CN108130295B - 一种生物有机肥发酵菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。本发明的生物有机肥发酵菌剂,添加了能产蛋酶的菌群种类,大量提升对羽毛的发酵、分解速度。
Description
技术领域
本发明属于有机肥生产技术领域,具体为一种生物有机肥发酵菌剂。
背景技术
目前,家禽粪便发酵制作有机肥所使用的微生物发酵剂,主要是利用物生物技术,以家禽粪便为主,麸皮、花生壳粉、作物秸秆等辅料作为载体,接入具有多种高效有机物分解功能的、由多种有益微生物菌株复合而成的发酵基菌种。主要采用搅拌的方法将菌种、辅料和家禽粪便充分搅匀,使微生物菌种接入到家禽粪便中,再经过快速升温、发酵、腐化、除臭等一系列无害化处理后,制造出生物有机肥。
现在家禽粪便制作有机肥发酵用的微生物发酵剂,可以有效地发酵、腐化家禽粪便和作辅料用的麸皮、花生壳粉、作物秸秆等载体。但如果家禽粪便中含有大量的家禽羽毛,这种没有优选生物菌种的发酵剂,效果不好;常用的发酵菌剂不能快速、有效的同步发酵家禽粪便与家禽羽毛,在发酵好粪便和辅料的情况下无法完成对家禽羽毛的发酵转化。而家禽的集中屠宰往往造成家禽羽毛的大量堆积,特别是现在很多大型的家禽养殖公司,多数配备有自己的家禽屠宰厂,废弃的家禽羽毛没有充分利用,有的甚至造成局部环境污染。
发明内容
本发明提供一种生物有机肥发酵菌剂,本发明的有机肥发酵菌剂添加了能产蛋酶的菌群种类,大量提升对羽毛的发酵、分解速度。
本发明的技术方案如下:
本发明的生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
优选地,每种菌种单独培养,获得各自的种子菌剂,然后将各种子菌剂混合后进行扩繁培养获得最终的生物有机肥发酵菌剂。
优选地,所述的种子菌剂的制备方法为:
1)将解淀粉芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨、牛肉浸取物、NaCl、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.0的培养基I中,在35-40℃下,摇床震荡培养1-3天,震荡速度为100-200rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配制出的pH为7.2的培养基II中,在28-32℃下,摇床震荡培养10-15小时,震荡速度为120-180rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2分别接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基II中,在28-32℃下,摇床震荡培养10-15小时,震荡速度为120-180rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌接S1接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基中III,在28-32℃下,摇床震荡培养20-28小时,震荡速度为100-300rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)地衣芽孢杆菌接S2接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基III中,在28-32℃下,摇床震荡培养20-28小时,震荡速度为100-300rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水配置出的培养基IV中,在42-48℃下,摇床震荡培养70-75小时,震荡速度为100-300rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6。
优选地,所述的培养基I中各原料的重量份配比为:蛋白胨3-7、牛肉浸取物2-5、NaCl 3-7、琼脂10-20、蒸馏水800-1200;
所述的培养基II中各原料的重量份配比为:NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂18-22、蒸馏水800-1200;
所述的培养基III中各原料的重量份配比为:NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂15-25、蒸馏水800-1200;
所述的培养基IV中各原料的重量份配比为:马铃薯100-300、葡萄糖10-30、琼脂15-20、蒸馏水800-1200。
优选地,所述的扩繁培养包括以下步骤:
a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按照重量比0.5-1.5:1-3:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5的比例混合均匀得混合物N;
在发酵罐中加入用葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙、蒸馏水制成的pH为7.0的培养基V,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积5-10%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖、麦芽粉、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、二水氯化钙、蒸馏水配置成的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积4-8%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;
c、将Y1、Y2按照5-10:0.5-1.5的体积比混合均匀后,经膜滤浓缩5-10倍,加入分散剂,进一步干燥得到固体产品,即得。
优选地,所述的培养基V中各原料的重量份配比为:葡萄糖10-15、蔗糖5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、磷酸二氢钾1-3、碳酸钙1-3、蒸馏水800-1200;
所述的培养基VI中各原料的重量份配比为:葡萄糖10-15、麦芽粉5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、硫酸铵1-3、二水氯化钙1-3、蒸馏水800-1200。
优选地,所述的混合物N的扩繁培养条件为:罐压0.4-0.6MPa,罐温30-35℃,空气流量为0.2-0.5v/v/min,搅拌器转速为100-200rpm,扩繁培养18-24小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵。
优选地,所述的嗜热侧孢霉种子菌剂N6的扩繁培养条件为:罐压0.5-1MPa,罐温43-47℃,空气流量为0.5-1.0v/v/min,搅拌器转速为150-200rpm,扩繁培养70-75小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵。
优选地,所述的步骤c中分散剂由沸石粉、玉米粉按1-2:1-2的比例配制而成。
本发明的有益效果为:
1)利用本发明所得的生物有机菌剂发酵处理的发酵过程明显缩短,发酵产生的热量使得最高温度能达到75℃,可以有效去除病原微生物、虫卵、杂草种子;
2)本发明的有机肥发酵菌剂中,添加了能产蛋酶的菌群种类,酶的种类或产酶量足以较快的打破羽毛蛋白中的二硫健,使用本发明所得的生物有机菌剂进行发酵,很好的对家禽粪便中所含有的大量的羽毛进行发酵,并且提升发酵速度,节省发酵时间,解决生产难点,降低成本;
3)利用本发明所得的生物有机菌剂发酵处理鸡粪可以去除臭味,从而一定程度上减少了环境污染;
4)使用本发明所得的生物有机菌剂进行发酵,堆肥总养分损失少,腐殖质含量高,钾元素含量增高明显。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
本发明的生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的种子菌剂的制备方法为:
1)将解淀粉芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨3g、牛肉浸取物2g、NaCl 3g、琼脂10g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.0的培养基I中,在35℃下,摇床震荡培养1天,震荡速度为100rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl 3g、牛肉膏8g、蛋白胨8g、琼脂18g、蒸馏水0.8L配置出的pH为7.2的培养基II中,在28℃下,摇床震荡培养10小时,震荡速度为120rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2接种于用NaCl 3g、牛肉膏8g、蛋白胨8g、琼脂18g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.2的培养基II中,在28℃下,摇床震荡培养10小时,震荡速度为120rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌接S1接种于用NaCl 3g、牛肉膏8g、蛋白胨8g、琼脂15g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.2的培养基中III,在28℃下,摇床震荡培养20小时,震荡速度为100rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)将地衣芽孢杆菌S2接种于用NaCl 3g、牛肉膏8g、蛋白胨8g、琼脂15g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.2的培养基III中,在28℃下,摇床震荡培养20小时,震荡速度为100rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯100g、葡萄糖10g、琼脂15g、蒸馏水0.8L配制出的培养基IV中,在42℃下,摇床震荡培养70小时,震荡速度为100rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6;;
本发明的扩繁培养包括以下步骤:a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按重量比为0.5:1:0.5:0.5:0.5混合均匀得混合物N;在发酵罐中加入用葡萄糖10g、蔗糖5g、蛋白胨2g、酵母膏3g、磷酸二氢钾1g、碳酸钙1g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.0的培养基V,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积5%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;扩繁培养条件为:罐压0.4MPa,罐温30℃,空气流量为0.2v/v/min,搅拌器转速为100rpm,扩繁培养18小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖10g、麦芽粉5g、蛋白胨2g、酵母膏3g、硫酸铵1g、二水氯化钙1g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积4%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;扩繁培养条件为:罐压0.5MPa,罐温43℃,空气流量为0.5v/v/min,搅拌器转速为150rpm,扩繁培养70小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
c、将Y1、Y2按体积比为5:0.5混合均匀后,经膜滤浓缩5倍,加入由沸石粉、玉米粉按1:1的重量比配制出的分散剂,进一步干燥得到固态产品,即得。
实施例2
本发明的生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的种子菌剂的制备方法为:
1)将解淀粉芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨4g、牛肉浸取物3g、NaCl 4g、琼脂12g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.0的培养基I中,在36℃下,摇床震荡培养2天,震荡速度为120rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl 4g、牛肉膏9g、蛋白胨9g、琼脂19g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.2的培养基II中,在29℃下,摇床震荡培养11小时,震荡速度为130rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2接种于用NaCl 4g、牛肉膏9g、蛋白胨9g、琼脂19g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.2的培养基II中,在29℃下,摇床震荡培养11小时,震荡速度为130rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌接S1种于用NaCl 4g、牛肉膏9g、蛋白胨9g、琼脂16g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.2的培养基中III,在29℃下,摇床震荡培养22小时,震荡速度为120rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)将地衣芽孢杆菌S2接种于用NaCl 4g、牛肉膏9g、蛋白胨9g、琼脂16g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.2的培养基中III,在29℃下,摇床震荡培养22小时,震荡速度为120rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯120g、葡萄糖12g、琼脂16g、蒸馏水0.9L配制出的培养基IV中,在43℃下,摇床震荡培养71小时,震荡速度为150rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6;
本发明的扩繁培养包括以下步骤:
a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按重量比为0.7:1.2:0.7:0.7:0.7混合均匀得混合物N;在发酵罐中加入用葡萄糖11g、蔗糖6g、蛋白胨3g、酵母膏4g、磷酸二氢钾2g、碳酸钙2g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.0的培养基V,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积6%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;扩繁培养条件为:罐压0.5MPa,罐温31℃,空气流量为0.3v/v/min,搅拌器转速为120rpm,扩繁培养19小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖11g、麦芽粉6g、蛋白胨3g、酵母膏4g、硫酸铵2g、二水氯化钙2g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积5%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;;扩繁培养条件为:罐压0.6MPa,罐温44℃,空气流量为0.6v/v/min,搅拌器转速为160rpm,扩繁培养71小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
c、将Y1、Y2按体积比为6:0.7混合均匀后,经膜滤浓缩6倍,加入由沸石粉、玉米粉按1:2的重量比配制出的分散剂,进一步干燥得到固态产品,即得。
实施例3
本发明的生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的种子菌剂的制备方法为:
1)将解淀粉芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨5g、牛肉浸取物4g、NaCl 5g、琼脂14g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基I中,在37℃下,摇床震荡培养3天,震荡速度为140rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl 5g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、琼脂19g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基II中,在30℃下,摇床震荡培养12小时,震荡速度为140rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2接种于用NaCl 5g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、琼脂19g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基II中,在30℃下,摇床震荡培养12小时,震荡速度为140rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌接S1接种于用NaCl 5g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、琼脂17g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基中III,在30℃下,摇床震荡培养23小时,震荡速度为140rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)将地衣芽孢杆菌S2接种于用NaCl 5g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、琼脂17g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基中III,在30℃下,摇床震荡培养23小时,震荡速度为140rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯150g、葡萄糖14g、琼脂17g、蒸馏水1L配制出的培养基IV中,在44℃下,摇床震荡培养72小时,震荡速度为200rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6;
本发明的扩繁培养包括以下步骤:
a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按重量比为0.8:1.4:0.9:0.8:0.9混合均匀得混合物N;在发酵罐中加入用葡萄糖13g、蔗糖7g、蛋白胨4g、酵母膏5g、磷酸二氢钾3g、碳酸钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基V,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积7%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;扩繁培养条件为:罐压0.6MPa,罐温32℃,空气流量为0.3v/v/min,搅拌器转速为140rpm,扩繁培养20小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖12g、麦芽粉7g、蛋白胨4g、酵母膏5g、硫酸铵3g、二水氯化钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积6%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;扩繁培养条件为:罐压0.7MPa,罐温45℃,空气流量为0.7v/v/min,搅拌器转速为170rpm,扩繁培养72小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
c、将Y1、Y2按体积比为7:0.8混合均匀后,经膜滤浓缩7倍,加入由沸石粉、玉米粉按2:1的重量比配制出的分散剂,进一步干燥得到固态产品,即得。
实施例4
本发明的生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的生物有机肥发酵菌剂的制备方法包括以下步骤:
A、种子菌培养:
1)将解淀粉芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨6g、牛肉浸取物5g、NaCl 5g、琼脂15g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.0的培养基I中,在38℃下,摇床震荡培养2天,震荡速度为160rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂21g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.2的培养基II中,在31℃下,摇床震荡培养13小时,震荡速度为150rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂21g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.2的培养基II中,在31℃下,摇床震荡培养13小时,震荡速度为150rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌接S1接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂20g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.2的培养基中III,在31℃下,摇床震荡培养25小时,震荡速度为160rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)将地衣芽孢杆菌S2接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂20g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.2的培养基中III,在31℃下,摇床震荡培养25小时,震荡速度为160rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯200g、葡萄糖25g、琼脂18g、蒸馏水1.1L配制出的培养基IV中,在45℃下,摇床震荡培养73小时,震荡速度为250rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6;
本发明的扩繁培养包括以下步骤:
a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按重量比为1:2:1:1:1混合均匀得混合物N;在发酵罐中加入用葡萄糖13g、蔗糖8g、蛋白胨5g、酵母膏2g、磷酸二氢钾2g、碳酸钙2g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.0的培养基V,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积8%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;扩繁培养条件为:罐压0.5MPa,罐温33℃,空气流量为0.5v/v/min,搅拌器转速为160rpm,扩繁培养22小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖13g、麦芽粉8g、蛋白胨5g、酵母膏5g、硫酸铵1g、二水氯化钙2g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积8%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;扩繁培养条件为:罐压0.8MPa,罐温45℃,空气流量为0.8v/v/min,搅拌器转速为180rpm,扩繁培养73小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
c、将Y1、Y2按体积比为8:1混合均匀后,经膜滤浓缩8倍,加入由沸石粉、玉米粉按1.5:1的重量比配制出的分散剂,进一步干燥得到固态产品,即得。
实施例5
本发明的生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的种子菌剂的制备方法为:
1)将解淀粉芽孢杆菌接种于用蛋白胨6g、牛肉浸取物5g、NaCl 6g、琼脂18g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基I中,在38℃下,摇床震荡培养1天,震荡速度为180rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂23g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基II中,在32℃下,摇床震荡培养14小时,震荡速度为170rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂23g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基II中,在32℃下,摇床震荡培养14小时,震荡速度为170rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌接S1种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂23g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基中III,在32℃下,摇床震荡培养26小时,震荡速度为280rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)将地衣芽孢杆菌接S2种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂23g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基中III,在32℃下,摇床震荡培养26小时,震荡速度为280rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯280g、葡萄糖28g、琼脂19g、蒸馏水1L配制出的培养基IV中,在46℃下,摇床震荡培养74小时,震荡速度为280rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6;
本发明的扩繁培养包括以下步骤:
a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按重量比为0.5:1:0.5:0.5:0.5混合均匀得混合物N;在发酵罐中加入用葡萄糖14g、蔗糖8g、蛋白胨6g、酵母膏6g、磷酸二氢钾2g、碳酸钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基V,灭菌后,加入相当于发酵罐培养基体积9%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;扩繁培养条件为:罐压0.5MPa,罐温34℃,空气流量为0.3v/v/min,搅拌器转速为190rpm,扩繁培养23小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖13g、麦芽粉8g、蛋白胨6g、酵母膏6g、硫酸铵2g、二水氯化钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于按照发酵罐培养基体积7%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;扩繁培养条件为:罐压0.9MPa,罐温46℃,空气流量为0.9v/v/min,搅拌器转速为190rpm,扩繁培养74小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
c、将Y1、Y2按体积比为10:1.5混合均匀后,经膜滤浓缩9倍,加入由沸石粉、玉米粉按1:1.5的重量比配制出的分散剂,进一步干燥得到固态产品,即得。
实施例6
本发明的生物有机肥发酵菌剂,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的种子菌剂的制备方法为:
1)将解淀粉芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨7g、牛肉浸取物5g、NaCl 7g、琼脂20g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.0的培养基I中,在40℃下,摇床震荡培养3天,震荡速度为200rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl 7g、牛肉膏12g、蛋白胨12g、琼脂22g、蒸馏水1.2L配制出的;pH为7.2的培养基II中,在32℃下,摇床震荡培养15小时,震荡速度为180rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2接种于用NaCl 7g、牛肉膏12g、蛋白胨12g、琼脂22g、蒸馏水1.2L配制出的;pH为7.2的培养基II中,在32℃下,摇床震荡培养15小时,震荡速度为180rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌接S1种于用NaCl 7g、牛肉膏12g、蛋白胨12g、琼脂25g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.2的培养基中III,在32℃下,摇床震荡培养28小时,震荡速度为300rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)将地衣芽孢杆菌S2接种于用NaCl 7g、牛肉膏12g、蛋白胨12g、琼脂25g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.2的培养基中III,在32℃下,摇床震荡培养28小时,震荡速度为300rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯300g、葡萄糖30g、琼脂20g、蒸馏水1.2L配制出的培养基IV中,在48℃下,摇床震荡培养75小时,震荡速度为300rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6;
本发明的扩繁培养包括以下步骤:
a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按重量比为1.5:3:1:1:1.5混合均匀得混合物N;在发酵罐中加入用葡萄糖15g、蔗糖10g、蛋白胨7g、酵母膏7g、磷酸二氢钾3g、碳酸钙3g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.0的培养基V,灭菌后,加入相当于发酵罐培养基体积10%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;扩繁培养条件为:罐压0.6MPa,罐温35℃,空气流量为0.5v/v/min,搅拌器转速为200rpm,扩繁培养24小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖15g、麦芽粉10g、蛋白胨7g、酵母膏7g、硫酸铵3g、二水氯化钙3g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积8%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;扩繁培养条件为:罐压1MPa,罐温47℃,空气流量为1.0v/v/min,搅拌器转速为200rpm,扩繁培养70小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
c、将Y1、Y2按体积比比为10:1.5混合均匀后,经膜滤浓缩10倍,加入由沸石粉、玉米粉按1:1的重量比配制出的分散剂,进一步干燥得到固态产品,即得。
实施例7
堆肥处理方法:设置2个处理,3个重复的试验。
处理1为鸡粪常规发酵,处理2为试用本发明实施例4所得的生物有机肥发酵菌剂进行鸡粪发酵。将10m3的鸡粪平均分为6份,其中3份用作常规发酵,3份加入本发明所得的生物有机肥发酵菌剂进行鸡粪发酵。将鸡粪在水泥地上均匀铺开,取生物有机肥发酵剂100kg,用自来水稀释100倍,放置24h后搅拌均匀,将其均匀喷洒在鸡粪上,用铁铲搅拌,按由多到少的原则,即先将菌种稀释液倒入少量发酵原料中搅拌均匀,直到没有团块,然后再搅拌好的少量发酵原料倒入剩余发酵原料中搅拌均匀,直到没有团块。将混合后的发酵原料堆肥发酵,每天检测温度和发酵情况,并且记录羽毛的发酵、分解情况。处理1组中的鸡粪按照正常发酵流程进行发酵,并同时记录温度和羽毛发酵、分解情况。
堆肥检测方法:将处理1和处理2的鸡粪分别粉碎后过0.5mm筛,取约0.5kg,放入样品袋中贴好标签以备化验。按照农业行业标准NY525-2012《有机肥料》化验鸡粪中的有机质、N、总养分(N+P2O5+K2O)、P2O5、K2O等养份含量。
表1处理1和处理2各项指标对比
由表1可知:1)发酵时间比较:试验结果表明,利用本发明所得的生物有机菌剂发酵处理的发酵过程明显缩短。常规堆肥发酵需要7d时间,而本发明所得生物有机菌剂能快速发酵起温,环境温度在0℃以上时,2天温度可升至60℃以上,与市场普通发酵剂相比可以缩短发酵周期2-5天。最高温度能达到75℃,可以有效去除病原微生物、虫卵、杂草种子;
2)常规堆肥发酵基本无法将鸡粪中的羽毛进行分解,对后续生产生物肥有较大的影响,而使用本发明所得的生物有机菌剂进行发酵后,鸡粪中的羽毛能够大部分降解,解决生产难点;
3)使用本发明所得的生物有机菌剂进行发酵的处理2,堆肥总养分损失少,腐殖质含量高,钾元素含量增高明显。与常规发酵处理1相比其总养分能提高2%以上,总有机质提高4%以上。
Claims (2)
1.一种生物有机肥发酵菌剂,其特征在于,其活性成分包括以下菌种:保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1;
每种菌种单独培养,获得各自的种子菌剂,然后将各种子菌剂混合后进行扩繁培养获得最终的生物有机肥发酵菌剂;
所述的种子菌剂的制备方法为:
1)将解淀粉芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨、牛肉浸取物、NaCl、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.0的培养基I中,在35-40℃下,摇床震荡培养1-3天,震荡速度为100-200rpm,得到解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1;
2)将枯草芽孢芽孢杆菌D1接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基II中,在28-32℃下,摇床震荡培养10-15小时,震荡速度为120-180rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2;
3)将枯草芽孢芽孢杆菌D2接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基II中,在28-32℃下,摇床震荡培养10-15小时,震荡速度为120-180rpm,得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N3;
4)将地衣芽孢杆菌S1接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基III中,在28-32℃下,摇床震荡培养20-28小时,震荡速度为100-300rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N4;
5)地衣芽孢杆菌S2接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基III中,在28-32℃下,摇床震荡培养20-28小时,震荡速度为100-300rpm,得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N5;
6)将嗜热侧孢霉T1接种于用马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水配置出的培养基IV中,在42-48℃下,摇床震荡培养70-75小时,震荡速度为100-300rpm,得到嗜热侧孢霉种子菌剂N6;
所述的扩繁培养包括以下步骤:
a、将解淀粉芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、枯草芽孢杆菌种子菌剂N3、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4、地衣芽孢杆菌种子菌剂N5按照重量比0.5-1.5:1-3:0.5-1.5:0.5-1.5:0.5-1.5的比例混合均匀得混合物N;
在发酵罐中加入用葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙、蒸馏水制成的pH为7.0的培养基V,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积的5-10%的混合物N作种子进行扩繁培养,得到培养物Y1;
b、在发酵罐中加入用葡萄糖、麦芽粉、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、二水氯化钙、蒸馏水配置成的pH为7.0的培养基VI,灭菌,加入相当于发酵罐培养基体积4-8%的嗜热侧孢霉种子菌剂N6作种子进行扩繁培养,得到培养物Y2;
c、将Y1、Y2按照体积比为5-10:0.5-1.5混合均匀后,经膜滤浓缩5-10倍,加入分散剂,进一步干燥得到固体产品,即得;
所述的培养基I中各原料的重量份配比为:蛋白胨3-7、牛肉浸取物2-5、NaCl 3-7、琼脂10-20、蒸馏水800-1200;
所述的培养基II中各原料的重量份配比为:NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂18-22、蒸馏水800-1200;
所述的培养基III中各原料的重量份配比为:NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂15-25、蒸馏水800-1200;
所述的培养基IV中各原料的重量份配比为:马铃薯100-300、葡萄糖10-30、琼脂15-20、蒸馏水800-1200;
所述的培养基V中各原料的重量份配比为:葡萄糖10-15、蔗糖5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、磷酸二氢钾1-3、碳酸钙1-3、蒸馏水800-1200;
所述的培养基VI中各原料的重量份配比为:葡萄糖10-15、麦芽粉5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、硫酸铵1-3、二水氯化钙1-3、蒸馏水800-1200;
所述的混合物N的扩繁培养条件为:罐压0.4-0.6MPa,罐温30-35℃,空气流量为0.2-0.5v/v/min,搅拌器转速为100-200rpm,扩繁培养18-24小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵;
所述的嗜热侧孢霉种子菌剂N6的扩繁培养条件为:罐压0.5-1MPa,罐温43-47℃,空气流量为0.5-1.0v/v/min,搅拌器转速为150-200rpm,扩繁培养70-75小时,当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵。
2.根据权利要求1所述的生物有机肥发酵菌,其特征在于:所述的步骤c中分散剂由沸石粉、玉米粉按1-2:1-2的重量比配制而成。
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