810494610A CN108403725A CN 108403725 A CN108403725 A CN 108403725A CN 201810494610 A CN201810494610 A CN 201810494610A CN 108403725 A CN108403725 A CN 108403725A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactobacillus
composition
ulcer
bacterium
compositions
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810494610.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108403725B (zh
Inventor
党福军
林海鸣
周军
黄隽
徐晴雨
常宗明
李娜
郑晓鹤
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Taizhou Maikang Biotechnology Co ltd
Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Taizhou Maikang Biotechnology Co ltd, Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Taizhou Maikang Biotechnology Co ltd
Priority to CN201810494610.XA priority Critical patent/CN108403725B/zh
Publication of CN108403725A publication Critical patent/CN108403725A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108403725B publication Critical patent/CN108403725B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/169—Plantarum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/173—Reuteri
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/175—Rhamnosus

Abstract

本发明属于医药健康领域，提供一种含有活体微生物的组合物及其制备方法和应用。所述组合物的有效成分为乳杆菌，所述乳杆菌为植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01和罗伊氏乳杆菌HCL04中的一种或两种或者三种菌。该组合物可显著增加黏膜屏障，抑制致病菌入侵，加强黏膜修复，起到抗炎及抗氧化作用，可用于消化道溃疡特别是胃溃疡疾病的预防、缓解和治疗。

Description

用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用
技术领域
本发明属于医药健康领域，涉及一种预防、缓解和治疗消化道溃疡特别是胃溃疡的活体微生物组合物。
背景技术
胃溃疡是一种常见的慢性消化道疾病，临床症状主要有腹部疼痛或不适、腹胀、反酸、恶心、呕吐等。幽门螺杆菌感染、非甾体类抗炎药的使用以及其他因素如胃酸胃蛋白酶分泌失衡、压力刺激、酒精等都可能造成胃黏膜屏障缺失，进而引起胃溃疡(Tarnawski A,Ahluwalia A and Jones MK.Gastric cytoprotection beyond prostaglandins:Cellular and molecular mechanisms of gastroprotective and ulcer healingactions of antacids.Curr Pharm Des,2013,19:126-132.)，患者如不及时治疗，可出现更加严重的并发症如呕血、便血、胃穿孔，甚至会诱发癌变。在胃溃疡治疗上，主要手段是控制胃酸分泌和根除幽门螺杆菌，同时开发出多种相关的广谱胃溃疡治疗药物如质子泵抑制剂、解酸剂、抗胆碱能药物和组胺受体拮抗剂等(P.Malfertheiner,F.K.L.Chan,andK.E.L.McColl.Pepti culcer disease.The Lancet,2009,374(9699):1449–1461.)。目前的治疗药物疗效不尽相同，易复发，患者需要长期服药，药物副作用明显，治疗费用昂贵，所以研发人员还在不断寻找更加安全、有效、低廉的预防和治疗慢性消化道溃疡的方法。
益生菌作为一种活体微生物在适当剂量下对宿主具有多种有益作用。多项体内外动物实验和临床实验显示益生菌对胃溃疡具有潜在的预防和治疗作用(Khoder G,Al-Menhali AA,Al-Yassir F,et al.Potential role of probiotics in the managementof gastric ulcer(Review)[J].Experiment Therapeutic Med,2016,12(1):3-17.)，其可能的作用机制主要有加强胃粘膜屏障保护，调节相关因子的表达如前列腺素、粘液、生长因子和抗炎症因子等，提高细胞增殖/凋亡率，抗氧化作用以及幽门螺杆菌清除等。由于哺乳动物胃液均为强酸性，常规益生菌经过胃部时多数难以定值和存活较长时间，所以疗效也不是那么显著；故本发明以耐酸性和菌群多样性为突破点，从醋发酵液和健康儿童肠道中筛选获得三株具有良好特性的潜在益生菌，三株菌组合起来服用显示出更加显著的胃溃疡修复能力，该组合物可作为预防、缓解和治疗消化道溃疡等相关疾病的有效药物。
发明内容
本申请发明人在研究乳杆菌在消化道溃疡治疗中的作用时，分离鉴定出三株乳杆菌(植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01、罗伊氏乳杆菌HCL04)，发现由上述三株乳杆菌作为有效成分的组合物对急性和慢性消化道溃疡(特别是胃溃疡)具有显著的缓解和治疗作用。基于此，本发明提供一种组合物，用于预防、缓解和治疗消化道溃疡。
在第一个方面，本发明提供一种组合物，其有效成分为乳杆菌，所述乳杆菌为植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01和罗伊氏乳杆菌HCL04中的一种或两种或者三种菌，优选三种菌，所述植物乳杆菌HPL03的保藏编号为CGMCC NO.15143，所述鼠李糖乳杆菌HCL01的保藏编号为CGMCC NO.15144，所述罗伊氏乳杆菌HCL04的保藏编号为CGMCC NO.15145。
本发明所述植物乳杆菌HPL03的微生物菌种于2018年1月2日保藏在于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC NO.15143，其分类命名：植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，并登记入册，证明存活。
本发明所述鼠李糖乳杆菌HCL01的微生物菌种于2018年1月2日保藏在于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC NO.15144，其分类命名：鼠李糖乳杆菌Lactobacillusrhamnosus，并登记入册，证明存活。
本发明所述罗伊氏乳杆菌HCL04的微生物菌种于2018年1月2日保藏在于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC NO.15145，其分类命名：罗伊氏乳杆菌Lactobacillusreuteri，并登记入册，证明存活。
在优选的实施方案中，所述乳杆菌含量为104-1014CFU/g组合物，优选106-1012CFU/g组合物，更优选1010-1012CFU/g组合物。
在优选的实施方案中，所述植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01与罗伊氏乳杆菌HCL04以任意比例混合。
在优选地实施方案中，所述植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01与罗伊氏乳杆菌HCL04以1︰1︰1混合。
在优选的实施方案中，所述组合物是一种制剂。
优选地，所述制剂的剂型为：片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂或液体制剂等。
优选地，所述组合物中还含有制药学上可接受的辅料，所述辅料包括赋形剂如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素，填料如异麦芽酮糖醇、木糖醇、甘露醇、脱脂奶粉等，调味剂如水果蔬菜粉、薄荷、各种香料、各种甜味剂等，润滑剂如二氧化硅、硬脂酸镁等，氢化植物油、聚乙二醇等。
优选地，所述组合物为食品、药品或保健品。
第二个方面，提供本发明的组合物的制备方法，包括下述步骤：
(1)冻干菌粉的制备：将所述乳杆菌的各菌种经培养，发酵，收集菌体，加入冻干保护剂冻干后得冻干菌粉；
(2)任选地，用包埋剂包埋冻干菌粉制得包埋菌粉；优选地，所述包埋剂为氢化棕榈油；
(3)任选地，将包埋菌粉或冻干菌粉以及辅料按照预设比例混合，并制成预设的剂型。
第三个方面，提供本发明的组合物在制备用于消化道溃疡疾病的预防、缓解和治疗的药物、食品或保健品中的应用，所述消化道溃疡疾病优选口腔溃疡、胃溃疡、肠道溃疡，更优选胃溃疡，所述胃溃疡包括急性胃溃疡和慢性胃溃疡。
本发明制备的组合物的有益效果在于：
(1)本发明组合物中的每一种菌均具有较强的耐酸性，可在胃部长时间存活和定值，加强了对消化道溃疡的治疗作用。
(2)本发明组合物可更好的应用于不同原因导致的消化道溃疡的治疗中。
(3)本发明可以是本领域任何可接受的剂型，如粉剂、片剂、胶囊剂等，方便、易携带，且安全，保存期长，具有广阔的市场前景。
(4)本发明制备方法操作简单，易于工业化生产。
具体实施方式
如没有特别说明，本申请中使用的试剂及仪器皆为普通市售品，可以通过商购途径购得；本申请中使用的方法均为常规方法，本领域技术人员根据说明书所记载的内容，可以毫无疑问地实施该方法并获得相应的结果。其中，
厌氧工作站：英国ELECTROTEK厌氧/微需氧工作站AW300SG；
PBS缓冲液(货号：B640435-0050)购自生工上海有限公司；
Rogosa Agar(固体培养基)，Oxoid；
MRS Broth(液体培养基)，Oxoid；
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(ml643059)、MDA测试盒(ml022446)均购自上海酶联生物科技有限公司；
IL-1β试剂盒购自R&D Systems公司；
BALB/c小鼠，雄性，SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2012-0001；
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1乳杆菌描述
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HPL03，保藏号：CGMCC NO.15143，是从生产醋的发酵液中经过特殊培养基分离、纯化、菌株鉴定后获得；鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)HCL01(保藏号：CGMCC NO.15144)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)HCL04(保藏号：CGMCC NO.15145)，均是从健康的儿童粪便中经过特殊培养基分离、纯化、菌株鉴定后获得。
本发明所述三株菌均具有如下特性：
1)在人工胃液(pH2.0)条件下，2h后菌株具有至少96％以上存活率；
2)在人工肠液(0.5％-1.0％胆酸钠)条件下，1h后菌株具有至少85％以上存活率；
3)MRS broth过夜培养的发酵菌液具有显著的抑菌(金黄色葡萄球菌)活性；
实施例2菌株相关特性分析
(1)耐酸耐胆盐测定
耐酸性测定：待测乳杆菌单菌落接种于MRS Broth液体培养基中，37℃厌氧培养约20h，分别取菌悬液1ml离心，弃上清，用PBS缓冲液洗涤两次后向离心管中加入1ml人工胃液(配制方法：：8.3g/L蛋白胨(oxoid)、3.5g/L葡萄糖、2.05g/L NaCl、0.6g/L KH2PO4、0.11g/LCaCl2、0.37g/L KCl，其余为水，HCl调至pH为2.0)，37℃水浴培养2h，每隔30min摇匀一次，于0h和2h分别取样用平板菌落计数法进行活菌计数，以0h样品为对照，计算2h样品菌体的存活率，存活率＝(2h时的活菌数/0h时的活菌数)×100％。
耐胆盐测定：待测乳杆菌单菌落接种于MRS Broth液体培养基中，37℃厌氧培养约20h，分别取菌悬液1ml离心，弃上清，用PBS缓冲液洗涤两次后向离心管中加入1ml人工肠液(配制方法：取KH2PO46.8g，加蒸馏水500ml溶解，用0.4％(w/v，g/ml)的NaOH溶液调节pH值至6.8，加水至1000ml，每100ml溶液中加0.5g胆酸钠充分溶解后，于115℃灭菌15min)，37℃水浴培养1h，每隔30min摇匀一次，于0h、1h分别取样用平板菌落计数法进行活菌计数，以0h样品为对照，计算1h样品菌体的存活率，存活率＝(1h时的活菌数/0h时的活菌数)×100％。
具体结果见表1，三株菌均具有良好的耐酸耐胆盐能力，可在胃肠道中生存较长时间。
表1：菌株耐胃酸、耐胆盐性能检测结果
(2)耐药性测定
利用琼脂稀释法(具体请参考董银苹,崔生辉,李凤琴,于红霞.北京市售酸奶中益生菌的分离鉴定及耐药性检测[J].卫生研究,2010,39(05):552-555.)将不同剂量的抗生素分别加于融化并冷至45℃的定量Rogasa琼脂培养基中，混匀，倾注成无菌平板，即为含有固定浓度梯度的培养基，分别接种植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01和罗伊氏乳杆菌HCL04于该培养基上，37℃厌氧培养48h后观察菌株生长情况，获得最小抑菌浓度，以此判定菌株对特定抗生素的敏感性。
结果显示(见表2)三株菌对不同类型抗生素具有不同程度的耐药性，为三株菌的安全性评价和耐药性监测提供参考依据。
表2：三株菌对常见抗生素药物的敏感性评价
素注：敏感：记为(S)，中敏：记为(I)，耐药：记为(R)
(3)抗菌测定
利用打孔法测定三株菌的抑菌效果，具体的将指示菌加于融化并冷至45℃的定量LB固体培养基(配制方法：在950ml ddH2O中加入胰蛋白胨10g；酵母提取物5g；NaCl 10g，用1M的NaOH调节pH值到7.0，定容至1L，然后加入15g琼脂粉，121℃，20min高压灭菌，待冷却至50-60℃时，倒制平板)中，待凝固后用已灭菌的打孔器或钢管在平板上打孔，取50μL 37℃厌氧过夜培养的植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01和罗伊氏乳杆菌HCL04发酵液注入孔中，37℃有氧培养18h后测定抑菌圈大小。
结果显示(见表3)，本发明所提供的组合物中三株菌对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用。
表3：菌株对致病菌的抑制作用
实施例3组合物冻干菌粉制备
将植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01、罗伊氏乳杆菌HCL04的-80℃冻存甘油管菌株分别活化到Rogosa固体培养基上，37℃厌氧培养40h；分别挑取单菌落转接到含有5ml液体培养基(MRS Broth)的试管中，37℃厌氧培养24h；按1％(体积比)接种量转接到含有200ml液体培养基(MRS Broth)的三角摇瓶中，37℃厌氧静止培养约18h；收集发酵液，4℃4000rpm离心10min，弃上清，用PBS缓冲液洗涤两遍，最后用一定量的PBS缓冲液悬浮菌体，三种菌的菌浓度分别控制在108～1010CFU/ml(以OD600进行细胞计数，OD600＝1.00＝5.0×108细胞/mL)，混合后加入等体积的冻干保护剂液体溶液(8％脱脂奶粉、3％乳糖、1％麦芽糊精、0.5％谷氨酸钠、0.5％抗坏血酸，其余为水，其中各物质含量为质量体积比，即，100ml液体中含有8g脱脂奶粉，其它物质相同表示)悬浮菌体，充分混匀，室温静置30min，放入-80℃冷冻4h，迅速转移至真空冷冻干燥机内，进行抽真空冷冻干燥40h，获得冻干菌粉SH008(用平板菌落计数法进行活菌计数，活菌数达1012CFU/g菌粉)，迅速转移至铝箔袋中抽真空密封，4℃保存备用。
实施例4组合物对急性胃溃疡的预防作用
(1)实验动物：BALB/c小鼠，雄性，6～8周龄，体重(20.0±2.0)g，SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2012-0001；
(2)动物分组及给药：动物饲养于明暗交替(10h:14h)清洁级动物房中(海正药业股份有限公司动物中心)，温度24±2℃；湿度50±10％，自由摄食饮水。适应性饲养一周后随机分为空白组、模型组、受试组,每组10只；空白组、模型组给小鼠灌胃以双蒸水；受试组给小鼠灌胃以受试物SH008液体溶液(SH008液体溶液制备方法为：取0.5g实施例3制备的冻干菌粉SH008，用100ml无菌双蒸水充分溶解，使制得的SH008液体溶液浓度为5mg/ml)，灌胃体积均为0.5ml，连续灌胃2周。
(3)建模：各组灌胃14天后，全部动物严格禁食24小时(不禁水)，此期间亦禁止给予受试物。空白组灌胃以水0.18ml/只，模型组、受试组灌胃以无水乙醇0.18ml/只。
(4)测定：造模后1小时处死动物，取出整个胃，沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，展开胃粘膜，于10％(单位为g/ml)福尔马林中浸泡1小时。在体视解剖显微镜下或肉眼下用游标卡尺测量出血点或出血带的长度和宽度。评分标准见表4。因宽度所代表损伤的严重性远较长度大，故双倍积分。各试验组胃粘膜损伤程度用损伤积分指数和损伤抑制率表示。损伤积分指数＝每组损伤积分总和/每组动物数量；损伤抑制率(％)＝(A-B)/A×100％(A、B分别为模型组与受试组的损伤积分)。
表4：急性酒精损伤肉眼观查评分标准
(5)实验结果及分析：在一定时间内给予一定量无水乙醇，造成小鼠胃壁内侧黏膜出现明显的黏膜下层水肿、溃疡、坏死，及明显的线性和条索状出血性溃疡，可作为小鼠急性胃溃疡模型。通过比较模型组和受试组小鼠胃损伤程度以及测定其胃损伤抑制率来判定冻干菌粉SH008是否有保护胃黏膜功效。实验结果显示，给予模型组和受试组0.18ml/只的无水乙醇1小时后，每只小鼠的胃均出现不同程度的出血状况，模型组出血状况最为严重。与模型组比较，受试组损伤指数小于模型组，且对小鼠胃损伤的保护作用达到显著水平P<0.05，损伤抑制率为33.89％(表5)。说明冻干菌粉SH008对小鼠急性胃溃疡有明显的预防和缓解作用。
表5：冻干菌粉SH008对小鼠急性胃溃疡的影响
组别 n 损伤积分总和 损伤积分指数 损伤抑制率(％)
模型组 10 29.80±1.44 2.98±1.44 ---
受试组 10 19.70±3.84* 1.97±3.84* 33.89
注：*P<0.05，与模型组比较；
实施例5组合物对慢性胃溃疡的治疗作用
(1)实验动物：SD大鼠，雄性，6～8周龄，体重180-200g，SPF级，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(京)2016-0011；
(2)动物建模：动物饲养于明暗交替(10h:14h)清洁级动物房中(海正药业股份有限公司动物中心)，温度24±2℃；湿度50±10％，自由摄食饮水。适应性饲养一周后进行造模手术。手术前禁食不禁水24h，除任选10只作为空白组外，其余各组大鼠以4ml/kg标准腹腔注射10％(质量体积比，g/ml)水合氯醛麻醉。常规消毒，自剑突下沿腹正中线切开约2cm，自肝后找到胃部，将胃移出腹腔，用直径为6mm的圆滤纸片浸适量(所有滤纸片浸泡时间尽量保持在2s左右，以保证相同的吸附量)的冰乙酸后，在胃窦部浆膜层贴敷30s×3次送还胃部进腹腔，用生理盐水擦洗多余的乙酸，按顺序缝合腹膜、肌层和皮肤，完成大鼠慢性胃溃疡模型造模。术后用青霉素肌肉注射进行常规抗菌，10万单位(U)/小鼠(只)/天，连续注射两天。
(3)动物分组及给药：造模2天后，除空白组外，将动物随机分为模型组、受试组每组10只；空白组、模型组给小鼠灌胃以双蒸水；受试组给小鼠灌胃以SH008液体溶液(SH008液体溶液制备方法为：取0.5g实施例3制备的冻干菌粉SH008，使制得的SH008液体溶液浓度为5mg/ml)，灌胃体积均为1.5ml，连续灌胃1周。
(4)测定：小鼠给药7天后，禁食不禁水12h，腹部静脉麻醉后处死。将剑突至肛门之间的腹前壁沿腹部正中线切开，取出胃部。用游标卡尺测量并计算溃疡面积，以胃溃疡的最大直径为溃疡长度d1，以与直径垂直的最宽距离为宽度d2。根据公式S＝π·(d1/2)·(d2/2)计算溃疡面积。用微量注射器的双蒸水体积来测定大鼠胃溃疡体积。
(5)结果分析：实验结果显示模型组溃疡病灶出现大量白细胞浸润，中间凹陷，周围充血水肿，溃疡病灶明显。受试组大鼠溃疡面积和溃疡体积显著缩小，愈合明显，与模型组比较有显著差异P<0.01(表6)。说明冻干菌粉SH008受试组对慢性胃溃疡具有治疗作用。
表6：冻干菌粉SH008对小鼠慢性胃溃疡的影响
注：**P<0.01，与模型组比较；
实施例6组合物对慢性胃溃疡组织中SOD、MDA和IL-1β的影响
分别称取实施例5所述的空白组、模型组、受试组的小鼠胃部组织0.6g，并加入5.4ml预冷的生理盐水，进行组织匀浆。1000×g离心10min，取上清液。根据小鼠超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(ml643059)、MDA测试盒(ml022446)、IL-1β试剂盒说明书分别检测各组胃组织中SOD、MDA、IL-1β的含量。
结果显示按照实施例5所述的纸片粘附法致大鼠慢性胃溃疡，可使大鼠的MDA(#P<0.05)、IL-1β(###P<0.001)显著升高，SOD(#P<0.05)明显降低。与模型组相比，受试组大鼠的MDA、IL-1β含量明显减少，但SOD含量没有明显变化。实验结果进一步说明该冻干菌粉SH008可能通过降低MDA、IL-1β含量来降低大鼠的炎症反应，进而加速溃疡愈合。
表7：SH008对大鼠慢性胃溃疡的影响
注：#P<0.05，###P<0.001，与空白组比较；*P<0.05，与模型组比较
实施例7：制剂产品的制备
基于实施例4-6综合结果，组合物对胃溃疡有显著的功效，将SH008即三株特异性乳杆菌组合起来作为必须的有效成分开发成一类微生态制剂。乳杆菌在体内体外的存活率直接影响着该制剂的功效，故该微生态制剂优选的通过以下步骤制备成易保存易携带易服用的粉剂，具体制备过程如下：
(1)冻干菌粉制备：按照实施例3的方法获得冻干菌粉(活菌数为1010～1014CFU/g)。
(2)菌粉包埋：将氢化棕榈油加热融化，置于自动搅拌机内，待温度降到55℃左右时，按氢化棕榈油:冻干菌粉重量比例1:1缓慢加入菌粉，同时快速搅拌粉碎，包埋后的菌粉过40目筛，获得颗粒均一的可压片的包埋菌粉，迅速转移至铝箔袋中抽真空密封，4℃保存备用。经检测，每克包埋菌粉中，活菌数为109-1013CFU/g。
(3)原料混合：将不同原料按以下质量比例混合，包埋菌粉0.1％-20％，优选的为1％-10％，更加优选的为4％-6％，润滑剂(二氧化硅、硬脂酸镁等，氢化植物油或聚乙二醇)0.1％-1％，其他辅料(如赋形剂(淀粉、糊精、乳糖或微晶纤维素)、调味剂(水果蔬菜粉、薄荷各种香料或各种甜味剂)0.1％-5％，填料(异麦芽酮糖醇、木糖醇、脱脂奶粉或甘露醇)10％-80％，优选的40％-60％，使总量为100％，充分搅拌混匀待用。为保证原料的均一性，所有原料混合之前均过80目筛。应当理解的是赋形剂、填料、调味剂、包囊剂、润滑剂以及粉剂产品的其它组分是本领域公知的，可以使用且不影响该产品功效。混合的原料中，活菌数的含量为108-1012CFU/g。
(4)包装：将混合均匀的粉末在干燥低温情况下，抽真空包装在铝箔袋中，4℃保存待重新分装。
综上，我们通过上述实施例对组合物SH008进行综合评价，SH008显示出较好的对胃黏膜的保护作用，显著降低了乙醇对胃黏膜的腐蚀和损伤，对胃溃疡有预防作用；同时SH008显著缩小慢性胃溃疡的溃疡面积和溃疡体积，对慢性胃溃疡具有治疗作用。上述两种动物模型与人类的胃溃疡发生机制、组织学特点、愈合和复发过程等极为相似，故SH008在哺乳动物急性、慢性胃溃疡疾病方面具有潜在的预防、缓解和治疗作用。组合物SH008可以通过多种方式摄入，例如可以作为食品补充剂、保健品有效组份、益生菌固体饮料、动物饲料添加剂或者辅助治疗药物等方式来发挥其预防、缓解和治疗胃溃疡的功效。
尽管某些代表性实施方案已列于此，但本领域技术人员如进行不背离本发明精神或范围的修改，均落入本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种组合物，其特征在于，其有效成分为乳杆菌，所述乳杆菌为植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01和罗伊氏乳杆菌HCL04中的一种或两种或者三种菌，优选三种菌，所述植物乳杆菌HPL03的保藏编号为CGMCC NO.15143，所述鼠李糖乳杆菌HCL01的保藏编号为CGMCC NO.15144，所述罗伊氏乳杆菌HCL04的保藏编号为CGMCC NO.15145。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述乳杆菌含量为104-1014CFU/g组合物，优选106-1012CFU/g组合物，更优选1010-1012CFU/g组合物。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述植物乳杆菌HPL03、鼠李糖乳杆菌HCL01与罗伊氏乳杆菌HCL04以任意比例混合，优选三种菌以1︰1︰1混合。
4.根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其中，所述组合物是一种制剂；优选地，所述制剂的剂型为片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂或液体制剂。
5.根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其中，所述组合物还含有制药学上可接受的辅料；优选地，所述辅料包括赋形剂、填料、调味剂、润滑剂。
6.根据权利要求1-5任一项所述的组合物，其特征在于，所述赋形剂包括淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素，所述填料包括异麦芽酮糖醇、木糖醇、甘露醇、脱脂奶粉，所述调味剂包括水果蔬菜粉、薄荷、各种香料、各种甜味剂，所述润滑剂包括二氧化硅、硬脂酸镁，氢化植物油、聚乙二醇。
7.根据权利要求1-6任一项所述的组合物，其中，所述组合物为食品、药品或保健品。
8.制备权利要求1-7任一项所述组合物的方法，包括下述步骤：
(1)冻干菌粉的制备：将所述乳杆菌的各菌种经培养，发酵，收集菌体，加入冻干保护剂冻干后得冻干菌粉；
(2)任选地，用包埋剂包埋冻干菌粉制得包埋菌粉；优选地，所述包埋剂为氢化棕榈油；
(3)任选地，将包埋菌粉或冻干菌粉以及辅料按照预设比例混合，并制成预设的剂型。
9.根据权利要求1-7任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物在制备用于消化道溃疡疾病的预防、缓解和治疗的药物、食品或保健品中的应用，所述消化道溃疡疾病优选口腔溃疡、胃溃疡、肠道溃疡，更优选胃溃疡，所述胃溃疡包括急性胃溃疡和慢性胃溃疡。
CN201810494610.XA 2018-05-22 2018-05-22 用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用 Active CN108403725B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810494610.XA CN108403725B (zh) 2018-05-22 2018-05-22 用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810494610.XA CN108403725B (zh) 2018-05-22 2018-05-22 用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108403725A true CN108403725A (zh) 2018-08-17
CN108403725B CN108403725B (zh) 2021-02-09

Family

ID=63140206

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810494610.XA Active CN108403725B (zh) 2018-05-22 2018-05-22 用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108403725B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111690565A (zh) * 2020-07-02 2020-09-22 重庆第二师范学院 一种益生菌及其在胃损伤中的应用
CN113355259A (zh) * 2021-03-24 2021-09-07 孙长春 一株格氏乳杆菌及其在治疗消化性溃疡中的应用
CN116004475A (zh) * 2023-02-15 2023-04-25 生合生物科技（扬州）有限公司 一株用于预防、辅助治疗胃部虚寒的植物乳杆菌及其应用
CN117683698A (zh) * 2024-02-04 2024-03-12 山东中科嘉亿生物工程有限公司 一种植物乳杆菌jylp-376及后生元菌剂、制备方法和应用
CN116004475B (zh) * 2023-02-15 2024-05-03 生合生物科技（扬州）有限公司 一株用于预防、辅助治疗胃部虚寒的植物乳杆菌及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101384700A (zh) * 2005-12-22 2009-03-11 器官平衡有限责任公司 新的乳杆菌属菌株及其用于对抗幽门螺杆菌的用途
CN103648511A (zh) * 2011-06-08 2014-03-19 有机平衡有限公司 喷雾干燥的乳杆菌属菌株/细胞及其对抗幽门螺杆菌的用途
CN107164274A (zh) * 2017-06-15 2017-09-15 广州市微生物研究所 一种乳酸菌复合菌剂及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101384700A (zh) * 2005-12-22 2009-03-11 器官平衡有限责任公司 新的乳杆菌属菌株及其用于对抗幽门螺杆菌的用途
CN103648511A (zh) * 2011-06-08 2014-03-19 有机平衡有限公司 喷雾干燥的乳杆菌属菌株/细胞及其对抗幽门螺杆菌的用途
CN107164274A (zh) * 2017-06-15 2017-09-15 广州市微生物研究所 一种乳酸菌复合菌剂及其制备方法和应用

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111690565A (zh) * 2020-07-02 2020-09-22 重庆第二师范学院 一种益生菌及其在胃损伤中的应用
CN113355259A (zh) * 2021-03-24 2021-09-07 孙长春 一株格氏乳杆菌及其在治疗消化性溃疡中的应用
CN116004475A (zh) * 2023-02-15 2023-04-25 生合生物科技（扬州）有限公司 一株用于预防、辅助治疗胃部虚寒的植物乳杆菌及其应用
CN116004475B (zh) * 2023-02-15 2024-05-03 生合生物科技（扬州）有限公司 一株用于预防、辅助治疗胃部虚寒的植物乳杆菌及其应用
CN117683698A (zh) * 2024-02-04 2024-03-12 山东中科嘉亿生物工程有限公司 一种植物乳杆菌jylp-376及后生元菌剂、制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108403725B (zh) 2021-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH11504048A (ja) 泌尿生殖器および腸用の組成物
CN107815432B (zh) 一种人用灭活乳酸菌制剂及其用途
CN108403725A (zh) 用于治疗消化道溃疡的组合物及其应用
EP2158916A1 (en) Administration unit comprising lactic acid bacteria
CN102727531A (zh) 一种对阴道炎具有治疗和预防作用的活性乳酸菌胶囊
CN108635585A (zh) 一种治疗老年性阴道炎的药物组合物及温敏缓释凝胶剂和制备方法
US20230072816A1 (en) Method To Improve The Health Of The Microbiome In A Human Gastrointestinal System And Multi-Chamber Probiotic Delivery Products Therefor
EP3261723B1 (en) Probiotic lactobacillus plantarum strains for urinary tract infections
CN111084831A (zh) 一种抑制阴道致病菌的抑菌组合物及其应用
CN109985069B (zh) 益生菌组合物及其用途
CN103157095A (zh) 芸豆植物凝集素在制备人用药物中的应用及其药物组合物
WO2010000207A1 (zh) 一种天然蒜素片及其制备方法
CN101797269A (zh) 一种调节女性阴道微生态的生理平衡液
CN101849969A (zh) 产酪酸有益菌在制备防治重症疾病肠道屏障损伤及损伤后并发症制剂中的应用
CN116966206A (zh) 发酵乳杆菌用于制备预防和/或治疗泻剂结肠的产品的用途
CN115607577B (zh) 一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用
CN115517367B (zh) 副干酪乳杆菌smn-lbk在制备促进肠道健康产品中的应用
CN115119940A (zh) 嗜酸乳杆菌LA85和乳双歧杆菌BLa80在抑制幽门螺旋杆菌上的应用
CN109464655B (zh) 一种防治阴道炎的外用胶囊制剂
CN105749260A (zh) 一种盐酸溶菌酶阴道片及其制备方法和应用
CN102526013A (zh) 一种药物组合物及其应用
CN108815132A (zh) 一种三氧活性油软胶囊及其制备方法与应用
CN113150069B (zh) 一种透明质酸酶抑制剂及其制备方法
CN112402465B (zh) 一种植物乳杆菌n-1在制备预防和/或改善良性前列腺增生的产品及用途
CN107596075A (zh) 一种治疗宫颈炎的药物组合物配方及用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: Room 1201-1202, 293 Workers'East Road, Jiaojiang District, Taizhou City, Zhejiang Province, 318000

Applicant after: Zhejiang Maokang Biotechnology Co.,Ltd.

Applicant after: ZHEJIANG HISUN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Address before: Room 1201-1202, 293 Workers'East Road, Jiaojiang District, Taizhou City, Zhejiang Province, 318000

Applicant before: TAIZHOU MAIKANG BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd.

Applicant before: ZHEJIANG HISUN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190515

Address after: No. 46, Jiaojiang District, Taizhou, Zhejiang Province

Applicant after: ZHEJIANG HISUN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Address before: Room 1201-1202, 293 Workers'East Road, Jiaojiang District, Taizhou City, Zhejiang Province, 318000

Applicant before: Zhejiang Maokang Biotechnology Co.,Ltd.

Applicant before: ZHEJIANG HISUN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant