CN113025507B - 复合微生物菌剂及其制备和在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用 - Google Patents

复合微生物菌剂及其制备和在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种复合微生物菌剂及其制备和在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用。本发明提供了一种含有异常威克汉姆酵母、植物乳杆菌以及解淀粉芽孢杆菌的复合微生物菌剂及其制备方法，该微生物菌剂可以对畜禽场养殖污水的NH3和H2S释放量起到有效消减作用，经过本发明中复合微生物菌剂处理后畜禽场养殖污水中COD、氨氮、总磷含量可在较短时间达到国家相关标准的要求，大大缩短养殖废水的处理周期，具有广阔的应用前景。

Description

复合微生物菌剂及其制备和在畜禽场高浓度废水脱臭净化中 的应用
技术领域
本发明涉及微生物菌种及其应用，特别是指一种复合微生物菌剂及其制备和在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用。
背景技术
畜禽养殖废水中含有大量污染物，远远超过了环境的自净能力，直接排入环境中就会导致水体污染、土壤污染及空气污染等一系列的环境问题，对生态环境、动植物生存以及人类健康造成危害。目前畜禽养殖废水中COD、氮磷等污染物的排放量超过了工业废水和生活废水，农业污染源成为包括工业、生活污染源在内的三大污染源之首。畜禽养殖废水属于高浓度有机废水，成分复杂,处理难度大；其特点可概括为:COD、氨氮、TP含量高，水量大，含有大量的病原菌并释放NH3、H2S、挥发性脂肪酸等有臭味的物质。
目前我国大部分中小规模畜禽场受经济条件限制，主要是通过三级沉淀池贮存养殖废水，通过3-6个月的自然存储发酵，降低废水中主要污染物的浓度，然后清水稀释6倍左右还田利用。此种方法处理周期长，受季节和农时影响对储存设施容积也有一定要求。且废水存储和还田过程中，还会大量释放氨气、硫化氢、甲烷等臭气和温室气体，对大气环境造成一定的负面影响。随着微生物学的发展，微生物菌剂在污水处理中也起到越来越重要的作用。在现有生猪养殖污水处理工艺上，通过添加特定微生物菌剂，将有效去除一些难降解的有机物、磷、氮等可溶性污染物等问题，保障出水达到国家《畜禽养殖业污染物排放标准》(GB18596-2001)要求。当前市场上的污水处理菌剂虽然多种多样，但主要是用于生活污水，工业废水等领域，针对畜禽养殖污水的还很少，且其菌种结构单一，对某些易处理的污水能够有较好的效果，而对于成分复杂的畜禽养殖废水的处理效果不佳。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种复合微生物菌剂。
其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液 1～3；
植物乳杆菌或含有其的发酵液 1～3；
解淀粉芽孢杆菌或含有其的发酵液 1～2；
所述的复合微生物菌剂中总菌数≥1×109个/ml，异常威克汉姆酵母的拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus，其保藏编号为CGMCC No.20654；植物乳杆菌的拉丁文名称为lactobacillus plantarum，其保藏编号为CGMCC No.20656；解淀粉芽孢杆菌的拉丁文名称为Bacillus amyloliquefaciens，其保藏编号为CGMCC No.1.7463。
本发明中的菌种——异常威克汉姆酵母是从生猪养殖粪污中分离获得的，该菌株于2020年9月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为异常威克汉姆酵母(Wickerhamomyces anomalus)，保藏编号CGMCC No.20654，保藏机构地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称CGMCC)。
该菌种的菌落形态及生理生化特性如下：
该菌株在YPD培养基平皿上培养，菌落形态呈圆屋顶状，灰白色，不透明，表面平滑，边缘较整齐，粘稠；单细胞为椭圆形或纺锤形，个体大，单一或聚集分布，菌株的生理生化特征如表1，通过菌株形态学特征、生理生化特征和16S rRNA序列分析，该菌株被鉴定为异常威克汉姆酵母菌，其拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus。
菌株的生长特征如下：
拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus的异常威克汉姆酵母CGMCC No.20654，可以在20℃～40℃下生长，最适温度为28～35℃，兼性厌氧，最适的pH为6.0～6.5。整个生长周期中延迟期特别短，增殖速度快，能快速进入对数期(6～30小时)，培养30小时后进入稳定期(30～54小时)，培养到54小时后逐渐进入衰退期。
表1异常威克汉姆酵母菌(Wickerhamomyces anomalus)的生理生化实验
Figure GDA0003727729500000021
Figure GDA0003727729500000031
注：“+”表示阳性或生长；“-”表示不生长或阴性。
该菌株的筛选方法如下：
1、菌株的分离
将采集的样品各取10g，放入到含有灭菌玻璃珠和50ml生理盐水的三角瓶中，于30℃、160转/分钟的转速下震荡2小时，静置20分钟，取上清液1ml，用无菌水稀释成10～4～10～6等不同浓度梯度，吸取不同稀释度悬液100μl涂布在YPD琼脂培养基上，30℃培养48小时，离出酵母菌47株。
2.菌株的初筛
取10mL NH3选择性培养基装于PA瓶中，高压灭菌后注入10μL体积百分比浓度为25％的氨水，将分离得到的菌株接种至培养基，在摇床上30℃、160转/分钟培养48小时，按体积百分比为3％接种量接种至PA瓶中，于30℃、160转/分钟摇床上恒温培养，观察菌液变化，若菌液浑浊表明该菌株具有利用NH3的能力。
3.菌株的复筛
通过测定氨气释放量的变化进行菌株的复筛，取200g新鲜猪粪置于体积为1L的锥形瓶中，将初选的菌株接种于YPD液体培养基培养，按猪粪质量的10％加入锥形瓶中，用保鲜膜密封后，置于30℃恒温培养箱中发酵培养3天。对照组加入等量灭菌培养基，每个处理重复3次。用气体检测仪测定NH3的释放量。
最终选得除臭效果最好的菌株Y21，对其进行进一步的鉴定。
本发明中的菌种——植物乳杆菌是从肉牛养殖场玉米秸秆青贮饲料中筛选得到，该菌株于2020年9月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)，保藏编号CGMCC No.20656，保藏机构地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所(简称CGMCC)。
该菌种的菌落形态及生长特性如下：
在MRS固体培养基上生长菌落形态为圆形，稍凸起，乳白色，菌落微小，不透明，表面光滑易挑起；单细胞呈杆状，两端圆形，无芽孢，呈单一或链状排列菌株的生理生化特征如表2，通过菌株形态学特征、生理生化特征和16S rRNA序列分析，该菌株被鉴定为植物乳杆菌，其拉丁文名称为lactobacil lus plantarum。
菌株的生长特征如下：
拉丁文名称为lactobacillus plantarum的植物乳杆菌CGMCC No.20656，可以在20℃～40℃下生长，最适温度为32～40℃，兼性厌氧，最适的pH为6.0～6.5。整个生长周期中延迟期特别短，增殖速度快，能快速进入对数期(6～36小时)，培养36小时后进入稳定期(36～60小时)，培养到60小时时未见衰退期。
表2植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)的生理生化实验
Figure GDA0003727729500000041
Figure GDA0003727729500000051
本发明中的菌种——解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens CGM CCNo.1.7463系申请人自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)购入。
本发明的目的之二是提供复合微生物菌剂的制备方法。
复合微生物菌剂的制备方法是将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，拉丁文名称为lactobacillus plantarum，保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌以及拉丁文名称为Bacillus amyloliquefaciens、保藏编号为CGMCC No.1.7463的解淀粉芽孢杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
复合微生物菌剂的制备方法，包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，拉丁文名称为lactobacillus plantarum、保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌以及拉丁文名称为Bacillus amyloliquefacie ens、保藏编号为CGMCCNo.1.7463的解淀粉芽孢杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌、植物乳杆菌以及解淀粉芽孢杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
对步骤(2)分别得到含有异常威克汉姆酵母菌、植物乳杆菌以及解淀粉芽孢杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基；培养解淀粉芽孢杆菌的液体培养基选用NA培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度28℃～35℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度30℃～37℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期；解淀粉芽孢杆菌的活化培养条件为：温度30℃～37℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0％～7.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；扩大培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度28℃～35℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养培养36～48小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.0％～5.0％，豆粕1.0％～1.5％，酵母粉1.0％～1.5％，乙酸钠0.3％～0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；扩大培养植物乳杆菌的条件为：温度30℃～37℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养培养24～36小时；步骤(2)中培养解淀粉芽孢杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：玉米淀粉1.0％～1.5％，蛋白胨1.0％～1.5％，酵母粉1.0％～1.5％，磷酸氢二钾0.2％～0.3％，磷酸二氢钾0.2％～0.3％，余量为水；扩大培养解淀粉芽孢杆菌的条件为：温度30℃～37℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养培养36～48小时。
本发明的目的之三是提供复合微生物菌剂在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用。
本发明所具备的实质性特点和取得的显著的技术进步在于：
1、本发明筛选获得异常威克汉姆酵母菌及植物乳杆菌，上述菌种对NH3和H2S有较为明显或优异的消减去除效果；且对于植物乳杆菌而言上述功能属于首次发现。
2、本发明包含从国家菌种库购得的解淀粉芽孢杆菌CGMCC1.7463，该菌产生淀粉酶和蛋白酶，可以有效地分解有机物，起到脱色和净化水质的作用。
3、本发明中的三种菌株在污水中相互配合、协同增效，能有效处理畜禽养殖污水，成本低，效果好，减轻畜禽养殖污水对生态环境的污染，以及对牲畜和人身体健康的威胁。养殖污水中投放7天后，可使氨气、硫化氢释放量下降82％以上；20天时COD含量降低87％，氨氮含量降低61％，总磷含量降低85％，有效缩短了养殖污水达标排放(《畜禽养殖业污染物排放标准》(GB18596-2001))的处理周期。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述，但不作为对本发明的限定，本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准，任何依据本发明的说明书所做出的等效手段替换，均不脱离本发明的保护范围。
实施例1
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液 3；
植物乳杆菌或含有其的发酵液 1；
解淀粉芽孢杆菌或含有其的发酵液 1；
所述的复合微生物菌剂中总菌数≥1×109个/ml，异常威克汉姆酵母的拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus，其保藏编号为CGMCC No.20654；植物乳杆菌的拉丁文名称为lactobacillus plantarum，其保藏编号为CGMCC No.20656；解淀粉芽孢杆菌的拉丁文名称为Bacillus amyloliquefaciens，其保藏编号为CGMCC No.1.7463。
复合微生物菌剂的制备方法，包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化
将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，拉丁文名称为lactobacillus plantarum、保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌以及拉丁文名称为Bacillus amyloliquefacie ens、保藏编号为CGMCCNo.1.7463的解淀粉芽孢杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
(2)菌种扩大培养
将步骤(1)得到的种子液按照体积比10％的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌、植物乳杆菌以及解淀粉芽孢杆菌的发酵液；
(3)菌种复配
将步骤(2)得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌、植物乳杆菌以及解淀粉芽孢杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
所述的步骤(1)中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基；培养解淀粉芽孢杆菌的液体培养基选用NA培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度35℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度37℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期；解淀粉芽孢杆菌的活化培养条件为：温度37℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖7.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；扩大培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度35℃，转速为200转/分钟，摇床培养培养48小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖5.0％，豆粕1.5％，酵母粉1.5％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；扩大培养植物乳杆菌的条件为：温度37℃，转速为200转/分钟，摇床培养培养36小时；步骤(2)中培养解淀粉芽孢杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：玉米淀粉1.5％，蛋白胨1.5％，酵母粉1.5％，磷酸氢二钾0.3％，磷酸二氢钾0.3％，余量为水；扩大培养解淀粉芽孢杆菌的条件为：温度37℃，转速为200转/分钟，摇床培养培养48小时。
复合微生物菌剂在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液 1；
植物乳杆菌或含有其的发酵液 3；
解淀粉芽孢杆菌或含有其的发酵液 2。
复合微生物菌剂的制备方法，包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化；
(2)菌种扩大培养；
(3)菌种复配。
所述的步骤(1)中异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度28℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度30℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期；解淀粉芽孢杆菌的活化培养条件为：温度30℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；扩大培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度28℃，转速为160转/分钟，摇床培养培养36小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.0％，豆粕1.0％，酵母粉1.0％，乙酸钠0.3％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；扩大培养植物乳杆菌的条件为：温度30℃，转速为160转/分钟，摇床培养培养24小时；步骤(2)中培养解淀粉芽孢杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：玉米淀粉1.0％，蛋白胨1.0％，酵母粉1.0％，磷酸氢二钾0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；扩大培养解淀粉芽孢杆菌的条件为：温度30℃，转速为160转/分钟，摇床培养培养36小时。
其余内容同实施例1。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液 1.5；
植物乳杆菌或含有其的发酵液 1.5；
解淀粉芽孢杆菌或含有其的发酵液 1.2。
复合微生物菌剂的制备方法，包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化；
(2)菌种扩大培养；
(3)菌种复配。
所述的步骤(1)中异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度32℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度33℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期；解淀粉芽孢杆菌的活化培养条件为：温度33℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖5.5％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；扩大培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度32℃，转速为180转/分钟，摇床培养培养42小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0％，豆粕1.3％，酵母粉1.3％，乙酸钠0.4％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；扩大培养植物乳杆菌的条件为：温度33℃，转速为180转/分钟，摇床培养培养30小时；步骤(2)中培养解淀粉芽孢杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：玉米淀粉1.3％，蛋白胨1.3％，酵母粉1.3％，磷酸氢二钾0.25％，磷酸二氢钾0.25％，余量为水；扩大培养解淀粉芽孢杆菌的条件为：温度33℃，转速为180转/分钟，摇床培养培养42小时。
其余内容同实施例1。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液 1.5；
植物乳杆菌或含有其的发酵液 2.5；
解淀粉芽孢杆菌或含有其的发酵液 1.8。
复合微生物菌剂的制备方法，包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化；
(2)菌种扩大培养；
(3)菌种复配。
所述的步骤(1)中异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度30℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度32℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期；解淀粉芽孢杆菌的活化培养条件为：温度32℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖5.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；扩大培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度29℃，转速为170转/分钟，摇床培养培养38小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.5％，豆粕1.1％，酵母粉1.1％，乙酸钠0.35％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；扩大培养植物乳杆菌的条件为：温度32℃，转速为170转/分钟，摇床培养培养28小时；步骤(2)中培养解淀粉芽孢杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：玉米淀粉1.1％，蛋白胨1.1％，酵母粉1.1％，磷酸氢二钾0.22％，磷酸二氢钾0.22％，余量为水；扩大培养解淀粉芽孢杆菌的条件为：温度32℃，转速为170转/分钟，摇床培养培养37小时。
其余内容同实施例1。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于：
复合微生物菌剂，其中含有如下菌体数量份数的原料：
异常威克汉姆酵母或含有其的发酵液 2.5；
植物乳杆菌或含有其的发酵液 1.6；
解淀粉芽孢杆菌或含有其的发酵液 1.8。
复合微生物菌剂的制备方法，包括如下工艺步骤：
(1)菌种活化；
(2)菌种扩大培养；
(3)菌种复配。
所述的步骤(1)中异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度33℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度36℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期；解淀粉芽孢杆菌的活化培养条件为：温度36℃，转速为160转/分钟摇床培养培养至生长对数期。
所述的步骤(2)中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖6.0％，硫酸铵0.2％，磷酸二氢钾0.2％，余量为水；扩大培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度33℃，转速为190转/分钟，摇床培养培养45小时；步骤(2)中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.5％，豆粕1.4％，酵母粉1.4％，乙酸钠0.45％，硫酸镁0.05％，硫酸锰0.05％，余量为水；扩大培养植物乳杆菌的条件为：温度35℃，转速为190转/分钟，摇床培养培养33小时；步骤(2)中培养解淀粉芽孢杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：玉米淀粉1.4％，蛋白胨1.4％，酵母粉1.4％，磷酸氢二钾0.28％，磷酸二氢钾0.28％，余量为水；扩大培养解淀粉芽孢杆菌的条件为：温度36℃，转速为190转/分钟，摇床培养培养46小时。
其余内容同实施例1。
为验证本发明所制备的复合微生物菌剂对氨气、硫化氢、COD含量、氨氮含量、总磷含量的去除效果，申请人用氨氮和硫化氢气体检测仪(英思科IBRID MX6)进行了如下试验：
1、试验时间：2019年11月；
2、试验场所：石家庄市和平西路598号申请人住所地；
3、试验器材：实施例1～5制备的复合微生物菌剂，取自河北省石家庄某生猪养殖场的养殖污水，容积50L的塑料桶，便携式气体检测仪(英思科IBRID MX6)；
4、试验过程：
取养殖污水30L，灌装于容积50L的塑料桶中，将按实施例1～5制得的复合微生物菌剂按体积份数的1％加入塑料桶中，室温下静置于遮阳棚内，连续七天在同一时间用便携式气体检测仪(英思科IBRID MX6)检测桶内氨气和硫化氢浓度，20天后分别取样测定污水中COD、氨氮、总磷含量。实验设置对照组，对照组加入等量灭菌自来水。
5、试验结果如表3。
表3对生猪畜禽场污水中氨气、硫化氢、COD、氨氮、总磷测定结果
Figure GDA0003727729500000131
Figure GDA0003727729500000141
6、试验结论
从表3中看出，采用本发明实施例1～5提供的复合微生物菌剂处理后的畜禽养殖污水，在保持短时间内(7天)具有较好脱臭效果的基础上，可以大大缩短养殖废水的处理周期，使污水中COD含量、氨氮含量、总磷含量等量化技术指标较短时间达到《畜禽养殖业污水排放标准》(GB18596-2001)要求，对污水的净化有很好的效果。

Claims (6)

1.复合微生物菌剂，其特征在于其中的微生物由如下菌体数量份数的菌种组成：
异常威克汉姆酵母 1～3；
植物乳杆菌 1～3；
解淀粉芽孢杆菌 1～3；
所述的复合微生物菌剂中总菌数≥1×109个/ml，拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus的异常威克汉姆酵母保藏编号为CGMCC No.20654；拉丁文名称为lactobacillus plantarum的植物乳杆菌保藏编号为CGMCC No.20656；拉丁文名称为Bacillus amyloliquefaciens的解淀粉芽孢杆菌保藏编号为CGMCC No.1.7463。
2.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于是将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，拉丁文名称为lactobacillus plantarum、保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌以及拉丁文名称为Bacillus amyloliquefaciens、保藏编号为CGMCC No.1.7463的解淀粉芽孢杆菌分别接种于灭菌后且含有碳源、氮源及无机盐的培养基中进行通气培养制成发酵液，将上述发酵液按比例复配或纯化后按比例复配制成。
3.根据权利要求2所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
（1）菌种活化
将拉丁文名称为Wickerhamomyces anomalus、保藏编号为CGMCC No.20654的异常威克汉姆酵母，拉丁文名称为lactobacillus plantarum、保藏编号为CGMCC No.20656的植物乳杆菌以及拉丁文名称为Bacillus amyloliquefaciens、保藏编号为CGMCC No.1.7463的解淀粉芽孢杆菌分别接种在相应的无菌液体培养基上，培养至生长对数期，得到相应的种子液；
（2）菌种扩大培养
将步骤（1）得到的种子液按照体积比10%的接种量分别接种于相应的无菌扩大培养基中，扩大培养得分别含有异常威克汉姆酵母菌、植物乳杆菌以及解淀粉芽孢杆菌的发酵液；
（3）菌种复配
将步骤（2）得到的分别含有异常威克汉姆酵母菌、植物乳杆菌以及解淀粉芽孢杆菌的发酵液进行菌落计数，按照菌数比例混合制成复合微生物菌剂。
4.根据权利要求3所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤（1）中培养异常威克汉姆酵母的液体培养基选用YPD培养基，培养植物乳杆菌的液体培养基选用MRS培养基；培养解淀粉芽孢杆菌的液体培养基选用NA培养基，异常威克汉姆酵母菌的活化培养条件为：温度28℃～35℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期；植物乳杆菌的活化培养条件为：温度30℃～37℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期; 解淀粉芽孢杆菌的活化培养条件为：温度30℃～37℃，转速为160转/分钟摇床培养至生长对数期。
5.根据权利要求3所述的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于所述的步骤（2）中培养异常威克汉姆酵母的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖4.0%～7.0%，硫酸铵0.2%，磷酸二氢钾0.2%，余量为水；扩大培养异常威克汉姆酵母的条件为：温度28℃～35℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养36～48小时；步骤（2）中培养植物乳杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：红糖3.0%～5.0%，豆粕1.0%～1.5%，酵母粉1.0%～1.5%，乙酸钠0.3%～0.5%，硫酸镁0.05%，硫酸锰0.05%，余量为水；扩大培养植物乳杆菌的条件为：温度30℃～37℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养24～36小时；步骤（2）中培养解淀粉芽孢杆菌的扩大培养基选用如下质量百分含量的原料组成：玉米淀粉1.0%～1.5%，蛋白胨1.0%～1.5%，酵母粉1.0%～1.5%，磷酸氢二钾0.2%～0.3%，磷酸二氢钾0.2%～0.3%，余量为水；扩大培养解淀粉芽孢杆菌的条件为：温度30℃～37℃，转速为160～200转/分钟，摇床培养36～48小时。
6.根据权利要求1所述的复合微生物菌剂在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用。
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