CN108084242A - 一种提取蜕皮激素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提取蜕皮激素的方法，该方法用甲醇或甲醇‑丙酮混合液浸泡露水草提取蜕皮激素，然后经过脱色、结晶、重结晶获得蜕皮激素，本发明方法简单易操作，无需柱层析，成本低、周期短，适于工业化应用和市场推广。

Description

一种提取蜕皮激素的方法

技术领域

本发明涉及一种由干燥的露水草提取蜕皮激素的工业化生产方法。

背景技术

"蜕皮激素"又称"脱皮激素"，是从鸭跖草科植物珍珠露水草根部提取得到的一种活性物质。根据纯度不同分为白色、灰白色、淡黄色或淡棕色结晶性粉末；分子式C₂₇H₄₄O₇；

蜕皮激素作用于人体有促进胶元蛋白合成、抗心律不齐、抗疲劳；促进细胞生长、刺激真皮细胞分裂，排除体内的胆固醇；降血脂，抑制血糖上升；通经活络，除湿镇痛等生理活性；是天然的抗癌制剂；露水草蜕皮激素自1976年问世以来，已研制不定期片剂、针剂、膏剂。民间用于风湿性关节炎，治疗不同症状的风湿及关节炎患者有较好疗效其有效成份20-羟基蜕皮甾酮经临床研究证明具有直接降血糖作用，对Ⅱ型糖尿病总有效率84%，对改善糖尿病患者"三多一少"症状尤为明显。

在运动保健品方面，蜕皮激素具有显著的通过增加氨基酸装配成蛋白链，从而刺激肌肉细胞质中蛋白质合成的能力，而且该能力回溯至蛋白质生长的转译和迁移过程。蜕皮激素不仅有益于健康而且安全，其有助于稳定在皮质醇伤害时的细胞，使能量合成步骤正常化(ATP和肌氨酸)和改善肝功能从而使有机体能迅速地适应环境和压力变化。其安全性，经超过50次的研究显示蜕皮激素没有副作用，没有与荷尔蒙的相互作用，毒性水平也极低。当1998年ICN生化实验室对其进行测试时，数据显示蜕皮激素要显示出毒性必需达到6400mg/kg的超高剂量。而且，在包含测试睾固酮，皮质醇，胰岛素，促皮质素，生长激素和黄体生成激素的内分泌测试中，没有任何蜕皮激素对哺乳动物荷尔蒙系统作用的报导。

应用在蚕业养殖上，用于促使桑蚕龄期缩短，上簇整齐，促进吐丝结茧；蜕皮激素是水生甲壳类--虾、蟹类生长发育、脱壳变态所必须的物质，是"脱壳素"的主要原料；该品适用于虾、蟹等水产甲壳类及地憋虫的人工养殖，添加该品后可使虾、蟹顺利脱壳，促进虾、蟹类脱壳的一致性，有效避免个体间的互相残杀，显著提高养殖成活率和商品规格。

应用在化妆品上，一般使用的是经过特殊处理后的高纯度的蜕皮激素也叫"蜕皮甾酮"，呈纯白色结晶性粉末或无色的透明结晶体，成份单一，对皮肤无过敏反应，具有很强的渗透性，在液态状态下能快速被皮肤吸收；能增强细胞新陈代谢及活化的有效物质，具有良好的去角质、去斑增白作用，对面部黄褐斑、外伤性黑斑、雀斑、黑色素沉着等有很好的修复功效，另对粉刺亦有明显效果。在促进胶元蛋白的合成上远远高于现有市场上的任何产品。

综合上述，蜕皮激素在各方面均应用，而且有很好的市场前景，找到一种简单可行的提取方法，可以使蜕皮激素得到更广泛的应用，同时可以使医药、保健品、养殖业等方面生产成本降低。

蜕皮激素提取现有技术或传统方法中存在如下问题：

（1）目前，由于蜕皮激素的水溶性强，大多数提取以水为提取溶剂，提取后再经过浓缩，柱层析、重结晶的方法；浓缩水提液的过程中，由于水的沸点，浓缩温度过高，浓缩时间长，影响了蜕皮激素的生物活性；

（2）绝大多数文献专利报道的提取方法中，所得的水浸膏必须经过大孔树脂的分离提纯，在工业生产时，再一次经过醇水或丙酮水的浓缩，浓缩中由于含水，浓缩时间长，温度高，再一次影响了蜕皮激素的生物活性；由于经过柱层析过程，生产周期加长、成本增加；

（3）传统的工艺方法中由于使用大量的甲醇或乙醇水或者萃取方法，由于蜕皮激素的水溶性特点，生产过种中，提取收率大打折扣；并且生产过程中产生大量的废水，直接排放影响环境及水体，经过废水处理则增加生产成本；工业化生产时在环境方面的投入从另一个角度增加了企业的加工成本；

（4）传统提取工艺需要经过水提、浓缩、柱层析生产，柱层析生产期长、成本投入大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取蜕皮激素的方法，该方法简单易行、周期短、提取条件不苛刻、收率高，提取物经过简单的物理方法处理，就能富集蜕皮激素，有效的去除杂质，整个生产工艺中只应用了有机溶剂，没有水，在提取过程中各种溶剂可以回收重复利用，生产方法简单、生产期短、保证了蜕皮激素的生物活性，对生产周围的环境不污染；本发明从低成本、高收率的、高质量的角度出发，利用醇提、脱色、絮泥、单相结晶方法处理，可以得到高含量的蜕皮激素。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

（1）以含水量小于10%的露水草为原料，粉碎后在室温条件下用甲醇或甲醇-丙酮混合液浸泡3-4h，过滤，滤渣再重复浸泡1-2次后，合并滤液，浓缩至原体积的1/5得蜕皮激素提取液；

（2）在蜕皮激素提取液中加入脱色絮泥剂，在40-50℃下搅拌脱色2-4h，过滤，滤液浓缩干燥，得黄红色晶体；

（3）将步骤（2）晶体在30-50℃下用四氢呋喃溶解，过滤，滤液浓缩，开始有晶体出现停止浓缩，自然冷却结晶干燥，再用四氢呋喃重结晶1次，即得蜕皮激素。

所述步骤（1）中甲醇或甲醇-丙酮混合液的添加量为每100kg原料添加300-400L，其中甲醇-丙酮混合液是甲醇和丙酮按体积比1:0.5-1的比例混合。

所述脱色絮泥剂为活性炭粉和硅藻土，活性炭与硅藻土的质量比为2-5:1，脱色絮泥剂按每L蜕皮激素提取液添加80-120g的比例添加。

干燥的露水草中含有2-4%的蜕皮激素，蜕皮激素极性较大，容易溶解于各种醇、酮、二氯甲烷、氯仿甚至各种醚类等溶剂中。本发明利用甲醇或甲醇-丙酮为溶剂对露水草进行浸泡处理，然后利用溶剂浓缩比水快的特点，保证了蜕皮激素的生物活性；醇提取后，经过活性炭及硅藻土的混合使用，对醇提的蜕皮激素进行脱色、絮泥处理，除去色素、油性物质、部分杂；利用蜕皮激素在四氢呋喃溶剂中加热与冷却时溶解度差异大的特点，用四氢呋喃加热溶解，放置降温后，蜕皮激素以针状晶形的形式实现结晶，结晶后可以达到98%以上的含量。

本发明相对于现有技术的优点和技术效果：

（1）本发明选择甲醇或甲醇-丙酮作为提取溶剂，利用了蜕皮激素容易溶解于各种醇类的特性，经过简单的浸泡，有效成分98%被顺利提取出来，其方法简单，时间较快，提取收率高于95%，操作简单的特点，非常适合于工业化生产；

（2）本发明选择甲醇作为提取溶剂，提取溶剂用量小，提取率高，提取液经过脱色、絮泥等物理方法处理后，除杂质效果明显，含量富集较快。非常适合于工业化生产；

（3）本发明选择醇取物无需经过柱层析，只需要进行简单单相溶剂四氢呋喃的结晶，就可以得到含量大于98%的成品；降低了生产成本，非常适合于工业化生产；

（4）本发明选择有机溶剂作为提取溶剂，提取路线短、周期短、提取纯化过程中有效的保证了蜕皮激素的生物活性；各种溶剂可以回收利用，不用水、不用传统的萃取方法，整个工艺中不会产生工艺废水减轻环境的污染；非常适合于工业化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。

实施例1：本从露水草中提取蜕皮激素的方法，具体操作如下：

（1）将蜕皮激素含量3.1%的露水草100kg 碎粉（含水量8%），在粉碎物中加入300L甲醇浸泡4小时，过滤，滤渣再次用300L甲醇浸泡4小时，过滤，合并两次滤液，于65℃下减压浓缩浓缩至原体积的1/5得黄绿色蜕皮激素提取液；

（2）将蜕皮激素提取液置于100L容器中，按每L蜕皮激素提取液加入脱色絮泥剂100 g的比例加入活性炭与硅藻土，活性炭与硅藻土的质量比为2:1，在40℃下搅拌脱色4h，减压过滤，滤除活性炭及硅藻土，得淡黄透明甲醇液体；将甲醇液于旋转蒸发仪上65℃下减压蒸去甲醇，得黄红色晶体；停止旋蒸，经过干燥后得8156g固体，送检测后蜕皮激素含量36.1%，有效量收率为95.1%；

（3）将上述8156g含量36.1%的黄红色晶体加入到50L锅内，用40L四氢呋喃于40℃溶解，溶解趁热过滤，滤液于旋转蒸发仪中加热浓缩，浓缩温度为45℃，浓缩除去20L四氢呋喃后，开始出现黄白色晶体，停止浓缩，将浓缩液转移到结晶锅中，冷却自然结晶8小时，减压抽干并干燥后，得黄白色晶体2998g，经送检蜕皮激素含量83.7%，有效量收率为85.19%；

再将上述含量83.7%的2998g蜕皮激素晶体于40℃下溶于30L四氢呋喃中溶解，溶液再次趁热过滤，除去少量黄色难溶物，将滤液于结晶锅中自然冷却结晶8小时，减压过滤，得白色晶体，经干燥白色晶体重量2174g，经检测含量为98.1%，有效量收率为86.7%。

实施例2：本从露水草中提取蜕皮激素的方法，具体操作如下：

（1）将蜕皮激素含量3.1%的露水草100kg 碎粉（含水量5%），在粉碎物中加入400L甲醇浸泡3小时，过滤，滤渣再次用300L甲醇浸泡3小时，过滤，滤渣再次用甲醇浸泡，合并3次滤液，于60℃下减压浓缩浓缩至原体积的1/5得黄绿色蜕皮激素提取液；

（2）将蜕皮激素提取液置于容器中，按每L蜕皮激素提取液加入脱色絮泥剂80g的比例加入活性炭与硅藻土，活性炭与硅藻土的质量比为3:1，在45℃下搅拌脱色3h，减压过滤，滤除活性炭及硅藻土，得淡黄透明甲醇液体；将甲醇液于旋转蒸发仪上70℃下减压蒸去甲醇，得黄红色晶体；停止旋蒸，经过干燥后得8254g固体，送检测后蜕皮激素含量36.11%，有效量为收率96%；

（3）将上述8254g含量36.11%的黄红色晶体加入到锅内，用40L四氢呋喃于50℃溶解，溶解趁热过滤，滤液于浓缩锅中加热浓缩；浓缩温度为45℃，浓缩除去部分四氢呋喃后，开始出现黄白色晶体，停止浓缩，将浓缩液转移到结晶锅中，冷却自然结晶6小时，减压抽干并干燥后，得黄白色晶体3054g，经送检蜕皮激素含量84.1%，有效量收率为86.21%；

再将上述含量84.1%的3054g蜕皮激素晶体于45℃条件下溶于15L四氢呋喃中溶解，再次趁热过滤，除去少量黄色难溶物，将滤液于结晶锅中自然冷却结晶6小时，减压过滤，得白色晶体，经干燥白色晶体重量2278g，经检测含量为98.21%，有效量收率为87.12%。

实施例3 ：本从露水草中提取蜕皮激素的方法，具体操作如下：

（1）将蜕皮激素含量3.1%的露水草100kg 碎粉（含水量7%），在粉碎物中加入350L甲醇-丙酮混合液（甲醇和丙酮按体积比1:0.5）浸泡3小时，过滤，滤渣再次用300L甲醇-丙酮混合液浸泡4小时，过滤，合并两次滤液，于65℃下减压浓缩浓缩至原体积的1/5得黄绿色蜕皮激素提取液；

（2）将蜕皮激素提取液置于100L容器中，按每L蜕皮激素提取液加入脱色絮泥剂120 g的比例加入活性炭与硅藻土，活性炭与硅藻土的质量比为5:1，在50℃下搅拌脱色4h，减压过滤，滤除活性炭及硅藻土，得淡黄透明甲醇液体；将甲醇液于旋转蒸发仪上65℃下减压蒸去甲醇，得黄红色晶体；停止旋蒸，经过干燥后得8176g固体，送检测后蜕皮激素含量35.86%，有效量为收率94.8%；

（3）将上述8176g含量35.86%的黄红色晶体加入到锅内，用四氢呋喃于50℃溶解，溶解趁热过滤，滤液于浓缩锅中加热浓缩，浓缩温度为45℃，浓缩除去部分四氢呋喃后，开始出现黄白色晶体，停止浓缩，将浓缩液转移到结晶锅中，冷却自然结晶8小时，减压抽干并干燥后，得黄白色晶体3002g，经送检蜕皮激素含量83.4%，有效量收率为84.89%；

再将上述含量83.4%的蜕皮激素晶体于50℃条件下溶于四氢呋喃中溶解，再次趁热过滤，除去少量黄色难溶物，将滤液于结晶锅中自然冷却结晶8小时，减压过滤，得白色晶体，经干燥白色晶体重量2170g，经检测含量为98.2%，有效量收率为87.1%。

实施例4 ：本从露水草中提取蜕皮激素的方法，具体操作如下：

（1）将蜕皮激素含量3.1%的露水草100kg 碎粉（含水量8%），在粉碎物中加入400L甲醇-丙酮混合液（甲醇和丙酮按体积比1:1）浸泡3小时，过滤，滤渣再次用300L甲醇-丙酮混合液浸泡4小时，过滤，合并两次滤液，于70℃下减压浓缩浓缩至原体积的1/5得黄绿色蜕皮激素提取液；

（2）将蜕皮激素提取液置于100L容器中，按每L蜕皮激素提取液加入脱色絮泥剂100g的比例加入活性炭与硅藻土，活性炭与硅藻土的质量比为4:1，在45℃下搅拌脱色2h，减压过滤，滤除活性炭及硅藻土，得淡黄透明甲醇液体；将甲醇液于旋转蒸发仪上70℃下减压蒸去甲醇，得黄红色晶体；停止旋蒸，经过干燥后得8212g固体，送检测后蜕皮激素含量36.12%，有效量为收率95%；

（3）将上述8212g含量36.12%的黄红色晶体加入到锅内，用四氢呋喃50L于35℃溶解，溶解趁热过滤，滤液于浓缩锅中加热浓缩，浓缩温度为45℃，浓缩除去部分四氢呋喃后，开始出现黄白色晶体，停止浓缩，将浓缩液转移到结晶锅中，冷却自然结晶7小时，减压抽干并干燥后，得黄白色晶体2915g，经送检蜕皮激素含量84.9%，有效量收率为83.45%；

再将上述含量84.9%的蜕皮激素晶体于45℃条件下溶于四氢呋喃中溶解，再次趁热过滤，除去少量黄色难溶物，将滤液于结晶锅中自然冷却结晶7小时，减压过滤，得白色晶体，经干燥白色晶体重量2163g，经检测含量为98.56%，有效量收率为86.14%。

Claims (3)

1.一种提取蜕皮激素的方法，其特征在于按以下步骤进行：

（1）以含水量小于10%的露水草为原料，粉碎后在室温条件下用甲醇或甲醇-丙酮混合液浸泡3-4h，过滤，滤渣再重复浸泡1-2次后，合并滤液，浓缩至总滤液体积的1/5得蜕皮激素提取液；

（2）在蜕皮激素提取液中加入脱色絮泥剂，在40-50℃下搅拌脱色2-4h，过滤，滤液浓缩干燥，得黄红色晶体；

（3）将步骤（2）晶体在30-50℃下用四氢呋喃溶解，过滤，滤液浓缩，开始有晶体出现停止浓缩，自然冷却结晶干燥，再用四氢呋喃重结晶1次，即得蜕皮激素。

2.根据权利要求1所述的提取蜕皮激素的方法，其特征在于：步骤（1）中甲醇或甲醇-丙酮混合液的添加量为每100kg原料添加300-400L，其中甲醇-丙酮混合液是甲醇和丙酮按体积比1:0.5-1的比例混合。

3.根据权利要求1所述的提取蜕皮激素的方法，其特征在于：脱色絮泥剂为活性炭粉和硅藻土，活性炭与硅藻土的质量比为2-5:1，脱色絮泥剂按每L蜕皮激素提取液添加80-120g的比例添加。