CN108159199A - 一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物繁殖过程中添加中药的发酵技术，尤其涉及一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法；取益母增蛋散组方中的黄芪60份、熟地黄60份、当归80份、淫羊藿150份、女贞子150份、益母草150份、板蓝根80份、丹参50份、紫花地丁50份、山楂80份、地榆50份、甘草40份；采用复合菌种固态发酵菌种发酵，菌种分别为：枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌、益母草内生菌1号；使用复合菌种发酵后的益母增蛋散，是一种完全取代抗生素的无药残、防病促生长的中药微生态制剂，使用复合菌种发酵后的益母增蛋散生产的兽药其免疫能力远远超过其它类产品及普通的益母增蛋散。

Description

一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法
技术领域
本发明属于微生物繁殖过程中添加中药的发酵技术，尤其涉及一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法。
背景技术
益母增蛋散的组方为黄芪60份、熟地黄60份、当归80份、淫羊藿150份、女贞子150份、益母草150份、板蓝根80份、丹参50份、紫花地丁50份、山楂80份、地榆50份、甘草40份；中药组分各药物的功能为：黄芪味甘性温、补气升阳，其活性成分黄芪多糖可提高机体免疫力；熟地黄味甘性温、滋阴补血，益精填髓；当归味甘性温，既能补血，又能活血，其活性成分阿魏酸钠能激活巨噬细胞，起到免疫功能；淫羊藿味辛甘性温，补肾壮阳，祛风除湿，其活性成分是淫羊藿黄酮甙，淫羊藿黄酮次甙有显著的促进性机能功能，还能迅速提升机体免疫力；女贞子，味甘苦、性凉，归肝肾经，具有滋补肝肾、益阴养血之功。现代医学研究证明，女贞子内含熊果酸、甘露醇、葡萄糖、脂肪油等，有强心、利尿和保肝作用，能使因化疗引起的白细胞下降数量升高，并对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有抑制作用；益母草，味辛微苦，入心、肝、膀胱经；主要用于活血调经，利尿消肿。用于月经不调，痛经，经闭，恶露不尽，水肿尿少;急性肾炎水肿；板蓝根，味苦性寒；归肝，胃经。主要功效清热解毒、凉血。用于温热发热、发斑、风热感冒、咽喉肿烂、流行性乙型脑炎、肝炎、 腮腺炎；丹参味苦，微寒，入心、肝经。具有活血散淤、消肿止血、消炎止痛、调经止痛、扩张冠状动脉、改善心肌缺血状况、降低血压、安神静心、降血糖和抗菌等功效，对月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛等病症有一定的疗效；紫花地丁味苦、辛、寒。归心、肺经。具有清热解毒，凉血消肿，清热利湿的作用，主治疔疮，痈肿，瘰疬，黄疸，痢疾，腹泻，目赤，喉痹，毒蛇咬伤；山楂味酸甘性温，入脾、胃、肝经。具有降血脂、血压、强心、抗心律不齐等作用，同时也是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药，对胸膈脾满、疝气、血淤、闭经等症有很好的疗效；地榆味苦酸性寒，归肝、肺、肾、大肠经，主要用于吐血，咯血，衄血，尿血，便血，痔血，血痢，崩漏，赤白带下，疮痈肿痛，湿疹，阴痒，水火烫伤，蛇虫咬伤；甘草具有清热解毒，调和诸药，其活性成分甘草酸是细胞免疫调节剂。诸药共奏益气健脾，补肾壮阳，增卵益精之功效，治疗各种原因引起的产蛋率低下，长期应用可有效延长产蛋高峰期，提高经济效益。
益母增蛋散系多种植物性中药组成，富含纤维素，禽类体内无法充分消化纤维素，这样使得很多有效成分难于溶出被动物利用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足，而提供的一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法。
本发明的目的是这样实现的：一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1）、取益母增蛋散组方中的黄芪60份、熟地黄60份、当归80份、淫羊藿150份、女贞子150份、益母草150份、板蓝根80份、丹参50份、紫花地丁50份、山楂80份、地榆50份、甘草40份；水洗后烘干、然后粉碎成粉末，粉末大小为50-100目；得到中药粉剂，备用；
步骤2）、采用复合菌种固态发酵菌种发酵，采用的复合菌种固态发酵菌种分别为：枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌、益母草内生菌1号；
步骤3）、将枯草芽孢杆菌接种到由3份牛肉膏、10份蛋白胨、5份氯化钠、20份琼脂和1000份水组成的培养基中，在使用恒温摇床在34度环境下培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；将益母草内生菌1号菌种接种到PDA培养基中使用恒温摇床在34℃环境下培养24小时获得益母草内生菌1号原菌液；将保加利亚乳杆菌接种到由20份葡萄糖、10份蛋白胨、10份牛肉膏、5份酵母膏、5份柠檬酸钠、2份磷酸二氢钾、5份醋酸钠、0.1份硫酸镁、0.1份硫酸锰和1000份水组成的培养基中，使用恒温摇床在34度环境下培养24小时获得保加利亚乳杆菌原菌液；使用与保加利亚乳杆菌相同的培养基和培养环境及方法分别获得植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液；然后分别对枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液进行提纯；
步骤4）、将提纯后的枯草芽孢杆菌原菌液和益母草内生菌1号原菌液，从斜面接入三角瓶中，振荡培养24小时；将提纯后的保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液和双歧杆菌原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制34℃，培养24小时；
步骤5）、将步骤4）中培养后的枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液混合均匀，各个原菌液的占比为：枯草芽孢杆菌原菌液15~25%、保加利亚乳杆菌原菌液15~25%、植物乳杆菌原菌液15~25%、嗜热链球菌原菌液15~25%、双歧杆菌原菌液15~25%、益母草内生菌1号原菌液15~25%，混合均匀后获得菌种原液，备用；
步骤6）、培养基的制备；培养基采用红糖、中药粉剂和水制成，红糖1~2%，中药粉剂55~60%，余量为蒸馏水，得到培养基，备用；
步骤7）、将步骤6）获得的培养基加热至34℃时接种，将步骤5）得到的菌种原液接种到培养基中，接种量为4％；采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间48~72小时，当PH值达到4.0时完成发酵，发酵完成以后晒干即得所述的复合菌种发酵的益母增蛋散。
所述的益母草内生菌1号的分离方法如下：
取益母草切成1cm长小块，依次进入75%酒精内1分钟，1%次氯酸钠溶液15分钟，然后再用75%酒精浸泡1分钟，去除表面菌株之后，再用蒸馏水冲洗5遍；插入含有双抗WA培养基中，放在恒温培养箱中28度培养；观察到有0.5cm的菌丝从益母草切口处长出后，将菌丝转接到PDA培养基中培养；内生菌菌种纯化采用平板分离法；分离后培养细菌，然后将细菌产物按照益母草药典标准检测法进行测量，最后找到一株囊孢菌，产生益母草碱类似成分，即为所述的益母草内生菌1号。
所述的双抗WA培养基的制备方法为：取琼脂20份，加水定容到1000份，加入效价为200 ,150IU/ml的青霉素和链霉素，既得所述的双抗WA培养基。
所述的PDA培养基的制备方法为：取马铃薯200份，切成块煮沸30分钟，用纱布过滤，再加入20份葡萄糖和20份琼脂，溶化后补足水至1000份，既得所述的PDA培养基。
本发明将现代生物工程技术与传统的中药制剂方法相结合，使中药生产现代化，弥补传统制法的不足。将生物菌发酵技术应用到中药中，分解益母增蛋散组方中中药的纤维素让有效成分易于溶出，同时药物有效成分变成小分子更易被吸收，更易到达靶器官发挥作用。从而提高了益母增蛋散的药效和生物利用度。不仅如此，使用复合菌种来发酵益母增蛋散，发酵后的益母增蛋散不仅含有中药有效作用的生理活性成分，而且还富含有菌种和基质在发酵制备过程中产生的多种维生素、丰富的氨基酸及多种易于吸收的微量元素。这些营养成分组分合理，极易被机体吸收和利用。同时微生物在繁殖过程中加入了中药粉剂，对微生物进行了定向筛选，让微生物及其副产物表达出一部分中药的特性。所以采用本制备方法发酵后的益母增蛋散制剂，表现出了微生物和中药的叠加效果，更适应市场需要。
使用复合菌种发酵后的益母增蛋散，是一种完全取代抗生素的无药残、防病促生长的中药微生态制剂，由于益母增蛋散和复合菌对免疫系统的协同作用，因此使用复合菌种发酵后的益母增蛋散生产的兽药其免疫能力远远超过其它类产品及普通的益母增蛋散。
具体实施方式
实施例1：一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1）、取益母增蛋散组方中的黄芪60克、熟地黄60克、当归80克、淫羊藿150克、女贞子150克、益母草150克、板蓝根80克、丹参50克、紫花地丁50克、山楂80克、地榆50克、甘草40克；水洗后烘干、然后粉碎成粉末，粉末大小为50目；得到中药粉剂，备用；
步骤2）、采用复合菌种固态发酵菌种发酵，采用的复合菌种固态发酵菌种分别为：枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌、益母草内生菌1号；
步骤3）、将枯草芽孢杆菌接种到由3克牛肉膏、10克蛋白胨、5克氯化钠、20克琼脂和1000毫升水组成的培养基中，接种量为1%，在使用恒温摇床在34度环境下培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；将益母草内生菌1号菌种接种到PDA培养基中使用恒温摇床在34℃环境下培养24小时获得益母草内生菌1号原菌液；将保加利亚乳杆菌接种到由20克葡萄糖、10克蛋白胨、10克牛肉膏、5克酵母膏、5克柠檬酸钠、2克磷酸二氢钾、5克醋酸钠、0.1克硫酸镁、0.1克硫酸锰和1000毫升水组成的培养基中，接种量为1%，使用恒温摇床在34度环境下培养24小时获得保加利亚乳杆菌原菌液；使用与保加利亚乳杆菌相同的培养基和培养环境及方法分别获得植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液；然后分别对枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液进行提纯；
步骤4）、将提纯后的枯草芽孢杆菌原菌液和益母草内生菌1号原菌液，从斜面接入三角瓶中，振荡培养24小时；将提纯后的保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液和双歧杆菌原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制34℃，培养24小时；
步骤5）、将步骤4）中培养后的枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液混合均匀，各个原菌液的占比为：枯草芽孢杆菌原菌液15%、保加利亚乳杆菌原菌液15%、植物乳杆菌原菌液15%、嗜热链球菌原菌液15~25%、双歧杆菌原菌液15%、益母草内生菌1号原菌液15%，混合均匀后获得菌种原液，备用；
步骤6）、培养基的制备；培养基采用红糖、中药粉剂和水制成，红糖2%，中药粉剂60%，余量为蒸馏水，得到培养基，备用；
步骤7）、将步骤6）获得的培养基加热至34℃时接种，将步骤5）得到的菌种原液接种到培养基中，接种量为4％；采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间72小时，当PH值达到4.0时完成发酵，发酵完成以后晒干即得所述的复合菌种发酵的益母增蛋散。
所述的益母草内生菌1号的分离方法如下：
取益母草切成1cm长小块，依次进入75%酒精内1分钟，1%次氯酸钠溶液15分钟，然后再用75%酒精浸泡1分钟，去除表面菌株之后，再用蒸馏水冲洗5遍；插入含有双抗WA培养基中，放在恒温培养箱中28度培养；观察到有0.5cm的菌丝从益母草切口处长出后，将菌丝转接到PDA培养基中培养；内生菌菌种纯化采用平板分离法；分离后培养细菌，然后将细菌产物按照益母草药典标准检测法进行测量，最后找到一株囊孢菌，产生益母草碱类似成分，即为所述的益母草内生菌1号。
所述的双抗WA培养基的制备方法为：取琼脂20克，加水定容到1000毫升，加入效价为200 ,150IU/ml的青霉素和链霉素，既得所述的双抗WA培养基。
所述的PDA培养基的制备方法为：取马铃薯200克，切成块煮沸30分钟，用纱布过滤，再加入20克葡萄糖和20克琼脂，溶化后补足水至1000毫升，既得所述的PDA培养基。
本发明，所述的各种菌的原菌种，均从农业微生物菌种保藏管理中心（ACCC）引进，或者本公司实验室自己分离。确保了各菌种的存活和质量。
对比实验：
实验材料与方法
本实验在河南新乡获嘉县李某种鸡场进行。由该场提供200只61~72周龄的海赛克斯白蛋鸡。供试日粮及营养水平饲料按国家标准配制。基础日粮由玉米、麸皮、豆饼、菜籽饼、棉仁饼、酵母粉、骨粉、石粉及各种矿物微量元素、维生素添加剂组成。
实验期与实验分组实验日期
2016年3月1日至2016年5月15日共76 天 ， 预试期10天，正试期66天。
实验分组
将200只海赛克斯白蛋鸡随机分为对照组和实验组。
对照组：饲喂基础日粮+益母增蛋散( 4g /kg )。
实验组：饲喂基础日粮+复合菌种发酵的益母增蛋散( 4g /kg )。
益母增蛋散和复合菌种发酵的益母增蛋散的预混方法为：取适量基础日粮将复合菌种发酵的益母增蛋散逐级扩大预混，均匀地撤在搅拌机中混匀即可使用。
饲养管理条件按实验鸡场饲养制度进行，二组实验条件相同，均为笼养，干粉料、自由采食、自由饮水、自然通风，光照时效为16小时，光照强度为5~10 lx，每天下午2时收蛋。每日记录采食量、产蛋颗数和蛋重。
对比实验结果
在海赛克斯白蛋鸡日粮中添加复合菌种发酵的益母增蛋散4000g/t， 对照组添加益母增蛋散4000g /t，实验组和对照组的产蛋率分别为(62.26±7.03)%和( 55.63±6.01)%，实验组比对照组蛋重提高3.10g/个。
吸收效果实验
分别收集对照组和实验组蛋鸡粪便晒干，粉碎后取粗粉20克，加乙醇100ml，冷浸过夜，过滤。蒸干滤液，残渣加稀盐酸4ml溶解，过滤，取滤液1ml，加碘化铋钾试液2滴。
吸收效果实验结果
对照组产生橙色沉淀，实验组没有产生沉淀。这说明对照组粪便中残留有没有消化吸收的生物碱，而实验组中生物碱被彻底消化吸收，再一次证明经过本发明发酵过后的益母增蛋散被充分消化吸收。
由于实验中使用了复合菌种发酵的益母增蛋散，相较于益母增蛋散，复合菌种发酵的益母增蛋散对卵巢组织的再生有着极强的促进作用，能延长产蛋期，使产蛋率缓慢下降。该复合菌种发酵的益母增蛋散是中药制剂，无毒副作用、无残留。
具体案例
安阳市内黄县张某饲养蛋鸡5200只，210天，2016年11月得了一场呼吸道疾病，经过8天的治疗，疾病已经痊愈，可是产蛋率迟迟不能回升，一直稳定在75%左右，经技术员推荐使用复合菌种发酵的益母增蛋散，按4公斤/吨拌料，连用一周，产蛋率迅速上升到92%，产蛋率得到迅速提高。
实施例2：一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1）、取益母增蛋散组方中的黄芪60份、熟地黄60份、当归80份、淫羊藿150份、女贞子150份、益母草150份、板蓝根80份、丹参50份、紫花地丁50份、山楂80份、地榆50份、甘草40份；水洗后烘干、然后粉碎成粉末，粉末大小为50-100目；得到中药粉剂，备用；
步骤2）、采用复合菌种固态发酵菌种发酵，采用的复合菌种固态发酵菌种分别为：枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌；
步骤3）、将枯草芽孢杆菌放入由5%红糖、0.3%磷酸二氢钾、0.5%酵母膏和使用蒸馏水定容至1000毫升的培养基中，接种量为1~2%；使用恒温摇床在34度环境下培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；使用同样的培养基和培养环境及方法分别获得保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液；然后分别对枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液进行提纯；
步骤4）、将提纯后的枯草芽孢杆菌原菌液和益母草内生菌1号原菌液，从斜面接入三角瓶中，振荡培养24小时；将提纯后的保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液和双歧杆菌原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制34℃，培养24小时；
步骤5）、将步骤4）中培养后的枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液混合均匀，各个原菌液的占比为：枯草芽孢杆菌原菌液15~24%、保加利亚乳杆菌原菌液15~24%、植物乳杆菌原菌液15~24%、嗜热链球菌原菌液15~24%、双歧杆菌原菌液15~24%、益母草内生菌1号原菌液15~24%，混合均匀后获得菌种原液，备用；
步骤6）、培养基的制备；培养基采用红糖、中药粉剂和水制成，红糖1~2%，中药粉剂55~60%，余量为蒸馏水，得到培养基，备用；
步骤7）、将步骤6）获得的培养基加热至34℃时接种，将步骤5）得到的菌种原液接种到培养基中，接种量为4％；采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间48~72小时，当PH值达到4.0时完成发酵，发酵完成以后晒干即得所述的复合菌种发酵的益母增蛋散。
所述的益母草内生菌1号的分离方法如下：
取益母草切成1cm长小块，依次进入75%酒精内1分钟，1%次氯酸钠溶液15分钟，然后再用75%酒精浸泡1分钟，去除表面菌株之后，再用蒸馏水冲洗5遍；插入含有双抗WA培养基中，放在恒温培养箱中28度培养；观察到有0.5cm的菌丝从益母草切口处长出后，将菌丝转接到PDA培养基中培养；内生菌菌种纯化采用平板分离法；分离后培养细菌，然后将细菌产物按照益母草药典标准检测法进行测量，最后找到一株囊孢菌，产生益母草碱类似成分，即为所述的益母草内生菌1号。
所述的双抗WA培养基的制备方法为：取琼脂20克，加水定容到1000毫升，加入效价为200 ,150IU/ml的青霉素和链霉素，既得所述的双抗WA培养基。
所述的PDA培养基的制备方法为：取马铃薯200克，切成块煮沸30分钟，用纱布过滤，再加入20克葡萄糖和20克琼脂，溶化后补足水至1000毫升，既得所述的PDA培养基。

Claims (4)

1.一种复合菌种发酵的益母增蛋散的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1）、取益母增蛋散组方中的黄芪60份、熟地黄60份、当归80份、淫羊藿150份、女贞子150份、益母草150份、板蓝根80份、丹参50份、紫花地丁50份、山楂80份、地榆50份、甘草40份；水洗后烘干、然后粉碎成粉末，粉末大小为50-100目；得到中药粉剂，备用；
步骤2）、采用复合菌种固态发酵菌种发酵，采用的复合菌种固态发酵菌种分别为：枯草芽孢杆菌、保加利亚乳杆菌、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌；
步骤3）、将枯草芽孢杆菌放入由5%红糖、0.3%磷酸二氢钾、0.5%酵母膏和使用蒸馏水定容至1000毫升的培养基中，接种量为1~2%；使用恒温摇床在34度环境下培养24小时获得枯草芽孢杆菌原菌液；使用同样的培养基和培养环境及方法分别获得保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液；然后分别对枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液进行提纯；
步骤4）、将提纯后的枯草芽孢杆菌原菌液和益母草内生菌1号原菌液，从斜面接入三角瓶中，振荡培养24小时；将提纯后的保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液和双歧杆菌原菌液，从斜面接入克氏瓶中，温度控制34℃，培养24小时；
步骤5）、将步骤4）中培养后的枯草芽孢杆菌原菌液、保加利亚乳杆菌原菌液、植物乳杆菌原菌液、嗜热链球菌原菌液、双歧杆菌原菌液、益母草内生菌1号原菌液混合均匀，各个原菌液的占比为：枯草芽孢杆菌原菌液15~25%、保加利亚乳杆菌原菌液15~25%、植物乳杆菌原菌液15~25%、嗜热链球菌原菌液15~25%、双歧杆菌原菌液15~25%、益母草内生菌1号原菌液15~25%，混合均匀后获得菌种原液，备用；
步骤6）、培养基的制备；培养基采用红糖、中药粉剂和水制成，红糖1~2%，中药粉剂55~60%，余量为蒸馏水，得到培养基，备用；
步骤7）、将步骤6）获得的培养基加热至34℃时接种，将步骤5）得到的菌种原液接种到培养基中，接种量为4％；采用厌氧发酵，温度34℃，发酵时间48~72小时，当PH值达到4.0时完成发酵，发酵完成以后晒干即得所述的复合菌种发酵的益母增蛋散。
2.根据权利要求1所述的复合菌种发酵益母增蛋散的制备方法，其特征在于：所述的益母草内生菌1号的分离方法如下：
取益母草切成1cm长小块，依次进入75%酒精内1分钟，1%次氯酸钠溶液15分钟，然后再用75%酒精浸泡1分钟，去除表面菌株之后，再用蒸馏水冲洗5遍；插入含有双抗WA培养基中，放在恒温培养箱中28度培养；观察到有0.5cm的菌丝从益母草切口处长出后，将菌丝转接到PDA培养基中培养；内生菌菌种纯化采用平板分离法；分离后培养细菌，然后将细菌产物按照益母草药典标准检测法进行测量，最后找到一株囊孢菌，产生益母草碱类似成分，即为所述的益母草内生菌1号。
3.根据权利要求2所述的复合菌种发酵益母增蛋散的制备方法，其特征在于：所述的双抗WA培养基的制备方法为：取琼脂20克，加水定容到1000毫升，加入效价为200 ,150IU/ml的青霉素和链霉素，既得所述的双抗WA培养基。
4.根据权利要求2所述的复合菌种发酵益母增蛋散的制备方法，其特征在于：所述的PDA培养基的制备方法为：取马铃薯200克，切成块煮沸30分钟，用纱布过滤，再加入20克葡萄糖和20克琼脂，溶化后补足水至1000毫升，既得所述的PDA培养基。
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