CN108094208B - 一种北川驴蹄草叶片组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于草本植物繁殖技术领域，公开了一种北川驴蹄草叶片组培快繁方法，通过消毒条件、芽诱导增殖、生根和移栽试验探索叶片快繁的最佳无菌培养条件；70％乙醇1min+0.1％升汞消毒处理叶片30s，消毒效果最好，外植体污染率仅为5％，存活率可达80％；采用2,4‑D和6‑BA时，MS+2mg·L‑16‑BA+1mg·L‑12,4‑D中不定芽诱导效果最好，平均芽数达1.67个；组培苗在培养基1/2MS+0.1mg·L‑1NAA上生根培养，生根率可达45％，生根条数可达2‑3；移栽基质筛选试验中，腐殖土：蛭石＝1:1条件下北川驴蹄草组培苗生长效果最好，成活率达48.7％。

Description

一种北川驴蹄草叶片组培快繁方法
技术领域
本发明属于草本植物繁殖技术领域，尤其涉及一种北川驴蹄草叶片组培快繁方法。
背景技术
北川驴蹄草(Caltha dysosmoides)多年生草本植物，有须根。茎不分枝。叶全部基生或同时茎生，茎生叶互生，叶片不分裂，稀茎上部叶掌状分裂，叶缘具细密锯齿，叶柄基部具鞘。花梗弯垂，花单独生于茎顶端或2朵组成简单的单歧聚伞花序。萼片5片，花瓣状，腥红色，倒卵形或椭圆形，脱落。花瓣不存在，雄蕊多数，花药椭圆形，药隔宽大扁平，花丝狭线形。心皮少数至多数，具短柄，顶端渐狭成短花柱；胚珠多数，成二列生子房腹缝线上。蓇葖果开裂。种子椭圆球形，种皮光滑。该物种存在高比例的胚胎败育、种子萌发率低等现象，因此，种子繁殖困难。
综上所述，现有技术存在的问题是：该物种存在高比例的胚胎败育、种子萌发率低等现象，因此，种子繁殖困难。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种北川驴蹄草叶片组培快繁方法。
本发明是这样实现的，一种北川驴蹄草叶片组培快繁方法，所述北川驴蹄草叶片组培快繁方法包括以下步骤：
步骤一，70％乙醇1min+0.1％升汞消毒处理叶片30s；
步骤二，采用2,4-D和6-BA时，MS+2mg·L-1 6-BA+1mg·L-1 2,4-D芽诱导增殖培养；
步骤三，组培苗在培养基1/2MS+0.1mg·L-1NAA上生根培养；
步骤四，腐殖土：蛭石＝1:1条件下北川驴蹄草组培苗生长；
步骤五，有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗3-5d，后揭开封口膜，用镊子轻轻夹出小苗，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3-5min；用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，保湿遮荫。
进一步，所述培养基中附加3％蔗糖、0.7％琼脂粉和0.05％活性炭，pH5.8，按植物组织培养方法配制和灭菌。
进一步，培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度为1500～2000lx。
进一步，所述保湿遮荫后需要1周再浇水1次，15d喷施1次营养液，常规管理。
本发明的另一目的在于提供一种采用所述北川驴蹄草叶片组培快繁方法的北川驴蹄草。
本发明以北川驴蹄草叶片为外植体，通过不定芽诱导试验探索北川驴蹄草叶片再生途径的最佳无菌培养条件；通过消毒条件、芽诱导增殖、生根和移栽试验探索叶片快繁的最佳无菌培养条件；70％乙醇1min+0.1％升汞消毒处理叶片30s，消毒效果最好，外植体污染率仅为5％，存活率可达80％；采用2,4-D和6-BA时，MS+2mg·L-1 6-BA+1mg·L-1 2,4-D中不定芽诱导效果最好，平均芽数达1.67个。组培苗在培养基1/2MS+0.1mg·L-1NAA上生根培养，生根率可达45％，生根条数可达2-3。移栽基质筛选试验中，腐殖土：蛭石＝1:1条件下北川驴蹄草组培苗生长效果最好，成活率达48.7％。
附图说明
图1是本发明实施例提供的北川驴蹄草叶片组培快繁方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的北川驴蹄草叶片组培快繁方法包括以下步骤：
S101：70％乙醇1min+0.1％升汞消毒处理叶片30s；
S102：采用2,4-D和6-BA时，MS+2mg·L-1 6-BA+1mg·L-1 2,4-D芽诱导增殖培养；
S103：组培苗在培养基1/2MS+0.1mg·L-1 NAA上生根培养；
S104：腐殖土：蛭石＝1:1条件下北川驴蹄草组培苗生长；
S105：有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗3-5d，后揭开封口膜，用镊子轻轻夹出小苗，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3-5min；再用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，保湿遮荫。
下面结合试验对本发明的应用原理作进一步的描述。
(1)外植体消毒
70％乙醇1min+0.1％升汞消毒处理叶片30s，消毒效果最好，外植体污染率仅为5％，存活率可达80％。
试验方法：
70％乙醇1min+0.1％升汞
种子洗净后，用自来水清洗干净，晾干，备用。置于超净工作台中，用70％乙醇处理后和0.1％升汞溶液分别处理30s、1min、2min、3min，无菌水冲洗8次，接种。记录种子污染率和存活率。
试验结果：
0.1％升汞作为消毒剂
0.1％升汞作为最常用的消毒剂之一，在本试验中对北川驴蹄草种子消毒效果较好，在处理1min、2min、3min下均未出现污染情况，仅30s处理的种子的污染率为5.00％。0.1％升汞对叶片存活率也有明显影响，处理时间1min、2min、3min的叶片两个月内未形成愈伤组织的个体较多。
Figure BDA0001527132900000051
(2)芽诱导增殖培养
采用2,4-D和6-BA时，MS+2mg·L-1 6-BA+1mg·L-1 2,4-D中不定芽诱导效果最好，平均芽数达1.67个。
Figure BDA0001527132900000052
(3)组培苗的生根培养
组培苗在培养基1/2MS+0.1mg·L-1 NAA上生根培养，生根率可达88.3％，生根条数可达2-3条。
长势良好的组培苗转入添加0.1mg·L-1 NAA的1/2MS固体培养基培养7天后，芽基部开始形成白色凸点，培养20天长出较多的白色不定根，生根率可达45％，生根条数可达2-3条，植株生长健壮，发育良好。
NAA/(mg·L<sup>-1</sup>) 生根率/％ 平均根数/条
0.05 11 1.2
0.1 45 2.5
0.2 22 2.2
0.3 15 1.2
(4)培养条件
以上所述培养基中均附加3％蔗糖、0.7％琼脂粉和0.05％活性炭，pH5.8，按植物组织培养常规方法配制和灭菌。培养温度为(25±2)℃，光照时间12h/d，光照强度为1500～2000lx。
(5)炼苗与移栽
移栽基质筛选试验中，腐殖土：蛭石＝1:1条件下北川驴蹄草组培苗生长效果最好，成活率达48％。
将有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗3-5d，后揭开封口膜，用镊子轻轻夹出小苗，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3-5min，然后再用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，适当保湿遮荫。1周后再浇水1次，15d喷施1次营养液，进行常规管理。10d后苗高可伸长2cm。30d后，苗的成活率达到48.7％，新根发早，根系发达、粗壮，植株生长良好。
Figure BDA0001527132900000071
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种北川驴蹄草叶片组培快繁方法，其特征在于，所述北川驴蹄草叶片组培快繁方法包括以下步骤：
步骤一，70％乙醇处理1min+0.1％升汞消毒处理叶片30s；
步骤二，采用2,4-D和6-BA时，MS+2mg·L-16-BA+1mg·L-12,4-D上进行芽诱导增殖培养；
步骤三，组培苗在培养基1/2MS+0.1mg·L-1NAA上生根培养；
步骤四，腐殖土：蛭石＝1:1条件下北川驴蹄草组培苗生长；
步骤五，有生根组培苗的培养瓶放置于室温自然光照条件下炼苗3-5d，后揭开封口膜，用镊子轻轻夹出小苗，在自来水下冲洗干净基部残留的培养基，用0.1％的多菌灵溶液消毒3-5min；用清水洗净，栽种到预先消毒处理过的基质中，基质用营养钵分装，每钵栽种1株，浇水淋透，保湿遮荫；
上述培养基中附加3％蔗糖、0.7％琼脂粉和0.05％活性炭，pH5.8，按植物组织培养方法配制和灭菌；
培养温度为25±2℃，光照时间12h/d，光照强度为1500～2000lx；
所述保湿遮荫后需要1周再浇水1次，15d喷施1次营养液，常规管理。
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