CN111690565A - 一种益生菌及其在胃损伤中的应用 - Google Patents

一种益生菌及其在胃损伤中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种益生菌及其在胃损伤中的应用，属于微生物技术领域，所述植物乳杆菌HFY09为乳酸菌属(lactic acid bacteria，LAB)，保藏编号为CGMCC No.16633；本发明采用盐酸/乙醇急性胃损伤模型，评价植物乳杆菌HFY09对胃损伤的预防作用；结果表明，HFY09能抑制胃液分泌，维持胃酸的正常pH值，减少胃粘膜损伤面积，能抑制胃粘膜上皮细胞凋亡，发挥生物学作用，与浓度呈正相关；HFY09可用于益生菌或功能性食品的生产，为其进一步开发利用提供了理论依据。

Description

一种益生菌及其在胃损伤中的应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种益生菌及其在胃损伤中的应用。
背景技术
胃损伤是破坏粘膜防御系统的一种传染性或化学攻击因子，会引起胃上皮损伤或溃疡。目前的研究表明，细菌、药物、吸烟和饮酒可引起胃粘膜损伤。乙醇是用于液体酒精和饮料的主要成分，因为它是脂溶性的，并产生具有强烈致癌作用的乙醛分子，从进入口腔开始，进入血液循环时继续。虽然胃粘膜可以通过乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶代谢乙醇和乙醛，但乙醛的致癌作用不容小觑。因此，酒精中毒可引起急性糜烂出血性胃炎，长期饮酒可引起胃病、慢性萎缩性胃炎、癌症、酒精性肝炎、脂肪肝、肝硬化和其他酒精性疾病。盐酸还可能引起胃粘膜损伤，乙醇可能到达粘膜并诱导血管壁细胞破裂。
益生菌和一些新的生物药物已被广泛研究作为治疗胃相关疾病的新疗法。越来越多的证据表明益生菌有利于宿主健康。大量研究证实，酵母菌和乳酸菌是胃中对人体有益的主要常驻微生物。其中，酵母菌在胃分泌区定植，而乳酸菌在非分泌区定植，这被认为是维持胃内微生态平衡的主要力量。有研究者在小鼠模型中研究了乙醇诱导的胃炎和肝损伤，发现植物乳杆菌LC27和长双歧杆菌LC67通过刺激免疫系统和成纤维细胞在修复胃炎中起着重要作用。有研究者用益生菌混合物预处理的大鼠表现出明显减少阿司匹林或乙醇引起的急性胃粘膜损伤。动物实验也证实了鲁特氏乳杆菌DSM17938能预防乙醇引起的胃损伤。
因此，开发具有防治胃损伤功能的益生菌，掌握益生菌对人体健康的影响机理，具有十分重要的经济价值和社会价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种益生菌及其在胃损伤中的应用，以解决上述现有技术存在的问题。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HFY09，所述植物乳杆菌HFY09为乳酸菌属(lactic acid bacteria，LAB)，已保藏于中国微生物菌种保藏中心管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年10月25日，保藏编号为CGMCC No.16633。
本发明还提供一种所述的植物乳杆菌HFY09在制备预防或治疗胃损伤的药物中的应用。
本发明公开了以下技术效果：
植物乳杆菌HFY09是一种从天然发酵牦牛酸奶中分离出来的乳酸杆菌。本发明采用盐酸/乙醇急性胃损伤模型，评价植物乳杆菌HFY09对胃损伤的预防作用。结果表明，HFY09能抑制胃液分泌，维持胃酸的正常pH值，减少胃粘膜损伤面积。与模型组相比，HFY09-H组SP、ET-1、IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平降低，SS和VIP水平升高。进一步的实验表明，HFY09增加了eNOS、nNOS、Cu/Zn SOD、Mn-SOD、EGF和EGFR的表达，降低了iNOS和COX-2在胃组织中的表达，表明HFY09能抑制胃粘膜上皮细胞凋亡，发挥生物学作用，与浓度呈正相关。结果表明，HFY09可用于益生菌或功能性食品的生产，为其进一步开发利用提供了理论依据。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实验组胃组织外观观察；
图2为小鼠胃的H&E病理观察(100×)；
图3为小鼠胃中Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和CAT的3mRNA表达水平；
图4为小鼠胃中nNOS、eNOS、iNOS和COX-2的4mRNA表达水平；
图5为小鼠胃中EGF和EGFR的5mRNA表达水平。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1
1.材料和方法
1.1实验室菌株
从天然发酵牦牛酸奶中分离出来植物乳杆菌HFY09，经16S rDNA序列鉴定为乳酸菌属lactic acid bacteria，LAB，该菌株已于2018年10月25日保藏于中国微生物菌种保藏中心管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.16633。
从牦牛酸奶样品中分离纯化出的植物乳杆菌HFY09，革兰氏染色均呈现阳性；菌落颜色多为白色或乳白色，形状为圆形，边缘整齐，表面湿润光滑，在100倍油镜下，细胞形态有长杆、短杆、球状，且不存在出芽生殖。
本发明的菌株HFY09的16S rDNA碱基序列，如SEQ ID No.1所示；将测序结果于NCBI网站进行序列比对(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)。同Lactobacillusplantarum，MN368282.1,同源性100％。
德氏乳杆菌保加利亚亚种(LB；CGMCC No.1.16075)作为HFY09的对照菌株。
1.2小鼠胃损伤模型
将60只昆明小鼠(6周龄，雄性)随机分为6组(n＝10)：正常组、模型组、雷尼替丁灌胃组(50mg/kg)、德氏乳杆菌保加利亚亚种LB灌胃组(1.0×109CFU/kg)、植物乳杆菌HFY09低剂量灌胃组HFY09-L(1.0×108CFU/kg)和高剂量灌胃组HFY09-H(1.0×109)。前14天，正常组和模型组给予自由饮食和饮水，雷尼替丁组给予雷尼替丁溶液，植物乳杆菌HFY09组给予低剂量和高剂量细菌悬液，LB组给予LB悬液。
第15天后，将小鼠禁食24小时，然后通过灌胃用诱导溶液盐酸/乙醇溶液(60％乙醇和40％150毫摩尔/升盐酸混合物)处理。诱导剂量为10毫升/千克。除正常组外，其他各组给予相同剂量的盐酸/乙醇溶液，正常组给予相同体积的生理盐水。半小时后，收集小鼠的血液，并在4℃环境下4000转/分钟离心10分钟。测定胃液分泌量和胃液酸碱度。用ImageJ软件分析胃损伤面积，计算胃损伤抑制率：胃损伤抑制率(％)＝胃损伤面积/胃组织面积×100。具体给药方法和剂量见表1。
表1动物实验组
Figure BDA0002567573590000051
Figure BDA0002567573590000061
1.3小鼠血清ET-1、SP、SS和VIP水平测定
从小鼠体内收集血清，保存于-80℃，根据试剂盒说明书(上海酶联生物技术有限公司)测定血清内皮素-1(ET-1)、P物质(SP)、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)水平。
1.4小鼠细胞因子IL-6、IL-12、TNF和IFN-γ水平测定
根据相应的试剂盒说明书(上海酶联生物技术有限公司)测定血清中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)，白细胞介素-12(IL-12)，肿瘤坏死因子-α，干扰素-γ(IFN-γ)水平。
1.5小鼠胃组织病理观察
取小鼠三分之一的胃组织，置于10％福尔马林中性固定液中48小时进行组织病理学分析。苏木精-伊红(H E)染色后，观察组织病理学形态。
1.6 RNA表达测定(Q-PCR法)
实时荧光定量PCR(Q-PCR)是在DNA扩增反应中，用荧光化学品检测每个PCR周期后产物总量的方法。目的基因和管家基因均通过荧光定量PCR反应得到周期阈值(CT)，通过相对比较和定量的方法(2-ΔΔCt法)计算样品中mRNA的相对表达量。采用Q-PCR检测不同组织RNA组的抗氧化酶(铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、炎症调节因子(内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2))、表皮生长因子(EGF)和受体(eGFR)的相对表达量。相应的基因引物序列如表2所示。
表2用于Q-PCR检测的引物序列
Figure BDA0002567573590000071
1.7统计分析
数据表示为平均标准偏差。通过单因素分析评价各组平均值之间的差异。通过邓肯多极差检验的方差分析(ANOVA)表示差异显著(P<0.05)。所有数字均使用Origin8.0软件绘制。
2.结果
2.1胃黏膜损伤的测定
如图1和表3所示，与正常组相比，模型组胃粘膜表现出明显的出血和糜烂，胃粘膜损伤面积最大。用HFY09、雷尼替丁和LB治疗后，损伤面积明显减少(P<0.05)，且雷尼替丁对损伤部位的抑制率最高。而HFY09-H抑制率在雷尼替丁和HFY09-L之间，显著高于LB(P<0.05)。因此，HFY09可以有效降低胃损伤对胃粘膜的影响。
表3胃损伤面积及胃损伤抑制率(n＝10)
Figure BDA0002567573590000081
给出的值是标准差。在同一栏中，根据邓肯多重范围试验，不同字母的数值有显著差异(p<0.05)。
正常＝正常小鼠；模型＝用盐酸/乙醇(10毫升/千克)处理的小鼠；雷尼替丁＝50毫克/千克/天，通过灌胃；HFY09＝用盐酸/乙醇处理的小鼠(第15天)和植物乳杆菌HFY09的剂量(L，H)(108，109CFU/千克/天)；LB＝用盐酸/乙醇(第15天)和德氏乳杆菌亚种处理的小鼠；保加利亚乳杆菌(每天109CFU/千克)。
2.2小鼠胃液体积和pH的测定
各组胃液体积及pH值见表4。正常组胃液量最少，胃液pH值最高，但模型组胃液量最高，胃液pH值最低。而HFY09-H组和雷尼替丁组可有效改善HCl/乙醇引起的小鼠胃液体积和pH的不利变化，表现为胃液pH增加，胃液体积减少。
表4实验小鼠胃液体积和pH(n＝10)
Figure BDA0002567573590000091
给出的值是标准差。在同一栏中，根据邓肯多重范围试验，不同字母的数值有显著差异(p<0.05)。
正常＝正常小鼠；模型＝用盐酸/乙醇(10毫升/千克)处理的小鼠；雷尼替丁＝50毫克/千克/天，通过灌胃；HFY09＝用盐酸/乙醇处理的小鼠(第15天)和植物乳杆菌HFY09的剂量(L，H)(108，109CFU/千克/天)；LB＝用盐酸/乙醇(第15天)和德氏乳杆菌亚种处理的小鼠。保加利亚乳杆菌(每天109CFU/千克)。
2.3小鼠胃组织病理观察
由HCl/乙醇引起的急性胃损伤小鼠胃组织的病理切片如图2所示。正常组胃粘膜结构完整，无炎症细胞浸润；模型组胃粘膜上皮细胞大量减少，细胞间隙明显增大，胃损伤最为严重。治疗后，HFY09高剂量组和雷尼替丁组小鼠的胃粘膜与正常组相似，各层结构清晰，无明显损伤。与正常组相比，HFY09低剂量组的胃粘膜细胞仍有部分脱落，但也有改善。因此，HFY09在一定程度上对胃损伤有保护作用，在高浓度下具有更强的作用。
2.4测定小鼠血清中ET-1、SP、SS和VIP水平
正常组SS和VIP水平最高，ET-1和SP最低，如表5所示。然而，模型组胃溃疡的四个指标与正常组相反。治疗后，血清SS和VIP水平显著升高(P<0.05)，SP和ET-1水平显著降低(P<0.05)，血清中HFY09-H调节S S、SP、VIP和ET-1水平的能力略低于雷尼替丁，但效果强于LB对照组。
表5小鼠血清ET-1、SP、SS和VIP水平(n＝10)
Figure BDA0002567573590000092
Figure BDA0002567573590000101
给出的值是标准差。在同一栏中，根据邓肯多重范围试验，不同字母的数值有显著差异(p<0.05)。
正常＝正常小鼠；模型＝用盐酸/乙醇(10毫升/千克)处理的小鼠；雷尼替丁＝50毫克/千克/天，通过灌胃；HFY09＝用盐酸/乙醇处理的小鼠(第15天)和植物乳杆菌HFY09的剂量(L，H)(108，109CFU/千克/天)；LB＝用盐酸/乙醇(第15天)和德氏乳杆菌亚种处理的小鼠。保加利亚乳杆菌(每天109CFU/千克)。
2.5测定小鼠血清中IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平
健康小鼠的IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平最低。然而，HCl/乙醇诱导的胃损伤小鼠的炎症因子水平升高，治疗后降低，如表6所示。下降最大的是雷尼替丁组，其次是HFY09-H治疗组。在HFY09-H组中，减少炎症因子的作用强于HFY09-L组。
表6小鼠血清IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平(n＝10)
Figure BDA0002567573590000102
给出的值是标准差。在同一栏中，根据邓肯多重范围试验，不同字母的数值有显著差异(p<0.05)。
正常＝正常小鼠；模型＝用盐酸/乙醇(10毫升/千克)处理的小鼠；雷尼替丁＝50毫克/千克/天，通过灌胃；HFY09＝用盐酸/乙醇处理的小鼠(第15天)和植物乳杆菌HFY09的剂量(L，H)(108，109CFU/千克/天)；LB＝用盐酸/乙醇(第15天)和德氏乳杆菌亚种处理的小鼠。保加利亚乳杆菌(每天109CFU/千克)。
2.6 Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和CAT在小鼠胃组织中的基因表达
用Q-PCR方法检测了Mn-SOD、Cu/Zn SOD和CAT在小鼠胃中的表达，如图3所示。图3结果表明，健康小鼠胃组织中Mn-SOD、Cu/Zn SOD和CATm RNA的表达水平最高，模型组最低。雷尼替丁组和HFY09-H组的Mn-SOD、Cu/Zn SOD和CAT均高于模型组，雷尼替丁组的表达水平高于HFY09-H治疗组。LB的表达水平与HFY09-L相似。
2.7小鼠胃组织中eNOS、iNOS、nNOS和COX-2的基因表达
小鼠胃组织中COX-2、iNOS、eNOS和nNOS的表达如图4所示。正常组eNOS和nNOS的表达最高，但模型组COX-2和iNOS的表达最低。在HFY09组中，iNOS和COX-2的相对表达明显低于模型组，高剂量组(HFY09-H)表达明显低于低剂量组(HFY09-L)和LB治疗组，HFY09-H组与雷尼替丁组差异较小。这些数据表明HFY09能抑制炎症，保护HCl/乙醇诱导的胃损伤模型小鼠胃组织，高浓度时效果更强。
2.8.小鼠胃组织中EGF和EGFR的基因表达
图5显示了EGF和EGFR在小鼠胃中的基因表达。模型组EGF和EGFR的表达水平明显低于正常组(P<0.05)。雷尼替丁、LB和HFY09对EGF和EGFR基因表达的影响与模型组显著不同(P<0.05)。在HFY09高剂量组中，EGF和EGFR的基因表达低于雷尼替丁治疗组，但显著高于LB组和HFY09低剂量组。在相同剂量下，HFY09H的作用比HFY09L更明显。
3.结论
急性胃损伤通常是由急性酒精滥用引起的，主要症状是上皮顶部细胞质膜受损，导致细胞脱落、多次胃糜烂和溃疡。如果血管受累，损伤可引起胃粘膜大出血和炎症。动物实验表明，通过直接观察胃粘膜组织溃烂，可以通过测量溃烂面积来确定胃损伤的程度。
乳酸菌(LAB)广泛存在于人体胃肠道，在维持人体胃肠道微生态平衡方面发挥着重要作用。大量的研究证实益生菌对各种肠道疾病有一定的治疗作用，但乳酸杆菌、双歧杆菌和酵母菌等益生菌对胃相关疾病的影响的研究较少。
本发明通过查阅相关研究和国际标准，确定乳酸菌饮料的细菌浓度必须高于107CFU/mL，这也是乳酸菌在为什么在动物实验中经常使用109CFU/ml的原因。因此，本发明选择了109CFU/kg和108CFU/kg为研究浓度，探讨植物乳杆菌HFY09对急性胃损伤的预防作用。
健康小鼠的胃液不影响胃黏膜。然而，当胃粘膜受损时，胃液的分泌会增加，因此胃液的pH值会降低。胃液体积的增加和pH值的降低加重了胃粘膜的损伤，加重了胃损伤，导致恶性循环。一方面，在目前的研究中，胃损伤模型组胃液pH值明显低于正常组。HFY09治疗有效减少胃液的量，提高胃液pH值，从而保护胃组织，减少酒精引起的胃损伤；另一方面，通过分析胃损伤的面积，利用ImageJ软件计算胃损伤的抑制率，可以直接比较各组胃损伤的程度。此结果如表3所示，与正常组相比，模型组胃粘膜表现出明显的糜烂。基于模型组胃损伤面积，低剂量和高剂量HFY09组胃损伤面积显著减少(P<0.05)，胃损伤抑制率分别为46.95％和63.70％，但HFY09-H抑制率低于阳性对照雷尼替丁组(84.46％)。结果表明，HFY09对胃损伤有一定的预防作用。
此外，组织病理学观察也是诊断胃损伤的重要临床标准。为了研究和评价HFY09对HCl/乙醇诱导的胃损伤的保护作用，本发明对小鼠的胃组织切片进行了分析，HFY09对胃损伤有一定的预防作用，说明胃粘膜上皮细胞脱落，细胞间间隙减小。
胃肠激素，如SP、ET、SS和VIP，在胃肠运动调节中起着重要作用。内皮素(ET)是由21个氨基酸组成的内皮衍生血管收缩剂。它是迄今为止发现的最有效的血管收缩肽，在胃粘膜损伤中起着重要作用。以往的研究表明，ET主要通过减少内部血流量和削弱胃粘膜的保护机制而引起损伤，这将导致严重的溃烂，并在溃疡性结肠炎的发病机制中发挥关键作用。SS和VIP是能抑制胃液分泌的胃肠道激素。SS通过抑制MTL和胃蛋白酶的释放来保护胃粘膜，促进胃病变的愈合。当胃受到刺激时，SS的减少会加重胃肠液的分泌和胃肠道的炎症。
VIP水平与免疫调节和胃损伤引起的炎症密切相关。同时，VIP可以抑制iNOS在体内的转录，防止iNOS转化为过量NO对胃粘膜造成损伤。SP是一种兴奋性的胃肠激素，在应激状态下，其产生会增加，并会导致胃液大量分泌，胃内酸性强，导致胃粘膜损伤。表5显示HCl/乙醇诱导导致小鼠胃肠激素分泌失衡，血清ET-1和SP显著增加(P<0.05)，SS和VIP显著降低(P<0.05)。HFY09能抑制胃酸分泌，减轻对胃黏膜的损害，可提高血清SS和VIP水平，降低ET-1和SP水平，其作用与雷尼替丁相似。
另一种有效的方法是控制促炎因子的数量。动物实验表明，乙醇引起的大量氧自由基的释放破坏了体内的氧化还原平衡，引起多种免疫反应，使体内的免疫系统释放过量的促炎因子，引发炎症反应。因此，炎症性疾病患者血清中IL-6，IL-12，IFN-γ，TNF-α等细胞因子水平均高于健康人群。减少这些炎性细胞因子可能是预防胃损伤的有效方法。以往的研究也表明，益生菌可以通过自身的抗炎特性来减少乙醇引起的胃损伤。研究发现，鲁特氏乳杆菌DSM17938补充剂能保护乙醇诱导的小鼠胃损伤引起的粘膜粘附。发酵乳杆菌可以降低HCl/乙醇诱导的胃损伤小鼠血清炎症因子IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平。在目前的研究中，雷尼替丁、LB和HFY09降低了血清中IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α和其他炎症相关因子的水平。其中雷尼替丁的作用最为明显，其次是高剂量HFY09，说明高剂量HFY09在预防胃损伤方面是有效的。
酒精引起的胃损伤与抗氧化基因的表达有关。研究表明，与其他组织相比，胃肠道中黄嘌呤氧化酶的含量要高得多。由于胃肠道代谢，乙醇将转化为乙醛。乙醛将在黄嘌呤氧化酶的作用下进一步产生氧自由基，从而导致胃粘膜氧化损伤。因此，氧自由基是乙醇诱导胃损伤的重要机制之一。Cu/Zn SOD和Mn-SOD可清除超氧化物歧化酶、过氧化氢、羟基和脂质过氧化物，调节胃损伤，甚至使恢复达到正常水平。因此，HFY09的抗氧化作用可以通过测量这些重要的抗氧化相关基因的水平来确定。
根据本实验结果，与模型组相比，高剂量HFY09上调了Cu/Zn SOD、Mn-SOD和CATmRNA的表达，表明HCl/乙醇诱导的胃氧化代谢自由基可以被消除。HFY09对胃损伤有一定的抗氧化作用，能抑制胃损伤。NO是一种高度不稳定的生物自由基，它是脂溶性的，可以自由地穿过细胞膜并被高度氧化，半衰期仅为3至5秒，其生产依赖于一氧化氮合成酶(NOS)，包括nNOS、eNOS和iNOS。NOS和eNOS产生低水平的NO，并在一定程度上保护胃粘膜。胃溃疡的发生与eNOS和nNOS水平的过度抑制有关。同时，本发明还测量了相关炎症因子在胃组织中的表达介质，如iNOS和COX-2，这些介质可用来抑制炎症细胞因子的产生。
COX-2是COX的同工酶。细胞因子和内毒素可诱导COX-2的产生，参与炎症反应，促进炎症的发展。因此，当细胞受到炎症刺激时，COX-2高度表达，而生六堡茶多酚可下调COX-2的表达，从而减轻炎症反应，进而减轻胃损伤。此外，iNOS与COX-2相互作用产生协同效应，可进一步降低炎症反应。在目前的研究中，植物乳杆菌HFY09也有效地控制了iNOS和COX-2在小鼠胃组织中的表达，增加了nNOS和eNOS的表达，减轻了胃损伤。
表皮生长因子可促进上皮增殖、组织修复和细胞保护。在保护胃粘膜免受损伤因素的影响，维持胃肠粘膜的完整性方面起着重要的作用。EGF通过其受体EGFR发挥其生物学效应。本发明的结果表明，HCl/乙醇诱导的胃损伤小鼠胃组织中EGF和EGFR的表达明显低于正常小鼠。表皮生长因子作为一种保护因子，与其受体EGFR结合，加速溃疡愈合，提高组织修复能力，保持溃疡愈合质量。在目前的研究中，HFY09的治疗显著提高了胃损伤小鼠胃组织中EGF和EGFR基因的表达水平，表明HFY09对HCl/乙醇诱导的胃损伤小鼠胃组织具有保护作用，在较高剂量下效果更强。
综上所述，本发明采用盐酸/乙醇急性胃损伤模型，评价植物乳杆菌HFY09对胃损伤的预防作用。结果表明，HFY09能抑制胃液分泌，维持胃酸的正常pH值，减少胃粘膜损伤面积。与模型组相比，HFY09-H组SP、ET-1、IL-6、IL-12、TNF-α和IFN-γ水平降低，SS和VIP水平升高。进一步的实验表明，HFY09增加了eNOS、nNOS、Cu/Zn SOD、Mn-SOD、EGF和EGFR的表达，降低了iNOS和COX-2在胃组织中的表达，表明HFY09能抑制胃粘膜上皮细胞凋亡，发挥生物学作用，与浓度呈正相关。结果表明，HFY09可用于益生菌或功能性食品的生产，为其进一步开发利用提供了理论依据。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 重庆第二师范学院
教育部学校规划建设发展中心
<120> 一种益生菌及其在胃损伤中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1438
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)
<400> 1
tgcagtcgaa cgaactctgg tattgattgg tgcttgcatc atgatttaca tttgagtgag 60
tggcgaactg gtgagtaaca cgtgggaaac ctgcccagaa gcgggggata acacctggaa 120
acagatgcta ataccgcata acaacttgga ccgcatggtc cgagtttgaa agatggcttc 180
ggctatcact tttggatggt cccgcggcgt attagctaga tggtggggta acggctcacc 240
atggcaatga tacgtagccg acctgagagg gtaatcggcc acattgggac tgagacacgg 300
cccaaactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccac aatggacgaa agtctgatgg 360
agcaacgccg cgtgagtgaa gaagggtttc ggctcgtaaa actctgttgt taaagaagaa 420
catatctgag agtaactgtt caggtattga cggtatttaa ccagaaagcc acggctaact 480
acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt gtccggattt attgggcgta 540
aagcgagcgc aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc ttcggctcaa ccgaagaagt 600
gcatcggaaa ctgggaaact tgagtgcaga agaggacagt ggaactccat gtgtagcggt 660
gaaatgcgta gatatatgga agaacaccag tggcgaaggc ggctgtctgg tctgtaactg 720
acgctgaggc tcgaaagtat gggtagcaaa caggattaga taccctggta gtccataccg 780
taaacgatga atgctaagtg ttggagggtt tccgcccttc agtgctgcag ctaacgcatt 840
aagcattccg cctggggagt acggccgcaa ggctgaaact caaaggaatt gacgggggcc 900
cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagctacg cgaagaacct taccaggtct 960
tgacatacta tgcaaatcta agagattaga cgttcccttc ggggacatgg atacaggtgg 1020
tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa 1080
cccttattat cagttgccag cattaagttg ggcactctgg tgagactgcc ggtgacaaac 1140
cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1200
gctacaatgg atggtacaac gagttgcgaa ctcgcgagag taagctaatc tcttaaagcc 1260
attctcagtt cggattgtag gctgcaactc gcctacatga agtcggaatc gctagtaatc 1320
gcggatcagc atgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380
atgagagttt gtaacaccca aagtcggtgg ggtaaccttt taggaaccag ccgcctaa 1438

Claims (2)

1.一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HFY09，其特征在于，所述植物乳杆菌HFY09为乳酸菌属(lactic acid bacteria，LAB)，已保藏于中国微生物菌种保藏中心管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2018年10月25日，保藏编号为CGMCC No.16633。
2.一种权利要求1所述的植物乳杆菌HFY09在制备预防或治疗胃损伤的药物中的应用。
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