CN111454308A - 替尼泊苷类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
公开了替尼泊苷类衍生物及其合成方法和应用，将具有低毒性的芳香杂环化合物，如5‑氟‑苯并噻唑‑2‑巯醇、5‑氟‑苯并恶唑‑2‑巯醇以酯键或是酰胺键引入到替尼泊苷糖环的2"、3"位，得到抗肿瘤活性显著提高、毒副作用降低的式(V)所示的替尼泊苷类衍生物。体外肿瘤细胞活性抑制实验表明，本发明式(V)所示化合物在抗肿瘤活性与替尼泊苷活性相当的基础上其毒副作用较替尼泊苷的有显著降低。
Description
技术领域
本发明属于替尼泊苷类衍生物领域，具体涉及替尼泊苷类衍生物及其制备方法，本发明还涉及所述替尼泊苷类衍生物在制备抗肿瘤药物中的用途。
背景技术
替尼泊苷(Teniposide)系鬼臼毒素的半合成糖苷类衍生物，其结构如下
上述化合物是由美国百时美施贵宝公司研发的抗肿瘤药物，其通过作用于DNA拓扑异构酶II使肿瘤细胞的DNA断裂而达到治疗肿瘤的目的。但因强烈的毒副作用和生物利用度差等缺点，限制了它们在临床的应用。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷，对替尼泊苷进行修饰，提供一类具有良好抗肿瘤活性的替尼泊苷类衍生物及其制备方法和应用。
为达到本发明的目的，本发明的替尼泊苷衍生物的结构式如(V)所示：
其中，X和Y可以各自独立地是-O-、-COO-或-CONH-；
R1和R2各自独立地选自
其中R4为F、Cl、Br；
R3为氢或
进一步地，在本发明的一些实施例中，R1和R2各自独立地选自
R3为氢。
进一步地，本发明还提供了制备上述式(V)所示化合物的方法，包括但不限于以下步骤：
在替尼泊苷糖环的2″位或3″位通过酯化反应以单酯化修饰引入单体；
或在替尼泊苷糖环的2″位和3″位通过酯化反应以双酯化修饰引入单体；
或在替尼泊苷糖环的2″位将羟基修饰成氨基后在通过酰化反应以酰胺化修饰引入单体；
或在替尼泊苷糖环的2″位将羟基修饰成氨基后通过酰化反应以酰胺化修饰引入单体，3″位通过亲核取代反应以酯化修饰引入单体。
优选地，步骤(1)完成后，旋蒸反应液得替尼泊苷类衍生物粗产物。
优选地，纯化步骤(2)所得的粗产物。
进一步地，所述单体选自噻吩-2-硫醇、噻二唑-2-硫醇、4-三氟甲基吡啶-2-硫醇、4-三氟甲基-2-巯基嘧啶、对氟苯硫酚、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇、5-苯基苯并噁唑-2-硫醇、5-甲基苯并噁唑-2-硫醇、6-氯苯并噁唑-2-硫醇、5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇、2-巯基萘或1-苯基四氮唑-5-硫醇。
根据本发明的一些实施方式，所述酯化反应的反应条件可以包括但不限于：将替尼泊苷溶于有机溶剂例如二氯甲烷中，再加入所述反应单体和脱水剂和/或催化剂，搅拌。
根据本发明的一些实施方式，所述脱水剂可以为DCC(二环己基碳二亚胺)或EDCI(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐)；催化剂为DMAP(4-二甲氨基吡啶)。
本发明中，在酯化反应中，替尼泊苷与所述反应单体的摩尔比可以为1∶1～5。
本发明中，所述酯化反应温度可以为25～35℃，优选为28～30℃。
根据本发明的一些实施方式，所述纯化方法包括但不限于：依次使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化所得粗产物，即得纯化的替尼泊苷类衍生物产物。
进一步地，根据本发明的一些实施方式，所述硅胶柱层析分离方法包括：(1)硅胶柱层析为正相硅胶柱层析或反相硅胶柱层析，正相硅胶以低极性有机溶剂拌匀后装柱，以洗脱剂平衡；反相硅胶以甲醇拌匀后装柱，以洗脱剂平衡；(2)将待分离纯化的样品以洗脱液溶解，进行上样吸附，然后用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，将样品挥干并重结晶。
进一步地，根据本发明的一些实施方式，所述硅胶柱层析为正相硅胶柱层析时，所述的洗脱剂可以是由体积比为8∶1的氯仿和丙酮组成；所述硅胶柱层析为反相硅胶柱层析时，所述的洗脱剂可以是由体积比为15∶7的甲醇和水组成。
进一步地，根据本发明的一些实施方式，所述凝胶柱层析分离方法包括但不限于：(1)凝胶以甲醇浸泡；将处理好的凝胶装柱，以甲醇平衡；(2)将经硅胶柱层析初步分离后的样品溶于甲醇中，进行上样吸附，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液，将样品中溶剂挥干并重结晶。
本发明还提供了一种所述替尼泊苷衍生物的应用，即所述替尼泊苷衍生物或其盐在制备治疗抗肿瘤药物中的应用。
具体的，本发明所述替尼泊苷衍生物或其盐应用于制备治疗抗肿瘤的药物中时，所述药物包括有效量的式(V)所示的化合物或其盐和药学上可接受的载体，即将药学上可接受用量的式(V)化合物与药学上可接受的载体配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一类适宜的药物组合物。通常该药物组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法，例如经皮给药。该药物组合物可以是片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂，或口服液或无菌胃肠外悬液等液体制剂形式。该组合物可以是大或小容量注射剂、冻干粉针、无菌粉分装等制剂形式。为了达到给药的一致性，本发明药物组合物优选为单剂形式。用于口服给药的单剂形式可以是片剂和胶囊，并可含有常规赋形剂诸如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁；崩解剂，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉乙醇酸钠或微晶纤维素，或药学上可接受的湿润剂，如十二烷基硫酸钠。
体外HepG2、HeLa、A549、MCF-7、HL-7702、MRC-5、HMEC、H-8细胞活性抑制的测试表明，本发明制备的式(V)所示化合物较替尼泊苷抗肿瘤活性显著提高，在抗肿瘤活性与替尼泊苷活性相当的基础上其毒副作用较替尼泊苷的有显著降低，可制备成抗肿瘤药物，临床应用于抗肿瘤治疗。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。应当理解，以下描述仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
短语“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显只指单数形式。
本发明所描述的术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不是必须针对相同的实施例或示例。而且，本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
本发明所采用原料和设备若非特指，均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
试验材料
1、替尼泊苷：购自湖北楚盛威化工有限公司；
2、4′-去甲基表鬼臼毒素：购自西安和霖生物工程有限公司；
3、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇：购自阿拉丁试剂；
4、无水K2CO3、HCl、碳酸氢钠、氯化钠、硫酸铜、五水合硫酸铜、无水硫酸镁、锌粉、硅藻土、无水氯化锌：购自武汉格奥瑞艾杰特科技有限公司
5、THF、溴代乙酸、乙酸乙酯、1-羟基苯并三唑HOBt、1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺EDCI、二氯甲烷、N，N-二异丙基乙胺DIPEA、氯仿、丙酮、NaN3、Tf2O、氨基葡萄糖盐酸盐、甲醇、吡啶、正己烷、乙腈、1，3，4，6-四-O-乙酰-2-叠氮-脱氧-吡喃葡萄糖、氢溴酸-醋酸、
BF3·Et2O、石油醚：均购自武汉泰晟生物科技有限公司。
取代基定义与上文相同，下面实施例显示了具体化合物及其制备方法。
实施例1 3″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷(化合物1)的合成和纯化
(1)3″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷的合成
1)将1.85g(10mmol)5-F苯并噻唑-2-巯基，3equiv.(当量)的无水K2CO3溶于THF，室温搅拌10min，加入1.8equiv.的溴代乙酸，搅拌过夜。反应结束，将反应液倒入盛有冰块的烧杯中，慢慢加入1N HCl溶液使pH调至4，乙酸乙酯萃取，200mL饱和碳酸氢钠洗，200mL饱和氯化钠洗，收集有机层，减压蒸干。共得产物2.22g，收率92％；
2)将5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸222mg(1.5mmol)，替尼泊苷656mg(1mmol)，1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺EDCI 229mg(1.2mmol)，1-羟基苯并三唑HOBt 162mg(2mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，加入100mL二氯甲烷，室温搅拌，加入3equiv.的N，N-二异丙基乙胺DIPEA，搅拌5h，反应结束，加入200mL饱和碳酸氢钠洗，收集有机层，加入200mL饱和氯化钠洗。收集有机层，减压蒸干得粗产物；
(2)3″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷的硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化
(A)用正相硅胶柱(正相硅胶：中国青岛海洋化工有限公司，HG/T2354-92)分离系统：瑞士步琪(Buchi)等度快速色谱系统；色谱柱：瑞士步琪(Buchi)玻璃柱C-690，长460mm，内径15mm或者相似极性柱分离；氯仿∶丙酮＝8∶1系统作为洗脱液，上样量2ml，流速恒流1.0mL/min；每2ml洗脱液作为一个馏分进行收集。用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；氯仿∶丙酮＝8∶1系统作为展开剂，将Rf值0.4的馏分进行合并；将合并后的样品真空干燥，避光条件下保存于4℃的冰箱中作为供纯化样品。
(B)用凝胶柱层析(凝胶：Sephadex LH-20；分离柱：玻璃柱，长480mm，内径30mm)分离；将处理好的Sephadex LH-20凝胶湿法装柱，以甲醇平衡。将待纯化样品溶于6ml甲醇中，以2.5mL/min的流速上样吸附，然后用600ml甲醇以2.5mL/min的流速洗脱，每10mL洗脱液收集1瓶，用正相硅胶薄层(德国莫克高效硅胶薄层)或相似极性薄层检视各馏分；氯仿∶丙酮＝8∶1系统作为展开剂，将Rf值0.4的馏分进行合并；真空干燥后所得的白色粉末状样品为3″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷，共132mg，得率为15％。
化合物1：3″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷，白色粉末，C41H36FNO14S3
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.26(s，1H)，78.00-7.91(m，1H)，7.84(dd，J＝8.9，4.8Hz，1H)，7.61-7.48(m，1H)，7.34(td，J＝9.0，2.6Hz，1H)，7.19(d，J＝2.8Hz，1H)，7.03(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.41(s，1H)，6.10(s，2H)，6.01(s，1H)，5.91(d，J＝23.9Hz，2H)，5.75(s，1H)，5.40(d，J＝5.7Hz，1H)，4.91(d，J＝3.2Hz，1H)，4.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.34(d，J＝5.3Hz，1H)，4.21-4.32(m，3H)，4.06(d，J＝14.9Hz，1H)，3.76-3.92(m，2H)，3.46-3.68(m，10H)，3.06(dd，J＝14.2，5.4Hz，1H)，2.79-2.97(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.83，166.75，148.38，148.18，147.57，146.58，140.65，135.14，133.14，130.55，128.79，126.87，126.56，111.41，110.40，110.10，108.75，105.50，101.75，100.22，97.94，81.47，72.98，70.21，68.21，67.97，66.22，57.44，56.36，43.36，40.47，40.30，40.13，39.96，39.83，39.80，39.55，37.61，36.68，30.06.MS(ESI)：880.36[M-H]-.
实施例2 3″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷(化合物2)的合成和纯化
(1)3″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷的化学合成
1)将1.85g(10mmol)5-F苯并噁唑-2-巯基，3equiv.的无水K2CO3溶于THF，室温搅拌10min，加入1.8equiv.的溴代乙酸，搅拌过夜。反应结束，将反应液倒入盛有冰块的烧杯中，慢慢加入1N HCl溶液使pH调至4，乙酸乙酯萃取，200mL饱和碳酸氢钠洗，200mL饱和氯化钠洗，收集有机层，减压蒸干。共得产物2.22g，收率92％。
2)将5-氟-苯并噁唑-2-硫-乙酸222mg(1.5mmol)，替尼泊苷656mg(1mmol)，1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺EDCI 229mg(1.2mmol)，1-羟基苯并三唑HOBt 162mg(2mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，加入100mL二氯甲烷，室温搅拌，加入3equiv.的N，N-二异丙基乙胺DIPEA，搅拌5h，反应结束，加入200mL饱和碳酸氢钠洗，收集有机层，加入200mL饱和氯化钠洗。收集有机层，减压蒸干，氯仿∶丙酮＝8∶1过柱分离，Rf＝0.4，收集粗产物，制备液相进一步纯化，甲醇∶水＝15∶7，流速2.5mL/min，得到白色固体132mg，收率15％。
(2)3″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷的硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物2：3″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷，白色粉末，C41H36FNO15S2
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.26(s，1H)，78.00-7.91(m，1H)，7.84(dd，J＝8.9，4.8Hz，1H)，7.61-7.48(m，1H)，7.34(td，J＝9.0，2.6Hz，1H)，7.19(d，J＝2.8Hz，1H)，7.03(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.41(s，1H)，6.10(s，2H)，6.01(s，1H)，5.91(d，J＝23.9Hz，2H)，5.75(s，1H)，5.40(d，J＝5.7Hz，1H)，4.91(d，J＝3.2Hz，1H)，4.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.34(d，J＝5.3Hz，1H)，4.21-4.32(m，3H)，4.06(d，J＝14.9Hz，1H)，3.76-3.92(m，2H)，3.46-3.68(m，10H)，3.06(dd，J＝14.2，5.4Hz，1H)，2.97-2.79(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.83，166.75，148.38，148.18，147.57，146.58，140.65，135.14，133.14，130.55，128.79，126.87，126.56，111.41，110.40，110.10，108.75，105.50，101.75，100.22，97.94，81.47，72.98，70.21，68.21，67.97，66.22，57.44，56.36，43.36，40.47，40.30，40.13，39.96，39.83，39.80，39.55，37.61，36.68，30.06.MS(ESI)：864.25[M-H]-).
实施例3 2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸酯)-替尼泊苷(3)的合成和纯化
合成方法与实施例1一致，制备液相甲醇∶水＝6∶4流速2.5mL/min分离纯化；
化合物3：2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸酯)-替尼泊苷，白色粉末，C41H36FNO14S3
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.26(s，1H)，78.00-7.91(m，1H)，7.84(dd，J＝8.9，4.8Hz，1H)，7.61-7.48(m，1H)，7.34(td，J＝9.0，2.6Hz，1H)，7.19(d，J＝2.8Hz，1H)，7.03(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.41(s，1H)，6.10(s，2H)，6.01(s，1H)，5.91(d，J＝23.9Hz，2H)，5.75(s，1H)，5.40(d，J＝5.7Hz，1H)，4.91(d，J＝3.2Hz，1H)，4.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.34(d，J＝5.3Hz，1H)，4.32-4.21(m，3H)，4.06(d，J＝14.9Hz，1H)，3.92-3.76(m，2H)，3.68-3.46(m，10H)，3.06(dd，J＝14.2，5.4Hz，1H)，2.97-2.79(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.83，166.75，148.38，148.18，147.57，146.58，140.65，135.14，133.14，130.55，128.79，126.87，126.56，111.41，110.40，110.10，108.75，105.50，101.75，100.22，97.94，81.47，72.98，70.21，68.21，67.97，66.22，57.44，56.36，43.36，40.47，40.30，40.13，39.96，39.83，39.80，39.55，37.61，36.68，30.06.MS(ESI)：880.36[M-H]-.
实施例4 2″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫-乙酸酯基)-替尼泊苷(4)的合成和纯化
合成与纯化方法与实施例3一致，除将5-氟-苯并噻唑-2-硫醇换为5-氟-苯并噁唑-2-硫醇；
化合物4：2″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫-乙酸酯)-替尼泊苷，白色粉末，C41H36FNO15S2
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.26(s，1H)，78.00-7.91(m，1H)，7.84(dd，J＝8.9，4.8Hz，1H)，7.61-7.48(m，1H)，7.34(td，J＝9.0，2.6Hz，1H)，7.19(d，J＝2.8Hz，1H)，7.03(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.41(s，1H)，6.10(s，2H)，6.01(s，1H)，5.91(d，J＝23.9Hz，2H)，5.75(s，1H)，5.40(d，J＝5.7Hz，1H)，4.91(d，J＝3.2Hz，1H)，4.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.34(d，J＝5.3Hz，1H)，4.32-4.21(m，3H)，4.06(d，J＝14.9Hz，1H)，3.92-3.76(m，2H)，3.68-3.46(m，10H)，3.06(dd，J＝14.2，5.4Hz，1H)，2.97-2.79(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.83，166.75，148.38，148.18，147.57，146.58，140.65，135.14，133.14，130.55，128.79，126.87，126.56，111.41，110.40，110.10，108.75，105.50，101.75，100.22，97.94，81.47，72.98，70.21，68.21，67.97，66.22，57.44，56.36，43.36，40.47，40.30，40.13，39.96，39.83，39.80，39.55，37.61，36.68，30.06.MS(ESI)：864.25[M-H]-.
实施例5 2″，3″-(二-5-氟苯并噻唑-2-硫)-乙酸酯替尼泊苷(5)的合成和纯化
(1)2″，3″-(二-5-氟苯并噻唑-2-硫)-乙酸酯替尼泊苷的化学合成
1)将1.85g(10mmol)5-F苯并噻唑-2-巯基，3equiv.的无水K2CO3溶于THF，室温搅拌10min，加入1.8equiv.的溴代乙酸，搅拌过夜。反应结束，将反应液倒入盛有冰块的烧杯中，慢慢加入1N HCl溶液使pH调至4，乙酸乙酯萃取，200mL饱和碳酸氢钠洗，200mL饱和氯化钠洗，收集有机层，减压蒸干。共得产物2.22g，收率92％。
2)向250mL的圆底烧瓶中加入583mg(2.4mmol)的5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸，替尼泊苷1443mg(1.6mmol)，加入适量的活化过的
加入100mL的干燥二氯甲烷搅拌，反口塞塞住，将1.02equiv.的N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)和0.2equiv.的4-二甲氨基吡啶DMAP事先用10mL二氯甲烷混合溶解，注射器缓慢加入，反应30min结束，硅藻土抽滤，乙酸乙酯洗滤饼，收集有机层，加入200mL×2饱和碳酸氢钠洗，收集有机层，加入200mL×3饱和氯化钠洗，有机层无水硫酸钠干燥，氯仿∶丙酮＝20∶1过柱分离，Rf＝0.4，得到白色固体252mg，收率14％。
(2)2″，3″-(二-5-氟苯并噻唑-2-硫)-乙酸酯替尼泊苷的硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，方法同实施例1。
化合物5：2″，3″-(二-5-氟苯并噻唑-2-硫)-乙酸酯替尼泊苷，白色粉末，C50H40F2N2O15S5
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.23(s，1H)，7.90(dd，J＝8.7，2.7Hz，1H)，7.82-7.73(m，2H)，7.56(dd，J＝8.9，4.9Hz，1H)，7.48(dd，J＝5.0，1.1Hz，1H)，7.30(td，J＝9.1，2.7Hz，1H)，7.15(td，J＝9.0，2.7Hz，1H)，7.05-6.98(m，2H)，6.91(dd，J＝4.9，3.6Hz，1H)，6.35(s，1H)，6.07(s，2H)，5.98(s，1H)，5.86(d，J＝9.5Hz，2H)，5.54(d，J＝8.0Hz，1H)，5.45(t，J＝9.6Hz，1H)，5.30(d，J＝7.8Hz，1H)，4.89(dd，J＝10.3，6.9Hz，2H)，4.33-4.22(m，3H)，4.15(dd，J＝12.0，4.5Hz，2H)，3.95(dd，J＝17.1，8.8Hz，2H)，3.82(d，J＝7.1Hz，2H)，3.68(d，J＝16.2Hz，1H)，3.57(s，6H)，3.11-2.78(m，2H).13C NMR(101MHz，DMSO-d6)δ167.07，165.07，149.61，147.53，136.49，128.80，126.89，126.35，122.40-122.87，114.92，109.83，108.71，73.51，67.80，56.36(2C)，40.57，40.36，40.15，39.95，39.74，39.53，39.32，34.72，33.79.MS(ESI)：1108.62C50H40F2N2O15S5，[M+H]+.
实施例6 2″，3″-(二-5-氟苯并噁唑-2-硫-)-乙酸酯替尼泊苷(6)的合成和纯化
合成与纯化方法与实例5一致，除将5-F苯并噻唑-2-巯基换成等摩尔量的5-F苯并噁唑-2-巯基；
化合物6：2″，3″-(二-5-氟苯并噁唑-2-硫-)-乙酸酯替尼泊苷，白色粉末，C50H40F2N2O17S3
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.24(s，1H)，7.63(dd，J＝8.9，4.3Hz，1H)，7.52-7.44(m，2H)，7.23(dd，J＝8.6，2.6Hz，1H)，7.16(td，J＝9.4，2.6Hz，1H)，7.06(s，1H)，7.05-7.00(m，2H)，6.91(dd，J＝4.9，3.6Hz，1H)，6.39(s，1H)，6.39(s，1H)，6.07(s，2H)，6.00(s，1H)，5.88(d，J＝2.3Hz，2H)，5.45(t，J＝9.6Hz，1H)，5.30(s，1H)，4.88(d，J＝17.0Hz，2H)，4.35(d，J＝4.9Hz，1H)，4.32-4.10(m，5H)，4.01-3.91(m，2H)，3.83(d，J＝7.1Hz，2H)，3.70(d，J＝16.4Hz，1H)，3.57(s，6H)，3.02-2.82(m，2H).13C NMR(201MHz，DMSO-d6)δ174.61，167.61，166.86，165.62，165.37，160.54，160.44，159.35，159.20，148.58-148.23，147.62，146.72，135.21，133.07，130.35，128.91，126.91，126.82-126.76，126.37，112.21，112.05，111.89，111.48，111.36-110.44，109.90，108.75，105.93-105.86，105.55，105.36，101.91，98.87，97.89，77.73，73.68，72.63，68.08-67.99，67.84，65.83，56.42，43.34，40.66，37.37，33.91.MS(ESI)：1076.32C50H40F2N2O17S3，[M+H]+.
实施例7 2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酰胺基-替尼泊苷(7)的合成和纯化
(1)2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酰胺基-替尼泊苷的化学合成
1)1，3，4，6-四-O-乙酰-2-叠氮-脱氧-吡喃葡萄糖(II)的合成
A、新制备TfN3的DCM溶液：将8.94g(137mmol)NaN3加入到25mL的水中，冰浴冷却，加入40mL DCM，剧烈搅拌，用注射器缓慢加入4.70mL(27.90mmol)Tf2O，冰浴剧烈搅拌2h；反应结束，用分液漏斗静置分层收集有机层，DCM(10mL×2)(萃取水层，合并所有有机层，饱和Na2CO3(50mL×1)，得到TfN3的DCM溶液。
B、2-叠氮-脱氧-吡喃葡萄糖的合成：将3.0g(13.95mmol)氨基葡萄糖盐酸盐、2.88g(20.93mmol)无水K2CO3、33mg(132μmol)五水合硫酸铜加入到500mL三口烧瓶中，45mL水溶解，搅拌，缓慢加入1中所得到的TfN3的DCM溶液，加毕，加入甲醇使体系均一，室温搅拌6h。反应结束后，70℃水浴减压蒸除溶剂得到黄色泡沫状黏稠状物，即2-叠氮-脱氧-吡喃葡萄糖。
C、1，3，4，6-四-O-乙酰-2-叠氮-脱氧-吡喃葡萄糖的合成：将50mL吡啶加入到盛有黏稠物的500mL单口烧瓶中，冰浴，接着加入65mL乙酸酐，搅拌过夜。
D、后处理：将反应完的液体分为两份，每份同样操作除吡啶，加入到1L分液漏斗中，加入适量冰块(后处理放热)，用冰的饱和硫酸铜溶液洗，乙酸乙酯萃取，合并有机层用饱和硫酸铜洗至水层呈酸性，反复用乙酸乙酯萃取，硫酸铜洗有机层至显色剂显色烤板检测有机层萃取干净。除硫酸铜，合并有机层分别用饱和碳酸氢钠(300mL×2)洗、饱和食盐水(300mL×1)洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去有机溶剂，正己烷∶乙酸乙酯＝7∶3(Rf＝0.5～0.6)过柱分离，得到淡黄色油状物，HPLC检测条件∶乙腈∶水＝6∶4，流速1.0mL/min。MS(ESI)：396.31(C14H19N3O9，[M+Na]+).
2)1-溴-2-叠氮-3，4，6-三-O-乙酰基-脱氧-吡喃葡萄糖(III)的合成
加入50～100mL DCM于盛有15.8mmol1，3，4，6-四-O-乙酰-2-叠氮-脱氧-吡喃葡萄糖的500mL圆底烧瓶中，室温加入8.6mL 33％(w/w)氢溴酸-醋酸溶液，室温搅拌4-5h，反应结束，用气球先排除部分溴化氢蒸汽，以免气压过高开盖危险，二氯甲烷稀释，饱和食盐水(300mL×2)洗除去大量酸，饱和碳酸氢钠(300mL)洗中和未除尽的酸，饱和食盐水(300mL×2)洗除碱，减压蒸干溶剂得到油状物，直接进行下一步。
3)1-羟基-2-叠氮-3，4，6-三-O-乙酰基-脱氧-吡喃葡萄糖(IV)的合成
由于溴代糖不太稳定故分离完后应立即进行下一步反应，将适量丙酮加入到盛有1mmol 1-溴-2-叠氮-3，4，6-四-O-乙酰-脱氧-吡喃葡萄糖的单口圆底烧瓶中，加入0.5mL水，室温搅拌3h，TLC检测无原料剩余，无水硫酸镁干燥过滤，减压蒸干溶剂得到白色油状物。
MS(ESI)：354.37(C12H17N3O8，[M+Na]+).
4)3″，4″，6″-三-O-乙酰-2-叠氮-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷(V)的合成
将1mmol DMEP溶于30mL二氯甲烷中，加入适量
氮气保护装置0℃，用注射器加入3.5equiv.BF3·Et2O，搅拌10min。冷却至-5℃，DCM溶解1-羟基-2-叠氮-3，4，6-三-O-乙酰-脱氧-吡喃葡萄糖，用1mL注射器加入到反应液中，反应4h至反应液澄清。
后处理：将反应液倒入到装有冰块的烧杯中，剧烈震荡淬灭BF3·Et2O，后用饱和碳酸钠(300mL×2)洗、饱和食盐水(300mL×2)洗，无水硫酸钠干燥，减压蒸去有机溶剂，经柱层析分离二氯甲烷∶甲醇＝50∶1(Rf＝0.4)粗分，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶6(Rf＝0.4)细分，得到白色固体(为异构体混合物，TLC分不开)，制备分离条件甲醇∶水＝6∶4，流速2.2mL/min可分开两个峰。
5)2″-叠氮-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷(VI)的合成
将适量甲醇加入到盛有1mmol3，4，6-三-O-乙酰-2-叠氮-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷的圆底烧瓶中，加入10equiv.锌粉，加热至回流，TLC检测，二氯甲烷∶甲醇＝10∶1(Rf＝0.3)，检测反应终点。反应结束，0.45μm有机滤膜过滤，硅藻土助滤，甲醇润洗滤饼至没有残留，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得白色固体。
6)4″，6″-噻吩亚甲基-2″-叠氮-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷(VII)的合成
向盛有1mmol 2″-叠氮-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷的单口烧瓶中加入4mL无水噻吩甲醛中，氮气保护下加入4equiv.无水氯化锌，加入适量
30℃搅拌过夜。反应结束后，二氯甲烷(80mL)萃取，饱和食盐水(300mL)洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色油状物，柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝55∶45，过柱分离Rf＝0.3～0.4)得浅红色固体；HPLC检测条件甲醇∶水＝6∶4，流速0.8mL/min。
7)4″，6″-噻吩亚甲基-2″-氨基-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷(VIII)的合成
向盛有1mmol 4″，6″-噻吩亚甲基-2″-叠氮-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷的单口烧瓶中加入20mL乙酸乙酯使其溶解，加入20mL甲醇，加入10％Pd/C，1atmH2还原，TLC检测(二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf＝0.5)原料完全反应完，反应结束，0.45μm有机滤膜过滤，硅藻土助滤，甲醇润洗滤饼至没有残留，无水硫酸钠干燥，减压蒸干得白色固体。
8)5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸的合成方法与实例1中方法一致；
9)向250mL的圆底烧瓶中加入800mg(1.22mmol)4″，6″-噻吩亚甲基-2-氨基-脱氧-4′-去甲基表鬼臼毒素-β-D-吡喃葡萄糖苷、382mg(1.58mmol)5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸，加入适量的活化过的
加入100mL的干燥二氯甲烷搅拌，反口塞塞住，将1.02equiv.的DCC和0.2equiv.的DMAP事先用10mL二氯甲烷混合溶解，注射器缓慢加入，反应30min结束，硅藻土抽滤，乙酸乙酯洗滤饼，收集有机层，饱和碳酸氢钠(200mL×2)洗，饱和氯化钠(200mL×3)洗，有机层无水硫酸钠干燥，氯仿∶丙酮＝3∶1过柱分离，Rf＝0.4，得到淡黄色固体332mg，收率31％。
(2)2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酰胺基-替尼泊苷的硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化：
使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化，氯仿∶丙酮＝5∶1过柱分离。
化合物7：2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酰胺基-替尼泊苷，白色粉末，C41H37FN2O14S2
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.36(d，J＝8.9Hz，1H)，8.26(s，1H)，78.00-7.91(m，1H)，7.84(dd，J＝8.9，4.8Hz，1H)，7.61-7.48(m，1H)，7.34(td，J＝9.0，2.6Hz，1H)，7.19(d，J＝2.8Hz，1H)，7.03(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.41(s，1H)，6.10(s，2H)，6.01(s，1H)，5.91(d，J＝23.9Hz，2H)，5.75(s，1H)，5.40(d，J＝5.7Hz，1H)，4.91(d，J＝3.2Hz，1H)，4.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.34(d，J＝5.3Hz，1H)，4.32-4.21(m，3H)，4.06(d，J＝14.9Hz，1H)，3.92-3.76(m，2H)，3.68-3.46(m，10H)，3.06(dd，J＝14.2，5.4Hz，1H)，2.97-2.79(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.83，166.75，148.38，148.18，147.57，146.58，140.65，135.14，133.14，130.55，128.79，126.87，126.56，111.41，110.40，110.10，108.75，105.50，101.75，100.22，97.94，81.47，72.98，70.21，68.21，67.97，66.22，57.44，56.36，43.36，40.47，40.30，40.13，39.96，39.83，39.80，39.55，37.61，36.68，30.06.MS(ESI)：896.34[M+H]+.
实施例8 2″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫)-乙酰胺基-替尼泊苷(8)的合成和纯化
合成与纯化方法与实例7一致，除将5-氟-苯并噻唑-2-硫醇换成等摩尔量的5-氟-苯并噁唑-2-硫醇；
化合物8：2″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫)-乙酰胺基-替尼泊苷，白色粉末，C41H37FN2O14S2
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.36(d，J＝8.9Hz，1H)，8.26(s，1H)，7.70(dd，J＝8.9，4.3Hz，1H)，7.54(ddd，J＝11.3，6.8，1.8Hz，2H)，7.24-7.14(m，2H)，7.04(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.99(s，1H)，6.41(s，1H)，6.10(s，2H)，6.01(s，1H)，5.91(d，J＝23.9Hz，2H)，5.75(s，1H)，5.40(d，J＝5.7Hz，1H)，4.91(d，J＝3.2Hz，1H)，4.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.34(d，J＝5.3Hz，1H)，4.32-4.21(m，3H)，4.06(d，J＝14.9Hz，1H)，3.92-3.76(m，2H)，3.68-3.46(m，10H)，3.06(dd，J＝14.2，5.4Hz，1H)，2.97-2.79(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.83，166.75，148.38，148.18，147.57，146.58，140.65，135.14，133.14，130.55，128.79，126.87，126.56，111.41，110.40，110.10，108.75，105.50，101.75，100.22，97.94，81.47，72.98，70.21，68.21，67.97，66.22，57.44，56.36，43.36，40.47，40.30，40.13，39.96，39.83，39.80，39.55，37.61，36.68，30.06.MS：863.16[M-H]-
实施例9 2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酰胺基-3″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酸酯基-替尼泊苷(9)的合成和纯化
其合成的方法与实施例7中的一致，单体为5-氟-苯并噻唑-2-硫醇，氯仿∶丙酮＝8∶1过柱分离；
化合物9：2″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酰胺基-3″-(5-氟-苯并噻唑-2-硫)-乙酸酯基-替尼泊苷：白色粉末，C50H40F2N3O14S5
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.57(d，J＝9.2Hz，1H)，8.29(d，J＝23.7Hz，2H)，7.65(dd，J＝8.9，4.4Hz，1H)，7.57-7.43(m，4H)，7.30(dd，J＝8.7，2.6Hz，1H)，7.23-7.14(m，1H)，7.04(dt，J＝9.3，3.2Hz，4H)，6.95(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.43(s，1H)，6.14(s，3H)，5.95(d，J＝29.1Hz，3H)，5.82(s，1H)，5.32(t，J＝9.9Hz，1H)，5.06(d，J＝8.2Hz，1H)，4.93(d，J＝3.2Hz，1H)，4.41(d，J＝5.3Hz，1H)，4.31-4.23(m，5H)，4.17(d，J＝16.7Hz，1H)，4.03(q，J＝7.1Hz，1H)，3.90(dd，J＝27.2，14.0Hz，5H)，3.76(d，J＝15.0Hz，1H)，3.62(dd，J＝14.2，4.9Hz，9H)，3.05(dd，J＝14.2，5.3Hz，1H)，2.96-2.84(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.79，167.70，166.59，160.77，158.96，148.48，148.13，147.60，146.69，142.68，142.27，140.13，135.19，132.94，130.42，129.06，126.87，126.29，112.30，112.04，111.88，111.53，111.03，110.16，108.80，105.61，105.48，105.35，101.71，100.59，97.81，79.64，78.22，74.38，73.05，68.03，65.99，60.23，56.43，54.81，43.34，40.86，37.56，36.44，33.95.
实施例10 2″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫)-乙酰胺基-3″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫)-乙酸酯基-替尼泊苷(10)的合成和纯化
其合成的方法与实施例7中的一致，除将5-氟-苯并噻唑-2-硫-乙酸替换成等摩尔量的5-氟-苯并噁唑-2-硫醇；氯仿∶丙酮＝8∶1过柱分离；
化合物10：2″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫)-乙酰胺基-3″-(5-氟-苯并噁唑-2-硫)-乙酸酯基-替尼泊苷，白色粉末，C50H40F2N3O16S3
1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ8.57(d，J＝9.2Hz，1H)，8.29(d，J＝23.7Hz，2H)，7.65(dd，J＝8.9，4.4Hz，1H)，7.57-7.43(m，4H)，7.30(dd，J＝8.7，2.6Hz，1H)，7.23-7.14(m，1H)，7.04(dt，J＝9.3，3.2Hz，4H)，6.95(dd，J＝5.0，3.5Hz，1H)，6.43(s，1H)，6.14(s，3H)，5.95(d，J＝29.1Hz，3H)，5.82(s，1H)，5.32(t，J＝9.9Hz，1H)，5.06(d，J＝8.2Hz，1H)，4.93(d，J＝3.2Hz，1H)，4.41(d，J＝5.3Hz，1H)，4.31-4.23(m，5H)，4.17(d，J＝16.7Hz，1H)，4.03(q，J＝7.1Hz，1H)，3.90(dd，J＝27.2，14.0Hz，5H)，3.76(d，J＝15.0Hz，1H)，3.62(dd，J＝14.2，4.9Hz，9H)，3.05(dd，J＝14.2，5.3Hz，1H)，2.96-2.84(m，1H).13C NMR(126MHz，DMSO-d6)δ174.79，167.70，166.59，160.77，158.96，148.48，148.13，147.60，146.69，142.68，142.27，140.13，135.19，132.94，130.42，129.06，126.87，126.29，112.30，112.04，111.88，111.53，111.03，110.16，108.80，105.61，105.48，105.35，101.71，100.59，97.81，79.64，78.22，74.38，73.05，68.03，65.99，60.23，56.43，54.81，43.34，40.86，37.56，36.44，33.95.
试验例1本发明实施例制备的化合物抑制肿瘤细胞的活性试验
一、试验材料
1.供试化合物：实施例1-10所制备的化合物，分别编号为化合物1-10；
2.对照化合物：依托泊苷、替尼泊苷；购自武汉楚盛威化工有限公司，纯度98％；
3.试剂耗材：DMEM培养基(gibco)，RPMI1640培养基(gibco)，PBS缓冲液(gibco)，胎牛血清(杭州四季青)，100×青霉素-链霉素液，胰蛋白酶(吉诺生物医药科技有限公司)，T25细胞培养瓶(NEST)，96孔板(NEST)，100mL120℃灭菌的西林瓶；
4.细胞株：HepG2、HeLa、A549、MCF-7细胞株以及HL-7702、H8、MRC-5、HMEC细胞株购自武汉博士得生物科技有限公司。
二、试验方法
将对数生长期的HepG2、HeLa、A549、MCF-7细胞株以及HL7702、H8、MRC-5、HMEC细胞株，1000rpm离心5分钟，弃上清，适量培养基悬浮，调整细胞浓度至3.5×104个/孔，将细胞接种于96孔培养板中，设置以下实验组别：
1个阴性对照组；10个同浓度的试验组(即：化合物1-化合物10组)；
2个对照组：依托泊苷组和替尼泊苷组。
每孔0.10mL细胞，用含有10％小牛血清的RPMI1640或DMEM作为培养液，37℃、5％CO2及饱和湿度下培养24h接近长满时，弃去培养液，10个试验组分别加入含有同样量的化合物(1-10)的10％小牛血清的RPMI1640或DMEM培养液0.10M；依托泊苷组和替尼泊苷组分别加入含有依托泊苷或替尼泊苷的10％小牛血清的RPMI1640或DMEM培养液0.10M；依托泊苷或替尼泊苷的用量与化合物1-10的用量完全相同；阴性对照组加入终浓度为0.5％DMSO；各组均设3个复孔，继续培养48h，每孔加入5mg/ml的MTT 10μL，37℃放置4h。每孔加入100μlDMSO，37℃摇床振荡30min，492nm测吸光度(OD)，计算MTT比值＝药物组OD值/阴性对照组OD值。
三、试验结果见表1
表1本发明试验例的试验结果
aThe IC50 values were the average of tirplicates determinations.
注：上表中Cytotoxic activity为细胞毒活性，Teniposide为替尼泊苷，Etoposide为依托泊苷，IC50值为三次检测的平均值(The IC50 values were the averageof triplicates determinations)。
由试验结果可知，化合物1-6、9-10对HepG2、A549、MCF-7和HeLa细胞株的抗肿瘤活性与目前已做为抗肿瘤药物上市的鬼臼毒素类衍生物依托泊苷和替尼泊苷抗肿瘤活性相当，其中化合物9-10对HL-7702、MRC-5、HMEC、H-8细胞株的毒性较依托泊苷和替尼泊苷的毒性有显著降低，但活性与依托泊苷和替尼泊苷相当；化合物7-8对HepG2、HeLa、A549和HL-7702细胞株的抗肿瘤活性弱于依托泊苷和替尼泊苷。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种替尼泊苷类衍生物，其特征在于，所述替尼泊苷类衍生物具有式(V)所示的结构：
其中，X和Y可以各自独立地是-O-、-COO-或-CONH-；
R1和R2各自独立地选自
其中R4为F、Cl或Br；
R3为氢或
2.根据权利要求1所述的替尼泊苷类衍生物，其特征在于，所述R1和R2各自独立地选自
R3为氢。
3.权利要求1或2所述的替尼泊苷类衍生物的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
在替尼泊苷糖环的2″位或3″位通过酯化反应以单酯化修饰引入单体；
或在替尼泊苷糖环的2″位和3″位通过酯化反应以双酯化修饰引入单体；
或在替尼泊苷糖环的2″位将羟基修饰成氨基后在通过酰化反应以酰胺化修饰引入单体；
或在替尼泊苷糖环的2″位将羟基修饰成氨基后通过酰化反应以酰胺化修饰引入单体，3″位通过亲核取代反应以酯化修饰引入单体。
4.根据权利要求3所述的替尼泊苷类衍生物的制备方法，其特征在于，所述单体选自噻吩-2-硫醇、噻二唑-2-硫醇、4-三氟甲基吡啶-2-硫醇、4-三氟甲基-2-巯基嘧啶、对氟苯硫酚、5-氟苯并噻唑-2-硫醇、5-氟苯并噁唑-2-硫醇、5-苯基苯并噁唑-2-硫醇、5-甲基苯并噁唑-2-硫醇、6-氯苯并噁唑-2-硫醇、5-二氟甲氧基苯并咪唑-2-硫醇、2-巯基萘或1-苯基四氮唑-5-硫醇。
5.根据权利要求3或4所述的替尼泊苷类衍生物的制备方法，其特征在于，所述酯化反应的反应条件包括：将替尼泊苷溶于有机溶剂例如二氯甲烷中，再加入所述反应单体和脱水剂和/或催化剂，搅拌；优选地，所述脱水剂为二环己基碳二亚胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；所述催化剂为4-二甲氨基吡啶。
6.根据权利要求3所述的替尼泊苷类衍生物的制备方法，其特征在于，所述酯化反应中，替尼泊苷与所述反应单体的摩尔比为1∶1～5；优选地，所述酯化反应温度为25～35℃，例如28～30℃。
7.根据权利要求3所述的替尼泊苷类衍生物的制备方法，其特征在于，所述纯化方法包括：依次使用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化所得粗产物，即得纯化的替尼泊苷类衍生物产物。
8.根据权利要求7所述的替尼泊苷类衍生物的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱层析分离方法包括：(1)硅胶柱层析为正相硅胶柱层析或反相硅胶柱层析，正相硅胶以低极性有机溶剂拌匀后装柱，以洗脱剂平衡；反相硅胶以甲醇拌匀后装柱，以洗脱剂平衡；(2)将待分离纯化的样品以洗脱液溶解，进行上样吸附，然后用洗脱剂洗脱，收集洗脱液，将样品挥干并重结晶；优选地，所述硅胶柱层析为正相硅胶柱层析时，所述的洗脱剂由体积比为8∶1的氯仿和丙酮组成；所述硅胶柱层析为反相硅胶柱层析时，所述的洗脱剂由体积比为15∶7的甲醇和水组成。
9.根据权利要求7所述的替尼泊苷类衍生物的制备方法，其特征在于，所述凝胶柱层析分离方法包括：(1)凝胶以甲醇浸泡；将处理好的凝胶装柱，以甲醇平衡；(2)将经硅胶柱层析初步分离后的样品溶于甲醇中，进行上样吸附，然后用甲醇洗脱，收集洗脱液，将样品中溶剂挥干并重结晶。
10.权利要求1或2所述的替尼泊苷类衍生物或其盐的应用，其特征在于，所述替尼泊苷类衍生物或其盐用于制备治疗抗肿瘤的药物。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112079879A (zh) * | 2020-08-21 | 2020-12-15 | 华润双鹤药业股份有限公司沧州分公司 | 一种替尼泊苷中间体的合成新方法及替尼泊苷的合成方法 |
| CN112079879B (zh) * | 2020-08-21 | 2022-01-14 | 华润双鹤药业股份有限公司沧州分公司 | 一种替尼泊苷中间体的合成新方法及替尼泊苷的合成方法 |
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