CN108017714A - 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf92蛋白的单克隆抗体及其应用 - Google Patents

一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf92蛋白的单克隆抗体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108017714A
CN108017714A CN201711165459.7A CN201711165459A CN108017714A CN 108017714 A CN108017714 A CN 108017714A CN 201711165459 A CN201711165459 A CN 201711165459A CN 108017714 A CN108017714 A CN 108017714A
Authority
CN
China
Prior art keywords
orf92
monoclonal antibody
cyhv
antigen
albumen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711165459.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108017714B (zh
Inventor
吕利群
沈兆媛
姜有声
鲁建飞
许丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Ocean University
Original Assignee
Shanghai Ocean University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Ocean University filed Critical Shanghai Ocean University
Priority to CN201711165459.7A priority Critical patent/CN108017714B/zh
Publication of CN108017714A publication Critical patent/CN108017714A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108017714B publication Critical patent/CN108017714B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/085—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus, Epstein-Barr virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G01N33/56994—Herpetoviridae, e.g. cytomegalovirus, Epstein-Barr virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及属于生物技术领域，特别涉及一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明成功克隆了PGEX‑4T‑3‑ORF92质粒，筛选出一株抗Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的细胞株CyHV‑2‑ORF92‑1B7，首次获得了抗CyHV‑2‑ORF92的单克隆抗体，可特异性识别CyHV‑2病毒粒子和ORF92重组蛋白，可用于制备关于CyHV‑2检测诊断试剂、试剂盒、抗病毒药物的应用。

Description

一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明涉及属于生物技术领域，特别涉及一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用。
背景技术
鲫(Crucian carp)饲养成本低，养殖地域广，在我国淡水养鱼上占有重要地位，我国鲫鱼养殖主要集中在东部、中部和南部地区，如江苏、湖北、江西、安徽、山东、广东、四川、辽宁、湖南、浙江等省。据统计，2013年我国鲫鱼年产量达259.44万吨，其中主要养殖品种为异育银鲫(Carassiusauratus gibelio)。近年来，疱疹病毒性造血器官坏死病(herpesviralhaematopoietic necrosis， HVHN)频发，对我国鲫鱼养殖业造成了严重影响。HVHN是鲫的一种高致病性病毒病，其病原为II型鲤疱疹病毒(cyprinid herpesvirus2，CyHV-2)。CyHV-2与分离自鲤科鱼类的另外两种病毒鲤疱疹毒1(Cyprinid herpesvirus1，CyHV-1) 和鲤疱疹病毒3(Cyprinid herpesvirus 3，CyHV-3)亲缘关系较近，与沟鲶疱疹病毒(Ictalurid herpesvirus 1，IcHV-1)关系相对较远。Jung等在1995年对 CyHV-2进行了第一次报道，发现CyHV-2是金鱼造血器官坏死病的致病病原。接着，美国、澳大利亚、中国台湾、英国养殖的金鱼也爆发该病。自从2011年匈牙利首次在养殖的鲫体内检测到CyHV-2后，近几年来关于CyHV-2感染鲫的报道也逐渐增多，捷克、意大利先后报道了CyHV-2感染鲫并引起鲫大批量死亡的情况。在我国，多个实验室在2012年和2013年先后报道了CyHV-2感染鲫的情况。虽CyHV-2有比较高的致死率，但其可以感染的种类比较少，只可以感染金鱼、鲫以及它的普通变种。组织病理学研究表明，被病毒感染的鲫体表出血，伴随眼球膨出，腹部膨胀，内脏器官严重出血，鳔壁斑点状出血。这些报道均表明CyHV-2 是一种新生养殖鲫鱼病毒病，其发病区域在逐年扩大。CyHV-2病害已经引起我国水产养殖业管理部门及养殖户高度重视。
发明内容
本发明公开一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体及其应用，本发明成功克隆了PGEX-4T-3-ORF92质粒，筛选出一株抗Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的细胞株CyHV-2-ORF92-1B7，首次获得了抗CyHV-2-ORF92的单克隆抗体，可特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白，可用于制备关于CyHV-2检测诊断试剂或设备中的应用。
为解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：
一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体,所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2017208杂交瘤细胞分泌，所述单克隆抗体特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白。
所述杂交瘤细胞制备方法如下：以GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞。
所述GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞的获得方法为：第一次免疫为腹腔注射，抗原与弗氏完全佐剂等体积充分乳化后免疫；14天后进行第二次免疫，抗原与弗式不完全佐剂等体积充分乳化后对小鼠腹腔注射免疫；7天后第三次免疫采用不加佐剂的抗原皮下注射免疫；7天后进行第四次不加佐剂的抗原皮下注射免疫。
所述的GST-ORF92重组蛋白的制备方法为：从Ⅱ型鲤疱疹病毒PCR扩增出 ORF92基因，将ORF92基因克隆至PGEX-4T-3质粒上，获得重组质粒 PGEX-4T-3-ORF92；将PGEX-4T-3-ORF92质粒转染到大肠杆菌中诱导表达出 GST-ORF92重组蛋白。
所述单克隆抗体特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白，用于制备关于CyHV-2检测诊断试剂或设备中的应用。
所述杂交瘤细胞在2017年10月20日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO:C2017208。
所述杂交瘤细胞制备方法如下：以GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞。
本发明的有益效果是：本发明成功克隆了PGEX-4T-3-ORF92质粒，筛选出一株抗Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的细胞株CyHV-2-ORF92-1B7，首次获得了抗 CyHV-2-ORF92的单克隆抗体，可特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白，可用于制备关于CyHV-2检测诊断试剂或设备中的应用。
附图说明
图1为Dot-Blot法筛选出效果最佳的细胞株结果图。
图2为Dot-blot验证后，扩大培养1B7细胞株，1B7细胞株分泌上清在 Western-Blotting中特异性识别CyHV-2病毒中的ORF92蛋白，验证表明该株细胞为ORF92重组蛋白抗体的细胞株。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步说明：
实施例1
ORF92原核表达：
1.ORF92基因片段扩增
根据CyHV-2 ORF92的基因序列设计特异性引物
(F:5'-GGAATTCCATGTCTAGTCAACAGTACATCATC-3'；R:5'-GCGGCCGCAAAAGGAAAACTCGGTGCAGATGA-3')，在上下游引物序列中分别插入EcoRI和NoTI酶切位点，以经蔗糖梯度离心纯化过的CyHV-2病毒粒子中所提出的DNA为模板，对ORF92基因进行PCR扩增，PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳，割胶后用纯化回收试剂盒对目的片段进行回收。
2.ORF92基因的克隆
将纯化回收得到的PCR产物和空载体质粒PGEX-4T-3双酶切处理(体系： EcoRI 1μL，NoTI 1μL，10×buffer 3μL，PCR纯化回收产物≤200ng，加灭菌水到30μL；质粒体系：EcoRI 1μL，NoTI 1μL，10×buffer 5μL，质粒≤1μg，加灭菌水到50μL)，37℃1h后，酶切后用T4DNA连接酶连接ORF92 目的片段和PGEX-4T-3[T4Liqase 1μL，T4Liqase buffer 2.5μL，PGEX-4T-3 100ng，ORF 92目的片段200ng，加灭菌水到25μL]，将连接后的产物转化到DH5α大肠杆菌中，筛选阳性克隆，菌液PCR鉴定为阳性的提取其重组质粒，经测序鉴定正确后，命名为PGEX-4T-3-ORF92。
3.诱导表达和可溶性分析
将PGEX-4T-3-ORF92转化到BL21大肠杆菌中，挑取LB/Amp平板筛选的阳性克隆，接种阳性菌落PGEX-4T-3-ORF92到2ml LB(Ampr+)培养基中，37℃摇床培养过夜。接着按照1:100的比例转移至刚配制的LB(Ampr+)液体培养基中培养，37℃，150r/min恒温摇床培养3-4h，加入终浓度为0.2mmol/L的IPTG诱导，诱导5h后收集表达细菌，4℃，8500r/min离心30min；1×PBS 洗涤两次，用适量1×PBS重悬后进行超声破碎处理约为120次(超声6s间隔6s，功率60％)至溶液澄清。4℃，12000r/min离心10min后分别收集上清和沉淀，制样后进行SDS-PAGE电泳，鉴定表达蛋白的可溶性。
4.目的蛋白纯化
诱导出表达大量目的蛋白后，将沉淀分别用2mol/L，4mol/L，6mol/L，8mol/L 的尿素处理15min，每步均在4℃下8500r/min，离心20min，而后将洗脱下的蛋白用透析袋透析，依次放入含6、4、2和0mol/L尿素的PBS溶液中透析，每个浓度透析4h。透析后用BCA法测定微量蛋白浓度测定试剂盒，测其浓度，于-80℃保存。
实施例2
单抗制备：
1.SP2/0小鼠骨髓瘤细胞及实验用小鼠
SP2/0小鼠骨髓瘤细胞由本实验室保存，免疫前进行复苏并培养，使其处于对数生长期。实验用SPF级BABL/C小鼠购自上海市实验动物研究中心，免疫前实验室暂养7天。
2.免疫程序
用已纯化好的目的蛋白免疫小鼠，免疫剂量为100μg/只。第一次免疫为腹腔注射，抗原与等体积的弗氏完全佐剂充分混匀后免疫；第一次免疫后14天进行第二次免疫，仍为腹腔注射，抗原与弗氏不完全佐剂等体积充分乳化后对小鼠进行免疫。随后的第三次免疫是不加佐剂的纯抗原进行腹腔注射。在免疫以后第三天，对小鼠眼角采血，检测其血清是否为阳性；若为阳性，则可以在第七天进行最后一次免疫。
3.细胞融合及培养
经过4次免疫后的第三天，麻醉小鼠后拉颈将其处死并将其浸泡在75％的乙醇溶液中，将没有经过处理的2只4周龄小鼠也以同样方法处死浸泡在75％的乙醇溶液消毒处理。在无菌条件下取免疫小鼠的脾脏和未免疫小鼠的胸腺细胞，分别在100目网筛上进行研磨，用RPMI1640培养液吹下形成单细胞悬液，在25℃条件下，1000rpm离心3min，去上清，用预热的1％HAT选择培养基重悬细胞沉淀，备用。将小鼠脾脏细胞的悬液和处于对数生长期的SP2/0小鼠骨髓瘤细胞混合均匀，25℃离心3min，弃去上清，握拳击打离心管下壁约20下，使其混合，然后缓慢滴加50％PEG溶液1ml，缓慢滴加37℃ RPMI 1640培养液10ml，5分钟后补加RPMI 1640培养液至40ml，25℃条件下1000rpm，离心5min，去上清。然后加入预热的1％HAT选择性培养基至40ml，滴至96孔板中，每孔200μl，在5％CO2恒温培养箱内37℃的恒温培养。
4.采用有限稀释法对阳性杂交瘤细胞进行克隆
用HAT选择培养液培养小鼠骨髓瘤细胞的细胞，培养7～10d后，将有单个细胞堆的孔换用HT选择培养基，培养3～4d后，用RPMI 1640完全培养基对阳性孔内细胞进行稀释至96孔细胞培养板中，选择单个细胞的阳性孔再一次进行克隆，直至达100％阳性孔率，总共进行了3次亚克隆。并采用Dot-blot法检测，筛选阳性杂交瘤细胞，结果如图1所示，选出效果最佳的细胞株为1B7，转孔并扩大培养并建立细胞株用DMSO保存。
5.对阳性细胞上清液进行Western blot验证
将纯化过的CyHV-2病毒加入2×SDS-PAGE上样缓冲液，制备样品，进行10％ SDS-PAGE凝胶电泳，采用电转膜法(100V，120min)转至硝酸纤维素膜，5％脱脂牛奶室温封闭2h。用0.1M PBST清洗三次，将Dot-blot法删选到的抗 CyHV-2-ORF92-1B7的阳性杂交瘤细胞上清作为一抗(室温2h，4℃过夜)，0.1M PBST清洗三次，HRP作为二抗(1：5000稀释，室温，2h)孵育硝酸纤维素膜，期间保持缓慢摇动，0.1M PBST清洗三次，用DAB显色缓冲液避光显色，观察条带大小，拍照记录。具体结果如图2所示。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (7)

1.一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体,其特征在于：所述单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO:C2017208杂交瘤细胞分泌，所述单克隆抗体特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体：其特征在于，所述杂交瘤细胞制备方法如下：以GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体,其特征在于：所述GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞的获得方法为：第一次免疫为腹腔注射，抗原与弗氏完全佐剂等体积充分乳化后免疫；14天后进行第二次免疫，抗原与弗式不完全佐剂等体积充分乳化后对小鼠腹腔注射免疫；7天后第三次免疫采用不加佐剂的抗原皮下注射免疫；7天后进行第四次不加佐剂的抗原皮下注射免疫。
4.根据权利要求3所述的一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体,其特征在于：所述的GST-ORF92重组蛋白的制备方法为：从Ⅱ型鲤疱疹病毒PCR扩增出ORF92基因，将ORF92基因克隆至PGEX-4T-3质粒上，获得重组质粒PGEX-4T-3-ORF92；将PGEX-4T-3-ORF92质粒转染到大肠杆菌中诱导表达出GST-ORF92重组蛋白。
5.一种权利要求1-4任一所述的一株Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体的应用，其特征在于：所述单克隆抗体特异性识别CyHV-2病毒粒子和ORF92重组蛋白，用于制备关于CyHV-2检测诊断试剂、试剂盒、抗病毒药物的应用。
6.一种分泌Ⅱ型鲤疱疹病毒ORF92蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞，其特征在于：所述杂交瘤细胞的保藏号为CCTCC NO:C2017208。
7.根据权利要求6所述的杂交瘤细胞，其特征在于：所述杂交瘤细胞制备方法如下：以GST-ORF92重组蛋白为抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞。
CN201711165459.7A 2017-11-21 2017-11-21 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf92蛋白的单克隆抗体及其应用 Expired - Fee Related CN108017714B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711165459.7A CN108017714B (zh) 2017-11-21 2017-11-21 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf92蛋白的单克隆抗体及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711165459.7A CN108017714B (zh) 2017-11-21 2017-11-21 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf92蛋白的单克隆抗体及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108017714A true CN108017714A (zh) 2018-05-11
CN108017714B CN108017714B (zh) 2021-03-19

Family

ID=62079970

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711165459.7A Expired - Fee Related CN108017714B (zh) 2017-11-21 2017-11-21 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf92蛋白的单克隆抗体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108017714B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109381697A (zh) * 2018-11-05 2019-02-26 共鳞实业(深圳)有限公司 一种用于预防或治疗鱼类感染CyHV-2的试剂及应用
CN111518201A (zh) * 2020-04-09 2020-08-11 上海海洋大学 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf121蛋白的单克隆抗体及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2412721A1 (en) * 2009-03-26 2012-02-01 National University Corporation Tokyo University of Marine Science And Technology Koi herpes virus-specific antibody and antigen thereof
CN106366187A (zh) * 2016-09-14 2017-02-01 上海海洋大学 一株ii型鲤疱疹病毒orf72蛋白的单克隆抗体及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2412721A1 (en) * 2009-03-26 2012-02-01 National University Corporation Tokyo University of Marine Science And Technology Koi herpes virus-specific antibody and antigen thereof
CN106366187A (zh) * 2016-09-14 2017-02-01 上海海洋大学 一株ii型鲤疱疹病毒orf72蛋白的单克隆抗体及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WALTER FUCHS ET AL.: ""Identification of structural proteins of koi herpesvirus"", 《ARCH VIROL》 *
孔善云等: ""一种基于II 型鲤疱疹病毒衣壳蛋白72 的免疫学检测方法"", 《中国水产科学》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109381697A (zh) * 2018-11-05 2019-02-26 共鳞实业(深圳)有限公司 一种用于预防或治疗鱼类感染CyHV-2的试剂及应用
CN112321685A (zh) * 2018-11-05 2021-02-05 共鳞实业(深圳)有限公司 用于鱼类预防或治疗CyHV-2感染的试剂及其应用
CN112321685B (zh) * 2018-11-05 2022-02-18 深圳技术大学 用于鱼类预防或治疗CyHV-2感染的试剂及其应用
CN111518201A (zh) * 2020-04-09 2020-08-11 上海海洋大学 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf121蛋白的单克隆抗体及其应用
CN111518201B (zh) * 2020-04-09 2022-11-29 上海海洋大学 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf121蛋白的单克隆抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108017714B (zh) 2021-03-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103751774B (zh) 稳定表达猪瘟病毒e2蛋白的重组细胞系及其在制备猪瘟亚单位疫苗和诊断试剂中的应用
CN106366187A (zh) 一株ii型鲤疱疹病毒orf72蛋白的单克隆抗体及其应用
CN106946995A (zh) Ⅰ群血清4型禽腺病毒基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用
CN105331636A (zh) 一种稳定表达猪瘟病毒e2蛋白的重组细胞系及其应用
CN112921005B (zh) 一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒vp2蛋白单克隆抗体和应用
CN109627331A (zh) 一种抗犬细小病毒抗体的重链、轻链可变区及基因工程抗体
CN106519041A (zh) 猪免疫球蛋白Fc片段和猪瘟E2融合蛋白在CHO细胞株的构建方法及其制备方法和应用
CN109970851B (zh) Ccv病毒m蛋白的单抗及其制备方法、免疫胶体金试纸条的制备方法
CN107899008A (zh) 一种猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪丁型冠状病毒病三联亚单位疫苗
CN105085626B (zh) 人肠道病毒的广谱亲和表位多肽、抗体及其用途
CN108017714A (zh) 一株ⅱ型鲤疱疹病毒orf92蛋白的单克隆抗体及其应用
CN104371025B (zh) 一种针对宫颈癌具有免疫原性的蛋白及其应用
CN104694479B (zh) 肠道病毒71型的vp2抗原的中和表位多肽及其用途
CN104293739B (zh) 针对h3n2犬流感病毒ha2蛋白的单克隆抗体
CN106399266A (zh) 一种表达犬血清白蛋白融合干扰素γ的重组杆状病毒及其应用
CN103505724A (zh) 猪瘟、猪伪狂犬病二联疫苗及其制备方法与应用
CN108586609A (zh) 一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体及应用
CN107987159A (zh) 一种使用大剂量dna免疫技术免疫动物使血清中抗体滴度提高的方法
CN107936123A (zh) 一种猪传染性胃肠炎病毒融合蛋白及其制备方法和应用
CN107090438A (zh) 抗血清I型MDV gI蛋白的单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其应用
CN107029231A (zh) 重组口蹄疫二价灭活疫苗及其制备方法和应用
CN105254756A (zh) 一种针对丙型肝炎病毒包膜蛋白e2的单克隆抗体及应用
CN115141273B (zh) 一种猫杯状病毒的单克隆抗体及其应用
CN102311928B (zh) 鸡贫血病毒vp1、vp2蛋白共表达的重组酵母工程菌、其构建方法及应用
CN103820398B (zh) 一种水貂肠炎病毒重组亚单位疫苗及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20210319

Termination date: 20211121