CN108218570A - 一种液态生物菌肥及其制备方法 - Google Patents

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吕沐永
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Abstract

本发明公开一种液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌5‑15份、地衣芽孢杆菌5‑15份、胶冻样芽孢杆菌5‑15份、淡紫拟青霉1‑5份、花生麸浸出液10‑20份。本发明还公开了该液态生物菌肥的制备方法。本发明的液态生物菌肥剂，添加了能产蛋酶的菌群种类，大量提升对羽毛的发酵、分解速度。

Description

一种液态生物菌肥及其制备方法
技术领域
本发明属于有机肥生产技术领域，具体为一种液态生物菌肥及其制备方法。
背景技术
为了降低污染，防止土壤硬化，目前有机肥已经开始逐渐推广替代化肥使用。有机肥发酵罐发酵有机肥可以减少占地面及空气污染等，减少环保问题。市场上微生物菌肥已经有很多种，但由于成分单一，因此普遍功能较为单一，无法做到多功用性。花生麸在果树上的应用已经比较普遍，多为直接使用或发酵后使用，但多为单一使用。植物生长调节剂已经在植物生长方面有推广使用。发酵罐发酵有机肥会有大量废液排出，废液中富含腐殖酸及氮元素等，但由于其碱性较大(PH值为9.2左右)，不能直接为作物使用，而直接排放又会污染环境；微生物菌、花生麸、植物生长调节剂都已经在作物上广泛推广使用，但无综合性产品，普遍为各自单一使用，耗时耗力，而效果却未必达到预期。
发明内容
本发明提供一种液态生物菌肥及其制备方法，本发明的液态生物菌肥添加了能产蛋酶的菌群种类，大量提升对家禽羽毛的发酵、分解速度。
本发明的技术方案如下：
本发明的液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌5-15份、地衣芽孢杆菌5-15份、胶冻样芽孢杆菌5-15份、淡紫拟青霉1-5份、花生麸浸出液10-20份。
进一步，还包括以下重量份的原料：胺鲜酯15-20份、复硝酚钠15-20份、萘乙酸钠15-20份。
进一步，所述的花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按0.5-1.5:2-4:3-5的质量比混合，然后加入原物料总质量20-30％的发酵菌剂发酵25-30天，即得；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
进一步，所述的液态生物菌肥的制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
进一步，所述的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉的种菌培养包括以下步骤：
1)将胶冻样芽孢杆菌接种于用蛋白胨、牛肉浸取物、NaCl、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.0的培养基I中，在35-40℃下，摇床震荡培养1-3天，震荡速度为100-200rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基II中，在28-32℃下，摇床震荡培养10-15小时，震荡速度为120-180rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基中III，在28-32℃下，摇床震荡培养20-28小时，震荡速度为100-300rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉接种于用马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水配置出的培养基IV中，在42-48℃下，摇床震荡培养70-75小时，震荡速度为100-300rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N4。
进一步，所述的培养基I中各原料的重量份配比为：蛋白胨3-7、牛肉浸取物2-5、NaCl3-7、琼脂10-20、蒸馏水800-1200；所述的培养基II中各原料的重量份配比为：NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂18-22、蒸馏水800-1200；所述的培养基III中各原料的重量份配比为：NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂15-25、蒸馏水800-1200；所述的培养基IV中各原料的重量份配比为：马铃薯100-300、葡萄糖10-30、琼脂15-20、蒸馏水800-1200。
进一步，各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：
a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、地衣芽孢杆菌种子菌剂N3按照重量比为0.5-1.5:1-3:0.5-1.5混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙、蒸馏水制成的pH为7.0的培养基V，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积的5-10％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖、麦芽粉、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、二水氯化钙、蒸馏水配置成的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积4-8％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；
c、将Y1、Y2按照体积比为5-10:0.5-1.5混合均匀后，经膜滤浓缩5-10倍，加入分散剂，进一步干燥得到固体产品，得生物发酵菌剂。
进一步，所述的培养基V中各原料的重量份配比为：葡萄糖10-15、蔗糖5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、磷酸二氢钾1-3、碳酸钙1-3、蒸馏水800-1200；所述的培养基VI中各原料的重量份配比为：葡萄糖10-15、麦芽粉5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、硫酸铵1-3、二水氯化钙1-3、蒸馏水800-1200。
进一步，所述的混合物N的扩繁培养条件为：罐压0.4-0.6MPa，罐温30-35℃，空气流量为0.2-0.5v/v/min，搅拌器转速为100-200rpm，扩繁培养18-24小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；所述的淡紫拟青霉种子菌剂N4的扩繁培养条件为：罐压0.5-1MPa，罐温43-47℃，空气流量为0.5-1.0v/v/min，搅拌器转速为150-200rpm，扩繁培养70-75小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵。
进一步，所述的步骤c中分散剂由沸石粉、玉米粉按1-2:1-2的重量比配制而成。
本发明的有益效果为：
1)利用本发明所得的液态生物菌肥发酵处理的发酵过程明显缩短，发酵产生的热量使得最高温度能达到75℃，可以有效去除病原微生物、虫卵、杂草种子；
2)本发明的有机肥发酵菌剂中，添加了能产蛋酶的菌群种类，酶的种类或产酶量足以较快的打破羽毛蛋白中的二硫健，使用本发明所得的液态生物菌肥进行发酵，很好的对家禽粪便中所含有的大量的羽毛进行发酵，并且提升发酵速度，节省发酵时间，解决生产难点，降低成本；
3)利用本发明所得的液态生物菌肥发酵处理鸡粪可以去除臭味，从而一定程度上减少了环境污染；
4)使用本发明所得的液态生物菌肥进行发酵，堆肥总养分损失少，腐殖质含量高，钾元素含量增高明显。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
本发明的液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌5份、地衣芽孢杆菌5份、胶冻样芽孢杆菌5份、淡紫拟青霉1份、花生麸浸出液10份、胺鲜酯15份、复硝酚钠15份、萘乙酸钠15份；花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按0.5:2:3的质量比混合，然后加入原物料总质量20％的发酵菌剂发酵25天，即得花生麸浸出液；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的液态生物菌肥的制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
其中，种子菌剂的制备方法为：
1)将胶冻样芽孢杆菌接种于用蛋白胨3g、牛肉浸取物2g、NaCl 3g、琼脂10g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.0的培养基I中，在35℃下，摇床震荡培养1天，震荡速度为100rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl 3g、牛肉膏8g、蛋白胨8g、琼脂18g、蒸馏水0.8L配置出的pH为7.2的培养基II中，在28℃下，摇床震荡培养10小时，震荡速度为120rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl 3g、牛肉膏8g、蛋白胨8g、琼脂15g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.2的培养基中III，在28℃下，摇床震荡培养20小时，震荡速度为100rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉接种于用马铃薯100g、葡萄糖10g、琼脂15g、蒸馏水0.8L配制出的培养基IV中，在42℃下，摇床震荡培养70小时，震荡速度为100rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N6；
各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、地衣芽孢杆菌种子菌剂N3按重量比为0.5:1:0.5混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖10g、蔗糖5g、蛋白胨2g、酵母膏3g、磷酸二氢钾1g、碳酸钙1g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.0的培养基V，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积5％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；扩繁培养条件为：罐压0.4MPa，罐温30℃，空气流量为0.2v/v/min，搅拌器转速为100rpm，扩繁培养18小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖10g、麦芽粉5g、蛋白胨2g、酵母膏3g、硫酸铵1g、二水氯化钙1g、蒸馏水0.8L配制出的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积4％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；扩繁培养条件为：罐压0.5MPa，罐温43℃，空气流量为0.5v/v/min，搅拌器转速为150rpm，扩繁培养70小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
c、将Y1、Y2按体积比为5:0.5混合均匀后，经膜滤浓缩5倍，加入由沸石粉、玉米粉按1:1的重量比配制出的分散剂，进一步干燥得到固态产品，即得。
实施例2
本发明的液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌8份、地衣芽孢杆菌8份、胶冻样芽孢杆菌8份、淡紫拟青霉2份、花生麸浸出液12份、胺鲜酯16份、复硝酚钠16份、萘乙酸钠16份；花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按0.8:2.5:3.5的质量比混合，然后加入原物料总质量22％的发酵菌剂发酵26天，即得花生麸浸出液；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的液态生物菌肥的制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按照重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
其中，本发明的种子菌剂的制备方法为：
1)将胶冻样芽孢杆菌接种于用蛋白胨4g、牛肉浸取物3g、NaCl 4g、琼脂12g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.0的培养基I中，在36℃下，摇床震荡培养2天，震荡速度为120rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl 4g、牛肉膏9g、蛋白胨9g、琼脂19g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.2的培养基II中，在29℃下，摇床震荡培养11小时，震荡速度为130rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl 4g、牛肉膏9g、蛋白胨9g、琼脂16g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.2的培养基中III，在29℃下，摇床震荡培养22小时，震荡速度为120rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉接种于用马铃薯120g、葡萄糖12g、琼脂16g、蒸馏水0.9L配制出的培养基IV中，在43℃下，摇床震荡培养71小时，震荡速度为150rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N4；
各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：
a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、地衣芽孢杆菌种子菌剂N3按重量比为0.7:1.2:0.7混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖11g、蔗糖6g、蛋白胨3g、酵母膏4g、磷酸二氢钾2g、碳酸钙2g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.0的培养基V，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积6％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；扩繁培养条件为：罐压0.5MPa，罐温31℃，空气流量为0.3v/v/min，搅拌器转速为120rpm，扩繁培养19小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖11g、麦芽粉6g、蛋白胨3g、酵母膏4g、硫酸铵2g、二水氯化钙2g、蒸馏水0.9L配制出的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积5％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；；扩繁培养条件为：罐压0.6MPa，罐温44℃，空气流量为0.6v/v/min，搅拌器转速为160rpm，扩繁培养71小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
c、将Y1、Y2按体积比为6:0.7混合均匀后，经膜滤浓缩6倍，加入由沸石粉、玉米粉按1:2的重量比配制出的分散剂，进一步干燥得到固态产品，即得。
实施例3
本发明的液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌10份、地衣芽孢杆菌10份、胶冻样芽孢杆菌10份、淡紫拟青霉3份、花生麸浸出液14份、胺鲜酯17份、复硝酚钠17份、萘乙酸钠17份；花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按1:2:3的质量比混合，然后加入原物料总质量25％的发酵菌剂发酵27天，即得花生麸浸出液；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的液态生物菌肥的制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按照重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
其中，本发明的种子菌剂的制备方法为：
1)将胶冻样芽孢杆菌接种于用蛋白胨5g、牛肉浸取物4g、NaCl 5g、琼脂14g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基I中，在37℃下，摇床震荡培养3天，震荡速度为140rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl 5g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、琼脂19g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基II中，在30℃下，摇床震荡培养12小时，震荡速度为140rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl 5g、牛肉膏10g、蛋白胨10g、琼脂17g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基中III，在30℃下，摇床震荡培养23小时，震荡速度为140rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉接种于用马铃薯150g、葡萄糖14g、琼脂17g、蒸馏水1L配制出的培养基IV中，在44℃下，摇床震荡培养72小时，震荡速度为200rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N4；
各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：
a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、地衣芽孢杆菌种子菌剂N3按重量比为0.8:1.4:0.9混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖13g、蔗糖7g、蛋白胨4g、酵母膏5g、磷酸二氢钾3g、碳酸钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基V，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积7％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；扩繁培养条件为：罐压0.6MPa，罐温32℃，空气流量为0.3v/v/min，搅拌器转速为140rpm，扩繁培养20小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖12g、麦芽粉7g、蛋白胨4g、酵母膏5g、硫酸铵3g、二水氯化钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积6％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；扩繁培养条件为：罐压0.7MPa，罐温45℃，空气流量为0.7v/v/min，搅拌器转速为170rpm，扩繁培养72小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
c、将Y1、Y2按体积比为7:0.8混合均匀后，经膜滤浓缩7倍，加入由沸石粉、玉米粉按2:1的重量比配制出的分散剂，进一步干燥得到固态产品，即得。
实施例4
本发明的液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌12份、地衣芽孢杆菌12份、胶冻样芽孢杆菌12份、淡紫拟青霉4份、花生麸浸出液15份、胺鲜酯18份、复硝酚钠18份、萘乙酸钠18份；花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按1:4:5的质量比混合，然后加入原物料总质量26％的发酵菌剂发酵28天，即得花生麸浸出液；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的液态生物菌肥的制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按照重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
其中，本发明的液态生物菌肥剂的制备方法包括以下步骤：
A、种子菌培养：
1)将胶冻样芽孢杆菌接种于用蛋白胨6g、牛肉浸取物5g、NaCl 5g、琼脂15g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.0的培养基I中，在38℃下，摇床震荡培养2天，震荡速度为160rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂21g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.2的培养基II中，在31℃下，摇床震荡培养13小时，震荡速度为150rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂20g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.2的培养基中III，在31℃下，摇床震荡培养25小时，震荡速度为160rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉接种于用马铃薯200g、葡萄糖25g、琼脂18g、蒸馏水1.1L配制出的培养基IV中，在45℃下，摇床震荡培养73小时，震荡速度为250rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N4。
各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：
a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2地衣芽孢杆菌种子菌剂N3按重量比为1:2:1混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖13g、蔗糖8g、蛋白胨5g、酵母膏2g、磷酸二氢钾2g、碳酸钙2g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.0的培养基V，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积8％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；扩繁培养条件为：罐压0.5MPa，罐温33℃，空气流量为0.5v/v/min，搅拌器转速为160rpm，扩繁培养22小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖13g、麦芽粉8g、蛋白胨5g、酵母膏5g、硫酸铵1g、二水氯化钙2g、蒸馏水1.1L配制出的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积8％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；扩繁培养条件为：罐压0.8MPa，罐温45℃，空气流量为0.8v/v/min，搅拌器转速为180rpm，扩繁培养73小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
c、将Y1、Y2按体积比为8:1混合均匀后，经膜滤浓缩8倍，加入由沸石粉、玉米粉按1.5:1的重量比配制出的分散剂，进一步干燥得到固态产品，即得。
实施例5
本发明的液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌14份、地衣芽孢杆菌13份、胶冻样芽孢杆菌14份、淡紫拟青霉4份、花生麸浸出液16份、胺鲜酯19份、复硝酚钠19份、萘乙酸钠19份；花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按1.5:4:5的质量比混合，然后加入原物料总质量28％的发酵菌剂发酵29天，即得花生麸浸出液；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的液态生物菌肥的制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按照重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
其中，本发明的种子菌剂的制备方法为：
1)将胶冻样芽孢杆菌接种于用蛋白胨6g、牛肉浸取物5g、NaCl 6g、琼脂18g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基I中，在38℃下，摇床震荡培养1天，震荡速度为180rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂23g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基II中，在32℃下，摇床震荡培养14小时，震荡速度为170rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl 6g、牛肉膏11g、蛋白胨11g、琼脂23g、蒸馏水1L配制出的pH为7.2的培养基中III，在32℃下，摇床震荡培养26小时，震荡速度为280rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉T1接种于用马铃薯280g、葡萄糖28g、琼脂19g、蒸馏水1L配制出的培养基IV中，在46℃下，摇床震荡培养74小时，震荡速度为280rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N4；
各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：
a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、地衣芽孢杆菌种子菌剂N4按重量比为1.5:1:1.5混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖14g、蔗糖8g、蛋白胨6g、酵母膏6g、磷酸二氢钾2g、碳酸钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基V，灭菌后，加入相当于发酵罐培养基体积9％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；扩繁培养条件为：罐压0.5MPa，罐温34℃，空气流量为0.3v/v/min，搅拌器转速为190rpm，扩繁培养23小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖13g、麦芽粉8g、蛋白胨6g、酵母膏6g、硫酸铵2g、二水氯化钙3g、蒸馏水1L配制出的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于按照发酵罐培养基体积7％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；扩繁培养条件为：罐压0.9MPa，罐温46℃，空气流量为0.9v/v/min，搅拌器转速为190rpm，扩繁培养74小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
c、将Y1、Y2按体积比为10:1.5混合均匀后，经膜滤浓缩9倍，加入由沸石粉、玉米粉按1:1.5的重量比配制出的分散剂，进一步干燥得到固态产品，即得。
实施例6
本发明的液态生物菌肥，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌15份、地衣芽孢杆菌15份、胶冻样芽孢杆菌15份、淡紫拟青霉5份、花生麸浸出液20份、胺鲜酯20份、复硝酚钠20份、萘乙酸钠20份；花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按2.5:4:5的质量比混合，然后加入原物料总质量30％的发酵菌剂发酵30天，即得花生麸浸出液；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
本发明的液态生物菌肥的制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按照重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
其中，本发明的种子菌剂的制备方法为：
1)将胶冻样芽孢杆菌接种于用蛋白胨7g、牛肉浸取物5g、NaCl 7g、琼脂20g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.0的培养基I中，在40℃下，摇床震荡培养3天，震荡速度为200rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl 7g、牛肉膏12g、蛋白胨12g、琼脂22g、蒸馏水1.2L配制出的；pH为7.2的培养基II中，在32℃下，摇床震荡培养15小时，震荡速度为180rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl 7g、牛肉膏12g、蛋白胨12g、琼脂25g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.2的培养基中III，在32℃下，摇床震荡培养28小时，震荡速度为300rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉接种于用马铃薯300g、葡萄糖30g、琼脂20g、蒸馏水1.2L配制出的培养基IV中，在48℃下，摇床震荡培养75小时，震荡速度为300rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N4；
各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：
a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、地衣芽孢杆菌种子菌剂N3按重量比为1.5:3:1混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖15g、蔗糖10g、蛋白胨7g、酵母膏7g、磷酸二氢钾3g、碳酸钙3g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.0的培养基V，灭菌后，加入相当于发酵罐培养基体积10％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；扩繁培养条件为：罐压0.6MPa，罐温35℃，空气流量为0.5v/v/min，搅拌器转速为200rpm，扩繁培养24小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖15g、麦芽粉10g、蛋白胨7g、酵母膏7g、硫酸铵3g、二水氯化钙3g、蒸馏水1.2L配制出的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积8％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；扩繁培养条件为：罐压1MPa，罐温47℃，空气流量为1.0v/v/min，搅拌器转速为200rpm，扩繁培养70小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
c、将Y1、Y2按体积比比为10:1.5混合均匀后，经膜滤浓缩10倍，加入由沸石粉、玉米粉按1:1的重量比配制出的分散剂，进一步干燥得到固态产品，即得。
实施例7
堆肥处理方法：设置2个处理，3个重复的试验。
处理1为鸡粪常规发酵，处理2为试用本发明实施例4所得的液态生物菌肥进行鸡粪发酵。将10m3的鸡粪平均分为6份，其中3份用作常规发酵，3份加入本发明所得的液态生物菌肥进行鸡粪发酵。将鸡粪在水泥地上均匀铺开，取生物有机肥发酵剂100kg，用自来水稀释100倍，放置24h后搅拌均匀，将其均匀喷洒在鸡粪上，用铁铲搅拌，按由多到少的原则，即先将菌种稀释液倒入少量发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块，然后再搅拌好的少量发酵原料倒入剩余发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块。将混合后的发酵原料堆肥发酵，每天检测温度和发酵情况，并且记录羽毛的发酵、分解情况。处理1组中的鸡粪按照正常发酵流程进行发酵，并同时记录温度和羽毛发酵、分解情况。
堆肥检测方法：将处理1和处理2的鸡粪分别粉碎后过0.5mm筛，取约0.5kg，放入样品袋中贴好标签以备化验。按照农业行业标准NY525-2012《有机肥料》化验鸡粪中的有机质、氮、总养分(氮+五氧化二磷+氧化钾)、五氧化二磷、氧化钾等养份含量。
表1处理1和处理2各项指标对比
由表1可知：1)发酵时间比较：试验结果表明，利用本发明所得的液态生物菌肥发酵处理的发酵过程明显缩短。常规堆肥发酵需要7d时间，而本发明所得液态生物菌肥能快速发酵起温，环境温度在0℃以上时，2天温度可升至60℃以上，与市场普通发酵剂相比可以缩短发酵周期2-5天。最高温度能达到75℃，可以有效去除病原微生物、虫卵、杂草种子；
2)常规堆肥发酵基本无法将鸡粪中的羽毛进行分解，对后续生产生物肥有较大的影响，而使用本发明所得的液态生物菌肥进行发酵后，鸡粪中的羽毛能够大部分降解，解决生产难点；
3)使用本发明所得的液态生物菌肥进行发酵的处理2，堆肥总养分损失少，腐殖质含量高，钾元素含量增高明显。与常规发酵处理1相比其总养分能提高2％以上，总有机质提高4％以上。

Claims (10)

1.一种液态生物菌肥，其特征在于，包括以下重量份的原料：枯草芽孢杆菌5-15份、地衣芽孢杆菌5-15份、胶冻样芽孢杆菌5-15份、淡紫拟青霉1-5份、花生麸浸出液10-20份。
2.根据权利要求1所述的液态生物菌肥，其特征在于，还包括以下重量份的原料：胺鲜酯15-20份、复硝酚钠15-20份、萘乙酸钠15-20份。
3.根据权利要求1所述的液态生物菌肥，其特征在于，所述的花生麸浸出液的制备方法包括以下步骤：将红糖、花生麸、水按0.5-1.5:2-4:3-5的质量比混合，然后加入原物料总质量20-30％的发酵菌剂发酵25-30天，即得；所述的发酵菌剂包括保藏编号为CICC.NO.10888的解淀粉芽孢杆菌K1、保藏编号为CICC.NO.10073的枯草芽孢杆菌D1、保藏编号为CICC.NO.10090的枯草芽孢杆菌D2、保藏编号为CICC.NO.10037的地衣芽孢杆菌S1、保藏编号为CICC.NO.10092的地衣芽孢杆菌S2、保藏编号为ACCC.NO.30346的嗜热侧孢霉T1。
4.根据权利要求2所述的液态生物菌肥，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
A、将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、淡紫拟青霉菌种分别单独培养，获得各自的种子菌剂，然后将各种子菌剂按照重量份混合后进行扩繁培养获得最终的生物发酵菌剂；
B、将步骤A得到的生物发酵菌剂与花生麸浸出液混合均匀后，再按重量份添加胺鲜酯、复硝酚钠、萘乙酸钠，搅拌均匀，即得。
5.根据权利要求4所述的液态生物菌肥，其特征在于，所述的种子菌剂的培养方法包括以下步骤：
1)将胶冻样芽孢杆菌K1接种于用蛋白胨、牛肉浸取物、NaCl、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.0的培养基I中，在35-40℃下，摇床震荡培养1-3天，震荡速度为100-200rpm，得到胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1；
2)将枯草芽孢芽孢杆菌接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基II中，在28-32℃下，摇床震荡培养10-15小时，震荡速度为120-180rpm，得到枯草芽孢杆菌种子菌剂N2；
3)将地衣芽孢杆菌接种于用NaCl、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水配置出的pH为7.2的培养基中III，在28-32℃下，摇床震荡培养20-28小时，震荡速度为100-300rpm，得到地衣芽孢杆菌种子菌剂N3；
4)将淡紫拟青霉接种于用马铃薯、葡萄糖、琼脂、蒸馏水配置出的培养基IV中，在42-48℃下，摇床震荡培养70-75小时，震荡速度为100-300rpm，得到淡紫拟青霉种子菌剂N4。
6.根据权利要求5所述的液态生物菌肥，其特征在于：
所述的培养基I中各原料的重量份配比为：蛋白胨3-7、牛肉浸取物2-5、NaCl 3-7、琼脂10-20、蒸馏水800-1200；
所述的培养基II中各原料的重量份配比为：NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂18-22、蒸馏水800-1200；
所述的培养基III中各原料的重量份配比为：NaCl 3-7、牛肉膏8-12、蛋白胨8-12、琼脂15-25、蒸馏水800-1200；
所述的培养基IV中各原料的重量份配比为：马铃薯100-300、葡萄糖10-30、琼脂15-20、蒸馏水800-1200。
7.根据权利要求4所述的液态生物菌肥，其特征在于，所述的各种子菌剂混合后的扩繁培养包括以下步骤：
a、将胶冻样芽孢杆菌种子菌剂N1、枯草芽孢杆菌种子菌剂N2、地衣芽孢杆菌种子菌剂N3按照重量比为0.5-1.5:1-3:0.5-1.5混合均匀得混合物N；在发酵罐中加入用葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母膏、磷酸二氢钾、碳酸钙、蒸馏水制成的pH为7.0的培养基V，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积的5-10％的混合物N作种子进行扩繁培养，得到培养物Y1；
b、在发酵罐中加入用葡萄糖、麦芽粉、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、二水氯化钙、蒸馏水配置成的pH为7.0的培养基VI，灭菌，加入相当于发酵罐培养基体积4-8％的淡紫拟青霉种子菌剂N4作种子进行扩繁培养，得到培养物Y2；
c、将Y1、Y2按照体积比为5-10:0.5-1.5混合均匀后，经膜滤浓缩5-10倍，加入分散剂，进一步干燥得到固体产品，得生物发酵菌剂。
8.根据权利要求7所述的液态生物菌肥，其特征在于：
所述的培养基V中各原料的重量份配比为：葡萄糖10-15、蔗糖5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、磷酸二氢钾1-3、碳酸钙1-3、蒸馏水800-1200；
所述的培养基VI中各原料的重量份配比为：葡萄糖10-15、麦芽粉5-10、蛋白胨2-7、酵母膏3-7、硫酸铵1-3、二水氯化钙1-3、蒸馏水800-1200。
9.根据权利要求7所述的液态生物菌肥，其特征在于：
所述的混合物N的扩繁培养条件为：罐压0.4-0.6MPa，罐温30-35℃，空气流量为0.2-0.5v/v/min，搅拌器转速为100-200rpm，扩繁培养18-24小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵；
所述的淡紫拟青霉种子菌剂N4的扩繁培养条件为：罐压0.5-1MPa，罐温43-47℃，空气流量为0.5-1.0v/v/min，搅拌器转速为150-200rpm，扩繁培养70-75小时，当培养液的OD值为OD600nm下降0.02时终止发酵。
10.根据权利要求7所述的液态生物菌肥，其特征在于：所述的步骤c中分散剂由沸石粉、玉米粉按1-2:1-2的重量比配制而成。
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