CN108085366B - 一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法 - Google Patents

一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108085366B
CN108085366B CN201711320971.4A CN201711320971A CN108085366B CN 108085366 B CN108085366 B CN 108085366B CN 201711320971 A CN201711320971 A CN 201711320971A CN 108085366 B CN108085366 B CN 108085366B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
primer
pair
primers
upstream
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201711320971.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108085366A (zh
Inventor
杨天燕
张楠
孟玮
高天翔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Ocean University ZJOU
Original Assignee
Zhejiang Ocean University ZJOU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Ocean University ZJOU filed Critical Zhejiang Ocean University ZJOU
Priority to CN201711320971.4A priority Critical patent/CN108085366B/zh
Publication of CN108085366A publication Critical patent/CN108085366A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108085366B publication Critical patent/CN108085366B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法，解决的技术问题是提供一种扩增江鳕线粒体DNA全序列的方法，有助于解决江鳕鱼类种质混杂问题，为种质保护、合理利用以及种质的生物多样性研究提供技术支撑，并且本发明方法操作简单，易于掌握，准确性高。

Description

一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法
技术领域
本发明涉及一种分子生物技术领域，尤其涉及一种能够一次性扩增出江鳕线粒体基因组、通过测序拼接能够快速获得其基因组全序列、具有简便、快捷、高效特点的江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及设计和扩增方法。
背景技术
江鳕(Lota lota Linnaeus,1758)，俗称山鲶鱼、山怀子，隶属于鳕形目(Gadiformes)、鳕科(Gadidae)、江鳕属(Lota)，是鳕科中唯一的淡水鱼类。江鳕主要分布在北纬40°以北的欧洲、亚洲和北美洲的内陆湖泊和缓流河中，是北极淡水区冷水性肉食鱼类。在我国主要分布于黑龙江水系、鸭绿江支流和额尔齐斯河水系。
近年来由于人类过度捕捞及对江鳕生活环境的改变，江鳕个体趋于低龄化、小型化，且群体数量减少，遗传多样性降低。目前关于江鳕的研究，多集中于繁殖生物学和资源生物学领域，而采用分子生物学技术对江鳕的研究不多，且多集中在线粒体部分序列的比较研究。从传统形态学角度，由于不同地理区域的江鳕形态差异较大，一直以来有各种不同的亚种分类，江鳕的亚种的划定也是鱼类学家关注的热点。鉴于江鳕分类较为混乱，分类地位尚不明确的现状，有必要从遗传学角度，健全其分类系统。
考虑到目前江鳕遗传学尤其是线粒体基因组方面的信息量有限，开展其线粒体基因组全序列的研究就显得十分必要。本研究江鳕样本采集自美国五大湖区，其扩增的方法和引物未见报道。本发明解决的技术问题是提供一种扩增江鳕线粒体DNA全序列的方法，有助于解决江鳕鱼类种质混杂问题，为种质保护、合理利用以及种质的生物多样性研究提供技术支撑。中国专利局于2017年9月29日公开了一种蜘蛛线粒体基因组全序列扩增引物及扩增方法的发明授权，授权公开号：CN104531688B，该发明采用提取蜘蛛基因组的总DNA，通过线粒体基因组DNA的长PCR(L-PCR)扩增和测序对蜘蛛进行鉴定，同样是采用DNA技术对生物进行鉴定，但其仅对蜘蛛线粒体基因组进行全序列扩增，无法解决目前没有能够对江鳕进行线粒体基因组全序列扩增的问题。
发明内容
为解决上述目前集中在线粒体部分序列的比较研究，没有能够对江鳕进行线粒体基因组全序列扩增的问题，提供了一种能够一次性扩增出其线粒体基因组、通过测序拼接能够快速获得其基因组全序列、具有简便、快捷、高效特点的江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及设计和扩增方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物的设计方法，从Genbank数据库中下载江鳕近缘物种的线粒体基因组全序列，通过对这些序列进行多重比对，找出比较保守的区域以及变异较大的区域，在相对保守的区域设计28对引物。
一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物，所述江鳕线粒体基因组全序列扩增引物包括二十八对引物，其中
第一对引物：
上游引物1如SEQ ID NO.1所示：5’-ACACTGAAGATGTTAAGATG-3’；
下游引物1如SEQ ID NO.2所示：5’-TTCACAGGGTAAGCTGACGA-3’；
第二对引物：
上游引物2如SEQ ID NO.3所示：5’-ACCCACCTAGAGGAGCCTGT-3’；
下游引物2如SEQ ID NO.4所示：5’-TAGGCTGTCTTGGAGTAGCT-3’；
第三对引物：
上游引物3如SEQ ID NO.5所示：5’-CTCGTACCTTTTGCATCATG-3’；
下游引物3如SEQ ID NO.6所示：5’-CCGTTAAACTTAGAGTCACAGG-3’；
第四对引物：
上游引物4如SEQ ID NO.7所示：5’-TTAACCCTACACTGGAGTGC-3’；
下游引物4如SEQ ID NO.8所示：5’-CTTCGGTCCTTTCGTACTAG-3’；
第五对引物：
上游引物5如SEQ ID NO.9所示：5’-GGATAACAGCGCAATCCCCT-3’；
下游引物5如SEQ ID NO.10所示：5’-GCCTAGACTGACTTCATAAGA-3’；
第六对引物：
上游引物6如SEQ ID NO.11所示：5’-ACCCTCGCCTTAACACTATG-3’；
下游引物6如SEQ ID NO.12所示：5’-GAAGTGGTGTAGTGGAAGCA-3’；
第七对引物：
上游引物7如SEQ ID NO.13所示：5’-AAGGGCCACTTTGATAGAGT-3’；
下游引物7如SEQ ID NO.14所示：5’-AAGGCTGGAGTTTACTGGTAT-3’；
第八对引物：
上游引物8如SEQ ID NO.15所示：5’-GGACTTGACCTAACAACAGG-3’；
下游引物8如SEQ ID NO.16所示：5’-TTTGAAGGCCCTTGGTCTAG-3’；
第九对引物：
上游引物9如SEQ ID NO.17所示：5’-CCCTATTCAGCCTGTACTTC-3’；
下游引物9如SEQ ID NO.18所示：5’-GGTATTACTATAAAGAAAAT-3’；
第十对引物：
上游引物10如SEQ ID NO.19所示：5’-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3’；
下游引物10如SEQ ID NO.20所示：5’-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3’；
第十一对引物：
上游引物11如SEQ ID NO.21所示：5’-TTACAGCCGTCCTACTACTC-3’；
下游引物11如SEQ ID NO.22所示：5’-TTCATAGTGTGTAGGCGTCG-3’；
第十二对引物：
上游引物12如SEQ ID NO.23所示：5’-TCCCACAACATTTCCTAGGC-3’；
下游引物12如SEQ ID NO.24所示：5’-AGGATAAGAATAACAGCAGGG-3；’
第十三对引物：
上游引物13如SEQ ID NO.25所示：5’-ATTGTTGCGATAGTCTCCACT-3’；
下游引物13如SEQ ID NO.26所示：5’-GAATCCCTAGATATGAAGGAC-3’；
第十四对引物：
上游引物14如SEQ ID NO.27所示：5’-TTCCCAAATGAGCCTTCTCCT-3’；
下游引物14如SEQ ID NO.28所示：5’-ACAGCTACTTCGAGAAGGGT-3’；
第十五对引物：
上游引物15如SEQ ID NO.29所示：5’-TACCTATAATACCAACAGTTGC-3’；
下游引物15如SEQ ID NO.30所示：5’-GCTTGAGTGGTAGAAGGC-3’；
第十六对引物：
上游引物16如SEQ ID NO.31所示：5’-TGATGACGAGATATTGTCCGA-3’；
下游引物16如SEQ ID NO.32所示：5’-TGGTTGGAAGCCACTTATACT-3’；
第十七对引物：
上游引物17如SEQ ID NO.33所示：5’-ATACTGACACTTCGTAGACG-3’；
下游引物17如SEQ ID NO.34所示：5’-CAAGCTTTTGAGCCGAAATC-3’；
第十八对引物：
上游引物18如SEQ ID NO.35所示：5’-TAGCCCTTCTAACCCTTGGT-3’；
下游引物18如SEQ ID NO.36所示：5’-GTCGTTCTGTTTGGTTGCCT-3’；
第十九对引物：
上游引物19如SEQ ID NO.37所示：5’-TCAACCCTTATCCCAACCCT-3’；
下游引物19如SEQ ID NO.38所示：5’-TCAGTTAAATAGGGAGGTGAG-3’；
第二十对引物：
上游引物20如SEQ ID NO.39所示：5’-ATGGCAACATGATGATTTA-3’；
下游引物20如SEQ ID NO.40所示：5’-GCACCAAGAGTTTTTGGTTCCTAAG-3’；
第二十一对引物：
上游引物21如SEQ ID NO.41所示：5’-CCTCTAATCCACCGAGAGAT-3’；
下游引物21如SEQ ID NO.42所示：5’-GTCTGCTCGTCCATGCCAT-3’；
第二十二对引物：
上游引物22如SEQ ID NO.43所示：5’-TTGGATGAGAAGGAGTAGGC-3’；
下游引物22如SEQ ID NO.44所示：5’-ACAGTGAGGCAGGAGGAAGT-3’；
第二十三对引物：
上游引物23如SEQ ID NO.45所示：5’-CCTAAACGACGAACAAGACAT-3’；
下游引物23如SEQ ID NO.46所示：5’-ATTGCGAGCTGTTAGGCTAC-3’；
第二十四对引物：
上游引物24如SEQ ID NO.47所示：5’-GCTGCCGCAACAAGCAATAT-3’；
下游引物24如SEQ ID NO.48所示：5’-CACTAGTGCGTCATTAGCAAT-3’；
第二十五对引物：
上游引物25如SEQ ID NO.49所示：5’-GACTTGAAAAACCACCGTTG-3’；
下游引物25如SEQ ID NO.50所示：5’-CTCCGATCTCCGGATTACAAGAC-3’；
第二十六对引物：
上游引物26如SEQ ID NO.51所示：5’-AGCATCCGTCCTGTACTTCT-3’；
下游引物26如SEQ ID NO.52所示：5’-CATTAGGGGAACGTAAGTGG-3’；
第二十七对引物：
上游引物27如SEQ ID NO.53所示：5’-CCACTAGCTCCCAAAGCTAGA-3’；
下游引物27如SEQ ID NO.54所示：5’-GATTTAGGATTTATGTACTCC-3’；
第二十八对引物：
上游引物28如SEQ ID NO.55所示：5’-CGTGCACTATTCCTGGCATC-3’；
下游引物28如SEQ ID NO.56所示：5’-GTGCGGATACTTGCATGTGT-3’。
一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物的扩增方法，所述江鳕线粒体基因组全序列扩增引物的扩增方法包括以下步骤：
(1)DNA抽提试剂盒法提取江鳕线粒体基因组的总DNA；
(2)采用权利要求1中所述的江鳕线粒体基因组全序列扩增引物组；
(3)以江鳕线粒体基因组DNA为模版，进行PCR扩增；
(4)回收扩增片段并进行测序及序列拼接。
作为优选，所述步骤(1)对江鳕线粒体基因组DNA进行提取时，为避免肠道内容物污染，舍去头腹部，只从其尾部提取DNA。
作为优选，步骤(3)所述PCR扩增的反应体系组成为：10×buffer 5.0μL，添加Mg2+并保持终浓度为2.0mM，2.5mM的dNTP4μL，Taq聚合酶2units，10μM的上下游引物各2μL，100g/μL的DNA模版溶液2μL，加灭菌水至终体积50μL；
PCR反应条件为：95℃预变性5min，然后94℃变性45s，恒温退火45s，72℃延伸1min，变形、退火和延伸三个步骤进行35个循环，最后72℃再延伸10min。
作为优选，所述PCR反应条件中恒温退火的温度根据引物进行调整。
作为优选，步骤(4)中回收扩增产物并测序后各序列依次首尾拼接即可得到江鳕线粒体基因组全序列。
本发明的有益效果是：
(1)本发明所提供的一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物，能够一次性扩增出其线粒体基因组，通过测序拼接能够快速获得其基因组全序列，具有便捷高效的优点；
(2)本发明所提供的一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物，引物数量少，省时省力，且节约试剂成本；
(3)本发明所提供的一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物的系统分析方法为江鳕群体遗传、种质资源保护和可持续开发利用以及鳕科鱼类乃至整个-鳕形目鱼类的系统发育研究提供了重要的分子手段及数据积累。
具体实施方式
下面结合本发明实施例对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然所描述实施例仅为本发明一部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例：
(1)江鳕样品的采集、鉴定和保存
实施例中所用江鳕样品均采自野外自然环境中，所采标本均带回实验室进行信息登记，-并通过形态学观察比较和解剖鉴定，以确定为江鳕。种类鉴定好的江鳕样品用100％的纯酒精浸泡并保存于4℃的冰箱中备用。
(2)江鳕线粒体基因组的提取
采用DNA抽提试剂盒法提取待测江鳕样品的线粒体基因组DNA，为避免肠道内容物污染，舍去其头腹部，只从其尾部剪取肌肉组织用于提取DNA。DNA提取直接采用DNA提取试剂盒进行提取，所提取的线粒体基因组DNA保存于-20℃条件下备用。
(3)江鳕线粒体基因全序列引物的设计和合成
从Genbank数据库中下载江鳕近缘物种的线粒体基因组全序列，通过对这些序列进行多重比对，找出比较保守的区域以及变异较大的区域，在相对保守的区域设计28对引物。所合成的引物如下：
第一对引物：
上游引物1如SEQ ID NO.1所示：5’-ACACTGAAGATGTTAAGATG-3’；
下游引物1如SEQ ID NO.2所示：5’-TTCACAGGGTAAGCTGACGA-3’；
第二对引物：
上游引物2如SEQ ID NO.3所示：5’-ACCCACCTAGAGGAGCCTGT-3’；
下游引物2如SEQ ID NO.4所示：5’-TAGGCTGTCTTGGAGTAGCT-3’；
第三对引物：
上游引物3如SEQ ID NO.5所示：5’-CTCGTACCTTTTGCATCATG-3’；
下游引物3如SEQ ID NO.6所示：5’-CCGTTAAACTTAGAGTCACAGG-3’；
第四对引物：
上游引物4如SEQ ID NO.7所示：5’-TTAACCCTACACTGGAGTGC-3’；
下游引物4如SEQ ID NO.8所示：5’-CTTCGGTCCTTTCGTACTAG-3’；
第五对引物：
上游引物5如SEQ ID NO.9所示：5’-GGATAACAGCGCAATCCCCT-3’；
下游引物5如SEQ ID NO.10所示：5’-GCCTAGACTGACTTCATAAGA-3’；
第六对引物：
上游引物6如SEQ ID NO.11所示：5’-ACCCTCGCCTTAACACTATG-3’；
下游引物6如SEQ ID NO.12所示：5’-GAAGTGGTGTAGTGGAAGCA-3’；
第七对引物：
上游引物7如SEQ ID NO.13所示：5’-AAGGGCCACTTTGATAGAGT-3’；
下游引物7如SEQ ID NO.14所示：5’-AAGGCTGGAGTTTACTGGTAT-3’；
第八对引物：
上游引物8如SEQ ID NO.15所示：5’-GGACTTGACCTAACAACAGG-3’；
下游引物8如SEQ ID NO.16所示：5’-TTTGAAGGCCCTTGGTCTAG-3’；
第九对引物：
上游引物9如SEQ ID NO.17所示：5’-CCCTATTCAGCCTGTACTTC-3’；
下游引物9如SEQ ID NO.18所示：5’-GGTATTACTATAAAGAAAAT-3’；
第十对引物：
上游引物10如SEQ ID NO.19所示：5’-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3’；
下游引物10如SEQ ID NO.20所示：5’-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3’；
第十一对引物：
上游引物11如SEQ ID NO.21所示：5’-TTACAGCCGTCCTACTACTC-3’；
下游引物11如SEQ ID NO.22所示：5’-TTCATAGTGTGTAGGCGTCG-3’；
第十二对引物：
上游引物12如SEQ ID NO.23所示：5’-TCCCACAACATTTCCTAGGC-3’；
下游引物12如SEQ ID NO.24所示：5’-AGGATAAGAATAACAGCAGGG-3；’
第十三对引物：
上游引物13如SEQ ID NO.25所示：5’-ATTGTTGCGATAGTCTCCACT-3’；
下游引物13如SEQ ID NO.26所示：5’-GAATCCCTAGATATGAAGGAC-3’；
第十四对引物：
上游引物14如SEQ ID NO.27所示：5’-TTCCCAAATGAGCCTTCTCCT-3’；
下游引物14如SEQ ID NO.28所示：5’-ACAGCTACTTCGAGAAGGGT-3’；
第十五对引物：
上游引物15如SEQ ID NO.29所示：5’-TACCTATAATACCAACAGTTGC-3’；
下游引物15如SEQ ID NO.30所示：5’-GCTTGAGTGGTAGAAGGC-3’；
第十六对引物：
上游引物16如SEQ ID NO.31所示：5’-TGATGACGAGATATTGTCCGA-3’；
下游引物16如SEQ ID NO.32所示：5’-TGGTTGGAAGCCACTTATACT-3’；
第十七对引物：
上游引物17如SEQ ID NO.33所示：5’-ATACTGACACTTCGTAGACG-3’；
下游引物17如SEQ ID NO.34所示：5’-CAAGCTTTTGAGCCGAAATC-3’；
第十八对引物：
上游引物18如SEQ ID NO.35所示：5’-TAGCCCTTCTAACCCTTGGT-3’；
下游引物18如SEQ ID NO.36所示：5’-GTCGTTCTGTTTGGTTGCCT-3’；
第十九对引物：
上游引物19如SEQ ID NO.37所示：5’-TCAACCCTTATCCCAACCCT-3’；
下游引物19如SEQ ID NO.38所示：5’-TCAGTTAAATAGGGAGGTGAG-3’；
第二十对引物：
上游引物20如SEQ ID NO.39所示：5’-ATGGCAACATGATGATTTA-3’；
下游引物20如SEQ ID NO.40所示：5’-GCACCAAGAGTTTTTGGTTCCTAAG-3’；
第二十一对引物：
上游引物21如SEQ ID NO.41所示：5’-CCTCTAATCCACCGAGAGAT-3’；
下游引物21如SEQ ID NO.42所示：5’-GTCTGCTCGTCCATGCCAT-3’；
第二十二对引物：
上游引物22如SEQ ID NO.43所示：5’-TTGGATGAGAAGGAGTAGGC-3’；
下游引物22如SEQ ID NO.44所示：5’-ACAGTGAGGCAGGAGGAAGT-3’；
第二十三对引物：
上游引物23如SEQ ID NO.45所示：5’-CCTAAACGACGAACAAGACAT-3’；
下游引物23如SEQ ID NO.46所示：5’-ATTGCGAGCTGTTAGGCTAC-3’；
第二十四对引物：
上游引物24如SEQ ID NO.47所示：5’-GCTGCCGCAACAAGCAATAT-3’；
下游引物24如SEQ ID NO.48所示：5’-CACTAGTGCGTCATTAGCAAT-3’；
第二十五对引物：
上游引物25如SEQ ID NO.49所示：5’-GACTTGAAAAACCACCGTTG-3’；
下游引物25如SEQ ID NO.50所示：5’-CTCCGATCTCCGGATTACAAGAC-3’；
第二十六对引物：
上游引物26如SEQ ID NO.51所示：5’-AGCATCCGTCCTGTACTTCT-3’；
下游引物26如SEQ ID NO.52所示：5’-CATTAGGGGAACGTAAGTGG-3’；
第二十七对引物：
上游引物27如SEQ ID NO.53所示：5’-CCACTAGCTCCCAAAGCTAGA-3’；
下游引物27如SEQ ID NO.54所示：5’-GATTTAGGATTTATGTACTCC-3’；
第二十八对引物：
上游引物28如SEQ ID NO.55所示：5’-CGTGCACTATTCCTGGCATC-3’；
下游引物28如SEQ ID NO.56所示：5’-GTGCGGATACTTGCATGTGT-3’。
(4)PCR扩增江鳕线粒体基因组
PCR扩增的反应体系组成为：10×buffer 5.0μL，添加Mg2+并保持终浓度为2.0mM，2.5mM的dNTP4μL，Taq聚合酶2units，10μM的上下游引物各2μL，100g/μL的DNA模版溶液2μL，加灭菌水至终体积50μL；
PCR反应条件为：95℃预变性5min，然后94℃变性45s，恒温退火45s，72℃延伸1min，变形、退火和延伸三个步骤进行35个循环，最后72℃再延伸10min。
其中，恒温退火温度如下表所示：
Figure BDA0001504768280000091
Figure BDA0001504768280000101
Figure BDA0001504768280000111
(5)PCR产物的序列测定
回收步骤(4)PCR扩增的产物，对回收产物进行拼接和测序，测序结果与GenBank上同源序列进行比较。测序结果如序列表SEQ ID NO.57所示。
并通过实施例提供方法得到江鳕线粒体基因组结构如下：
Figure BDA0001504768280000112
Figure BDA0001504768280000121
Figure BDA0001504768280000131
其中负值表示基因重叠。
序列表
<110> 浙江海洋大学
<120> 一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法
<160> 57
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 1
acactgaaga tgttaagatg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 2
ttcacagggt aagctgacga 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 3
acccacctag aggagcctgt 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 4
taggctgtct tggagtagct 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 5
ctcgtacctt ttgcatcatg 20
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 6
ccgttaaact tagagtcaca gg 22
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 7
ttaaccctac actggagtgc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 8
cttcggtcct ttcgtactag 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 9
ggataacagc gcaatcccct 20
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 10
gcctagactg acttcataag a 21
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 11
accctcgcct taacactatg 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 12
gaagtggtgt agtggaagca 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 13
aagggccact ttgatagagt 20
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 14
aaggctggag tttactggta t 21
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 15
ggacttgacc taacaacagg 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 16
tttgaaggcc cttggtctag 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 17
ccctattcag cctgtacttc 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 18
ggtattacta taaagaaaat 20
<210> 19
<211> 26
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 19
tcaaccaacc acaaagacat tggcac 26
<210> 20
<211> 26
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 20
tagacttctg ggtggccaaa gaatca 26
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 21
ttacagccgt cctactactc 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 22
ttcatagtgt gtaggcgtcg 20
<210> 23
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 23
tcccacaaca tttcctaggc 20
<210> 24
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 24
aggataagaa taacagcagg g 21
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 25
attgttgcga tagtctccac t 21
<210> 26
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 26
gaatccctag atatgaagga c 21
<210> 27
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 27
ttcccaaatg agccttctcc t 21
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 28
acagctactt cgagaagggt 20
<210> 29
<211> 22
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 29
tacctataat accaacagtt gc 22
<210> 30
<211> 18
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 30
gcttgagtgg tagaaggc 18
<210> 31
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 31
tgatgacgag atattgtccg a 21
<210> 32
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 32
tggttggaag ccacttatac t 21
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 33
atactgacac ttcgtagacg 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 34
caagcttttg agccgaaatc 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 35
tagcccttct aacccttggt 20
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 36
gtcgttctgt ttggttgcct 20
<210> 37
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 37
tcaaccctta tcccaaccct 20
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 38
tcagttaaat agggaggtga g 21
<210> 39
<211> 19
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 39
atggcaacat gatgattta 19
<210> 40
<211> 25
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 40
gcaccaagag tttttggttc ctaag 25
<210> 41
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 41
cctctaatcc accgagagat 20
<210> 42
<211> 19
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 42
gtctgctcgt ccatgccat 19
<210> 43
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 43
ttggatgaga aggagtaggc 20
<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 44
acagtgaggc aggaggaagt 20
<210> 45
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 45
cctaaacgac gaacaagaca t 21
<210> 46
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 46
attgcgagct gttaggctac 20
<210> 47
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 47
gctgccgcaa caagcaatat 20
<210> 48
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 48
cactagtgcg tcattagcaa t 21
<210> 49
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 49
gacttgaaaa accaccgttg 20
<210> 50
<211> 23
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 50
ctccgatctc cggattacaa gac 23
<210> 51
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 51
agcatccgtc ctgtacttct 20
<210> 52
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 52
cattagggga acgtaagtgg 20
<210> 53
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 53
ccactagctc ccaaagctag a 21
<210> 54
<211> 21
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 54
gatttaggat ttatgtactc c 21
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 55
cgtgcactat tcctggcatc 20
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> 引物(primer)
<400> 56
gtgcggatac ttgcatgtgt 20
<210> 57
<211> 16534
<212> DNA
<213> 测序结果(Sequencing results)
<400> 57
gttatcgtag cttaattaaa gtataatact gaagatatta agatgggccc tagaaagtcc 60
cgaaagcaca aaggtttggt cctgacttta ctatcaattc taccccaatt tacacatgca 120
agtctccgca tccccgtgag aatgccctta atgtcctgcc cggaattaag gagcaggcat 180
caggcacgtc aaatcagccc ataacgcctt gctcagccac acccctacgg gtattcagca 240
gtgataaaat ttaagccata agtgaaagct tgacttagtt agggttaaga gggccggtaa 300
aactcgtgcc agccaccgcg gttatacgag aggcccaagt tgatgaaaaa cggcgtaaag 360
cgtggttaag aaaacaagaa aaatagggcc gaacagcctc aaagcagtta tacgcattcg 420
aggccacgaa gctcaatcac gaaagtggcc ctacaaatct ctgattccac gaaagccata 480
aaacaaactg ggattagata ccccactatg tatggttgtt aacattgatg gttttatact 540
taaaccatcc gcctgggtac tacgagcatt agcttaaaac ccaaaggact tggcggtgct 600
ttagaccccc ctagaggagc ctgttctaga actgataacc cccgttaaac ctcaccatcc 660
tttgtttaac ccgcctatat accaccgtcg tcagcttacc ctgtgaaggt aaaatagtaa 720
gcataaatgg caaagccaaa aacgtcaggt cgaggtgtag cgaatgggat gggaagaaat 780
gggctacatt ctctactaca gagaatacga atggtatttt gaaaagaaat acctgaagga 840
ggatttagca gtaagtaagg aatagagcgc cctactgaaa acggccctga agcgcgcaca 900
caccgcccgt cactctctcc aaatagaccc taaatattac ctaaaatgtt ttatataata 960
aggggaggca agtcgtaaca tggtaagcgt accggaaggt gcgcttggat gaatcagagc 1020
atagccaagt tagtaaagca tctcccttac accgagaggt cgtccgtgca aatcggactg 1080
ccctgatgcc taacagctag cctcaacaat caaattttat tattgtgaaa ctaaaaactc 1140
ataatataat taaataaacc attttacccc ctaagtatgg gcgacaaaaa aggaaaaaag 1200
agcaacagat aaagtaccgc aagggaacgc tgaaaaagaa atgaaataaa ccatttaagc 1260
accgaacagc agagtttacc cctcgtacct tttgcatcat gatttagcaa gtaaactaca 1320
agcaaagagc cctttagttt gtaaccccga aactgagcga gctactccaa gacagcctac 1380
atagggcaaa cccgtctctg tggcaaaaga gtgggaagag ctttgagtag aggtgataaa 1440
cctaccgagc acagttatag ctggttgcct gagaaatgaa tagaagttca gccctctaag 1500
tctttccccc atcacccatg cttacgctaa aattgattaa ggaaactaga ggagttaatc 1560
aaaaggggta cagccctttt gataaaagaa acaactttaa caggtgaccc aagatcatat 1620
tacccaagga ttacaaatta agtgggccta aaagcagcca tcttactaga aagcgttaaa 1680
gctcaaatta gacatcatcc tcatatactg atattatatc tccctccctg ctctctacca 1740
ggctgtctta tgcccccata agaacaatta tgctaaaatg agtaataaga agaatataat 1800
tcttctccca gcacatgtgt aagtcggaac ggacctccca ccgactatta atcgacccca 1860
aacccagagg gaaataagag acatttaaca agaaaaacac ttatttttta tcgttaaccc 1920
cacacaggtg tgcccaaagg aaagactaaa agagaaggaa ggaactcggc aaacacaagc 1980
ctcgcctgtt taccaaaaac atcgcctctt gaccctaaga atataagagg tcccgcctgc 2040
cctgtgacta taagtttaac ggccgcggta ttttaaccgt gcgaaggtag cgtaatcact 2100
tgtcttttaa atgaagacct gtatgaatgg catcacgagg gcttagctgt ctcccctctc 2160
cagtcaatga aattgacctc cccgtgcaga ggcggggata attacataag acgagaagac 2220
cctgtggagc tttagaccta aggtaagtca cgtttaatat actagaataa cagtaaaaac 2280
ttagtgatgt ttatcgaagt gtctttggtt ggggcgaccg cggggtaaaa cacaaccccc 2340
atgtggaccg gggatattat ccctaatact cagagcctct actccaagta acagaaattc 2400
tgacttttct gatccggtat aaccgatcaa cgaaccgagt taccccaggg ataacagcgc 2460
aatcccctct cagagcccat atcgacgagg gggtttacga cctcgatgtt ggatcaggac 2520
atcctaatgg tgcagccgct attaagggtt cgtttgttca acgattaaag tcctacgtga 2580
tctgagttca gaccggagta atccaggtca gtttctatct atgacaagct cttttccagt 2640
acgaaaggac cgaaaaaagg gggcctatgc ctaaagcacg cccctcccct gaccgctgac 2700
acccaataaa gcggacaagg gggcttaaaa agaccccaaa aagaatgggc gtgttagagt 2760
ggcagagccc ggacagtgca aaaggcctaa gccctttcta cagaggttca agtcctctct 2820
ctaactatgg cccacgttgt gattagttat attcttaacc ccctcattta tatagtcccc 2880
gttcttctag cagtcgcctt cttgaccctt attgaacgga aggtcttagg ctacatacaa 2940
ctacggaaag ggcccaacat tgttggccct tatggccttc ttcaaccaat tgcagacggc 3000
gtaaaactat ttattaaaga acccatccga ccctcaacat cctctcccct tttgtttatt 3060
ctcgcccctg tcctagccct taccctcgcc ttaacactat gagcccccat gcccatgccc 3120
tttccggtat ccgacttaaa cctaagtatc ttgtttgtgc tcgccctttc aagcctcgct 3180
gtatactcaa tcttagggtc aggatgagcg tccaattcaa aatacgctct agtaggagcc 3240
ctccgtgctg ttgcccagac tatttcttat gaagtcagtc taggcctcat cctattaagc 3300
attattattt tttcaggggg ctttacactt caaacattca gtataaccca agaagcaaca 3360
tgacttgccc tccccgcatg acccttagcc gccatatgat atatctctac cttagcagaa 3420
acaaatcggg ccccctttga tttaactgaa ggagaatctg aactagtctc aggcttcaat 3480
gtagaatatg caggaggccc cttcgcatta tttttcttag cagaatacgc taacattctt 3540
cttataaaca ccctctccac tattttattt ttaggctcct catattcttc cacaataccc 3600
gaacttacct cattaacact cataaccaaa gcagccctcc tatctatggt cttcctgtga 3660
gtacgagctt cttacccccg attccgctac gaccaactaa tgcacctagt atgaaaaaat 3720
ttcttaccct tgactctggc actagtaatc tggcacctct ccctctcgac cgcatgtgct 3780
gggcttcccc ctcatgccta acggagttgt gcctgaagta aaggaccact ttgatagagt 3840
gaactataag ggttagagtc ccttcaactc cttagaaaaa ggggacttga acccatcctc 3900
aggagatcaa aactcctagt gcttccgcta cactactttc tagtaaagtc agctaaaata 3960
agctcttggg cccatacccc gaacatgttg gttaaattcc ttcctttact aatgaacccc 4020
tttgtcctct ccattctctt attaagcctg ggcctcggta ccacccttac tttcgcaagt 4080
tctcactggc tcttggcctg aatgggccta gaaattagta ccctggctat tattcctctt 4140
atagcccaac accaccaccc ccgtgcagta gaggctacaa caaaatattt tatcacccaa 4200
gcagcagccg ctgccctaat cttatttgcc agtacaacaa atgcttgaat tacaggacaa 4260
tgggacatta actttaatct ccacgctttc cccgcctcct tgcttaccat agccttagct 4320
ttaaaaatgg gccttgcccc cgtacacttt tggctccccg aagttctcca aggacttgac 4380
ctaacaacag gacttatctt atctacctga caaaaactag ccccctttat cttaatatgt 4440
cagattatac cagtaaactc cagccttatt accttcctcg ggattgcctc cacccttgtt 4500
ggcggctgag ggggcttaaa ccaaacacag ctacgtaaaa tcttagccta ctcatcaatt 4560
gctcaccttg gttgaatagt tttagttata cagttcaacc aacaactagc acttcttgca 4620
ttagtaattt atatccccat aaccttttca acctttataa tctttaaaac caactcgtca 4680
acaactataa atacactagc cgcctcttga gccaaaactc ctgcactcac tgccattaca 4740
cctctagtat tactttcttt aggaggacta ccccctctat caggcttcat acccaaatga 4800
atgattcttc aagagctaac aaaacaagat atcccactga ccgcctcagt cgctgcctta 4860
agtgccctat tcagcctgta cttctatctc cgcgtctcct acgctataac cctgactatt 4920
tcccctaata atcttaatgc tacaacccct tgacgactac aaacaacatc ctcaaccttg 4980
cctcttgcaa tctctacgac tatttctgcc atgctgctcc ccctagcccc cgcaacctta 5040
gctctattat ccccttaggg gcttaggata atctagacca agggccttca aagccctcag 5100
tggaggtgag aatcctccag cccctgttaa gatctgcagg acattacccc acatcttctg 5160
tatgcaaaac aaatacttta attaagctaa gaccttttct agatagaaag gcctcgatcc 5220
tttaaactct tagttaacag ctaagcactc aaaccagcga gcatccatct actttccccc 5280
gctgtaacgc ggggaagcgg gggaaagtcc cggcaaacgt ttgtttgctt cttcaggttt 5340
gcaatctgac gtgtaacacc ccaggacttg gcaagaagag ggctcaaacc tctgtatgtg 5400
gggttacaat ccaccgctta ctcagccatc ctacctgtgg caatcacccg ctgatttttc 5460
tcgaccaatc acaaagacat tggcaccctc tatctcgtat ttggtgcctg agccggcata 5520
gtcggaacag ccctaagcct gctcattcga gcagagctaa gtcaacccgg cgcactcctt 5580
ggtgacgatc agatttataa tgtaatcgtc acagcacacg ctttcgtaat aattttcttt 5640
atagtaatac cactaataat tggaggcttc ggaaactgac tagtccccct aatgatcggc 5700
gcccccgata tagcctttcc tcgtatgaac aacatgagct tctgacttct tcctccatcc 5760
ttcttgcttc tcctagcatc ctcgggggta gaagccggag ccggaacagg ttgaactgta 5820
taccctcctc tagcaggcaa tcttgctcat gctggggctt ctgttgacct tactattttc 5880
tccctgcatt tagcaggggt ctcatcaatt cttggagcaa ttaattttat taccaccatc 5940
atcaacatga aacccccagc aatctcacaa tatcaaacac cgctatttgt ctgagcagtc 6000
ctaattacag ccgtcctact actcctgtct ctccccgttt tagccgctgg tattacgata 6060
ctgctgactg atcgaaatct taatacttcc ttctttgacc ccgctggagg aggggaccca 6120
attctgtatc agcacttatt ctgattcttt ggtcaccctg aagtctacat tcttattctt 6180
ccaggctttg gaataatctc acacatcgta gcatactact cagggaaaaa agaacctttt 6240
ggttacatag gaatggtttg agctataatg gccattggcc ttcttggctt tatcgtgtga 6300
gctcatcata tatttacggt gggaatagat gttgatacac gagcctactt tacatcagca 6360
actataatta ttgccattcc aacaggcgta aaagtcttca gctgactagc aactctgcac 6420
ggaggctcaa ttaaatgaga aacaccctta ctctgagccc tcgggtttat tttcctgttc 6480
acagtaggag gattaacagg cattgtccta gccaactcct ccctagatat tgttcttcat 6540
gacacatatt acgtggtcgc ccatttccat tatgtcctct ctataggagc cgtctttgct 6600
atcatagcag cttttgttca ctgattcccg ctgtttacag gctatactct ccatgacacc 6660
tgaacaaaaa tccactttgg agtgatattt gtaggagtta atcttacatt cttcccacaa 6720
cattttctag gccttgcagg catgccccga cggtactcag actaccccga cgcctacaca 6780
ctatgaaata cagtttcctc tatcggctcc ctaatctcac tgatagccgt aattatattc 6840
ctatttatcc tatgagaagc tttcgctgct aaacgggaag tactggcagt agaactaact 6900
atgaccaacg tcgaatgact acacggatgt cctccacctt atcacacatt tgaagaaccc 6960
gccttcgtcc aagtccaaac ccgttaaccc gagaaaggag ggaatcgaac ccccatctac 7020
tggtttcaag ccaatcacat gaccactctg tcactttctt catgggccac tggtgaaaaa 7080
tcacactgcc ttgtcaaggc agaattgtgg gttaaaaccc cgcgtagccc tagcgaaagc 7140
tagtatggca cacccctcac aactaggatt ccaagacgcg gcatcacccg taatagaaga 7200
gttactacat ttccacgacc acgccctaat aattgtattt ctaattagca cccttgtact 7260
ttacattatt gttgcgatag tctccactaa attaacaaat aaatatattt tagactccca 7320
agaaattgaa atcatctgaa cagtactccc tgctgttatt cttatcctaa ttgcacttcc 7380
ctccctacga attctttatc ttatagacga aatcaatgac ccccacctca ccattaaagc 7440
aatgggccac caatgatact gaagctatga atacaccgat tatgaagacc tcggctttga 7500
ttcttatatg atccccacac aagacctggc ccctggacaa ttccgcctat tagaagcaga 7560
tcaccgcata gttgtcccag ttgagtcccc catccgaatc ttaatctcag cagaagacgt 7620
tcttcattca tgagccgtcc ctgccctagg aattaaaata gacgcagttc ccggacgtct 7680
aaatcaaaca gcctttatca cctcccgccc cggggttttc tatggacaat gttcagaaat 7740
ttgcggagca aaccacagct ttatacctat tgtggttgaa gcagttcctc tcgaacactt 7800
tgagtcctga tcctctttaa tacttgaaga cgcctcacta agaagctaaa ctcgggccaa 7860
gcgccagcct tttaagctgg aagttggtga ctcccaacca cccttaatga tatgccccaa 7920
ttaaaccccg ccccctgatt cataattttc atgttcacat gagtaatttt cttaacaatt 7980
cttcccccaa aagtattagc acacactttc ccaaatgagc cttcccctca aagcataaca 8040
gcccctaaaa ccaccccctg aaactgacca tgacactaag ccttttcgat caattttcaa 8100
gtccttcata tctagggatt cccctaattt taattgccct cagcctcccc tgagtacttt 8160
tccctgcccc ttcaacccga tgactaaaca accgaatatt aaccctacaa ggatgattta 8220
ttgctcgttt taccaaccaa ctcttccttc ccctaaatgt aggcgggcac aagtgagccc 8280
ctctactcgc ttccctaata atctttttac tcactcttaa catactgggc ctgataccct 8340
acactttcac ccctacaaca caactgtcgc ttaatatagg ccttgcagtc cccctctgat 8400
tggcaactgt gattattggg atacgaaatc aaccaaccca tgcactagga cattttcttc 8460
cggaaggaac gcccacccct ttaatccccg ttctaatcat catcgaaaca attagtcttt 8520
ttattcgccc ccttgcccta ggagttcggc ttacagccaa cttaacagca ggacacttac 8580
taattcatct catctcttcc gcagcctttg tccttatacc tataatacca acagttgcac 8640
ttcttacagc cattctcctt ttaatactta cccttctcga agtagctgtt gcaatgattc 8700
aagcctatgt ctttatttta cttctaagcc tctacctaca agaaaacgtt taatgaccca 8760
ccaagctcat gcatatcaca tagtagaccc cagcccttga cccctcacag gcgcagtagc 8820
tgccctttta atgacatctg gcctcgccgt atgattccac ttccactcaa cagtcctgat 8880
aactttagga actgttctcg ttttattaac catgtatcaa tgatgacgag atattgtccg 8940
agagggcact tttcaaggtc accacacacc tcccgttcaa aaagggcttc gatacggcat 9000
aatcctcttt attacatcag aagttttctt tttcctaggg tttttctgag ccttctacca 9060
ctcaagccta gcccccaccc cagaacttgg cggctgctga cctccaacag gcattatcac 9120
cctcgacccc tttgaagtcc ctctattaaa taccgccgtt cttttagcct ccggagtaac 9180
agtaacctga gcccatcata gcatcatgga gggagaacga aaacaagcaa ttcactccct 9240
taccctcaca atcctgctag gcttctattt taccttcctc caagcaatag aatattacga 9300
agcccccttt actattgccg acggtgttta cggttcaact ttctttgttg ccaccggctt 9360
ccatggcctc cacgtaatta tcggatctac cttcttagcg gtatgtctac tccgacagat 9420
tcgttaccac tttacatccg aacaccactt cggctttgaa gcagctgcat gatactgaca 9480
ttttgtagac gtcgtttgac tcttcttata tatctcaatc tattgatgag gctcataatc 9540
tttctagtat caattagtat aagtggcttc caaccacacg gtcttggtca aaatccaagg 9600
aaagataatg aacttaatct caacagttat ccttattgcc tcagcattat cactagtcct 9660
catcctagtc tctttctgac ttcctcaact aacccctgac tacgaaaagc tctcaccata 9720
cgaatgtggt tttgaccccc taggaagtgc ccgccttccc ttctccctac gcttctttct 9780
aatcgccatc ttatttcttc tctttgacct agaaattgct cttctcctcc cccttccctg 9840
aggagaccaa ctaagcaacc ctgccttaac atttatatga gccacttccg tactagccct 9900
tctaaccctt ggtcttattt acgaatgact acaaggcggc ctagagtgag ctgaataggc 9960
gattagtata agtaaaatac ttgatttcgg ctcaagagtt tgtggttaaa gtccacaatt 10020
gcctaatgac ccctactcac ttcacaattt cctcagcttt tctattaggc ctgataggct 10080
tagcatttca ccgaacacac ctcctctccg ctcttctctg cttagaagcc ataatacttg 10140
ccctattcat cgcactctca ctctgatccc ttcaattaga tgccaccggc tactcaactg 10200
cccctatatt aatactagcc ttttccgctt gtgaggcaag tgccggatta gcactactcg 10260
tagccacggc tcgaacacac ggaaccgatc atttacaaaa cctaaatctc ctacaatgct 10320
aaaaatccta atcccgaccc tcttccttct tccaacgaca tgactcacat caggtaaatg 10380
gttgtgacca actgccctaa cccagagcat gctaattgcc ctagctagtc tcacttgact 10440
taataacagc acagatgtcg ggtgagccac ccttaattca tacattgcca cagacccttt 10500
atcaacccca ctcctcgttc tctcgtgctg acttctacca ctaataatcc tagcaagcca 10560
aaaccatctc tcatcagagc ctgtaaaccg tcaacgcatg tacctcaccc ttcttgctac 10620
acttcaactt tttcttattt tagcatttgg tgccaccgaa ataattatat tttatgttat 10680
atttgaagca acccttatcc caaccctcct tgtcatcacc cgctgaggca accaaacaga 10740
acgactcaac gcaggaacct actttttatt ttataccctc gcaggctctc ttcctctcct 10800
agttgcccta cttatacttc aaaataatgc aggaacactc tctcttttaa ttctccccta 10860
caccaagccc ctcctcttaa caccttttgg cagcaacatc tgatgggctg catgcatgat 10920
cgctttcctg gttaaaatgc ccttatatgg catacatctc tgacttccaa aagcccatgt 10980
agaggcccct gtcgcaggct ccatagtact tgctgctgta ttactaaaac taggcggtta 11040
tggtatgata cgactcatag taatactaga acctctctcc aaggaaatag tttatccttt 11100
tattgtccta gccctatgag gtgtaatcat aacaggctca atttgcctac gtcaaacaga 11160
cctaaaatcc ctcattgctt attcctctgt tagccatata ggccttgtag caggagggat 11220
tctaatccaa accccatgag gattcacagg cgctctcgtt ttaataattg cccatggctt 11280
agcatcctcc gcccttttct gcctcgccaa caccaactac gaacgaacgc acagccgaac 11340
aatactttta gcccgaggcc tccaaattgc cctccccctc ataacaactt gatgatttat 11400
tgccagcttg gcaaatctcg cacttcctcc cttaccaaac ttaataggag aactaataat 11460
cctcacctcc ctatttaact gatctgcctg aaccctaatt ctcacgggag caggaacact 11520
aattacagcc gcatattccc tgtacatgtt cctgataagc caacggggcc cccttcctca 11580
acacatactc gcccttcccc cctcatatac acgagaacac ttactgatgg ctctccactt 11640
aatcccgctt ctgctgatta ttcttaagcc agccctcctc tgaggatggt ttgcctgtag 11700
atttagttta attaagacat tagattgtga ttctaaaaat agaggttaaa cccctctaat 11760
ccaccgagag aggcccgacg gcaatgaaga ctgctaacta tcaccccctt ggttaaaccc 11820
caaggctcgc tcgaagctcc taaaggataa tagctcatcc gttggtctta ggaaccaaaa 11880
actcttggtg caactccaag tagcagctat gcaccccaca actttaatat acacttcaag 11940
ccttttatta atatttgcta ttcttctata ccccctcctg gtcaccttca catctctgcc 12000
cctaaataat gattgagctt cctcacatgc aaaaacagct gttaaaaccg ctttcttaat 12060
tagccttgcc cctctttccc tttttcttag ctccggaata gagactgtag cctcttcatg 12120
aacttgaata gtaacaacaa ctttggatat tactctcagc tttaaatttg attactactc 12180
tattattttc attcccattg ccctttatgt aacctgatct atcttagaat ttgccacatg 12240
atacatacac gcagaccctc tcatcaatcg attttttaag tatctattaa ccttcctcgt 12300
agcaatacta attctggtct ctgccaataa cctctttcag ctgtttattg gatgagaagg 12360
agtgggcatc atatcctttc tactaatcgg ctgatggcat ggacgagcag acgcaaatac 12420
cgccgcccta caagcagtat tatataaccg agtaggggac atcggactaa tcttaggcat 12480
agcttgacta gcaactaatg tcaatagttg agatattcaa caaatattca ttttaagtaa 12540
aaacctagac cttactctac ccctgctagg attaatccta gcagccactg gtaaatctgc 12600
acaatttggt cttcaccctt gactcccagc tgcaatagaa ggcccaacac cagtatctgc 12660
cctacttcat tctagcacaa tagttgttgc aggaattttc cttcttattc gacttagtcc 12720
ccttatagaa aataatcaaa ctgccttatc cctatgtctt tgcctcggag ccctaaccac 12780
tatattcact gccacttgcg ccctaaccca aaacgacatc aaaaaaatcg ttgccttttc 12840
aacctccagc caactaggac ttatgatggt cacaattgga ctaaatcaac cacaactagc 12900
cttccttcac atctgtaccc acgctttctt taaagccata ctatttttat gctcaggttc 12960
agttattcac agcctaaacg acgaacaaga catccgaaaa ataggaggac tccaccatct 13020
tgcccccttt acctcctcct gcctcactgt aggaagcctc gctctaacag gaaccccctt 13080
cctggcaggg tttttctcca aagacgcaat tattgaagcc cttaacacat cccaagtaaa 13140
cgcctgagcc ctcaccctaa cacttattgc tacctctttc accgccatct acagcctccg 13200
agtaattttc tttgttacca taggcacccc ccgattctta cccttttccc ctattaacga 13260
gaacaactca gcagtaatta accccttaaa acgcttagca tggggaagta tttttggggg 13320
cctcttaatt atactaaaca caaatctctt caaaactcct gtattaacaa taccaacaga 13380
actgaagtta gcagccttag ctgtatccat tcttggacta ttaatcgcct tagaactagc 13440
aactctaact actaaacaac taaaggtagc acctcttcaa gtctcccacc atttctcaaa 13500
ttccctagga ttcatcccag caatcatcca ccgacaagcc ccacaactga gcctttttct 13560
aggtcagaaa attgccagtc aaatagtaga ccaaacatga ttagaaaaaa caggacctaa 13620
agcaattgcc aacaccacca cccctctggc tgccacaaca agtaatattc aacaaggact 13680
aattaaaacc tacctcaccc tatttttaat tacccttatc ttggtaaccc tgatctcggt 13740
agcctaacag ctcgcaatgc cccccgggct aagccccgag ttaattctaa taccacaaga 13800
agtgttaata aaagaaccca agcactcact acaagaagtc ccccacctaa agaatacatt 13860
aaagcaaccc ctcctgaatc tgcagctaca acagaaaact caattaactc atcaacaggc 13920
actcacgccc cttcatacca tccccctcaa aaccaagaaa ccccgccaaa cactagtaac 13980
aaataaccta aaacagaccc aagaacagac cactcccccc atgcctcagg gtaaggctcc 14040
gcggccaaag ccgcacaata agcaaacaca acaagcatcc ccccaagata aattaagaaa 14100
agcacaaggg acaaaaaaga tcccccatgc cccattaaaa ccccacatcc cacacccgcc 14160
actaaaacta gccctaaggc tgcaaagtag ggggagggat tggaagctac tgaaattaca 14220
cctagaacta tcccaattaa aagagtcaat atgatatatg ccataatttt tgcccggaat 14280
ctaaccagga ctaatgactt gaaaaaccac cgttgtaatt caactacaaa aaccttaatg 14340
gccagcctcc gaaaaaccca cccaattcta aaaattgcta ataacgcact agtagacctc 14400
cccgcccctt ctaacatctc agtttgatga aactttggtt cgctcctagg cctttgctta 14460
attacccaga ttttaacagg cctattttta gccatacatt acacctcaga catcgaaaca 14520
gccttttcat ccgttgtaca catctgccgt gacgtaaact acggatgact aatccgaaat 14580
atacatgcca acggtgcctc ttttttcttt atttgcctct atctccacat tgcccgaggc 14640
ttatattacg gctcatacct atttattgaa acatggaata ttggggttat tttattcctg 14700
ctagtaatag taacctcttt tgtaggctat gttcttccct gaggacaaat atccttctga 14760
ggagcaaccg taattacaaa cctaatatct actgtaccct acgtaggaaa taccctagtt 14820
caatgaattt gaggaggctt ctcagttgac aacgccaccc ttacccgctt ctttgcattt 14880
cattttctat tcccttttat tgttgctgct gttacaatac tacacctact atttcttcac 14940
gaaacaggct caaataaccc aacaggaatt aactcaaatg cagacaaaat ccccttccac 15000
ccctacttta cttataaaga ccttctaggt tttgccgtaa tactccttgg ccttactgcc 15060
cttgccctct tctcccccaa cctgcttgga gacccagaca attttacacc cgctaacccg 15120
attgtcaccc ctccacatgt caagcctgaa tgatatttcc tatttgccta cgcaatttta 15180
cgatccattc ctaacaaact aggaggagtt cttgcccttc tattttcaat tctaatcctg 15240
atagttgtac ccttcctaca cacctctaaa caacgaggct tgacattccg cccactcact 15300
caagtactgt tttgagtact cgtcgcagac atacttgtct taacatgaat tggcggggta 15360
ccagtagaac accctttcat catcattgga caagtagcat ccgtcctgta cttctcatta 15420
ttcctagtat tatttcccct tgcaggaata actgaaaata aagcccttga atgaaactgc 15480
cctagtagct cagcacaaga gcgccggcct tgtaagccgg aggtcggagg ctaaattcct 15540
ccctagcgct tatagacaca cacatatata catatttagt aaagagattc aaaaatctct 15600
gatgccacga gccgcggctc gtggctttca accggacact gccccccccc ccccccccac 15660
ctcaaagaga ggagatttta actcccacca ctagctccca aagctagaat tctaaattaa 15720
actactctct gaaaaaattt tctcctaata tatgtactat ttaaagttaa ggacatatat 15780
gtattatccc cataagtgat attaaccatt caggaaatca taactgataa atattacatc 15840
ggcacttata gttaacacca aataaactgc ttgaaaacag gatatttttc ttaataccac 15900
ttacgttccc ctaatgaaat cctgttcttt ccccctcatt tcctctcatc agtataatat 15960
atgtagtaag agatcatcta gcgtgtcttt aatcccattc gttccatgag ggtcaaggtc 16020
atttatttga agatctacca actcgtgcac tattcctggc atccctgcct agcttcaagt 16080
ccatataacc ttaaagctct aaacttgctc ttttgtccat ctcttaatgt tggagtacat 16140
aaatcctaaa tcacccagca tgccgggcgt tctctctaag gggcaagggg tttttttttt 16200
ttatttcctt tcacttggca ttacagagtg cacacggtaa taatctcaag gttgaactat 16260
tccttggtgt taaatatgtg tatgaatggt ggaaagtcat tacataagaa ttgcatataa 16320
gtatatcaag agcataatat gagatttttc ctcgaaaggt ttctaagatg ccccccctgg 16380
cttttgcgcg taaatccccc ctacccccca gttctcctga gattactatg acttcctgta 16440
aaccccccgg aaacaggaaa acctcgagaa ctggcttcat tgcctaaaat gtgtataatt 16500
tgttattata cactatttca aattattaaa attt 16534

Claims (6)

1.一种江鳕线粒体基因组全序列引物，其特征在于，所述江鳕线粒体基因组全序列引物包括二十八对引物，其中
第一对引物：
上游引物1如SEQ ID NO.1所示：5’-ACACTGAAGATGTTAAGATG-3’；
下游引物1如SEQ ID NO.2所示：5’-TTCACAGGGTAAGCTGACGA-3’；
第二对引物：
上游引物2如SEQ ID NO.3所示：5’-ACCCACCTAGAGGAGCCTGT-3’；
下游引物2如SEQ ID NO.4所示：5’-TAGGCTGTCTTGGAGTAGCT-3’；
第三对引物：
上游引物3如SEQ ID NO.5所示：5’-CTCGTACCTTTTGCATCATG-3’；
下游引物3如SEQ ID NO.6所示：5’-CCGTTAAACTTAGAGTCACAGG-3’；
第四对引物：
上游引物4如SEQ ID NO.7所示：5’-TTAACCCTACACTGGAGTGC-3’；
下游引物4如SEQ ID NO.8所示：5’-CTTCGGTCCTTTCGTACTAG-3’；
第五对引物：
上游引物5如SEQ ID NO.9所示：5’-GGATAACAGCGCAATCCCCT-3’；
下游引物5如SEQ ID NO.10所示：5’-GCCTAGACTGACTTCATAAGA-3’；
第六对引物：
上游引物6如SEQ ID NO.11所示：5’-ACCCTCGCCTTAACACTATG-3’；
下游引物6如SEQ ID NO.12所示：5’-GAAGTGGTGTAGTGGAAGCA-3’；
第七对引物：
上游引物7如SEQ ID NO.13所示：5’-AAGGGCCACTTTGATAGAGT-3’；
下游引物7如SEQ ID NO.14所示：5’-AAGGCTGGAGTTTACTGGTAT-3’；
第八对引物：
上游引物8如SEQ ID NO.15所示：5’-GGACTTGACCTAACAACAGG-3’；
下游引物8如SEQ ID NO.16所示：5’-TTTGAAGGCCCTTGGTCTAG-3’；
第九对引物：
上游引物9如SEQ ID NO.17所示：5’-CCCTATTCAGCCTGTACTTC-3’；
下游引物9如SEQ ID NO.18所示：5’-GGTATTACTATAAAGAAAAT-3’；
第十对引物：
上游引物10如SEQ ID NO.19所示：5’-TCAACCAACCACAAAGACATTGGCAC-3’；
下游引物10如SEQ ID NO.20所示：5’-TAGACTTCTGGGTGGCCAAAGAATCA-3’；
第十一对引物：
上游引物11如SEQ ID NO.21所示：5’-TTACAGCCGTCCTACTACTC-3’；
下游引物11如SEQ ID NO.22所示：5’-TTCATAGTGTGTAGGCGTCG-3’；
第十二对引物：
上游引物12如SEQ ID NO.23所示：5’-TCCCACAACATTTCCTAGGC-3’；
下游引物12如SEQ ID NO.24所示：5’-AGGATAAGAATAACAGCAGGG-3；’
第十三对引物：
上游引物13如SEQ ID NO.25所示：5’-ATTGTTGCGATAGTCTCCACT-3’；
下游引物13如SEQ ID NO.26所示：5’-GAATCCCTAGATATGAAGGAC-3’；
第十四对引物：
上游引物14如SEQ ID NO.27所示：5’-TTCCCAAATGAGCCTTCTCCT-3’；
下游引物14如SEQ ID NO.28所示：5’-ACAGCTACTTCGAGAAGGGT-3’；
第十五对引物：
上游引物15如SEQ ID NO.29所示：5’-TACCTATAATACCAACAGTTGC-3’；
下游引物15如SEQ ID NO.30所示：5’-GCTTGAGTGGTAGAAGGC-3’；
第十六对引物：
上游引物16如SEQ ID NO.31所示：5’-TGATGACGAGATATTGTCCGA-3’；
下游引物16如SEQ ID NO.32所示：5’-TGGTTGGAAGCCACTTATACT-3’；
第十七对引物：
上游引物17如SEQ ID NO.33所示：5’-ATACTGACACTTCGTAGACG-3’；
下游引物17如SEQ ID NO.34所示：5’-CAAGCTTTTGAGCCGAAATC-3’；
第十八对引物：
上游引物18如SEQ ID NO.35所示：5’-TAGCCCTTCTAACCCTTGGT-3’；
下游引物18如SEQ ID NO.36所示：5’-GTCGTTCTGTTTGGTTGCCT-3’；
第十九对引物：
上游引物19如SEQ ID NO.37所示：5’-TCAACCCTTATCCCAACCCT-3’；
下游引物19如SEQ ID NO.38所示：5’-TCAGTTAAATAGGGAGGTGAG-3’；
第二十对引物：
上游引物20如SEQ ID NO.39所示：5’-ATGGCAACATGATGATTTA-3’；
下游引物20如SEQ ID NO.40所示：5’-GCACCAAGAGTTTTTGGTTCCTAAG-3’；
第二十一对引物：
上游引物21如SEQ ID NO.41所示：5’-CCTCTAATCCACCGAGAGAT-3’；
下游引物21如SEQ ID NO.42所示：5’-GTCTGCTCGTCCATGCCAT-3’；
第二十二对引物：
上游引物22如SEQ ID NO.43所示：5’-TTGGATGAGAAGGAGTAGGC-3’；
下游引物22如SEQ ID NO.44所示：5’-ACAGTGAGGCAGGAGGAAGT-3’；
第二十三对引物：
上游引物23如SEQ ID NO.45所示：5’-CCTAAACGACGAACAAGACAT-3’；
下游引物23如SEQ ID NO.46所示：5’-ATTGCGAGCTGTTAGGCTAC-3’；
第二十四对引物：
上游引物24如SEQ ID NO.47所示：5’-GCTGCCGCAACAAGCAATAT-3’；
下游引物24如SEQ ID NO.48所示：5’-CACTAGTGCGTCATTAGCAAT-3’；
第二十五对引物：
上游引物25如SEQ ID NO.49所示：5’-GACTTGAAAAACCACCGTTG-3’；
下游引物25如SEQ ID NO.50所示：5’-CTCCGATCTCCGGATTACAAGAC-3’；
第二十六对引物：
上游引物26如SEQ ID NO.51所示：5’-AGCATCCGTCCTGTACTTCT-3’；
下游引物26如SEQ ID NO.52所示：5’-CATTAGGGGAACGTAAGTGG-3’；
第二十七对引物：
上游引物27如SEQ ID NO.53所示：5’-CCACTAGCTCCCAAAGCTAGA-3’；
下游引物27如SEQ ID NO.54所示：5’-GATTTAGGATTTATGTACTCC-3’；
第二十八对引物：
上游引物28如SEQ ID NO.55所示：5’-CGTGCACTATTCCTGGCATC-3’；
下游引物28如SEQ ID NO.56所示：5’-GTGCGGATACTTGCATGTGT-3’。
2.一种如权利要求1所述的江鳕线粒体基因组全序列引物的扩增方法，其特征在于，所述江鳕线粒体基因组全序列引物的扩增方法包括以下步骤：
(1)DNA抽提试剂盒法提取江鳕线粒体基因组的总DNA；
(2)采用权利要求1中所述的江鳕线粒体基因组全序列引物组；
(3)以江鳕线粒体基因组DNA为模版，进行PCR扩增；
(4)回收扩增片段并进行测序及序列拼接。
3.根据权利要求2所述的一种江鳕线粒体基因组全序列引物的扩增方法，其特征在于，所述步骤(1)对江鳕线粒体基因组DNA进行提取时，为避免肠道内容物污染，舍去头腹部，只从其尾部提取DNA。
4.根据权利要求2所述的一种江鳕线粒体基因组全序列引物的扩增方法，其特征在于，步骤(3)所述PCR扩增的反应体系组成为：10×buffer 5.0μL，添加Mg2+并保持终浓度为2.0mM，2.5mM的dNTP4μL，Taq聚合酶2units，10μM的上下游引物各2μL，100g/μL的DNA模版溶液2μL，加灭菌水至终体积50μL；
PCR反应条件为：95℃预变性5min，然后94℃变性45s，恒温退火45s，72℃延伸1min，变形、退火和延伸三个步骤进行35个循环，最后72℃再延伸10min。
5.根据权利要求4所述的一种江鳕线粒体基因组全序列引物的扩增方法，其特征在于，所述PCR反应条件中恒温退火的温度根据引物进行调整。
6.根据权利要求4所述的一种江鳕线粒体基因组全序列引物的扩增方法，其特征在于，步骤(4)中回收扩增产物并测序后各序列依次首尾拼接即可得到江鳕线粒体基因组全序列。
CN201711320971.4A 2017-12-12 2017-12-12 一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法 Active CN108085366B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711320971.4A CN108085366B (zh) 2017-12-12 2017-12-12 一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711320971.4A CN108085366B (zh) 2017-12-12 2017-12-12 一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108085366A CN108085366A (zh) 2018-05-29
CN108085366B true CN108085366B (zh) 2021-04-20

Family

ID=62175098

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711320971.4A Active CN108085366B (zh) 2017-12-12 2017-12-12 一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108085366B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109055515A (zh) * 2018-08-28 2018-12-21 浙江海洋大学 一种鉴别新疆额尔齐斯河北方须鳅隐存种的分子生物学方法
CN109868272B (zh) * 2019-03-18 2020-07-24 湖南农业大学 黑金红头鼠线粒体全基因组序列的扩增引物和扩增方法
CN112094926A (zh) * 2020-11-17 2020-12-18 水利部中国科学院水工程生态研究所 刺鮈线粒体基因组全序列的引物设计及其扩增方法
CN113930519A (zh) * 2021-10-22 2022-01-14 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 一种鉴别黑龙江流域江鳕和额尔齐斯河流域江鳕的分子标记和引物以及方法与应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104531688A (zh) * 2014-12-11 2015-04-22 中国计量学院 一种蜘蛛线粒体基因组全序列扩增引物及扩增方法
CN104911182A (zh) * 2015-06-01 2015-09-16 中国水产科学研究院 鱼类线粒体全基因组dna扩增
CN106591299A (zh) * 2016-12-08 2017-04-26 浙江省海洋水产研究所 一种双棘黄姑鱼线粒体全基因组序列的扩增引物及其扩增方法
CN106591298A (zh) * 2016-11-17 2017-04-26 浙江省海洋水产研究所 一种鮸状黄姑鱼线粒体全基因组序列的扩增引物及其扩增方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104531688A (zh) * 2014-12-11 2015-04-22 中国计量学院 一种蜘蛛线粒体基因组全序列扩增引物及扩增方法
CN104911182A (zh) * 2015-06-01 2015-09-16 中国水产科学研究院 鱼类线粒体全基因组dna扩增
CN106591298A (zh) * 2016-11-17 2017-04-26 浙江省海洋水产研究所 一种鮸状黄姑鱼线粒体全基因组序列的扩增引物及其扩增方法
CN106591299A (zh) * 2016-12-08 2017-04-26 浙江省海洋水产研究所 一种双棘黄姑鱼线粒体全基因组序列的扩增引物及其扩增方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AP004412.1;GenBank;《NCBI》;20160724;序列部分 *
鲚属鱼类和江鳕的线粒体基因组全序列研究;张楠;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》;20160715;D052-49 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108085366A (zh) 2018-05-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108085366B (zh) 一种江鳕线粒体基因组全序列扩增引物及其设计和扩增方法
Lin et al. Diversity and dynamics of microbial communities at each step of treatment plant for potable water generation
Breton et al. Comparative mitochondrial genomics of freshwater mussels (Bivalvia: Unionoida) with doubly uniparental inheritance of mtDNA: gender-specific open reading frames and putative origins of replication
CN104087578A (zh) 一种与水稻白叶枯病抗性基因紧密连锁的分子标记、引物及其应用
Hofman et al. Mitochondrial genome organization and divergence in hybridizing central European waterfrogs of the Pelophylax esculentus complex (Anura, Ranidae)
JP2021061826A (ja) 帆立貝雌特異的分子マーカーの組み合わせ及びその応用
CN111893198B (zh) 用于银白色葡萄球菌鉴定的特异性分子靶标、检测引物组及其快速检测方法
CN113930525B (zh) 用于乌鳢性别鉴定的特异性序列及应用
Kumar et al. PCR-based detection of mcy genes in blooms of Microcystis and extracellular DNA of pond water
CN110923335A (zh) 一种鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈的dna条形码及其鉴别方法和应用
Prajapati et al. Identification of Garlic virus A infecting Allium sativum L. through next generation sequencing technology
Liu et al. First report of microcystin production in Microcystis smithii Komárek and Anagnostidis (Cyanobacteria) from a water bloom in Eastern China
US20230407416A1 (en) IDENTIFICATION METHOD OF TWO PARENTS OF NYMPHAEA HYBRID BASED ON SEQUENCES OF INTERNAL TRANSCRIBED SPACER (ITS) AND matK
CN109022457A (zh) 一种*dna条形码序列及其应用
Zhang et al. Spatial variation of Yersinia pestis from Yunnan Province of China
CN104531902B (zh) 一种试剂盒及其制备方法
CN102134604B (zh) 鉴别中华乌塘鳢种群的单核苷酸多态性标记和鉴别方法
CN110819699A (zh) 一种水环境中人类粪便指示物的定量检测方法
Kapley et al. Development of duplex PCR for the detection of Salmonella and Vibrio in drinking water
CN111500774B (zh) 一种流行性出血病病毒及血清型鉴定rt-pcr试剂盒
Mbukwa et al. PCR amplification and DNA sequence of mcy A gene: The distribution profile of a toxigenic Microcystis aeruginosa in the Hartbeespoort Dam, South Africa
CN107937620B (zh) 一种区别禽坦布苏病毒弱毒疫苗株和野毒株的pcr-rflp方法
CN111850138A (zh) 一种区分黑龙江三角鲂与团头鲂及其杂交种的分子标记、试剂盒及区分方法
Osunmakinde et al. Viral Communities Distribution and Diversity in a Wastewater Treatment Plants Using High-throughput Sequencing Analysis.
Tian et al. Identification of species-specific microsatellite markers in three Siniperca species by RNA-Seq

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant