CN108362805B - 一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法 - Google Patents

一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108362805B
CN108362805B CN201810165820.4A CN201810165820A CN108362805B CN 108362805 B CN108362805 B CN 108362805B CN 201810165820 A CN201810165820 A CN 201810165820A CN 108362805 B CN108362805 B CN 108362805B
Authority
CN
China
Prior art keywords
rutin
betaine
resveratrol
folic acid
standard
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810165820.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108362805A (zh
Inventor
马金同
刘露
马雷
胡心行
刘国英
李安军
周庆伍
沈小梅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Anhui Ruisiweier Technology Co Ltd
Original Assignee
Anhui Ruisiweier Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anhui Ruisiweier Technology Co Ltd filed Critical Anhui Ruisiweier Technology Co Ltd
Priority to CN201810165820.4A priority Critical patent/CN108362805B/zh
Publication of CN108362805A publication Critical patent/CN108362805A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108362805B publication Critical patent/CN108362805B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种UPLC‑Q‑Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法，首先使用Ben的C18色谱柱进行梯度洗脱分离，然后采用电喷雾离子源，在正离子模式下进行扫描，对四种天然产物对应的特征离子进行提取并获得积分峰面积，从而实现对甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的快速分析鉴定。本发明快速、准确的同时检测了保健酒中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸，并给出甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸在质谱中的离子特征，从而可以实现对保健酒中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸准确定性定量。

Description

一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法
技术领域
本发明涉及一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法，属于检测技术领域。
背景技术
研究证明甜菜碱对人体心血管类、神经类、肝脏类和高半胱氨酸尿症等疾病有一定的治疗作用；白藜芦醇具有抗肿瘤，降血压，抗血小板聚集，抗细菌和真菌感染，影响胃酸分泌等多种生理活性；芦丁作为黄酮类化合物的典型代表，具有抗自由基活性、抗脂质过氧化作用、抗病毒、拮抗血小板活化因子作用、抗急性胰腺炎、舒张血管以及对胃溃疡的保护作用等生理活性或药理作用；叶酸作为胎儿生长发育不可缺少的营养素，具有参与遗传物质和蛋白质的代谢，影响动物胰腺的分泌，促进生长，提高机体免疫力等生理功能。目前关于4种天然产物的同时检测方法鲜有报道。目前可见文献中，4种天然产物表征需要凝胶渗透色谱和高效液相色谱分离纯化，再试用质谱、核磁共振等手段进行表征。这一手段耗时长，步骤复杂，无法满足快速分析检测的要求。
保健酒中基质复杂、成分多样，不仅干扰目标化合物的测定，还给仪器带来损害，故有效的前处理方式是保健酒中天然产物测定一个亟待解决的难题。
发明内容
为了避免上述现有技术所存在的不足，本发明旨在提供一种UPLC-Q-Tof/MS(超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱联用)同时测定保健酒中四种天然产物的方法。本发明快速、准确的同时检测了保健酒中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸，并给出甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸在质谱中的离子特征，从而可以实现对保健酒中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸准确定性定量。本发明检测方法可用于保健酒质量控制中。
本发明UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法，首先使用Ben(表面带电杂化颗粒)的C18色谱柱进行梯度洗脱分离，然后采用电喷雾离子源，在正离子模式下进行扫描，对四种天然产物对应的特征离子进行提取并获得积分峰面积，从而实现对甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的快速分析鉴定。
本发明UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法，包括如下步骤：
步骤1：标准品的准备
将甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸分别用乙腈溶解，配成母液标品，母液标品的各浓度分别为甜菜碱100mg/L，芦丁400mg/L，白藜芦醇400mg/L，叶酸50mg/L；
步骤2：色谱检测条件
色谱柱：ACQUITY UPLC Ben C18Column，2.1mm×100mm，1.7μm；
流动相：流动相A：1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈；
流动梯度洗脱程序：0-2min，92％A+8％B～80％A+20％B；2-3min，80％A+20％B～70％A+30％B；3-4min，70％A+30％B～30％A+70％B，4-7min，70％A+30％B～92％A+8％B；7-10min，92％A+8％B，流速0.3mL/min；
柱温：30℃；
进样量5μL；
步骤3：质谱检测条件
质谱仪WATERS Xevo G2-XS Q Tof/MS，电喷雾离子源，正离子扫描模式，离子源温度120℃，脱溶剂温度500℃，脱溶剂气流量800L/h，锥孔气流量50L/h，扫描范围50-1200Da，毛细管电压：1kV，取样锥孔电压：20V，扫描时间：0.5s，参比质量：亮氨酸脑啡呔[M+H]+＝556.2771；
步骤4：标准曲线的绘制
采用外标法定量，将步骤1配制的甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的四种母液标品混合配成混合标准储备液，然后用乙腈-水溶液(50:50，v/v)逐级稀释获得不同浓度的混合标准品溶液，以每个浓度下标准品对应的母离子提取离子色谱图中的积分峰面积为纵坐标，该标准品的浓度为横坐标，建立标准曲线，分别获得甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的四个标准曲线，线性回归方程见下表：
标样名称 线性回归方程 R2 线性范围(μg/L)
甜菜碱 y＝1042.38x+42226.1 0.995 100-250
芦丁 y＝42.1056x-6983.11 0.995 200-500
白藜芦醇 y＝113.883x-15698.1 0.998 200-500
叶酸 y＝67.9363x-5274.6 0.996 200-500
步骤4中，用乙腈-水溶液逐级稀释混合标准储备液时，至少获得五个不同浓度的混合标准品溶液，混合标准品溶液中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的浓度范围为100-500μg/L。
步骤4中，甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸分别对应的母离子为：甜菜碱选择m/z118.0868、芦丁选择m/z 611.1612、白藜芦醇选择m/z 229.0865、叶酸选择m/z 442.1475。
步骤5：待测样品的前处理
取待测样品20mL，真空浓缩至10mL，然后用超纯水冲洗定容至20mL，过0.22μm滤膜后待测；
步骤6：待测样品的检测
将经步骤5前处理后的待测样品送样，按照步骤2、步骤3的检测条件进行检测，将获得的待测样品谱图与标准品谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，然后通过标准曲线线性回归方程获得对应甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的含量。
本发明的有益效果体现在：
本发明快速、准确的同时检测了保健酒中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸，并给出甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸在质谱中的离子特征，从而可以实现对保健酒中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸准确定性定量。
附图说明
图1为四种天然产物(甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸)的MS全扫描图；
图2为甜菜碱的提取离子色谱图(a)和质谱图(b)；
图3为芦丁的提取离子色谱图(a)和质谱图(b)；
图4为白藜芦醇的提取离子色谱图(a)和质谱图(b)；
图5为叶酸的提取离子色谱图(a)和质谱图(b)；
图6为黑枸杞保健酒的MS全扫描图(a)和甜菜碱提取离子流图(b)、芦丁提取离子流图(c)。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合具体的实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例，实施例不应视作对本发明保护范围的限定。
1仪器与样品
1.1仪器：
超高效液相色谱系统(ACQUITY Ultra Performance LC Waters公司)配以质谱(G2-Q Tof飞行时间质谱仪Waters公司)、旋转蒸发仪(瑞士步琪R-210)、ACQUITY UPLC BenC18Column(1.7μm,2.1×50mm)色谱柱。
1.2样品：黑枸杞保健酒
2方法与结果
2.1.1标准品的准备：将甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸分别用乙腈溶解，配成母液标品，母液标品的各浓度分别为甜菜碱100mg/L，芦丁400mg/L，白藜芦醇400mg/L，叶酸50mg/L；
2.1.2样品前处理：取样品20mL真空浓缩至10mL，再用超纯水冲洗定容至20mL，过0.22μm滤膜后待测；
2.1.3色谱条件：
色谱柱：ACQUITY UPLC Ben C18Column，2.1mm×100mm，1.7μm；
流动相：流动相A：1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈；
流动梯度洗脱程序：0-2min，92％A+8％B～80％A+20％B；2-3min，80％A+20％B～70％A+30％B；3-4min，70％A+30％B～30％A+70％B，4-7min，70％A+30％B～92％A+8％B；7-10min，92％A+8％B，流速0.3mL/min；
柱温：30℃；
进样量5μL；
2.1.4质谱条件：质谱仪WATERS Xevo G2-XS Q Tof/MS，电喷雾离子源，正离子扫描模式，离子源温度120℃，脱溶剂温度500℃，脱溶剂气流量800L/h，锥孔气流量50L/h，扫描范围50-1200Da，毛细管电压：1kV，取样锥孔电压：20V，扫描时间：0.5s，参比质量：亮氨酸脑啡呔[M+H]+＝556.2771。
2.2标准曲线的绘制
采用外标法定量，将步骤1配制的甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的四种母液标品混合配成混合标准储备液，并用乙腈-水溶液(50:50，v/v)逐级稀释获得不同浓度的混合标准品溶液，混合标准品溶液中甜菜碱浓度分别为100、125、150、200、250μg/L，芦丁、白藜芦醇、叶酸浓度分别为200、250、300、400、500μg/L，以每个浓度下标准品对应的母离子提取离子色谱图中的积分峰面积为纵坐标，该标准品的浓度为横坐标，建立标准曲线，分别获得甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的四个标准曲线，线性回归方程见下表：
标样名称 线性回归方程 R2 线性范围(μg/L)
甜菜碱 y＝1042.38x+42226.1 0.995 100-250
芦丁 y＝42.1056x-6983.11 0.995 200-500
白藜芦醇 y＝113.883x-15698.1 0.998 200-500
叶酸 y＝67.9363x-5274.6 0.996 200-500
步骤4中，甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸分别对应的母离子为：甜菜碱选择m/z118.0868、芦丁选择m/z 611.1612、白藜芦醇选择m/z 229.0865、叶酸选择m/z 442.1475。
2.3黑枸杞保健酒中四种天然产物的测定
将按照2.1.2前处理后的待测酒样送样检测，按照2.1.3和2.1.4的检测条件进行UPLC-Q-Tof/MS分析测定。
对黑枸杞保健酒进行MS全扫描，结果见图6。提取离子流图分别为M/Z＝118.0868(0.50min)、611.1612(4.19min)。由图可知，黑枸杞保健酒中含有甜菜碱、芦丁，经标准曲线换算得出含甜菜碱510.2μg/L、芦丁1910μg/L，无叶酸、白藜芦醇。此方法前处理简单，快速、准确度高。

Claims (4)

1.一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法，其特征在于：首先使用Ben的C18色谱柱进行梯度洗脱分离，然后采用电喷雾离子源，在正离子模式下进行扫描，对四种天然产物对应的特征离子进行提取并获得积分峰面积，从而实现对甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的快速分析鉴定；包括如下步骤：
步骤1：标准品的准备
将甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸分别用乙腈溶解，配成母液标品，母液标品中甜菜碱100mg/L、芦丁400mg/L、白藜芦醇400mg/L、叶酸50mg/L；
步骤2：色谱检测条件
色谱柱：ACQUITY UPLC Ben C18 Column，2.1mm×100mm，1.7μm；
流动相：流动相A：1％甲酸水溶液，流动相B：乙腈，梯度洗脱；
柱温：30℃；
进样量5μL；
步骤3：质谱检测条件
质谱仪WATERS Xevo G2-XS Q Tof/MS，电喷雾离子源，正离子扫描模式，离子源温度120℃，脱溶剂温度500℃，脱溶剂气流量800L/h，锥孔气流量50L/h，扫描范围50-1200Da，毛细管电压：1kV，取样锥孔电压：20V，扫描时间：0.5s，参比质量：亮氨酸脑啡呔[M+H]+＝556.2771；
步骤4：标准曲线的绘制
采用外标法定量，将步骤1配制的甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的四种母液标品混合配成混合标准储备液，然后用乙腈-水溶液逐级稀释获得不同浓度的混合标准品溶液，以每个浓度下标准品对应的母离子提取离子色谱图中的积分峰面积为纵坐标，该标准品的浓度为横坐标，建立标准曲线，分别获得甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的四个标准曲线；
步骤4中，甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸分别对应的母离子为：甜菜碱选择m/z118.0868、芦丁选择m/z 611.1612、白藜芦醇选择m/z 229.0865、叶酸选择m/z 442.1475；
步骤5：待测样品的前处理
取待测样品20mL，真空浓缩至10mL，然后用超纯水冲洗定容至20mL，过0.22μm滤膜后待测；
步骤6：待测样品的检测
将经步骤5前处理后的待测样品送样，按照步骤2、步骤3的检测条件进行检测，将获得的待测样品谱图与标准品谱图对比，保留时间相同的即为对应物质，然后通过标准曲线线性回归方程获得对应甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
步骤2中，梯度洗脱程序：0-2min，92％A+8％B～80％A+20％B；2-3min，80％A+20％B～70％A+30％B；3-4min，70％A+30％B～30％A+70％B，4-7min，70％A+30％B～92％A+8％B；7-10min，92％A+8％B，流速0.3mL/min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
步骤4中，用乙腈-水溶液逐级稀释混合标准储备液时，至少获得五个不同浓度的混合标准品溶液。
4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于：
步骤4中，混合标准品溶液中甜菜碱、芦丁、白藜芦醇、叶酸的浓度范围为100-500μg/L。
CN201810165820.4A 2018-02-28 2018-02-28 一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法 Active CN108362805B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810165820.4A CN108362805B (zh) 2018-02-28 2018-02-28 一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810165820.4A CN108362805B (zh) 2018-02-28 2018-02-28 一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108362805A CN108362805A (zh) 2018-08-03
CN108362805B true CN108362805B (zh) 2020-05-01

Family

ID=63002792

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810165820.4A Active CN108362805B (zh) 2018-02-28 2018-02-28 一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108362805B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011017792A1 (pt) * 2009-08-14 2011-02-17 Universidade Federal De Minas Gerais - Ufmg Método extrativo-analítico para determinação de taninos em insumos e produtos vegetais
CN107014920A (zh) * 2017-04-05 2017-08-04 西南民族大学 一种梅子配方酒的检测方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101634648B (zh) * 2009-08-21 2012-06-27 江南大学 超高压液相色谱—飞行时间质谱同时测定白酒中六种微量甜味剂的方法
CN103808822A (zh) * 2014-02-13 2014-05-21 湖南省检验检疫科学技术研究院 一种区分不同来源白藜芦醇的lc-qtof分析方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011017792A1 (pt) * 2009-08-14 2011-02-17 Universidade Federal De Minas Gerais - Ufmg Método extrativo-analítico para determinação de taninos em insumos e produtos vegetais
CN107014920A (zh) * 2017-04-05 2017-08-04 西南民族大学 一种梅子配方酒的检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108362805A (zh) 2018-08-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109085278B (zh) 液相色谱串联质谱法同时检测多种氨基酸的试剂盒及其应用
CN108008026B (zh) 一种山楂丸中13种着色剂同步检测的方法
CN107941950B (zh) 超高效液相色谱-串联质谱法同时测定常山胡柚的不同部位中九种功能性成分的方法
Quan et al. Determining eight biogenic amines in surface water using high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
CN104181268A (zh) 一种同时测定化妆品中15种禁用雄激素的方法
Cao et al. Development of an HPLC–MS/MS method for the simultaneous analysis of six kinds of parabens in food
CN110208392B (zh) 基于uplc-qtof-ms对富硒烟叶的代谢组学研究的方法
Chen et al. Determination of ellagic acid in wine by solid-phase extraction–ultra-high performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry
CN108181400A (zh) Uhplc-qqq-ms/ms同时测定酸枣仁水煎液中6种化学成分含量的方法
CN102788833B (zh) 一种检测低丰度低分子量蛋白谱的试剂盒
CN108362805B (zh) 一种UPLC-Q-Tof/MS同时测定保健酒中四种天然产物的方法
CN112114079B (zh) 一种同时检测使君子中9种化学成分的方法
CN108072712A (zh) 一种sd大鼠血浆中新化合物wsj-557的血药浓度定量分析方法
CN105486775A (zh) 一种右归丸中多种成分含量的检测方法
CN104897835A (zh) 一种利用uplc-q-tof/ms技术快速测定寡聚古罗糖醛酸的方法
CN106442784B (zh) 人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的uplc-ms/ms检测方法
CN113155991A (zh) 一种全自动在线萃取超高效液相色谱串联质谱联用快速测定水中磺胺类抗生素的方法
CN219715347U (zh) 用于流式细胞仪和色谱仪在线检测细胞代谢物的进样盘
CN103487539B (zh) 利用超快速液相色谱-串联三重四级杆质谱测定家蚕血淋巴中阿苯达唑及代谢物含量的方法
CN109444293A (zh) 一种新鲜烟叶中内源水溶性b族维生素的检测方法
CN112255327B (zh) 乳制品中草铵膦含量的检测方法
CN108982684B (zh) 一种检测和鉴别石格菜的方法
CN110609097A (zh) 一种磷脂酰丝氨酸类化合物的筛查方法
CN108387656B (zh) 一种液质联用检测化妆品中双(羟甲基)咪唑烷基脲的方法
CN110794062B (zh) 一种蔬菜中环氧虫啶和氟吡呋喃酮残留的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant