CN108048344B - 两株除臭菌株及其在制备复合生物除臭剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了两株除臭菌株及其在制备复合生物除臭剂中的应用。本发明除臭菌株为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2，本发明经实验证实，副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2通过适当比例复配，对粪便等具有很强的除臭效果，可长期有效去除养殖场、厕所等环境或场所中的臭味，具有良好的应用前景和市场价值。

Description

两株除臭菌株及其在制备复合生物除臭剂中的应用
技术领域
本发明属微生物除臭技术领域，更具体地说，本发明涉及两株具有除臭效果的菌株，并将该两株菌株制备复合生物除臭器，用于去除多种环境的臭味。
背景技术
臭气或臭味是重要的环境污染物，除了影响观感和环境体验，还直接危害人体健康。随着我国规模化、集约化畜牧业的快速发展，畜禽粪便的产生量逐年增加，相对集中的畜禽粪污对畜禽自身、饲养员及饲养场周围居民的健康都带来了极大的危害。刚排放的禽畜粪便含有NH3，H2S和吲哚等有害气体，若未能及时清除或清除后不能及时处理，而又会产生其它恶臭性气体。有调查研究表明，中国作为传统的畜牧业生产大国，畜禽粪便年排放量约21.7亿吨，得到实际处理的不到10％，畜禽场养殖恶臭化合物的排放已严重制约了养殖业的可持续发展，破坏了生态环境，威胁着人民健康。因此，禽畜粪便处理问题亟待解决。
目前，禽畜粪便处理方法主要有生物堆肥法、厌氧产沼法、人工湿地法、干燥法、化学法等。这些方法中，干燥法和化学法处理效率最高，但除成本较高外，还可能产生二次污染；生物堆肥法是目前应用最广泛的方法，成本较低，而且可以实现粪污的再利用，但是堆肥过程中也会产生多种恶臭性气体。氨气是这些臭气中的首恶，有研究表明，年出栏5000头的猪场每天氨气产生量达0.8kg以上。
国内外市场上的生物除臭产品普遍存在菌种低效、有效菌数虚高等问题。此外，有不少产品存在盲目复配菌种，不考虑菌种间的合适比例和是否有拮抗性，导致产品质量和使用效果不稳定，相关问题层出不穷。因此，筛选高效、协同的除臭菌株，研发能高效去除臭气的复合生物除臭剂，对解决养殖场等场所臭味对人体和环境的危害、实现环境友好型社会具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于：克服现有生物除臭产品中存在的上述问题，提供两株除臭菌株，并将其用于制备复合生物除臭剂，可长期有效去除养殖场、厕所等环境或场所中的臭味。
为了实现上述发明目的，本发明提供了一种副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)R1，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址:广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No：60240，保藏日期为2017年8月1日。该菌株是2017年7月从菜市场酸豆角中分离得到，其生理生化特征为：革兰氏阳性菌；在MRS培养基上培养时，其菌落为圆形，乳白色，不透明，凸起，有光泽，表面光滑湿润，直径0.5～1.5mm(见图1)；细胞短杆，单个、成对或成链排列(见图2)。
本发明还提供了一种异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址:广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No：60241，保藏日期为2017年8月1日。该菌株是2017年7月在自制堆肥中分离得到，其生理生化特征为：在PDA培养基上培养时，其菌落为圆形，白色，不透明，凸起，表面光滑，直接1～2mm(见图3)；细胞椭圆形，出芽生殖(见图4)。
本发明所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2混合喷施到禽粪有机肥上后，1小时内氨去除率可达100％，6小时候氨去除率仍达97.14％和94.27％，感官臭味也大大降低，因此，所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomycesanomalus)J2可用于制备复合生物除臭剂。
因此，本发明还提供了一种复合生物除臭剂，其是由所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2混合而成，且总菌数不少于1×108个/mL。
作为本发明复合生物除臭剂的一种优选技术方案，所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2的菌数比为1:1或3:2。
本发明还提供了上述复合生物除臭剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)种子液的培养：将所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1接种于MRS培养基中，37℃培养36h，得到副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1种子液；将所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2接种于PDA培养基中，28℃、180rpm培养21h，得到异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2种子液；
(2)在一号发酵罐中装入占总体积60％的发酵培养基，在培养基温度为28～30℃时，接入占所述发酵培养基体积5％的所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomycesanomalus)J2种子液，转速180～200rpm、间歇性通气搅拌培养24～36h，使所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2的菌数达到1×108cfu/mL；同时，在二号发酵罐中装入占总体积60％的发酵培养基，在培养基温度为28～30℃时，接入占所述发酵培养基体积8％的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1种子液，35～37℃、厌氧培养36～48h，使所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1的菌数达到1～3×108cfu/mL；
(3)将所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2和所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1按照比例通入搅拌罐中混匀，调节pH至3.7，得到复合生物除臭剂；
所述发酵培养基的pH为5.5，包括如下按照质量百分比计的组分：红糖5％、大豆蛋白胨0.5％、玉米浆粉1％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％，余量为水。
本发明复合生物除臭剂可用于禽畜养殖场、厕所等环境或场所的除臭。
本发明所述除臭，具体是指除去氨和硫化氢。
本发明复合生物除臭剂的使用方法是将其稀释10～20倍，然后喷施于需要除臭的环境或场所。
相对于现有技术，本发明具有如下优点和有益效果：
(1)本发明将两种菌株按照特定的比例混合制成复合生物除臭剂，具有淡淡的酵香味，喷施于养殖场鸡粪后臭气去除效果显著，氨去除率可达94％以上，且两种菌株相互无拮抗作用；
(2)本发明发现的异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2可在以铵根为唯一氮源的培养基上生长，在接种培养12h内，能迅速去除培养基内93.4％的铵根离子，16h达到100％去除率，并且其菌数也达到了5×106个/mL以上，显示出了优良的除铵根离子能力和生长适应性。因此，其可以以散发臭味的氨作为生长原料持续生长(氨气极易溶于水溶液，溶于水溶液后解离出的铵根离子会快速被J2分解利用)，达到长期稳定除臭的效果；
(3)本发明复合生物除臭剂的制备方法是采用单菌培养的方式，不仅提高了生产效率，还使产品质量更加稳定。
附图说明
图1为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1在固体平板上的菌落形态。
图2为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2在固体平板上的菌落形态。
图3为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1经结晶紫染色后在光学显微镜下(100×)的照片。
图4为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2在光学显微镜下(100×)的照片。
图5为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2的脱氮效果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明，实施例的参数、比例等可因地制宜做出选择而对结果并无实质性影响。
实施例1
乳酸菌的分离保藏：
取酸豆角样品，加适量生理盐水研磨。将研磨液稀释不同浓度，取10-6、10-7、10-8梯度的菌液涂布CaCO3-MRS(富集培养基：含碳酸钙的MRS琼脂培养基，MRS琼脂培养基中添加质量浓度为20g/L的碳酸钙)平板，37℃厌氧培养48h。挑取溶钙圈较大的菌落在MRS平板上划线分离，反复纯化。将纯化后的菌落进行革兰氏染色、镜检及H2O2接触酶试验，挑出无芽孢、接触酶阴性的革兰氏阳性菌株(R1)，扩大培养并保种甘油管和冻干管。
菌株R1的16S rDNA鉴定：
提取菌株R1的基因组DNA，用细菌16S rRNA基因扩增通用引物27F/1492R扩增得到PCR产物，并送至上海美吉生物医药科技有限公司(广州分公司)进行序列测序，测序结果(SEQ ID NO:1)与NCBI及EzBioCloud网站数据库中的16S rDNA序列进行同源性比对分析，结果分析表明其与菌株Lactobacillus paracasei的16S rRNA基因序列相似性最高(100％)。基于以上结果分析，初步鉴定菌株R1为Lactobacillus sp.。
实施例2
酵母菌的分离保藏：
配制富集所用培养基，配方如下：
富集培养基：20g葡萄糖，20g蛋白胨，10g酵母膏，100mg青霉素(筛选过程中排除细菌干扰)，1000mL蒸馏水。取堆肥样品2g，放入装有50mL上述培养基的锥形瓶中，28℃，180rpm，培养7d进行富集。
菌株J2的分离纯化与保藏：
对于上述富集培养物，采用稀释涂布法涂布固体平板(PDA培养基)；肉眼观察菌落形态，并划线纯化，挑取已纯化的菌落进行显微镜检，通过形态学特征确定酵母菌。对纯化后的菌株(J2)，扩大培养并保种甘油管和冻干管。
菌株J2的18S ITS rDNA鉴定：
提取菌株J2的基因组DNA，用真菌18S ITS rRNA基因扩增通用引物ITS1/ITS4扩增得到PCR产物，并送至上海美吉生物医药科技有限公司(广州分公司)进行序列测序，测序结果(SEQ ID NO:2)与NCBI网站数据库中的18S ITS rDNA序列进行同源性比对分析，结果分析表明其与菌株Wickerhamomyces anomalus的18S ITS rRNA基因序列相似性最高(99％)。基于以上结果分析，初步鉴定本发明菌株为Wickerhamomyces sp.。
实施例3
定量检测菌株R1和J2的除氨能力:
单菌液体培养：接种菌株R1至MRS培养基中，37℃厌氧培养箱培养36h；接种菌株J2至PDB培养基中，28℃，180rpm培养21h。两种菌株菌液菌数均达到1×108cfu/mL。
检测上述菌株除氨能力的方法是根据食品安全国家标准《GB 5009.228-2016食品中挥发性盐基氮的测定》中的微量扩散法。试验材料为未完成堆肥的禽粪有机肥，每个扩散皿外室中称取1g禽粪有机肥，并喷施1mL的上述菌株R1或者J2菌液，对照不进行处理，扩散皿内室量取3mL硼酸，并滴加两滴定氮指示剂，每个处理重复6次，封口后放入37℃培养箱中孵育，在1h后对其中的3个重复用盐酸标液滴定，6h后对剩余的3个重复进行滴定，记录消耗盐酸体积并计算产氨量和除氨率。
表1试验结果
由上述试验可知，菌株R1和J2在处理喷施1h内，恶臭肥料向外扩散出的氨量基本没有，而对照则达到了82.97mg/kg，除氨率达100％；喷施6h后，两个菌株处理的除氨率仍达94％以上，除氨能力强而持久。
实施例4
复合生物除臭剂除氨除臭能力检测：
(1)种子液的培养：接种J2菌至PDA培养基中，28℃，180rpm培养21h；接种R1菌至MRS培养基中，37℃培养箱培养36h，制得种子液。
(2)除臭剂的制备：
a.发酵培养基的制备：红糖5％，大豆蛋白胨0.5％，玉米浆粉1％，硫酸镁0.05％，磷酸二氢钾0.05％，其余为水，pH值5.5；121℃，15分钟灭菌；
b.在一号发酵罐中装入装量为总体积60％所述的发酵培养基；待培养基温度降至28～30℃时，接入占培养基体积5％的异常威克汉姆酵母种子液，转速180-200rpm，间歇性通空气搅拌培养24-36h，酵母菌数达1×108cfu/mL左右。同时，在二号发酵罐中接入占培养基体积8％的副干酪乳杆菌种子液，厌氧培养36-48h，培养温度为35～37℃，乳杆菌数达1×108-3×108cfu/mL左右，再把两种发酵液按菌数比例1:1(配方一)或者3:2(配方二)通入到搅拌罐中混匀，pH接近3.7，制成复合生物除臭剂。
检测上述复合生物除臭剂除氨能力的方法是根据食品安全国家标准《GB5009.228-2016食品中挥发性盐基氮的测定》中的微量扩散法。试验材料为广东省温氏集团有限公司下属养鸡场采集的鸡粪，每个扩散皿外室中称取1g鸡粪，并喷施1mL的上述配方一菌剂或配方二菌剂，对照不进行处理，扩散皿内室量取3mL硼酸，并滴加两滴定氮指示剂，每个处理重复3次，封口后放入37℃培养箱中孵育，在1h后用盐酸标液滴定，记录消耗盐酸体积并计算产氨量和除氨率，并从感官上对臭味进行判断(恶臭“++++”，较臭“+++”，微臭“++”，无明显臭感“+”)。
表2试验结果
指标 产氨量(mg/kg) 除氨率(％) 臭味
对照 363.78±2.66 - ++++
配方一 15.93±0.00 95.62±0.00 +
配方二 20.45±0.27 94.38±0.10 +
由上述试验可知，配方一和配方二在处理喷施1h后，除氨率达94％以上，对比禽粪有机肥更为恶臭的材料(养殖场鸡粪)去除氨能力强，除臭效果明显。
实施例5
复合生物除臭剂稀释液除氨除臭能力检测：
复合生物除臭剂原液制备按照实施例4中的方法。检测上述复合生物除臭剂稀释液除氨和硫化氢能力的方法是用氨气和硫化氢检测管，气体采集用手动气体采样器(100mL)。试验材料为未完成堆肥的禽粪有机肥，称取20g高氨浓度禽粪有机肥于250mL的烧杯中，分别喷施3mL的上述配方一和配方二10倍稀释液，对照不进行处理，处理结束后对粪肥烧杯进行封口，并且在处理后1h后用检测管检测其氨气和硫化氢浓度结果入下:
表3试验结果
由上述试验可知，配方一和配方二10倍稀释液在处理高氨浓度的粪肥喷施1h后，除氨率达84％以上，除硫化氢去除到已检测不出，在恶臭养殖场有很好的应用前景。
实施例6
1.菌株J2在铵根作为唯一氮源的培养基中生长及脱氨能力定量检测：
(1)铵根离子作为唯一氮源培养基，配方如下：丁二酸钠2.5g，二水合柠檬酸钠2.5g，(NH4)2SO4 0.0733g，K2HPO41g，KH2PO41g，MgSO4·7H2O 0.2g，pH7.4，定容至1000mL，分装至250mL三角瓶中，每瓶100mL。121℃，20min，高温高压灭菌。添加无菌过滤后的复合碳源1％。复合碳源：D-葡萄糖6.9g，D-果糖6.9g，D-乳糖6.9g，90％乳酸6.4mL，甘露醇7g，醋酸钠9.5g，甘油6.3mL，无水乙醇7mL，水杨酸4.6g，苯甲酸钠4.8g，溶于500mL水中，pH 7.4，0.22μm滤膜过滤除菌。
(2)试验步骤：接种菌株J2至液体培养基中(铵根作为唯一氮源培养基，但其中(NH4)2SO4浓度为0.56mM，即铵根离子浓度为20mg/L)，28℃，180rpm摇床培养，分别在培养0、8、12、16、19、22、25h、28h后，取样，离心取上清，定量检测铵根离子浓度(纳氏试剂法)。如图5所示，菌株J2对铵根离子有很好的降解效果，在该菌长12h时，能将培养基中初始浓度为20mg/L的铵根离子降解完全；同时用二苯胺显色法检测水体中硝酸根，用格里斯试剂检测水体中亚硝酸根，结果表明菌株J2在降解铵根的过程中不积累硝酸根和氨亚硝酸根，无二次污染。此外，在接种培养12h内，铵根离子浓度降到了2mg/L以下，铵根离子去除率达93.4％，16h时去除率达到100％，并且，通过血球计数板计数发现其菌数为5.5×106个/mL，菌株生长状况良好。
2.菌株J2去除氨和硫化氢的持续效果检测：
菌株J2菌液制备方法按照实施例3中的方法，检测上述菌株除氨和硫化氢能力的方法是用氨气和硫化氢检测管，气体采集用手动气体采样器(100mL)。试验材料为未完成堆肥的禽粪有机肥，称取20g禽粪有机肥于250mL的烧杯中，每天喷施2mL的上述J2菌液，连续处理5天，对照不进行处理，处理结束后对粪肥烧杯进行封口，并且每天用检测管检测其氨气和硫化氢浓度，连续检测一周，结果如下：
表4试验结果
指标 氨气浓度(mg/m<sup>3</sup>) 硫化氢浓度(mg/m<sup>3</sup>)
对照 101.2±5.6 2.0±0.0
J2菌液处理 9.8±2.3 0
表4结果表明，多次使用菌株J2菌液喷施处理产氨气浓度很高的粪肥，能较长时间维持氨气浓度在很低的水平(不新增粪肥条件下至少维持一周)，本研究喷施处理仅持续5天，而更为长期的施用会进一步加大J2菌株的菌数，使其维持优势群落，可能会产生更好、更持久的效果。
根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。
序列表
<110> 广东博沃特生物科技有限公司
<120> 两株除臭菌株及其在制备复合生物除臭剂中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1440
<212> DNA/RNA
<213> 副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）R1(artifitial sequence)
<400> 1
tgcagtcgac gagttctcgt tgatgatcgg tgcttgcacc gagattcaac atggaacgag 60
tggcggacgg gtgagtaaca cgtgggtaac ctgcccttaa gtgggggata acatttggaa 120
acagatgcta ataccgcata gatccaagaa ccgcatggtt cttggctgaa agatggcgta 180
agctatcgct tttggatgga cccgcggcgt attagctagt tggtgaggta atggctcacc 240
aaggcgatga tacgtagccg aactgagagg ttgatcggcc acattgggac tgagacacgg 300
cccaaactcc tacgggaggc agcagtaggg aatcttccac aatggacgca agtctgatgg 360
agcaacgccg cgtgagtgaa gaaggctttc gggtcgtaaa actctgttgt tggagaagaa 420
tggtcggcag agtaactgtt gtcggcgtga cggtatccaa ccagaaagcc acggctaact 480
acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt ggcaagcgtt atccggattt attgggcgta 540
aagcgagcgc aggcggtttt ttaagtctga tgtgaaagcc ctcggcttaa ccgaggaagc 600
gcatcggaaa ctgggaaact tgagtgcaga agaggacagt ggaactccat gtgtagcggt 660
gaaatgcgta gatatatgga agaacaccag tggcgaaggc ggctgtctgg tctgtaactg 720
acgctgaggc tcgaaagcat gggtagcgaa caggattaga taccctggta gtccatgccg 780
taaacgatga atgctaggtg ttggagggtt tccgcccttc agtgccgcag ctaacgcatt 840
aagcattccg cctggggagt acgaccgcaa ggttgaaact caaaggaatt gacgggggcc 900
cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt cgaagcaacg cgaagaacct taccaggtct 960
tgacatcttt tgatcacctg agagatcagg tttccccttc gggggcaaaa tgacaggtgg 1020
tgcatggttg tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa 1080
cccttatgac tagttgccag catttagttg ggcactctag taagactgcc ggtgacaaac 1140
cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1200
gctacaatgg atggtacaac gagttgcgag accgcgaggt caagctaatc tcttaaagcc 1260
attctcagtt cggactgtag gctgcaactc gcctacacga agtcggaatc gctagtaatc 1320
gcggatcagc acgccgcggt gaatacgttc ccgggccttg tacacaccgc ccgtcacacc 1380
atgagagttt gtaacacccg aagccggtgg cgtaaccctt tagggagcga gccgtctaag 1440
<210> 2
<211> 588
<212> DNA/RNA
<213> 异常威克汉姆酵母（Wickerhamomyces anomalus）J2(artifitial sequence)
<400> 2
ggcatgcatc tttgcagcgc ttattgcgcg gcgataaacc ttacacacat tgtctagttt 60
ttttgaactt tgctttgggt ggtgagcctg gcttactgcc caaaggtcta aacacatttt 120
tttaatgtta aaacctttaa ccaatagtca tgaaaatttt taacaaaaat taaaatcttc 180
aaaactttca acaacggatc tcttggttct cgcaacgatg aagaacgcag cgaaatgcga 240
tacgtattgt gaattgcaga ttttcgtgaa tcatcgaatc tttgaacgca cattgcaccc 300
tctggtattc cagagggtat gcctgtttga gcgtcatttc tctctcaaac cttcgggttt 360
ggtattgagt gatactctgt caagggttaa cttgaaatat tgacttagca agagtgtact 420
aataagcagt ctttctgaaa taatgtatta ggttcttcca actcgttata tcagctaggc 480
aggtttagaa gtattttagg ctcggcttaa caacaataaa ctaaaagttt gacctcaaat 540
caggtaggac tacccgctga acttaagcat atcaaaaggc cggaggaa 588

Claims (6)

1.一种异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60241，保藏日期为2017年8月1日。
2.权利要求1所述的异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2在制备除去氨和硫化氢的复合生物除臭剂中的应用。
3.一种复合生物除臭剂，其特征在于，由副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和权利要求1所述的异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2混合而成，且总菌数不少于1×108个/mL，所述的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60240，保藏日期为2017年8月1日；
所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1和所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2的菌数比为1∶1或3∶2。
4.一种权利要求3所述复合生物除臭剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)种子液的培养：将所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1接种于MRS培养基中，37℃培养36h，得到副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1种子液；将所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2接种于PDA培养基中，28℃、180rpm培养21h，得到异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2种子液；
(2)在一号发酵罐中装入占总体积60％的发酵培养基，在培养基温度为28～30℃时，接入占所述发酵培养基体积5％的所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2种子液，转速180～200rpm、间歇性通气搅拌培养24～36h，使所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2的菌数达到1×108cfu/mL；同时，在二号发酵罐中装入占总体积60％的发酵培养基，在培养基温度为28～30℃时，接入占所述发酵培养基体积8％的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1种子液，35～37℃、厌氧培养36～48h，使所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1的菌数达到1～3×108cfu/mL；
(3)将所述异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)J2和所述副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)R1按照比例通入搅拌罐中混匀，调节pH至3.7，得到复合生物除臭剂；
所述发酵培养基的pH为5.5，包括如下按照质量百分比计的组分：红糖5％、大豆蛋白胨0.5％、玉米浆粉1％、硫酸镁0.05％、磷酸二氢钾0.05％，余量为水。
5.权利要求3所述复合生物除臭剂在对散发臭味的环境或场所进行除臭的应用，所述除臭是指除去氨和硫化氢。
6.根据权利要求5所述复合生物除臭剂的应用，其特征在于，将所述复合生物除臭剂稀释10～20倍，喷施于需要除臭的环境或场所。
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