CN108102933A - 一株白黄黑链霉菌菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)菌株MS160002，其已于2017年11月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.14871。其具有很好的抗结核菌活性，在抗结核治疗研究方面具有重大意义。

Description

一株白黄黑链霉菌菌株及其应用
技术领域
本发明涉及一株海洋放线菌及其次级代谢产物在制备抗结核药物中的应用。
背景技术
结核(Tuberculosis，TB)是一种由结核杆菌感染引起的慢性传染病，几千年来一直威胁着人类健康，目前仍是世界范围内致死率最高的单一性传染病。自1942年首个抗结核药物链霉素问世以来，人们开始着眼于从微生物天然产物中寻找抗结核的有效化合物。海洋作为地球表面71％的组分，拥有着极为丰富的物质及生物资源，其中海洋微生物更是种类繁多，数量庞大，且多具有复杂奇妙的生理代谢功能，其次级代谢产物不仅能提供地球上近一半的初级生产力，还能作为一种新兴的化合物资源库，为人类疾病治疗提供更安全有效的新型药物，目前已成为研究者们开发寻找新型活性物质的重点和热点。
发明内容
本发明的目的是提供一株海洋放线菌及其次级代谢产物在制备抗结核药物中的应用。
本发明提供的化合物如式(I)所示；
本发明保护所述化合物在制备抗菌药物中的应用。所述抗菌药物为抗细菌药物和/或抗真菌药物。所述细菌为革兰氏阳性细菌，具体为金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌。所述真菌具体可为白色念珠菌。所述药物包括药学上允许的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、增效剂、添加剂和溶剂等。制备所述抗菌药物时，可将有效剂量的所述化合物与药学上允许的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、增效剂、添加剂和溶剂等混合，制成各种药用制剂。所述药物的形态可为片剂、胶囊、软胶囊、散剂、颗粒剂、细粒剂、液剂、丸剂、乳剂或悬浊剂等口服制剂，亦可为针剂(如粉剂、水剂、油剂)栓剂、软膏、硬膏、贴剂、喷雾剂、酊剂或滴眼剂等非口服制剂。这些制剂都可采用本领域技术人员熟知常用的制备方法而获得。其给药途径可为口服、经皮，静脉或肌肉注射。
菌株MS160002已于2017年11月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCCNo.14871。白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)MS160002CGMCC No.14871简称链霉菌MS160002。
本发明提供的化合物具有很好的抗结核菌活性，在抗结核治疗研究方面具有重大意义。
附图说明
图1为菌株MS160002在ISP2培养基上28℃生长15天时的菌落照片。
图2为基于16S rRNA基因序列的系统发育树。
图3为化合物的质谱图。
图4为化合物溶于CDCL3中的1H-NMR谱图。
图5为化合物于CDCL3中的13C-NMR谱图。
图6为化合物于CDCL3中的HSQC谱图。
图7为化合物于CDCL3中的COSY谱图。
图8为化合物于CDCL3中的HMBC谱图。
图9为化合物于CDCL3中的ROESY谱图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
牛型分枝杆菌(Mycobacterium bovis)：法国巴斯德研究所，保藏编号1173P2；Strain Designations:BCG JP15。结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)：ATCC编号为27294；Strain Designations:TMC 102[H37Rv]。白色念珠菌(Candida albicans)：ATCC编号为MYA-2876；Strain Designation：SC5314。铜绿假单孢菌(Pseudomonasaeruginosa)：ATCC编号为15692；Strain Designations:PA14。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)：ATCC编号为6538；Strain Designations:FDA 209。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)：参考文献Shang JL,Guo H,Li ZS,Ren B,Li ZM,Dai HQ,ZhangLX,Wang JG.2013.Synthesis and evaluation of novel sulfenamides as novel antiMethicillin-resistant Staphylococcus aureus agents.Bioorg Med Chem Lett 23(3):724-727。
实施例1
菌株MS160002的分离与鉴定
一、菌株MS160002的分离
取1g海泥样品(采集自中国南海海底沉积物)，放入装有9mL无菌水的50mL离心管中，以20KHz、100W功率超声2min，200rpm振摇2h；取1mL悬浊液，放入装有9mL无菌水的50mL离心管中，充分震荡混匀；取1mL悬浊液，放入装有9mL无菌水的50mL离心管中，充分震荡混匀；取1mL悬浊液，放入装有9mL无菌水的50mL离心管中，充分震荡混匀，置于60℃下1h，取0.2mL涂布于菌株分离培养基上，获得一株菌，将其命名为菌株MS160002。菌株分离培养基的成分如下(％均为质量百分比)：可溶性淀粉2％、L-天冬素0.05％、KNO3 0.1％、K2HPO4·H2O 0.05％、NaCl 0.05％、MgSO4·7H2O 0.05％、CaCO3 0.1％、Agar 2％和水，pH 7.2-7.5。
二、菌株MS160002的鉴定
菌株MS160002在ISP2培养基上28℃生长15天时的菌落照片(图1)，气生菌丝和基内菌丝均呈白色，孢子呈灰黑色，有少量灰褐色色素产生。菌株MS160002的16S rRNA的编码序列如序列表的序列1所示，将序列信息提交EzBioCloud数据库(EzTaxon Server version2.1)进行序列比对。菌株MS160002与模式菌株Streptomyces albiflaviniger NRRL B-1356(T)的16S rRNA的编码序列的相似性为99.86％。利用MEGA5.0软件中的邻接法生成系统发育树图(图2)(步缺值设定为1000)。根据菌落形态及序列比对的结果，菌株MS160002属于链霉菌(Streptomyces sp.)。菌株MS160002已于2017年11月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏号为CGMCC No.14871。白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)MS160002CGMCCNo.14871，简称链霉菌MS160002。
实施例2
应用白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)菌株MS160002生产制备化合物
一、种子液的制备
1、将白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)菌株MS160002接种于ISP2培养基上，28℃培养7天(使气生菌丝生长丰满)，得到菌种。
2、将菌种接种至ISP2培养基中，28℃、200rpm振荡培养3天，得到种子液。
ISP2培养基：酵母粉4g，麦芽浸提物10g，葡萄糖4g，蒸馏水1000mL，pH 7.5，115℃灭菌30min，琼脂20g。
二、发酵
将上述制备得到的种子液按5％的接种量接入MPG发酵培养基中，28℃、200rpm振荡培养7天。MPG培养基为：葡萄糖10g，稷粉20g，药媒20g，Mops 20g，蒸馏水1000mL，pH7.0，115℃灭菌30min。
三、分离纯化化合物
1、取步骤二得到的发酵体系，20℃、10000rpm离心10min，分别收集上清和沉淀。
2、取步骤1得到的沉淀，用丙酮室温静置浸提12h，20℃、10000rpm离心10min，收集上清；将剩余的沉淀再次用丙酮室温浸提12h，20℃、10000rpm离心10min，收集上清；将剩余的沉淀再次用丙酮室温浸提12h，20℃、10000rpm离心10min，收集上清；将三次浸提得到的上清与步骤1得到的上清合并，过滤去除不溶物，得到清澈的发酵液。
3、取步骤2得到的发酵液，进行常压柱层析。
常压柱层析条件：采用大孔树脂HP20层析柱(120cm×7cm)；每种流动相洗脱3L，流速为100mL/min，流动相成分依次如下：(1)以甲醇:水＝20:80(体积比)为流动相洗脱后收集洗脱液并减压蒸馏除去有机溶剂得到馏分A。(2)然后以甲醇:水＝40:60(体积比)为流动相洗脱后收集洗脱液并减压蒸馏除去有机溶剂得到馏分B。(3)然后以甲醇:水＝60:40(体积比)为流动相洗脱后收集洗脱液并减压蒸馏除去有机溶剂得到馏分C。(4)然后以甲醇:水＝80:20(体积比)为流动相洗脱后收集洗脱液并减压蒸馏除去有机溶剂得到馏分D。(5)然后以甲醇:水＝100:0(体积比)为流动相洗脱后收集洗脱液并减压蒸馏除去有机溶剂得到馏分E。
4、将馏分E用二氯甲烷：甲醇＝2:1重新溶解，过滤去除不溶物后进行凝胶柱层析。
凝胶柱层析条件：采用过羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH-20层析柱(60cm×3cm)；流动相为二氯甲烷：甲醇＝2:1,流速为5mL/min，每个流份接取60mL。洗脱后收集洗脱液并减压蒸馏除去有机溶剂得到精馏分E-1、E-2、E-3、E-4、E-5、E-6。
5、将精馏分E-2用甲醇重新溶解，过滤去除不溶物后使用反相高效液相色谱进一步分离。
反相高效液相色谱条件：采用Agilent Eclipse XDB C-8反相色谱柱(9.4mm×250mm)；流动相为乙腈或乙腈和水的混合物；洗脱时间为30min，流速为3mL/min；洗脱过程中，乙腈在流动相中的体积百分比从85％线性上升至90％；检测图谱为质谱。收集峰值的保留时间为11.28min的峰的洗脱液，减压蒸干得到化合物E-2-A。
表1高效液相色谱洗脱方法(Table1 Elution conditions of HPLC)
四、化合物的表征
1、外观：步骤三制备得到的化合物为无定形金黄色膏状固体。
2、溶解性：步骤三制备得到的化合物可溶于甲醇、丙酮和二甲基亚砜，微溶于水。
3、紫外光谱；步骤三制备得到的化合物在紫外光谱下未显示出图谱信息。
4、质谱；ESIMS：Agilent 1100 LC/MSD mass detector(Agilent，Germany)，甲醇为质谱检测时化合物溶剂。化合物E-2-A的质谱图见图3，显示其[M+H]+峰为782.6m/z。
5、核磁共振谱；化合物E-2-A溶于CDCl3中的1H-NMR谱图见图4。化合物E-2-A溶于CDCl3中的13C-NMR谱图见图5。对各个化合物的核磁共振谱进行研究并对核磁信号进行归属。化合物E-2-A的归属情况见表2。
表2化合物E-2-A的NMR数据(500Hz，Chloroform-d)
结合多谱进行化学式解析，确定化合物的化学式为：
实施例3
检测化合物抗结核分枝杆菌的活性
一、主要试剂和药品：
7H9培养基：取4.7g Middlebrook 7H9Broth培养基粉末(美国BD公司)、2mL甘油、0.5mL Tween 80溶于900mL水中，121℃，10min。使用前加入经0.22μm孔径无菌滤膜过滤灭菌的增菌剂OADC 100mL充分混合。增菌剂OADC配方(100mL)：氯化钠0.85g；牛血清蛋白BSA-V 5g；葡萄糖2g；油酸钠0.053g；catalase 0.004g。异烟肼：Sigma-Aldrich公司；利福平：Sigma-Aldrich公司。
二、抗BCG活性筛选实验：
1.将BCG接种至7H9培养基，37℃，110rpm/min培养一周，直至OD600为0.50-0.55，用7H9培养基将其稀释至OD600＝0.05-0.06(此时菌浓对应106cfu/mL)；
2.以无菌DMSO为溶剂将化合物配制为4mg/mL的母液，然后用无菌DMSO依次稀释得到浓度为4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、62.5μg/mL、31.25μg/mL的稀释液；
3.以无菌DMSO为溶剂将阳性对照药物(异烟肼)配制为80μg/mL的母液，然后用无菌DMSO依次稀释得到浓度为80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL的稀释液；
4.取96孔细胞培养板，每孔加入98微升7H9培养基；
5.取完成上述步骤的96孔细胞培养板，分组处理如下：实验组(8个孔)：分别加入2μL步骤2制备的化合物稀释液；阳性对照组(8个孔)：分别加入2μL步骤3制备的阳性对照药物稀释液；阴性对照组(8个孔)：分别加入2μL无菌DMSO。
6.37℃培养72h，使用多功能酶标仪检测并记录各孔荧光值(激发波长为480nm，散射波长为535nm)，BCG生长被抑制90％以上(荧光值低于阴性对照组90％以上)的孔所对应的化合物终浓度即定义为该化合物对BCG的最低抑菌浓度(MIC)。阳性对照异烟肼的MIC值应为0.05-0.1μg/mL。
三、抗MTB活性筛选实验：
1.将MTB接种至7H9培养基，37℃，110rpm/min培养3-4周，到达对数生长期；2.按菌株的数量取相应1倍数量的玻璃瓶加1mm玻璃珠，此为1号玻璃瓶，另取分别2倍数量的玻璃瓶，分别编号为2号和3号；3.在1号玻璃瓶内加入2mL 0.05％Tween-80/生理盐水，用接种环从斜面刮取尽量多的菌，振荡磨菌，尽量使菌块分散均匀，静置5～10min；4.取上清液转移至2号玻璃瓶中，用生理盐水将浓度调节至1个麦氏浓度；5.在3号玻璃瓶中加入7H9培养基+10％OADC，按1:10稀释第4步获得的菌液，此时菌液浓度为1ⅹ106cfu/mL；6.在96孔板中的最外圈加入200μL无菌水；7.在剩余的每孔加入100μL7H9培养基+10％OADC；8.左侧第2列再加入80μL培养基；9.第2列每孔加入20μL药物贮液；10.按照对倍稀释依次从第2列稀释至第10列，得到从128～0.5μg/mL的药液梯度，第11列为空白；11.每孔加100μL浓度1ⅹ106cfu/mL的菌液，每种指示菌占一行；12.按照步骤7、8另做一块不加药的空白板，100μL浓度1ⅹ106cfu/mL的菌液，每种指示菌占一行；13.将完成上述操作后的96孔板装入封口袋密封，置于37℃恒温恒湿环境中培养；14.第7天取出空白板，取几孔加入70μL显色剂(AlarmarBlue：5％Tween-80＝2：5)，24h后观察变色情况。如颜色变成紫红色，则可在加药板中加入等量显色剂；若空白板颜色未发生变化或变化程度较低，则继续培养，隔一段时间在其他空白孔中加显色剂观察，直至发生变色为止；15.在加药培养基中加入显色剂，继续培养24h后观察结果。完全没有变色的孔所对应的化合物终浓度即定义为该化合物对MTB的最小抑菌浓度(MIC)。
实施例4
检测化合物抗白色念珠菌的活性
一、主要试剂和药品：
RPMI Media 1640:美国Gibco公司。两性霉素B:Sigma-Aldrich公司。
二、抗白色念珠菌活性筛选实验：
1.通过血球计数板计数，用RPMI Media 1640培养基将白色念珠菌制备成1.0x104cfu/mL的菌液。分别采用以下几种白色念珠菌：野生株Candida albicans SC5314，耐药株Candida albicans 17#、G5；
2.以无菌DMSO为溶剂将化合物配制为4mg/mL的母液，然后用无菌DMSO依次稀释得到浓度为4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、62.5μg/mL、31.25μg/mL的稀释液；
3.以无菌DMSO为溶剂将阳性对照药物(两性霉素B)配制为400μg/mL的母液，然后用无菌DMSO依次稀释得到浓度为400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL、6.25μg/mL、3.125μg/mL的稀释液；
4.取96孔细胞培养板，每孔加入78μL RPMI Media 1640培养基；
5.取完成上述步骤的96孔细胞培养板，分组处理如下：实验组(8个孔)：分别加入2μL步骤2制备的化合物稀释液；阳性对照组(8个孔)：分别加入2μL步骤3制备的阳性对照药物稀释液；阴性对照组(8个孔)：分别加入2μL无菌DMSO。
6.37℃培养16h，使用多功能酶标仪检测并记录各孔OD600，细菌生长被抑制90％以上(OD600低于阴性对照组90％以上)的孔所对应的化合物终浓度即定义为该化合物对该菌的最低抑菌浓度(MIC)。阳性对照两性霉素B的MIC值应为1.25μg/mL。
实施例5
检测化合物抗细菌的活性
一、主要试剂和药品：
MHB培养基：称取24克Mueller-Hinton Broth干粉，溶解于1000mL蒸馏水，调pH至7.2，121℃灭菌20min。Mueller-Hinton Broth：北京奥博星生物技术有限责任公司。万古霉素：美国Amresco公司。环丙沙星：购自美国Amresco公司。
二、抗细菌活性筛选实验：
1.通过血球计数板计数，用MHB培养基将细菌制备成3×105cfu/mL的菌液。分别采用以下几种细菌：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，SA)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)、铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)；
2.以无菌DMSO为溶剂将化合物配制为4mg/mL的母液，然后用无菌DMSO依次稀释得到浓度为4mg/mL、2mg/mL、1mg/mL、500μg/mL、250μg/mL、125μg/mL、62.5μg/mL、31.25μg/mL的稀释液；
3.以无菌DMSO为溶剂将阳性对照药物(万古霉素：在对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行检测时作为阳性对照药物、环丙沙星：在对铜绿假单孢菌进行检测时作为阳性对照药物)配制为80μg/mL的母液，然后用无菌DMSO依次稀释得到浓度为80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、1.25μg/mL、0.625μg/mL的稀释液；
4.取96孔细胞培养板，每孔加入78μL MHB培养基；
5.取完成上述步骤的96孔细胞培养板，分组处理如下：实验组(8个孔)：分别加入2μL步骤2制备的化合物稀释液；阳性对照组(8个孔)：分别加入2μL步骤3制备的阳性对照药物稀释液；阴性对照组(8个孔)：分别加入2μL无菌DMSO。
6.37℃培养16h，使用多功能酶标仪检测并记录各孔OD600，细菌生长被抑制90％以上(OD600低于阴性对照组90％以上)的孔所对应的化合物终浓度即定义为该化合物对该菌的最低抑菌浓度(MIC)。阳性对照万古霉素的MIC值应为0.625μg/mL，环丙沙星的MIC值应为0.03125μg/mL。化合物抗菌活性检测结果见表3。
表3化合物MS160002-E-2-A抗菌活性筛选结果
[a]Isoniazid[b]Amphotericin B[c]Vancomycin[d]Ciprofloxacin
实施例6
MTT法检测化合物细胞毒性
一、主要实验试剂及材料：
RPMI Media 1640:美国Gibco公司。使用前加10％的FBS血清，600微升双抗(卡那霉素、氨苄青霉素)，0.17微升β-巯基乙醇。MTT染料：活细胞染料，采用PBS缓冲液将其溶解为5mg/mL，0.22μm无菌滤膜过滤除菌。
二、MTT法检测化合物细胞毒性实验：
1.细胞复苏：从液氮罐中取1mL冻存管中的细胞Thp-1，加RPMI Media 1640复苏，RPMI Media 1640使用前加10％的FBS血清，600μL双抗(卡那霉素、氨苄青霉素)，0.17μLβ-巯基乙醇。连续传代培养两次直至细胞状态稳定；2.细胞培养与消化：将细胞培养至大概能铺满80％的培养皿后，用PBS缓冲液将细胞洗两次，加2mL胰酶细胞消化液，置于37℃培养箱培养一段时间，实时观察细胞形态，待细胞变为圆形，加4mL含10％的FBS血清的DMEM细胞培养基，轻轻吹打，使细胞充分悬浮。将细胞悬液转移至15mL离心管，800rpm/min离心5min；3.细胞计数：离心后弃上清，加新鲜培养基重悬，用血球计数板测定细胞浓度，将细胞浓度调节至5×104cfu/mL；4.细胞铺板：将步骤3中所得浓度的细胞悬液铺至96孔板中，每孔100μL，置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h，直至细胞贴壁；5.加待测样品：弃原培养基，加入新鲜1640培养基，并加入1μL梯度稀释的待测化合物，DMSO作为阴性对照，置于37℃，5％CO2培养箱中培养24h；6.MTT染色：弃原培养基，加入新鲜1640培养基，并加入15μL MTT染液，置于37℃，5％CO2培养箱中培养4h；7.结果检测：弃原培养基，每孔加150μL DMSO，置于摇床上震荡10min，待染色结晶物充分溶解，使用多功能酶标仪读取OD570吸光值。化合物细胞毒性实验结果见表4，通过模拟细胞生长抑制曲线，推理公式，计算得该化合物的半抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration,IC50)约为18.56μg/mL。
表4化合物MS160002-E-2-A细胞毒性实验结果
样品浓度(μg/mL) OD570 细胞存活率(％)
5 0.847 73.46
1.25 0.770 66.78
0.3125 0.730 63.31
0.078 1.000 86.73
0.0195 1.215 105.37
0.0049 1.317 114.22
对照组 1.153 100
序列表
<110> 中国科学院微生物研究所
<120> 一株白黄黑链霉菌菌株及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1410
<212> DNA/RNA
<213> 白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)
<400> 1
cttacacatg cagtcgaacg atgaaccggt ttcggccggg gattagtggc gaacgggtga 60
gtaacacgtg ggcaatctgc cctgcactct gggacaagcc ctggaaacgg ggtctaatac 120
cggatacgac tgccgaccgc atggtctggt ggtggaaagc tccggcggtg caggatgagc 180
ccgcggccta tcagcttgtt ggtggggtga tggcctacca aggcgacgac gggtagccgg 240
cctgagaggg cgaccggcca cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca 300
gcagtgggga atattgcaca atgggcgcaa gcctgatgca gcgacgccgc gtgagggatg 360
acggccttcg ggttgtaaac ctctttcagc agggaagaag cgcaagtgac ggtacctgca 420
gaagaagcgc cggctaacta cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggc gcaagcgttg 480
tccggaatta ttgggcgtaa agagctcgta ggcggcttgt cgcgtcggat gtgaaagccc 540
ggggcttaac tccgggtctg cattcgatac gggcaggcta gagttcggta ggggagatcg 600
gaattcctgg tgtagcggtg aaatgcgcag atatcaggag gaacaccggt ggcgaaggcg 660
gatctctggg ccgatactga cgctgaggag cgaaagcgtg gggagcgaac aggattagat 720
accctggtag tccacgccgt aaacgttggg aactaggtgt gggcgacatt ccacgttgtc 780
cgtgccgcag ctaacgcatt aagttccccg cctggggagt acggccgcaa ggctaaaact 840
caaaggaatt gacgggggcc cgcacaagcg gcggagcatg tggcttaatt cgacgcaacg 900
cgaagaacct taccaaggct tgacatacac cggaaaactc tggagacagg gtcccccttg 960
tggtcggtgt acaggtggtg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1020
gtcccgcaac gagcgcaacc cttgttctgt gttgccagca tgcctttcgg ggtgatgggg 1080
actcacagga gactgccggg gtcaactcgg aggaaggtgg ggacgacgtc aagtcatcat 1140
gccccttatg tcttgggctg cacacgtgct acaatggccg gtacaatgag ctgcgaagcc 1200
gtgaggtgga gcgaatctca aaaagccggt ctcagttcgg attggggtct gcaactcgac 1260
cccatgaagt cggagtcgct agtaatcgca gatcagcatt gctgcggtga atacgttccc 1320
gggccttgta cacaccgccc gtcacgtcac gaaagtcggt aacacccgaa gccggtggcc 1380
caacccttgt ggagggagcc gtcgaaggtg 1410

Claims (10)

1.一株白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)菌株MS160002CGMCCNo.14871。
2.一种化合物的制备方法，其特征在于，包括：
将白黄黑链霉菌(Streptomyces albiflaviniger)菌株MS160002接种于ISP2固体培养基上，28℃培养7天，得到菌种；
将菌种接种至ISP2培养基中，28℃、200rpm振荡培养3天，得到种子液；
将种子液按5％的接种量接入MPG发酵培养基中，28℃、200rpm振荡培养7天，得发酵体系；
将发酵体系于20℃、10000rpm离心10min，合并上清和沉淀提取液得发酵液；
将发酵液以甲醇:水＝100:0(体积比)为流动相进行常压柱层析收集洗脱液并减压蒸馏得到馏分；
将馏分用二氯甲烷：甲醇＝2:1重新溶解，过滤去除不溶物后进行凝胶柱层析，收集洗脱液并减压蒸馏得到精馏分。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的ISP2培养基为：，琼脂20g,酵母粉4g，麦芽浸提物10g，葡萄糖4g，蒸馏水1000mL，pH 7.5，115℃灭菌30min。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的MPG培养基为：葡萄糖10g，稷粉20g，药媒20g，Mops 20g，蒸馏水1000mL，pH7.0，115℃灭菌30min。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的沉淀提取液为将沉淀用丙酮室温静置浸提12h，20℃、10000rpm离心10min。
6.一种化合物，其特征在于具有如下化学式：
7.根据权利要求6所述的化合物，其在制备治疗或预防抗结核分枝杆菌药物中的应用。
8.根据权利要求6所述的化合物，其在制备治疗或预防抗白色念珠菌药物中的应用。
9.根据权利要求6所述的化合物，其在制备治疗或预防抗细菌药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的化合物，其特征在于，所述的细菌包括：金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌。
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