WO2017012569A1 - 用于观赏鱼的芽孢杆菌复合净水剂及其应用方法 - Google Patents

用于观赏鱼的芽孢杆菌复合净水剂及其应用方法 Download PDF

Info

Publication number
WO2017012569A1
WO2017012569A1 PCT/CN2016/090894 CN2016090894W WO2017012569A1 WO 2017012569 A1 WO2017012569 A1 WO 2017012569A1 CN 2016090894 W CN2016090894 W CN 2016090894W WO 2017012569 A1 WO2017012569 A1 WO 2017012569A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
bacillus
cfu
purifying agent
water
cctcc
Prior art date
Application number
PCT/CN2016/090894
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
张梁
Original Assignee
江南大学
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 江南大学 filed Critical 江南大学
Publication of WO2017012569A1 publication Critical patent/WO2017012569A1/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/085—Bacillus cereus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/10—Bacillus licheniformis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/11—Bacillus megaterium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus

Definitions

  • Bacillus compound water purifying agent for ornamental fish and application method thereof Bacillus compound water purifying agent for ornamental fish and application method thereof
  • the present invention relates to the field of microbial application technology, and in particular to a microbial water purifying agent containing Bacillus coagulans, which is applied to ornamental fish, and an application thereof.
  • PSB is a type of light energy anaerobic microorganism that can perform photosynthesis with organic matter in sewage as a nutrient to purify water.
  • the agricultural and forestry students introduced a beneficial effect of a composite microbe water purifying agent based on photosynthetic bacteria in ornamental fish culture.
  • PSB has a shortcoming, that is, the shelf life is not long, and it must be used up in the short term after leaving the factory, otherwise the microbes will die in large numbers. Therefore, in the case of using a microbial water purifying agent containing photosynthetic bacteria (PSB), it is often found that the product is effective in the early stage, but after two or three months, the effect is weakened or even ineffective.
  • the present applicant provides a Bacillus licheniformis microbial water purifying agent containing Bacillus coagulans for use in ornamental fish and an application thereof.
  • the invention can degrade the bottom residual bait and excrement in the aquaculture water body, realize the purification of the water body, save the water exchange artificial and reduce the environmental pollution problem caused by the water exchange; the product shelf life is 1 year, which is favorable for daily purchase and use.
  • the present invention provides a composite Bacillus microbial water purifying agent for use in ornamental fish, which is composed of the following strains:
  • Bacillus subtilis CCTCC NO: M2011443 1.0x 10 7 -3.0 ⁇ 10 9 cfu/g
  • Bacillus licheniformis 1.0x 10 7 - 1.0x10 9 cfu/g
  • Bacillus coagulans is Bacillus coagulans ZS-007
  • the present invention also provides a method for applying a composite Bacillus microbial water purifying agent for ornamental fish, and directly applying the Bacillus licheniformis water purifying agent to a water body, and the dosage is 0.1-0.5 g/m 3 water body, each 8 ⁇ Use once every 12 days.
  • strain numbered ZS-007 was identified as Bacillus coagula.
  • ZS-007 was deposited with the China Center for Type Culture Collection on May 3, 2015 under the accession number CCTCC M 2015273.
  • Bacillus coagulans strain is inoculated onto the nutrient agar slant medium, and cultured at 25-37 ° C for 24-48 hr; then the streak is transferred to the slant of the nutrient agar eggplant bottle, and cultured at 25-37 ° C 24- 48hr.
  • composition of the nutrient agar slant medium and the nutrient agar eggplant bottle are: peptone 10g / L, beef cream
  • the activated strain was inoculated into a shake flask and shake cultured for 18-30 hr.
  • Shake flask medium formula: peptone 10g / L, beef extract 3g / L, sodium chloride 5g / L,
  • the volume of the 250 mL shake flask is 20 mL, and the volume of the 500 mL shake flask is 50 mL.
  • Seed tank medium composition peptone 10g / L, beef extract 3g / L, sodium chloride 5g / L, pH 7.2-7.4.
  • the seed tank has a volume of 10-1000L and a liquid volume of 50-80%.
  • the seed liquid is connected to the fermenter with an inoculum of 0.1%-10 ⁇ 3 ⁇ 4, and the fermentation medium is composed of: glucose 25 g/L, peptone 15 g/L, yeast powder 10 g/L, potassium dihydrogen phosphate lg /L, magnesium sulfate 0.5 g / L, initial pH 7.0.
  • the fermenter has a volume of l-50m 3 and a liquid loading of 50-80%.
  • the viable cell count and the number of spores of the final fermentation broth were measured by a plate coating method, and the spore rate was calculated.
  • the spore rate is the ratio of the number of spores to the number of viable cells.
  • the medium used was a nutrient agar medium: peptone 10 g/L, beef extract 3 g/L, sodium chloride 5 g/L, agar 15-20 g/L, pH 7.2-7.4.
  • the number of live bacteria in the final fermentation broth was measured and determined by gradient dilution; the number of spores was determined, and the final fermentation broth was heat-treated at 80 ° C for 10 min, and the mixture was diluted by a gradient.
  • the number of viable bacteria in the final fermentation broth is 1.5x10 1Q cfu/mL or more, and the number of spores is 1.4 10 /!1 ⁇
  • the upper and spore rates are above 90.8%.
  • the wet bacterial sludge is collected, and the dry bacterial powder is obtained by a spray drying process.
  • Operating conditions are: inlet air temperature 210 °C, outlet air temperature 100 °C.
  • the number of viable bacteria in dry powder is 8.0x10 "cfu/g or more.
  • Bacillus subtilis Bacillus licheniformis, Bacillus coagulans, Bacillus brevis, Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, Bacillus cereus to compound composite spores Bacillus microbial water purifying agent product.
  • the composite Bacillus microbial water purifying agent product is used in a direct-injection manner, and the dosage is 0.1-0.5 g product/m 3 water body, which is used once every 8-12 days. Product shelf life is 1 year.
  • the principle of action of the present invention (1) a variety of Bacillus play a synergistic role, excess bait and ornamental fish excrement are used as nutrients required for microbial reproduction and are consumed in large quantities; (2) microbial metabolism produces many enzymes, Effectively removes ammonia nitrogen, nitrite and other unfavorable factors in water; (3) The formed microbial cell polymer can be used as ornamental fish bait and directly swallowed; (4) Microbes exist in spore state, strong resistance, long product shelf life .
  • the invention directly puts on the aquaculture water body for water quality improvement, and effectively solves the environmental pollution problem caused by the water change; the invention realizes the water quality stability, prolongs the water exchange period or even does not change the water; meanwhile, the product has a long shelf life 1 year, easy to purchase and use daily.
  • ZS-007 was finally obtained and identified as Bacillus coagulant.
  • ZS-007 was deposited with the China Type Culture Collection on May 3, 2015, with the accession number CCTCC.
  • the obtained strain was inoculated on a nutrient agar slant medium, cultured at 30 ° C for 24 hr, and then transferred to a slanted surface of a nutrient agar eggplant bottle, and cultured at 30 ° C for 24 hr.
  • the composition of the nutrient agar slant medium and the nutrient agar eggplant bottle are: peptone 10g/L, beef extract 3g/L, sodium chloride 5g/L, agar 15-20g/L, pH 7.2-7.4.
  • Shake flask culture The activated strain was inoculated into a shake flask and shake cultured for 20 hr.
  • Shake flask medium formula: peptone 10g / L, beef extract 3g / L, sodium chloride 5g / L, pH 7.2-7.4, shake flask volume 50mL / 500mL triangle bottle.
  • Culture conditions shake flask speed 200r/min, temperature 30. C.
  • Seed tank expansion 20 bottles of 500 mL shake flask seed solution were collected for seed tank inoculation.
  • Seed tank medium composition peptone 10g / L, beef extract 3g / L, sodium chloride 5g / L, pH 7.2-7.4.
  • the seed tank has a volume of 500L and a liquid volume of 75%.
  • Culture conditions stirring speed 200 r / min, aeration rate 0.8 vvm, temperature 30 ° C, culture time 20 hr.
  • Fermentor fermentation 30m 3 fermenter liquid volume 70%.
  • Medium composition glucose 25 g / L, peptone 15 g / L, yeast powder 10 g / L, potassium dihydrogen phosphate lg / L, magnesium sulfate 0.5 g / L, initial pH 7.0.
  • the cultured seeds are connected to a fermentor for fermentation.
  • Culture conditions stirring speed 100 r / min, aeration rate 0.6 v V m, temperature 35 ° C, cultured for 40-45 hr.
  • the number of viable cells was 1.99 ⁇ 10 1 () cfu/g
  • the number of spores was 1.92 ⁇ 10 1 () cfu/g
  • the spore rate was 96.5 ⁇ 3 ⁇ 4.
  • the wet bacterial sludge is collected by centrifugation, and a dry bacterial powder is obtained by a spray drying process. Operating conditions are: inlet air temperature 210 °C, outlet air temperature 100 °C. Number of viable bacteria in dry powder 8.32x10 "cfu/ga
  • Bacillus subtilis CCTCC NO: 2011443 Bacillus licheniformis CCTCC NO: 2012457 purchased from the China Center for Type Culture Collection; Bacillus coagulans CCTCC
  • Example 1 Bacillus pumilus, Bacillus megaterium, Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis, and Bacillus cereus are commercially available products.
  • the product After application, the product is directly placed in an ornamental fish tank, and the amount is 0.2 g/m 3 of water, which is used once every 10 days.
  • the Bacillus microbial water purifying agent does not contain Bacillus coagulans CTCCC NO: M2015273, the fish tank can be replaced without water during the first month, and the water quality is relatively clean; from the second month, there is excrement precipitation at the bottom of the fish tank The water quality gradually becomes cloudy. In less than the third month, the fish appeared to float and had to change water.
  • Example 1 The composite Bacillus microbial water purifying agent in Example 1 was placed at room temperature for one year and then used, and the product was directly placed in an ornamental aquarium, and the amount was 0.2 g/m 3 of water, which was used once every 10 days.
  • the product After application, the product is directly placed in an ornamental fish tank, and the amount is 0.1 g/m ice body, which is used once every 10 days.
  • the product After application, the product is directly placed in an ornamental fish tank, and the amount is 0.1 g/m ice body, which is used once every 10 days.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

提供了一种应用于观赏鱼的芽孢杆菌复合净水剂，由以下菌种组成：枯草芽孢杆菌CCTCC NO：M2011443、地衣芽孢杆菌CCTCC NO：M2012457、凝结芽孢杆菌CCTCC NO：M2015273、短小芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌。

Description

用于观赏鱼的芽孢杆菌复合净水剂及其应用方法
技术领域
[0001] 本发明涉及微生物应用技术领域， 尤其是涉及一种应用于观赏鱼的、 含有凝结 芽孢杆菌复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用。
背景技术
[0002] 随着生活水平不断提高， 观赏鱼已进入日常生活， 给人们带来欢乐。 家庭养鱼 过程中， 水体经常出现浑浊甚至发绿发黑等现象， 严重吋直接导致观赏鱼死亡 。 引起这种现象的原因在于未被食用的饵料和观赏鱼排泄物污染了水体。
[0003] 目前， 人们通常采用定期更换新鲜水或者使用含有光合细菌 （PSB) 的微生物 净水剂产品来保持水体干净。
[0004] 定期更换新鲜水固然能维持观赏鱼养殖水质， 但替换出的脏水会被排入下水道 或者进入环境， 形成新的污染源。
[0005] PSB是一类光能厌氧性微生物， 能以污水中的有机物为营养进行光合作用， 从 而净化水质。 农林生介绍了一种以光合菌群为主的复合微生物净水剂在观赏鱼 养殖中的有益效果 （复合微生物净水剂对观赏鱼水族箱养殖水质的影响试验， 广西农业科学， 2008年第 39卷第 6期） 。 PSB有一个缺点， 即保质期不长， 出厂 后短期内必须用完， 否则微生物大量死亡。 因此， 在使用含有光合细菌 （PSB) 的微生物净水剂产品吋， 经常会发现产品前期有效， 但过了两三个月以后效果 减弱甚至没有效果。
技术问题
[0006] 针对现有技术存在的上述问题， 本申请人提供了一种应用于观赏鱼的、 含有凝 结芽孢杆菌的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用。 本发明可降解观赏鱼养殖 水体中的底部残饵和排泄物， 实现净化水体， 节省换水人工并减少换水带来的 环境污染问题； 产品保质期 1年， 利于日常采购和使用。
问题的解决方案 技术解决方案
[0007] 本发明的技术方案如下：
[0008] 本发明提供了一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂， 由以下菌种组 成：
[0009] 名称
[0010] 枯草芽孢杆菌 CCTCC NO: M2011443 1.0x 10 7-3.0χ10 9 cfu/g
[0011] 地衣芽孢杆菌 CCTCC NO: M2012457 1.0x 10 7- 1.5x10 9 cfu/g
[0012] 凝结芽孢杆菌 CCTCC NO: M2015273 0.5x 10 7- 1.0x10 9 cfu/g
[0013] 短小芽孢杆菌 0.1x 10 7-0.5xl0 9 cfu/g
[0014] 巨大芽孢杆菌 0.4x 10 7- 1.0x10 9 cfu/g
[0015] 解淀粉芽孢杆菌 0.5x10 7- 1.0x10 9 cfu/g
[0016] 侧孢芽孢杆菌 1.0x 10 7- 1.0x10 9 cfu/g
[0017] 蜡样芽孢杆菌 0.5x 10 7- 1.0x10 9 cfu/g
[0018] 合计 5.0x 10 7- 1. Ox 10 10cfu/g;
[0019] 所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌 ( Bacillus coagulans) ZS-007
中国典型培养物保藏中心， 保藏编号为 CCTCC NO: M 2015273
[0020] 本发明还提供了一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂的应用方法， 将复合芽孢杆菌微生物净水剂直接投入水体， 用量 0.1-0.5g/m 3水体， 每 8~12天 使用一次。
[0021] 1、 凝结芽孢杆菌的筛选
[0022] 从江苏无锡马山某奶牛养殖场附近的土壤样品称取 2g， 加入 98ml无菌生理盐水
80°C热处理 lOmin后， 在 37°C摇床上 120 rpm条件下振荡 20min， 吸取上清液 lml 加入 LB培养基中稀释涂布进行菌株分离。 通过对菌株进行形态学观察、 生理生 化实验、 16S rDNA分析等手段有效而准确的确定菌种的属种。
[0023] 最终得到编号为 ZS-007的菌种， 鉴定为凝结芽孢杆菌 Bacillus coagula )
[0024] ZS-007于 2015年 5月 3日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏编号为 CCTCC M 2015273
[0025] 2、 凝结芽孢杆菌高密度发酵 [0026] (1) 菌种活化
[0027] 将凝结芽孢杆菌菌种接种至营养琼脂斜面培养基上， 25-37°C下培养 24-48hr; 然后划线转接于营养琼脂茄子瓶斜面， 25-37°C下培养 24-48hr。
[0028] 营养琼脂斜面培养基及营养琼脂茄子瓶的组成均为： 蛋白胨 10g/L， 牛肉膏
3g/L, 氯化钠 5g/L， 琼脂 15-20g/L， pH7.2-7.4。
[0029] (2) 摇瓶培养
[0030] 将活化好的菌种接种至摇瓶中， 振荡培养 18-30hr。
[0031] 摇瓶培养基配方： 蛋白胨 10g/L， 牛肉膏 3g/L， 氯化钠 5g/L，
pH7.2-7.4。 250mL摇瓶装液量为 20mL， 500mL摇瓶装液量为 50mL。
[0032] 培养条件： 摇瓶转速 200r/min， 温度 25-37°C。
[0033] (3) 种子罐扩培
[0034] 扩培菌种以用于后期发酵。 种子罐培养基组成： 蛋白胨 10g/L， 牛肉膏 3g/L， 氯化钠 5g/L， pH7.2-7.4。 种子罐体积 10-1000L, 装液量 50-80%。
[0035] 培养条件： 搅拌转速 180-250r/min， 通气量 0.5-1.0vvm， 温度 25-37°C， 培养吋 间 18-30hr。
[0036] (4) 发酵罐发酵
[0037] 以 0.1%-10<¾的接种量将种子液接入发酵罐， 发酵培养基组成： 葡萄糖 25 g/L， 蛋白胨 15 g/L， 酵母粉 10 g/L， 磷酸二氢钾 l g/L， 硫酸镁 0.5 g/L， 初始 pH7.0。 发 酵罐体积 l-50m 3， 装液量 50-80%。
[0038] 培养条件： 搅拌转速 100-200r/min， 通气量 0.5-0.8vvm， 温度 25-37°C， 培养吋 间 16-48hr。
[0039] 取发酵液镜检吋， 当 90%以上的菌体都形成芽孢吋， 即到发酵终点， 得到最终 发酵液。
[0040] 采用平板涂布法测定最终发酵液活菌数和芽孢数， 并计算芽孢率。 其中， 芽孢 率为芽孢数与活菌数的比值。 所用培养基为营养琼脂培养基： 蛋白胨 10g/L， 牛 肉膏 3g/L， 氯化钠 5g/L， 琼脂 15-20g/L， pH7.2-7.4。 测定最终发酵液活菌数吋 ， 梯度稀释后测定； 测定芽孢数吋， 取最终发酵液于 80°C热处理 10min， 梯度稀 释后测定。 最终发酵液中活菌数 1.5x10 1Qcfu/mL以上、 芽孢数1.4 10 /!1^以 上、 芽孢率 90.8%以上。
[0041] 3、 凝结芽孢杆菌干菌粉制备
[0042] 最终发酵液离心后收集湿菌泥， 采用喷雾干燥工艺得到干菌粉。 操作条件为： 进风温度 210 °C， 出风温度 100 °C。 干菌粉中活菌数 8.0x10 "cfu/g以上。
[0043] 本发明的实现方式： 将枯草芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌、 凝结芽孢杆菌、 短小芽 孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌、 侧孢芽孢杆菌、 蜡样芽孢杆菌进行 复配得到复合芽孢杆菌微生物净水剂产品。 该复合芽孢杆菌微生物净水剂产品 直投式使用， 用量 0.1-0.5g产品 /m 3水体， 每 8-12天使用一次。 产品保质期 1年。 发明的有益效果
有益效果
[0044] 本发明有益的技术效果在于：
[0045] 本发明的作用原理： （1 ) 多种芽孢杆菌发挥协同作用， 多余饵料和观赏鱼排 泄物用作微生物繁殖所需的营养物质而被大量消耗； （2) 微生物代谢产生很多 酶类， 有效去除水体中的氨氮、 亚硝酸盐等不利因素； （3) 形成的微生物菌体 聚合物可充当观赏鱼饵料， 直接被吞食； （4) 微生物以芽孢状态存在， 抗逆性 强， 产品保质期长。
[0046] 本发明直接投放于观赏鱼养殖水体进行水质改良， 有效解决换水带来的环境污 染问题； 本发明实现了水质稳定， 延长换水周期甚至可不换水； 同吋， 产品保 质周期长达 1年， 便于日常采购和使用。
本发明的实施方式
[0047] 实施例 1
[0048] 1、 凝结芽孢杆菌的筛选
[0049] 从江苏无锡马山某奶牛养殖场附近的土壤样品称取 2g， 加入 98ml无菌生理盐水 ， 80°C热处理 lOmin后， 在 37°C摇床上 120 rpm条件下振荡 20min， 吸取上清液 1 ml加入 LB培养基中稀释涂布进行菌株分离。 通过对菌株进行形态学观察、 生理 生化实验、 16S rDNA分析等手段有效而准确的确定菌种的属种。
[0050] 最终得到编号为 ZS-007的菌种， 鉴定为凝结芽孢杆菌 (^ Bacillus coagulant 。 [0051] ZS-007于 2015年 5月 3日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏编号为 CCTCC
M 2015273。
[0052] 2、 30m 3发酵罐制备
[0053] 菌种活化： 将得到的菌种接种至营养琼脂斜面培养基上， 30°C下培养 24hr后划 线转接于营养琼脂茄子瓶斜面， 30°C下培养 24hr。 营养琼脂斜面培养基及营养琼 脂茄子瓶的组成均为： 蛋白胨 10g/L， 牛肉膏 3g/L， 氯化钠 5g/L， 琼脂 15-20g/L ， pH7.2-7.4。
[0054] 摇瓶培养： 将活化好的菌种接种至摇瓶中， 振荡培养 20hr。 摇瓶培养基配方： 蛋白胨 10g/L， 牛肉膏 3g/L， 氯化钠 5g/L， pH7.2-7.4, 摇瓶装液量 50mL/500mL 三角瓶。 培养条件： 摇瓶转速 200r/min， 温度 30。C。
[0055] 种子罐扩培： 收集 20瓶 500mL摇瓶种子液用于种子罐接种。 种子罐培养基组成 ： 蛋白胨 10g/L， 牛肉膏 3g/L， 氯化钠 5g/L， pH7.2-7.4。 种子罐体积 500L， 装 液量 75%。 培养条件： 搅拌转速 200r/min， 通气量 0.8vvm， 温度 30°C， 培养吋间 20hr。
[0056] 发酵罐发酵： 30m 3发酵罐装液量 70%。 培养基组成： 葡萄糖 25 g/L， 蛋白胨 15 g/L， 酵母粉 10 g/L， 磷酸二氢钾 l g/L， 硫酸镁 0.5 g/L， 初始 pH7.0。 将培养好的 种子接入发酵罐进行发酵。 培养条件： 搅拌转速 100r/min， 通气量 0.6vVm， 温度 35°C， 培养吋间 40-45hr。
[0057] 发酵液中， 活菌数 1.99x10 1()cfu/g， 芽孢数 1.92x10 1()cfu/g， 芽孢率 96.5<¾。
[0058] 3、 干菌粉制备
[0059] 离心收集湿菌泥， 采用喷雾干燥工艺得到干菌粉。 操作条件为： 进风温度 210 °C， 出风温度 100 °C。 干菌粉中活菌数 8.32x10 "cfu/ga
[0060]
[0061] 实施例 2
[0062] 本复合芽孢杆菌微生物净水剂中各微生物含量如表 1 :
[0063] 表 1
[] [表 1]
Figure imgf000007_0001
[0064] 其中， 枯草芽孢杆菌 CCTCC NO: 2011443、 地衣芽孢杆菌 CCTCC NO: 2012457 购买于中国典型培养物保藏中心； 凝结芽孢杆菌 CCTCC
NO:M2015273为实施例 1所制备。 短小芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆 菌、 侧孢芽孢杆菌、 蜡样芽孢杆菌为市售产品。
[0065] 应用吋， 产品直接投放于观赏鱼缸内， 用量 0.2g/m 3水体， 每 10天使用一次。
同吋进行对照试验， 在另外一个同规格、 观赏鱼数量和大小一致的鱼缸中， 使 用不含有凝结芽孢杆菌 CCTCC NO: M2015273的产品。 两个缸均正常喂食。
[0066] 不含有凝结芽孢杆菌 CCTCC NO: M2015273的芽孢杆菌微生物净水剂， 鱼缸在 前 1个月内可不换水， 水质较为干净； 从第二个月幵始， 鱼缸底部有排泄物沉淀 出现， 水质逐渐变浑浊。 不到第三个月， 鱼出现浮头现象， 不得不换水。
[0067] 含有凝结芽孢杆菌 CCTCC NO: M2015273的芽孢杆菌微生物净水剂， 鱼缸 4个 月内未换水， 水质干净， 底部未见饵料、 排泄物沉淀， 鱼未出现死亡现象。 期 间， 主要水质指标变化情况如表 2所示， 污染因子指标下降， 水质稳定。
[0068] 表 2 [表 2]
Figure imgf000008_0001
[0069]
[0070] 实施例 3
[0071] 按实施例 1中的复合芽孢杆菌微生物净水剂室温下放置 1年后再使用， 产品直接 投放于观赏鱼缸内， 用量 0.2g/m 3水体， 每 10天使用一次。
[0072] 正常喂食， 鱼缸 4个月内未换水， 水质干净， 底部未见饵料、 排泄物沉淀， 鱼 未出现死亡现象。
[0073]
[0074] 实施例 4
[0075] 复合芽孢杆菌微生物净水剂中各微生物含量如表 3:
[0076] 表 3
[]
[表 3]
Figure imgf000009_0001
[0077] 应用吋， 产品直接投放于观赏鱼缸内， 用量 0.1g/m冰体， 每 10天使用一次。
正常喂食， 鱼缸一年内未换水， 水质常年保持清亮， 底部干净， 鱼未出现死亡 现象。
[0078]
[0079] 实施例 5
[0080] 复合芽孢杆菌微生物净水剂中各微生物含量如表 4:
[0081] 表 4
[]
[表 4]
Figure imgf000010_0001
[0082] 应用吋， 产品直接投放于观赏鱼缸内， 用量 0.1g/m冰体， 每 10天使用一次。
正常喂食， 鱼缸一年内未换水， 水质常年保持清亮， 底部干净， 鱼未出现死亡 现象。
[0083] 对于本领域技术人员来说， 可以根据上述说明加以改进或变换， 这些改进或变 换都属于本发明所附权利要求的保护范围。
打印件 (原件为电子形式)
-1 PCT/RO/134表 (SAFE)有关保藏的微生物
或其他生物材料的说明 (PCT细则笫 13条
之二）
-1-1 软件版本 CEPCT
版本 1.01.00 MT/FOP 20140331/0.20.5.21
-2 国际申请号 PCT/CN2016/090894
-3 申请人或代理人的档案号 HY0081 下面的说明与本申请说明书中此处提到的
保藏的微生物或其他生物材料相关：
-1 页码 0024
-2 行号： 1-2
-3 保藏事项
-3-1 保藏单位名称 中国典型培养物保藏中心
-3-2 保藏单位地址 中国湖北省武汉市武汉大学，邮政编码: 430072， Hubei
(CN)。
-3-3 保藏日期 2015年 5月 03日（03.05.2015)
-3-4 保藏号 CCTCC M2015273
-4 补充说明
-5 本说明是对下列指定国 所有指定国
-6 单独提交的说明
这些说明将随后提交给国际局 由受理局填写 -4 本表格与国际申请一起收到：
(是或否）
-4-1 受权官员 由国际局填写 -5 国际局收到本表格日期： -5-1 受权官员

Claims

权利要求书
[权利要求 1] 一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂， 其特征在于由以下 菌种组成：
名称 含量
枯草芽孢杆菌 CCTCC NO: M2011443 1.0x107-3.0xl09 cfu/g 地衣芽孢杆菌 CCTCC NO: M2012457 1.0x107-1.5xl09 cfu/g 凝结芽孢杆菌 CCTCC NO: M2015273 0.5x107- 1.0x109 cfu/g 短小芽孢杆菌 0.1x107-0.5xl09 cfu/g 巨大芽孢杆菌 0.4x107-1.0x109 cfu/g 解淀粉芽孢杆菌 0.5x107-1.0x109 cfu/g
侧孢芽孢杆菌 1.0x107-1.0x10 ή cfu/g 蜡样芽孢杆菌 0.5x10乙 1.0x109 cfu/g 合计 5.0xl07-1.0xl010cfu/g;
所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌 Bacillus coagulans) ZS-007, 保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏编号为 CCTCC NO: M
2015273。
[权利要求 2] 一种权利要求 1所述的应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂的 应用方法， 其特征在于将复合芽孢杆菌微生物净水剂直接投入水体, 用量 0.1-0.5g/m3水体， 每 8~12天使用一次。
PCT/CN2016/090894 2015-07-22 2016-07-21 用于观赏鱼的芽孢杆菌复合净水剂及其应用方法 WO2017012569A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510436128.7A CN105132307B (zh) 2015-07-22 2015-07-22 一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用
CN201510436128.7 2015-07-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2017012569A1 true WO2017012569A1 (zh) 2017-01-26

Family

ID=54717881

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2016/090894 WO2017012569A1 (zh) 2015-07-22 2016-07-21 用于观赏鱼的芽孢杆菌复合净水剂及其应用方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN105132307B (zh)
WO (1) WO2017012569A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11653674B2 (en) 2018-01-24 2023-05-23 Omnigen Research, Llc Bacillus combination for administration to animals

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105132307B (zh) * 2015-07-22 2017-12-12 江南大学 一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用
CN106472393A (zh) * 2016-09-28 2017-03-08 吕子含 一种对虾养殖池水质和藻类自动控制管理系统及其控制方法
CN111909868A (zh) * 2020-07-24 2020-11-10 天津开发区坤禾生物技术有限公司 一种防治草鱼厌食死鱼的复合菌剂及其制备方法和应用
CN113712077A (zh) * 2021-08-23 2021-11-30 南京工业大学 一种利用芽孢杆菌发酵产物复配的水果保鲜剂及其应用
CN117821316B (zh) * 2023-12-26 2024-07-30 江苏三仪生物工程有限公司 复合芽孢杆菌菌剂及其在水产养殖中抑制蓝藻的应用
CN118360212A (zh) * 2024-05-20 2024-07-19 哈尔滨市农业科学院 一种短小芽孢杆菌及其制备的复合微生物菌剂和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100819869B1 (ko) * 2007-07-27 2008-04-08 디에스케이엔지니어링(주) 남은 음식물과 맥반석을 이용한 수질정화제 제조방법
CN101333499A (zh) * 2008-05-13 2008-12-31 昆山工研院华科生物高分子材料研究所有限公司 复合型活菌生物净水剂及其制备方法
CN102219310A (zh) * 2011-04-11 2011-10-19 武汉中傲天乐生物科技有限公司 环保型复合微生物制剂及其制备和其在水产养殖中的应用
CN104017757A (zh) * 2014-06-03 2014-09-03 江南大学 一株高效底改芽孢杆菌及其制成的复合底改菌剂和应用
CN105132307A (zh) * 2015-07-22 2015-12-09 江南大学 一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6645506B1 (en) * 1997-04-18 2003-11-11 Ganeden Biotech, Inc. Topical compositions containing extracellular products of Pseudomonas lindbergii and Emu oil
CN1557944A (zh) * 2004-02-11 2004-12-29 常熟市恒达生物工程科技有限公司 复合活菌生物净水剂的制备方法
CN100400651C (zh) * 2006-03-14 2008-07-09 浙江大学 凝结芽孢杆菌菌株及其用途
CN101723521B (zh) * 2009-12-08 2011-07-20 华南理工大学 降解养殖水体中亚硝酸盐和氨态氮的净水剂的制备方法
CN104671432B (zh) * 2015-01-27 2016-08-31 河海大学 一种水产养殖水体净化剂及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100819869B1 (ko) * 2007-07-27 2008-04-08 디에스케이엔지니어링(주) 남은 음식물과 맥반석을 이용한 수질정화제 제조방법
CN101333499A (zh) * 2008-05-13 2008-12-31 昆山工研院华科生物高分子材料研究所有限公司 复合型活菌生物净水剂及其制备方法
CN102219310A (zh) * 2011-04-11 2011-10-19 武汉中傲天乐生物科技有限公司 环保型复合微生物制剂及其制备和其在水产养殖中的应用
CN104017757A (zh) * 2014-06-03 2014-09-03 江南大学 一株高效底改芽孢杆菌及其制成的复合底改菌剂和应用
CN105132307A (zh) * 2015-07-22 2015-12-09 江南大学 一种应用于观赏鱼的复合芽孢杆菌微生物净水剂及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZHAO, DEBING ET AL.: "The Effect Comparison of Several Purifying Agentson Water Quality", MODERN AGRICULTURAL SCIENCES, vol. 15, no. 7, 31 July 2008 (2008-07-31), ISSN: 1005-4650 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11653674B2 (en) 2018-01-24 2023-05-23 Omnigen Research, Llc Bacillus combination for administration to animals

Also Published As

Publication number Publication date
CN105132307B (zh) 2017-12-12
CN105132307A (zh) 2015-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2017012569A1 (zh) 用于观赏鱼的芽孢杆菌复合净水剂及其应用方法
EP3095855B1 (en) Efficient bottom treatment bacillus, composite bottom treatment inoculant prepared using same and applications thereof
CN101333499B (zh) 复合型活菌生物净水剂及其制备方法
CN107299067B (zh) 一种降解养殖池塘中亚硝酸盐的复合微生态制剂及应用
CN105462872A (zh) 一种复合微生态制剂及其制备方法
CN106957805B (zh) 一种具有抑菌效果的芽孢杆菌GBacillus-9菌株及其分离方法和应用
CN109355223A (zh) 一株具有氨氮降解功能的枯草芽孢杆菌n2及其应用
CN104946574B (zh) 一株抑制植物病原真菌的枯草芽孢杆菌Baisha2C
CN104673715B (zh) 对镉具有固定效应并能促进植物生长的肠杆菌及其应用
CN111793575A (zh) 一种复合菌剂及其在水产养殖中的应用
CN107988117B (zh) 一种复合益生菌腐熟剂及其制备方法与应用
CN101921710B (zh) 过度养殖区水体微生物修复剂
CN109762767B (zh) 一种污水复合微生物处理剂及其制备方法与应用
CN102746999A (zh) 一种lh微生物、制备方法及其应用
CN114921385B (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在饲料添加和无抗养殖中的应用
WO2017012571A1 (zh) 一株凝结芽孢杆菌在提升蛋鸡产蛋量上的应用
CN105543149B (zh) 一株新的巨大芽孢杆菌及其应用
CN102899277A (zh) 一种蜡状芽孢杆菌及其应用
CN114437964B (zh) 一株贝莱斯株芽孢杆菌及其应用
CN108865935A (zh) 一种水质改良的微生态制剂及其制备方法
CN117487699B (zh) 一株兼具促生长能力的硝化细菌及其应用
CN118126869B (zh) 枯草芽孢杆菌bs-22株及其应用
CN109055264A (zh) 一种用于海参养殖的微生物菌剂及其制备方法
CN113025507B (zh) 复合微生物菌剂及其制备和在畜禽场高浓度废水脱臭净化中的应用
CN106982739A (zh) 一种微生物降解垫料

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16827260

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 16827260

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1