CN108137693A - 特异性地结合至tl1a的抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供重组表达的变体抗体，所述变体抗体具有对TL1A的增强的亲和力和相对于它们所来源的亲本抗体的增强的效力。所述抗体抑制TL1A与死亡受体3(DR3)之间的相互作用。所述抗体或其组合物可用于治疗以下中的一种或多种：哮喘、COPD、肺纤维化、囊性纤维化、炎性肠病、与囊性纤维化相关的胃肠疾病、克罗恩氏病、结肠炎、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、嗜酸性食道炎、特应性皮炎、湿疹、硬皮病、关节炎或类风湿性关节炎。

Description

特异性地结合至TL1A的抗体
相关申请的交叉引用
本申请要求2015年9月18日提交的美国临时申请号62/220,442的优先权，其内容以引用的方式整体且出于所有目的并入本文。
对序列表的引用
本申请包括作为创建于2015年9月18日且大小为89,000字节的名称为TL1A_ST25的文本文件以电子方式提交的序列表。所述序列表以引用的方式并入本文。
发明领域
本公开总体上涉及抗体工程化的领域。更具体地说，本公开涉及变体抗体，所述变体抗体特异性地结合至TL1A且抑制TL1A与死亡受体3(DR3)之间的相互作用。在一些方面中，所述抗体还抑制TL1A与诱饵受体3(DcR3)之间的相互作用。所述抗体具有相对于所述变体所来源的亲本抗体改进的效力。
发明背景
在整个说明书中引用各种公布，包括专利、公布的申请、登录号、技术论文以及学术论文。这些引用的公布中的每一者在此文件中以引用的方式整体且出于所有目的并入。
TNF样配体1A(TL1A，合成TNF超家族成员15(TNFSF15)；TL1和VEGI)是肿瘤坏死因子超家族的成员，其由抗原呈递细胞(包括树突状细胞、B细胞和巨噬细胞)、CD4+和CD8+T细胞以及内皮细胞表达。TL1A可在细胞表面上表达或分泌为可溶性细胞因子。TL1A的受体死亡受体3(DR3)由多种细胞表达，包括CD4+和CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞和FOXP3+调控T(Treg)细胞以及2型和3型先天淋巴细胞(ILC2和ILC3)。
TL1A还可结合诱饵受体(DcR3)，其是DR3的竞争性抑制剂。DcR3还充当用于Fas配体(Fas-L)和淋巴毒素样诱导性蛋白质的诱饵受体，所述淋巴毒素样诱导性蛋白质与糖蛋白D竞争结合T细胞(LIGHT)上的疱疹病毒侵入介体。因此，DcR3是如果干信号转导路径的重要调控因子。
TL1A/DR3信号传导途径一直牵涉于与人疾病相关的如果干生物系统中。例如，TL1A已展示在免疫性、血管生成和屏障组织稳态中起一定作用。抑制TL1A与DR3的相互作用也已展示促进如果干免疫介导的病状中的治疗益处，所述病状如实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE；多发性硬化症模型)、结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、炎性肠病、皮肤疾病、哮喘以及关节炎。
因此，期望抑制TL1A活性的化合物，例如用于其治疗性、预防性、诊断性以及预后用途。
发明概述
本文提供一种重组抗体，所述重组抗体包含：重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ IDNO:28的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，其限制条件为当所述重链可变区包含SEQID NO:1的氨基酸序列时，所述轻链可变区不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ IDNO:21的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQID NO:24的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:21的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
本文还提供一种重组抗体，所述重组抗体包含：重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列，其限制条件为当所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列时，所述轻链可变区不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:8的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
在一些方面中，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。在一些方面中，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列；以及轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列。
此类重组抗体优选是全长的，并且优选是单克隆的。此类重组抗体以相对于抗体增强的亲和力结合至TL1A，所述抗体具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区。相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区以及包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体，此类重组抗体具有增强的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约10倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约12倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约13倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约15倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约20倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约25倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约27倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约40倍的效力。效力的增强倍数可根据TF-1细胞中的TL1A诱导的半胱天冬酶效力测定来测定。
此类重组抗体可包含人IgG1重链恒定区、人IgG2重链恒定区或人IgG4重链恒定区或其任何同种异型。人IgG1重链恒定区可包含SEQ ID NO:42或SEQ ID NO:43(人IgG1ΔK)或SEQ ID NO:44(具有YTE的人IgG1)或SEQ ID NO:64(具有YTE和ΔK的人IgG1)或SEQ IDNO:63(具有L234A、L235A、G237A的人IgG1)或SEQ ID NO:62(具有L234A、L235A、G237A以及ΔK的人IgG1)或SEQ ID NO:65(具有L235A和G237A的人IgG1)或SEQ ID NO:66(具有L235A、G237A和ΔK的人IgG1)。人IgG2重链恒定区可包含SEQ ID NO:67或SEQ ID NO:70(人IgG2ΔK)或SEQ ID NO:71(具有A330S、P331S的人IgG2)或SEQ ID NO:68(具有A330S、P331S和ΔK的人IgG2)。人IgG4重链IgG4恒定区可包含SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:46(具有S228P和ΔK的人IgG4)或SEQ ID NO:47(具有S228P和YTE的人IgG4)或SEQ ID NO:69(具有S228P、YTE和ΔK的人IgG4)。应理解，IgG4重链可在无稳定取代S228P的情况下使用(例如，仅具有YTE的IgG4或具有YTE和ΔK的IgG4或仅具有ΔK的IgG4)。
重组抗体可包含人λ轻链恒定区或其同种异型。人轻链λ恒定区可包含SEQ ID NO:48。
此类重组抗体结合至人TL1A，并且可结合至非人灵长类动物的TL1A、或非人哺乳动物(如小鼠、大鼠、豚鼠、猫、狗、兔或猪)的TL1A。
此类重组抗体可用于治疗呼吸道疾病的方法、治疗胃肠疾病的方法、治疗皮肤疾病的方法或治疗关节炎的方法中，或可用于治疗呼吸道疾病、胃肠疾病、皮肤疾病或关节炎，或可用于制造用于治疗呼吸道疾病、胃肠疾病、皮肤疾病或关节炎的药剂。呼吸道疾病可包括以下中的一种或多种：哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎或囊性纤维化。胃肠疾病可包括以下中的一种或多种：炎性肠病、克罗恩氏病、结肠炎、溃疡性结肠炎、嗜酸性食道炎或肠易激综合征或胃肠疾病或与囊性纤维化相关的病状。关节炎可包括类风湿性关节炎。皮肤疾病可包括以下中的一种或多种：特应性皮炎、湿疹和硬皮病。
需要此类治疗的人受试者、非人灵长类动物受试者或非人哺乳动物受试者可例如通过向所述受试者施用所述抗体或其组合物来用所述抗体或包含所述抗体的组合物治疗。施用可以是胃肠外，例如皮下和/或静脉内。
此类重组抗体可用于检测外周血单核细胞(PBMC)的表面上的TL1A的方法中。所述方法包括使结合至如本文中所描述或所例示的TL1A的抗体与从受试者获得的PBMC接触，并且检测结合至所述PBMC的表面上的TL1A的抗体。所述方法还可包括量化所述PBMC上的TL1A的水平。所述方法还可包括从所述受试者获得所述PBMC。
此类重组抗体可用于检测血清中的TL1A的方法。所述方法包括使结合至如本文中所描述或所例示的TL1A的抗体与从受试者获得的血清接触，并且检测结合至所述血清中的TL1A的抗体。所述方法还可包括量化血清中的TL1A的水平。所述方法还可包括自从所述受试者获得的血液获得血清。所述方法还可包括从所述受试者获得血液。
提供编码此类抗体的重链可变区和轻链可变区中的一个或多个的多核苷酸。所述多核苷酸还可编码重链恒定区和/或轻链恒定区。
在一些方面中，多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:51或SEQ ID NO:58的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:50的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:52或SEQ ID NO:59的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:54的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:55的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:56的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ IDNO:57的核酸序列。
在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体重链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:49的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ IDNO:52的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:53的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:54的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:55的核酸序列。在一些方面中，所述多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列，例如包含SEQ ID NO:56的核酸序列。
提供包含此类多核苷酸中的一种或多种的载体。提供用一种或多种此类多核苷酸或此类载体转化的细胞。转化的细胞可以是哺乳动物，并且优选使哺乳动物表达宿主细胞，诸如CHO细胞、NS0细胞或HEK293细胞。
附图简述
图1示出对CDR1或CDR2区域或邻近于亲本抗体(320-179)可变重链的CDR2的所选择氨基酸残基进行的单氨基酸取代中的每一者的位置和标识。加框区域代表根据AbM编号系统的CDR。
图2示出对亲本抗体(320-179)可变轻链的CDR1或CDR3区域进行的单氨基酸取代中的每一者的位置和标识。加框区域代表根据AbM编号系统的CDR。
图3示出变体抗TL1A抗体重链的比对。
图4示出变体抗TL1A结合抗体轻链的比对。
图5示出如通过SPR所测量，变体抗TL1A抗体的TL1A解离阶段的比较。
图6示出利用变体TL1A抗体的TF-1细胞半胱天冬酶效力测定的结果。
图7示出相较于亲本抗体320-179，使用各种TL1A抗体的TF-1细胞半胱天冬酶效力测定的结果。
图8示出跨如果干不同实验，相较于其他所公布的抗TL1A抗体，抗体320-587在TF-1细胞半胱天冬酶效力测定中具有优异TL1A效力。
图9示出如在ELISA形式中所测量，与同种型对照相比，抑制TL1A与DR3的结合的各种抗TL1A抗体。
图10示出亲本抗体320-179不抑制TL1A与DcR3的结合，而变体抗TL1A抗体抑制TL1A-DcR3相互作用。
图11示出抗体320-587与不同种类的TL1A交叉反应且结合至不同种类的TL1A；所述抗体结合至来自所有所测试种类的TL1A。
图12示出抗体320-587在大鼠TNBS诱导的结肠炎模型中的施用结果，从而证明所述抗体显著改善结肠炎的症状。
图13示出在ELISA测试中，抗体320-587检测从用免疫复合物刺激的人PBMC分泌的人TL1A。
图14示出在流式细胞术测试中，抗体320-587检测在其表面上表达膜TL1A的人PBMC群体。
图15示出用抗体320-587治疗的患有急性OVA诱导的哮喘的大鼠在支气管肺泡灌洗液(BALF)中具有显著减少的嗜酸性粒细胞。
图16A至图16D示出用抗体320-587治疗的患有急性OVA诱导的哮喘的豚鼠具有(图16A)BALF嗜酸性粒细胞、(图16B)BALF巨噬细胞、(图16C)早期哮喘反应之后的气道反应过度以及(图16D)早期哮喘反应的量值的改善。
图17A至图17E示出用抗体320-587治疗的患有慢性OVA诱导的哮喘的大鼠具有(图17A)BALF嗜酸性粒细胞、(图17B)BALF巨噬细胞、(图17C)BALF IL-13、(图17D)如通过PAS反应性评定的杯状细胞增生以及(图17E)如从H&E染色切片评定的粘膜增厚的改善。
图18示出加倍气道阻塞所需的卵白蛋白的剂量。
图19示出用抗体320-587治疗的患有TNBS诱导的结肠炎的大鼠具有溃疡区域纤维化的改善。
图20A至图20E示出用抗体320-587治疗的患有TNBS诱导的结肠炎的大鼠与患有DNBS诱导的结肠炎的大鼠的比较以及在7天和14天时的作用，其为(图20A)结肠重量/长度比率、(图20B)结肠纤维化、(图20C)结肠浸润以及(图20D)结肠损伤。图20E示出在7天和14天时的溃疡区域的代表性部分。
图21A至图21C示出用抗体320-587治疗的患有DSS诱导的结肠炎的大鼠具有(图21A)在DSS施用期间的重量变化、(图21B)在DSS施用期间的临床评分以及(图21C)结肠重量/长度比率的改善。
图22示出TL1A诱导的腹膜内细胞因子响应于320-587治疗的变化。
发明详述
相关申请的交叉引用
涉及本公开的方面的各种术语在整个说明书和权利要求中使用。除非另有指示，否则此类术语将具有其在本领域中的普通含义。其他特定定义的术语以符合本文中提供的定义的方式解释。
术语“受试者”和“患者”可互换地使用且包括任何动物。哺乳动物是优选的，包括伴侣哺乳动物(例如猫、狗)和农场哺乳动物(例如猪、马、牛)以及啮齿类动物，包括小鼠、兔和大鼠、豚鼠以及其他啮齿类动物。非人灵长类动物，诸如食蟹猴是更优选的，并且人类是高度优选的。
如果分子已通过人手自其天然环境改变和/或移除，则所述分子诸如抗体已被“分离”。
如本文所用，除非另外明确说明，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数个指示物。
在抗体-抗原相互作用的背景下“特异性”并非必需为绝对指定，但可构成表示抗体对抗原阳性细胞相较于抗原阴性细胞的选择性程度的相对术语。抗体对抗原阳性细胞的特异性通过抗体的可变区介导，并且通常通过抗体的互补决定区(CDR)介导。构建体可对抗原阳性细胞相较于抗原阴性细胞具有约100至约1000倍特异性。
如本文所使用，术语“重组”包括来自通过基因工程化或以其他方式通过实验室操纵制备的基因的表达。
本公开提供包含抗体320-179的以重组方式改变的重链和/或轻链可变区的变体抗TL1A抗体，其中变体抗体特异性地结合至TL1A。这些320-179变体抗体抑制TL1A与DR3相互作用且在一些方面中还抑制与DcR3相互作用的能力，并且进一步抑制通过TL1A与DR3相互作用诱导的信号传导。这些抗体具有相对于抗体320-179增强的效力。这些抗体对TL1A具有相对于抗体320-179增强的亲和力。
增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约10倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约12倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约13倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约15倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约20倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约25倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约27倍的效力。增强的效力可以是相对于具有包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区的抗体大至少约40倍的效力。可例如通过在TF-1细胞测定中测量TL1A诱导的细胞凋亡中的半胱天冬酶释放来测定效力增强倍数。
320-179变体抗体以重组方式表达，并且特异性地结合至TL1A。亲本抗体320-179包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些方面中，320-179变体抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，其限制条件为当重链可变区包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列时，轻链可变区不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。320-179变体抗体能够抑制TL1A与DR3的相互作用。320-179变体抗体具有相对于抗体320-179增强的效力和/或具有相对于抗体320-179对TL1A增强的亲和力。
在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些高度优选的方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些方面中，重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
在高度优选的方面中，320-179变体抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，并且特异性地结合至TL1A。在一些方面中，SEQ ID NO:3的重链可变区连接至人IgG1(ΔK)重链恒定区(例如SEQ ID NO:43)，以使得重链包含SEQ ID NO:60。在一些方面中，SEQID NO:4的轻链可变区连接至λ人轻链恒定区(例如SEQ ID NO:48)，以使得轻链包含SEQ IDNO:61。320-179变体抗体能够抑制TL1A与DR3的相互作用。变体抗体具有相对于抗体320-179增强的效力和/或具有相对于抗体320-179对TL1A增强的亲和力。
在一些方面中，320-179变体抗体以重组方式表达且特异性地结合至TL1A，并且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；以及重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列。所述抗体可包含轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列。在重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的方面中，轻链可变区优选不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。这些320-179变体抗体能够抑制TL1A与DR3的相互作用。这些320-179变体抗体具有相对于抗体320-179增强的效力和/或具有相对于抗体320-179对TL1A增强的亲和力。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:16的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:16的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:16的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:16的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:21的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:16的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:21的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:21的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:21的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:21的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A且包含重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQID NO:21的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列；以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列；以及轻链可变区，其限制条件为轻链可变区不包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区或轻链。轻链可变区还可包含λ恒定区。
在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，以及重链可变区，其限制条件为重链可变区不包含SEQ IDNO:1的氨基酸序列。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列；以及重链可变区。在一些方面中，抗体特异性地结合至TL1A，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；以及重链可变区，其限制条件为如果轻链可变区包含SEQID NO:2的氨基酸序列，则重链可变区不包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。重链可变区还可包含重链恒定区，包括本文中所描述或所例示的任何IgG1、IgG2或IgG4重链恒定区氨基酸序列。
320-179变体抗体特异性地结合至TL1A。所述抗体结合至人TL1A，并且可结合至以下中的一种或多种：食蟹猴TL1A、小鼠TL1A、大鼠TL1A、豚鼠TL1A、猫TL1A、狗TL1A、猪TL1A或兔TL1A。在一些方面中，例如如果表位共用，则所述抗体可结合至多个不同种类的TL1A。在一些方面中，人TL1A包含SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33的氨基酸序列。在一些方面中，食蟹猴TL1A包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。在一些方面中，小鼠TL1A包含SEQID NO:35的氨基酸序列。在一些方面中，大鼠TL1A包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列。在一些方面中，豚鼠TL1A包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列。在一些方面中，猫TL1A包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列。在一些方面中，猪TL1A包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列。在一些方面中，兔TL1A包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列。在一些方面中，狗TL1A包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列。
320-179变体抗体对TL1A上的表位具有结合亲和力，其包括平衡解离常数(KD)，其可根据动力学排除测定，诸如测定(Sapidyne Instruments Inc.,Boise,ID)测量。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD优选小于约1000pM。在一些方面中，从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD小于约500pM或小于约400pM或小于约300pM或小于约200pM。在一些优选方面中，从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD小于约100pM。
从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约10pM至约100pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约25pM至约75pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约30pM至约60pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约30pM至约50pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约35pM至约50pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约36pM至约46pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约38pM至约44pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约39pM至约43pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约40pM至约45pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约35pM至约42pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约40pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约41pM。从动力学排除测定测定的关于TL1A结合的KD可为约42pM。动力学排除测定可使用抗体分子或TL1A分子作为恒定结合配偶体，并且另一分子作为滴定液。
320-179变体抗TL1A抗体优选能够结合至TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约100nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约75nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约50nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约30nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约25nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约20nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约18nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约15nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约13nM的TL1A阳性细胞。所述抗体可结合至EC50值小于约10nM的TL1A阳性细胞。
320-179变体抗体优选为单克隆，并且更优选为包含两个重链和两个轻链的全长抗体。在一些方面中，抗体包含保留抗原结合特异性且还优选保留320-179亲本抗体分子的大部分或所有亲和力(例如对于TL1A)的抗体的衍生物或片段或部分。例如，衍生物可包含至少一个可变区(重链或轻链可变区)。适合抗体衍生物和片段的其他实例包括(但不限于)具有多表位特异性的抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、双功能抗体、单链分子以及FAb、F(Ab')2、Fd、Fabc和Fv分子、单链(Sc)抗体、单链Fv抗体(scFv)、个别抗体轻链、个别抗体重链、在抗体链与其他分子之间的融合物、重链单体或二聚体、轻链单体或二聚体、由一个重链和一个轻链组成的二聚体以及其他多聚体。单链Fv抗体可以是多价的。所有抗体同种型可用于制备抗体衍生物、片段和部分。抗体衍生物、片段和/或部分可以重组方式产生且通过任何细胞类型原核或真核细胞表达。
在全长抗体中，各重链由重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区构成。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。各轻链由轻链可变区(本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。VH区和VL区可进一步再分成高变区，称为互补决定区(CDR)，其中散置有更保守的区域，称为框架区(FR)。各VH和VL由自氨基端至羧基端按以下顺序排列的三个CDR和四个FR构成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。通常与CDR序列的改变相比，抗体的抗原结合特性不大可能受到FR序列改变干扰。免疫球蛋白分子可具有任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA以及IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2)或子类别。
320-179变体抗体是完全人的。全人抗体是整个分子为人或以其他方式源于人的那些抗体，或包括与人形式的抗体相同的氨基酸序列。全人抗体包括从人V基因库获得的那些抗体，例如其中编码抗体的可变区的人基因以重组方式表达。全人抗体可在其他生物体(例如小鼠和异种小鼠技术(xenomouse technology))或在来自用编码人抗体的基因转化的其他生物体的细胞中表达。然而，全人抗体可包括不由人序列编码的氨基酸残基，例如由随机或定点突变引入的突变。
在一些方面中，320-179变体抗体可包含非免疫球蛋白源性的蛋白质框架。例如，可参考(Ku&Schutz,1995,Proc.Natl.Acad.Sci.USA92:6552-6556)，其描述具有随机建立CDR(其被选择用于抗原结合)的两个环路的四螺旋束蛋白质细胞色素b562。
320-179变体抗体可包含可影响抗体活性或稳定性的翻译后修饰或部分。这些修饰或部分包括(但不限于)甲基化、乙酰化、糖基化、硫酸化、磷酸化、羧基化以及酰胺化部分和本领域中所熟知的其他部分。部分包括通常出现在免疫球蛋白分子上的任何化学基团或基团组合，所述免疫球蛋白分子天然存在或通过重组表达系统(包括原核和真核表达系统)添加至抗体。
本公开涵盖的侧链修饰的实例包括诸如通过以下进行的氨基修饰：还原烷基化，其通过与醛反应，接着用NaBH4进行还原；与乙酰亚氨酸甲酯进行脒化；与乙酸酐进行酰化；与氰酸酯进行氨基的氨甲酰化；与2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)进行氨基的三硝基苯甲基化；与丁二酸酐和四氢邻苯二甲酸酐进行氨基的酰化；以及与吡哆醛-5-磷酸酯进行赖氨酸的吡哆醛化，接着用NaBH4进行还原。
精氨酸残基的胍基团可通过用诸如2,3-丁二酮、苯基乙二醛和乙二醛的试剂形成杂环缩合产物进行修饰。羧基可经由形成O-酰基异脲而活化碳化二亚胺，接着后续衍生成例如相应酰胺进行修饰。巯基可利用诸如以下方法进行修饰：用碘乙酸或碘乙酰胺进行羧甲基化；过甲酸氧化成磺基丙氨酸；与其他硫醇化合物形成混合二硫化物；与顺丁烯二酰亚胺、顺丁烯二酸酐或其他取代的顺丁烯二酰亚胺反应；使用4-氯汞基苯甲酸盐、4-氯汞苯基磺酸、氯化苯基汞、2-氯汞基-4-硝基苯酚以及其他汞剂形成汞衍生物；用氰酸酯在碱性pH下进行氨甲酰化。色氨酸残基可通过例如用N-溴代琥珀酰亚胺氧化或用2-羟基-5-硝基苄基溴化物或次磺酰基卤化物对吲哚环进行烷基化来修饰。另一方面酪氨酸残基可通过用四硝基甲烷进行硝化而形成3-硝基酪氨酸衍生物来改变。组氨酸残基的咪唑环修饰可通过用碘乙酸衍生物进行烷基化或用焦碳酸二乙酯进行N-乙氧羰化完成。
320-179变体抗体可包括调节血清半衰期和生物分布的修饰，包括(但不限于)调节抗体与新生Fc受体(FcRn)的相互作用的修饰，所述新生Fc受体(FcRn)是在保护IgG免于分解代谢且维持较高血清抗体浓度中起关键作用的受体。如美国专利号7,083,784中所描述，血清半衰期调节修饰可在IgG1、IgG2或IgG4的Fc区中进行，包括M252Y/S254T/T256E的三元取代(“YTE”取代，根据EU编号系统进行编号(Edelman,G.M.等人(1969)Proc.Natl.Acad.USA 63,78-85))。其他取代可在位置250和428处(参见例如美国专利号7,217,797)以及在位置307、380和434处(参见例如PCT公布号WO 00/042072)进行。调节结合至Fc受体和通过这些受体介导的后续功能(包括FcRn结合和血清半衰期)的恒定结构域氨基酸取代的实例描述于美国公布号2009/0142340、2009/0068175和2009/0092599中。任何类别的抗体可具有省去或移除以减少异质性(ΔK)的重链C末端赖氨酸。人IgG4中S228P(EU编号)的取代可使体内抗体Fab臂交换稳定化(Labrin等人(2009)Nature Biotechnology27:8；767-773)，并且此取代可与YTE和/或ΔK修饰同时存在。
320-179变体抗体包含人恒定结构域。重链恒定结构域优选是人IgG1、IgG2或IgG4恒定结构域。轻链恒定结构域优选是人λ恒定结构域。适合的人λ域包含SEQ ID NO:48。
可与320-179变体抗体一起使用的人重链IgG1恒定区可选自人IgG1(SEQ ID NO:42)、人IgG1(ΔK)(SEQ ID NO:43)、人IgG1252Y/254T/256E(SEQ ID NO:44)、人IgG1 252Y/254T/256E(ΔK)(SEQ ID NO:64)、人IgG1L234A/L235A/G237A(SEQ ID NO:63)、人IgG1L234A/L235A/G237A(ΔK)(SEQ ID NO:62)、人IgG1L235A/G237A(SEQ ID NO:65)以及人IgG1L235A/G237A(ΔK)(SEQ ID NO:66)。可与320-179变体抗体一起使用的人重链IgG2恒定区可选自具有或不具有ΔK(SEQ ID NO:67和SEQ ID NO:70)的人IgG2以及具有或不具有(ΔK)(SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:68)的人IgG2A330S/P331S。可与320-179变体抗体一起使用的人重链IgG4恒定区可选自人IgG4S228P(SEQ ID NO:45)、人IgG4S228P(ΔK)(SEQID NO:46)、人IgG4 228P/252Y/254T/256E(SEQ ID NO:47)以及人IgG4228P/252Y/254T/256E(ΔK)(SEQ ID NO:69)。
320-179变体抗体可标记、结合或缀合至任何化学或生物分子部分。标记抗体可是适用于治疗性、诊断性或基础研究应用。此类标记/缀合物可以是可检测的，诸如荧光染料、电化学发光探针、量子点、放射性标记、酶、荧光蛋白质、发光蛋白质以及生物素。标记/缀合物可以是化学治疗剂、毒素、同位素以及用于治疗病状诸如杀死癌细胞的其他药剂。化学治疗剂可以是适用于抗体正用于的目的任何药剂。
抗体可通过已知的保护基/阻断基衍生以预防蛋白质水解裂解或增强活性或稳定性。
编码抗体及其子结构域(例如FR和CDR)的多核苷酸序列在本发明中详细说明。多核苷酸包括(但不限于)RNA、DNA、cDNA、RNA与DNA的杂合体以及RNA、DNA或其杂合体的单链、双链或三链。多核苷酸可包含编码如本文中所描述或所例示的320-179变体抗体的重链可变区和/或轻链可变区的核酸序列。多核苷酸序列的互补序列也在本发明的范围内。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:51的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体重链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:49的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:50的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:4的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:52的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:53的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:6的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:54的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:7的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:55的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:8的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:56的核酸序列。
多核苷酸可包含编码包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的抗体轻链可变区的核酸序列。编码SEQ ID NO:10的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:57的核酸序列。
在一些方面中，多核苷酸包含编码抗体重链可变区的第一核酸序列和编码抗体轻链可变区的第二核酸序列。第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:51的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:50的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:51的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:4的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:52的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:51的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:6的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:54的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:51的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:7的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:55的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:51的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:8的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:56的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:51的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:10的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:57的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:49的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:4的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:52的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:49的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:5的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:53的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:49的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:6的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:54的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:49的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:7的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:55的核酸序列。
第一核酸序列可编码包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的抗体重链可变区和包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变区。编码SEQ ID NO:1的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQ ID NO:49的核酸序列，并且编码SEQ ID NO:8的氨基酸序列的多核苷酸可包含SEQID NO:56的核酸序列。
在一些方面中，多核苷酸包含编码抗体重链可变区的第一核酸序列和编码重链恒定区的第二核酸序列。在优选方面中，多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的抗体重链可变区的第一核酸序列和编码SEQ ID NO:43的IgG1(ΔK)重链恒定区的第二核酸序列，例如包含SEQ ID NO:58的核酸序列的多核苷酸。
在一些方面中，多核苷酸包含编码抗体轻链可变区的第一核酸序列和编码轻链恒定区的第二核酸序列。在优选方面中，多核苷酸包含编码包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的抗体轻链可变区的第一核酸序列和编码SEQ ID NO:48的λ轻链恒定区的第二核酸序列，例如包含SEQ ID NO:59的核酸序列的多核苷酸。
本文中所描述或所例示的多核苷酸中的任一种可包含在载体内。因此，包含多核苷酸的载体作为本公开的部分提供。载体可以是表达载体。因此提供含有编码目标多肽的序列的重组表达载体。表达载体可含有一或多个另外序列，诸如(但不限于)调控序列、选择标记物、纯化标签或聚腺苷酸化信号。此类调控元件可包括转录启动子、增强子、mRNA核糖体结合位点或控制终止转录和翻译的序列。
表达载体，尤其哺乳动物表达载体可包括一或多个非转录元件，诸如复制起点、连接至待表达基因的适合启动子和增强子、其他5'或3'侧接非转录序列、5'或3'未翻译序列(诸如必需的核糖体结合位点)、聚腺苷酸化位点、剪接供体和受体位点或转录终止序列。也可并入在特定宿主中赋予复制能力的复制起点。
载体可用于转化本领域的技术人员所熟知的多种宿主细胞中的任一种，并且优选能够表达抗体的宿主细胞。载体包括(但不限于)质粒、噬菌粒、粘粒、杆粒(bacmid)、细菌人工染色体(BAC)、酵母人工染色体(YAC)以及杆状病毒以及其他细菌、真核、酵母和病毒性载体。适合的宿主细胞包括(但不限于)CHO细胞、NS0细胞、HEK293细胞或已知的或产生的任何真核稳定细胞系，并且还包括细菌、酵母和昆虫细胞。
抗体也可通过杂交瘤细胞制备；产生杂交瘤的方法是熟知的且在本领域中确立。
本发明还提供包含320-179变体抗体的组合物。所述组合物可包含本文中所描述和/或所例示抗体中的任一种和可接受的载体，诸如药学上可接受的载体。适合载体包括不干扰抗体的生物活性的任何介质且优选对其所施用的宿主为无毒的。可以任何适合的剂型配制组合物用于向受试者施用。
320-179变体抗体可用于治疗受试者的呼吸道疾病、胃肠疾病、关节炎或皮肤疾病。因此，本公开提供治疗方法。一般而言，所述方法包括向需要治疗呼吸道疾病、胃肠疾病、关节炎或皮肤疾病的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得呼吸道疾病、胃肠疾病、关节炎或皮肤疾病得以治疗。320-179变体抗体可包含本文中所描述或所例示的任何抗体。施用可包括皮下施用抗体。施用可包括静脉内施用抗体。受试者优选是人类。受试者可以是非人灵长类动物，诸如食蟹猴，或可以是哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、豚鼠、猫、猪、兔或狗。
在治疗呼吸道疾病的方面中，所述方法包括向需要治疗呼吸道疾病的受试者施用320-179变体抗体或其组合物。所述呼吸道疾病可包括以下中的一种或多种：哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎或囊性纤维化。因此，例如在一些方面中，所述方法包括向需要治疗哮喘的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的哮喘得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗COPD的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的COPD得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗肺纤维化的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的肺纤维化得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗肺类肉瘤病的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的肺类肉瘤病得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗过敏性鼻炎的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的过敏性鼻炎得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗囊性纤维化的受试者施用320-179变体抗体，以使得受试者中的囊性纤维化得以治疗。
在治疗胃肠疾病的方面中，所述方法包括向需要治疗胃肠疾病的受试者施用320-179变体抗体或其组合物。所述胃肠疾病可包括以下中的一种或多种：炎性肠病(IBD)、克罗恩氏病、结肠炎、溃疡性结肠炎、肠易激综合征(IBS)、嗜酸性食道炎或胃肠疾病或与囊性纤维化相关的病状。因此，例如在一些方面中，所述方法包括向需要治疗IBD的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的IBD得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗克罗恩氏病的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的克罗恩氏病得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗结肠炎的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的结肠炎得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗溃疡性结肠炎的受试者施用320-179变体抗体，以使得受试者中的溃疡性结肠炎得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗IBS的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的IBS施用得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗嗜酸性食道炎的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的嗜酸性食道炎得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗胃肠疾病或与囊性纤维化相关的病状的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的胃肠疾病或与囊性纤维化相关的病状得以治疗。
在治疗关节炎的方面中，所述方法包括向需要治疗关节炎的受试者施用320-179变体抗体或其组合物。所述关节炎可包括类风湿性关节炎。因此，例如在一些方面中，所述方法包括向需要治疗类风湿性关节炎的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的类风湿性关节炎得以治疗。
在治疗皮肤疾病的方面中，所述方法包括向需要治疗皮肤疾病的受试者施用320-179变体抗体或其组合物。所述皮肤疾病可包括以下中的一种或多种：特应性皮炎、湿疹或硬皮病。因此，例如在一些方面中，所述方法包括向需要治疗特应性皮炎的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的特应性皮炎得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗湿疹的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的湿疹得以治疗。在一些方面中，所述方法包括向需要治疗硬皮病的受试者施用320-179变体抗体或其组合物，以使得受试者中的硬皮病得以治疗。
本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于制备用于治疗呼吸道疾病的药剂。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于制备用于治疗胃肠疾病的药剂。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于制备用于治疗关节炎的药剂。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于制备用于治疗皮肤疾病的药剂。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于制备用于治疗以下中的任一种的药剂：哮喘、COPD、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎、囊性纤维化、炎性肠病、克罗恩氏病、结肠炎、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、嗜酸性食道炎、胃肠疾病或与囊性纤维化相关的病状、关节炎、类风湿性关节炎、特应性皮炎、湿疹或硬皮病。
本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗呼吸道疾病。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗胃肠疾病。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗哮喘。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗皮肤疾病。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗COPD。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗肺纤维化。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗肺类肉瘤病。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗过敏性鼻炎。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗囊性纤维化。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗炎性肠病。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗克罗恩氏病。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗结肠炎。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗溃疡性结肠炎。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗嗜酸性食道炎。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗胃肠疾病或与囊性纤维化相关的病状。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗肠易激综合征。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗类风湿性关节炎。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗特应性皮炎。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗湿疹。本文中所描述或所例示的320-179变体抗体可用于治疗硬皮病。
还提供一种检测从受试者分离的组织样品中TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求1至19中任一项所述的抗体与从受试者分离的组织样品接触以形成抗体-TL1A复合物，并且检测所述组织样品中的所述复合物。
320-179变体抗体可用于检测例如从受试者获得的组织样品中的TL1A阳性细胞。抗体可用于检测TL1A阳性外周血单核细胞(PBMC)，例如从受试者获得的PBMC。抗体可用于检测血清中的TL1A。此类方法可体内、体外、离体或原位进行。一般而言，所述方法包括使本文中所描述或所例示的320-179变体抗体中的任一种与从受试者分离的组织或细胞(例如PBMC)接触以形成抗体-TL1A复合物，并且检测所述组织中或所述细胞上的所述复合物。抗体可用可检测标记进行标记。抗体可经用可检测标记标记的第二抗体检测。组织可包括或可以是诸如血液或血清的生物流体。组织可包括或可以是呼吸道组织，诸如肺组织、痰液、支气管肺泡灌洗液、胃肠组织或胃肠灌洗液。组织可包括或可以是皮肤或皮肤组织。组织可包括或可以是体内任何关节的组织。所述方法还可包括从受试者分离组织。所述方法可例如通过量化组织中的TL1A水平、通过量化TL1A阳性细胞的水平或通过量化细胞上TL1A的水平或通过量化血清中TL1A的水平进行量化。
本发明还提供包括本文中所描述且所例示的320-179变体抗体中的任一种的试剂盒。所述试剂盒可用于供应抗体及其他药剂以用于尤其诊断、基础研究或治疗方法。在一些方面中，所述试剂盒包括本文中所描述或所例示的320-179变体抗体中的任何一种或多种以及在治疗呼吸道疾病的方法中、治疗胃肠疾病的方法中或治疗关节炎的方法中使用所述一种或多种抗体的说明书。
提供以下实施例以更详细地描述本公开。其意图说明本公开而不对其进行限制。
实施例1
材料和方法
这些实施例中的氨基酸位置根据Kabat编号系统进行编号。在整个此文件中，CDR根据CDR定义系统的AbM方法进行定义。
1.1.变体束的产生。抗体320-179的重链和轻链可变区氨基酸序列(分别为SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2)用作用于点变体设计的模板。320-179在美国公布号2014/0255302(VH在所述公布中是SEQ ID NO:186且VL是SEQ ID NO:199)作为320-179(还描述为C320-179)已经先前描述。此抗体具有有利的生物物理学特性，为TL1A的强力抑制剂且具有较低的预测免疫原性特征。
320-179的抗体变体通过在轻链CDR1(CDR-L1)、轻链CDR3(CDR-L3)、重链CDR1(CDR-H1)以及重链CDR2(CDR-H2)中各CDR氨基酸位置(如由AbM命名法所定义)中的一者处一次取代一组九个代表性氨基酸A、S、Q、D、H、K、L、W、Y中的一种来制备。并入A、S、Q、D、H、K、L、W、Y的抗体变体还在可变重链中的位置59和60处以及可变轻链中的位置79处制备。所生成的所有单一取代的抗体变体的完整列表分别在图1(可变重链)和图2(可变轻链)中示出。
1.2.载体表达抗体的构建。可变区变体通过将氨基酸序列反向翻译成DNA序列，随后通过合成寡核苷酸的组装重新合成产生。将VH变体亚克隆至含有人恒定区的哺乳动物表达载体中以产生全长抗体重链(人IgG1重链CH1、铰链、CH2以及CH3结构域)(例如UniProt号P01857)。类似地，将VL变体亚克隆至含有人λ轻链恒定区的哺乳动物表达载体中以产生全长抗体λ链(SwissProt号P0CG05.1)。在一些情况下，将全长重链和单独地轻链反向翻译成DNA序列，并且随后通过合成寡核苷酸的组装重新合成。
1.3.抗体变体的表达。通过将抗体重链和轻链共转染成细胞(LifeTechnologies,Carlsbad,CA)来产生抗体。在转染之前那天，测定实验所需的细胞数目。对于各20mL转染，20mL表达培养基需要3.6×107个细胞。在转染之前那天，将细胞以0.9×106个活细胞/mL的密度接种，并且在37℃下在含8％CO2的空气的潮湿氛围中在以200rpm旋转的定轨振荡器上孵育过夜。在转染当天，使用自动化细胞计数器测定细胞数目和存活力。仅使用具有>98％活细胞的培养物。对于各20mL转染，通过在(Life Technologies,Carlsbad,CA)I减少的血清培养基(I Reduced Serum Medium)(目录号31985-062)中将10μg重链DNA和10μg轻链DNA稀释至1.0mL总体积来制备脂质-DNA复合物。将54μL293试剂(Life Technologies,Carlsbad,CA)在I培养基中稀释至1.0mL总体积。轻轻地混合两个小瓶，并且将其在室温下孵育5分钟。孵育之后，将稀释的DNA与稀释的293试剂以及293试剂混合物混合，并且在室温下再孵育20分钟以使得形成293试剂复合物。孵育之后，将2mL293试剂复合物添加至各50mL生物反应器管(TPP Techno Plastic Products AG)。将2mL(Life Technologies,Carlsbad,CA)I培养基而非293试剂复合物添加至阴性对照管。将细胞在37℃孵育箱中含8％CO2的空气的潮湿氛围中在以200rpm旋转的定轨振荡器上孵育。转染后大约16-18小时，添加100μL293转染增强子1和1.0mL293转染增强子2至各生物反应器。在转染后约72小时收集抗体。
1.4.抗体变体的纯化。在20mL细胞培养物中的细胞中表达各抗体变体。培养物在50mL法尔康管(falcon tube)中以3000×g快速离心20分钟，并且使用0.22μm过滤器(Corning)过滤上清液。将上清液使用Gilson ASPEC GX274机器人纯化。简言之，将用1.2mL MABSELECT蛋白质A(GE Healthcare Bio-Sciences AB Uppsala,Sweden)树脂装填的SPE筒(Agilent,12131014)用3柱体积的1×PBS进行预平衡。使18mL上清液流过柱，接着4ml 1×PBS洗涤。将各柱用0.9ml 0.1M柠檬酸pH 2.9进行预洗脱。将纯化的抗体用2mL 0.1M柠檬酸pH 2.9进行洗脱。使用PD-10柱(GE Healthcare)将抗体脱盐至PBS(59.5mM KH2PO4，7.3mM Na2HPO4.2H2O，145.4mM NaCl(pH约5.8))中。
1.5.如通过SPR所测定的抗体表达和抗原结合。使用CM5传感器晶片(GEHealthcare)，蛋白质A(Pierce)使用胺偶联试剂盒(GE Healthcare)偶联至晶片表面。蛋白质A使用T200在流动细胞1和2(或替代地3和4)上偶联。使来自含有抗体或替代地纯化的抗体(如1.4中所描述)的细胞的上清液流过流动细胞2的表面，同时缓冲剂(HBS-EP)流过流动细胞1。在捕获阶段期间注射的上清液或纯化蛋白质(以及浓度)的量在轮次之间变化，并且在表3至表11的表头中指定。在注射上清液或纯化的抗体结束时，测量反应单元中的改变。此值在表3至表11中作为捕获水平报道。为了测定抗体是否结合TL1A，在注射TL1A(缔合阶段)结束之前，使TL1A接着流过流动细胞1和2以及所测量的反应单元。此值在表3至表11中标记为TL1A结合水平(早期)。在解离阶段结束之前测量反应单元。此值在表3至表11中标记为TL1A结合水平(晚期)，并且为由于TL1A-抗体复合物解离而自晶片表面丧失的抗体的量的测量值。双重参考传感器图谱(流动细胞1和缓冲剂空白减去流动细胞2)。当存在大量抗体变体需要筛选时，这些抗体变体经历不同轮次(表3至表11)进行筛选。在各情况下(除了轮次3以外)，亲本抗体320-179出于比较目的包括于轮次中。以下为各轮次中的条件的概述：
表1.
*此轮次在A100上进行
还使用SPR测定抗TL1A结合至不同种类TL1A。在蛋白质A的表面上捕获抗TL1A抗体。来自人、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、猪、狗、猫或食蟹猴的TL1A流经所测量的表面和反应单元。
1.6.TL1A的制备。人TL1A在哺乳动物表达系统中使用编码具有位于N末端HIS和FLAG标签的人TL1A的细胞外结构域(ECD)的DNA表达构建体制备。其他种类形式的TL1A基于公开列举的数据库上的序列表生成。以下概述这些TL1A：
表2.
含有分泌的TL1A蛋白质的培养物上清液通过以2000×g离心10分钟以移除细胞进行收获。TL1A蛋白质使用HP柱(GE Healthcare)自上清液纯化。将洗脱的蛋白质使用16/60Superdex 200制备级柱(GE Healthcare)缓冲剂交换至PBS中，并且约70kDa级分通过凝胶过滤在26/60200制备级柱(GEHealthcare)上分离。
1.7.TF-1细胞系效力测定。为了测定抗TL1A抗体功能上中和TL1A的生物活性，测试抗体中和TF-1细胞系中TL1A诱导的细胞凋亡的能力。将TF-1人红白血病细胞系(ATCC:CRL-2003)维持在标准条件下的培养物中。将TF-1细胞(7.5×104个/孔)在含有人TL1A100ng/ml和环己酰亚胺10μg/mL的黑色侧面96孔板(Greiner)中孵育，以诱导细胞凋亡。添加浓度为10μg/mL(66.7nM)或更低的测试抗体至板中，并且孵育4至5小时。接着使用均质半胱天冬酶试剂盒(Homogenous Capases Kit)(Roche)根据制造商的说明书评定细胞凋亡的诱导。
将数据通过表示为最大细胞凋亡(在没有抗TL1A抗体存在的情况下通过人TL1A加上环己酰亚胺所实现的细胞凋亡水平)的百分比进行标准化。
1.8.前导抗体的受体选择性。TL1A结合至其同源信号传导受体DR3且结合至诱饵受体DcR3，其还充当用于TNF家族成员Fas-L和LIGHT的诱饵受体。在竞争ELISA中，评定抗体抑制TL1A与其受体结合的能力。将DR3/Fc嵌合体(R&D Systems)或DcR3/Fc嵌合体(R&DSystems)以2μg/ml的浓度涂覆至96孔板(Maxisorp,Nunc)上。将连续稀释的测试抗体与单点生物素化的人TL1A 1μg/ml一起预孵育30分钟，接着添加至DR3/Fc或DcR3/Fc涂覆的孔中。使用链霉亲和素-辣根过氧化酶1:2000(BD Pharmingen)检测到结合的TL1A。将数据通过表示为在没有抗TL1A抗体存在的情况下TL1A与受体的最大结合的百分比标准化。
1.9.动力学排除测定。此测定测量结合配偶体中的一种在不扰乱平衡的情况下的游离浓度。溶液可使用含未修饰的蛋白质的溶液离线制备，并且可在混合后读取亲和力测量值若干天，以确保已达到平衡。在动力学排除测定中，将一种相互作用物(称为恒定结合配偶体或CBP)保持在恒定浓度下，而另一相互作用物(称为滴定物)进行连续稀释。可采用动力学排除测定来测定解离常数(KD)和抗体-抗原相互作用的亲和力。在典型的动力学排除测定中，将滴定物固定于珠粒(例如琼脂糖凝胶(Sepharose)或PMMA珠粒)，并且用于捕获溶液中的游离CBP。接着使用第二标记探针来定量CBP的捕获量。动力学排除测定概述于Darling,RK等人(2004)ASSAY and Drug Development Technol.2(6):647-57中。
合并组分，并且使其达到平衡。动力学排除测定接着用于测量CBP的游离部分。具有多个CBP浓度的平衡曲线使用在Pro软件(4.1.11版，Sapidyne)内的n曲线分析工具进行分析以获得稳健的KD测定。人TL1A的320-587的相互作用使用以下两个定向进行检查：(1)CBP是320-587，滴定液是TL1A，并且(2)CBP是TL1A，滴定液是320-587。
实施例2
实验结果
2.1.选择具有等效物或相对于C320-179改进的解离速率的TL1A结合变体。构建抗体320-179的变体，并且如上述表达。各变体的(Life Technologies Corp.)上清液通过(GE Healthcare)以及与亲本抗体320-179的数据相比较而获得的数据分析。在一些实验中，将抗体使用蛋白质A色谱法(参见1.4)进行纯化，并且将纯化的抗体用于(GE Healthcare)实验。表3至表11示出各变体的表达水平以及其在早期和晚期时间点下对TL1A的结合。在稍后的轮次(表10和表11)中，测试含有超过一个氨基酸取代的抗体变体。
表3.SPR实验-轮次1-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
表4.SPR实验-轮次2-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
表5.SPR实验-轮次3-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
表6.SPR实验-轮次4-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
表7.SPR实验-轮次5-抗TL1A抗体结合至TL1A。
表8.SPR实验-轮次6-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
表9.SPR实验-轮次7-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
表10.SPR实验-轮次8-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
表11.SPR实验-轮次9-抗TL1A抗体结合至TL1A。*指示所选择用于效力测定测试的抗体。
具有与320-179类似或比其更好的捕获水平以及在类似范围中的TL1A结合水平(早期)和TL1A结合水平(晚期)值的抗体放入效力测定中。这些变体通过在表3至表11中着色指示。如通过SPR所测量关于若干抗体的解离速率的比较展示于图5中。若干抗体以比亲本抗体320-179更慢的速率解离。
2.2在基于细胞的测定中具有改进的效力的抗TL1A抗体。为了评定改进的解离速率是否与增强的效力相关，将变体在TF-1细胞中的TL1A诱导的半胱天冬酶活性测定中操作。强力抗体通过结合至TL1A且抑制DR3受体的TL1A活化起作用。此受体触发细胞凋亡途径，其中半胱天冬酶被活化且可使用市售试剂检测到。在各实验中，比较抗体变体与320-179在效力上的倍数改进。结果示于表12中。
表12.在TF-1细胞中TL1A诱导的半胱天冬酶效力测定：通过抗TL1A抗体抑制。
**效力上倍数改进大于10倍改进的若干抗体在至多n＝7次测定中操作。结果与此表中所示数据相一致。图7示出具有相较于320-179改进的效力的若干抗体的n＝4次重复。
如表12中和图6中所展现，所测试的若干单一取代抗体具有相较于320-179的优异效力。当相较于320-179时，所测试的所有单一取代抗体变体中的两者在效力上具有大于10倍改进。这些变体是320-331(其在可变轻链中含有Y91W取代)和320-547(其在可变重链中含有N56Y取代)(图6)。此结果是出人意料的，因为通常抗体VH的CDR3主要地涉及抗体结合，同时相比之下，所识别的N56Y取代对处于抗体VH的CDR2中的结合具有显著影响。当制备并入来自VL的Y91W或单独地具有改进效力的其他取代的VH中的N56Y的抗体时，获得高度效力抗体。当Y91W VL取代与N56Y VH取代合并至一个抗体320-587中时，相较于320-179的效力的倍数改进是40。图7示出四个不同的重复实验，其展现四种抗体320-587、320-591、320-592以及320-601相较于320-179的效力增加。具有相较于320-179改进的效力的这些抗体的序列示于图3(可变重链)中和图4(可变轻链)中。
进行320-587相较于其他上述抗TL1A抗体的效力比较。这些上述抗体包括描述于美国专利号8,642,741中的抗体1681N(VH是SEQ ID NO:18；VL是SEQ ID NO.26)、来自美国公布号2014/0308271的抗体VH5/VL1(VH是SEQ ID NO:24；VL是SEQ ID NO:17)、如美国专利号8,263,743中所描述的人源化1B4(VH是SEQ ID NO:74；VL是SEQ ID NO:75)和如美国公布号2014/0255302A1中所描述的320-168(还称为C320-168)(VH是SEQ ID NO:181；VL是SEQID NO:194)。图8示出相较于这些上述抗体，320.587在基于细胞的测定中具有优异效力，从而使其成为所描述的最强力抗TL1A抗体。
2.3.DR3和DcR3受体竞争测定。筛选展示相较于320-179增加的效力的抗体以检测抑制TL1A结合至其同源信号传导受体DR3或诱饵受体DcR3的能力。当相较于同种型对照时，所测试的所有抗TL1A抗体展示抑制TL1A结合至DR3(图9)。这确认抗体通过阻断TL1A-DR3相互作用而抑制TL1A活性。
在描述于美国公布号2014/0255302A1中的先前实验(实施例4)中，抗体320-179(320-179)在受体竞争测定中进行测试且展示选择性抑制TL1A结合至DR3而非结合至DcR3(图10)。在图10中本文所呈现的实验中，其再次表明320-179不抑制TL1A-DcR3相互作用。相较于所测试的改进的抗TL1A抗体，这保持不变。在TF-1细胞测定(如章节2.2中所描述)中具有改进的效力的抗体，包括抗体320-587一致地抑制TL1A-DcR3相互作用。
总之，亲本抗体320-179能够抑制TL1A-DR3相互作用但不抑制TL1A-DcR3相互作用。具有改进效力的若干抗体，诸如320-267(VH是SEQ ID NO:1；VL是SEQ ID NO:11)、320-277(VH是SEQ ID NO:1，VL是SEQ ID NO 12)、320-278(VH是SEQ ID NO 1；VL是SEQ ID NO13)以及320-591(VH是SEQ ID NO:3，VL是SEQ ID NO 9)抑制TL1a-DR3相互作用但不抑制TL1A-DcR3相互作用。具有改进效力的若干抗体，诸如320-331、320-547、320-583、320-584、320-585、320-586、320-587以及这些抗体的变体能够抑制TL1A-DR3和TL1A-DcR3相互作用。
2.4.测试320-587的种类交叉反应性以检验其结合至来自不同种类的以重组方式产生的TL1A的能力。抗体结合至来自所测试的所有种类的TL1A(图11)。320-587与人、大鼠、豚鼠、狗、猫、食蟹猴TL1A的结合具有缓慢的解离速率，从而指示高亲和力相互作用。抗体结合小鼠和兔TL1A，并且具有快速解离速率。
2.5.用于测试患有疾病的以下动物模型中的抗TL1A抗体的临床前功效模型：
哮喘：过敏原诱导的哮喘-啮齿类动物(小鼠、大鼠或豚鼠)通过皮内注射卵白蛋白(OVA)(尤其源自鸡蛋的OVA)加上矾致敏，并且随后通过雾化OVA的喷雾激发至少2周后，从而导致哮喘样症状，包括气道反应过度、大量涌入嗜酸性粒细胞以及增加的细胞因子产生(例如Hylkema等人,2002,Clin.Exp.Immunol.129:390-96)。这种模型可通过重复激发修改以呈现具有增加的气道重塑和纤维化诱导的更加慢性疾病特征(例如Bos等人,2007,Eur.Respir.J.30:653-661)。还可使用替代性过敏原，诸如房屋尘螨(例如Lambert等人,1998,Am.J.Respir.Crit.Care Med.157:1991-9)。替代地，非人灵长类动物(例如食蟹猴)可用环境抗原(诸如猪蛔虫)进行致敏且激发，从而导致气道反应过度、大量涌入嗜酸性粒细胞以及增加的细胞因子产生(例如Wegner等人,1991,J.Allergy Clin.Immunol.87:835-41)。
COPD：烟雾吸入诱导的气道炎症-将啮齿类动物(小鼠、大鼠或豚鼠)暴露于香烟烟雾一周3至7次持续至少4周，从而导致类似于COPD的肺部疾病，其特征在于嗜中性粒细胞的肺积累、增加的炎性细胞因子产生、肺纤维化以及肺高血压(例如Davis等人(2012)PLoSOne 7:e33304)。更加严重形式的疾病可通过在烟雾暴露期间将重复细菌或病毒感染纳入肺中诱导(例如Li等人(2012)Biol.Pharm.Bull.35:1752-60)。患有烟雾诱导的COPD的啮齿类动物将用抗TL1A抗体治疗，并且筛选治疗功效。
肺纤维化：博莱霉素诱导的肺纤维化-啮齿类动物(小鼠、大鼠或豚鼠)将通过气管内/鼻内滴入或静脉内注射用博莱霉素治疗每周一次或两次持续至少3周。此治疗诱导显著且稳定的肺纤维化(例如Pinart等人(2009)Resp.Physiol.Neurobiol.166:41-46)。患有博莱霉素诱导的肺纤维化的啮齿类动物将用抗TL1A抗体治疗，并且筛选治疗功效。
囊性纤维化：CFTR基因敲除雪貂模型-CFTR(囊性纤维化中的致病基因)的用于基因敲除的雪貂纯合子或已知的疾病相关突变自发地发展囊性纤维化样疾病，其特征在于气道的粘液阻塞、肺不张、间质肺炎以及具有进行性肺细菌定殖的重复肺感染(例如Sun等人(2014)Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.50:502-12)。CFTR-/-雪貂将用抗TL1a抗体治疗且筛选治疗功效。
肠易激综合征：应力诱导的内脏过敏性-应力将通过新生儿-母体分离(例如Coutinho等人(2002)Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.282:G307-16)或成年人约束在大鼠中诱导(例如Shen等人(2010)J.Neurogastroenterol.Motil.16:281-90)。这预期产生类似于IBS患者中所观察到的变化肠运动性和内脏过敏性。处于应力下的大鼠将用抗TL1A抗体治疗且筛选治疗功效。
类风湿性关节炎：胶原蛋白诱导的关节炎-啮齿类动物(小鼠、大鼠或豚鼠)将进行免疫接种且用含胶原蛋白的佐剂增强免疫。动物出现两侧脚膨胀和红斑、炎性浸润关节区域中和关节损伤(例如Bendele等人(1999)Toxicol.Pathol.27:134-42)。患有胶原蛋白诱导的关节炎的啮齿类动物将用抗TL1A抗体治疗且筛选治疗功效。
嗜酸性食道炎：鼻内烟曲霉诱导的嗜酸性食道炎。暴露于重复鼻内滴入烟曲霉的小鼠出现显著的食道嗜酸性粒细胞增多、上皮发育不良和增生以及游离嗜酸性粒细胞颗粒(例如Mishra等人(2001)J.Clin.Invest.107:83-90)。类似地，致敏豚鼠中历经两周时段暴露于卵白蛋白的重复气雾剂导致食道嗜酸性粒细胞增多，其中嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润至上皮层中(例如Liu等人(2015)Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.308:G482-488)。患有嗜酸性食道炎的小鼠或豚鼠将用抗TL1A抗体治疗且筛选治疗功效。
2.6.用于检测含有本公开的TL1A抗体的样品的TL1A抗体可用于检测人样品中的TL1A。320-587用于检测自人PBMC分泌的人TL1A，所述人PBMC用免疫复合物(图13)在ELISA形式中刺激。320-587还用于检测人PBMC群体，所述人PBMC在流式细胞术实验(图14)中在其表面上表达膜TL1A。
2.7.通过动力学排除测定进行的抗TL1A抗体与人TL1A结合的亲和力测量。达到与作为CBP的320-587平衡的时间：第一，测量320-587/TL1A相互作用的Kon速率。简言之，通过混合320-587与TL1A来制备溶液，并且在各个时间点下历经3小时移除等分试样。通过使溶液穿过经用20μg/mL TL1A涂覆的琼脂糖凝胶珠粒装填的柱捕获游离320-587。所捕获的320-587用Alexa647缀合的抗人抗体(0.5μg/mL)检测。此测定重复两次，从而获得8.35×105Ms-1和7.45×105Ms-1的Kon速率，平均Kon速率为7.90×105Ms-1。Kon速率接着用于使用Sapidyne网站(www.Sapidyne.com)上提供的理论结合曲线工具评估在各种浓度的320-587下达到平衡所需的时间量。
用作为CBP的320-587的KD测定。CBP，320-587于测定缓冲液(补充有1mg/ml BSA的DPBS)中稀释至15、50和150pM的最终浓度。滴定液人TL1A在测定缓冲液中稀释以建立0.1、0.3、1、3、10、30、100、300、1000以及3000pM的浓度系列。使用以上所测定的达到平衡的时间，使含有50或150pM 320-587的曲线在25℃孵育箱中平衡2天。使含有15pM 320-587的曲线在25℃孵育箱中平衡3天。平衡时段之后，各反应中320-587的游离部分如中以上所描述定量。KD值使用以15、50和150pM 320-587生成的平衡曲线的n-曲线分析测定。
达到与作为CBP的TL1A平衡的时间：在此定向中达到平衡的时间使用如以上2.8中所描述测定的320-587/TL1A相互作用的Kon评估。在此形式中，通过使溶液穿过经用30μg/mL320-587涂覆的PMMA珠粒装填的柱捕获TL1A的游离部分。所捕获的TL1A用抗6x-hisDyLight 650抗体(0.75μg/mL)检测。此测定重复两次，从而获得6.11×105Ms-1和5.74×105Ms-1的Kon速率，平均Kon速率为5.93×105Ms-1。
用作为CBP的TL1A的KD测定：CBP人TL1A在测定缓冲液中稀释至30、100和300pM的最终浓度。滴定液320-587在测定缓冲液中稀释，以建立0.05、0.15、0.5、1.5、5、15、50、150、500、1500以及5000pM的浓度系列。
使用以上所测定达到平衡的时间，使所有曲线在25℃孵育箱中平衡3天。平衡时段之后，各反应中TL1A的游离部分如上文所描述定量。KD值使用以30、100和300pM TL1A生成的平衡曲线的n-曲线分析测定。
在两种KinExA方法之间观察到良好一致以及相对较低％误差。使用320-587作为CBP测定TL1A与320-587相互作用的KD值为40.97±8.33pM(表13)，同时使用TL1A作为CBP获得的KD为41.52±13.5pM(表14)。
表13.亲和力：用TL1A涂覆的琼脂糖凝胶珠粒；320-587作为CBP。
测定编号： KD(pM) ％误差
1 40.43 4.57
2 52.03 5.61
3 46.31 4.76
4 32.42 3.74
5 33.66 3.9
平均值 40.97
SD 8.33
％CV 20
表14.亲和力：用320-587涂覆的PMMA珠粒；TL1A作为CBP。
测定编号： KD(pM) ％误差
1 33.39 5.33
2 57.1 5.51
3 34.07 3.9
平均值 41.52
SD 13.5
％CV 33
3.0.用于测试抗TL1a抗体的临床前功效模型。
3.0.1.哮喘。
大鼠中急性卵白蛋白诱导的哮喘。将棕色挪威大鼠在第0天用OVA通过腹膜内注射致敏，接着在第35天至第42天用OVA喷雾剂每天激发。在第14天、第21天、第28天以及第35天将大鼠用抗体320-587或媒介物通过静脉内注射治疗。在第43天评定支气管肺泡灌洗液(BALF)的总体和差异性细胞。发现治疗显著减少BALF嗜酸性粒细胞(图15)。
大鼠中慢性卵白蛋白诱导的哮喘。在第0天和第7天大鼠用OVA加上矾通过腹膜内注射致敏，并且随后用OVA喷雾剂每周两次激发持续3周，第14天开始持续到第31天，以及第37天至第42天为5个连续日。在第24天、第29天、第34天以及第39天将动物用抗体320-587或媒介物通过静脉内注射治疗。在第43天评定BALF的总体和差异性细胞以及细胞因子组。将肺切片用苏木精和曙红(H&E)以及过碘酸希夫(periodic-acid Schiff；PAS)染色，并且评定一系列病理学。相较于媒介物，用320-587治疗显著减少BALF嗜酸性粒细胞和巨噬细胞(图17A和图17B)、BALF IL-4和IL-13(图17C)、杯状细胞增生(图17D)以及支气管上皮层的厚度(图17E)。
豚鼠中急性卵白蛋白诱导的哮喘。使雄性Dunkin Hartley豚鼠致敏卵白蛋白，并且其后经历手术以安装气球导管，以测量肺功能以及早期和晚期哮喘反应。在第16天、第20天、第24天以及第28天，将动物用抗体320-587或媒介物腹膜内注射进行治疗。在最后治疗之后，用卵白蛋白(0.05-0.1％)气雾剂激发30分钟。在激发之前24小时、在激发之后6小时(在早期哮喘反应之后立刻)以及在激发之后24小时(在晚期哮喘反应之后立刻)测量对组胺的呼吸道反应性(AHR)。早期和晚期哮喘反应的性质和尺寸也通过跨整个24小时时段在线登记肺功能进行记录。动物在激发和进行支气管肺泡灌洗之后25小时处死。分析BALF的总体和差异性细胞。与媒介物相比，用320-587治疗显著减少BALF中的嗜酸性粒细胞和巨噬细胞(图16A和图16B)以及改善早期哮喘反应之后的AHR(图16C)以及早期哮喘反应的全部量值(图16D)。
豚鼠中的慢性卵白蛋白诱导的哮喘。使雄性Dunkin Hartley豚鼠致敏卵白蛋白，并且4周后，每周用卵白蛋白激发持续12周。卵白蛋白激发(0.05-0.5％)通过吸入气雾化溶液直至观察到呼吸道阻塞为止来进行。卵白蛋白激发第8周开始每隔5天将动物用抗体320-587或媒介物通过腹膜内注射治疗。在初始激发之前、在最终激发之前24小时以及在最终激发之后6小时借助于对组胺的气道反应性测量气管功能。随着需要渐进增加OVA剂量以诱导气管阻塞(图18)，尽管未观察到对由组胺激发诱导的AHR的作用，但抗体320-587显著减少对OVA的过敏性反应。
据信豚鼠的急性和慢性哮喘模型中观察到的抗体治疗作用差异取决于模型自身。据信在慢性模型中，AHR程度随时间推移降低，并且因此变得对治疗较不起反应。在本领域中，急性模型一般用于观察对气道反应性的化合物作用，并且慢性模型一般用于观察对气道重塑的化合物作用。持续重塑评定。然而，出人意料地观察到抗体影响对过敏原的反应(尽管在此阶段抗体大体上不影响绝对AHR(对组胺的反应))，其显著减少对抗原的直接过敏性反应。
3.0.2.炎性肠病
大鼠中的TNBS诱导的结肠炎：用单次剂量的于乙醇中的三硝基苯磺酸通过直肠内滴入剂量来治疗大鼠。对照动物仅接受相等体积的乙醇。历经7天时间间隔，动物罹患局部结肠炎，其特征在于结肠溃疡，伴随炎性浸润和不同程度的纤维化(例如Wirtz等人(2007)Nat.Protoc.2:541-546)。320-587施用显著减少多个疾病指标，包括结肠厚度(图12A)、粘附的数目和严重性(图12B)以及狭窄的数目和严重性(图12C)，由此导致与用媒介物或同种型匹配不相关的抗体治疗的动物相比显著较轻度的疾病(图12D)。在320.587治疗的动物中也观察到结肠纤维化降低(图19)。
在大鼠中DNBS诱导的结肠炎7天和14天之后疾病的比较。结肠炎如上文所描述使用二硝基苯磺酸(DNBS)而非TNBS进行诱导，用于DNBS实验的大鼠是Wistar大鼠。在第1天和第8天将动物用抗体320-587或媒介物通过静脉内注射治疗。DNBS后7天和14天，评定多组的结肠炎，并且在两个时间点之间比较疾病严重程度。用抗体320-587治疗在第7天具有有限作用，但到第14天，用抗体320-587治疗的动物在结肠重量和长度(图20A)、纤维化(图20B)、炎性浸润(图20C)以及结肠损伤(图20D)中显示显著改进。溃疡区域结肠的代表性部分(图20E)显示在14天时损伤修复和纤维化减小程度。在7天和14天，媒介物治疗的动物显示广泛的炎性浸润和纤维化，伴随肠架构的显著损失。相比之下，320-587治疗的动物在7天后显示显著炎性浸润、纤维化和肠架构损失，但到14天后这些作用得到大大地逆转。
TNBS和DNBS模型中观察到的抗体治疗作用所观察到的差异据信由使用不同品系的大鼠(Sprague-Dawley用于TNBS相对于Wistar用于DNBS)引起。各大鼠品系在其对免疫激发的反应中具有差异，以使得据信这些模型中其反应动力学是不同的。同样，TNBS和DNBS在结构上不同，并且据信诱导疾病状态的变化。
大鼠中慢性(21天)DSS诱导的结肠炎。在饮用水中给与大鼠浓度为5％w/v的硫酸葡聚糖钠盐(DSS)持续7天，接着在饮用水中给与2％w/v再持续14天。动物罹患腹泻、弥漫性结肠炎症、杯状细胞增生以及腺管上皮损伤和溃疡(例如Randhawa等人(2014)KoreanJ.Physiol.Pharmacol.18:279-88)。在第5天、第12天和第19天将大鼠用抗体320-587或媒介物通过静脉内注射治疗。称量动物，并且每天评定其临床疾病(腹泻和潜血)，并且在第21天评定结肠重量和长度。抗体320-587治疗显著逆转DSS诱导的体重增加减慢(图21A)，改善疾病的临床病征(图21B)且改进结肠重量和长度(图21C)。
通过重组人TL1A诱导腹膜内细胞因子。腹膜内注射重组小鼠TL1A可诱导炎性细胞因子，诸如IL-5的产生。在此研究中，小鼠接受单次剂量的抗体320-587或媒介物，接着一小时后，用重组人TL1A(rhTL1A)40μg/小鼠进行治疗。在rhTL1A剂量之后六小时，进行腹膜灌洗，并且通过多重测定评定腹膜流体的细胞因子和趋化因子。用抗体320-587治疗显著减少细胞因子G-CSF、IL-1b、IL-5、IL-6、IL-17以及趋化因子IP-10、KC、MCP-1、MIP-1a、MIP-1b、MIP-2的腹膜浓度(图22)。
本公开不限于上文所描述和所例示的实施例，并且能够在所附权利要求的范围内进行变化和修改。
序列表
<110> 赛福伦公司（CEPHALON,INC.）
<120> 特异性地结合至TL1A的抗体
<130> 185704-3019
<160> 71
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Leu Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Glu Gly Tyr Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Leu
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Leu Pro Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Gly Thr
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Leu Ser Ala Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
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Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Pro Glu Thr Ala Ala Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
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Leu Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
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Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Leu
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Ala
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Leu Ile Glu Gly Tyr Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
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Leu Ser Ala Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
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<210> 6
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
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Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Leu
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
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Gln Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
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<210> 8
<211> 111
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
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100 105 110
<210> 10
<211> 111
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
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Leu Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
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Leu Ile Glu Gly Tyr Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
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Leu Ser Ala Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 11
<211> 111
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Ala
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<210> 12
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
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Leu Pro Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Gly Thr
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Leu Ser Ala Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
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<210> 13
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Gln Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Glu Gly Tyr Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
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Leu Pro Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Gly Thr
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Leu Ser Ala Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
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<210> 14
<211> 111
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> VARIANT
<222> (32)..(32)
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<220>
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<220>
<221> VARIANT
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<220>
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<220>
<221> UNSURE
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<220>
<221> UNSURE
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<220>
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<221> UNSURE
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<400> 14
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Xaa
20 25 30
Xaa Gly Val Xaa Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Glu Gly Tyr Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Leu Pro Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Xaa Asp Gly Thr
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Leu Ser Ala Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
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<210> 15
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<213> 智人(Homo sapiens)
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Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asp Ile Asn
1 5 10
<210> 16
<211> 10
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<213> 智人(Homo sapiens)
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Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 17
Glu Val Pro Glu Thr Ala Ala Phe Glu Tyr
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<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly Leu Gly Val His
1 5 10
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
Gly Tyr Tyr Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
Gln Ser Tyr Asp Gly Thr Leu Ser Ala Leu
1 5 10
<210> 21
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gly
1 5 10
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
Gln Ser Trp Asp Gly Thr Leu Ser Ala Leu
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<210> 23
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Ala Leu Gly Val His
1 5 10
<210> 24
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly Ser Gly Val His
1 5 10
<210> 25
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly Gln Gly Val His
1 5 10
<210> 26
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly Leu Gly Val Leu
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
Gln Ser Phe Asp Gly Thr Leu Ser Ala Leu
1 5 10
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> VARIANT
<222> (8)..(8)
<223> N或Y
<220>
<221> UNSURE
<222> (8)..(8)
<223> The 'Xaa' at location 8 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<400> 28
Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Xaa Thr Gly
1 5 10
<210> 29
<211> 14
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> VARIANT
<222> (10)..(10)
<223> G或A
<220>
<221> VARIANT
<222> (11)..(11)
<223> L或S或Q
<220>
<221> VARIANT
<222> (14)..(14)
<223> H或L
<220>
<221> UNSURE
<222> (10)..(10)
<223> The 'Xaa' at location 10 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<220>
<221> UNSURE
<222> (11)..(11)
<223> The 'Xaa' at location 11 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<220>
<221> UNSURE
<222> (14)..(14)
<223> The 'Xaa' at location 14 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<400> 29
Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Xaa Xaa Gly Val Xaa
1 5 10
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> VARIANT
<222> (3)..(3)
<223> Y或W或F
<220>
<221> UNSURE
<222> (3)..(3)
<223> The 'Xaa' at location 3 stands for Gln, Arg, Pro, or Leu.
<400> 30
Gln Ser Xaa Asp Gly Thr Leu Ser Ala Leu
1 5 10
<210> 31
<211> 180
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 31
Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro
1 5 10 15
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
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Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Leu
180
<210> 32
<211> 180
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro
1 5 10 15
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
20 25 30
Gln Thr Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Val Thr Phe Ala Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Leu
180
<210> 33
<211> 210
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Ser His His His His His His
1 5 10 15
His His Gly Ser Gly Ser Leu Val Pro Arg Gly Ser Gly Ser Leu Lys
20 25 30
Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro Leu Arg
35 40 45
Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg Gln Thr
50 55 60
Pro Thr Gln His Phe Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp Glu His
65 70 75 80
Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr Asn Lys
85 90 95
Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser Gln Val
100 105 110
Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln Ala Gly
115 120 125
Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys Val Thr
130 135 140
Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys Ser Val
145 150 155 160
Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala Met
165 170 175
Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp Ile
180 185 190
Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala Phe
195 200 205
Leu Leu
210
<210> 34
<211> 180
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<400> 34
Leu Lys Gly Gln Glu Phe Ala Pro Ser His Gln Gln Val Tyr Ala Pro
1 5 10 15
Leu Arg Ala Asp Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
20 25 30
Gln Thr Pro Thr Gln His Leu Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Leu Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Val Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Val Thr Phe Arg Gly Met Thr Ser Glu Cys Ser Glu Ile Arg Gln
85 90 95
Ala Gly Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Leu
180
<210> 35
<211> 180
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 35
Leu Arg Ala Ile Thr Glu Glu Arg Ser Glu Pro Ser Pro Gln Gln Val
1 5 10 15
Tyr Ser Pro Pro Arg Gly Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Ile Lys Lys
20 25 30
Gln Thr Pro Ala Pro His Leu Lys Asn Gln Leu Ser Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Asp Leu Gly Met Ala Phe Thr Lys Asn Gly Met Lys Tyr Ile
50 55 60
Asn Lys Ser Leu Val Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Ile Thr Phe Arg Gly Thr Thr Ser Val Cys Gly Asp Ile Ser Arg
85 90 95
Gly Arg Arg Pro Asn Lys Pro Asp Ser Ile Thr Met Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Ala Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Ala Arg Leu Leu Thr Gly Ser Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Ile Ser Asn Asn Trp Phe Gln Ser Leu Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Thr Phe Ser Leu Glu Glu Gly Asp Arg Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Leu
180
<210> 36
<211> 180
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 36
Phe Pro Thr Val Thr Glu Glu Arg Ser Ala Pro Ser Ala Gln Pro Val
1 5 10 15
Tyr Thr Pro Ser Arg Asp Lys Pro Lys Ala His Leu Thr Ile Met Arg
20 25 30
Gln Thr Pro Val Pro His Leu Lys Asn Glu Leu Ala Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu Asn Asn Leu Gly Met Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Val Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Ile Thr Phe Arg Gly Thr Thr Ser Glu Cys Gly Asp Ile Ser Arg
85 90 95
Val Arg Arg Pro Lys Lys Pro Asp Ser Ile Thr Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Ala Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Ala His Leu Leu Thr Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Ile Ser Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Met Phe Ser Leu Glu Glu Gly Asp Arg Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Ile
180
<210> 37
<211> 179
<212> PRT
<213> 豚鼠(Cavia porcellus)
<400> 37
Ile Asn Glu Gln Arg Phe Gly Pro Ser Tyr Gln Arg Val Tyr Thr Pro
1 5 10 15
Leu Arg Asp Asp Arg Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
20 25 30
Gln Thr Pro Thr Gln His Leu Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Val Ile Pro Glu Thr Gly Asp Tyr Phe Val Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Ile Thr Phe Arg Gly Thr Thr Ser Glu Cys Gly Ile Ser Pro Gly
85 90 95
Arg Gln Gln Asn Lys Pro Asp Ser Ile Phe Val Val Ile Thr Lys Val
100 105 110
Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Ser Gln Leu Leu Thr Gly Thr Lys Ser
115 120 125
Val Cys Glu Ile Ser Ser Asn Trp Phe Gln Pro Leu Tyr Leu Gly Ala
130 135 140
Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp
145 150 155 160
Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala
165 170 175
Phe Leu Leu
<210> 38
<211> 180
<212> PRT
<213> 家猫(Felis catus)
<400> 38
Pro Lys Gly Arg Glu Phe Gly Pro Ser His Gln Arg Ala Tyr Thr Ser
1 5 10 15
Pro Gly Ala Gly Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
20 25 30
Gln Thr Pro Thr Gln Pro Leu Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Ile Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Val Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Val Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Val Thr Phe Arg Gly Thr Thr Ser Glu Cys Gly Glu Ile Arg Gln
85 90 95
Gly Ser Arg Leu Asn Lys Pro Asp Ser Ile Ile Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Leu
180
<210> 39
<211> 180
<212> PRT
<213> 野猪(Sus scrofa)
<400> 39
Pro Lys Gly Gln Glu Leu Gly Pro Ser His Gln Arg Val Tyr Ala Pro
1 5 10 15
Pro Gly Ala Gly Arg Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
20 25 30
Gln Thr Ser Thr Glu Pro Leu Lys Asn Gln Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Val Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Ile Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Val Thr Phe Arg Gly Thr Thr Ser Glu Cys Gly Glu Ile Ser Gln
85 90 95
Glu Arg Arg Leu Asn Lys Pro Asp Ser Ile Ile Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Ile Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Met Phe Ser Leu His Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Leu
180
<210> 40
<211> 179
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 40
Leu Lys Gly Arg Glu Phe Gly Pro Ser Gln Gln Arg Ala Tyr Met Pro
1 5 10 15
Leu Arg Ala Asp Gly Asn Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Ala Val Lys
20 25 30
Gln Thr Pro Thr Gln Pro Leu Arg Asn His Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Val Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Val Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Val Thr Phe Arg Gly Thr Thr Ser Glu Cys Gly Val Ile Asn Gln
85 90 95
Arg Arg Arg Gln Thr Lys Pro Asp Ser Ile Val Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Thr Asp Asn Tyr Pro Glu Pro Ala Gln Leu Leu Thr Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Met Gly Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly Ala
130 135 140
Met Phe Ser Leu Glu Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser Asp
145 150 155 160
Val Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly Ala
165 170 175
Phe Leu Leu
<210> 41
<211> 180
<212> PRT
<213> 家犬(Canis familiaris)
<400> 41
Pro Lys Gly Gln Glu Phe Gly His Ser His Gln Arg Ala Tyr Ala Ser
1 5 10 15
Pro Arg Ala Gly Gly Asp Lys Pro Arg Ala His Leu Thr Val Val Arg
20 25 30
Gln Ser Pro Thr Gln Pro Leu Glu Ser Leu Phe Pro Ala Leu His Trp
35 40 45
Glu His Glu Leu Gly Leu Ala Phe Thr Lys Asn Arg Met Asn Tyr Thr
50 55 60
Asn Lys Phe Leu Val Ile Pro Glu Ser Gly Asp Tyr Phe Val Tyr Ser
65 70 75 80
Gln Val Thr Phe Arg Gly Thr Thr Ser Glu Cys Gly Glu Ala Arg Gln
85 90 95
Gly Ser Arg Leu Asn Lys Pro Asp Ser Ile Ile Val Val Ile Thr Lys
100 105 110
Val Thr Asp Ser Tyr Pro Glu Pro Thr Gln Leu Leu Met Gly Thr Lys
115 120 125
Ser Val Cys Glu Val Gly Ser Asn Trp Phe Gln Pro Ile Tyr Leu Gly
130 135 140
Ala Met Phe Ser Leu Gln Glu Gly Asp Lys Leu Met Val Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ser Leu Val Asp Tyr Thr Lys Glu Asp Lys Thr Phe Phe Gly
165 170 175
Ala Phe Leu Leu
180
<210> 42
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 43
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 44
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 45
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 45
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 46
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 46
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly
325
<210> 47
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 47
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 48
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 48
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
35 40 45
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
65 70 75 80
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
85 90 95
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 49
<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 49
caggtgcagc tggtgcagtc tggggcggag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc 120
cccggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ctgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accgcagatc gttccaccag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagaagtg 300
cctgagacgg ccgcctttga gtactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 50
<211> 333
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 50
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
agctgcacca gcagcagcag cgacatcgga gccggcctgg gcgtgcactg gtatcagcag 120
ctgcctggca ccgcccccaa gctgctgatc gagggctact acaaccggcc cagcggcgtg 180
cccgaccggt ttagcggcag caagagcggc accagcgcca gcctgacaat caccggcctg 240
ctgcccgagg acgagggcga ctactactgc cagagctacg acggcaccct gagcgccctg 300
ttcggcggag gcaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 51
<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 51
caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaaac ccggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc tcctacgaca tcaactgggt gaggcaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggctgg ctgaacccca actccggcta caccggctac 180
gcccagaagt tccagggcag ggtgaccatg accgccgaca ggtccacctc caccgcctac 240
atggagctgt ccagcctgag gtccgaggac accgccgtgt actattgcgc cagggaggtg 300
cccgagaccg ctgccttcga gtactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtccagc 357
<210> 52
<211> 333
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 52
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
agctgcacca gcagcagcag cgacatcgga gccggcctgg gcgtgcactg gtatcagcag 120
ctgcctggca ccgcccccaa gctgctgatc gagggctact acaaccggcc cagcggcgtg 180
cccgaccggt ttagcggcag caagagcggc accagcgcca gcctgacaat caccggcctg 240
ctgcccgagg acgagggcga ctactactgc cagagctggg acggcaccct gagcgccctg 300
ttcggcggag gcaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 53
<211> 333
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 53
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
agctgcacca gcagcagcag cgacatcgga gccgctctgg gcgtgcactg gtatcagcag 120
ctgcctggca ccgcccccaa gctgctgatc gagggctact acaaccggcc cagcggcgtg 180
cccgaccggt ttagcggcag caagagcggc accagcgcca gcctgacaat caccggcctg 240
ctgcccgagg acgagggcga ctactactgc cagagctggg acggcaccct gagcgccctg 300
ttcggcggag gcaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 54
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<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 54
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
agctgcacca gcagcagcag cgacatcgga gccggcagcg gcgtgcactg gtatcagcag 120
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ctgcccgagg acgagggcga ctactactgc cagagctggg acggcaccct gagcgccctg 300
ttcggcggag gcaccaagct gaccgtccta ggt 333
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<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 55
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
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<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 56
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
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<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 57
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
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<211> 1344
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 58
caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaaac ccggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcacc tcctacgaca tcaactgggt gaggcaggcc 120
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cccgagaccg ctgccttcga gtactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gtccagcgcc 360
tccaccaagg gccccagcgt gttccccctg gcccccagct ccaagtccac cagcggcgga 420
accgccgctc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg 480
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ctgtactccc tgagctccgt ggtcaccgtg ccctcctcta gcctgggcac ccagacctac 600
atctgcaacg tgaaccacaa gccctccaac accaaggtgg acaaaaaggt ggagcccaag 660
tcctgcgaca agactcacac ctgtcctccc tgccccgccc ccgagctgct cggcggaccc 720
tccgtgttcc tgttcccacc caagcccaag gacaccctga tgatctccag gacccccgag 780
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gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagccca gggaggaaca gtacaactcc 900
acctaccggg tcgtgtccgt gctgaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
tacaagtgca aggtgtccaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catctccaag 1020
gccaagggcc agcctcggga gccccaggtg tacacactgc ccccttccag ggacgagctg 1080
accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtgaagggct tctacccctc cgacatcgcc 1140
gtggagtggg agtccaacgg ccagcccgag aacaattaca agaccacacc tcccgtcctg 1200
gactccgacg gctccttctt tctgtactcc aagctgaccg tggacaagtc caggtggcag 1260
caaggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320
aagtccctga gcctgtcccc cggc 1344
<210> 59
<211> 648
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 59
cagagcgtgc tgacacagcc tccatccgtg tctggcgccc ctggccagag agtgaccatc 60
agctgcacca gcagcagcag cgacatcgga gccggcctgg gcgtgcactg gtatcagcag 120
ctgcctggca ccgcccccaa gctgctgatc gagggctact acaaccggcc cagcggcgtg 180
cccgaccggt ttagcggcag caagagcggc accagcgcca gcctgacaat caccggcctg 240
ctgcccgagg acgagggcga ctactactgc cagagctggg acggcaccct gagcgccctg 300
ttcggcggag gcaccaagct gaccgtccta ggtcagccca aggccgctcc cagcgtgacc 360
ctgttccccc caagcagcga ggaactgcag gccaacaagg ccaccctggt gtgcctgatc 420
agcgacttct accctggggc cgtgaccgtg gcctggaagg ccgatagcag ccctgtgaag 480
gccggcgtgg aaaccaccac cccctccaag cagagcaaca acaaatacgc cgccagcagc 540
tacctgtccc tgacccccga gcagtggaag tcccaccggt cctacagctg ccaggtgaca 600
cacgagggca gcaccgtgga aaagaccgtg gcccccaccg agtgcagc 648
<210> 60
<211> 448
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 60
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Arg Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Pro Glu Thr Ala Ala Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 61
<211> 216
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 61
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Ser Ser Ser Ser Asp Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Leu Gly Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Glu Gly Tyr Tyr Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Leu Pro Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Trp Asp Gly Thr
85 90 95
Leu Ser Ala Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 62
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 62
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 63
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 63
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 64
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 64
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
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Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
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Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
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Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
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His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 65
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 65
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
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Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 66
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 66
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 67
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 67
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 68
<211> 325
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 68
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
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115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
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145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
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260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 69
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 69
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
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225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
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305 310 315 320
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325
<210> 70
<211> 325
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 70
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
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35 40 45
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65 70 75 80
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
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290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
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Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 71
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 71
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1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
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260 265 270
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275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325

Claims (245)

1.一种重组抗体，其包含：重链可变区CDR1，所述重链可变区CDR1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列；重链可变区CDR2，所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列；重链可变区CDR3，所述重链可变区CDR3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列；轻链可变区CDR1，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列；轻链可变区CDR2，所述轻链可变区CDR2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，以及轻链可变区CDR3，所述轻链可变区CDR3包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列，其限制条件为当所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列时，所述轻链可变区不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中所述抗体特异性地结合至TNF样配体1A(TL1A)且其中所述抗体能够抑制TL1A与死亡受体3(DR3)的相互作用。
2.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
8.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
9.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
10.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
11.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，所述轻链可变区CDR1包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列。
12.根据权利要求1所述的重组抗体，其中所述重链可变区CDR2包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，并且所述轻链可变区CDR3包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人IgG1重链恒定区。
15.根据权利要求14所述的重组抗体，其中所述人IgG1重链恒定区包含SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人重链IgG4恒定区。
17.根据权利要求16所述的重组抗体，其中所述人重链IgG4恒定区包含SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:69。
18.根据权利要求1至13中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人重链IgG2恒定区。
19.根据权利要求18所述的重组抗体，其中所述人重链IgG2恒定区包含SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:71。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人轻链λ恒定区。
21.根据权利要求20所述的重组抗体，其中所述人轻链λ恒定区包含SEQ ID NO:48。
22.根据权利要求20所述的重组抗体，其中所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ IDNO:61的氨基酸序列。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的重组抗体，其中如通过动力学排除测定所测量，对TL1A的KD是约30pM至约60pM。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的重组抗体，其中如通过动力学排除测定所测量，对TL1A的KD是约35pM至约50pM。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的重组抗体，其中如通过动力学排除测定所测量，对TL1A的KD是约35pM至约42pM。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其中所述TL1A是非人灵长类动物TL1A。
27.根据权利要求26所述的重组抗体，其中所述非人灵长类动物是食蟹猴。
28.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其中所述TL1A是非人哺乳动物TL1A。
29.根据权利要求28所述的重组抗体，其中所述非人哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猫、狗或猪。
30.一种组合物，其包含根据权利要求1至29中任一项所述的重组抗体和药学上可接受的载体。
31.一种治疗呼吸道疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求1至25中任一项所述的抗体施用至需要治疗呼吸道疾病的受试者。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述呼吸道疾病是哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎、肺纤维化或囊性纤维化。
33.一种治疗胃肠疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求1至25中任一项所述的抗体施用至需要治疗胃肠疾病的受试者。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述胃肠疾病是炎性肠病、克罗恩氏病、结肠炎、溃疡性结肠炎、嗜酸性食道炎、肠易激综合征或与囊性纤维化相关的胃肠疾病。
35.一种治疗关节炎的方法，所述方法包括将根据权利要求1至25中任一项所述的抗体施用至需要治疗关节炎的受试者。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述关节炎是类风湿性关节炎。
37.一种治疗皮肤疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求1至25中任一项所述的抗体施用至需要治疗皮肤疾病的受试者。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述皮肤疾病是特应性皮炎、湿疹或硬皮病。
39.根据权利要求31至38中任一项所述的方法，其中施用包括静脉内施用或皮下施用。
40.根据权利要求31至38中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
41.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗呼吸道疾病。
42.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗哮喘。
43.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗COPD。
44.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肺类肉瘤病。
45.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗过敏性鼻炎。
46.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肺纤维化。
47.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗囊性纤维化。
48.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗胃肠疾病。
49.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗炎性肠病。
50.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗结肠炎。
51.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗溃疡性结肠炎。
52.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗嗜酸性食道炎。
53.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗与囊性纤维化相关的胃肠疾病。
54.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肠易激综合征。
55.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗克罗恩氏病。
56.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗关节炎。
57.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗类风湿性关节炎。
58.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗皮肤疾病。
59.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗特应性皮炎。
60.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗湿疹。
61.根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体，其用于治疗硬皮病。
62.一种根据权利要求1至25中任一项所述的重组抗体的用途，其用于制备用于治疗哮喘、COPD、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎、囊性纤维化、炎性肠病、结肠炎、溃疡性结肠炎、嗜酸性食道炎、与囊性纤维化相关的胃肠疾病、克罗恩氏病、肠易激综合征、关节炎、类风湿性关节炎、特应性皮炎、湿疹或硬皮病的药剂。
63.一种用于检测外周血单核细胞(PBMC)的表面上的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求1至25中任一项所述的抗体与从受试者分离的PBMC接触，检测结合至所述PBMC的表面上的TL1A的所述抗体，以及任选地量化所述PBMC上的TL1A的水平。
64.一种用于检测血清中的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求1至25中任一项所述的抗体与从受试者获得的血清接触，检测结合至所述血清中的TL1A的所述抗体，以及任选地量化所述血清中的TL1A的水平。
65.一种用于检测从受试者分离的组织样品中的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求1至25中任一项所述的抗体与从受试者分离的组织接触以形成抗体-TL1A复合物，以及检测所述组织中的所述复合物。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述组织包括呼吸道组织。
67.根据权利要求65所述的方法，其中所述组织包括痰液或支气管肺泡灌洗液。
68.根据权利要求65所述的方法，其中所述组织包括胃肠组织。
69.根据权利要求65所述的方法，其中所述组织包括关节组织。
70.根据权利要求65所述的方法，其中所述组织包括皮肤组织。
71.根据权利要求65所述的方法，其中所述组织包括血液。
72.根据权利要求65至71中任一项所述的方法，其还包括从所述受试者分离所述组织样品。
73.根据权利要求63至72中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
74.一种转化的细胞，其表达根据权利要求1至25中任一项所述的抗体。
75.根据权利要求74所述的转化的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
76.根据权利要求75所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
77.根据权利要求75所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是HEK 293细胞。
78.一种重组抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
79.根据权利要求78所述的重组抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
80.根据权利要求78或79所述的重组抗体，其中所述抗体包含人IgG1重链恒定区。
81.根据权利要求80所述的重组抗体，其中所述人IgG1重链恒定区包含SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65或SEQ ID NO:66。
82.根据权利要求78或79所述的重组抗体，其中所述抗体包含人IgG4重链恒定区。
83.根据权利要求82所述的重组抗体，其中所述人重链IgG4恒定区包含SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:69。
84.根据权利要求78或79所述的重组抗体，其中所述抗体包含人重链IgG2恒定区。
85.根据权利要求84所述的重组抗体，其中所述人重链IgG2恒定区包含SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:71。
86.根据权利要求78至85中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人轻链λ恒定区。
87.根据权利要求86所述的重组抗体，其中所述人轻链λ恒定区包含SEQ ID NO:48。
88.根据权利要求86所述的重组抗体，其中所述重组抗体包含轻链，所述轻链包含SEQID NO:61的氨基酸序列。
89.根据权利要求80或88所述的重组抗体，其中所述重组抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列。
90.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其中所述TL1A是非人灵长类动物TL1A。
91.根据权利要求90所述的重组抗体，其中所述非人灵长类动物是食蟹猴。
92.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其中所述TL1A是非人哺乳动物TL1A。
93.根据权利要求92所述的重组抗体，其中所述非人哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猫、狗或猪。
94.一种组合物，其包含根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体和药学上可接受的载体。
95.一种治疗呼吸道疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求78至89中任一项所述的抗体施用至需要治疗呼吸道疾病的受试者。
96.根据权利要求95所述的方法，其中所述呼吸道疾病是哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎或囊性纤维化。
97.一种治疗胃肠疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求78至89中任一项所述的抗体施用至需要治疗胃肠疾病的受试者。
98.根据权利要求80所述的方法，其中所述胃肠疾病是炎性肠病、结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、嗜酸性食道炎、肠易激综合征或与囊性纤维化相关的胃肠疾病。
99.一种治疗关节炎的方法，所述方法包括将根据权利要求78至89中任一项所述的抗体施用至需要治疗关节炎的受试者。
100.根据权利要求99所述的方法，其中所述关节炎是类风湿性关节炎。
101.一种治疗皮肤疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求78至89中任一项所述的抗体施用至需要治疗皮肤疾病的受试者。
102.根据权利要求101所述的方法，其中所述皮肤疾病是特应性皮炎、湿疹或硬皮病。
103.根据权利要求95至102中任一项所述的方法，其中施用包括静脉内施用或皮下施用。
104.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗呼吸道疾病。
105.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗哮喘。
106.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗COPD。
107.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肺类肉瘤病。
108.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗过敏性鼻炎。
109.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肺纤维化。
110.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗囊性纤维化。
111.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗胃肠疾病。
112.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗炎性肠病。
113.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗结肠炎。
114.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗溃疡性结肠炎。
115.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗嗜酸性食道炎。
116.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗与囊性纤维化相关的胃肠疾病。
117.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肠易激综合征。
118.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗克罗恩氏病。
119.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗关节炎。
120.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗类风湿性关节炎。
121.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗皮肤疾病。
122.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗特应性皮炎。
123.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗湿疹。
124.根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体，其用于治疗硬皮病。
125.一种根据权利要求78至89中任一项所述的重组抗体的用途，其用于制备用于治疗哮喘、COPD、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎、囊性纤维化、炎性肠病、结肠炎、溃疡性结肠炎、嗜酸性食道炎、与囊性纤维化相关的胃肠疾病、克罗恩氏病、肠易激综合征、关节炎、类风湿性关节炎、特应性皮炎、湿疹或硬皮病中的任一种的药剂。
126.一种用于检测外周血单核细胞(PBMC)的表面上的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求78至89中任一项所述的抗体与从受试者分离的PBMC接触，检测结合至所述PBMC的表面上的TL1A的所述抗体，以及任选地量化所述PBMC上的TL1A的水平。
127.一种用于检测血清中的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求78至89中任一项所述的抗体与从受试者获得的血清接触，检测结合至所述血清中的TL1A的所述抗体，以及任选地量化所述血清中的TL1A的水平。
128.一种用于检测从受试者分离的组织样品中的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求78至89中任一项所述的抗体与从受试者分离的组织接触以形成抗体-TL1A复合物，以及检测所述组织中的所述复合物。
129.根据权利要求128所述的方法，其中所述组织包括呼吸道组织、痰液或支气管肺泡灌洗液。
130.根据权利要求128所述的方法，其中所述组织包括胃肠组织。
131.根据权利要求128所述的方法，其中所述组织包括关节组织。
132.根据权利要求128所述的方法，其中所述组织包括皮肤组织。
133.根据权利要求128所述的方法，其中所述组织包括血液。
134.根据权利要求128至133中任一项所述的方法，其还包括从所述受试者分离所述组织样品。
135.根据权利要求126至134中任一项所述的方法，其中所述受试者是人类。
136.一种转化的细胞，其表达根据权利要求78至89中任一项所述的抗体。
137.根据权利要求136所述的转化的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
138.根据权利要求137所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
139.根据权利要求137所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是HEK 293细胞。
140.一种重组抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:3的氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列，其限制条件为当所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列时，所述轻链可变区不包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其中所述抗体特异性地结合至TNF样配体1a(TL1A)并且其中所述抗体能够抑制TL1A与死亡受体3(DR3)的相互作用。
141.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
142.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
143.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
144.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
145.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
146.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
147.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
148.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
149.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
150.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
151.根据权利要求140所述的重组抗体，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
152.根据权利要求140至151中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
153.根据权利要求140至152中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人IgG1重链恒定区。
154.根据权利要求153所述的重组抗体，其中所述人IgG1重链恒定区包含SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ IDNO:65或SEQ ID NO:66。
155.根据权利要求140至152中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人重链IgG4恒定区。
156.根据权利要求155所述的重组抗体，其中所述人重链IgG4恒定区包含SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47或SEQ ID NO:69。
157.根据权利要求140至152中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人重链IgG2恒定区。
158.根据权利要求157所述的重组抗体，其中所述人重链IgG2恒定区包含SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:70或SEQ ID NO:71。
159.根据权利要求140至158中任一项所述的重组抗体，其中所述抗体包含人轻链λ恒定区。
160.根据权利要求159所述的重组抗体，其中所述人轻链λ恒定区包含SEQ ID NO:48。
161.根据权利要求159所述的重组抗体，其中所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ IDNO:61的氨基酸序列。
162.根据权利要求140至161中任一项所述的重组抗体，其中如通过动力学排阻测定所测量，对TL1A的KD是约30pM至约60pM。
163.根据权利要求140至162中任一项所述的重组抗体，其中如通过动力学排除测定所测量，对TL1A的KD是约35pM至约50pM。
164.根据权利要求140至163中任一项所述的重组抗体，其中如通过动力学排除测定所测量，对TL1A的KD是约35pM至约42pM。
165.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其中所述TL1A是非人哺乳动物TL1A。
166.根据权利要求165所述的重组抗体，其中所述非人哺乳动物是小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猫、狗或猪。
167.一种组合物，其包含根据权利要求140至166中任一项所述的重组抗体和药学上可接受的载体。
168.一种治疗呼吸道疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求140至164中任一项所述的抗体施用至需要治疗呼吸道疾病的受试者。
169.根据权利要求168所述的方法，其中所述呼吸道疾病是哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎或囊性纤维化。
170.一种治疗胃肠疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求140至164中任一项所述的抗体施用至需要治疗胃肠疾病的受试者。
171.根据权利要求170所述的方法，其中所述胃肠疾病是炎性肠病、结肠炎、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、嗜酸性食道炎、肠易激综合征或与囊性纤维化相关的胃肠疾病。
172.一种治疗关节炎的方法，所述方法包括将根据权利要求140至164中任一项所述的抗体施用至需要治疗关节炎的受试者。
173.根据权利要求172所述的方法，其中所述关节炎是类风湿性关节炎。
174.一种治疗皮肤疾病的方法，所述方法包括将根据权利要求140至164中任一项所述的抗体施用至需要治疗皮肤疾病的受试者。
175.根据权利要求174所述的方法，其中所述皮肤疾病是特应性皮炎、湿疹或硬皮病。
176.根据权利要求168至175中任一项所述的方法，其中施用包括静脉内施用或皮下施用。
177.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗呼吸道疾病。
178.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗哮喘。
179.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗COPD。
180.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肺类肉瘤病。
181.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗过敏性鼻炎。
182.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肺纤维化。
183.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗囊性纤维化。
184.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗胃肠疾病。
185.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗炎性肠病。
186.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗结肠炎。
187.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗溃疡性结肠炎。
188.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗嗜酸性食道炎。
189.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗与囊性纤维化相关的胃肠疾病。
190.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗肠易激综合征。
191.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗克罗恩氏病。
192.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗关节炎。
193.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗类风湿性关节炎。
194.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗皮肤疾病。
195.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗特应性皮炎。
196.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗湿疹。
197.根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体，其用于治疗硬皮病。
198.一种根据权利要求140至164中任一项所述的重组抗体的用途，其用于制备用于治疗哮喘、COPD、肺纤维化、肺类肉瘤病、过敏性鼻炎、囊性纤维化、炎性肠病、结肠炎、溃疡性结肠炎、嗜酸性食道炎、与囊性纤维化相关的胃肠疾病、克罗恩氏病、肠易激综合征、关节炎、类风湿性关节炎、特应性皮炎、湿疹或硬皮病的药剂。
199.一种用于检测外周血单核细胞(PBMC)的表面上的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求140至164中任一项所述的抗体与从受试者分离的PBMC接触，检测结合至所述PBMC的表面上的TL1A的抗体，以及任选地量化所述PBMC上的TL1A的水平。
200.一种用于检测血清中的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求140至164中任一项所述的抗体与从受试者获得的血清接触，检测结合至所述血清中的TL1A的所述抗体，以及任选地量化所述血清中的TL1A的水平。
201.一种用于检测从受试者分离的组织样品中的TL1A的体外方法，所述方法包括使根据权利要求140至164中任一项所述的抗体与从受试者分离的组织接触以形成抗体-TL1A复合物，以及检测所述组织中的所述复合物。
202.根据权利要求201所述的方法，其中所述组织包括呼吸道组织、痰液或支气管肺泡灌洗液。
203.根据权利要求201所述的方法，其中所述组织包括胃肠组织。
204.根据权利要求201所述的方法，其中所述组织包括关节组织。
205.根据权利要求201所述的方法，其中所述组织包括皮肤组织。
206.根据权利要求201所述的方法，其中所述组织包括血液。
207.根据权利要求201至206中任一项所述的方法，其还包括从所述受试者分离所述组织样品。
208.一种转化的细胞，其表达根据权利要求140至164中任一项所述的抗体。
209.根据权利要求208所述的转化的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
210.根据权利要求209所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
211.根据权利要求209所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是HEK 293细胞。
212.一种多核苷酸，其具有编码抗体重链可变区的核酸序列，所述抗体重链可变区包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。
213.根据权利要求212所述的多核苷酸，其中所述核酸序列包含SEQ ID NO:51。
214.根据权利要求212所述的多核苷酸，其中所述核酸序列包含SEQ ID NO:58。
215.根据权利要求212或213所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。
216.根据权利要求214所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:50。
217.根据权利要求212至214中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
218.根据权利要求217所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:52。
219.根据权利要求217所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:59。
220.根据权利要求212或213所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
221.根据权利要求220所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:54。
222.根据权利要求212或213所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
223.根据权利要求222所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:55。
224.根据权利要求212或213所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
225.根据权利要求224所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:56。
226.根据权利要求212或213所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列。
227.根据权利要求226所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:57。
228.一种多核苷酸，其具有编码抗体重链可变区的核酸序列，所述抗体重链可变区包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
229.根据权利要求228所述的多核苷酸，其中所述核酸序列包含SEQ ID NO:49。
230.根据权利要求228或229所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列。
231.根据权利要求230所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:52。
232.根据权利要求228或229所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列。
233.根据权利要求232所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:53。
234.根据权利要求228或229所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
235.根据权利要求234所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:54。
236.根据权利要求228或229所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列。
237.根据权利要求236所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:55。
238.根据权利要求228或229所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸进一步具有编码抗体轻链可变区的第二核酸序列，所述抗体轻链可变区包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
239.根据权利要求238所述的多核苷酸，其中所述第二核酸序列包含SEQ ID NO:56。
240.一种载体，其包含根据权利要求212至239中任一项所述的多核苷酸。
241.一种转化的细胞，其包含根据权利要求240所述的载体。
242.根据权利要求241所述的转化的细胞，其中所述转化的细胞是哺乳动物细胞。
243.根据权利要求242所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
244.根据权利要求242所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是HEK293细胞。
245.根据权利要求75、209或242中任一项所述的转化的细胞，其中所述哺乳动物细胞是NS0细胞。
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