CN108285456A - 4-硫取代鬼臼毒素类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

4-硫取代鬼臼毒素类衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了4‑硫取代鬼臼毒素类衍生物及其合成方法和应用，本发明将具有刚性的芳香杂环化合物，如4‑三氟甲基吡啶‑2‑硫醇、4‑三氟甲基‑2‑巯基嘧啶、对氟苯硫酚等作为取代基团分别引入到鬼臼毒素或4′‑去甲基表鬼臼毒素C环4位，得到抗肿瘤活性显著提高、毒副作用降低的式(V)所示的鬼臼毒素类衍生物。体外肿瘤细胞活性抑制实验表明，本发明式(V)所示化合物的抗肿瘤活性较鬼臼毒素或4′‑去甲基表鬼臼毒素的抗肿瘤活性有显著提高。

Description

4-硫取代鬼臼毒素类衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于鬼臼毒素类衍生物领域，具体涉及4-硫取代鬼臼毒素类衍生物及其制备方法，本发明还涉及所述4-硫取代鬼臼毒素类衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。
背景技术
鬼臼毒素(Podophyllotoxin)和4′-去甲基表鬼臼毒素(4′-Demethylepipodophyllotoxin)其结构如图1中式(I)和(II)所示；鬼臼毒素和4′-去甲基表鬼臼毒素是从鬼臼毒素类植物(如：小檗科植物桃儿七、山荷叶、八角莲等)中提取的具有独特抗肿瘤活性的天然活性先导化合物，因强烈的毒副作用和生物利用度差等缺点，限制了它们在临床的应用。
发明内容
本发明的目的之一是提供一类具有良好抗肿瘤活性的4-硫取代鬼臼毒素类衍生物；
本发明的目的之二是提供一种制备所述4-硫取代鬼臼毒素类衍生物的方法；
本发明的目的之三是将所述4-硫取代鬼臼毒素类衍生物应用于制备临床用抗肿瘤药物。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
一类具有抗肿瘤活性的4-硫取代鬼臼毒素类衍生物或其药学上可接受的盐，所述鬼臼毒素类衍生物的结构式为(V)所示：
其中，R1选自
R2为氢或-CH3。
本发明采用的4-三氟甲基吡啶-2-硫醇、4-三氟甲基-2-巯基嘧啶、对氟苯硫酚、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇、5-苯基苯并噁唑-2-硫醇、5-甲基苯并噁唑-2-硫醇、6-氯苯并噁唑-2-硫醇、5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇、2-巯基萘、1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2-硫醇、1-苯基四氮唑-5-硫醇、3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5-硫醇和4-(4-吡啶基)噻唑-2-硫醇等化合物是具有刚性的芳香杂环化合物，如图2所示，以其作为取代基团有利于鬼臼毒素和4′-去甲基表鬼臼毒素C环4位β构型的形成。
本发明提供的制备上述式(V)所示化合物的方法，包括以下步骤：
通过亲核取代反应，将反应单体引入到鬼臼毒素的C环4位或引入到4′-去甲基表鬼臼毒素的C环4位，所述反应单体可以为4-三氟甲基吡啶-2-硫醇、4-三氟甲基-2-巯基嘧啶、对氟苯硫酚、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇、5-苯基苯并噁唑-2-硫醇、5-甲基苯并噁唑-2-硫醇、6-氯苯并噁唑-2-硫醇、5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇、2-巯基萘、1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2-硫醇、1-苯基四氮唑-5-硫醇、3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5-硫醇或4-(4-吡啶基)噻唑-2-硫醇。
本发明中，所述亲核取代反应可以在以下条件下进行：将鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素溶于有机溶剂中，再加入所述反应单体，搅拌；所述有机溶剂可以为亲核试剂，所述亲核试剂可以选自三氟乙酸、甲磺酰氯或三氟化硼乙醚。
本发明中，在亲核取代反应中，鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素与所述反应单体的摩尔比可以为1∶1～10，例如1∶1～8，又如1∶1。
本发明中，所述亲核取代反应温度可以为-20～40℃，例如-20～20℃。
本发明中，所述亲核取代反应温度还可以为-10～10℃，例如0～10℃。
上述制备方法还包括：将亲核取代反应后的反应液倾入去离子水中，析出后过滤，滤饼干燥得4-硫取代鬼臼毒素类衍生物粗产物，所述去离子水的体积可以为亲核取代后的反应液体积的20～50倍。
进一步，还包括将所述粗产物依次使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离，即得纯化的4-硫取代鬼臼毒素类衍生物产物。
优选的，所述硅胶柱层析分离方法包括：(1)硅胶柱层析为正相硅胶柱层析或反相硅胶柱层析，正相硅胶以低极性有机溶剂拌匀后装柱，以洗脱剂平衡，所述的洗脱剂优选是体积比为40∶1的氯仿和丙酮组成；反相硅胶以甲醇拌匀后装柱，以洗脱剂平衡，所述的洗脱剂优选是体积比为60∶1的甲醇和水组成；(2)将待分离纯化的样品以洗脱液溶解，进行上样吸附，然后用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，将样品挥干并重结晶；
优选的，所述的凝胶柱层析分离方法包括：(1)凝胶以甲醇浸泡；将处理好的凝胶装柱，以甲醇平衡；(2)将经硅胶柱层析初步分离后的样品溶于甲醇中，进行上样吸附，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液，将样品中溶剂挥干并重结晶。
体外HepG2、HeLa、HL-7702细胞活性抑制的测试表明，本发明制备的式(V)所示化合物的抗肿瘤活性较鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素的抗肿瘤活性有显著提高。试验结果表明，本发明式(V)所示化合物可制备成抗肿瘤药物，临床应用于抗肿瘤治疗。
本发明提供的抗肿瘤药物组合物，包含有效量的式(V)所示的化合物或其盐和药学上可接受的载体，即将药学上可接受用量的式(V)化合物与药学上可接受的载体配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一类适宜的药物组合物。通常该药物组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法，例如经皮给药。该药物组合物可以是片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂，或口服液或无菌胃肠外悬液等液体制剂形式。该组合物可以是大或小容量注射剂、冻干粉针、无菌粉分装等制剂形式。为了达到给药的一致性，本发明药物组合物优选为单剂形式。用于口服给药的单剂形式可以是片剂和胶囊，并可含有常规赋形剂诸如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁；崩解剂，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉乙醇酸钠或微晶纤维素，或药学上可接受的湿润剂，诸如十二烷基硫酸钠。
附图说明
图1是鬼臼毒素和4′-去甲基表鬼臼毒素的结构式；
图2是4-三氟甲基吡啶-2-硫醇、4-三氟甲基-2-巯基嘧啶、对氟苯硫酚、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇、5-苯基苯并噁唑-2-硫醇、5-甲基苯并噁唑-2-硫醇、6-氯苯并噁唑-2-硫醇、5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇、2-巯基萘、1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2-硫醇、1-苯基四氮唑-5-硫醇、3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5-硫醇、4-(4-吡啶基)噻唑-2-硫醇的结构式。
图3是本发明的式(V)化合物的结构式。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案做进一步说明。
本发明所采用原料和设备若非特指，均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
试验材料
1、鬼臼毒素和4′-去甲基表鬼臼毒素：均购自西安和霖生物工程有限公司；
2、4-三氟甲基吡啶-2-硫醇、4-三氟甲基-2-巯基嘧啶、对氟苯硫酚、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇、5-苯基苯并噁唑-2-硫醇、5-甲基苯并噁唑-2-硫醇、6-氯苯并噁唑-2-硫醇、5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇、2-巯基萘、1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2-硫醇、1-苯基四氮唑-5-硫醇、3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5-硫醇、4-(4-吡啶基)噻唑-2-硫醇均购自阿拉丁试剂。
实施例1 4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2)-鬼臼毒素(化合物1)的合成和纯化
(1)4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2)-鬼臼毒素的合成：
取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，179mg(1mmol)的4-三氟甲基吡啶-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15ml三氟乙酸为溶剂，常压搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化：
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92；分离系统：瑞士步琪(Buchi)等度快速色谱系统；色谱柱：瑞士步琪(Buchi)玻璃柱C-690，长460mm，内径15mm)或者相似极性柱分离；氯仿∶丙酮＝40∶1系统作为洗脱液，上样量2ml，流速恒流1.0ml/min：每2ml洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；氯仿∶丙酮2∶1系统作为展开剂，将Rf值0.5的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480mm，内径30mm)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6ml甲醇中，以0.6ml/min的流速上样吸附，然后用600ml甲醇以0.6ml/min的流速洗脱，每10ml洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；氯仿∶丙酮＝2∶1系统作为展开剂，将Rf值0.5的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2-硫醇)-鬼臼毒素。
化合物1 4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2-硫醇)-鬼臼毒素：白色粉末，C28H24F3NO7S
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.65(s，1H)，7.74(d，J＝8.7Hz，1H)，7.29(d，J＝8.1Hz，1H)，6.90(s，1H)，6.47(s，1H)，6.32(s，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.94(d，J＝1.1Hz，1H)，5.57(d，J＝4.2Hz，1H)，4.60(d，J＝5.5Hz，1H)，4.40-3.81(m，2H)，3.80(s，3H)，3.76(s，6H)，3.30-3.33(m，1H)，3.17(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.40，162.78，152.48(2C)，148.06，147.31，146.07，137.11，135.38，133.06，132.47，127.55，123.45(q，J＝202.5Hz)，123.35，121.15，109.88(2C)，108.20(2C)，101.48，70.68，60.67，56.17(2C)，53.35，46.21，43.64，42.48.MS-ESI：576.13[M+H]+
实施例2 4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物2)的合成和纯化
(1)4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，179mg(1mmol)的4-三氟甲基吡啶-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物2 4-β-S-(4-三氟甲基吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H22F3NO7S
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.80(d，J＝4.9Hz，1H)，7.38(d，J＝4.8Hz，1H)，6.93(s，1H)，6.48(s，1H)，6.33(s，2H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.95(d，J＝1.3Hz，1H)，5.39(d，J＝4.2Hz，1H)，4.61(d，J＝5.1Hz，1H)，4.40-3.82(m，2H)，3.80(s，3H)，3.77(s，6H)，3.3-3.28(m，1H)，3.22(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.13，172.85，159.78，152.51，148.25，147.40，137.25，135.30，132.59，126.67，120.35(d，J＝221.2Hz)，112.63，110.02，108.36，101.54，70.30，60.66，56.24，47.72，43.62，42.31，36.86.MS-ESI：577.12[M+H]+
实施例3 4-β-S-(4-三氟甲基嘧啶-2)-鬼臼毒素(化合物3)的合成和纯化
(1)4-β-S-(4-三氟甲基嘧啶-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，1472mg(8mmol)的4-(三氟甲基)-2-巯基嘧啶，真空干燥1h，在冰浴条件下以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4-β-S-(4-三氟甲基嘧啶-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物3 4-β-S-(4-三氟甲基嘧啶-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C27H23F3N2O7S
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.80(d，J＝4.9Hz，1H)，7.38(d，J＝4.8Hz，1H)，6.93(s，1H)，6.48(s，1H)，6.33(s，2H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.95(d，J＝1.3Hz，1H)，5.39(d，J＝4.2Hz，1H)，4.61(d，J＝5.1Hz，1H)，4.40-3.82(m，2H)，3.80(s，3H)，3.77(s，6H)，3.3-3.28(m，1H)，3.22(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.13，172.85，159.78，152.51(2C)，148.25，147.40，137.25，135.30，132.59，126.67，120.35(q，J＝221.2Hz)，112.63，110.02(2C)108.36(2C)，101.54，70.30，60.66，56.24(2C)，47.72，43.62，42.31，36.86.MS-ESI：563.11[M+H]+
实施例4 4-β-S-(4-三氟甲基嘧啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物4)的合成和纯化
(1)4-β-S-(5-三氟甲基嘧啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，180mg(1mmol)的4-(三氟甲基)-2-巯基嘧啶，真空干燥1h，在冰浴条件下以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4-β-S-(4-三氟甲基嘧啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物4 4-β-S-(4-三氟甲基嘧啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C26H21F3N2O7S
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.82(d，J＝4.9Hz，1H)，7.40(d，J＝4.8Hz，1H)，6.94(s，1H)，6.49(s，1H)，6.35(s，2H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.97(d，J＝1.3Hz，1H)，5.48(s，1H)，5.39(d，J＝4.2Hz，1H)，4.62(d，J＝5.1Hz，1H)，4.43-3.82(m，2H)，3.81(s，6H)，3.35-3.25(m，1H)，3.21(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.20，172.87，159.77，148.24，147.35，146.36(2C)，134.12，132.86，132.78，130.80，126.68，119.88(q，J＝205.5Hz)，112.62，110.13，109.98，108.02(2C)，101.51，70.28，56.45(2C)，47.73，43.46，42.41，36.79.MS-ESI：525.13[M+H]+
实施例5 4β-S-(4-氟苯-1)-鬼臼毒素(化合物5)的合成和纯化
(1)4β-S-(4-氟苯-1)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，127mg(1mmol)的对氟苯硫酚，真空干燥1h，在-10℃下以15ml三氟乙酸为溶剂，常压搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(4-氟苯-1)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物5 4β-S-(4-氟苯-1)-鬼臼毒素：白色粉末，C28H25FO7S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.34-7.29m，1H)，7.10-7.04(m，2H)，6.95-6.92(m，1H)，6.94(s，1H)，6.46(s，1H)，6.27(s，2H)，5.98(d，J＝1.3Hz，1H)，5.96(d，J＝1.3Hz，1H)，4.85(d，J＝4.2Hz，1H)，4.58(d，J＝5.1Hz，1H)，4.18-4.09(m，2H)，3.78(s，3H)，3.74(s，6H)3.33(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H)，3.24-3.21(m，1H).13C NMR(101MHz，CDCl3)δ174.26，162.93(d，1J＝248Hz)，152.54(2C)，148.15，147.32，138.35(d，3J＝5Hz)，137.22，135.39，132.07，130.85，127.90，124.22，115.55(d，2J＝23Hz)，114.01(d，2J＝19Hz)，109.97(2C)，108.24(2C)，101.57，69.40，60.37，56.22(2C)，49.37，43.56，41.88，37.73.MS-ESI：525.13[M+H]+
实施例6 4β-S-(4-氟苯-1)-4′去甲基表鬼臼毒素(化合物6)的合成和纯化
(1)4β-S-(4-氟苯-1)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，127mg(1mmol)的对氟苯硫酚，真空干燥1h，在15℃下以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(4-氟苯-1)-4′去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物6 4β-S-(4-氟苯-1)-4′去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H23FO7S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.30(td，J＝8.1，6.0Hz，1H)，7.13-7.03(m，2H)，6.97-6.92(m，1H)，6.93(s，1H)，6.46(s，1H)，6.29(s，2H)，5.98(d，J＝1.3Hz，1H)，5.95(d，J＝1.3Hz，1H)，5.42(s，1H)，4.84(d，J＝4.2Hz，1H)，4.57(d，J＝5.1Hz，1H)，4.17-4.15(m，2H)，3.77(s，6H)，3.32(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H)，3.27-3.15(m，1H).13C NMR(101MHz，CDCl3)δ174.36，162.83(d，1J＝249Hz)，148.15，147.29，146.39(2C)，138.39(d，3J＝8Hz)，134.09，132.26，130.8，130.7，127.93，124.25，115.5(d，2J＝23Hz)，114.05(d，2J＝21Hz)，110.0，109.97，107.93(2C)，101.58，69.43，56.46(2C)，49.41，43.45，42.03，37.73.MS-ESI：511.14[M+H]+
实施例7 4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-鬼臼毒素(化合物7)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，184mg(1mmol)的5-氟苯并噻唑-2-硫醇，真空干燥1h，在4℃以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物7 4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C29H24FNO7S2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.76(dd，J＝8.9，4.7Hz，1H)，7.45(dd，J＝7.9，2.5Hz，1H)，7.15(td，J＝8.9，2.5Hz，1H)，6.98(s，1H)，6.47(s，1H)，6.32(s，2H)，5.96(d，J＝1.0Hz，1H)，5.94(d，J＝1.0Hz，1H)，5.70(d，J＝4.3Hz，1H)，4.59(d，J＝5.2Hz，1H)，4.44-3.97(m，2H)，3.79(s，3H)，3.75(s，6H)，3.43-3.27(m，1H)，3.18(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13CNMR(101MHz，CDCl3)δ174.27，164.86(d，J＝2.9Hz)，161.25，158.81，152.58，149.27(d，J＝1.7Hz)，148.47，147.51，137.23，136.15(d，J＝11.1Hz)，135.26，132.70，126.79，122.17(d，J＝9.3Hz)，114.81，114.56，110.04(d，J＝10.3Hz)，108.27，107.92，107.65，101.68，70.73，60.74，56.25，49.86，43.69，42.55，37.11.MS-ESI：582.15[M+H]+
实施例8 4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物8)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，184mg(1mmol)的5-氟苯并噻唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物8 4β-S-(5-氟苯并噻唑-2)-4’-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C28H22FNO7S2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.77(dd，J＝8.9，4.7Hz，1H)，7.46(dd，J＝8.0，2.5Hz，1H)，7.17(td，J＝8.9，2.6Hz，1H)，6.98(s，1H)，6.48(s，1H)，6.32(s，2H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.71(d，J＝4.3Hz，1H)，5.50(s，1H)，4.60(d，J＝5.1Hz，1H)，4.43-3.88(m，2H)，3.78(s，6H)，3.42-3.28(m，1H)，3.17(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13CNMR(101MHz，CDCl3)δ174.31，164.90(d，J＝3.0Hz)，161.27，158.82，149.30，148.46，147.46，146.45，136.16(d，J＝11.1Hz)，134.15，132.91，130.72，126.81，122.17(d，J＝9.3Hz)，114.81，114.57，110.03(d，J＝2.6Hz)，107.94(d，J＝4.7Hz)，107.65，101.65，70.70，56.48，49.87，43.53，42.66，37.04.MS-ESI：568.75[M+H]+
实施例9 4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-鬼臼毒素(化合物9)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，169mg(1mmol)的5-氟苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物9 4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C29H24FNO8S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40(dd，J＝8.9，4.2Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.1，2.5Hz，1H)，7.03(dd，J＝9.1，2.6Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.50(s，1H)，6.31(s，2H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.55(d，J＝4.2Hz，1H)，4.63(d，J＝5.2Hz，1H)，4.50(dd，J＝9.1，7.4Hz，1H)，3.95(dd，J＝10.3，9.3Hz，1H)，3.81(s，3H)，3.77(s，6H)，3.43-3.33(m，1H)，3.17(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13C NMR(101MHz，CDCl3)δ173.99，165.70，158.92，155.03，148.67，148.13，147.59，146.46，142.08，134.18，132.91，130.52，126.31，112.07，111.81，110.41，110.02，107.89，105.40，105.14，101.73，70.32，60.76，56.25，49.92，43.69，42.45，36.89，29.69.MS-ESI：566.25[M+H]+
实施例10 4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物10)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，169mg(1mmol)的5-氟苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15ml三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物10 4β-S-(5-氟苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C28H22FNO8S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.40(dd，J＝8.9，4.2Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.2，2.5Hz，1H)，7.02(dd，J＝9.1，2.6Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.50(s，1H)，6.31(s，2H)，5.99(d，J＝1.3Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.55(d，J＝4.2Hz，1H)，5.44(s，1H)，4.62(d，J＝5.2Hz，1H)，4.48(dd，J＝9.1，7.4Hz，1H)，3.95(dd，J＝10.3，9.3Hz，1H)，3.79(s，6H)，3.43-3.31(m，1H)，3.17(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13C NMR(101MHz，CDCl3)δ173.99，165.70，158.92，155.03，148.67，148.13，147.59，146.46，142.08，134.18，132.91，130.52，126.31，112.07，111.81，110.41，110.02，107.89，105.40，105.14，101.73，70.30，56.46，49.92，43.53，42.56，36.82.MS-ESI：552.68[M+H]+
实施例11 4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素(化合物11)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，1816mg(8mmol)的5-苯基苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在-10℃下以15mL三氟乙酸为溶剂，常压搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物11 4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C35H29FNO8S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.78(t，J＝1.0Hz，1H)，7.61-7.57(m，2H)，7.52(d，J＝1.1Hz，2H)，7.46(t，J＝7.6Hz，2H)，7.41-7.34(m，1H)，7.02(s，1H)，6.50(s，1H)，6.32(s，2H)，5.99(d，J＝1.1Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.60(d，J＝4.2Hz，1H)，4.63(d，J＝5.2Hz，1H)，4.55-3.98(m，2H)，3.81(s，3H)，3.77(s，6H)，3.46-3.34(m，1H)，3.21(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.01，164.32，152.64，151.35，148.64，147.62，141.90，140.73，138.66，137.28，135.10，132.72，128.91，127.41，126.45，124.10，116.97，110.29，109.91，108.22，101.74，70.42，60.77，56.25，49.83，43.71，42.46，36.95.MS-ESI：664.61[M+Na]+
实施例12 4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物12)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，227mg(1mmol)的5-苯基苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在20℃下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物12 4β-S-(5-苯基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C34H27FNO8S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.78(t，J＝1.0Hz，1H)，7.61-7.57(m，2H)，7.52(d，J＝1.1Hz，2H)，7.46(t，J＝7.6Hz，2H)，7.41-7.34(m，1H)，7.02(s，1H)，6.50(s，1H)，6.32(s，2H)，5.99(d，J＝1.1Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.60(d，J＝4.2Hz，1H)，4.63(d，J＝5.2Hz，1H)，4.55-3.98(m，2H)，3.81(s，3H)，3.77(s，6H)，3.46-3.34(m，1H)，3.21(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.01，164.32，152.64，151.35，148.64，147.62，141.90，140.73，138.66，137.28，135.10，132.72，128.91，127.41，126.45，124.10，116.97，110.29，109.91，108.22，101.74，70.42，60.77，56.25，49.83，43.71，42.46，36.95.MS-ESI：664.61[M+Na]+
实施例13 4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素(化合物13)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，1320mg(8mmol)的5-甲基苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在-10℃下以15mL三氟乙酸为溶剂，常压搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物13 4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C30H27FNO8S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.39-7.27(m，2H)，7.09(dd，J＝8.3，1.1Hz，1H)，7.00(s，1H)，6.48(s，1H)，6.31(s，2H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.96(d，J＝1.2Hz，1H)，5.56(d，J＝4.2Hz，1H)，4.61(d，J＝5.2Hz，1H)，4.5-3.96(m，2H)，3.80(s，3H)，3.76(s，6H)，3.43-3.30(m，1H)，3.19(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H)，2.45(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.02，163.54，152.62，150.06，148.59，147.58，141.44，137.32，135.13，134.58，132.68，126.56，125.51，118.48，110.04，109.53，108.27，101.70，70.39，60.74，56.24，49.63，43.71，42.41，36.94.MS-ESI：562.15[M+H]+
实施例14 4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物14)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，165mg(1mmol)的5-甲基苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物14 4β-S-(5-甲基苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C29H25FNO8S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.41-7.29(m，2H)，7.10(dd，J＝8.3，1.5Hz，1H)，7.00(s，1H)，6.49(s，1H)，6.32(s，2H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.56(d，J＝4.2Hz，1H)，5.44(s，1H)，4.61(d，J＝5.1Hz，1H)，4.49-3.93(m，2H)，3.79(s，6H)，3.45-3.28(m，1H)，3.18(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H)，2.46(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.09，163.58，152.34，150.06，148.58，147.54，146.46，141.44，134.59，134.16，132.86，130.63，126.57，125.51，118.48，110.03，109.53，107.91，101.67，70.37，56.46，49.64，43.55，42.53，36.87.MS-ESI：548.32[M+H]+
实施例15 4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-鬼臼毒素(化合物15)的合成和纯化
(1)4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，201mg(1mmol)6-氯苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物15 4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C29H24ClNO7S2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.43(m，2H)，7.30(dd，J＝8.3，2.1Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.48(s，1H)，6.30(s，2H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.96(d，J＝1.2Hz，1H)，5.53(d，J＝4.2Hz，1H)，4.61(d，J＝5.2Hz，1H)，4.49(dd，J＝9.1，7.4Hz，1H)，3.95(dd，J＝10.3，9.3Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.75(s，6H)，3.41-3.32(m，1H)，3.18(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ173.87，164.54，152.64，151.89，148.69，147.64，140.07，137.37，135.01，132.74，130.23，126.28，125.31，118.86，110.88，110.03，108.28，101.74，70.29，60.74，56.30，50.02，43.68，42.44，36.90.MS-ESI：583.14[M+H]+
实施例16 4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物16)的合成和纯化
(1)4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，1472mg(8mmol)6-氯苯并噁唑-2-硫醇，真空干燥1h，在-10℃下以15mL三氟乙酸为溶剂，常压搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物16 4β-S-(6-氯苯并恶唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C28H22ClNO7S2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.53-7.42(m，2H)，7.30(dd，J＝8.3，2.2Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.49(s，1H)，6.31(s，2H)，5.99(d，J＝1.3Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.53(d，J＝4.2Hz，1H)，5.46(s，1H)，4.61(d，J＝5.2Hz，1H)，4.47(dd，J＝9.1，7.4Hz，1H)，3.95(dd，J＝10.3，9.3Hz，1H)，3.78(s，6H)，3.44-3.29(m，1H)，3.17(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ173.94，164.58，151.89，148.69，147.60，146.49，140.07，134.23，132.93，130.52，130.24，126.29，125.31，118.86，110.89，110.02，107.94，101.72，70.27，56.44，50.03，43.53，42.55，36.83.MS-ESI：569.21[M+H]+
实施例17 4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-鬼臼毒素(化合物17)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，216mg(1mmol)5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物17 4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C30H26F2N2O8S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.97(d，J＝20.4Hz，1H)7.56-7.53，7.26-7.24(m，1H)，7.11，7.39(dd，1H)，7.03-6.99(m，1H)，6.99(s，1H)，6.67-6.48(m，1H)，6.46(s，1H)，6.30(s，2H)，5.96(d，J＝1.1Hz，1H)，5.94(d，J＝1.1Hz，1H)，5.71(d，J＝3.5Hz，1H)，4.60(d，J＝5.2Hz，1H)，4.43(t，J＝7.6Hz，1H)，3.90(t，J＝9.7Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.73(s，6H)，3.45-3.29(m，1H)，3.21(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.82，152.51，150.94，150.20，148，.37，147.45，146.63，143.78，141.09，136.93，135.31，134.91，132.40，127.11，118.88，118.45，116.29，116.21，115.89，115.18，113.89，110.59，110.00，109.84，109.43，108.03，102.43，101.62，70.80，60.72，56.12，53.388，48.79，43.69，42.54，36.95.MS-ESI：635.34[M+Na]+
实施例18 4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物18)的合成和纯化
(1)4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，216mg(1mmol)5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL甲磺酰氯为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物18 4β-S-(5-二氟甲氧基苯并咪唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C29H24F2N2O8S
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ12.91(s，1H)，8.35(s，1H)，7.58-7.56，(m，1H)，7.45-7.43(m，1H)，7.10(s，1H)，7.02(s，1H)，6.99(s，1H)，6.20(s，2H)，5.78(d，J＝1.1Hz，1H)，5.77(d，J＝1.1Hz，1H)，5.66(d，J＝3.5Hz，1H)，4.55(d，J＝5.2Hz，1H)，4.40-3.86(m，1H)，3.67(s，6H)，3.45-3.29(m，1H)，3.21(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H).13C NMR(75MHz，CDCl3)δ174.38，151.93，151.13，147.85，147.48，146.93，146.58，144.11，141.32，135.88，135.03，133.36，133.15，130.74，128.22，118.46，117.31，114.75，114.07，111.52，110.19，109.84，109.40，108.77，108.39，102.01，101.77，70.42，56.32，48.73，43.12，41.95，31.04.MS-ESI：621.13[M+Na]+
实施例19 4β-S-(萘-2)-鬼臼毒素(化合物19)的合成和纯化
(1)4β-S-(萘-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，160mg(1mmol)2-巯基萘，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(萘-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物19 4β-S-(萘-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C32H28O7S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.86-7.69(m，4H)，7.57-7.40(m，3H)，7.03(s，1H)，6.47(s，1H)，6.31(s，2H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.95(d，J＝1.3Hz，1H)，4.97(d，J＝4.3Hz，1H)，4.59(d，J＝5.2Hz，1H)，4.39-4.09(m，2H)，3.79(s，3H)，3.75(s，6H)，3.41(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H)，3.31-3.19(m，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.49，152.54，148.05，147.30，137.20，135.58，133.70，133.32，132.10，132.06，129.18，128.51，127.82，127.45，127.11，127.05，127.04，126.39，110.06，108.31，101.56，69.58，60.75，56.26，49.64，43.68，42.01，38.01.MS-ESI：586.14[M+K]+
实施例20 4β-S-(萘-2)-4′去甲基表鬼臼毒素(化合物20)的合成和纯化
(1)4β-S-(萘-2)-4′去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，160mg(1mmol)2-巯基萘，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL甲磺酰氯为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(萘-2)-4′去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物20 4β-S-(萘-2)-4′-去甲基鬼臼毒素：白色粉末，C31H26O7S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.82-7.73(m，4H)，7.58-7.39(m，3H)，7.03(s，1H)，6.47(s，1H)，6.32(s，2H)，5.98(d，J＝1.1Hz，1H)，5.94(d，J＝1.1Hz，1H)，5.45(s，1H)，4.96(d，J＝4.3Hz，1H)，4.58(d，J＝5.2Hz，1H)，4.33-4.12(m，2H)，3.77(s，6H)，3.40(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H)，3.30-3.17(m，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.57，152.73，148.04，147.25，146.39，134.08，133.70，133.36，132.15，132.10 131.06，129.17，128.53，127.82，127.46，127.11，127.04，126.38，110.12，109.98，107.99，101.54，69.58，56.48，49.67，43.52，42.12，37.94.MS-ESI：599.52[M+K]+
实施例21 4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-鬼臼毒素(化合物21)的合成和纯化
(1)4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，151mg(1mmol)1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物21 4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C28H25N3O7S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.23(s，1H)，8.08(d，J＝7.9Hz，1H)，7.30(s，1H)，6.95(s，1H)，6.47(s，1H)，6.30(s，2H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.73(d，J＝3.9Hz，1H)，4.59(d，J＝5.1Hz，1H)，4.46-3.85(m，2H)，3.80(s，3H)，3.75(s，6H)，3.44-3.27(m，1H)，3.15(dd，J＝13.8，5.1Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ175.08，159.38，150.22，148.57，147.48，147.21，136.45，134.54，133.20，132.44，130.58，126.70，124.62，117.74，109.53，109.47，108.04，101.69，70.57，55.37，49.11，43.31，42.19，37.18.MS-ESI：570.53[M+Na]+
实施例22 4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物22)的合成和纯化
(1)4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，151mg(1mmol)1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物22 4β-S-(1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C27H23N3O7
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ8.37(d，J＝5.6Hz，1H)，8.22(dd，J＝8.0，1.0Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.0，5.7Hz，1H)，7.02(s，1H)，6.47(s，1H)，6.34(s，2H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.77(d，J＝4.0Hz，1H)，4.60(d，J＝5.2Hz，IH)，4.50-3.93(m，2H)，3.73(s，6H)，3.51-3.35(m，1H)，3.33(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CD3OD)δ175.08，159.38，150.22，148.57，147.48，147.21，136.45，134.54，133.20，132.44，130.58，126.70，124.62，117.74，109.53，109.47，108.04，101.69，70.57，55.37，49.11，43.31，42.19，37.18.MS-ESI：556.41[M+Na]+
实施例23 4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-鬼臼毒素(化合物23)的合成和纯化
(1)4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，178mg(1mmol)1-苯基四氮唑-5-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟化硼乙醚为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物23： 4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-鬼臼毒素：白色粉末，C29H26N4O7S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.63-7.46(m，5H)，6.92(s，1H)，6.46(s，1H)，6.27(s，2H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.94(d，J＝1.1Hz，1H)，5.70(d，J＝4.2Hz，1H)，4.58(d，J＝5.5Hz，1H)，4.57-3.81(m，2H)，3.79(s，3H)，3.74(s，6H)，3.46-3.32(m，1H)，3.15(dd，J＝13.8，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ173.78，153.41，152.65，148.81，147.62，137.29，134.80，133.23，132.86，130.48，129.99，126.02，123.57，110.05，108.10，101.80，76.72，70.47，60.76，56.18，51.00，43.64，42.43，36.90.MS-ESI：575.12[M+H]+
实施例24 4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物24)的合成和纯化
(1)4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，178mg(1mmol)1-苯基四氮唑-5-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-4′-去甲基表鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物24 4β-S-(1-苯基四氮唑-5)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C28H24N4O7S
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60-7.50(m，5H)，6.92(s，1H)，6.46(s，1H)，6.27(s，2H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.69(d，J＝4.2Hz，1H)，4.62-4.48(m，2H)，3.84-3.79(m，1H)，3.77(s，6H)，3.43-3.32(m，1H)，3.13(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ173.85，153.45，148.79，147.57，146.50，134.21，133.25，133.06，130.47，130.30，129.99，126.04，123.59，110.03，107.80，101.78，77.05，76.73，70.46，56.45，51.01，43.49，42.55，36.84.MS-ESI：561.41[M+H]+
实施例25 4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-鬼臼毒素(化合物25)的合成和纯化
(1)4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，265mg(1mmol)3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟化硼乙醚为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-鬼臼毒素：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物25 4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-鬼臼毒素：白色粉末，C30H27KN2O7S3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.70-7.64(m，2H)，7.55-7.41(m，3H)，6.94(s，1H)，6.48(s，1H)，6.25(s，2H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.32(d，J＝4.1Hz，1H)，5.28(s，1H)，4.59(d，J＝5.1Hz，1H)，4.47-4.03(m，2H)，3.78(s，3H)，3.73(s，6H)，3.31-3.19(m，1H)，3.14(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ185.55，173.65，154.97，152.63，148.83，147.69，138.15，137.38，134.85，132.92，129.45，129.24，125.81，125.73，110.12，109.97，108.25，101.84，70.27，60.73，56.30，50.22，43.55，42.45，36.94.MS-ESI：681.13[M+H]+
实施例26 4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-4′-去甲基表鬼臼毒素((化合物26)的合成和纯化
(1)4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，265mg(1mmol)3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-4′-去甲基表鬼臼毒素：使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物26 4β-S-(3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5)-4′-去甲基表鬼臼素毒：白色粉末，C29H25KN2O7S3
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.72-7.64(m，2H)，7.55-7.41(m，3H)，6.93(s，1H)，6.47(s，1H)，6.26(s，2H)，5.99(d，J＝1.2Hz，1H)，5.98(d，J＝1.2Hz，1H)，5.44(s，1H)，5.32(d，J＝4.1Hz，1H)，5.29(s，1H)，4.59(d，J＝5.1Hz，1H)，4.47-4.03(m，2H)，3.76(s，6H)，3.29-3.19(m，1H)，3.12(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ185.57，173.72，155.00，148.82，147.64，146.45，138.16，134.25，133.10，130.34，129.46，129.25，125.77，110.13，109.91，107.91，101.82，70.25，56.51，50.24，43.39，42.55，36.88.MS-ESI：667.01[M+H]+
实施例27 4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-鬼臼毒素(化合物27)的合成和纯化
(1)4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-鬼臼毒素的合成：取414mg(1mmol)的鬼臼毒素，194mg(1mmol)4-(4-吡啶基)噻唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-鬼臼毒素：使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物27 4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-鬼臼毒素：白色粉末，C30H28N2O7S2
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝5.9Hz，2H)，7.72(d，J＝1.6Hz，1H)，7.71(d，J＝1.5Hz，1H)，7.64(s，1H)，6.99(s，1H)，6.48(s，1H)，6.32(s，2H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.57(d，J＝4.2Hz，1H)，4.61(d，J＝5.2Hz，1H)，4.48-4.04(m，2H)，3.79(s，3H)，3.76(s，6H)，3.41-3.31(m，1H)，3.22(dd，J＝13.7，5.2Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.24，164.72，152.59，152.36，150.47，148.45，147.49，140.44，137.32，135.28，132.56，127.00，120.27，116.41，110.13，110.00，108.38，101.68，70.69，60.75，56.33，50.63，43.67，42.45，37.26，MS-ESI：593.13[M+H]+
实施例28 4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素(化合物28)的合成和纯化
(1)4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素的合成：取400mg(1mmol)的4′-去甲基表鬼臼毒素，194mg(1mmol)4-(4-吡啶基)噻唑-2-硫醇，真空干燥1h，在冰浴条件下以15mL三氟乙酸为溶剂，真空搅拌1～3h，以氯仿丙酮为展开剂，检测反应终点。将反应体系加入到20～50倍体积的去离子水中，过滤收集滤饼，洗涤干燥即得粗产物。
(2)分离和纯化4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物28 4β-S-(4-(4-吡啶基)噻唑-2)-4′-去甲基表鬼臼毒素：白色粉末，C29H26N2O7S2，
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝5.9Hz，2H)，7.72(d，J＝1.6Hz，1H)，7.71(d，J＝1.5Hz，1H)，7.64(s，1H)，6.99(s，1H)，6.48(s，1H)，6.32(s，2H)，5.97(d，J＝1.2Hz，1H)，5.95(d，J＝1.2Hz，1H)，5.72(s，1H)，5.57(d，J＝4.2Hz，1H)，4.61(d，J＝5.2Hz，1H)，4.47-4.04(m，2H)，3.79(s，6H)，3.42-3.30(m，1H)，3.21(dd，J＝13.7，5.1Hz，1H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ174.31，164.76，152.40，150.50，148.44，147.44，146.51，140.42，134.30，132.78，130.69，127.02，120.27，116.33，110.05，108.06，101.66，70.68，56.55，50.66，43.51，42.58，37.18.MS-ESI：579.24[M+H]+
试验例1本发明实施例制备的化合物抑制肿瘤细胞的活性试验
一、试验材料
1、供试化合物：实施例1～28所制备的化合物，分别编号为化合物1-28；
2、对照化合物：鬼臼毒素和4′-去甲基表鬼臼毒素，购自西安和霖生物工程有限公司，纯度98％；依托泊苷；
3、细胞株：HepG2、HeLa细胞株以及人正常肝细胞HL-7702，购自武汉博士得生物科技有限公司；
二、试验方法
将对数生长期的HepG2、HeLa细胞株以及人正常肝细胞HL-7702，1000rpm离心5分钟，弃上清，适量培养基悬浮，调整细胞浓度至3.5×104个/孔，将细胞接种于96孔培养板中，设置以下实验组别：
1个阴性对照组；28个同浓度的试验组(即：化合物1-化合物28组)；3个对照组：鬼臼毒素组、4′-去甲基表鬼臼毒素组和依托泊苷组。
每孔0.10mL细胞，用含有10％小牛血清的RPMI1640作为培养液，37℃、5％CO2及饱和湿度下培养24h接近长满时，弃去培养液，28个试验组分别加入含有同样量的化合物1-28的10％小牛血清的RPMI1640培养液0.10M；鬼臼毒素组、4′-去甲基表鬼臼毒素组和依托泊苷组分别加入含有鬼臼毒素、4′-去甲基表鬼臼毒素或依托泊苷的10％小牛血清的RPMI1640培养液0.10M；鬼臼毒素、4′-去甲基表鬼臼毒素或依托泊苷的用量与化合物1-28的用量完全相同；阴性对照组加入终浓度为0.5％DMSO：各组均设3个复孔，继续培养48h，每孔加入5mg/ml的MTT 10μL，37℃放置4h。每孔加入100μl DMSO，37℃摇床振荡30min，492nm测吸光度(OD)，计算MTT比值＝药物组OD值/阴性对照组OD值。
三、试验结果
试验结果见表1，由表1可知，化合物1-28对HepG2、HeLa和HL-7702细胞株的抗肿瘤活性较鬼臼毒素、4′-去甲基表鬼臼毒素以及目前已做为抗肿瘤药物上市的鬼臼毒素类衍生物依托泊苷抗肿瘤活性均有明显提高；其中化合物8-10对HL-7702细胞株的毒性较鬼臼毒素、4′-去甲基表鬼臼毒素以及依托泊苷的毒性有显著降低。
表14-硫取代鬼臼毒素类衍生物对体外肿瘤株以及对正常细胞株的IC50值
经活性评价后，筛选出8和10两个低毒化合物，对这两个化合物通过添加新的正常细胞株：人宫颈永生化细胞H8、人胚胎肺细胞MRC-5、人乳腺上皮细胞HMEC及对应的肿瘤细胞：人肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MCF7对化合物的毒性和活性进一步考察。
由表2可知，化合物8和10对A549、MCF7细胞株的抗肿瘤活性较依托泊苷有明显提高，对正常细胞株H8、MRC-5及HMEC的毒性较依托泊苷有显著降低。
表2化合物8和10对体外肿瘤株以及对正常细胞株的IC50值

Claims (10)

1.一种式(V)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，R1选自
R2为氢或-CH3。
2.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
通过亲核取代反应，将反应单体引入到鬼臼毒素的C环4位或引入到4′-去甲基表鬼臼毒素的C环4位，所述反应单体可以为4-三氟甲基吡啶-2-硫醇、4-三氟甲基-2-巯基嘧啶、对氟苯硫酚、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇、5-苯基苯并噁唑-2-硫醇、5-甲基苯并噁唑-2-硫醇、6-氯苯并噁唑-2-硫醇、5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇、2-巯基萘、1H-咪唑并[4，5-B]吡啶-2-硫醇、1-苯基四氮唑-5-硫醇、3-苯基-1，3，4-噻二唑-2(3H)硫酮钾盐-5-硫醇或4-(4-吡啶基)噻唑-2-硫醇。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的亲核取代反应在以下条件下进行：将鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素溶于有机溶剂中，再加入所述反应单体，搅拌，所述有机溶剂可以为亲核试剂，所述亲核试剂可以选自三氟乙酸、甲磺酰氯或三氟化硼乙醚。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，鬼臼毒素或4′-去甲基表鬼臼毒素与所述反应单体的摩尔比为1∶1～10，例如1∶1～8，又如1∶1。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述亲核取代反应温度为-20～40℃，例如-20～20℃。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述亲核取代反应温度为-10～10℃，例如0～10℃。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，还包括：将亲核取代反应后的反应液倾入去离子水中，析出后过滤，滤饼干燥得4-硫取代鬼臼毒素类衍生物粗产物，所述去离子水的体积可以为亲核取代后的反应液体积的20～50倍。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，还包括：将所述粗产物依次使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离，即得纯化的4-硫取代鬼臼毒素类衍生物产物。
9.权利要求1所述化合物或其盐在制备抗肿瘤药物中的用途。
10.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，包含有效量的权利要求1所述的化合物或其盐和药学上可接受的载体。
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