CN105969697A - 一种用于秸秆堆肥的复配菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种用于秸秆堆肥的复配菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于秸秆堆肥的复配菌剂,其特征在于,包括根霉、蜂房芽孢杆菌、绿色木霉和拟茎点霉B3;所述复合菌剂中含有:真菌孢子数目不少于104个/ml的根霉孢子悬液、细菌OD值为0.5‑1的蜂房芽孢杆菌的细菌菌液、真菌孢子数目不少于104个/ml的绿色木霉孢子悬液、真菌孢子数目不少于104个/ml的拟茎点霉B3孢子悬液;本发明还公开了该复合菌剂的制备方法,将上述四种菌所制备的菌剂,取相同质量进行混合,即得到的复配菌剂;使用该复配菌剂可以加快秸秆的堆肥速度,腐熟化程度以及资源的再生利用率;同时解决了秸秆运输和存放困难,避免了因焚烧秸秆造成的大气污染,具有良好的环境效益。

Description

一种用于秸秆堆肥的复配菌剂及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于微生物发酵技术领域,具体涉及一种用于秸杆堆肥的复配菌剂及其制 备方法和应用。
背景技术
[0002] 我国是农业大国,农作物资源总量总体呈不断增长趋势,作物秸杆产生量增大,有 研究表明,至2016年我国的秸杆产量达到9亿吨左右。农作物秸杆含有一定量的碳、氮、磷、 钾、钙、硅等多种元素,同时含有丰富的纤维素、半纤维素、木质素和蛋白质等有机物质。秸 杆中含有可供动植物利用的大量的营养成分,是具有综合利用价值的可再生资源。
[0003] 农作物秸杆是一种难处理好的农业产物,作为纤维素农作物,秸杆存在难降解,耗 时长,能源产生量低等工艺缺点。根据我国具体国情,面对农用秸杆这一宝贵的生物资源, 我国的再生利用率很低,大量的秸杆被随便堆砌或直接燃烧,不仅占用土地,污染环境,并 造成生物质能源的严重浪费。此外,由于化学肥料的成本较高,易引起水体污染,土壤板结, 进一步吸引了人们对生物质废料的研究。秸杆含有大量可利用元素,是最大的固体废弃物 养分资源,我们可以通过堆肥技术将秸杆制成有机肥,具有经济和环境的双重利益。
发明内容
[0004] 发明目的:针对现有技术存在的问题,本发明提供了一种用于秸杆堆肥的复配菌 剂,本发明的复合菌剂可以加快秸杆的堆肥速度,腐熟化程度以及资源的再生利用率,同时 本发明还提供了该复合菌剂的制备方法和应用。
[0005] 技术方案:为了实现上述目的,如本发明所述一种用于秸杆堆肥的复配菌剂,其特 征在于,包括根霉、蜂房芽孢杆菌、绿色木霉和拟茎点霉B3;所述菌株都由河海大学环境学 院赠送。
[0006] 所述复合菌剂中含有:真菌孢子数目不少于104个/ml的根霉孢子悬液、细菌0D值 为0.5-1的蜂房芽孢杆菌的细菌菌液、真菌孢子数目不少于10 4个/ml的绿色木霉孢子悬液、 真菌孢子数目不少于1〇4个/ml的拟茎点霉B3孢子悬液。
[0007] 所述复配菌剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
[0008] (1)将根霉接种于PDA培养基,28-30 °C培养40-50小时,用15-30ml的0.9 %灭菌生 理盐水振荡,得到根霉孢子悬液;
[0009] (2)将蜂房芽孢杆菌接种到LB培养基上,温度28-30 °C,转速160-200rpm,培养1-2 天,离心后去掉上清液取沉淀,再用15-30ml的0.9%灭菌生理盐水重悬,得到蜂房芽孢杆 菌菌液;
[0010] (3)将绿色木霉接种于PDA培养基,28-30°C培养40-50小时,用15-30ml的0.9%灭 菌生理盐水振荡,得到绿色木霉孢子悬液;
[0011] (4)将拟茎点霉B3接种于TOA培养基,28-30°C培养40-50小时,用15-30ml的0.9% 灭菌生理盐水振荡,得到拟茎点霉B3孢子悬液;
[0012] 将上述四种菌剂,取相同质量进行混合,即得到的复配菌剂。
[0013] 所述的roA培养基培养包括:马铃薯提取液180~220g/L,葡糖糖15~30g/L,琼脂 15~25g/L,去离子水800~1000mL。
[0014] 所述的LB培养基包括:蛋白胨10~15g,酵母提取物10~12g,氯化钠5~10g,去离 子水900 ~1000mL。
[0015] 所述的复配菌剂在秸杆堆肥中的应用,包括如下步骤:
[0016] (1)将秸杆经自然晾干后,粉碎至l-2cm,向其中添加牛粪和果蔬废弃物,将秸杆、 牛粪果蔬废弃物按40:10:0.25的干重配比进行混合;为避免秸杆在发酵初期所含有机物成 分过少所以添加牛粪和果蔬废弃物;
[0017] (2)将上述混合物作为堆肥的混合基质,与复配菌剂按145~150:1的重量比混合;
[0018] (3)将混合后的废弃物和菌剂投入堆肥箱中,进行发酵;发酵的时间为19-27天。
[0019] 所述的秸杆优选为玉米秸杆。
[0020] 上述操作步骤如无特别说明,均按本领域常规操作。
[0021] 有益效果:与现有技术相比,本发明的复配菌剂具有如下优点:本发明通过选取新 型微生物种类制成复配菌剂,使用该菌剂可以加快秸杆的堆肥速度,腐熟化程度以及资源 的再生利用率;同时解决了秸杆运输和存放困难,避免了因焚烧秸杆造成的大气污染,具有 良好的环境效益;本发明的制备方法简单,生产成本低,对环境无污染。
具体实施方式
[0022] 实施例1
[0023] -种用于秸杆堆肥的复配菌剂的制备方法:
[0024] PDA培养基:马铃薯提取液180g/L,葡糖糖15g/L,琼脂15g/L,去离子水800mL。
[0025] LB培养基:蛋白胨10g,酵母提取物10g,氯化钠5g,去离子水900mL。
[0026] (1)将根霉接种于PDA培养基,28°C培养50小时,用15ml的0.9%灭菌生理盐水振 荡,得到真菌孢子数目为5 X 104个/ml的根霉孢子悬液;
[0027] (2)将蜂房芽孢杆菌接种到LB培养基上,温度28°C,转速200rpm,培养2天,离心后 去掉上清液取沉淀,再用15ml的0.9 %灭菌生理盐水重悬,得到细菌0D值为0.5的蜂房芽孢 杆菌菌液;
[0028] (3)将绿色木霉接种于PDA培养基,28°C培养50小时,用15ml的0.9%灭菌生理盐水 振荡,得到真菌孢子数目为6 X 104个/ml的绿色木霉孢子悬液;
[0029] (4)将拟茎点霉B3接种于PDA培养基,28°C培养50小时,用15ml的0.9%灭菌生理盐 水振荡,得到真菌孢子数目为5 X 104个/ml的拟茎点霉B3孢子悬液;
[0030] 将上述四种菌剂,取相同质量进行混合,即得到的复配菌剂。
[0031] 实施例2
[0032] -种用于秸杆堆肥的复配菌剂的制备方法:
[0033] PDA培养基:马铃薯提取液220g/L,葡糖糖30g/L,琼脂25g/L,去离子水1000mL。
[0034] LB培养基:蛋白胨15g,酵母提取物12g,氯化钠10g,去离子水1000mL。
[0035] (1)将根霉接种于PDA培养基,30°C培养40小时,用30ml的0.9%灭菌生理盐水振 荡,得到真菌孢子数目为7 X 104个/ml的根霉孢子悬液;
[0036] (2)将蜂房芽孢杆菌接种到LB培养基上,温度30°C,转速200rpm,培养1天,离心后 去掉上清液取沉淀,再用30ml的0.9%灭菌生理盐水重悬,得到细菌0D值为1的蜂房芽孢杆 菌菌液;
[0037] (3)将绿色木霉接种于PDA培养基,30 °C培养50小时,用30ml的0.9%灭菌生理盐水 振荡,得到真菌孢子数目为5 X 104个/ml的绿色木霉孢子悬液;
[0038] (4)将拟茎点霉B3接种于PDA培养基,30 °C培养50小时,用30ml的0.9%灭菌生理盐 水振荡,得到真菌孢子数目为6 X 104个/ml的拟茎点霉B3孢子悬液;
[0039] 将上述四种菌剂,取相同质量进行混合,即得到的复配菌剂。
[0040] 实施例3
[0041] -种用于秸杆堆肥的复配菌剂的制备方法:
[0042] PDA培养基:马铃薯提取液200g/L,葡糖糖22.5g/L,琼脂20g/L,去离子水900mL。
[0043] LB培养基:蛋白胨12.5g,酵母提取物1 lg,氯化钠7.5g,去离子水950mL。
[0044] (1)将根霉接种于PDA培养基,29°C培养45小时,用25ml的0.9%灭菌生理盐水振 荡,得到真菌孢子数目为6 X 104个/ml的根霉孢子悬液;
[0045] (2)将蜂房芽孢杆菌接种到LB培养基上,温度29°C,转速180rpm,培养1.5天,离心 后去掉上清液取沉淀,再用25ml的0.9%灭菌生理盐水重悬,得到细菌0D值为0.8的蜂房芽 孢杆菌菌液;
[0046] (3)将绿色木霉接种于PDA培养基,29°C培养45小时,用25ml的0.9%灭菌生理盐水 振荡,得到真菌孢子数目为5 X 104个/ml的绿色木霉孢子悬液;
[0047] (4)将拟茎点霉B3接种于PDA培养基,29°C培养45小时,用25ml的0.9%灭菌生理盐 水振荡,得到真菌孢子数目为7 X 104个/ml的拟茎点霉B3孢子悬液;
[0048] 将上述四种菌剂,取相同质量进行混合,即得到的复配菌剂。
[0049] 实施例4
[0050] 复配菌剂在秸杆堆肥中的应用,包括如下步骤:
[0051] (1)将玉米秸杆经自然晾干后,粉碎至l-2cm,向其中添加牛粪和果蔬废弃物,将秸 杆、牛粪果蔬废弃物按40:10:0.25的干重配比进行混合;为避免秸杆在发酵初期所含有机 物成分过少所以添加牛粪和果蔬废弃物;
[0052] (2)将上述混合物作为堆肥的混合基质,与实施例1所制备的复配菌剂按145:1的 重量比混合;
[0053] (3)将混合后的废弃物和菌剂投入堆肥箱中,进行发酵;发酵的时间定为19天。
[0054] 实施例5
[0055] 实施例5的方法与实施例4基本相同,不同之处在于混合基质与实施例2所制备的 复配菌剂按150:1的重量比混合,发酵时间为27天。
[0056] 实施例6
[0057]实施例6的方法与实施例4基本相同,不同之处在于混合基质与实施例3制备的复 配菌剂按148:1的重量比混合,发酵时间为24天。
[0058] 试验例1
[0059]以所配复配菌剂用作玉米秸杆堆肥的微生物反应种类,随着时间的迀移,观察其 对秸杆反应堆的堆肥效应,反映中碳氮比(C/N)是能够直观的判断是否腐熟的参数,通过碳 氮比的数据来说明复配菌剂的效用。
[0060]本试验例中按实施例6的方法进行,添加物为:混合基质(47.36kg,包括玉米秸杆、 牛粪和果蔬废弃物)+根霉(80g)+蜂房芽孢杆菌(80g)+拟茎点霉B3(80g)+绿色木霉(80g); 试验例1中复配菌剂的作用如表1所示。
[0061 ]表1玉米秸杆中的碳氮比
Figure CN105969697AD00061
[0063]^根据国家制定的《堆肥质量要求》,参考《粪便无害化卫生标准(GB7959-87)》,将碳 氮比小于20作为堆肥腐熟的标志,结合表1的数据可以看出在反应发生后的第19天,所得碳 氮比小于20,且所需时间相对最少,由此可以得出,本发明所选取的复配菌剂在对秸杆堆肥 腐熟的过程中起到了很好的作用。
[0064]通过试验发现使用本发明实施例4和实施例5的方法堆肥腐熟的时间也是19天;综 上可得,本发明所制备的复配菌剂堆肥时间只需19天就可,达到最佳堆肥腐熟成效。

Claims (7)

1. 一种用于秸杆堆肥的复配菌剂,其特征在于,包括根霉、蜂房芽孢杆菌、绿色木霉和 拟茎点霉B3。
2. 根据权利要求1所述的复配菌剂,其特征在于,所述复合菌剂中含有:真菌孢子数目 不少于104个/ml的根霉孢子悬液、细菌0D值为0.5-1的蜂房芽孢杆菌的细菌菌液、真菌孢子 数目不少于1〇 4个/ml的绿色木霉孢子悬液、真菌孢子数目不少于104个/ml的拟茎点霉B3孢 子悬液。
3. 权利要求1所述复配菌剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤: (1) 将根霉接种于roA培养基,28-30 °C培养40-50小时,用15-30ml的0.9 %灭菌生理盐 水振荡,得到根霉孢子悬液; (2) 将蜂房芽孢杆菌接种到LB培养基上,温度28-30°C,转速160-200rpm,培养1-2天,离 心后去掉上清液取沉淀,再用15-30ml的0.9 %灭菌生理盐水重悬,得到蜂房芽孢杆菌菌液; (3) 将绿色木霉接种于TOA培养基,28-30 °C培养40-50小时,用15-30ml的0.9 %灭菌生 理盐水振荡,得到绿色木霉孢子悬液; (4) 将拟茎点霉B3接种于PDA培养基,28-30°C培养40-50小时,用15-30ml的0.9%灭菌 生理盐水振荡,得到拟茎点霉B3孢子悬液; 将上述四种菌剂,取相同质量进行混合,即得到的复配菌剂。
4. 根据权利要求3所述的复配菌剂,其特征在于,所述的TOA培养基培养包括:马铃薯提 取液180~220g/L,葡糖糖15~30g/L,琼脂15~25g/L,去离子水800~1000mL。
5. 根据权利要求3所述的复配菌剂,其特征在于,所述的LB培养基包括:蛋白胨10~ 15g,酵母提取物10~12g,氯化钠5~10g,去离子水900~1000mL。
6. 权利要求1所述的复配菌剂在秸杆堆肥中的应用。
7. 根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述包括如下步骤: (1) 将秸杆经自然晾干后,粉碎至l-2cm,向其中添加牛粪和果蔬废弃物,将秸杆、牛粪 果蔬废弃物按40:10:0.25的干重配比进行混合; (2) 将上述混合物作为堆肥的混合基质,与复配菌剂按145~150:1的重量比混合; (3) 将混合后的废弃物和菌剂投入堆肥箱中,进行发酵。
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