TW201722990A - 特異性結合tl1a之抗體 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種以重組方式表現之變異抗體，其具有對TL1A增強之親和力及相對於衍生其之親本抗體具有增強之效能。該等抗體抑制TL1A與死亡受體3(DR3)之間的相互作用。抗體或其組合物可用於治療以下其中一或多者：哮喘、COPD、肺纖維化、囊腫性纖維化、發炎性腸病、與囊腫性纖維化相關之腸胃疾病、克羅恩氏病(Crohn's disease)、結腸炎、潰瘍性結腸炎、大腸急躁症、嗜酸性食道炎、異位性皮膚炎、濕疹、硬皮病、關節炎或類風濕性關節炎。

Description

特異性結合TL1A之抗體
本發明大體上係關於抗體工程改造之領域。更具體言之，本發明係關於變異抗體，其特異性結合TL1A且抑制TL1A與死亡受體3(DR3)之間的相互作用。在一些態樣中，抗體亦抑制TL1A與誘餌受體3(DcR3)之間的相互作用。抗體具有相對於衍生變異體之親本抗體的經改良效能。
在整個說明書中引用各種公開案，包括專利、所公佈申請案、寄存編號、技術論文及學術論文。此等所引用公開案中之每一者在此文件中以全文引用之方式併入且出於所有目的。
TNF樣配位體1A(TL1A，合成TNF超家族成員15(TNFSF15)；TL1及VEGI)為腫瘤壞死因子超家族之成員，其藉由抗原呈現細胞(包括樹突狀細胞、B細胞及巨噬細胞)、CD4+及CD8+ T細胞以及內皮細胞表現。TL1A可在細胞表面上表現或分泌為可溶細胞因子。關於TL1A之受體死亡受體3(DR3)藉由多種細胞表現，包括CD4+及CD8+ T細胞、NK細胞、NKT細胞及FOXP3+調節T(Treg)細胞以及2型及3型先天淋巴細胞(ILC2及ILC3)。
TL1A亦可結合誘餌受體(DcR3)，其為DR3之競爭性抑制劑。DcR3亦充當用於Fas配位體(Fas-L)及淋巴毒素樣誘導性蛋白質之誘餌受體，該 淋巴毒素樣誘導性蛋白質與用於結合T細胞(LIGHT)上疱疹病毒進入介體之糖蛋白D競爭。因此，DcR3為數個信號轉導路徑之重要調節因子。
TL1A/DR3信號傳導路徑與人類疾病相關之數個生物系統有關。舉例而言，TL1A已展示在免疫性、血管生成及障壁組織恆定中起一定作用。抑制TL1A與DR3之相互作用亦已展示促進數種免疫介導性病狀中之治療效益，諸如實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE；多發性硬化症模型)、結腸炎、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、發炎性腸病、皮膚病、哮喘及關節炎。
因此，期望抑制TL1A活性之化合物例如用於其治療性、預防性、診斷性及預後用途。
本文提供一種包含以下之重組抗體：包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2、包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3、包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3，其限制條件為當該重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列時，該輕鏈可變區不包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。
在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
本文亦提供一種包含以下之重組抗體：包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的，其限制條件為當該重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列時，該輕鏈可變區不包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：8之胺基酸序 列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
在一些態樣中，該抗體包含重鏈，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含輕鏈，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列。在一些態樣中，該抗體包含重鏈，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列；及輕鏈，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列。
該等重組抗體較佳為全長的，且較佳為單株。該等重組抗體以相對於抗體增強之親和力結合至TL1A，該抗體具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區。相對於具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區的抗體，該等重組抗體具有增強之效能。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約10倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約12倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約13倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約15倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約20倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效 能大至少約25倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約27倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約40倍。效能之增強倍數可根據在TF-1細胞中進行TL1A誘導之卡斯蛋白酶效能分析測定。
該等重組抗體可包含人類IgG1重鏈恆定區、人類IgG2重鏈恆定區或人類IgG4重鏈恆定區或其任何異型。人類IgG1重鏈恆定區可包含SEQ ID NO：42或SEQ ID NO：43(人類IgG1△K)或SEQ ID NO：44(具有YTE之人類IgG1)或SEQ ID NO：64(具有YTE及△K之人類IgG1)或SEQ ID NO：63(具有L234A、L235A、G237A之人類IgG1)或SEQ ID NO：62(具有L234A、L235A、G237A及△K之人類IgG1)或SEQ ID NO：65(具有L235A及G237A之人類IgG1)或SEQ ID NO：66(具有L235A、G237A及△K之人類IgG1)。人類IgG2重鏈恆定區可包含SEQ ID NO：67或SEQ ID NO：70(人類IgG2△K)或SEQ ID NO：71(具有A330S、P331S之人類IgG2)或SEQ ID NO：68(具有A330S、P331S及△K之人類IgG2)。人類IgG4重鏈IgG4恆定區可包含SEQ ID NO：45或SEQ ID NO：46(具有S228P及△K之人類IgG4)或SEQ ID NO：47(具有S228P及YTE之人類IgG4)或SEQ ID NO：69(具有S228P、YTE及△K之人類IgG4)。應理解，IgG4重鏈可在無穩定取代S228P的情況下使用(例如僅具有YTE之IgG4或具有YTE及△K之IgG4或僅具有△K之IgG4)。
重組抗體可包含人類λ輕鏈恆定區或其異型。人類輕鏈λ恆定區可包含SEQ ID NO：48。
該等重組抗體結合至人類TL1A，且可結合至非人類靈長類之TL1A、或非人類哺乳動物(諸如小鼠、大鼠、天竺鼠、貓、狗、兔子或豬)之TL1A。
該等重組抗體可用於治療呼吸道疾病之方法、治療腸胃疾病之方法、治療皮膚病之方法或治療關節炎之方法，或可用於治療呼吸道疾病、腸胃疾病、皮膚病或關節炎，或可用於製造用於治療呼吸道疾病、腸胃疾病、皮膚病或關節炎之藥劑。該呼吸道疾病可包含以下中之一或多者：哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纖維化、肺類肉瘤病、過敏性鼻炎或囊腫性纖維化。該腸胃疾病可包含以下中之一或多者：發炎性腸病、克羅恩氏病、結腸炎、潰瘍性結腸炎、嗜酸性食道炎或大腸急躁症或腸胃疾病或與囊腫性纖維化相關病況。該關節炎可包含類風濕性關節炎。該皮膚病可包含以下中之一或多者：異位性皮膚炎、濕疹及硬皮病。
需要該等治療之人類個體、非人類靈長類個體或非人類哺乳動物個體可例如藉由向該個體投與該等抗體或其組合物而用該等抗體或包含該等抗體之組合物治療。投與可非經腸，例如皮下及/或靜脈內。
該等重組抗體可用於偵測周邊血液單核細胞(PBMC)表面上之TL1A的方法。該等方法包含使結合至如本文中所描述或所例示之TL1A的抗體與獲自個體之PBMC接觸，且偵測結合至該等PBMC表面上TL1A之抗體。該等方法可進一步包含量化PBMC上之TL1A水準。該等方法可進一步包含自個體獲得PBMC。
該等重組抗體可用於偵測血清中TL1A之方法。該等方法包含使結合至如本文中所描述或所例示之TL1A的抗體與獲自個體之血清接觸，且偵測結合至血清中TL1A之抗體。該等方法可進一步包含量化血清中TL1A之 水準。該等方法可進一步包含自獲自個體之血液獲得血清。該等方法可進一步包含自個體獲得血液。
提供對該等抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區中之一或多者進行編碼的多核苷酸。該等多核苷酸可進一步對重鏈恆定區及/或輕鏈恆定區進行編碼。
在一些態樣中，多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：51或SEQ ID NO：58之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：50之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：59之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：54之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：55之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：56之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：57之核酸序列。
在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體重鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：49之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：4之胺基酸序 列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：52之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：53之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：54之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：55之核酸序列。在一些態樣中，該多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列，例如包含SEQ ID NO：56之核酸序列。
提供包含該等多核苷酸中之一或多者的載體。提供經一或多個該等多核苷酸或該等載體轉型之細胞。經轉型細胞可為哺乳動物，且較佳為哺乳動物表現主體細胞，諸如CHO細胞、NS0細胞或HEK293細胞。
圖1展示CDR1或CDR2區域或鄰近於親本抗體(320-179)可變重鏈之CDR2的所選擇胺基酸殘基所製作的單胺基酸取代中之每一者之位置及標識。加框區域代表根據AbM編號系統之CDR。
圖2展示親本抗體(320-179)可變輕鏈之CDR1或CDR3區域所製作的單胺基酸取代中之每一者之位置及標識。加框區域代表根據AbM編號系統之CDR。
圖3展示變異抗TL1A抗體重鏈之對準。
圖4展示變異抗TL1A結合抗體輕鏈之對準。
圖5展示如利用SPR所量測，變異抗TL1A抗體之TL1A解離階段之比 較。
圖6展示利用變異TL1A抗體之TF-1細胞卡斯蛋白酶效能分析結果。
圖7展示使用各種TL1A抗體相較於親本抗體320-179之TF-1細胞卡斯蛋白酶效能分析結果。
圖8展示經歷數個不同實驗，相較於其他所公佈抗TL1A抗體，抗體320-587在TF-1細胞卡斯蛋白酶效能分析中具有優良TL1A效能。
圖9展示如在ELISA形式中所量測，與同型對照相比，抑制結合至DR3之TL1A的各種抗TL1A抗體。
圖10展示親本抗體320-179不抑制結合至DcR3之TL1A，而變異抗TL1A抗體抑制TL1A-DcR3相互作用。
圖11展示抗體320-587與不同種類之TL1A交叉反應且結合至不同種類之TL1A；抗體結合至來自所有所測試種類之TL1A。
圖12展示抗體320-587在大鼠TNBS誘導結腸炎模型中之投與結果，其表明抗體顯著改善結腸炎症狀。
圖13展示在ELISA測試中，抗體320-587偵測自利用免疫複合體刺激之人類PBMC分泌的人類TL1A。
圖14展示在流式細胞測量術測試中，抗體320-587偵測表現表面上之膜TL1A的人類PBMC群體。
圖15展示用抗體320-587治療的患有急性OVA誘導哮喘之大鼠在支氣管肺泡灌洗流體(BALF)中具有顯著減少之嗜伊紅血球。
圖16A至圖16D展示用抗體320-587治療患有急性OVA誘導哮喘之天竺鼠的治療改良(圖16A)BALF嗜伊紅血球、(圖16B)BALF巨噬細胞、(圖16C)早期哮喘反應之後的氣管反應過度及(圖16D)早期哮喘反應之量 值。
圖17A至圖17E展示用抗體320-587治療患有慢性OVA誘導哮喘之大鼠的治療改良(圖17A)BALF嗜伊紅血球、(圖17B)BALF巨噬細胞、(圖17C)BALF IL-13、(圖17D)如藉由PAS反應性分析之杯狀細胞增生及(圖17E)如自H&E染色部分分析之黏膜增厚。
圖18展示加倍氣管堵塞所要的卵白蛋白之劑量。
圖19展示用抗體320-587治療患有TNBS誘導結腸炎之大鼠的治療改良潰瘍面積纖維化。
圖20A至圖20E展示患有TNBS誘導結腸炎之大鼠與患有DNBS誘導結腸炎之大鼠用抗體320-587治療的比較及在7天及14天時的效應，其為(圖20A)結腸重量/長度比率、(圖20B)結腸纖維化、(圖20C)結腸滲透及(圖20D)結腸損傷。圖20E展示在7天及14天時的潰瘍面積之代表性部分。
圖21A至圖21C展示用抗體320-587治療患有DSS誘導結腸炎之大鼠的治療改良(圖21A)DSS投與期間之重量變化、(圖21B)DSS投與期間之臨床評分及(圖21C)結腸重量/長度比率。
圖22展示TL1A誘導腹膜內細胞因子對320-587治療起反應之改變。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2015年9月18日申請之美國臨時申請案第62/220,442號的優先權，其內容以全文引用之方式且出於所有目的併入本文中。
關於本發明之態樣的各種術語在整個說明書及申請專利範圍中使用。除非另有指示，否則該等術語將具有其在此項技術中之普通含義。其他特定定義之術語以符合本文中提供之定義的方式解釋。
術語「個體」及「患者」可被互換地使用且包括任何動物。哺乳動物為較佳的，包括伴侶(例如貓、狗)及農場哺乳動物(例如豬、馬、母牛)以及嚙齒動物，包括小鼠、兔子及大鼠、天竺鼠以及其他嚙齒動物。非人類靈長類，諸如食蟹獼猴為更佳的，且人類為極佳的。
若分子已藉由人手自其天然環境改變及/或移除，則該分子，諸如抗體已「經分離」。
如本文所用，除非另外明確說明，否則單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個參考物。
在抗體-抗原相互作用之情形下「特異性」並非必需為絕對指定，但可構成表示抗體對抗原陽性細胞相較於抗原陰性細胞之選擇性程度的相對術語。抗體對抗原陽性細胞之特異性藉由抗體之可變區介導，且通常藉由抗體之互補決定區(CDR)介導。構築體對抗原陽性細胞相較於抗原陰性細胞可具有約100倍至約1000倍特異性。
如本文所使用，術語「重組」包括來自藉由基因工程改造或以其他方式藉由實驗室操縱製作之基因的表現。
本發明提供包含抗體320-179之以重組方式改變之重鏈及/或輕鏈可變區的變異抗TL1A抗體，其中變異抗體特異性結合至TL1A。此等320-179變異抗體抑制TL1A與DR3相互作用且在一些態樣中亦抑制與DcR3相互作用之能力，且進一步抑制藉由TL1A與DR3相互作用誘導之信號傳導。此等抗體具有相對於抗體320-179增強之效能。此等抗體對TL1A具有相對於抗體320-179增強之親和力。
增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約 10倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約12倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約13倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約15倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約20倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約25倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約27倍。增強之效能可比具有包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區之抗體的效能大至少約40倍。可例如藉由在TF-1細胞分析中量測TL1A誘導細胞凋亡中之卡斯蛋白酶釋放來測定效能增強倍數。
320-179變異抗體以重組方式表現，且尤其結合至TL1A。親本抗體320-179包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。在一些態樣中，320-179變異抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列，其限制條件為當重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列時，輕鏈可變區不包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。320-179變異抗體能夠抑制TL1A與DR3之 相互作用。320-179變異抗體具有相對於抗體320-179增強之效能及/或對TL1A具有相對於抗體320-179增強之親和力。
在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。在一些極佳態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列。在一些態樣中，重鏈可變區包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列，且輕鏈可變區包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列。
在極佳態樣中，320-179變異抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列，且尤其結合至TL1A。在一些態樣中，SEQ ID NO：3之重鏈可變區接 合至人類IgG1(△K)重鏈恆定區(例如SEQ ID NO：43)，使得重鏈包含SEQ ID NO：60。在一些態樣中，SEQ ID NO：4之輕鏈可變區接合至λ人類輕鏈恆定區(例如SEQ ID NO：48)，使得輕鏈包含SEQ ID NO：61。320-179變異抗體能夠抑制TL1A與DR3之相互作用。變異抗體具有相對於抗體320-179增強之效能及/或對TL1A具有相對於抗體320-179增強之親和力。
在一些態樣中，320-179變異抗體以重組方式表現且尤其結合至TL1A，且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列；及重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列。抗體可包含輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列。在重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的態樣中，輕鏈可變區較佳不包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。此等320-179變異抗體能夠抑制TL1A與DR3之相互作用。此等320-179變異抗體具有相對於抗體320-179增強之效能及/或對TL1A具有相對於抗體320-179增強之親和力。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區 CDR3，其包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列；輕鏈 可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A且包含重鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列；重鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列；重鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR1，其包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列；輕鏈可變區CDR2，其包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列；及輕鏈可變區CDR3，其包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其限制條件為輕鏈可變區不包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區或輕鏈。輕鏈可變區可進一步包含λ恆定區。
在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列，及重鏈可變區，其限制條件為重鏈可變區不包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列，及重 鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：11之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：12之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：13之胺基酸序列，及重鏈可變區。在一些態樣中，抗體特異性結合至TL1A，且包含輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列，及重鏈可變區，其限制條件為若輕鏈可變區包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列，則重鏈可變區不包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列。重鏈可變區可進一步包含重鏈恆定區，其包括本文中所描述或所例示之任何IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區胺基酸序列。
320-179變異抗體特異性結合至TL1A。抗體結合至人類TL1A，且可結合至以下中之一或多者：食蟹獼猴TL1A、小鼠TL1A、大鼠TL1A、天竺鼠TL1A、貓TL1A、狗TL1A、豬TL1A或兔子TL1A。在一些態樣中， 例如若抗原決定基共用，則抗體可結合至多個不同種類之TL1A。在一些態樣中，人類TL1A包含SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32或SEQ ID NO：33之胺基酸序列。在一些態樣中，食蟹獼猴TL1A包含SEQ ID NO：34之胺基酸序列。在一些態樣中，小鼠TL1A包含SEQ ID NO：35之胺基酸序列。在一些態樣中，大鼠TL1A包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列。在一些態樣中，天竺鼠TL1A包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。在一些態樣中，貓TL1A包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列。在一些態樣中，豬TL1A包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列。在一些態樣中，兔子TL1A包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列。在一些態樣中，狗TL1A包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列。
320-179變異抗體對TL1A上之抗原決定基具有結合親和力，其包括平衡解離常數(KD)，其可根據動力學排除分析，諸如KINEXA®分析(Sapidyne Instruments Inc.,Boise,ID)量測。
自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD較佳小於約1000pM。在一些態樣中，自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD小於約500pM或小於約400pM或小於約300pM或小於約200pM。在一些較佳態樣中，自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD小於約100pM。
自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約10pM至約100pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約25pM至約75pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約30pM至約60pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約30pM至約50pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約35pM至約50pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約36pM至約46 pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約38pM至約44pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約39pM至約43pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約40pM至約45pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約35pM至約42pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約40pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約41pM。自動力學排除分析測定之關於TL1A結合之KD可為約42pM。動力學排除分析可使用抗體分子或TL1A分子作為恆定結合對象，且另一分子作為滴定液。
320-179變異抗TL1A抗體較佳能夠結合至TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約100nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約75nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約50nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約30nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約25nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約20nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約18nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約15nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約13nM之TL1A陽性細胞。抗體可結合至EC50值小於約10nM之TL1A陽性細胞。
320-179變異抗體較佳為單株，且更佳為包含兩個重鏈及兩個輕鏈之全長抗體。在一些態樣中，抗體包含保留抗原結合特異性且亦較佳保留320-179親本抗體分子之大部分或所有親和力(例如對於TL1A)的抗體之衍生物或片段或部分。舉例而言，衍生物可包含至少一個可變區(重鏈或輕鏈可變區)。適合抗體衍生物及片段之其他實例包括(但不限於)具有多抗原決定基特異性之抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、雙功能抗體、單 鏈分子以及FAb、F(Ab')2、Fd、Fabc及Fv分子、單鏈(Sc)抗體、單鏈Fv抗體(scFv)、個別抗體輕鏈、個別抗體重鏈、在抗體鏈與其他分子之間的融合物、重鏈單體或二聚體、輕鏈單體或二聚體、由一個重鏈及一個輕鏈組成之二聚體及其他多聚體。單鏈Fv抗體可為多價的。所有抗體同型可用於製備抗體衍生物、片段及部分。抗體衍生物、片段及/或部分可以重組方式製備且藉由任何細胞類型原核或真核細胞表現。
在全長抗體中，各重鏈由重鏈可變區(本文中簡寫為HCVR或VH)及重鏈恆定區構成。重鏈恆定區包含三個域CH1、CH2及CH3。各輕鏈由輕鏈可變區(本文中簡寫為LCVR或VL)及輕鏈恆定區構成。輕鏈恆定區由一個域CL構成。VH及VL區可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，其中散置有更保守的區域，稱為構架區(FR)。各VH及VL由自胺基端至羧基端按以下順序排列之三個CDR及四個FR構成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。通常與CDR序列改變相比，抗體之抗原結合特性不大可能受到FR序列改變干擾。免疫球蛋白分子可呈任何類型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類別。
320-179變異抗體為完全人類的。全人類抗體為整個分子為人類或以其他方式源於人類的彼等抗體，或包括與人類形式之抗體相同的胺基酸序列。全人類抗體包括彼等獲自人類V基因庫的彼等抗體，例如其中編碼抗體之可變區的人類基因係以重組方式表現。全人類抗體可在其他生物體(例如小鼠及異種小鼠技術(xenomouse technology))或在來自經過編碼人類抗體基因轉型之其他生物體的細胞中表現。然而，全人類抗體可包括不由人類序列編碼之胺基酸殘基，例如由無規或定位突變引入的突變。
在一些態樣中，320-179變異抗體可包含非免疫球蛋白衍生之蛋白質構架。舉例而言，可參考(Ku & Schutz,1995,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92：6552-6556)，其描述具有隨機建立CDR(其經選擇用於抗原結合)之兩個環路的四螺旋束蛋白質細胞色素b562。
320-179變異抗體可包含可影響抗體活性或穩定性之轉譯後修飾或部分體。此等修飾或部分體包括(但不限於)甲基化、乙醯化、糖基化、硫酸化、磷酸化、羧基化及醯胺化部分體及此項技術中所熟知之其他部分體。部分體包括常出現在免疫球蛋白分子上之任何化學基團或基團組合，該等免疫球蛋白分子係天然存在或改藉由重組表現系統(包括原核及真核表現系統)添加至抗體。
本發明涵蓋之側鏈修飾之實例包括諸如藉由以下進行之胺基修飾：還原烷基化，其藉由與醛反應，接著用NaBH4進行還原；與乙醯亞胺酸甲酯進行脒化；與乙酸酐進行醯化；與氰酸酯進行胺基之胺甲醯化；與2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)進行胺基之三硝基苯甲基化；與丁二酸酐及四氫鄰苯二甲酸酐進行胺基之醯化；及與吡哆醛-5-磷酸酯進行離胺酸之吡哆醛化，接著與NaBH4進行還原反應。
精胺酸殘基之胍基團可藉由用諸如2,3-丁二酮、苯基乙二醛及乙二醛之試劑形成雜環縮合產物進行修飾。羧基可經由形成O-醯基異脲而活化碳化二亞胺，接著後續衍生成例如相應醯胺進行修飾。巰基可利用諸如以下方法進行修飾：用碘乙酸或碘乙醯胺進行羧甲基化；過甲酸氧化成氧化半胱胺酸；與其他硫醇化合物形成混合二硫化物；與順丁烯二醯亞胺、順丁烯二酸酐或其他經取代之順丁烯二醯亞胺反應；使用4-氯汞基苯甲酸鹽、4-氯汞苯基磺酸、氯化苯基汞、2-氯汞基-4-硝基苯酚及其他汞劑形成汞衍 生物；用氰酸酯在鹼性pH下進行胺甲醯化。色胺酸殘基可藉由例如用N-溴代丁二醯亞胺進行氧化或用2-羥基-5-硝基苄基溴化物或次磺醯基鹵化物對吲哚環進行烷基化來修飾。另一方面酪胺酸殘基可藉由用四硝基甲烷進行硝化而形成3-硝基酪胺酸衍生物來改變。組胺酸殘基之咪唑環修飾可藉由用碘乙酸衍生物進行烷基化或用焦碳酸二乙酯進行N-乙氧羰化完成。
320-179變異抗體可包括調變血清半衰期及生物分佈之修飾，包括(但不限於)調變抗體與新生Fc受體(FcRn)相互作用的修飾，該新生Fc受體(FcRn)在保護IgG免於分解代謝且維持較高血清抗體濃度中起關鍵作用。如美國專利第7,083,784號中所描述，血清半衰期調節修飾可在IgG1、IgG2或IgG4之Fc區中進行，包括M252Y/S254T/T256E之三元取代(「YTE」取代，根據EU編號系統進行編號(Edelman,G.M.等人(1969)Proc.Natl.Acad.USA 63,78-85))。其他取代可在位置250及428處(參看例如美國專利第7,217,797號)以及在位置307、380及434處(參看例如專利合作條約公開案第WO 00/042072號)進行。調變結合至Fc受體及藉由此等受體介導之後續功能(包括FcRn結合及血清半衰期)之恆定域胺基酸取代之實例描述於美國公開案第2009/0142340號、第2009/0068175號及第2009/0092599號中。任何類別之抗體可具有經省去或移除以減少異質性(△K)之重鏈C末端離胺酸。人類IgG4中S228P(EU編號)之取代可使活體內抗體Fab臂交換穩定化(Labrin等人(2009)Nature Biotechnology 27：8；767-773)，且此取代可與YTE及/或△K修飾同時存在。
320-179變異抗體包含人類恆定域。重鏈恆定域較佳為人類IgG1、IgG2或IgG4恆定域。輕鏈恆定域較佳為人類λ恆定域。適合的人類λ域包含SEQ ID NO：48。
可與320-179變異抗體一起使用之人類重鏈IgG1恆定區可選自人類IgG1(SEQ ID NO：42)、人類IgG1(△K)(SEQ ID NO：43)、人類IgG1 252Y/254T/256E(SEQ ID NO：44)、人類IgG1 252Y/254T/256E(△K)(SEQ ID NO：64)、人類IgG1 L234A/L235A/G237A(SEQ ID NO：63)、人類IgG1 L234A/L235A/G237A(△K)(SEQ ID NO：62)、人類IgG1 L235A/G237A(SEQ ID NO：65)及人類IgG1 L235A/G237A(△K)(SEQ ID NO：66)。可與320-179變異抗體一起使用之人類重鏈IgG2恆定區可選自具有或不具有△K(SEQ ID NO：67及SEQ ID NO：70)之人類IgG2及具有或不具有(△K)(SEQ ID NO：71及SEQ ID NO：68)之人類IgG2 A330S/P331S。可與320-179變異抗體一起使用之人類重鏈IgG4恆定區可選自人類IgG4 S228P(SEQ ID NO：45)、人類IgG4 S228P(△K)(SEQ ID NO：46)、人類IgG4 228P/252Y/254T/256E(SEQ ID NO：47)及人類IgG4 228P/252Y/254T/256E(△K)(SEQ ID NO：69)。
320-179變異抗體可標記、鍵結或結合(conjugate)至任何化學或生物分子部分。標記抗體可可用於治療性、診斷性或基礎研究應用。該等標記/結合物可為可偵測的，諸如螢光染料、電化學發光探針、量子點、放射性標記、酶、螢光蛋白質、發光蛋白質及生物素。標記/結合物可為化學治療劑、毒素、同位素及用於治療病狀諸如殺死癌細胞之其他藥劑。化學治療劑可為適用於抗體正用於之目的之任何藥劑。
抗體可藉由已知的保護基/阻隔基衍生以預防蛋白質裂解或促進活性或穩定性。
編碼抗體及其子域(例如FR及CDR)之多核苷酸序列在本發明中詳細說明。多核苷酸包括(但不限於)RNA、DNA、cDNA、RNA與DNA之雜 種及RNA、DNA或其雜種之單鏈、雙鏈或三鏈。多核苷酸可包含對如本文中所描述或所例示之320-179變異抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。多核苷酸序列之互補序列亦在本發明之範疇內。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：3之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：51之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體重鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：1之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：49之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：2之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：50之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：4之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：52之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：5之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：53之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：6之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：54之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：7之胺基酸序列進行編碼的多核 苷酸可包含SEQ ID NO：55之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：8之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：56之核酸序列。
多核苷酸可包含對包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的核酸序列。對SEQ ID NO：10之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：57之核酸序列。
在一些態樣中，多核苷酸包含對抗體重鏈可變區進行編碼的第一核酸序列及對抗體輕鏈可變區進行編碼的第二核酸序列。第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：3之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：51之核酸序列，且對SEQ ID NO：2之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：50之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：3之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：51之核酸序列，且對SEQ ID NO：4之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：52之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：3之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：51之核酸序列，且對SEQ ID NO：6之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：54之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：3之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：51之核酸序列，且對SEQ ID NO：7之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：55之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：3之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：51之核酸序列，且對SEQ ID NO：8之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：56之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：10之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：3之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：51之核酸序列，且對SEQ ID NO：10之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：57之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：1之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：49之核酸序列，且對SEQ ID NO：4之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：52之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：5之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：1之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：49之核酸序 列，且對SEQ ID NO：5之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：53之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：6之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：1之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：49之核酸序列，且對SEQ ID NO：6之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：54之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：7之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：1之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：49之核酸序列，且對SEQ ID NO：7之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：55之核酸序列。
第一核酸序列可對包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列的抗體重鏈可變區及包含SEQ ID NO：8之胺基酸序列的輕鏈可變區進行編碼。對SEQ ID NO：1之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：49之核酸序列，且對SEQ ID NO：8之胺基酸序列進行編碼的多核苷酸可包含SEQ ID NO：56之核酸序列。
在一些態樣中，多核苷酸包含對抗體重鏈可變區進行編碼的第一核酸序列及對重鏈恆定區進行編碼的第二核酸序列。在較佳態樣中，多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列的抗體重鏈可變區進行編碼的第一核酸序列及對SEQ ID NO：43之IgG1(△K)重鏈恆定區進行編碼的第二核酸序列，例如包含SEQ ID NO：58之核酸序列的多核苷酸。
在一些態樣中，多核苷酸包含對抗體輕鏈可變區進行編碼的第一核 酸序列及對輕鏈恆定區進行編碼的第二核酸序列。在較佳態樣中，多核苷酸包含對包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列的抗體輕鏈可變區進行編碼的第一核酸序列及對SEQ ID NO：48之λ輕鏈恆定區進行編碼的第二核酸序列，例如包含SEQ ID NO：59之核酸序列的多核苷酸。
本文中所描述或所例示之多核苷酸中之任一者可包含在載體內。因此，包含多核苷酸之載體作為本發明之部分提供。載體可為表現載體。因此提供含有對所關注多肽進行編碼之序列的重組表現載體。表現載體可含有一或多個另外序列，諸如(但不限於)調節序列、選擇標記物、純化標籤或聚腺苷酸化信號。該等調節要素可包括轉錄啟動子、強化子、mRNA核糖體結合位點或控制終止轉錄及轉譯之序列。
表現載體，尤其哺乳動物表現載體可包括一或多個非轉錄要素，諸如起點複製、連接至待表現基因之適合啟動子及強化子、其他5'或3'側接非轉錄序列、5'或3'未轉譯序列(諸如必需的核糖體結合位點)、聚腺苷酸化位點、剪接供體及受體位點或轉錄終止序列。亦可併入在特定主體中賦予複製能力的起點複製。
載體可用於轉型熟習此項技術者所熟知的多種主體細胞中之任一者，且較佳為能夠表現抗體之主體細胞。載體包括(但不限於)質體、噬質體、黏質體、穿梭載體(bacmid)、細菌人造染色體(BAC)、酵母人造染色體(YAC)及桿狀病毒以及其他細菌、真核、酵母及病毒性載體。適合的主體細胞包括(但不限於)CHO細胞、NS0細胞、HEK293細胞或已知的或製備的任何真核穩定細胞株，且亦包括細菌、酵母及昆蟲細胞。
抗體亦可藉由融合瘤細胞製備；製備融合瘤之方法為熟知的且在此項技術中確立。
本發明亦提供包含320-179變異抗體之組合物。組合物可包含本文中所描述及/或所例示抗體中之任一者及可接受載劑，諸如藥學上可接受之載劑。適合載劑包括不干擾抗體之生物活性的任何介質且較佳對其所投與之主體為無毒的。可以任何適合之劑型調配組合物用於向個體投與。
320-179變異抗體可用於治療個體中呼吸道疾病、腸胃疾病、關節炎或皮膚病。因此，本發明提供治療方法。一般而言，方法包含向需要治療呼吸道疾病、腸胃疾病、關節炎或皮膚病之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得呼吸道疾病、腸胃疾病、關節炎或皮膚病得以治療。320-179變異抗體可包含本文中所描述或所例示之任何抗體。可包含皮下投與抗體。投與可包含靜脈內投與抗體。個體較佳為人類。個體可為非人類靈長類，諸如食蟹獼猴，或可為哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、天竺鼠、貓、豬、兔子或狗。
在治療呼吸道疾病之態樣中，方法包含向需要治療呼吸道疾病之個體投與320-179變異抗體或其組合物。該呼吸道疾病可包含以下中之一或多者：哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、肺纖維化、肺類肉瘤病、過敏性鼻炎或囊腫性纖維化。因此，例如在一些態樣中，方法包含向需要治療哮喘之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之哮喘得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療COPD之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之COPD得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療肺纖維化之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之肺纖維化得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療肺類肉瘤病之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之肺類肉瘤病得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療過敏性鼻炎之個體投與320- 179變異抗體或其組合物，使得個體中之過敏性鼻炎得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療囊腫性纖維化之個體投與320-179變異抗體，使得個體中之囊腫性纖維化得以治療。
在治療腸胃疾病之態樣中，方法包含向需要治療腸胃疾病之個體投與320-179變異抗體或其組合物。該腸胃疾病可包含以下中之一或多者：發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、結腸炎、潰瘍性結腸炎、大腸急躁症(IBS)、嗜酸性食道炎或腸胃疾病或與囊腫性纖維化相關病況。因此，例如在一些態樣中，方法包含向需要治療IBD之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之IBD得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療克羅恩氏病之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之克羅恩氏病得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療結腸炎之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之結腸炎得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療潰瘍性結腸炎之個體投與320-179變異抗體，使得個體中之潰瘍性結腸炎得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療IBS之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之IBS投與得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療嗜酸性食道炎之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之嗜酸性食道炎得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療腸胃疾病或與囊腫性纖維化相關病況之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之腸胃疾病或與囊腫性纖維化相關病況得以治療。
在治療關節炎之態樣中，方法包含向需要治療關節炎之個體投與320-179變異抗體或其組合物。該關節炎可包含類風濕性關節炎。因此，例如在一些態樣中，方法包含向需要治療類風濕性關節炎之個體投與320- 179變異抗體或其組合物，使得個體中之類風濕性關節炎得以治療。
在治療皮膚病之態樣中，方法包含向需要治療皮膚病之個體投與320-179變異抗體或其組合物。該皮膚病可包含以下中之一或多者：異位性皮膚炎、濕疹或硬皮病。因此，例如在一些態樣中，方法包含向需要治療異位性皮膚炎之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之異位性皮膚炎得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療濕疹之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之濕疹得以治療。在一些態樣中，方法包含向需要治療硬皮病之個體投與320-179變異抗體或其組合物，使得個體中之硬皮病得以治療。
本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於製備供治療呼吸道疾病之藥劑。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於製備供治療腸胃疾病之藥劑。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於製備供治療關節炎之藥劑。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於製備供皮膚病之藥劑。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於製備供治療以下中任一者之藥劑：哮喘、COPD、肺纖維化、肺類肉瘤病、過敏性鼻炎、囊腫性纖維化、發炎性腸病、克羅恩氏病、結腸炎、潰瘍性結腸炎、大腸急躁症、嗜酸性食道炎、腸胃疾病或與囊腫性纖維化相關病況、關節炎、類風濕性關節炎、異位性皮膚炎、濕疹或硬皮病。
本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療呼吸道疾病。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療腸胃疾病。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療哮喘。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療皮膚病。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療COPD。本文中所描述或所例示之320-179變 異抗體可用於治療肺纖維化。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療肺類肉瘤病。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療過敏性鼻炎。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療囊腫性纖維化。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療發炎性腸病。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療克羅恩氏病。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療結腸炎。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療潰瘍性結腸炎。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療嗜酸性食道炎。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療腸胃疾病或與囊腫性纖維化相關病況。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療大腸急躁症。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療類風濕性關節炎。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療異位性皮膚炎。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療濕疹。本文中所描述或所例示之320-179變異抗體可用於治療硬皮病。
亦提供一種偵測自個體分離之組織樣本中TL1A的活體外方法，其包含使技術方案1至19中任一項之抗體與自個體分離之組織樣本接觸以形成抗體-TL1A複合物，且偵測該組織樣本中之複合物。
320-179變異抗體可用於偵測例如獲自個體之組織樣本中的TL1A陽性細胞。抗體可用於偵測TL1A陽性周邊血液單核細胞(PBMC)，例如獲自個體在PBMC。抗體可用於偵測血清中之TL1A。該等方法可活體內、活體外、試管內或原位進行。一般而言，方法包含使本文中所描述或所例示之320-179變異抗體中之任一者與自個體分離之組織或細胞(例如PBMC)接觸，以形成抗體-TL1A複合物，且偵測組織中或細胞上之複合 物。抗體可用可偵測標記進行標記。抗體可經用可偵測標記標記之二級抗體偵測到。組織可包含或可為諸如血液或血清之生物流體。組織可包含或可為呼吸道組織，諸如肺組織、痰、支氣管肺泡灌洗流體、胃腸組織或腸胃灌洗流體。組織可包含或可為皮膚或皮膚組織。組織可包含或可為體內任何關節之組織。方法可進一步包含自個體分離組織。該等方法可例如藉由量化組織中TL1A水準、藉由量化TL1A陽性細胞之水準或藉由量化細胞上TL1A水準或藉由量化血清中TL1A水準進行定量。
本發明亦提供包含本文中所描述且所例示之320-179變異抗體中之任一者。套組可用於供應抗體及其他藥劑用於尤其診斷、基礎研究或治療方法。在一些態樣中，套組包含本文中所描述或所例示之320-179變異抗體中之任何一或多者及在治療呼吸道疾病之方法中、治療腸胃疾病之方法中或治療關節炎之方法中使用一或多種抗體的說明書。
提供以下實例以更詳細地描述本發明。其意欲說明本發明而不對其進行限制。
實例1 材料及方法
此等實例中胺基酸位置根據Kabat編號系統進行編號。在整個此文件中，CDR根據CDR定義系統之AbM方法進行定義。
1.1. 變異束之產生。抗體320-179之重及輕鏈可變區胺基酸序列(分別為SEQ ID NO：1及SEQ ID NO：2)用作用於點變異體設計之模板。320-179在美國公開案第2014/0255302號(VH在彼公開案中為SEQ ID NO：186且VL為SEQ ID NO：199)作為320-179(亦描述為C320-179)已經先前描述。此抗體具有有利的生物物理學特性，為TL1A之強力抑制劑且具有較 低的預測免疫原性特徵。
320-179之抗體變異體藉由在輕鏈CDR1(CDR-L1)、輕鏈CDR3(CDR-L3)、重鏈CDR1(CDR-H1)及重鏈CDR2(CDR-H2)中各CDR胺基酸位置(如由AbM命名法所定義)中之一者處一次取代一組九個代表性胺基酸A、S、Q、D、H、K、L、W、Y中之一者製作。併入A、S、Q、D、H、K、L、W Y之抗體變異體亦在可變重鏈中之位置59及60處及可變輕鏈中之位置79處製作。所生成的所有經單一取代之抗體變異體之完整清單分別在圖1(可變重鏈)及圖2(可變輕鏈)中展示。
1.2. 載體表現抗體之建構。可變區變異體係由將胺基酸序列反向轉譯成DNA序列，隨後藉由合成寡核苷酸之總成重新合成產生。VH變異體次選殖至含有人類恆定區之哺乳動物表現載體中，產生全長抗體重鏈(人類IgG1重鏈CH1、鉸鏈、CH2及CH3域)(例如UniProt第P01857號)。類似地，VL變異體次選殖至含有人類λ輕鏈恆定區之哺乳動物表現載體中，產生全長抗體λ鏈(SwissProt第P0CG05.1號)。在一些情況下，全長重鏈及輕鏈分別反向轉譯成DNA序列，且隨後藉由合成寡核苷酸之總成重新合成。
1.3. 抗體變異體之表現。抗體藉由將抗體重鏈及輕鏈共轉染成EXPI293®細胞(Life Technologies,Carlsbad,CA)製備。在轉染之前那天，測定實驗所需的細胞數目。對於各20mL轉染，20mL EXPI293®表現培養基需要3.6×107個細胞。在轉染之前那天，細胞以0.9×106個活細胞/毫升之密度接種，且在37℃下在含8% CO2之空氣的潮濕氛圍中在以200rpm旋轉之定軌振盪器上培育隔夜。在轉染那天，使用自動化細胞計數器測定細胞數目及成活力。僅使用具有>98%活細胞的培養物。對於各20 mL轉染，脂質-DNA複合物藉由在OPTI-MEM®(Life Technologies,Carlsbad,CA)I減少之血清培養基(I Reduced Serum Medium)(目錄號31985-062)中將10μg重鏈DNA及10μg輕鏈DNA稀釋至1.0mL總體積製備。將54μL EXPIFECTAMINE® 293試劑(Life Technologies,Carlsbad,CA)在OPTI-MEM® I培養基中稀釋至1.0mL總體積。輕緩地混合兩個小瓶，且將其在室溫下培育5分鐘。培育之後，經稀釋DNA與經稀釋EXPIFECTAMINE® 293試劑及DNA-EXPIFECTAMINE® 293試劑混合物混合，且在室溫下再培育20分鐘以使得形成DNA-EXPIFECTAMINE® 293試劑複合物。培育之後，將2mL DNA-EXPIFECTAMINE® 293試劑複合物添加至各50mL生物反應器管(TPP Techno Plastic Products AG)。將2mL OPTI-MEM®(Life Technologies,Carlsbad,CA)I培養基而非DNA-EXPIFECTAMINE® 293試劑複合物添加至陰性對照管。細胞在37℃恆溫箱中含8% CO2之空氣的潮濕氛圍中在以200rpm旋轉之定軌振盪器上培育。轉染後約16-18小時，添加100μL EXPIFECTAMINE® 293轉染強化子1及1.0mL EXPIFECTAMINE® 293轉染強化子2至各生物反應器。在轉染後約72小時收集抗體。
1.4. 抗體變異體之純化。在20mL細胞培養物中之EXPI293®細胞中表現各抗體變異體。培養物在50mL法爾康管(falcon tube)中以3000×g快速離心20分鐘，且使用0.22μm過濾器(Corning)過濾清液層。清液層使用Gilson ASPEC GX274機器人純化。簡言之，用1.2mL MABSELECT SURE®蛋白質A(GE Healthcare Bio-Sciences AB Uppsala,Sweden)樹脂裝填之SPE筒柱(Agilent,12131014)用3管柱體積之1×PBS進行預平衡。18mL清液層流過管柱，接著4ml 1×PBS洗滌。各管柱用0.9ml 0.1M檸 檬酸pH 2.9進行預溶離。經純化抗體用2mL 0.1M檸檬酸pH 2.9進行溶離。抗體使用PD-10管柱(GE Healthcare)脫鹽至Sørensens PBS(59.5mM KH2PO4，7.3mM Na2HPO4.2H2O，145.4mM NaCl(pH約5.8))中。
1.5. 如藉由SPR所測定之抗體表現及抗原結合。使用CM5感測器晶片(GE Healthcare)，蛋白質A(Pierce)使用胺偶合套組(GE Healthcare)偶合至晶片表面。蛋白質A使用BIACORE® T200在流動細胞1及2(或替代地3及4)上偶合。來自含有抗體或替代地經純化抗體(如1.4中所描述)之EXPI-293®細胞的清液層流過流動細胞2之表面，同時緩衝劑(HBS-EP)流過流動細胞1。在捕獲階段期間注射之清液層或純化蛋白質(以及濃度)之量在輪次之間變化，且在表3至表11之標頭中指定。在注射清液層或經純化抗體結束時，量測反應單元中之改變。此值在表3至表11中作為捕獲水準報導。為了測定抗體是否結合TL1A，在注射TL1A(締合階段)結束之前，TL1A接著流過流動細胞1及2以及所量測之反應單元。此值在表3至表11中標記為TL1A結合水準(早期)。在解離階段結束之前量測反應單元。此值在表3至表11中標記為TL1A結合水準(晚期)，且為由於TL1A-抗體複合物解離而自晶片表面喪失之抗體之量的量測值。雙重參考感測器圖譜(流動細胞1及緩衝劑空白減去流動細胞2)。當存在大量抗體變異體需要篩檢時，此等抗體變異體經歷不同輪次(表3至表11)進行篩檢。在各情況下(除了輪次3以外)，親本抗體320-179出於比較目的包括於輪次中。以下為各輪次中之條件概述：
亦使用SPR測定抗TL1A結合至不同種類TL1A。在蛋白質A之表面上捕獲抗TL1A抗體。來自人類、大鼠、小鼠、兔子、天竺鼠、豬、狗、貓或食蟹獼猴之TL1A流經所量測之表面及反應單元。
1.6. TL1A之製備。人類TL1A在哺乳動物EXPI293®表現系統中使用對具有位於N末端HIS及FLAG標籤之人類TL1A之細胞外域(ECD)編碼的DNA表現構築體製備。其他種類形式之TL1A基於公開列舉之資料庫上之序列表生成。以下概述此等TL1A：
含有分泌TL1A蛋白質之培養物清液層藉由以2000×g離心10分鐘移除細胞進行收集。TL1A蛋白質使用HISTRAP® HP管柱(GE Healthcare)自清液層純化。經溶離蛋白質使用HILOAD® 16/60 Superdex 200製備級管柱(GE Healthcare)經緩衝劑交換至PBS中，且約70kDa溶離份藉由凝膠過濾在HILOAD® 26/60 SUPERDEX® 200製備級管柱(GE Healthcare)上分離。
1.7. TF-1細胞株效能分析。為了測定抗TL1A抗體功能上中和TL1A之生物活性，測試抗體中和TF-1細胞株中TL1A誘導細胞凋亡的能力。 TF-1人類紅白血病細胞株(ATCC：CRL-2003)係維持在標準條件下之培養物中。TF-1細胞(7.5×104個/孔)係在含有人類TL1A 100ng/ml及環己醯亞胺10μg/mL之黑色側面96孔板(Greiner)中培育，以誘導細胞凋亡。添加濃度為10μg/mL(66.7nM)或更低之測試抗體至板中，且培育4至5小時。接著使用均質卡斯蛋白酶套組(Homogenous Capases Kit)(Roche)根據製造商的說明書分析細胞凋亡之誘導。
數據係以經過人類TL1A加上環己醯亞胺在沒有抗TL1A抗體存在之情況下所達成最高細胞凋亡程度校正之百分比表示。
1.8. 前導抗體之受體選擇性。TL1A結合至其同源信號傳遞受體DR3且結合至誘餌受體DcR3，其亦充當用於TNF家族成員Fas-L及LIGHT之誘餌受體。在競爭ELISA中，分析抗體抑制TL1A與其受體結合的能力。DR3/Fc嵌合體(R&D Systems)或DcR3/Fc嵌合體(R&D Systems)以2μg/ml之濃度塗覆至96孔板(Maxisorp,Nunc)上。取經過連續稀釋之測試抗體與單點生物素標記之人類TL1A 1μg/ml一起預培育30分鐘，接著添加至經DR3/Fc或DcR3/Fc塗覆之孔中。使用抗生蛋白鏈菌素-辣根過氧化酶1：2000(BD Pharmingen)偵測到已結合之TL1A。數據係以經過TL1A在沒有抗TL1A抗體存在之情況下與受體之最大結合性校正之百分比表示。
1.9. 動力學排除分析法。此分析法量測其中一個結合對象在不擾亂平衡的情況下之游離濃度。溶液可使用含未經修飾蛋白質之溶液離線製備，且可在混合後讀取親和力量測值若干天，以確保已達到平衡。在動力學排除分析法中，其中一種相互作用物(稱為恆定結合對象(constant binding partner)或CBP)保持在恆定濃度下，而另一相互作用物(稱為滴定物)則經過連續稀釋。可採用動力學排除分析法測定解離常數(KD)及抗體- 抗原相互作用之親和力。在典型的動力學排除分析法中，滴定物固定於珠粒(例如瓊脂糖凝膠(Sepharose)或PMMA珠粒)，且用於捕獲溶液中之游離CBP。接著使用第二標記探針定量CBP之捕獲量。動力學排除分析法概述於Darling,RK等人(2004)ASSAY and Drug Development Technol.2(6)：647-57中。
合併組分，且使其達到平衡。動力學排除分析接著用於量測CBP之游離部分。具有多個CBP濃度之平衡曲線使用在KinExA® Pro軟體(4.1.11版，Sapidyne)內之n曲線分析工具進行分析以獲得穩固的KD測定。人類TL1A之320-587相互作用使用以下兩個定向檢測：(1)CBP為320-587，滴定液為TL1A，且(2)CBP為TL1A，滴定液為320-587。
實例2 實驗結果
2.1. 選擇具有等效物或相對於C320-179經改良解離速率之TL1A結合變異體。建構抗體320-179之變異體，且如上述表現。各變異體之EXPI293®(Life Technologies Corp.)清液層藉由BIACORE®(GE Healthcare)及與親本抗體320-179之資料相比較而獲得之資料分析。在一些實驗中，抗體使用蛋白質A層析法(參看1.4)進行純化，且經純化抗體用於BIACORE®(GE Healthcare)實驗。表3至表11展示各變異體之表現水準以及其在早期及晚期時間點下對TL1A之結合。在稍後的輪次(表10及表11)中，測試含有超過一個胺基酸取代之抗體變異體。
具有與320-179類似或比其更好之捕獲水準以及在類似範圍中之TL1A結合水準(早期)及TL1A結合水準(晚期)值的抗體放入效能分析中。此等變異體藉由在表3至表11中著色指示。如藉由SPR所量測關於數個抗體之解離速率的比較展示於圖5中。數個抗體以比親本抗體320-179更慢的速率解離。
2.2 在基於細胞之分析中具有改良效能的抗TL1A抗體。為了分析經改良解離速率是否與增強效能相關，經純化抗體、變異體在TF-1細胞中之TL1A誘導卡斯蛋白酶活性分析中操作。強力抗體藉由結合至TL1A且抑制DR3受體之TL1A活化起作用。此受體觸發細胞凋亡路徑，其中卡斯蛋白酶經活化且可使用市售試劑偵測到。在各實驗中，比較抗體變異體與320-179在效能上的倍數改良。結果展示於表12中。
結果與此表中所展示資料相一致。圖7展示具有相較於320-179改良之效能的數個抗體之n=4複製。
如表12中及圖6中所展現，所測試之數個單一取代抗體具有相較於320-179之優良效能。當相較於320-179時，所測試之所有單一取代抗體變異體中之兩者在效能上具有大於10倍改良。此等變異體為320-331(其在可變輕鏈中含有Y91W取代)及320-547(其在可變重鏈中含有N56Y取代)(圖6)。此結果為出人意料的，因為通常抗體VH之CDR3主要地涉及抗體結合，同時相比之下，所識別之N56Y取代對處於抗體VH之CDR2中的結合具有相當大的影響。當所製作變異體併入來自VL之Y91W或分別地具有改良效能之其他取代之VH中的N56Y時，獲得極強力抗體。當Y91W VL取代與N56Y VH取代合併至一個抗體320-587中時，相較於320-179之效能的倍數改良為40。圖7展示四個不同的重複實驗，其展現四個抗體320-587、320-591、320-592及320-601相較於320-179之效能增加。具有相較於320-179改良之效能的此等抗體之序列展示於圖3(可變重鏈)中及圖4(可變輕鏈)中。
進行320-587相較於其他上述抗TL1A抗體之效能比較。此等上述抗體包括描述於美國專利第8,642,741號中之抗體1681N(VH為SEQ ID NO：18；VL為SEQ ID NO.26)、來自美國公開案第2014/0308271號之抗體VH5/VL1(VH為SEQ ID NO：24；VL為SEQ ID NO：17)、如美國專利第8,263,743號中所描述之人類化1B4(VH為SEQ ID NO：74；VL為SEQ ID NO：75)及如美國公開案第2014/0255302A1號中所描述之320-168(亦稱作C320-168)(VH為SEQ ID NO：181；VL為SEQ ID NO：194)。圖8展示相較於此等上述抗體，320.587在基於細胞之分析中具有優良效能，使其 成為所描述之最強力抗TL1A抗體。
2.3. DR3及DcR3受體競爭分析。篩檢顯示相較於320-179增加之效能的抗體以偵測抑制TL1A結合至其同源信號傳導受體DR3或誘餌受體DcR3之能力。當相較於同型對照時，所測試之所有抗TL1A抗體展示抑制TL1A結合至DR3(圖9)。此確定抗體藉由阻斷TL1A-DR3相互作用而抑制TL1A活性。
在描述於美國公開案第2014/0255302A1號中之先前實驗(實例4)中，抗體320-179(320-179)在受體競爭分析中進行測試且展示選擇性抑制TL1A結合至DR3而非結合至DcR3(圖10)。在圖10中本文所呈現之實驗中，其再次展示320-179不抑制TL1A-DcR3相互作用。相比於所測試之經改良抗TL1A抗體，此保持不變。在TF-1細胞分析(如章節2.2中所描述)中具有改良效能之抗體，包括抗體320-587一致地抑制TL1A-DcR3相互作用。
概言之，親本抗體320-179能夠抑制TL1A-DR3相互作用但不抑制TL1A-DcR3相互作用。具有經改良效能之數個抗體，諸如320-267(VH為SEQ ID NO：1；VL為SEQ ID NO：11)、320-277(VH為SEQ ID NO：1，VL為SEQ ID NO 12)、320-278(VH為SEQ ID NO 1；VL為SEQ ID NO 13)及320-591(VH為SEQ ID NO：3，VL為SEQ ID NO 9)抑制TL1a-DR3相互作用但不抑制TL1A-DcR3相互作用。具有經改良效能之數個抗體，諸如320-331、320-547、320-583、320-584、320-585、320-586、320-587及此等抗體之變異體能夠抑制TL1A-DR3及TL1A-DcR3相互作用。
2.4. 測試320-587之種類交叉反應性以檢驗其結合至來自不同種類以重組方式製備之TL1A的能力。抗體結合至來自所測試之所有種類的 TL1A(圖11)。320-587結合至人類、大鼠、天竺鼠、狗、貓、食蟹獼猴TL1A具有緩慢的解離速率，其指示高親和力相互作用。抗體結合小鼠及兔子TL1A，且具有快速的解離速率。
2.5. 用於測試患有疾病之以下動物模型中之抗TL1A抗體的臨床前功效模型：哮喘：過敏原誘導哮喘-嚙齒動物(小鼠、大鼠或天竺鼠)藉由皮內注射卵白蛋白(OVA)(尤其衍生自雞蛋之OVA)加上礬致敏，且隨後藉由霧化OVA之噴霧攻擊至少2週後，導致哮喘樣症狀，包括氣管反應過度、大量湧入嗜伊紅血球及增加之細胞因子生成(例如Hylkema等人，2002,Clin.Exp.Immunol.129：390-96)。此類模型可藉由重複攻擊修改以呈現具有增加之氣管重塑及纖維化誘導的更加慢性疾病特徵(例如Bos等人，2007,Eur.Respir.J.30：653-661)。亦可使用替代性過敏原，諸如房屋塵蟎(例如Lambert等人，1998,Am.J.Respir.Crit.Care Med.157：1991-9)。替代地，非人類靈長類(例如食蟹獼猴)可用環境抗原(諸如豬蛔蟲)進行致敏且攻擊，導致氣管反應過度、大量湧入嗜伊紅血球及增加之細胞因子生成(例如Wegner等人，1991,J.Allergy Clin.Immunol.87：835-41)。
COPD：煙霧吸入誘導氣管發炎-將嚙齒動物(小鼠、大鼠或天竺鼠)曝露於香菸煙霧一週3至7次持續至少4週，導致類似於COPD之肺部疾病，其特徵在於嗜中性白細胞之肺積累、增加之發炎性細胞激素產生、肺纖維化及肺高血壓(例如Davis等人(2012)PLoS One 7：e33304)。更加嚴重形式之疾病可藉由在煙霧曝露期間將重複細菌或病毒感染納入肺中誘導(例如Li等人(2012)Biol.Pharm.Bull.35：1752-60)。患有煙霧誘導COPD之嚙齒動物將用抗TL1A抗體治療，且篩檢治療功效。
肺纖維化：博萊黴素誘導肺纖維化-嚙齒動物(小鼠、大鼠或天竺鼠)將藉由氣管內/鼻內滴入或靜脈內注射用博萊黴素處理每週一次或兩次持續至少3週。此處理誘導顯著且穩定的肺纖維化(例如Pinart等人(2009)Resp.Physiol.Neurobiol.166：41-46)。患有博萊黴素誘導肺纖維化之嚙齒動物將用抗TL1A抗體治療，且篩檢治療功效。
囊腫性纖維化：CFTR基因剔除雪貂模型-CFTR(囊腫性纖維化中之致病基因)之用於基因剔除之雪貂同種接合子或已知的疾病相關突變自發地發展囊腫性纖維化樣疾病，其特徵在於氣管之黏液堵塞、肺不張、間質肺炎及具有進行性肺細菌移生之重複肺感染(例如Sun等人(2014)Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.50：502-12)。CFTR-/-雪貂將用抗TL1a抗體治療且篩檢治療功效。
大腸急躁症：壓力誘導內臟過敏性-壓力將藉由新生兒-母體分離(例如Coutinho等人(2002)Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.282：G307-16)或成年人約束在大鼠中誘導(例如Shen等人(2010)J.Neurogastroenterol.Motil.16：281-90)。此預期產生類似於IBS患者中所觀測之變化腸運動性及內臟過敏性。處於壓力下之大鼠將用抗TL1A抗體治療且篩檢治療功效。
類風濕性關節炎：膠原蛋白誘導關節炎-嚙齒動物(小鼠、大鼠或天竺鼠)將經免疫接種且用含膠原蛋白之佐劑增強免疫。動物出現兩側腳膨脹及紅斑、發炎滲透關節區域中及關節損傷(例如Bendele等人(1999)Toxicol.Pathol.27：134-42)。患有膠原蛋白誘導關節炎之嚙齒動物將用抗TL1A抗體治療且篩檢治療功效。
嗜酸性食道炎：鼻內薰煙色麴菌誘導嗜酸性食道炎。曝露於重複鼻 內滴入薰煙色麴菌之小鼠出現顯著的食道嗜伊紅血球增多、上皮發育不良及增生以及游離嗜伊紅血球顆粒(例如Mishra等人(2001)J.Clin.Invest.107：83-90)。類似地，致敏天竺鼠中歷經兩週時段暴露於卵白蛋白之重複噴霧劑導致食道嗜伊紅血球增多，其中嗜伊紅血球及肥大細胞滲入上皮層中(例如Liu等人(2015)Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.308：G482-488)。患有嗜酸性食道炎之小鼠或天竺鼠將用抗TL1A抗體治療且篩檢治療功效。
2.6. 用於偵測含有本發明之TL1A抗體之樣品的TL1A抗體可用於偵測人類樣品中之TL1A。320-587用於偵測自人類PBMC分泌之人類TL1A，該等人類PBMC用免疫複合物(圖13)在ELISA形式中刺激。320-587亦用於偵測人類PBMC群體，該等人類PBMC在流式細胞測量術實驗(圖14)中表現其表面上之膜TL1A。
2.7. 藉由動力學排除分析量測抗TL1A抗體結合至人類TL1A的親和力。達到與作為CBP之320-587平衡的時間：第一，量測320-587/TL1A相互作用之Kon速率。簡言之，溶液藉由混合320-587與TL1A製備，且在各個時間點下歷經3小時移除等分試樣。游離320-587藉由使溶液穿過經用20μg/mL TL1A塗佈之瓊脂糖凝膠珠粒裝填的管柱捕獲。所捕獲之320-587用Alexa Fluor® 647結合抗人類抗體(0.5μg/mL)偵測。此分析重複兩次，獲得8.35×105Ms-1及7.45×105Ms-1之Kon速率，平均Kon速率為7.90×105Ms-1。Kon速率接著用於使用Sapidyne網站(www.Sapidyne.com)上提供之理論結合曲線工具評估在各種濃度之320-587下達到平衡所要的時間量。
用作為CBP之320-587的KD測定。CBP 320-587於分析緩衝液(補充 有1mg/ml BSA之DPBS)中稀釋至15、50及150pM之最終濃度。滴定液人類TL1A在分析緩衝液中稀釋以建立0.1、0.3、1、3、10、30、100、300、1000及3000pM之濃度系列。使用以上所測定達到平衡之時間，使含有50或150pM 320-587之曲線在25℃恆溫箱中平衡2天。使含有15pM320-587之曲線在25℃恆溫箱中平衡3天。平衡時段之後，各反應中320-587之游離部分如中以上所描述定量。KD值使用以15、50及150pM 320-587生成之平衡曲線的n-曲線分析測定。
達到與作為CBP之TL1A平衡的時間：在此定向中達到平衡之時間使用如以上2.8中所描述測定的320-587/TL1A相互作用之Kon評估。在此形式中，TL1A之游離部分藉由使溶液穿過經用30μg/mL 320-587塗佈之PMMA珠粒裝填的管柱捕獲。所捕獲之TL1A用抗6x-his DyLight 650抗體(0.75μg/mL)偵測。此分析重複兩次，獲得6.11×105Ms-1及5.74×105Ms-1之Kon速率，平均Kon速率為5.93×105Ms-1。
用作為CBP之TL1A的KD測定：CBP人類TL1A在分析緩衝液中稀釋至30、100及300pM之最終濃度。滴定液320-587在分析緩衝液中稀釋，以建立0.05、0.15、0.5、1.5、5、15、50、150、500、1500及5000pM之濃度系列。
使用以上所測定達到平衡之時間，使所有曲線在25℃恆溫箱中平衡3天。平衡時段之後，各反應中TL1A之游離部分如上文所描述定量。KD值使用以30、100及300pM TL1A生成之平衡曲線的n-曲線分析測定。
在兩種KinExA方法之間觀測到良好一致以及相對較低%誤差。使用320-587作為CBP測定TL1A與320-587相互作用的KD值為40.97±8.33pM(表13)，同時使用TL1A作為CBP獲得之KD為41.52±13.5pM(表14)。
3.0. 用於測試抗TL1a抗體之臨床前功效模型。
3.0.1. 哮喘。
大鼠中急性卵白蛋白誘導哮喘。棕色挪威大鼠在第0天用OVA藉由腹膜內注射致敏，接著在第35天至第42天用OVA噴霧劑每天攻擊。在第14天、第21天、第28天及第35天大鼠用抗體320-587或媒劑藉由靜脈內注射治療。在第43天分析支氣管肺泡灌洗術流體(BALF)的總體及差異性細胞。發現治療顯著減少BALF嗜伊紅血球(圖15)。
大鼠中慢性卵白蛋白誘導哮喘。在第0天及第7天大鼠用OVA加上礬藉由腹膜內注射致敏，且隨後用OVA噴霧劑每週兩次攻擊持續3週，第14天開始持續到第31天，及第37天至第42天為5個連續日。在第24天、第29 天、第34天及第39天動物用抗體320-587或媒劑藉由靜脈內注射治療。在第43天分析BALF之總體及差異性細胞以及細胞因子組。肺部分用蘇木精及曙紅(H&E)以及過碘酸希夫(periodic-acid Schiff；PAS)反應染色，且分析一系列病理學。相較於媒劑，用320-587治療顯著減少BALF嗜伊紅血球及巨噬細胞(圖17A及圖17B)、BALF IL-4及IL-13(圖17C)、杯狀細胞增生(圖17D)及支氣管上皮層之厚度(圖17E)。
天竺鼠中急性卵白蛋白誘導哮喘。使雄性Dunkin Hartley天竺鼠致敏卵白蛋白，且其後經歷手術以安裝氣球導管，以量測肺功能以及早期及晚期哮喘反應。在第16天、第20天、第24天及第28天，動物用抗體320-587或媒劑腹膜內注射進行治療。在最後治療之後，用卵白蛋白(0.05-0.1%)噴霧劑攻擊30分鐘。在攻擊之前24h、在攻擊之後6h(在早期哮喘反應之後立刻)及在攻擊之後24h(在晚期哮喘反應之後立刻)量測對組胺之呼吸道反應性(AHR)。早期及晚期哮喘反應之性質及尺寸亦藉由跨整個24h時段在線登記肺功能進行記錄。動物在攻擊及進行支氣管肺泡灌洗之後25h處死。分析BALF之總體及差異性細胞。與媒劑相比，用320-587治療顯著減少BALF中之嗜伊紅血球及巨噬細胞(圖16A及圖16B)以及改善早期哮喘反應之後的AHR(圖16C)及早期哮喘反應之全部量值(圖16D)。
天竺鼠中之慢性卵白蛋白誘導哮喘。使雄性Dunkin Hartley天竺鼠致敏卵白蛋白，且4週後，每週用卵白蛋白攻擊持續12週。卵白蛋白攻擊(0.05-0.5%)藉由吸入噴霧化溶液直至觀測到呼吸道堵塞為止來進行。卵白蛋白攻擊第8週開始每隔5天動物用抗體320-587或媒劑藉由腹膜內注射治療。在初始攻擊之前、在最終攻擊之前24小時及在最終攻擊之後6小時藉助於對組胺之氣管反應性量測氣管功能。隨著需要漸進增加OVA劑量以 誘導氣管堵塞(圖18)，儘管未觀測到對由組胺攻擊誘導AHR的效應，但抗體320-587顯著減少對OVA之過敏性反應。
咸信天竺鼠之急性及慢性哮喘模型中觀測到的抗體治療性效應差異取決於模型自身。咸信在慢性模型中，AHR程度隨時間推移減少，且因此變得對治療較不起反應。在此項技術中，急性模型一般用於觀測對氣管反應性之化合物效應，且慢性模型一般用於觀測對氣管重塑之化合物效應。持續重塑分析。然而，出人意料的為觀測到抗體影響對過敏原之反應(儘管在此階段抗體大體上不影響絕對AHR(對組胺反應))，其顯著減少對抗原之直接過敏性反應。
3.0.2. 發炎性腸病
大鼠中之TNBS誘導結腸炎：用單次劑量之於乙醇中之三硝基苯磺酸藉由直腸內滴入給藥來治療大鼠。對照動物僅接受相等體積之乙醇。歷經7天時間間隔，動物罹患局部結腸炎，其特徵在於結腸潰瘍，伴隨發炎性滲透及不同程度纖維化(例如Wirtz等人(2007)Nat.Protoc.2：541-546)。320-587投與顯著減少多個疾病指標，包括結腸厚度(圖12A)、黏著之數目及嚴重性(圖12B)以及狹窄之數目及嚴重性(圖12C)，由此導致與用媒劑或同型匹配不相關抗體治療之動物相比顯著較輕度的疾病(圖12D)。在經320.587治療動物中亦觀測到結腸纖維化降低(圖19)。
在大鼠中DNBS誘導結腸炎7天及14天之後疾病之比較。結腸炎如上文所描述使用二硝基苯磺酸(DNBS)而非TNBS進行誘導，用於DNBS實驗之大鼠為Wistar大鼠。在第1天及第8天動物用抗體320-587或媒劑藉由靜脈內注射治療。DNBS後7天及14天，分析多組之結腸炎，且在兩個時間點之間比較疾病嚴重程度。用抗體320-587治療在第7天具有有限效應，但 到第14天，用抗體320-587治療之動物在結腸重量及長度(圖20A)、纖維化(圖20B)、發炎性滲透(圖20C)及結腸損傷(圖20D)中展示顯著改良。潰瘍區域結腸之代表性部分(圖20E)展示在14天時損傷修復及纖維化減小程度。在7天及14天，經媒劑治療之動物展示廣泛的發炎性滲透及纖維化，伴隨腸架構之顯著損失。相比之下，經320-587治療之動物在7天後展示顯著發炎性滲透、纖維化及腸架構損失，但到14天後此等效應得到大大地逆轉。
TNBS及DNBS模型中觀測到之抗體治療性效應所觀測的差異咸信由使用不同品系之大鼠(Sprague-Dawley用於TNBS相對於Wistar用於DNBS)引起。各大鼠品系在其對免疫攻擊之反應中有差異，使得咸信此等模型中其反應動力學為不同的。同樣，TNBS及DNBS結構上不同，且咸信誘導疾病病況產生差異。
大鼠中慢性(21天)DSS誘導結腸炎。在飲用水中給與大鼠濃度為5% w/v之硫酸葡聚糖鈉鹽(DSS)持續7天，接著在飲用水中給與2% w/v再持續14天。動物罹患腹瀉、彌漫性結腸發炎、杯狀細胞增生及腺管上皮損傷及潰瘍(例如Randhawa等人(2014)Korean J.Physiol.Pharmacol.18：279-88)。在第5天、第12天及第19天大鼠用抗體320-587或媒劑藉由靜脈內注射治療。稱量動物，且每天分析其臨床疾病(腹瀉及潛血)，且在第21天分析結腸重量及長度。抗體320-587治療顯著逆轉DSS誘導之體重增加減慢(圖21A)，改善疾病之臨床症狀(圖21B)且改良結腸重量及長度(圖21C)。
藉由重組人類TL1A誘導腹膜內細胞因子。腹膜內注射重組小鼠TL1A可誘導發炎性細胞因子，諸如IL-5產生。在此研究中，小鼠接受單次劑量之抗體320-587或媒劑，接著一小時後，用重組人類TL1A (rhTL1A)40微克/小鼠進行治療。在rhTL1A劑量之後六小時，進行腹膜灌洗，且藉由多重分析分析腹膜流體之細胞因子及趨化因子。用抗體320-587治療顯著減少細胞因子G-CSF、IL-1b、IL-5、IL-6、IL-17及趨化因子IP-10、KC、MCP-1、MIP-1a、MIP-1b、MIP-2之腹膜濃度(圖22)。
本發明不限於上文所描述及所例示之實施例，且能夠在隨附申請專利範圍之範疇內進行變化及修改。
<110> 美商西佛隆公司
<120> 特異性結合TL1A之抗體
<130> 185704-3019
<160> 71
<170> PatentIn version 3.5
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Claims (41)

  1. 一種重組抗體，其包含以下各者：包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的重鏈可變區CDR1、包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的重鏈可變區CDR2、包含SEQ ID NO：17之胺基酸序列的重鏈可變區CDR3、包含SEQ ID NO：29之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR1、包含SEQ ID NO：19之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR2及包含SEQ ID NO：30之胺基酸序列的輕鏈可變區CDR3，其限制條件為當該重鏈可變區包含SEQ ID NO：1之胺基酸序列時，該輕鏈可變區不包含SEQ ID NO：2之胺基酸序列，其中該抗體特異性結合至TNF樣配位體1A(TL1A)且其中該抗體能夠抑制TL1A與死亡受體3(DR3)相互作用。
  2. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  3. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：20之胺基酸序列。
  4. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列，該輕鏈可變區CDR1包含SEQ ID NO：23之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  5. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列，該輕鏈可變區CDR1包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  6. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列，該輕鏈可變區CDR1包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  7. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：16之胺基酸序列，該輕鏈可變區CDR1包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  8. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  9. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列，該輕鏈可變區CDR1包含SEQ ID NO：24之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  10. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列，該輕鏈可變區CDR1包含SEQ ID NO：25之胺基酸序 列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  11. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列，該輕鏈可變區CDR1包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：22之胺基酸序列。
  12. 如請求項1之重組抗體，其中該重鏈可變區CDR2包含SEQ ID NO：21之胺基酸序列，且該輕鏈可變區CDR3包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列。
  13. 如請求項1之重組抗體，其中該抗體包含重鏈可變區，其包含SEQ ID NO：3之胺基酸序列；及輕鏈可變區，其包含SEQ ID NO：4之胺基酸序列。
  14. 如請求項1至13中任一項之重組抗體，其中該抗體為單株抗體。
  15. 如請求項1至13中任一項之重組抗體，其中該抗體包含人類IgG1重鏈恆定區。
  16. 如請求項15之重組抗體，其中該人類IgG1重鏈恆定區包含SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：65或SEQ ID NO：66。
  17. 如請求項1至13中任一項之重組抗體，其中該抗體包含人類重鏈IgG4恆定區。
  18. 如請求項17之重組抗體，其中該人類重鏈IgG4恆定區包含SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47或SEQ ID NO：69。
  19. 如請求項1至13中任一項之重組抗體，其中該抗體包含人類重鏈IgG2恆定區。
  20. 如請求項19之重組抗體，其中該人類重鏈IgG2恆定區包含SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70或SEQ ID NO：71。
  21. 如請求項1至13中任一項之重組抗體，其中該抗體包含人類輕鏈λ恆定區。
  22. 如請求項1至13中任一項之重組抗體，其中如藉由動力學排除分析所量測，TL1A之KD為約30pM至約60pM。
  23. 如請求項1至13中任一項之重組抗體，其中如藉由動力學排除分析所量測，TL1A之KD為約35pM至約42pM。
  24. 一種組合物，其包含如請求項1至23中任一項之重組抗體及載劑。
  25. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療慢性阻塞性肺病之藥劑。
  26. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療肺類肉瘤病之藥劑。
  27. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療過敏性鼻炎之藥劑。
  28. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療肺纖維化之藥劑。
  29. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療囊腫性纖維化之藥劑。
  30. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療哮喘之藥劑。
  31. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療發炎性腸病之藥劑。
  32. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療克羅恩氏病(Crohn's disease)之藥劑。
  33. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療結腸炎之藥劑。
  34. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療潰瘍性結腸炎之藥劑。
  35. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療嗜酸性食道炎之藥劑。
  36. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療與囊腫性纖維化相關之腸胃疾病之藥劑。
  37. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療大腸急躁症之藥劑。
  38. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療類風濕性關節炎之藥劑。
  39. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療異位性皮膚炎之藥劑。
  40. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療 濕疹之藥劑。
  41. 一種如請求項1至23中任一項之重組抗體之用途，其用於製造供治療硬皮病之藥劑。
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Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110229471A1 (en) 2008-11-26 2011-09-22 Cedars-Sinai Medical Center Methods of determining responsiveness to anti-tnf alpha therapy in inflammatory bowel disease
CN104114577A (zh) 2011-09-30 2014-10-22 特瓦制药澳大利亚私人有限公司 针对TL1a的抗体及其用途
CN112870368A (zh) 2013-03-27 2021-06-01 西达-赛奈医疗中心 通过抑制tl1a的功能和相关信号传导途径来减轻并逆转纤维化和炎症
EP3022295A4 (en) 2013-07-19 2017-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Signature of tl1a (tnfsf15) signaling pathway
TWI703158B (zh) 2015-09-18 2020-09-01 美商希佛隆公司 特異性結合tl1a之抗體
IL259752B (en) * 2015-12-04 2022-07-01 Univ Iowa Res Found Device, systems and methods for prediction, screening and monitoring of encephalopathy / delirium
EP3430172A4 (en) 2016-03-17 2019-08-21 Cedars-Sinai Medical Center METHOD FOR DIAGNOSIS OF INFLAMMATORY ENDURANCE THROUGH RNASET2
CN110121509B (zh) 2016-10-26 2024-05-07 西达-赛奈医疗中心 中和抗tl1a单克隆抗体
AU2018259856A1 (en) * 2017-04-28 2019-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Compound having substance that has affinity for soluble protein, cleavable moiety, and reactive group, or salt thereof
US20210070871A1 (en) 2018-04-25 2021-03-11 Prometheus Biosciences, Inc. Optimized anti-tl1a antibodies
KR20220103721A (ko) 2019-10-24 2022-07-22 프로메테우스 바이오사이언시즈, 인크. Tnf 유사 리간드 1a(tl1a)에 대한 인간화 항체 및 그의 용도
WO2024026386A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Cephalon Llc Anti-tl1a antibody formulations
WO2024026395A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Cephalon Llc Anti-tl1a antibodies for the treatment of ulcerative colitis and crohn's disease

Family Cites Families (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7820798B2 (en) 1994-11-07 2010-10-26 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
US7597886B2 (en) 1994-11-07 2009-10-06 Human Genome Sciences, Inc. Tumor necrosis factor-gamma
ES2694002T3 (es) 1999-01-15 2018-12-17 Genentech, Inc. Polipéptido que comprende una región Fc de IgG1 humana variante
US6548062B2 (en) * 2000-02-29 2003-04-15 Cephalon, Inc. Method of treating cancer with anti-neurotrophin agents
PT1355919E (pt) 2000-12-12 2011-03-02 Medimmune Llc Moléculas com semivida longa, composições que as contêm e suas utilizações
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
EP1667730B1 (en) 2003-08-20 2013-06-26 University of Miami Compositions and methods for treating inflammatory lung disease
AU2005227322A1 (en) 2004-03-23 2005-10-06 Biogen Idec Ma Inc. Receptor coupling agents and therapeutic uses thereof
GB0521621D0 (en) * 2005-10-24 2005-11-30 Domantis Ltd Tumor necrosis factor receptor 1 antagonists for treating respiratory diseases
US20090317388A1 (en) 2005-05-25 2009-12-24 Linda Burkly Tl1a in treatment of disease
ES2611307T3 (es) 2005-08-30 2017-05-08 University Of Miami Inmunomodulación de agonistas, antagonistas e inmunotoxinas del receptor del factor de necrosis tumoral 25 (TNFR25)
US20090269345A1 (en) 2005-12-23 2009-10-29 Rong Fan CLN248 Antibody Compositions and Methods of Use
US20110217310A1 (en) 2007-01-10 2011-09-08 Siegel Richard M Blockade of tl1a-dr3 interactions to ameliorate t cell mediated disease pathology
US20100190162A1 (en) * 2007-02-26 2010-07-29 Cedars-Sinai Medical Center Methods of using single nucleotide polymorphisms in the tl1a gene to predict or diagnose inflammatory bowel disease
JP5745854B2 (ja) 2007-11-13 2015-07-08 テバ バイオファーマシューティカルズ ユーエスエー インコーポレーティッド Ｔｌ１ａに対するヒト化抗体
US20120073585A1 (en) 2009-04-08 2012-03-29 Cedars-Sinai Medical Center Methods of predicting complication and surgery in crohn's disease
EP2519260A2 (en) 2009-12-31 2012-11-07 Deutsches Krebsforschungszentrum Novel modulators of trail signalling
JO3375B1 (ar) 2010-11-08 2019-03-13 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للجين a1 الشبيه بعامل النخر الورمي (tl1a)
KR20140104344A (ko) 2011-05-20 2014-08-28 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 시크리터리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비시스 Ｔ 세포 매개성 질병의 병증을 개선하기 위한 ｔｌ１ａ-ｄｒ３의 상호작용의 차단 및 그것의 항체
CN104114577A (zh) * 2011-09-30 2014-10-22 特瓦制药澳大利亚私人有限公司 针对TL1a的抗体及其用途
TR201815254T4 (tr) 2013-01-02 2018-11-21 Glenmark Pharmaceuticals Sa Tl1a'ya bağlanan anti̇korlar ve bunlarin kullanimlari
CN112870368A (zh) 2013-03-27 2021-06-01 西达-赛奈医疗中心 通过抑制tl1a的功能和相关信号传导途径来减轻并逆转纤维化和炎症
EP2981286A4 (en) * 2013-04-05 2016-08-24 Hoffmann La Roche ANTI-IL-4 ANTIBODIES AND BISPECIFIC ANTIBODIES AND USES THEREOF
EP2996717A4 (en) 2013-05-17 2016-11-23 Cedars Sinai Medical Center DISTINCT EFFECTS OF IFN GAMMA AND IL-17 ON TL1A-MODIFIED INFLAMMATION AND FIBROSIS
EP3022295A4 (en) 2013-07-19 2017-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Signature of tl1a (tnfsf15) signaling pathway
WO2015035261A1 (en) 2013-09-06 2015-03-12 Cedars-Sinai Medical Center Systems, devices and methods for anti-tl1a therapy
SG10201810298VA (en) 2013-11-13 2018-12-28 Pfizer Tumor necrosis factor-like ligand 1a specific antibodies and compositions and uses thereof
BR112017022117A2 (pt) 2015-04-15 2018-07-10 Biosearch Technologies, Inc. “sondas duplas supressoras”
TWI703158B (zh) 2015-09-18 2020-09-01 美商希佛隆公司 特異性結合tl1a之抗體
CR20180365A (es) 2015-12-16 2018-09-28 Amgen Inc PROTEÍNAS DE UNIÓN AL ANTÍGENO BISPECÍFICO DE ANTI-TL1A/ANTI-TNF-a Y SUS USOS

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US11220549B2 (en) 2022-01-11
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