CN108030784A - 一种大鼠持续性高尿酸血症模型的复制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于实验模型构建技术领域，涉及一种大鼠持续性高尿酸血症模型的复制方法；其方法流程包括动物选取、适应性饲养、模型构建和模型应用四个步骤；该方法步骤具体为将选取的健康大鼠于清洁级的动物饲养室进行适应性喂养1周，将形态特征正常的大鼠用于模型的建立；针对形态特征正常的大鼠，每天于室温下用腹腔注射给药的方式，给予500mg·kg‑1的尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾，同时24h不间断的给予10％的果糖饮水以及充足的饮食。每日连续按对大鼠给药造模，持续给药3周，得到试样大鼠高尿酸血症模型；再将建立的大鼠高尿酸血症模型进行应用，得到具有典型疾病特征的高尿酸模型；用本发明建立大鼠持续性高尿酸血症模型的方法不仅操作简单，复制周期短，可使大鼠的血尿酸水平可显著提高，并且能够更好地模拟高尿酸血症的临床特征，具有良好的应用前景。

Description

一种大鼠持续性高尿酸血症模型的复制方法
一、技术领域
本发明属于实验模型构建技术领域，涉及一种能构建长期稳定的大鼠高尿酸血症模型的方法。
二、背景技术
高尿酸血症是典型的因嘌呤代谢紊乱或尿酸排泄减少而导致的疾病，以体内嘌呤代谢终产物尿酸的浓度高出正常水平2～8倍并长时间维持为特征。流行病学研究表示，体内血尿酸浓度长时间持续呈高水平时，会引发痛风、肾病、高血压和糖尿病等。而临床的常见的治疗高尿酸血症的药物如别嘌呤醇、非布索坦、苯溴马隆等均会出现不同程度的皮肤过敏、腹泻、肝功能异常等不良反应。因此，寻找更加合理和科学的高尿酸血症模型去应用于新型药物的筛选显得至关重要。
果糖是一种甜度最高的天然甜味剂，饮食中摄取的果糖主要来源于蔗糖、高果糖玉米糖浆。随着人们生活水平的提高，果糖的消耗量也在逐年升高，流行病学调查结果显示果糖饮料的消耗与血清尿酸水平的升高和高尿酸血症的频发有密切的关系。通过利用果糖造模，能够模拟临床常见的高尿酸病症病症，可以去探究果糖过量摄入与高尿酸血症之间的内在联系。由于啮齿类动物体内存在人类缺乏的尿酸酶，为了更好的模拟人体的实际情况和高尿酸血症的发病机制，故采用果糖和尿酸酶抑制剂别嘌呤醇结合的方式诱导高尿酸血症，可以在较短时间内形成稳定的动物模型。该模型可以用于广泛用于高果糖摄入所致高尿酸血病发病机理的探究以及抗高尿酸血症药物的筛选。
三、发明内容
本发明的目的在于克服目前常见的高尿酸血症造模技术所存在的缺点，建立了一种通过果糖联合氧嗪酸钾在短时间内建立稳定高尿酸血症模型的方法。本发明的技术方案为：
为了实现上述目的，本发明所述的高尿酸血症模型的构建方法，其方法流程包括以下步骤：
1)动物选取：选取体重为180-220g，年龄为6-8周龄的雄性清洁级SD大鼠，饲养于清洁级或SPF级的动物饲养室；
2)适应性饲养：将步骤1)中选取的SD大鼠于清洁级或SPF级的动物饲养室进行适应性饲养，适应性饲养期间观察大鼠的形态特征，将形态特征正常的大鼠挑选出来用于模型的建立；
3)模型的建立：将步骤2)中经过适应性饲养后形态特征无异常的大鼠，于SPF级的动物饲养室中24h不间断的给予10％的果糖饮水，并于室温下用腹腔注射的方式，给予500mg·kg-1的尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾。每日连续按对大鼠给药造模，持续给药3周。质量分数为10％的果糖溶液的配制方法：将饮用水中加入重量百分比为10％的果糖，搅拌混匀。；
4)模型的应用：对步骤3)中构建的大鼠高尿酸血症模型进行大鼠眼眶后静脉丛采血，加入含有肝素钠溶液的离心管中，在4℃、3000r/min的条件下离心5min，取500μL血浆的上清液，用尿酸试剂盒测定血浆尿酸得浓度，处死大鼠后迅速打开腹腔，摘除右侧肾脏，使用4％的多聚甲醛溶液固定，常规石蜡包埋后进行切片、HE染色，光镜(×200)下观察肾脏组织学变化。利用氧嗪酸钾联合果糖诱导大鼠高尿酸血症，得到的模型具有明显的高尿酸血症症状，血浆内尿酸水平出现显著升高并伴有明显的肾损伤症状。
本发明与现有技术相比，采用果糖和尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾联合造模的方法易于掌握，安全稳定，能够模拟临床常见的高尿酸病症，具有良好的应用前景和临床意义。
四、附图说明
图1为本发明实施例2中空白对照组、果糖对照组、氧嗪酸钾对照组和果糖氧嗪酸钾对照组血浆中尿酸的水平。
图2为本发明实施例3中空白对照组、果糖对照组、氧嗪酸钾对照组和果糖氧嗪酸钾对照组光镜下的肾脏结构。
五、具体实施方式
下面结合附图及具体实施例对本发明作进一步的详细描述，实施例中所使用的实验方法，如无说明，均为常规方法；实施例中所使用材料试剂，如无说明，均为商业途径得到。
实施例1：本实施例的具体构建高尿酸血症模型的具体步骤为
1)动物选取和模型构建：选取8周龄雄性清洁级SD大鼠，体重180-220g，由上海西普尔-必凯实验物有限公司提供，饲养于中国药科大学清洁级动物饲养室，实验期间，室温控制在22±2℃左右，湿度控制在55±5℃左右，12h/12h交替照明，自由饮食饮水观察大鼠体态特征变化，筛选出体态特征正常的SD大鼠20只进行造模实验。
2)材料与设备：
氧嗪酸钾(CAS：2207-75-2)购于上海仕锋生物科技有限公司，D-果糖(CAS：57-4-7)购自Biosharp公司；尿酸测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；肝素钠(CAS：9041-08-1)购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；多功能酶标仪美国伯腾仪器有限公司；这些试剂和设备为构建模型所必需。
本实施例采用随机分组法将20只雄性SD大鼠按体重分组，分别是空白对照、果糖对照、氧嗪酸钾对照和氧嗪酸钾果糖对照4组，每组5只；空白对照组和氧嗪酸钾组给予正常饮水和正常饮食，其他两组给予质量分数为10％的果糖饮水和正常饮食。氧嗪酸钾组和氧嗪酸钾果糖组每天以腹腔注射的方式给予500mg/kg的氧嗪酸钾混悬液，灌胃体积为1mL/100g。所有大鼠均自由饮食和饮水。在喂养第3周末禁食12h后进行眼眶后静脉丛采血1～1.5mL于加有肝素钠溶液的离心管中，离心(4,000rpm，10min，4℃)，取上清收集血浆300μL，用尿酸试剂盒测量血浆中的尿酸水平。在实验3周后，果糖对照组、氧嗪酸钾对照组和氧嗪酸钾果糖对照组血尿酸水平分别达到162.660±8.552，207.877±9.886，216.980±22.348μmol/L；与空白对照组(149.442±3,185μmol/L)相比血尿酸水平均出现显著性升高，其中氧嗪酸钾果糖组血尿酸水平在四个组别中最高。实验结果证明，果糖联合氧嗪酸钾干预可以使大鼠的尿酸水平维持在一个较高的水平。
实施例2：本实施例采用实施例1的动物干预进行试验，在动物实验第3周末，大鼠禁食12h后处死，处死后迅速打开腹腔，摘除右肾，置于4％的多聚甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋后制成3μm厚的切片进行HE染色，光镜下(×200)下观察；结果如附图所示，空白对照组为正常结构的肾小球和肾小管，肾小球大小正常，分布均匀，肾小管无肿胀变性。果糖对照组肾小管出现一定程度的胞质分离的现象。氧嗪酸钾对照组肾小管出现明显的空泡。氧嗪酸钾果糖组出现肾小球萎缩变性，肾小管上皮细胞肿胀，胞浆内出现边界清晰的巨大空泡，但并未发现结晶物沉积以及明显的纤维化，符合高尿酸血症大鼠肾脏病理损伤机制。

Claims (1)

1.一种高尿酸血症模型的构建方法，其特征在于其方法流程包括以下步骤：
1)动物选取：选取体重为180-220g，年龄为6-8周龄的雄性清洁级SD大鼠，饲养于清洁级或SPF级的动物饲养室；
2)适应性饲养：将步骤1)中选取的SD大鼠于清洁级或SPF级的动物饲养室进行适应性饲养，适应性饲养期间观察大鼠的形态特征，将形态特征正常的大鼠挑选出来用于模型的建立；
3)模型的建立：将步骤2)中经过适应性饲养后形态特征无异常的大鼠，于SPF级的动物饲养室中24h不间断的给予10％的果糖饮水，并于室温下用腹腔注射的方式，给予250～500mg·kg-1的尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾。每日连续按对大鼠给药造模，持续给药3周。质量分数为10％的果糖溶液的配制方法：将饮用水中加入重量百分比为10％的果糖，搅拌混匀；
4)模型的应用：对步骤3)中构建的大鼠高尿酸血症模型进行大鼠眼眶后静脉丛采血，加入含有肝素钠溶液的离心管中，在4℃、3000r/min的条件下离心5min，取500μL血浆的上清液，用尿酸试剂盒测定血浆尿酸的浓度；处死大鼠后迅速打开腹腔，摘除右侧肾脏，使用4％的多聚甲醛溶液固定，常规石蜡包埋后进行切片、HE染色，光镜(×200)下观察肾脏组织学变化。利用氧嗪酸钾联合果糖诱导大鼠高尿酸血症，得到的模型具有明显的高尿酸血症症状，血浆内尿酸水平出现显著升高并伴有明显的肾损伤症状。
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