TWI592487B - 新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種k56 - Google Patents
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Description
本發明係關於一種適合應用於增加醱酵產品、功能性食品或乳製品的風味,並具有調節免疫和發炎症狀的功能新穎乳桿菌,特別是關於新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56(以下有時簡稱為K56)。
目前開發中或已開發國家,免疫失調症狀或是免疫相關疾病,例如過敏(例如氣喘、慢性鼻炎或是異位性皮膚炎(atopic dermatitis))或是發炎症狀有越來越普及的趨勢。使用類固醇是現行最常使用於治療免疫症狀或疾病的方法,但是卻有容易誘發副作用的缺點,甚至有致死的風險。因此人們希望能在不引發副作用的前提下尋求更安全方便的方法來減輕或是預防過敏和免疫疾病。
目前普遍已知乳酸桿菌(Lactobacillus spp.)是存在一般環境中且對人體健康具有多重益處的一群菌種,然而,乳酸桿菌中卻只有少數能被定義為所謂的「益生菌(Probiotics)」,原因在於,益生菌需要具備有能抗酸、抗膽鹽、可以通過腸道並穩定生存於腸道中之特性,且對人體
有健康助益。
現在的健康產業正努力開發具有多功能且能作為食品添加物以提升產品價值的乳酸菌株。乳酸桿菌已有很長的食用歷史,屬於公認安全(G.R.A.S,Generally Regarded as Safe)的菌屬,在適當條件培養下通常能產生良好的風味,有些菌株甚至能表現出絕佳的產酸能力以及優異的免疫調節功效,大幅提升產品價值。然而,由於不同菌株的特性與能力,乳酸菌的效果是可變的。因此,仍有必要發展具優異免疫調節和抗發炎活性的乳酸菌。
為達上述目的,本案發明人致力於乳酸菌相關研究,終開發出本案新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56。
本發明提供一種經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56,其係於2013年6月27日寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures),寄存編號為DSM27447。另外,前述副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56亦已於2014年4月8日以副乾酪乳桿菌副乾酪亞種Lactobacillus paracasei subsp.paracasei K56名稱寄存於財團法人食品工業發展研究所(Food Industry Research and Development Institute,FIRDI)之生物資源保存及研究中心,寄存編號為BCRC 910621。
於本發明之一態樣中,亦提供一種組成物,其包括經
單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56,該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心,寄存編號為DSM27447。根據一具體實施例,該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係經熱去活化。
根據本發明之一具體實施例,組成物係醫藥組成物、食品補充劑或食品。根據本發明之一具體實施例,該組成物係口服劑型。較佳地,該口服劑型係選自下列所組成之群組:溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、以及膠囊。
於本發明之又一態樣中,係提供一種經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56用於製備調節免疫反應之組成物的用途,該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心,寄存編號為DSM27447。根據一具體實施例,該免疫反應係與選自下列所述群組之因子的表現相關:IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α、iNOS、COX2、IgE及其組合。
於本發明之另一態樣中,提供一種經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56用於製備預防、減緩或抑制過敏之組成物的用途,該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心,寄存編號為DSM27447。根據一具體實施例,該過敏係與選自下列所述群組之因子的表現相關:IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、IgE及其組合。較佳地,該過敏係選自由下列所組成之群組:氣管反應過度或發炎、異位性皮膚炎、過敏結膜炎、過敏
性鼻炎、過敏性肺炎、外因性過敏性肺泡炎、蕁麻疹、血管性水腫、花粉熱、食物過敏、及氣喘。
本發明進一步提供一種經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56用於製備預防、減緩或抑制發炎之組成物的用途,該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心,寄存編號為DSM27447。根據一具體實施例,該發炎係與選自下列所述群組之因子的表現相關:TNF-α、IL-6、IL-10、iNOS、COX2及其組合。較佳地,該發炎係選自由下列所組成之群組:氣管反應過度或發炎、異位性皮膚炎、過敏結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性肺炎、外因性過敏性肺泡炎、蕁麻疹、血管性水腫、花粉熱、及氣喘。
於本發明之另一態樣中,所使用的經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係經熱去活化。
第1圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌(Shirota)於生長過程中環境酸鹼值的變化。
第2圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌(Shirota)的產酸表現。
第3A圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌(Shirota)促進人類周邊血液單核球細胞(hPBMCs)分泌IFN-γ的能力,其中,PHA表示植物血球凝集素,CON表示未經PHA或乳酸菌處理之控制組。
第3B圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56
和代田菌(Shirota)促進hPBMCs分泌IL-10的能力,其中,PHA表示植物血球凝集素,CON表示未經PHA或乳酸菌處理之控制組。
第4A圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌(Shirota)在巨噬細胞受脂多醣刺激後,抑制細胞表現iNOS的能力,其中,LPS表示脂多醣,CON表示未經LPS或乳酸菌處理之控制組。
第4B圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌(Shirota)在巨噬細胞受脂多醣刺激後,抑制細胞表現COX2的能力,其中,LPS表示脂多糖,CON表示未經LPS或乳酸菌處理之控制組。
第5圖係說明對小鼠施以不同濃度之霧化甲基膽鹼後,呼吸道的收縮程度,其中,CON表示為未經OVA或乳酸菌處理之控制組,OVA表示卵白蛋白,K56表示副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56,Penh表示肺功能指標Penh(Enhanced Pause)值。
第6A圖係說明小鼠肺沖洗液(BALF)中Th2類型細胞激素IL-4的含量,其中,OVA表示卵白蛋白,K56表示副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56,CON表示未經OVA或乳酸菌處理之控制組。
第6B圖係說明小鼠BALF中Th2類型細胞激素IL-5的含量,其中,OVA表示卵白蛋白,K56表示副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56,CON表示未經OVA或乳酸菌處理之控制組。
第6C圖係說明小鼠BALF中Th2類型細胞激素IL-13的含量,其中,OVA表示卵白蛋白,K56表示副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56,CON表示未經OVA或乳酸菌處理之控制組。
第7圖係說明小鼠BALF中促發炎細胞激素(proinflammatory cytokine)腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量,其中,OVA表示卵白蛋白,K56表示副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56,CON表示未經OVA或乳酸菌處理之控制組。
第8圖係說明小鼠血清中OVA特異性IgE(OVA-IgE)表現量,其中,OVA表示卵白蛋白,K56表示副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56,CON表示未經OVA或乳酸菌處理之控制組。
本發明係關於一種新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56(亦簡稱K56),其十分適合應用於增加醱酵產品、功能性食品或乳製品的風味,並具有調節免疫和發炎症狀的功能。為讓本發明之上述和其他目的、特徵和優點能更明顯易懂,下文僅以例示為目的,舉出較佳實施例,並配合所附圖式,作詳細說明如下。發明所屬技術領域中具有通常知識者不違背本發明的技術原理及精神下,可輕易完成的改變或修飾,均屬本發明所主張的範圍。
以下實施例之試驗結果的數據皆以平均值±平均數標準誤差(Means±SEM)表示。統計分析使用單因子變異數分析(One-way analysis of variance(One-way ANOVA)),並
以Tukey多重比較檢定(Tukey's Multiple Comparison Test)作為後測比較組間差異。當p<0.05(*)或<0.01(**)或<0.001(***)時,表示控制組和其他組別間的差異被認為具有統計學意義;當p<0.05(#)或<0.01(##)或<0.001(###)時,表示對照組(即第3圖之PHA組、第4圖之LPS組及第5、6、7、8圖之OVA組)和其他組別間的差異被認為具有統計學意義。
實施例1:16s rRNA和pheS基因序列鑑定
K56係分離自台灣孩童之糞便,分離株K56係以MRS培養基於37℃下培養一天後,抽取其基因組DNA。為了確認分離株K56在微生物分類上的地位,使用16S rRNA和pheS基因引子(如表1所示)對取自分離株K56基因組DNA進行聚合酶連鎖反應(Polymerase Chain Reaction,PCR),並定序增殖後的核苷酸片段。
經定序之分離株K56核苷酸片段係利用美國國家生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information,簡稱NCBI)資料庫中的比對軟體將16S rRNA及pheS基因片段與厚壁菌門(Firmicutes)所屬菌株之典型16S rRNA及pheS基因片段進行手動比對。進行比對時,厚壁菌門所屬菌株之典型16S rRNA及pheS基因片段皆取自NCBI線上資料庫。分析比對結果如下表2及3所示。
表2為利用16S rRNA基因引子進行增殖的序列比對結果。分離株K56的16S rRNA基因序列相同於另兩株副乾酪乳桿菌副乾酪亞種之菌株(D79212、AB181950),但和其他幾株乳桿菌屬的菌株有些序列上的差異。因此,分離株K56可以確認為副乾酪乳桿菌。
為進一步辨識K56的身份,利用pheS基因引子增殖的序列進行進一步序列比對,其中,因菌種庫編號的不同,表2所述之D79212(16S rRNA)與表3所述之AM087710(pheS)編號雖相異但為同一株菌,而表2所述之AB181950(16S rRNA)與表3所述之AM087711(pheS)編號雖相異但亦為同一株菌。
如表3所示,分離株K56與副乾酪乳桿菌副乾酪亞種
(L.paracasei subsp.paracasei)(AM087710)和副乾酪乳桿菌堅韌亞種(L.paracasei subsp.tolerans)(AM087711)近似度雖分別高達92.0%和91.6%,但仍非完全相同,且與其他種類的乳酸菌近似度明顯較低,因此可以判定分離株K56為一種新穎的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種。
實施例2:新穎副乾酪乳桿菌K56之醱酵能力測試
為了進一步確認分離株K56的亞種,利用API 50 CHL快速鑑定套組(bioMerieux,France)測試分離株K56對各種不同碳水化合物基質的醱酵能力,結果如表4所示。API 50 CHL快速鑑定套組的醱酵能力分析結果顯示,分離株K56的生化特性高度近似於副乾酪乳桿菌副乾酪亞種,因此,可以推測分離株K56確實為副乾酪乳桿菌副乾酪亞種,但是在乳酸桿菌屬中仍屬於新穎菌種。
經過鑑定確認分離株K56所屬菌種後,副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56根據布達佩斯協定(Budapest Treaty),於2013年6月27日寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)(Inhoffenstr.7 B,D-38124 Braunschweig,Germany),並由國際寄存單位給予DSMZ寄存編號為DSM27447。另外,前述副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56亦已於2014年4月8日寄存於財團法人食品工業發展研究所之生物資源保存及研究中心,並取得寄存編號為BCRC 910621。此生物材料已經存活試驗測試並通過該試驗。
實施例3:新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56之產酸能力測試
將培養於MRS培養基(Man,Rogoa,Sharpe培養基)中的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56取出,並轉移至以脫脂牛奶為基礎的培養液,在37℃下培養24小時、48及72小時,取出醱酵後的培養液(醱酵液),檢測培養液(醱酵液)的酸鹼值並進行酸滴定試驗。
在以下實施例之描述中,“代田菌”係表示待測菌株為分離自著名乳酸菌飲料養樂多的乾酪乳桿菌代田株(Shirota)。代田菌已知具有良好的免疫調節能力。
在酸滴定試驗中,每5公克醱酵後的培養液係混合於20毫升的純水,並以濃度0.1N的氫氧化鈉進行滴定,以計算待測菌株的產酸量。乳酸菌產酸量計算公式如下:
產酸量(%)=0.1N氫氧化鈉體積(毫升)×F×0.009/醱酵後的培養液重量(公克)×100
請參考第1圖,第1圖係說明本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌於生長過程中環境酸鹼值的變化。經過48小時的培養後,本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56展現了絕佳的酸化能力,其增加醱酵液酸度的能力和代田菌不相上下。
請參考第2圖,第2圖係說明本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌的產酸表現。經過48小時的培養後,副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56展現絕佳的產酸能力,產酸速率和代田菌十分接近。
因此,本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56的優異產酸效能使其十分具有商業應用之潛力。
實施例4:製備副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56
將副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56接種於MRS液體培養基裡,並且在37℃厭氧培養48小時。K56活菌之製備,係將經培養後之K56用無菌磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)清洗兩次,然後於PBS中再懸浮至所欲之最終濃度(如1010CFU/mL)。經熱去活化之K56之製備,則是依所欲濃度,如將1010CFU/mL之K56在100℃熱去活化20分鐘,而後儲存在-20℃冰箱備用。
實施例5:體外免疫調節反應試驗
人類周邊血液單核球細胞(Human Peripheral Blood Mononuclear Cells,hPBMCs)包括了多種免疫細胞和少量的自然殺手細胞(natural killer cell),係廣泛應用於研究免疫反應和細胞激素(cytokines)之分泌,可用以評估乳酸菌的免疫調節能力。
目前已知輔助T細胞(helper T cell)中的Th1細胞可以分泌干擾素-γ(Interferon-γ,IFN-γ),並且刺激B細胞分泌免疫球蛋白G(IgG),而Th2細胞則可以分泌介白素-4(Interleukin-4,IL-4)、IL-5、IL-13和刺激B細胞分泌免疫球蛋白E(IgE)。在正常狀況下,Th1細胞和Th2細胞具有相互拮抗的作用,當Th1細胞增加時,IFN-γ會抑制Th2細胞的過度表現並且降低Th2細胞的免疫反應。此外,由
Th2細胞分泌的細胞激素也會抑制Th1細胞的活化以減少Th1細胞的免疫反應。而過敏原會促進Th2細胞的反應及增加IgE的分泌而引發過敏。
此外,調節T細胞(regulatory T cell,Treg)、輔助T細胞和B細胞則會分泌IL-10,IL-10有助於抑制發炎反應並調節免疫反應。
因此,藉由檢測IFN-γ和IL-10的含量可以評估並比較不同乳酸菌的免疫調節功能,以鑑別出具有免疫調節潛力且能適度增加Th1細胞反應或減少Th2細胞反應的理想乳酸菌株。
本試驗係利用人類周邊血液單核球細胞模式來測試本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56的免疫調節能力。
本試驗中的人類周邊血液單核球細胞係分離自健康捐贈者的靜脈血液,方法如後。將靜脈血加到肝素抗凝管中後,加入Ficoll-PaqueTM PLUS單核球細胞分離液混合均勻,並由棕黃層(buffy coat)取得人類周邊血液單核球細胞。使用Turk試劑進行細胞計數後,利用RPMI-1640細胞培養液清洗細胞並將細胞濃度調整至2×106細胞/ml備用。在96孔細胞培養盤中,每孔加入2×105個人類周邊血液單核球細胞,及108CFU經熱去活化處理之副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56、代田菌或可以增加T細胞活性及促進增生的植物血球凝集素(phytohaemagglutinin,PHA)。將培養盤置於含10%二氧化碳的培養箱中,以37℃培養48小時後,
收集細胞培養上清液,以酵素免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定IFN-γ及IL-10之含量。
請參考第3A圖和第3B圖,第3A圖係說明本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌促進hPBMC細胞分泌IFN-γ的能力。第3B圖係說明本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌促進hPBMC細胞分泌IL-10的能力。由圖中可看出,本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56具有促進hPBMC分泌IFN-γ及IL-10的能力,且K56促進細胞分泌IFN-γ及IL-10的能力與知名的商業用乳酸菌株代田菌相近。由此可預期,新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56確實具有調節免疫反應的潛力。
實施例6:體外抗發炎反應試驗
目前脂多醣(Lipopolysaccharide,LPS)被認為是用來誘發發炎反應的重要因子之一,因為脂多醣可以促進轉錄因子NF-κ B(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)活化,進而增加誘導型一氧化氮合成酶(inducible Nitric Oxide synthase,iNOS)和環氧酵素-2(cycloxgenase-2,COX2)的表現,以產生一氧化氮和前列環素(Prostaglndin E2,PGE2),並引發發炎反應。
因此,iNOS和COX2的表現量可以作為乳酸菌抗發炎反應的檢測指標。基因轉殖巨噬細胞株RAW 264.7-iNOS及RAW264.7-COX2係分別將iNOS與COX2基因之操控子區段接於螢光素酶(luciferase)基因前面,再轉殖入巨噬細胞中所構建成之細胞評估系統。當iNOS和COX2受到基質
的作用而啟動時,螢光素酶即會被表現而產生螢光反應。
兩細胞株RAW264.7-iNOS及RAW264.7-COX2分別培養於12孔盤(5×105細胞/孔)24小時後,以新鮮DMEM細胞培養液前處理一小時,再加入LPS(1μg/mL)刺激三小時。之後移除細胞培養液,每一孔槽分別加入懸浮於DMEM細胞培養液、濃度為1×107CFU/mL(細胞數:菌數=1:20)的K56或代田菌之熱去活化菌體,培養24小時後,移除細胞培養液,並且加入細胞裂解液(passive lysis buffer)反應30分鐘,收集上清液,進行螢光素酶冷光分析。
請參照第4A圖和第4B圖,第4A圖係說明本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌在巨噬細胞受脂多醣刺激後,抑制細胞表現iNOS的能力。第4B圖係說明本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56和代田菌在巨噬細胞受脂多醣刺激後,抑制細胞表現COX2的能力。由圖中可看出,LPS確實可以明顯增加iNOS和COX2的表現,然而,本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56卻可以有效的抑制iNOS和COX2的表現,具有減緩或消除發炎反應的作用。
實施例7:動物模式中抗過敏氣喘調節功能
本實施例中,係以BALB/c小鼠模式來測試本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56的抗過敏氣喘能力。將BALB/c小鼠分為3組,每組五隻,分別餵食水(控制組、OVA組)及熱去活化之副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56(濃度為109CFU/200μl)。
在第0天和第14天,除了控制組之外各組小鼠,以腹腔注射OVA(濃度為20μg OVA/2mg氫氧化鋁(aluminum hydroxide)/200μl PBS)以引發小鼠的全身性過敏反應。
在第0、15和22天,對小鼠進行採血,並檢測血液中總免疫球蛋白E(IgE)的含量,以確認小鼠是否已被致敏。對於已致敏的小鼠,於第28天、第29天、第30天,鼻腔滴入100μg OVA/40μL PBS,誘發小鼠呼吸道過敏反應。第31天,再以霧化之甲基膽鹼(methacholine)刺激小鼠氣管平滑肌收縮,並利用全體腔呼吸測量系統(barometric whole-body plethysmography,Buxco Electronics,Inc.,Troy,NY)偵測呼吸道阻力(airway hyperresponsiveness,AHR)變化,以評估小鼠氣喘程度。第32天犧牲小鼠採集肺沖洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、血清等,以進行後續分析。
請參考第5圖,第5圖係說明對小鼠施以不同濃度之霧化甲基膽鹼後,呼吸道的收縮程度。隨著甲基膽鹼濃度增加(6.25、12.5、25mg/ml),控制組小鼠呼吸道僅呈現輕微程度的收縮狀態,OVA組小鼠呼吸道收縮程度非常明顯,而副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56明顯可改善OVA致敏小鼠氣喘程度。
BALF含有多種的細胞激素,比較致敏前後的細胞激素濃度變化,有助於釐清乳酸菌對於改善氣喘症狀,以及調節呼吸道黏膜免疫平衡的功效。
請參考第6A、6B和6C圖,第6A圖係說明小鼠BALF
中Th2類型細胞激素IL-4的含量。第6B圖係說明小鼠BALF中Th2類型細胞激素IL-5的含量。第6C圖係說明小鼠BALF中Th2類型細胞激素IL-13的含量。由圖中可看出,副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56具有優異的能力可以降低致敏氣喘小鼠的Th2類型細胞激素(IL-4、IL-5和L-13)的表現,以降低Th2細胞的活性,而達到抑制過敏反應的功效。
請參考第7圖所示,第7圖係說明小鼠BALF中促發炎細胞激素(proinflammatory cytokine)腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量。由圖中可看出,相對於餵食OVA的組別,餵食副乾酪菌K56可以明顯降低TNF-α的分泌,顯示K56有助改善致敏氣喘小鼠因氣喘而伴隨的呼吸道發炎反應。
目前已知Th2細胞的過度表現是促進B細胞釋出免疫球蛋白E(IgE)的重要因素,請參考第8圖,第8圖係說明小鼠血清OVA特異性IgE(OVA-IgE)表現量。由圖中可看出,餵食副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56的小鼠,其血清中OVA特異性IgE的濃度明顯低於OVA組,顯示K56具備改善過敏反應之功效。
綜上所述,在小鼠模式中,AHR測試結果、BALF分析結果、OVA特異性IgE表現結果都顯示副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56具有卓越的能力可以改善過敏及氣喘症狀。而特異性抗過敏調節試驗也顯示出副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56對於免疫調節都可以呈現出良好之成效,因此副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56確實為極具潛力的益生菌,可以
作為乳製品、飲品或是乳品的添加物,並發揮改善過敏症狀和調節免疫力的功能。此外,副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56也可以和一生物可相容之賦形劑相混合,以製備成溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、或膠囊之劑型,供一般應用或醫藥使用。
上述實施例僅為例示性說明本發明之原理及其功效,而非用於限制本發明之範圍。任何熟於此項技術之人士均可在不違背本發明之技術原理及精神下,對實施例作修改與變化。因此本發明之權利保護範圍應如後述之申請專利範圍所述。
【生物材料寄存】
財團法人食品工業發展研究所之生物資源保存及研究中心、2014年4月8日寄存、寄存編號為BCRC910621。
德國、德國微生物及細胞培養物收集中心、2013年6月27日寄存、寄存編號為DSM27447。
<110> 益福生醫股份有限公司
<120> 新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56
<130> 113375
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
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<213> 人工序列
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 16S rRNA的反向引子
<220>
<221> misc_difference
<222> (1)..(20)
<400> 2
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pheS基因的反向引子
<220>
<221> misc_difference
<222> (1)..(20)
<400> 4
Claims (13)
- 一種經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K56,係寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures),寄存編號為DSM27447,並係以寄存編號BCRC 910621寄存於財團法人食品工業發展研究所。
- 一種組成物,其包括如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56。
- 如申請專利範圍第2項所述的組成物,係醫藥組成物、食品補充劑或食品。
- 如申請專利範圍第2項所述的組成物,係口服劑型者。
- 如申請專利範圍第4項所述的組成物,其中,該口服劑型係選自下列所組成之群組:溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、以及膠囊。
- 如申請專利範圍第2項所述的組成物,其中,該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係經熱去活化。
- 一種如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56用於製備調節免疫反應之組成物的用途。
- 如申請專利範圍第7項所述之用途,其中,該免疫反應係與選自下列所述群組之因子的表現相關:IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TNF-α、iNOS、COX2、 IgE及其組合。
- 一種如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56用於製備預防、減緩或抑制過敏或發炎之組成物的用途。
- 如申請專利範圍第9項所述之用途,其中,該過敏係與選自下列所述群組之因子的表現相關:IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、IgE及其組合。
- 如申請專利範圍第9項所述之用途,其中,該過敏或該發炎係選自由下列所組成之群組:氣管反應過度或發炎、異位性皮膚炎、過敏結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性肺炎、外因性過敏性肺泡炎、蕁麻疹、血管性水腫、花粉熱、食物過敏、及氣喘。
- 如申請專利範圍第9項所述之用途,其中,該發炎係與選自下列所述群組之因子的表現相關:TNF-α、IL-6、IL-10、iNOS、COX2及其組合。
- 如申請專利範圍第7項至第12項中任一項所述的用途,其中,該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K56係經熱去活化。
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