CN108207492A - 一种木腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种木腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用。本发明木腐型食用菌液体菌种培养基，包括以下质量百分比浓度的组分：葡萄糖0.5％～1.0％；杏鲍菇菌渣酶解液3.0％～5.0％；油葵饼粕水煮液2.0％～3.0％；酵母浸膏0.05％～0.15％；余量为水。本发明液体培养基营养成分丰富、组成合理，充分满足了木腐型食用菌的生长需要，使菌丝快速萌发生长和占据生长空间，抗杂菌能力增强，活力强，稳定好，菌丝老化慢，菌种质量提升明显。采用本发明液体培养基，菌种制备时间较常规缩短0～2天。

Description

一种木腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用
技术领域
本发明涉及一种木腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用，属于真菌发酵技术领域。
背景技术
制种是食用菌生产中的关键环节，对产业的发展至关重要，直接关系到最终产品的产量、品质和效益。液体菌种是采用液体培养基经深层培养制得，与固体菌种相比，液体菌种具有生产周期短、发菌快、菌龄整齐、便于机械化操作等优点。随着食用菌规模化生产的发展，采用液体培养技术制备液体菌种代替传统的固体菌种，将是食用菌生产发展的重要方向。由于液体菌种对生产工艺及技术条件要求高，并受资金和技术的限制，目前我国仍有相当多食用菌生产企业采用传统固体菌种的栽培模式。
液体菌种质量的好坏对液体接种的难易、菌丝长势、子实体产量和出菇质量等均有很大的影响。木腐型食用菌是以木质材料为主要原料，分解木质素能力较强的一类食用菌，如香菇、平菇、黑木耳和金针菇等。现有技术的木腐型食用菌液体菌种培养基多含有葡萄糖和马铃薯等碳源、豆粕和麸皮等氮源、维生素、无机盐、生长因素等多种营养成分，但这些方法在实际生产过程操作繁琐，添加原料组分多，成本高，原料溶解不充分，颗粒物质多，造成液体菌种培养基质量不稳定、抗杂菌能力弱、菌丝生长不适应、菌丝老化退变快等问题。为解决液体菌种质量问题，需要对现有技术进行改进、创新和提高。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，根据木腐菌型食用菌对养分需求的特点，提供一种木腐型食用菌液体菌种培养基、制备方法及应用，本发明具有良好的通用性，培育的菌种一致性、稳定性好，菌丝活力和抗杂菌能力强。
为实现上述发明目的，本发明一方面提供一种木腐型食用菌液体菌种培养基，包括以下质量百分比浓度的组分：
葡萄糖0.5％～1.0％；
杏鲍菇菌渣酶解液3.0％～5.0％；
油葵饼粕水煮液2.0％～3.0％；
酵母浸膏0.05％～0.15％；
余量为水。
优选的，所述木腐型食用菌液体菌种培养基，包括以下质量百分比浓度的组分：
葡萄糖0.75％；
杏鲍菇菌渣酶解液4.0％；
油葵饼粕水煮液2.5％；
酵母浸膏0.1％；
余量为水。
所述杏鲍菇菌渣酶解液的制备方法：取新鲜无霉变的杏鲍菇菌渣，在60℃条件下烘干，粉碎，放入打浆器中，加5倍重量的水匀浆；向杏鲍菇菌渣浆液中加入0.2％～0.4％纤维素酶，0.1％～0.2％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至52～58℃，持续酶解2.0～4.0h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得杏鲍菇菌渣酶解液。
优选地，杏鲍菇菌渣浆液中加入0.3％纤维素酶，0.15％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至55℃，持续酶解3.0h。
制备杏鲍菇菌渣酶解液所用的纤维素酶和木瓜蛋白酶为市售食品级产品，原料成本低廉，获取方便。
所述油葵饼粕水煮液制备方法：称取油葵饼粕，粉碎过50～80目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸20～40min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。
优选地，油葵饼粕粉碎后过60目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸30min，过滤。
本发明还提供了制备木腐型食用菌液体菌种培养基的方法，包括以下步骤：
(1)按制备液体培养基的重量，计算并称取葡萄糖、杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液、酵母浸膏、水。
(2)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌。再将其与杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。
(3)在保持营养不流失的情况下进行彻底灭菌，冷却后即得液体培养基。
优选地，所述步骤(3)中，灭菌温度为121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa，灭菌时间40min。
本发明还提供所述的木腐型食用菌液体菌种培养基在发酵培养木腐型食用菌液体菌种中的应用，方法是：冷却至26℃以下，接入食用菌菌种，根据不同菇种生长特性，将所述培养基液体温度调整至20～28℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养3～7天即可制得品质优良的液体菌种。
本发明液体菌种培养基所选用的原料具有特点如下：
(1)食用菌菌渣是食用菌采收子实体后剩余的废弃物，相关研究表明，菌渣中含有丰富的可被食用菌直接吸收利用的营养物质，以及多糖、酶类、有机酸类等，而且菌渣还含有大量的菌体蛋白，利用酶解的方式可以产生更多的活性多肽、还原糖和氨基酸，用于液体菌种的培养，可提高食用菌菌丝的长速、活力和抗逆性，具有很好的促进作用。
(2)油葵饼粕是油葵经机械压榨或溶剂浸出提油后的副产物，含有丰富的营养成分，其中维生素、蛋氨酸、烟酸、钙、磷等高于豆粕，但目前利用率不高，造成资源浪费。研究利用其替代豆粕用于食用菌生产具有重要的作用和意义。本发明人经过研究发现将其水煮液用于发酵培养菌种替代豆粕可以取得优良效果，拓展了油葵饼粕的应用范围及降低了食用菌液体菌种培养成本。
(3)本发明液体菌种培养基中葡萄糖为碳源物质，酵母浸膏为氮源物质，杏鲍菇菌渣酶解液既补充了不同形式的碳源，又提供了丰富的生长因子和无机盐等，油葵饼粕水煮液既补充了不同形式的氮源，又提供了食用菌生长发育不可少的维生素类等物质，优化了培养基的养分和结构组成。
本发明具有如下有益效果：
(1)本发明充分利用废弃物，经过加工处理后，用于食用菌液体发酵培养基，极大地降低了成本，且本发明制备工艺简单可控，易于管理和质量控制，利于工业化生产。
(2)本发明液体培养基营养成分丰富，充分满足了木腐型食用菌的生长需要，使菌丝快速萌发生长和占据生长空间，抗杂菌能力增强，活力强，稳定好，菌丝老化慢，显著提高木腐型食用菌液体菌种的制备成功率。
(3)本发明菌种制备时间较常规缩短0～2天，菌丝体干重显著提高，菌丝球大小均匀、表面毛刺多，悬浮性好，结构紧密，而且具有更好的菌种活力，老化速度慢，菌种质量提升明显。
具体实施方式
下面结合以下具体实施方式，对本发明的技术方案及效果做进一步的说明。下述说明用于解释本发明，而非对本发明的限制。下述方法如无特殊说明均为本领域常规方法，所用组分、试剂等如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
一种金针菇液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.75％，杏鲍菇菌渣酶解液3.5％，油葵饼粕水煮液2.5％，酵母浸膏0.12％，其余为水。
按照如下步骤进行制备：
(1)杏鲍菇菌渣酶解液的制备：取新鲜无霉变的杏鲍菇菌渣，在60℃条件下烘干，粉碎，放入打浆器中，加5倍重量的水匀浆；向杏鲍菇菌渣浆液中加入0.3％纤维素酶和0.15％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至55℃，持续酶解3.0h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得杏鲍菇菌渣酶解液。
(2)油葵饼粕水煮液制备方法：称取油葵饼粕，混合粉碎过60目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸40min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。
(3)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌。再将其与杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。
(4)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌40min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。
灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入金针菇菌种，将所述培养基液体温度调整至22℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养4天即可制得品质优良的液体菌种。
实施例2
一种杏鲍菇液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.75％，杏鲍菇菌渣酶解液4.0％，油葵饼粕水煮液2.0％，酵母浸膏0.15％，其余为水。
按照如下步骤进行制备：
(1)杏鲍菇菌渣酶解液的制备：取新鲜无霉变的杏鲍菇菌渣，在60℃条件下烘干，粉碎，放入打浆器中，加5倍重量的水匀浆；向杏鲍菇菌渣浆液中加入0.25％纤维素酶和0.12％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至58℃，持续酶解3.5h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得杏鲍菇菌渣酶解液。
(2)油葵饼粕水煮液制备方法：称取油葵饼粕，混合粉碎过80目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸20min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。
(3)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌。再将其与杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。
(4)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌35min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。
灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入杏鲍菇菌种，将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得品质优良的液体菌种。
实施例3
一种香菇液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.5％，杏鲍菇菌渣酶解液5.0％，油葵饼粕水煮液3.0％，酵母浸膏0.05％，其余为水。
按照如下步骤进行制备：
(1)杏鲍菇菌渣解液的制备：取新鲜无霉变的杏鲍菇菌渣，在60℃条件下烘干，粉碎，放入打浆器中，加5倍重量的水匀浆；向杏鲍菇菌渣浆液中加入0.35％纤维素酶和0.18％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至55℃，持续酶解2.5h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得杏鲍菇菌渣酶解液。
(2)油葵饼粕水煮液制备方法：称取油葵饼粕，混合粉碎过60目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸30min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。
(3)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌。再将其与杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。
(4)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌40min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。
灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入香菇菌种，将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得品质优良的液体菌种。
实施例4
一种木耳液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖1.0％，杏鲍菇菌渣酶解液3.0％，油葵饼粕水煮液2.5％，酵母浸膏0.1％，其余为水。
按照如下步骤进行制备：
(1)杏鲍菇菌渣解液的制备：取新鲜无霉变的杏鲍菇菌渣，在60℃条件下烘干，粉碎，放入打浆器中，加5倍重量的水匀浆；向杏鲍菇菌渣浆液中加入0.2％纤维素酶和0.1％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至52℃，持续酶解4.0h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得杏鲍菇菌渣酶解液。
(2)油葵饼粕水煮液制备方法：称取油葵饼粕，混合粉碎过50目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸30min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。
(3)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌。再将其与杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。
(4)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌45min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。
(5)灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入木耳菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得品质优良的液体菌种。
实施例5
一种灵芝液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖0.5％，杏鲍菇菌渣酶解液4.5％，油葵饼粕水煮液3.0％，酵母浸膏0.08％，其余为水。
按照如下步骤进行制备：
(1)杏鲍菇菌渣酶解液的制备：取新鲜无霉变的杏鲍菇菌渣，在60℃条件下烘干，粉碎，放入打浆器中，加5倍重量的水匀浆；向杏鲍菇菌渣浆液中加入0.4％纤维素酶和0.2％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至52℃，持续酶解2.0h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得杏鲍菇菌渣酶解液。
(2)油葵饼粕水煮液制备方法：称取油葵饼粕，混合粉碎过80目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸20min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。
(3)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌。再将其与杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。
(4)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌35min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。
灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下，接入灵芝菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得品质优良的液体菌种。
对比例1
一种通用型食用菌液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：马铃薯8.0％，葡萄糖2.0％，豆粕1.0％，酵母浸膏0.3％，磷酸二氢钾0.06％，硫酸镁0.06％，维生素B10.005％，其余为水。
按照如下步骤进行制备：
(1)按比例分别称取马铃薯和豆粕，马铃薯洗净去皮切成小块，与豆粕混合放入水煮容器中，加入9倍重量的水，煮沸30min，过滤，取滤液。
(2)将原料中的葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素按上述比例溶于水中，并充分搅拌，直至溶解成半成品溶液。
(3)再将原料中的酵母浸膏按比例加入半成品溶液中，与马铃薯和豆粕水煮液混合并搅拌均匀，制成培养基液体，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容。
(4)将以上培养基溶液在发酵罐中灭菌40min，保持温度121～125℃，压强为0.105～0.135Mpa。
灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下。接入金针菇菌种，将所述培养基液体温度调整至22℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得液体菌种；接入杏鲍菇菌种，将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种；接入香菇菌种，将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养8天即可制得液体菌种；接入木耳菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种；接入灵芝菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。
对比例2
一种食用菌液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖2.0％，油葵饼粕水煮液2.5％，酵母浸膏0.1％，其余为水。
制备方法同实施例1。
灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下。接入金针菇菌种，将所述培养基液体温度调整至22℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得液体菌种；接入杏鲍菇菌种，将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种；接入香菇菌种，将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养7天即可制得液体菌种；接入木耳菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种；接入灵芝菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养6天即可制得液体菌种。
对比例3
一种食用菌液体菌种培养基，培养基配方为(质量百分比浓度)：葡萄糖1.0％，杏鲍菇菌渣酶解液4.0％，豆粕水煮液2.5％，酵母浸膏0.1％，其余为水。
制备方法同实施例1。
灭菌完成后，将培养基液体冷却至26℃以下。接入金针菇菌种，将所述培养基液体温度调整至22℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养4天即可制得液体菌种；接入杏鲍菇菌种，将所述培养基液体温度调整至24℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得液体菌种；接入香菇菌种，将所述培养基液体温度调整至25℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养7天即可制得液体菌种；接入木耳菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得液体菌种；接入灵芝菌种，将所述培养基液体温度调整至26℃，通入净化空气进行有氧培养，发酵培养5天即可制得液体菌种。
实验例
利用上述实施例和对比例的方法制备金针菇、杏鲍菇、香菇、木耳、灵芝的液体菌种，实施例和对比例中各菌种接种量及培养温度等均相同。测定培养所需时间、培养菌丝干重、菌丝球形态，并通过检测菌球在固体培养基上的萌发时间、长势、长速等评价液体菌种的活性，比较不同实施例和对照实施例对不同食用菌菌丝生长的影响，结果见表1。
表1不同制备方法对食用菌液体菌种生长的影响
根据上表可以看出，本发明各实施例培养的金针菇、杏鲍菇、香菇、木耳、灵芝等木腐型食用菌液体菌种较对比例具有明显的优势，菌种制备时间缩短0～2天，菌丝体干重显著提高，菌丝球大小均匀、表面毛刺多，悬浮性好，结构紧密，而且具有更好的菌种活力，老化速度慢，菌种质量提升明显。

Claims (9)

1.一种木腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，包括以下质量百分比浓度的组分：葡萄糖0.5％～1.0％；杏鲍菇菌渣酶解液3.0％～5.0％；油葵饼粕水煮液2.0％～3.0％；酵母浸膏0.05％～0.15％；余量为水。
2.如权利要求1所述的木腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，包括以下质量百分比浓度的组分：葡萄糖0.75％；杏鲍菇菌渣酶解液4.0％；油葵饼粕菌渣水煮液2.5％；酵母浸膏0.1％；余量为水。
3.如权利要求1或2所述的木腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，所述杏鲍菇菌渣酶解液的制备方法：取新鲜无霉变的杏鲍菇菌渣，在60℃条件下烘干，粉碎，放入打浆器中，加5倍重量的水匀浆；向杏鲍菇菌渣浆液中加入0.2％～0.4％纤维素酶，0.1％～0.2％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至52～58℃，持续酶解2.0～4.0h，待酶解结束后，将温度升至100℃保持15min，使酶灭活，得到酶解产物，冷却，过滤取滤液即得杏鲍菇菌渣酶解液。
4.如权利要求3所述的木腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，杏鲍菇菌渣浆液中加入0.3％纤维素酶，0.15％的木瓜蛋白酶进行酶解，搅拌，加热至55℃，持续酶解3.0h。
5.如权利要求1或2所述的木腐型食用菌液体菌种培养基，其特征是，所述油葵饼粕水煮液制备方法：称取油葵饼粕，粉碎过50～80目筛，放入水煮容器中，加入10倍重量的水，煮沸20～40min，过滤，滤液即为油葵饼粕水煮液。
6.制备权利要求1-5任一所述的木腐型食用菌液体菌种培养基的方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)按制备液体培养基的重量，计算并称取葡萄糖、杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液、酵母浸膏、水；
(2)将葡萄糖和酵母浸膏溶于水中，充分搅拌；再将该溶液与杏鲍菇菌渣酶解液、油葵饼粕水煮液均匀混合，获得混合溶液，倒入生物发酵罐中，在容器中加水定容；
(3)灭菌冷却后即得。
7.如权利要求6所述的木腐型食用菌液体菌种培养基的制备方法，其特征是，所述步骤(3)中，灭菌温度121～125℃，压强0.105～0.135Mpa，时间35～45min。
8.权利要求1-5任一所述的木腐型食用菌液体菌种培养基在发酵培养木腐型食用菌液体菌种中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征是，将木腐型食用菌液体菌种培养基冷却至26℃以下，接入食用菌菌种，于20～28℃，通入净化空气进行有氧发酵培养3～7天，即可制得品质优良的液体菌种。
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