CN108210457A - 胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法 - Google Patents
胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108210457A CN108210457A CN201810033902.3A CN201810033902A CN108210457A CN 108210457 A CN108210457 A CN 108210457A CN 201810033902 A CN201810033902 A CN 201810033902A CN 108210457 A CN108210457 A CN 108210457A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cucurbitacin
- collagen peptide
- parts
- collagen
- drug
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- CVKKIVYBGGDJCR-SXDZHWHFSA-N Cucurbitacin B Natural products CC(=O)OC(C)(C)C=CC(=O)[C@@](C)(O)[C@@H]1[C@@H](O)C[C@]2(C)C3=CC[C@@H]4C(C)(C)C(=O)[C@H](O)C[C@@]4(C)[C@@H]3CC(=O)[C@@]12C CVKKIVYBGGDJCR-SXDZHWHFSA-N 0.000 title claims abstract description 134
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 127
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 127
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 118
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 117
- LNSXRXFBSDRILE-UHFFFAOYSA-N Cucurbitacin Natural products CC(=O)OC(C)(C)C=CC(=O)C(C)(O)C1C(O)CC2(C)C3CC=C4C(C)(C)C(O)C(O)CC4(C)C3(C)C(=O)CC12C LNSXRXFBSDRILE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 100
- 150000001904 cucurbitacins Chemical class 0.000 title claims abstract description 100
- PIGAXYFCLPQWOD-UHFFFAOYSA-N dihydrocucurbitacin I Natural products CC12C(=O)CC3(C)C(C(C)(O)C(=O)CCC(C)(O)C)C(O)CC3(C)C1CC=C1C2C=C(O)C(=O)C1(C)C PIGAXYFCLPQWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 98
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 claims abstract description 12
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims abstract description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- IXQKXEUSCPEQRD-NRNCYQGDSA-N (2S,4R,23E)-2,16beta,20-trihydroxy-9beta,10,14-trimethyl-1,11,22-trioxo-4,9-cyclo-9,10-secocholesta-5,23-dien-25-yl acetate Chemical compound C([C@H]1[C@]2(C)C[C@@H](O)[C@@H]([C@]2(CC(=O)[C@]11C)C)[C@@](C)(O)C(=O)C=CC(C)(C)OC(=O)C)C=C2[C@H]1C[C@H](O)C(=O)C2(C)C IXQKXEUSCPEQRD-NRNCYQGDSA-N 0.000 claims description 36
- IHTCCHVMPGDDSL-ZJNDIJRCSA-N Cucurbitacin A Natural products O=C([C@@](O)(C)[C@H]1[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@]1(C)CC(=O)[C@]1(CO)[C@H]2CC=C2C(C)(C)C(=O)[C@H](O)C[C@@H]12)/C=C/C(OC(=O)C)(C)C IHTCCHVMPGDDSL-ZJNDIJRCSA-N 0.000 claims description 36
- QZJJDOYZVRUEDY-UHFFFAOYSA-N Dihydrocucurbitacin B Natural products CC12C(=O)CC3(C)C(C(C)(O)C(=O)CCC(C)(C)OC(=O)C)C(O)CC3(C)C1CC=C1C2CC(O)C(=O)C1(C)C QZJJDOYZVRUEDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 28
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 12
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 12
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 229960002668 sodium chloride Drugs 0.000 claims description 11
- JVKUCNQGESRUCL-UHFFFAOYSA-N 2-Hydroxyethyl 12-hydroxyoctadecanoate Chemical compound CCCCCCC(O)CCCCCCCCCCC(=O)OCCO JVKUCNQGESRUCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229920001304 Solutol HS 15 Polymers 0.000 claims description 9
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 5
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 claims description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 abstract description 58
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 7
- 230000035699 permeability Effects 0.000 abstract description 6
- -1 15 hydroxy stearic acid ester Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 abstract description 2
- 238000005253 cladding Methods 0.000 abstract description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 46
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 38
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 8
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 7
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 7
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 230000032895 transmembrane transport Effects 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 240000009087 Crescentia cujete Species 0.000 description 2
- 235000005983 Crescentia cujete Nutrition 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009797 Lagenaria vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 description 2
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 description 2
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010985 leather Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- SRPHMISUTWFFKJ-VOKXYEOFSA-N (23E)-2beta,16alpha,20,25- tetrahydroxy-9beta-methyl-19-nor-10alpha-lanosta-5,23-diene-3,11,22-trione Chemical compound C([C@H]1[C@]2(C)C[C@@H](O)[C@@H]([C@]2(CC(=O)[C@]11C)C)[C@@](C)(O)C(=O)C=CC(C)(O)C)C=C2[C@H]1C[C@H](O)C(=O)C2(C)C SRPHMISUTWFFKJ-VOKXYEOFSA-N 0.000 description 1
- SRPHMISUTWFFKJ-UHFFFAOYSA-N (E)-2beta,16alpha,20,25-tetrahydroxy-9-methyl-19-nor-9beta,10alpha-lanosta-5,23-diene-3,11,22-trione Natural products CC12C(=O)CC3(C)C(C(C)(O)C(=O)C=CC(C)(O)C)C(O)CC3(C)C1CC=C1C2CC(O)C(=O)C1(C)C SRPHMISUTWFFKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZEAHFLEZWXHCE-UHFFFAOYSA-N 3-iodo-2-methylaniline Chemical compound CC1=C(N)C=CC=C1I UZEAHFLEZWXHCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033350 ATP-dependent translocase ABCB1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034273 Annexin A7 Human genes 0.000 description 1
- 108010039940 Annexin A7 Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010047230 Member 1 Subfamily B ATP Binding Cassette Transporter Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 240000005373 Panax quinquefolius Species 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011001 backwashing Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035587 bioadhesion Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- JTPLNLNCNOCZIB-UHFFFAOYSA-N cucurbitacin D Natural products CC(C)(O)C=CC(=O)C(C)(O)C1C(O)CC2C3CC=C4C(C)(C)C(=O)C(O)CC4(C)C3C(=O)CC12C JTPLNLNCNOCZIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001202 cucurbitacin group Chemical group 0.000 description 1
- ZYZJWAJOTPNVPI-ZVBSCDOUSA-N cucurbitane Chemical compound C([C@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]([C@]2(CC[C@]11C)C)[C@H](C)CCCC(C)C)CC2[C@H]1CCCC2(C)C ZYZJWAJOTPNVPI-ZVBSCDOUSA-N 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000010579 first pass effect Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000031891 intestinal absorption Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004279 orbit Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000003726 plant lectin Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007962 solid dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002047 solid lipid nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 150000003521 tetracyclic triterpenoids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明属于医药技术领域，特别涉及胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法，其中胶原蛋白肽作为药物穿膜工具在制备口服药物制剂中的应用，所述胶原蛋白肽带正电荷；本发明提供了一种含胶原蛋白肽的葫芦素口服胶束，包括以下重量份的组分：葫芦素8～15份、卵磷脂30～70份、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯50～75份、聚乙二醇15‑羟基硬脂酸酯25～50份和带正电荷的胶原蛋白肽80～100份；本发明制备的胶原蛋白肽，协同其余载体材料，提高了药物的膜渗透性，并降低了药物的外排作用，可作为药物穿膜工具使用，针对葫芦素口服生物利用度的问题，本发明采用的胶原蛋白肽包覆纳米胶束的技术，利用胶原蛋白肽的特性，以改善药物，如葫芦素口服存在的生物利用度低的问题。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法。
背景技术
药物临床应用多以口服给药为主，药效的发挥主要依赖于药效组分在肠道的吸收。药物的溶解性、稳定性、膜通透性和首过作用等生物药剂学性质是影响药物口服后经胃肠道吸收的主要因素。不少活性成分溶解性低、渗透性差，并由于转运蛋白外排、肠道代谢等原因，口服生物利用度很低，大大制约了临床药效的发挥。采用制剂新技术提高药物的口服生物利用度的研究报道最多，主要包括微粉化、环糊精包合、固体分散、生物粘附、磷脂复合物、新型载体技术等。消化道上皮细胞是药物吸收的屏障，药物的跨膜转运能力即药物的膜通透性是这一过程的主要影响因素。载体跨膜转运促进技术是当前药剂学界研究的热点。当前促进载体跨膜转运的方法主要包括植物凝集素、膜融合蛋白、多聚乙烯亚胺、穿膜肽修饰等，其中穿膜肽由于其高效性和安全性，最具发展前景。穿膜肽(cell-permeablepeptides，CPPs)是一类具有较强细胞膜穿透能力的多肽，它们具有高效穿过细胞膜而不损伤细胞膜结构和功能的特点。将细胞穿膜肽用于携带各种物质，如小分子、纳米粒，特别是生物药如核酸、抗体等进入细胞。穿膜肽在口服吸收方面的应用报道很少，目前仅有学者采用穿膜肽R8修饰固态脂质纳米粒，显著增加了胰岛素和紫杉醇的吸收。穿膜肽目前都是通过固相合成或原核表达制备，成本很高，限制了其在口服给药中的应用。因此，找到一种制备工艺简单、成本低、安全的穿膜肽对提高药物的口服生物利用度，从而提高药效非常必要；此外，大多数药物纳米胶束都带有电负性，与带正电荷的胶原蛋白肽易形成稳定药物组合物，胶原蛋白肽对纳米胶束的包覆度较好，此组合物更有利于透过肠系膜而吸收。
葫芦素为一类葫芦烷型四环三萜类化合物，可用于湿热毒盛所致迁延性肝炎、慢性肝炎及原发性肝癌的辅助治疗。而有研究表明，市售葫芦素片中葫芦素类成分水溶性差，溶出慢，且该类成分属生物药剂学分类中第四类低溶解性、低渗透性药物，限制了其口服药效的发挥与临床应用。
因此，本发明从3000Da的牛皮胶原蛋白肽中分离得到的正电性的牛皮胶原蛋白肽(CPs)，并将其用于制备葫芦素纳米胶束，结果表明，本发明制备的葫芦素纳米胶束的口服生物利用度、抗肿瘤效果较好。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法，本发明的目的是针对现有技术中胶原蛋白肽制备方法繁杂、成本高的缺陷，提供一种低成本、高效率、能促进药物口服吸收的胶原蛋白肽的制备方法，本发明的另一目的是将带正电性的胶原蛋白肽在口服给药中的应用，并且提供了含胶原蛋白肽的葫芦素口服胶束，提高葫芦素的口服生物利用度。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是：
胶原蛋白肽作为药物穿膜工具在制备口服药物制剂中的应用，所述胶原胶原蛋白肽带正电荷。
作为优选，所述带正电荷的胶原蛋白肽的制备方法如下：
(a)将胶原蛋白肽水溶液与阳离子交换树脂混合，于摇床内40℃下震荡吸附3h，取出吸附后的阳离子交换树脂，用0.2mol/L氯化钠水溶液洗脱2h，过滤，弃去洗脱液；
(b)将步骤(a)过滤后的阳离子交换树脂，用0.5mol/L氯化钠水溶液同样步骤重复洗脱3次，收集洗脱液；所得洗脱液合并，得总液；其中，阳离子交换树脂和氯化钠水溶液的质量体积比为1∶2，单位为g∶mL；
(c)将步骤(b)所得总液，浓缩除盐，透析袋透析，冻干，即得带正电荷的胶原蛋白肽。
作为优选，所述阳离子交换树脂型号为D152、732、D072、D61或D001，所述胶原蛋白肽分子量为1000～5000Da，所述胶原蛋白肽水溶液的浓度为(10～100)mg/mL。
作为优选，所述步骤(a)中，胶原蛋白肽水溶液、阳离子交换树脂和氯化钠水溶液的质量体积比为2∶1∶2，其单位为mL∶g∶mL。
一种含胶原蛋白肽的葫芦素口服胶束，包括以下重量份的组分：葫芦素8～15份、卵磷脂30～70份、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯50～75份、聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯25～50份和带正电荷的胶原蛋白肽80～100份。
作为优选，所述葫芦素为葫芦素B或含有葫芦素B含量大于60％的总葫芦素。
作为优选，所述含胶原蛋白肽的葫芦素口服胶束的制备方法，包括以下方法步骤：
(1)称取所述重量份的葫芦素溶于一定量的甲醇中，加入所述重量份的卵磷脂，30～50℃下搅拌40～50min；其中，葫芦素与甲醇的质量体积比为(4～6)∶1，单位为mg/mL；
(2)称取所述重量份的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，加入到步骤(1)所得混合液中，相同温度下继续搅拌40～50min；
(3)将步骤(2)所得溶液，蒸发除去甲醇，氮吹完全除去有机溶剂，得均匀分布透明的含药脂膜；
(4)称取一定量的纯水，溶解步骤(3)所得的脂膜，超声水化后，离心分离，取上清液，加入所述重量份的改性胶原蛋白肽，室温溶解后，于35～40℃下孵育30min，过0.22μm滤膜，滤液即为含改性胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束。
其中，所述步骤(4)中，葫芦素与水的质量体积比为1∶(1～3)，单位为mg/mL，超声水化时间为：0.5～2h，离心分离条件为：温度35～40℃，转速10000rpm，离心20min。
其中本发明中，带正电荷的胶原蛋白肽的制备方法的原理是：利用阳离子交换树脂，吸附胶原蛋白肽中的碱性胶原蛋白肽，再利用氯化钠水溶液洗脱吸附后的阳离子交换树脂，将吸附的碱性胶原蛋白肽洗脱至水溶液中，浓缩、透析、冻干，得到碱性胶原蛋白肽产品，其带正电荷，最终达到从胶原蛋白肽中分离出碱性胶原蛋白肽的目的。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1.本发明制备的胶原蛋白肽，制备方法简便，成本低，协同其余载体材料，提高了药物的膜渗透性，并降低了药物的外排作用，可作为药物穿膜工具使用。
2.本发明的含胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束，通过在水溶液中自组装形成纳米胶束，解决了葫芦素在水溶液中溶解度低的问题。
3.本发明的含胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束，显著的提高了葫芦素的生物利用度。
4.本发明的含胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束，对HepG-2细胞有较好的抑制率。
5.本发明的含胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束，用于治疗荷瘤小鼠，给药两周后即有治疗效果，有效的抑制了肿瘤的生长。
6.本发明的含胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束，可以作为抗肿瘤药物而应用，其具有提高口服葫芦素药物生物利用度的功能，体内外抗肿瘤效果显著。
7.针对葫芦素口服生物利用度的问题，本发明采用的胶原蛋白肽包覆纳米胶束的技术，利用胶原蛋白肽的特性，以改善葫芦素口服存在的生物利用度低的问题。另本发明选用辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯与聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯作为葫芦素纳米胶束的主要载体，构建新型的抗肿瘤纳米胶束，其中辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯能改善细胞膜通透性，聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯具有P-糖蛋白抑制作用，两者作为药物载体，不仅能提高葫芦素的溶解性，还能改善葫芦素的穿膜效率及摄取率。
8.本发明所开发的胶原蛋白肽-葫芦素纳米胶束，利用载体两亲性与带电性自组装成纳米胶束，其制备方法简单，成本低。
附图说明
图1胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束粒径分布；
图2胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束SEM图；
图3总葫芦素、无胶原蛋白肽的总葫芦素混合纳米胶束及胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束口服给药后的药-时曲线图(n＝6)；
图4葫芦素B、无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束及胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束口服给药后的药-时曲线图(n＝6)；
图5葫芦素B、无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束及胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束对肝癌细胞HepG-2的生长抑制率(n＝3)；
图6生理盐水、总葫芦素混悬液组及胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束给药期间各组荷瘤鼠体重变化(n＝8)；
图7各组荷瘤鼠体内肿瘤体积在总葫芦素给药期间的变化(n＝8)；
图8给药各组荷瘤鼠体内肿瘤；
图9生理盐水、葫芦素B及葫芦素B纳米胶束给药期间各组荷瘤鼠体重变化(n＝8)；
图10各组荷瘤鼠体内肿瘤体积在给药期间的变化(n＝8)；
图11给药各组荷瘤鼠体内肿瘤；
n代表各组平行组的数量。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明及其具体实施方式作进一步详细说明，但不意味着限制本发明的范围。
实施例1：
带正电荷的胶原蛋白肽的制备：称取5g型号为D152阳离子交换树脂置于锥形瓶内，加入10mL质量浓度为0.1g/mL的胶原蛋白肽水溶液，其中胶原蛋白肽的分子量为3000Da，于摇床内40℃下震荡吸附3h后，收集已吸附的树脂，用10mL浓度为0.2mol/L氯化钠水溶液洗脱2h，过滤，弃去洗脱液；再以每次10mL浓度为0.5mol/L氯化钠水溶液同样步骤重复洗脱3次，收集洗脱液，所得洗脱液合并，得总液，浓缩除盐，透析袋透析，冻干，即得带正电荷的胶原蛋白肽，其外观为白色松软粉末，晶体光泽明显。
实施例2：
胶原蛋白肽肽氨基酸组成分析：分别称取0.1g市售胶原蛋白肽与实施例1制备的胶原蛋白肽，分别加入10ml浓度为6mol/L的HCl，震荡混匀，封口放入110℃烘箱里水解24h，将水解液过滤，取500μl滤液，55℃真空干燥，干燥后的样品内加入0.02mol/L HCl溶解稀释，与氨基酸混合标准品溶液进行茚三酮比色，确定样品稀释程度，用0.22μm微孔滤膜过滤，全自动氨基酸分析仪进行分析，分离前后胶原蛋白肽中不同氨基酸种类的组成含量变化结果见表1；
表1 3000Da市售胶原蛋白肽与正电荷胶原蛋白肽氨基酸组成分析
酸性氨基酸与碱性氨基酸的量是直接导致多肽显负电性或正电性的原因。对市售胶原蛋白肽和实施例1制备的带正电荷的胶原蛋白肽的氨基酸各组分含量变化比例进行分析，可发现相对于市售胶原蛋白肽，实施例1制备的带正电荷的胶原蛋白肽，除甘氨酸、蛋氨酸外，其余氨基酸含量均发生明显变化，其中碱性氨基酸赖氨酸、精氨酸的含量较市售胶原蛋白肽中的含量均显著增加，而酸性氨基酸谷氨酸含量则显著减少，并未见天冬氨酸，由此实施例1制备的带正电荷的胶原蛋白肽分子中的碱性氨基酸较多。
实施例3：
制备胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束：
1)配制5mg/mL的总葫芦素甲醇溶液(以葫芦素B浓度计，葫芦素B含量65％)，取2mL上述溶液加入48mg卵磷脂，40℃下搅拌45min；
2)称取71mg的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和29mg的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，加入到步骤1)所得混合液中，相同温度下继续搅拌45min；
3)将步骤2)所得溶液，蒸发除去甲醇，氮吹完全除去有机溶剂，得均匀分布透明的含药脂膜；
4)加入17mL纯化水溶解步骤3)所得脂膜，在40℃温度下超声水化1h后，10000rpm离心20min；
5)取步骤4)所得上清液，加入90mg实施例1制备的胶原蛋白肽，室温搅拌溶解后，于37℃下孵育30min，过0.22μm滤膜，得到澄清透明的载总葫芦素胶原蛋白肽纳米胶束溶液；
所得纳米胶束用Beckman公司的纳米粒径电位分析仪DelsaNano C检测，所述纳米胶束的平均粒径为73.5nm，电位为3.49mV，包封率为89.92％，载药量为5.90％。粒径分布如图1所示，纳米胶束形态如透射电镜图图2所示。
实施例4：
制备无胶原蛋白肽的总葫芦素混合纳米胶束：
1)配制5mg/mL的总葫芦素甲醇溶液(以葫芦素B浓度计，葫芦素B含量65％)，取2mL上述溶液加入50mg卵磷脂，40℃下搅拌45min；
2)称取60mg的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和40mg的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，加入到步骤1)所得混合液中，相同温度下继续搅拌45min；
3)将步骤2)所得溶液，蒸发除去甲醇，氮吹完全除去有机溶剂，得均匀分布透明的含药脂膜；
4)加入15mL纯化水溶解步骤3)所得脂膜，在40℃温度下超声水化1h后，10000rpm离心20min；
5)取步骤4)所得上清液，加入90mg实施例1制备的胶原蛋白肽，室温搅拌溶解后，于37℃下孵育30min，过0.22μm滤膜，滤液即为胶原蛋白肽的总葫芦素混合纳米胶束；
所得纳米胶束用Beckman公司的纳米粒径电位分析仪DelsaNano C检测，所述纳米胶束的平均粒径为59.3nm，电位为-18.29mV，包封率为89.24％，载药量为5.82％。
实施例5：
制备胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束：
1)配制浓度为5mg/mL的葫芦素B甲醇溶液，取2mL上述溶液加入48mg卵磷脂，40℃下搅拌45min；
2)称取71mg的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和29mg的聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，加入到步骤1)所得混合液中，相同温度下继续搅拌45min；
3)将步骤2)所得溶液，蒸发除去甲醇，氮吹完全除去有机溶剂，得均匀分布透明的含药脂膜；
4)加入17mL纯化水溶解步骤3)所得脂膜，在40℃温度下超声水化1h后，10000rpm离心20min；
5)取步骤4)所得上清液，加入90mg实施例1制备的胶原蛋白肽，室温搅拌溶解后，于37℃下孵育30min，过0.22μm滤膜，滤液即为含胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束；
所得纳米胶束用Beckman公司的纳米粒径电位分析仪DelsaNano C检测，所述纳米胶束的平均粒径为76.5nm，电位为3.62mV，包封率为90.12％，载药量为5.87％。
实施例6：
本实施例中，对总葫芦素、无胶原蛋白肽的总葫芦素混合纳米胶束及胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束的药动学进行了测定，其中胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束制备方法重复实施例3，无胶原蛋白肽的总葫芦素混合纳米胶束制备方法重复实施例3，但过程中不加入胶原蛋白肽。其中三组总葫芦素组分及含量相同。
方法如下：将SD雄性大鼠(体重250±20g)随机分为3组，灌胃给予总葫芦素、无胶原蛋白肽总葫芦素纳米胶束及总葫芦素胶原蛋白肽纳米胶束，其剂量均为1mg/kg(均以葫芦素B量计，每组各6只)；大鼠给药前禁食12h，期间自由饮水。给药后，于5min，10min，20min，30min，40min，1h，3h，5h，8h，12h，24h，36h眼眶取血，置于肝素化的EP管内，8000rpm离心10min后，移取上层血浆300μL于1.5mL EP管内，加入800μL的乙酸乙酯，涡旋萃取1min，8000rpm离心5min，取出上清液，往剩余下层液体内再加入400μL乙酸乙酯，再次涡旋萃取以及离心，吸取上清液合并，置于40℃水浴下氮气吹干后，加入100μL甲醇，超声复溶，再次离心(8000rpm，10min)，取上清进样，用HPLC测定血浆中的含量，将所得数据用DAS 3.2.7药代动力学数据处理软件进行统计分析；
药-时曲线如图3所示，药代动力学参数如表2所示。根据药-时曲线下面积所示，与原药总葫芦素相比，无胶原蛋白肽总葫芦素纳米胶束口服生物利用度提高了2.05倍，胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束提高了3.05倍；这说明本发明选用的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯与聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯作为葫芦素纳米胶束的主要载体，可显著改善葫芦素的穿膜效率及摄取率；其中，图3中，a、b、c分别代表总葫芦素、胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束和无胶原蛋白肽总葫芦素纳米胶束；
表2总葫芦、无胶原蛋白肽的总葫芦素混合纳米胶束及胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束口服给药后的药代动力学参数(n＝6)
实施例7：
本实施例中，对葫芦素B、无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束及实施例5制备的胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束的药动学进行了测定；其中，无胶原蛋白肽葫芦素B纳米胶束制备方法重复实施例5，但是过程不加入胶原蛋白肽，三组葫芦素B用量相同。其测试方法重复实施例6，药-时曲线如图4所示，药代动力学参数如表3所示。根据药-时曲线下面积所示，与原料药葫芦素B相比，无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束口服生物利用度提高了2.14倍，胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束提高了3.43倍。实施例6与实施例7对比，说明葫芦素B相对于葫芦素D有更好的生物利用度。其中，图4中，a、b、c分别代表葫芦素B、胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米和无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束。
表3葫芦B、无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束及胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束口服给药后的药代动力学参数(n＝6)
实施例8：
在本实施例中，测定了葫芦素B、无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束及实施例5制备的胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束，对HepG-2的细胞毒性，其中葫芦素B与实施例5相同，无胶原蛋白肽的葫芦素B混合纳米胶束制备方法重复实施例5，但是过程不添加胶原蛋白肽。方法如下：将HepG-2细胞培养于含有10％胎牛血清的DMEM高糖培养基内，取对数生长期的HepG-2细胞，消化后用培养液稀释至3×104cells/mL，吹打分散均匀后接种于96孔板内，每孔加入细胞悬液180μL，置细胞培养箱内孵育24h。待细胞贴壁后，加入各组设定梯度浓度的药物。实验中葫芦素溶液与胶束制剂均用DMEM高糖培养液稀释，并用0.22μm无菌滤膜过滤。受试溶液每孔加入20μL，每个浓度设置3个复孔，对照组则补加20μL空白培养液，空白组单加200μL无细胞培养液，置于培养箱中孵育。于加药后48h，将96孔板取出，每孔加入2mg/mL MTT溶液50μL，放回培养箱内孵育4h后甩板，将96孔板倒扣于滤纸上，吸干残留液体后，每孔加入150μL DMSO，放入酶标仪内震荡均匀。用酶标仪测定在490nm处各孔的吸光度值，将数据进行统计分析；
结果如图5可知，空白纳米胶束对HepG-2细胞具有一定的抑制作用，但抑制程度与浓度无关；葫芦素B及含胶原蛋白肽-葫芦素B纳米胶束对HepG-2肿瘤细胞均具有较好的抑制作用，且随着药物浓度的增加，表现出更强的细胞毒性。
实施例9：
本实施例将实施例3制备的胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束，用于以下药效学试验：
(1)受试对象：
裸鼠(SPF级)，雄性，体重(20±2)g，由浙江省医学科学院实验动物中心提供。取处于生长对数期的HepG-2肝癌细胞，消化后用PBS清洗3次，用PBS配制成细胞浓度为5×107个/mL，将其注射入健康的裸鼠左侧腋窝皮下，每只注射细胞悬液量为0.2mL，造荷HepG-2肝癌瘤模型。
(2)试验方法：
接种后，测量肿瘤体积，待肿瘤体积生长至100-200mm3，对荷瘤小鼠进行灌胃给药。将荷瘤小鼠分成3组，每组8只，分别为模型对照组、总葫芦素混悬液组及胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束组。模型对照组灌胃给予生理盐水，另两组分别给予总葫芦素混悬液与胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束，每两天给药一次，连续给药21天，给药剂量为2mg/kg(以葫芦素B计)。
荷瘤鼠的体重变化如图6所示，给予生理盐水的模型对照组体重稍有增加，给予总葫芦素组体重无显著变化，而给予胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束组荷瘤鼠体重较其余组略有下降(p＜0.05)，且胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束内出现一只老鼠死亡。结果表明总葫芦素具有一定的毒性，总葫芦素混悬于生理盐水中给药，吸收较差，因此在同等给药剂量下，胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束组表现出稍大的毒性，在保证药效的前提下，可稍降低给药量。测量肿瘤大小，各组荷瘤鼠肿瘤体积的变化情况如图7所示。与对照组相比，灌胃给予总葫芦素和胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束后，肿瘤的体积均有明显抑制，显示出较好的肿瘤抑制效果。与总葫芦素相比，总葫芦素纳米胶束组的肿瘤抑制活性更强，尤其在给药初期，15天内抑制效果较好，7天内肿瘤体积有所下降。处死裸鼠后取出肿瘤如图8所示。其中，图6、图7、图8中，a、b、c分别代表空白对照、总葫芦素混悬液和胶原蛋白肽-总葫芦素混合纳米胶束。
实施例10：
本实施例将实施例5制备的胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束，用于以下药效学试验：
(1)受试对象：
裸鼠(SPF级)，雄性，体重(20±2)g，由浙江省医学科学院实验动物中心提供。取处于生长对数期的HepG-2肝癌细胞，消化后用PBS清洗3次，用PBS配制成细胞浓度为5×107个/mL，将其注射入健康的裸鼠左侧腋窝皮下，每只注射细胞悬液量为0.2mL，造荷HepG-2肝癌瘤模型。
(2)试验方法：
接种后，测量肿瘤体积，待肿瘤体积生长至100-200mm3，对荷瘤小鼠进行灌胃给药。将荷瘤小鼠分成3组，每组8只，分别为模型对照组、葫芦素B混悬液组及胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束组。模型对照组灌胃给予生理盐水，另两组分别给予葫芦素B混悬液与胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束，每两天给药一次，连续给药21天，给药剂量为2mg/kg(以葫芦素B计)。
荷瘤鼠的体重变化如图9所示，给予生理盐水的模型对照组体重稍有增加，给予葫芦素B组体重无显著变化，而给予载药纳米胶束组荷瘤鼠体重较其余组略有下降(p＜0.05)。结果表明葫芦素B混悬于生理盐水中给药，吸收较差，而在同等给药剂量下，纳米胶束组表现出一定的毒性。测量肿瘤大小，各组荷瘤鼠肿瘤体积的变化情况如图10所示。与对照组相比，灌胃给予葫芦素B和胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束后，肿瘤的体积均有明显抑制，显示出较好的肿瘤抑制效果。与葫芦素B相比，胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束组的肿瘤抑制活性更强，尤其在给药初期，15天内抑制效果较好，7天内肿瘤体积有所下降。处死裸鼠后取出肿瘤如图11所示。其中，图9、图10、图11中，a、b、c分别代表空白对照、葫芦素B混悬液和胶原蛋白肽-葫芦素B混合纳米胶束。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，对本领域熟悉的人员来说，可容易的实现另外的修改，在不违背权利要求及等同范围所限定的一般概念的情况下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (9)
1.胶原蛋白肽作为药物穿膜工具在制备口服药物制剂中的应用，所述胶原蛋白肽带正电荷。
2.根据权利要求1所述的胶原蛋白肽作为药物穿膜工具在制备口服药物制剂中的应用，其特征在于，所述带正电荷的胶原蛋白肽的制备方法如下：
(a)将胶原蛋白肽水溶液与阳离子交换树脂混合，于摇床内40℃下震荡吸附3h，取出吸附后的阳离子交换树脂，用0.2mol/L氯化钠水溶液洗脱2h，过滤，弃去洗脱液；
(b)将步骤(a)过滤后的阳离子交换树脂，用0.5mol/L氯化钠水溶液同样步骤重复洗脱3次，收集洗脱液；所得洗脱液合并，得总液；其中，阳离子交换树脂和氯化钠水溶液的质量体积比为1∶2，单位为g：mL；
(c)将步骤(b)所得总液，浓缩除盐，透析袋透析，冻干，即得带正电荷的胶原蛋白肽。
3.根据权利要求2所述的胶原蛋白肽在制备口服给药中的应用，其特征在于，所述阳离子交换树脂型号为D152、732、D072、D61或D001，所述胶原蛋白肽分子量为1000～5000Da，所述胶原蛋白肽水溶液的浓度为(10～100)mg/mL。
4.根据权利要求2所述的胶原蛋白肽在制备口服给药中的应用，其特征在于，所述步骤(a)中，胶原蛋白肽水溶液、阳离子交换树脂和氯化钠水溶液的质量体积比为2∶1∶2，其单位为mL：g：mL。
5.一种含胶原蛋白肽的葫芦素口服胶束，起特征在于，包括以下重量份的组分：葫芦素8～15份、卵磷脂30～70份、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯50～75份、聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯25～50份和带正电荷的胶原蛋白肽80～100份。
6.根据权利要求5所述的一种含胶原蛋白肽的葫芦素口服胶束，其特征在于，所述葫芦素为葫芦素B或含有葫芦素B含量大于60％的总葫芦素。
7.一种权利要求5或6的含胶原蛋白肽的葫芦素口服胶束的制备方法，其特征在于，包括以下方法步骤：
(1)称取所述重量份的葫芦素溶于一定量的甲醇中，加入所述重量份的卵磷脂，30～50℃下搅拌40～50min；其中，葫芦素与甲醇的质量体积比为(4～6)：1，单位为mg/mL；
(2)称取所述重量份的辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯和聚乙二醇15-羟基硬脂酸酯，加入到步骤(1)所得混合液中，相同温度下继续搅拌40～50min；
(3)将步骤(2)所得溶液，蒸发除去甲醇，氮吹完全除去有机溶剂，得均匀分布透明的含药脂膜；
(4)称取一定量的纯水，溶解步骤(3)所得的脂膜，超声水化后，离心分离，取上清液，加入所述重量份的改性胶原蛋白肽，室温溶解后，于35～40℃下孵育30min，过0.22μm滤膜，滤液即为含改性胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束。
8.根据权利要求7所述的含改性胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，葫芦素与水的质量体积比为1∶(1～3)，单位为mg/mL。
9.根据权利要求7所述的一种含改性胶原蛋白肽的葫芦素纳米胶束的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，超声水化时间为：0.5～2h，离心分离条件为：温度35～40℃，转速10000rpm，离心20min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810033902.3A CN108210457B (zh) | 2018-01-14 | 2018-01-14 | 胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810033902.3A CN108210457B (zh) | 2018-01-14 | 2018-01-14 | 胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108210457A true CN108210457A (zh) | 2018-06-29 |
| CN108210457B CN108210457B (zh) | 2020-06-02 |
Family
ID=62641812
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810033902.3A Active CN108210457B (zh) | 2018-01-14 | 2018-01-14 | 胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108210457B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101138550A (zh) * | 2007-09-18 | 2008-03-12 | 沈阳药科大学 | 多种表面活性剂联合使用制备的混合胶束药物制剂及其制备方法 |
| CN106137966A (zh) * | 2015-03-26 | 2016-11-23 | 天津药物研究院有限公司 | 葫芦素b纳米脂质体及其制备 |
-
2018
- 2018-01-14 CN CN201810033902.3A patent/CN108210457B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101138550A (zh) * | 2007-09-18 | 2008-03-12 | 沈阳药科大学 | 多种表面活性剂联合使用制备的混合胶束药物制剂及其制备方法 |
| CN106137966A (zh) * | 2015-03-26 | 2016-11-23 | 天津药物研究院有限公司 | 葫芦素b纳米脂质体及其制备 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| TANG，L.，ET AL.: "Modified mixed nanomicelles with collagen peptides enhanced oral absorption of Cucurbitacin B: preparation and evaluation", 《DRUG DELIVERY》 * |
| WANG F. H.，ET AL.: "Recent progress of cell-penetrating peptides as new carriers for intracellular cargo delivery", 《JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE》 * |
| 梁飞 等: "胶原蛋白肽的性质、应用及发展前景的研究综述", 《明胶科学与技术》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108210457B (zh) | 2020-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101221680B1 (ko) | 20 （Ｒ）Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ３ 약용조합물 수성 솔루션과 준비방법 | |
| CN102327230A (zh) | 一种包裹紫杉烷类药物的蛋白纳米颗粒及其制备方法 | |
| CN102370622A (zh) | 一种载药物纳米粒及其制备方法和应用 | |
| CN105617362A (zh) | 一种新型的胰岛素－磷脂－壳聚糖自组装微粒载体及其制剂 | |
| CN111569082A (zh) | 一种包载蛋白多肽类药物外泌体的口服递送系统 | |
| CN102357077A (zh) | 一种包裹难溶性药物的蛋白纳米颗粒及其制备方法 | |
| CN114917362B (zh) | 一种脂质纳米粒及其制备方法及用途 | |
| CN106983719A (zh) | 一种多西他赛聚合物纳米胶束注射剂、其制备方法及其在制备治疗肿瘤药物中的应用 | |
| CN108853142A (zh) | 水溶性富勒烯纳米颗粒在制备抑制肿瘤生长药物中的应用 | |
| CN104098763B (zh) | 一种巯基化泊洛沙姆衍生物载体及其制备方法和应用 | |
| CN102133191A (zh) | 一种转铁蛋白和白蛋白复合纳米粒及其制备方法和用途 | |
| CN113876964B (zh) | 一种肿瘤细胞膜载药体系及其构建方法和应用 | |
| CN109044991B (zh) | 巨噬细胞载药制剂及其制备方法 | |
| CN101259115B (zh) | 一种治疗糖尿病的口服胰岛素软胶囊及其制备方法 | |
| CN108210457A (zh) | 胶原蛋白肽的药物应用、葫芦素口服胶束及其制备方法 | |
| CN102357076A (zh) | 一种包裹难溶性药物的蛋白纳米颗粒的制备方法 | |
| CN105879051A (zh) | 一种自组装的核壳结构纳米药物的制备及应用 | |
| CN109568601A (zh) | 一种蛋白多肽类药物双重微球及其制备方法和胰岛素双重微球 | |
| CN109662955A (zh) | 一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒及其制备和应用 | |
| CN106109442B (zh) | 一种山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒及其制备方法与应用 | |
| CN100515392C (zh) | 有效部位药物沉积得到改善的干粉组合物 | |
| CN107281163B (zh) | 羧基化合物在促进载药纳米粒微球口服吸收方面的应用 | |
| CN105663060B (zh) | 一种去水卫矛醇脂质体冻干粉针剂及其制备方法 | |
| CN102406610B (zh) | 一种具有长循环性能的微粒给药系统及其制备方法 | |
| CN100435784C (zh) | 含有和包封中药成分的无机盐纳米粒子的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20180629 Assignee: Meixinjia Zhongwei Pharmaceutical Co.,Ltd. Assignor: JIANG University OF TECHNOLOGY Contract record no.: X2023980045553 Denomination of invention: Drug Application of Collagen Peptide, Cucurbitacin Oral Micelle and Its Preparation Method Granted publication date: 20200602 License type: Common License Record date: 20231102 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |