TW201636035A - 新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種ｋ６６ - Google Patents

Abstract

本發明係關於一種新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K66。此菌株增殖快速且產酸能力優異，具有分泌胞外多醣以及對抗膽鹽和胃酸侵襲的能力，更可調節免疫、過敏和發炎現象，十分適合作為醱酵產品、功能性食品和乳製品的添加物。

Description

新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66

本發明係關於一種具有快速增殖、產酸能力優異、可分泌胞外多醣、對抗膽鹽和胃酸等特色，並具有調節免疫、過敏及發炎能力的新穎乳酸菌，特別是關於新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K66。

目前開發中或已開發國家，免疫症狀或是免疫疾病，例如過敏、氣喘、慢性鼻炎、異位性皮膚炎(atopic dermatitis)或是發炎症狀有越來越普及的趨勢，最常使用的治療方法是口服或塗抹類固醇，然而其缺點是容易產生副作用例如使病人變胖或增加感染率，甚至有致死的風險。許多研究團隊正在開發更安全的方法，盡可能在減少副作用的前提下，舒緩或是預防過敏和免疫疾病。

目前普遍已知乳酸桿菌(Lactobacillus spp.)是存在一般環境中且對人體健康具有多重益處的菌屬。乳酸桿菌屬的特定菌株已被發現能夠定殖於腸道粘膜，並協助維持人類和動物的健康，例如抗發炎活性和免疫調節活性。熱滅活的乾酪乳酸桿菌(Lactobacillus casei)代田株(strain Shirota) (LcS)刺激IL-12的分泌，使免疫反應朝向Th1為主狀態，藉以抑制IgE之產生。將熱致死嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)L-55口服給予經卵清蛋白(簡稱OVA)致敏的BALB/c小鼠，結果顯示可抑制由OVA誘導之鼻部症狀，如打噴嚏及揉鼻。然而，由於不同菌株的特性與能力，乳酸菌的效果是可變的。因此，仍有必要發展具優異免疫調節和抗發炎活性的乳酸菌。

目前的健康產業努力嘗試開發新穎可食用且具有特殊功效的乳酸菌種。乳酸桿菌已有很長的食用歷史，屬於公認安全(G.R.A.S,Generally Regarded as Safe)的菌屬，在適當條件培養下通常能產生良好的風味，有些菌株甚至能表現出絕佳的產酸能力以及優異的免疫調節功效，大幅提升產品價值。

本發明提供一種經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K66，其係寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)，寄存編號為DSM27448。於本發明之一態樣中，經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66係經熱滅活。

於本發明之一態樣中，係提供一種組成物，其包括經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66及載劑，其中，載劑可為生理上可接受的賦形劑或稀釋劑。生理上可接受的賦形劑或稀釋劑之實例包括但不限於乳糖、乾燥澱粉、澱粉 糊、糊精、環糊精、羧甲基澱粉鈉、羧基澱粉丙酸酯、微晶性纖維素、羧甲基纖維素、麥芽糊精、硬脂酸鎂及其類似物。

於本發明之一具體實施例中，組成物可為醫藥組成物、食品補充劑或食品。於本發明之另一具體實施例中，組成物可為口服劑型。較佳者，口服劑型可選自下列所組成之群組：溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、以及膠囊。

於本發明之另一態樣中，所使用的經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66係經熱滅活者。

於本發明之再一態樣中，上述組成物可為口服投予。

於本發明之另一態樣中，係提供經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之用途，其係用於製備調節免疫反應之組成物。於本發明之一具體實施例中，免疫反應可與選自下列所述群組之因子的表現相關：IFN-γ、IL-1 β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、TNF-α、一氧化氮合成酶、環氧合酶-2及其組合。

於本發明之又一態樣中，係提供經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之用途，其係用於製備預防、減緩或抑制過敏之組成物。於本發明之一具體實施例中，過敏係與選自下列所述群組之因子的表現相關：IL-4、IL-5、IL-12、IL-13及其組合。於本發明之又一具體實施例中，過敏可選自由下列所組成之群組：氣管反應過度或發炎、異位性皮膚炎、過敏結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性肺炎、外因性過 敏性肺泡炎、蕁麻疹、血管性水腫、花粉熱、食物過敏、及氣喘。

於本發明之另一態樣中，係提供經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之用途，其係用於製備預防、減緩或抑制發炎之組成物。於本發明之一具體實施例中，發炎係與選自下列所述群組之因子的表現相關：IFN-γ、IL-1 β、IL-6、IL-10、TNF-α、一氧化氮合成酶、環氧合酶-2及其組合。於本發明之又一具體實施例中，發炎係選自由下列所組成之群組：氣管反應過度或發炎、異位性皮膚炎、過敏結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性肺炎、外因性過敏性肺泡炎、蕁麻疹、血管性水腫、花粉熱、食物過敏、及氣喘。

第1圖係說明本發明新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌生長過程中環境酸鹼值的變化；第2圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的產酸能力；第3圖係本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的生長曲線；第4圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的胞外多醣產量；第5圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66的抗膽鹽能力；第6A圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66促進hPBMC分泌IFN-γ的能力； 第6B圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66促進hPBMC分泌IL-10的能力；第7A圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66抑制小鼠脾細胞分泌TNF-α的能力；第7B圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66抑制小鼠脾細胞分泌IL-6的能力；第7C圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66抑制小鼠脾細胞分泌IL-1 β的能力；第8A圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66促進小鼠脾細胞分泌IL-12的能力；第8B圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66抑制小鼠脾細胞分泌IL-4的能力；第8C圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66抑制小鼠脾細胞分泌IL-5的能力；以及第8D圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66抑制小鼠脾細胞分泌IL-13的能力。

本發明係關於一種新穎乳酸菌，副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66(亦簡稱K66)，其具有快速增生的特性，並能夠發揮優異的產酸能力，更可以分泌出胞外多醣、抵抗膽鹽和胃酸、調節免疫反應、過敏和發炎症狀，並且十分適合添加於醱酵產品、功能性產品或是乳製品中。以下描述皆以例示為目的。

以下實施例之試驗結果的數據皆以平均值±標準差 (Means±SD)表示。統計分析使用單因子變異數分析(One-way analysis of variance(One-way ANOVA))，並以Tukey多重比較檢定(Tukey's Multiple Comparison Test)作為後測比較組間差異，當組間差異達統計上意義以*(p<0.05)、**(p<0.01)、***(p<0.001)或不同英文字母(a,b)表示。

實施例1：16s rDNA和pheS序列鑑定

K66係分離自台灣孩童之糞便，分離株K66係以MRS培養基於37℃下培養一天後，抽取其基因組DNA，並利用16s rDNA和pheS引子(如表1所示)對於該基因組DNA進行聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction，PCR)以增殖特定之DNA序列，並利用美國國家生物技術信息中心(National Center for Biotechnology Information，簡稱NCBI)資料庫進行菌株比對。

表2為利用16S rDNA引子進行增殖的序列比對結果。分離株K66的16S rDNA序列相同於另兩株副乾酪乳桿菌副乾酪亞種之菌株(D79212、AB181950)，但和其他幾株乳桿菌屬的菌株有些序列上的差異。因此，分離株K66可以確認為副乾酪乳桿菌。

為進一步辨識K66的身份，利用pheS引子增殖的序列進行進一步序列比對，其中，因菌種庫編號的不同，表2所述之D79212(16S)與表3所述之AM087710(pheS)編號雖相異但為同一株菌，而表2所述之AB181950(16S)與表3所述之AM087711(pheS)編號雖相異但亦為同一株菌。

比對結果如表3所示，分離株K66與副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(L.paracasei subsp.paracasei)(AM087710)和副乾酪乳桿菌堅韌亞種(L.paracasei subsp.tolerans)(AM087711) 近似度雖分別高達91.8%和91.4%，但仍非完全相同，且與其他種類的乳酸菌近似度明顯較低，因此可以判定分離株K66為一種新穎的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種。

經過鑑定確認其所屬菌種後，副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66根據布達佩斯協定(Budapest Treaty)於2013年6月27日寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心(Leibniz Institute DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)(Inhoffenstr.7 B,D-38124 Braunschweig,Germany)，並由DSMZ給予寄存編號DSM27448。此生物材料已經存活試驗測試並通過該試驗。

實施例2：副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之醱酵能力

利用API 50 CHL快速鑑定套組(bioMerieux,France)測試副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66對各種不同碳水化合物基質的醱酵能力，結果如表4所示。

實施例3：副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之產酸能力

副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66培養於MRS培養基中，於第24、36及72小時取出菌液進行塗佈培養並計數。取出二次活化菌液體積的百分之一，以脫脂牛奶為基礎的培養液在37℃下培養24小時、36及72小時，取出醱酵後的培養液檢測培養液酸鹼值並進行酸滴定試驗。

在以下實施例之描述中，”Shirota”係表示待測菌株 為分離自著名乳酸菌飲料養樂多的代田菌。

在酸滴定試驗中，每5公克醱酵後的培養液係混合於20毫升的純水，並以濃度0.1N的氫氧化鈉進行滴定以計算待測菌株的產酸量。滴定終點定為pH值8.30至8.32間，乳酸菌產酸量計算公式如下：產酸量(%)=0.1N氫氧化鈉體積(毫升)×F×0.009/醱酵後的培養液重量(公克)×100

請參考第1圖至第3圖。第1圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌生長過程中環境酸鹼值的變化。第2圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的產酸表現。第3圖係本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的生長曲線。

由圖中可看出，副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66的生長速率明顯優於代田菌，亦具有較佳的產酸能力，因此，副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66的菌液酸鹼值在培養48小時後有明顯急遽的下降現象。由於進行乳酸菌篩選時，產酸能力是一個相當重要的觀察指標，而副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66相對於養樂多代田菌來說，更展現了較佳的產酸能力，產酸速率也比代田菌更為快速。

實施例4：K66胞外多醣產量

乳酸菌所分泌的胞外多醣通常會影響流體特性、性質或是醱酵乳製品的風味，並且會表現出某些生理功能。特別是在歐洲禁用傳統乳品添加物例如組織促進劑之後，選 用具有分泌胞外多醣能力的乳酸菌來取代現行的醱酵添加物已越來越普遍且漸成趨勢。

將K66於分別含有2%果糖或蔗糖的MRS培養液大量培養，以95%酒精將培養液中的多醣沉澱下來，以酚硫法測定多醣含量。

如第4圖所示，其係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的胞外多醣產量。由圖中可看出，在選用蔗糖和果糖為碳源的狀況下，每公升副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66培養液產生的胞外多醣產量分別為0.432±0.006和0.329±0.008公克，皆遠優於代田菌的0.246±0.005和0.251±0.009公克。

實施例5：K66之抗酸和抗膽鹽能力

乳酸菌抗酸能力的測試是探討乳酸菌在不同酸鹼度培養基的培養下，經過一段時間後乳酸菌的存活比例。所使用的菌數如表5所示，取二次活化的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66菌液各1ml，加至9ml PBS緩衝液(pH值2.3、2.5和3.0)中，菌液與緩衝液混合均勻後，置於37℃培養箱中，1.5小時後以MRS平板法測定活菌數。

結果如表5所示，表5為副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的抗酸能力比較表，由表中可以看出，副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66在酸性環境下培養1.5小時，存活率高於代田菌，顯見，副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66具有在消化道中存活的潛力。

表5、副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66與養樂多代田菌的抗

乳酸菌抗膽鹽的能力測試則是觀察乳酸菌在不同膽鹽濃度的環境下存活比例。取二次活化的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66菌液各200μl，加至9.8ml MRS培養基(分別含0.25%、0.5%膽鹽，pH 7.0)中，混合均勻後，置於37℃培養箱中，24小時後MRS平板法測定活菌數。

如第5圖所示，其係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66的抗膽鹽能力。膽鹽是由肝臟所分泌，並且會抑制消化道中的微生物生長，然而，副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66在0.25%低膽鹽濃度的狀態下，其生長並不會受到明顯的抑制。

實施例6：熱殺死菌K66之體外免疫調節能力

目前已知有兩種輔助型T細胞(helper T cell)，分別是Th1細胞和Th2細胞。Th1細胞可以分泌干擾素-γ(Interferon-γ，IFN-γ)，並且刺激B細胞分泌免疫球蛋白G(IgG)，而Th2細胞則可以分泌介白素-4(Interleukin-4，IL-4)、IL-5和刺激B細胞分泌免疫球蛋白E(IgE)。在正常狀況下，Th1細胞和Th2細胞具有相互拮抗的作用，當Th1細胞增加時，IFN-γ會抑制Th2細胞的過度表現並且降低Th2細胞的免疫反應。此外，由Th2細胞分泌的細胞素 (cytokines)也會抑制Th1細胞的活化以減少Th2細胞的免疫反應。而過敏原則會增加Th2細胞的反應與IgE的分泌而引發過敏。

此外，調節型T細胞(regulatory T cell，Treg)、輔助型T細胞和B細胞則會分泌IL-10，IL-10有助於抑制發炎反應並調節免疫反應。

因此藉由檢測IFN-γ和IL-10的含量可以評估並比較不同組別的免疫調節功能，以鑑別出具有抗過敏潛力且能適度增加Th1細胞反應或減少Th2細胞反應的理想乳酸菌株。人類周邊血液單核球細胞包括了多種免疫細胞和少量的自然殺手細胞(natural killer cells)，係廣泛應用於刺激免疫反應以評估乳酸菌的免疫調節能力。

本試驗係利用人類周邊血液單核球細胞(Human Peripheral Blood Mononuclear Cells，hPBMC)模式來測試本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66的免疫調節能力。試驗中的hPBMC係分離自健康捐贈者的靜脈血液，方法如後。將靜脈血加到肝素抗凝管中後，加入Ficoll-Paque^TM PLUS單核球細胞分離液混合均勻，並由棕黃層(buffy coat)取得人類周邊血液單核細胞。使用Turk試劑進行細胞計數後，利用RPMI-1640細胞培養液清洗細胞並將細胞濃度調整至2×10⁶細胞/毫升備用。在24孔細胞培養盤中，每孔加入2×10⁵ hPBMC細胞，及10⁸ CFU經熱殺處理之副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66或代田菌。將培養盤置於含10%二氧化碳的培養箱中，以37℃培養48小時後，收集細胞培 養上清液，以酵素免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測定干擾素IFN-γ及介白素IL-10之含量。

請參考第6A圖和第6B圖。第6A圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66對hPBMC分泌IFN-γ能力的影響。第6B圖係說明本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66對hPBMC分泌IL-10能力的影響。由圖中可看出，本發明副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66和代田菌類似，具有促進hPBMC分泌IFN-γ和IL-10的能力，由此可預期，熱殺死菌K66確實具有抑制過敏和調節免疫反應的潛力。

實施例7：熱殺死菌K66之體外抗發炎能力。

脂多醣(Lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性菌細胞壁外膜成分，是一種用來誘發發炎反應的重要因子之一。脂多醣經巨噬細胞接受器接受後，會促進轉錄因子NF-κ B(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)活化，進而促進一氧化氮合成酶(NO synthase，iNOS)和環氧酵素-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的活化，以產生一氧化氮和前列腺素群(Prostaglandins,PGs)，並引發發炎反應。因此，iNOS和COX-2的表現量可以作為乳酸菌抗發炎反應的檢測指標。基因轉殖巨噬細胞株RAW264.7 iNOS及RAW264.7 COX2係分別將iNOS與COX-2基因之操控子區段，接於螢光素酶(luciferase)基因前面，再轉殖入巨噬細胞中，所建構成之細胞評估系統。當iNOS和COX-2基因受到活化而啟動時，螢光素酶即會被表現而產生螢光反應。

兩細胞株RAW264.7 iNOS及RAW264.7 COX2分別培 養於12孔盤(5×10⁵細胞/孔)24小時後，以新鮮DMEM細胞培養液前處理一小時，再加入脂多醣(1μg/mL)刺激三小時。移除DMEM細胞培養液後，每一孔槽分別加入懸浮於DMEM細胞培養液，濃度為1×10⁷ CFU/毫升(細胞數：菌數=1：20)的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus)LGG(以下簡稱LGG)或代田菌之熱殺菌體。培養24小時後，移除DMEM細胞培養液，並且加入細胞裂解液(passive lysis buffer)反應30分鐘，收集上清液，進行螢光素酶冷光分析。

表6所示者係巨噬細胞受到脂多醣刺激，再與不同乳酸菌株反應後，iNOS和COX-2的表現結果比較表。實驗結果顯示，K66可降低促發炎因子iNOS和COX-2的表現，進而減緩發炎反應。

實施例8：熱殺死菌K66之抗發炎效果

選用8周齡BALB/c母鼠，每日餵食10⁸與10⁷ CFU熱殺死菌(熱殺條件：80℃，20分鐘)，總餵食時間為一個月。將小鼠犧牲後，取出脾臟進行初代培養，細胞濃度為1 x 10⁶細胞/孔，培養於24孔培養皿，添加脂多醣(600ng/mL/孔)處理96小時後，測定其細胞激素。脂多醣為一促發炎物質，可刺激脾臟細胞分泌促發炎細胞激素TNF-α、IL-6及IL-1 β等。從第7圖可知，餵食熱殺死菌K66組的脾臟細胞經脂多醣刺激後之TNF-α(如第7A圖所示)與IL-6(如第7B圖所示)分泌量顯著下降，而IL-1 β分泌量亦有下降的趨勢(如第7C圖所示)，顯示小鼠攝取熱殺死菌K66後，重要免疫器官抗發炎能力顯著提升。

實施例9：熱殺死菌K66之過敏調節效果

選用8周齡BALB/c母鼠於實驗第0及第14日腹腔注射20μg卵清蛋白(ovalbumin,OVA)/2mg氫氧化鋁(aluminum hydroxide)/200μL PBS致敏，第21日犧牲，取出脾臟進行初代培養，細胞濃度為1 x 10⁶細胞/孔，給予100μg/mL OVA刺激，模擬免疫系統處於過敏反應的狀況，同時加入熱殺死菌K66，使細胞與菌體比例為1：20、1：10與1：1(感染複數(multiplicity of infection,MOI)=20、10、1)。於培養96小時後收集上清液，測定細胞激素IL-4、IL-5、IL-12與IL-13的濃度。

體內T細胞分化是受不同細胞激素或抗原刺激所影響，IL-12刺激Th1分化，IL-4則刺激Th2分化。從第8A 圖結果可知，致敏小鼠的脾細胞經OVA刺激後，IL-12並無顯著變化。IL-12是抗原呈現細胞(例如樹突細胞或巨噬細胞)所釋放的細胞激素，參與Th1型免疫反應，可促進Th0細胞朝Th1分化。給予熱殺死菌K66的處理後，IL-12濃度顯著增加(如第8A圖所示)。此外，隨著感染複數增加，IL-12濃度也顯著上升。此結果表示熱殺死菌K66能顯著提高Th1型免疫反應，且隨著劑量增加，功效愈強。

而在調節Th2型免疫反應方面，熱殺死菌K66亦具有明顯功效。過敏患者是由於接觸過敏原後，Th2細胞過度反應釋放IL-4、IL-5與IL-13等細胞激素，進而使肥大細胞釋放大量發炎介質。由第8B至8D圖可知，熱殺死菌K66可顯著的降低脾細胞分泌的IL-4(如第8B圖所示)、IL-5(如第8C圖所示)與IL-13(如第8D圖所示)等細胞激素，顯示K66具有減少Th2細胞過度反應的潛力。臨床上，治療氣喘藥物Nuvance^TM為一種水溶性的IL-4受體a(IL-4Ra)，能與IL-4結合，減少IL-4與初始T細胞(naïve T cell)上的IL-4R結合，達到抑制Th2細胞分化的效果。本試驗中，熱殺死菌K66顯著降低脾細胞分泌的IL-4(如第8B圖所示)，進而降低Th2免疫反應。綜合以上實驗可知，熱殺死菌K66能顯著提高Th1型免疫反應、降低Th2細胞過度反應，而具有優異的免疫調節能力。

<110> 國立陽明大學

<120> 新穎副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66

<130> 113338

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> 16S rDNA的正向引子

<220>

<221> misc_difference

<222> (1)..(20)

<400> 1

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工

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<223> 16S rDNA的反向引子

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<221> misc_difference

<222> (1)..(20)

<400> 2

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工

<220>

<223> pheS的正向引子

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<221> misc_difference

<222> (1)..(19)

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> n is a,c,g,or t

<400> 3

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工

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<223> pheS的反向引子

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<221> misc_difference

<222> (1)..(20)

<400> 4

本案圖式均為實驗數據圖式，故無指定代表圖

Claims (18)

1. 一種經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)K66，係寄存於德國微生物及細胞培養物收集中心(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)，寄存編號為DSM27448。
2. 如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66，其係經熱滅活。
3. 一種組成物，其包括如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66及其載劑，其中，該載劑為生理上可接受的賦形劑或稀釋劑。
4. 如申請專利範圍第3項所述的組成物，其中，該生理上可接受的賦形劑或稀釋劑包括以下至少一種：乳糖、乾燥澱粉、澱粉糊、糊精、環糊精、羧甲基澱粉鈉、羧基澱粉丙酸酯、微晶性纖維素、羧甲基纖維素、麥芽糊精、硬脂酸鎂及其類似物。
5. 如申請專利範圍第3項所述的組成物，係作為醫藥組成物、食品補充劑或食品。
6. 如申請專利範圍第3項所述的組成物，係做成口服劑型。
7. 如申請專利範圍第6項所述的組成物，其中，該口服劑型係選自下列所組成之群組：溶液、懸浮液、乳劑、粉末、錠劑、丸劑、糖漿、口含錠、片劑、口嚼膠、以及膠囊。
8. 如申請專利範圍第3項所述的組成物，其中，該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66係經熱滅活。
9. 一種如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之用途，其係用於製備調節免疫反應之組成物。
10. 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中，該免疫反應係與選自下列所述群組之因子的表現相關：IFN-γ、IL-1 β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、TNF-α、一氧化氮合成酶、環氧合酶-2及其組合。
11. 一種如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之用途，其係用於製備預防、減緩或抑制過敏之組成物。
12. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中，該過敏係與選自下列所述群組之因子的表現相關：IL-4、IL-5、IL-12、IL-13及其組合。
13. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中，該過敏係選自由下列所組成之群組：氣管反應過度或發炎、異位性皮膚炎、過敏結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性肺炎、外因性過敏性肺泡炎、蕁麻疹、血管性水腫、花粉熱、食物過敏及氣喘。
14. 如申請專利範圍第11項所述之用途，其中，該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66係經熱滅活。
15. 一種如申請專利範圍第1項所述之經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66之用途，其係用於製備預防、減 緩或抑制發炎之組成物。
16. 如申請專利範圍第15項所述之用途，其中，該發炎係與選自下列所述群組之因子的表現相關：IFN-γ、IL-1 β、IL-6、IL-10、TNF-α、一氧化氮合成酶、環氧合酶-2及其組合。
17. 如申請專利範圍第15項所述之用途，其中，該發炎係選自由下列所組成之群組：氣管反應過度或發炎、異位性皮膚炎、過敏結膜炎、過敏性鼻炎、過敏性肺炎、外因性過敏性肺泡炎、蕁麻疹、血管性水腫、花粉熱、食物過敏及氣喘。
18. 如申請專利範圍第15項所述之用途，其中，該經單離的副乾酪乳桿菌副乾酪亞種K66係經熱滅活。