CN108586609A - 一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体及应用。本发明提供的单克隆抗体，由重链和轻链组成；重链的氨基酸序列如序列表的序列2所示；轻链的氨基酸序列如序列表的序列4所示。本发明提供的单克隆抗体可以抑制猪流行性腹泻病毒，在预防和/或治疗猪流行性腹泻中具有重要的应用价值。

Description

一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体及应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体及应用，尤其涉及该单克隆抗体在制备用于预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病的药物中的应用。
背景技术
猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV)引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病，其与传染性胃肠炎很相似，在我国多发生在每年12月份至翌年1～2月，夏季也有发病的报道。PEDV属于冠状病毒科，冠状病毒属。目前还没有发现PEDV有不同的血清型。PEDV经口和鼻感染后，直接进入小肠。通过免疫荧光和电子显微镜检查，PEDV的复制在小肠和结肠绒毛上皮细胞浆中进行，其它脏器内未发现PEDV增殖。PEDV增殖首先造成细胞器的损伤，继而出现细胞功能障碍。肠绒毛萎缩，造成了吸收表面积的减少，小肠黏膜碱性磷酸酶含量显著减少进而引起营养物质吸收障碍，这是引起腹泻的主要原因，属于渗透性腹泻。严重腹泻引起脱水是导致病猪死亡的主要原因。
猪流行性腹泻只发生于猪，各种年龄的猪都能感染发病。哺乳猪、架子猪或肥育猪的发病率很高，尤以哺乳猪受害最为严重，母猪发病率变动很大，约为15—90％。病猪是主要传染源。PEDV存在于肠绒毛上皮细胞和肠系膜淋巴结，随粪便排出后，因污染环境、饲料、饮水、交通工具及用具等而传染。主要感染途径是消化道，如果一个猪场陆续有不少窝仔猪出生或断奶，PEDV会不断感染失去母源抗体的断奶仔猪，使PED呈地方流行性，在这种繁殖场内，猪流行性腹泻可造成5—8周龄仔猪的断奶期顽固性腹泻。
疫苗是预防PED的主要途径，但是经常会出现免疫失败的问题，尤其是哺乳母猪发病，会引起PED在猪场流行。抗体法是清除PEDV的主要方法，也是治疗发病猪的最重要手段。具有完善翻译后修饰功能是哺乳动物细胞被选作大多数生物药蛋白表达宿主的主因。中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary Cell，CHO)是用于外源抗体基因表达最为成功的宿主细胞，已有越来越多的抗体蛋白在其中获得了高效表达，很多人用重组抗体蛋白药物已上市。与其它表达系统相比，该系统具有许多优点，如拥有完备的翻译后加工过程，包括糖基化、羟基化，使表达的外源真核基因产物能够保持其天然结构及活性，且使表达产物分泌到胞外，有利于外源蛋白的分离纯化。
IgG类的免疫球蛋白是血液中最丰富的蛋白质，它们的半衰期可高达21天，而FC片段是IgG保持体内较长半衰期的主要原因，同时具有稳定蛋白的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体。
本发明所提供的单克隆抗体，是由重链和轻链组成；所述重链的氨基酸序列可如序列表的序列2所示；所述轻链的氨基酸序列可如序列表的序列4所示。
序列表的序列2由445个氨基酸组成。序列表的序列4由217个氨基酸组成。
本发明还保护编码所述单克隆抗体的核酸分子。所述单克隆抗体的核酸分子可由所述重链的编码基因和所述轻链的编码基因组成。
所述重链的编码基因可如序列表的序列1自5’末端起第1至1335位所示。
所述轻链的编码基因可如序列表的序列3所示。
本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本发明的编码所述单克隆抗体的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本发明的所述单克隆抗体的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码所述单克隆抗体且抗猪流行性腹泻病毒，均是衍生于本发明的核苷酸序列并且等同于本发明的序列。
这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码序列表的序列2和/或序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或80％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
所述单克隆抗体、或、编码所述单克隆抗体的核酸分子在制备用于抑制猪流行性腹泻病毒的药物中的应用也属于本发明的保护范围。
所述单克隆抗体、或、编码所述单克隆抗体的核酸分子在抑制猪流行性腹泻病毒中的应用也属于本发明的保护范围。
所述单克隆抗体、或、编码所述单克隆抗体的核酸分子在制备用于预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病的药物中的应用也属于本发明的保护范围。
所述单克隆抗体、或、编码所述单克隆抗体的核酸分子在预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明还保护一种用于抑制猪流行性腹泻病毒的药物，其含有所述单克隆抗体。
本发明还保护一种用于预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病的药物，其含有所述单克隆抗体。
上述任一所述猪流行性腹泻病毒引起的疾病具体可为猪流行性腹泻。
上述任一所述猪流行性腹泻病毒具体可为猪流行性腹泻病毒S蛋白。
实验证明，本发明提供的单克隆抗体可以抑制猪流行性腹泻病毒，在预防和/或治疗猪流行性腹泻中具有重要的应用价值。
附图说明
图1为重组细胞株的Western blot的实验结果。
图2为猪的肝脏组织和肠道组织的HE染色结果。
图3为动物保护实验的实验结果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
载体pCDNA3.1(-)和CHO细胞为ATCC公司的产品。限制性内切酶为TaKaRa公司的产品。CHO培养基、无血清培养基和牛血清培养基均为Hyclone公司的产品。猪流行性腹泻病毒S蛋白为青岛博隆基因工程有限公司的产品。
实施例1、PED-IGG抗体的制备
一、PED-IGG抗体的编码基因的优化
本发明的发明人经过大量实验，按鼠类密码子偏好性优化了野生型PED-IGG抗体的编码基因。优化的PED-IGG抗体的重链(可变区到恒定区全片段)的氨基酸序列如序列表的序列2所示，其编码基因如序列表的序列1自5’末端起第1至1335位所示。优化的PED-IGG抗体的轻链(可变区到恒定区全片段)的氨基酸序列如序列表的序列4所示，其编码基因如序列表的序列3所示。
二、重组质粒的构建
将载体pCDNA3.1(-)的限制性内切酶NheI和XhoI识别序列间的小片段替换为序列表中序列1所示的DNA分子，得到重组质粒PED-L。重组质粒PED-L表达序列表中序列2所示的蛋白质PED-L。
向载体pCDNA3.1(-)的限制性内切酶ApaLI的酶切识别位点处插入序列表中序列3所示的DNA分子，得到重组质粒PED-H。重组质粒PED-H表达序列表中序列4所示的蛋白质PED-H。
三、重组细胞株1的获得
将步骤二构建的重组质粒PED-L和重组质粒PED-H转染CHO细胞，经过筛选，得到适应悬浮培养且蛋白表达量较高的重组细胞株1。具体步骤如下：
1、取重组质粒PED-L，用限制性内切酶pvul酶切，回收线性质粒1。取重组质粒PED-H，用限制性内切酶pvul酶切，回收线性质粒2。
2、取溶液1和溶液2，混合，室温静置20min，得到混合溶液。
溶液1：将240μL无血清培养基和10μL lipofectamine 2000混合，温育5min。
溶液2：将225μL无血清培养基和25μL线性质粒溶液(由线性质粒1溶液和线性质粒2溶液混合而成，其中含有4μg线性质粒1和4μg线性质粒2)混合。
3、取装有CHO培养基的6孔培养板，接种CHO细胞，37℃、5％CO2培养至细胞的融合度达到90-95％。
4、完成步骤3后，取所述6孔培养板，弃CHO培养基，加入无血清培养基冲洗CHO细胞两遍，再加入2mL无血清培养基。
5、完成步骤4后，取所述6孔培养板，每孔逐滴加入步骤2制备的混合溶液，摇动6孔培养板，轻轻混匀，然后37℃、5％CO2静置6h。
6、完成步骤5后，取所述6孔培养板，弃培养基，加入牛血清培养基，37℃、5％CO2继续培养48h。
7、完成步骤6后，取所述6孔培养细胞，按接种比为1:10，加入含2mg/mL G418的牛血清培养基，37℃、5％CO2振荡培养(转速为100rpm)，连续传代，得到重组细胞。
8、完成步骤7后，取所述96孔板，吸取上清进行SDS-PAGE。根据SDS-PAGE结果，初步筛选出7个蛋白表达量相对较高的重组系细胞株，依次命名为重组细胞株1-重组细胞株7。
9、完成步骤8后，分别将重组细胞株1-重组细胞株7接种至无血清培养基，37℃、5％CO2振荡培养(转速为100rpm)2个月。
将CHO细胞接种至无血清培养基，37℃、5％CO2振荡培养(转速为100rpm)2个月，作为对照。
分别吸取上述培养体系的上清进行Western blot，采用猪流行性腹泻S蛋白作为一抗。
部分实验结果见图1(M为蛋白分子质量标准，1为重组细胞株1，2为CHO细胞)。结果表明，重组细胞株1适应悬浮培养且蛋白表达量较高。将重组细胞株1用于后续实验。
四、PED-IGG抗体的制备
1、重组细胞株1的发酵培养
(1)取重组细胞株1，加入1L无血清培养基，37℃、5％CO2振荡培养(转速为100rpm)56h，得到细胞密度为2.0×106个/mL的种子液。
(2)取种子液，加入装有5L无血清培养基的发酵罐(规格为10L)(此时记为发酵第1天)，37℃、100rpm培养13天，得到发酵液。发酵培养过程中，每天计数，观察细胞状态，当细胞密度达到4.0×106左右时每天补加补料培养基400mL，连续补加7天，直至细胞培养液密度达到1010(此时蛋白浓度达到最大)，停止补加补料培养基，1天后停止发酵。发酵过程中用O2维持发酵罐30％溶氧水平，CO2和NaHCO2控制pH值为7.2。
发酵过程中，细胞的发酵密度、死亡率等结果如表1所示。
表1
发酵天数 发酵密度 死亡率 补料体积
第1天 0.3×106 1％ 0mL
第2天 - - 0mL
第3天 1.6×106 1％ 0mL
第4天 - - 0mL
第5天 3.5×106 2％ 400mL
第6天 - - 400mL
第7天 1.58×107 8％ 400mL
第8天 - - 400mL
第9天 4.4×107 10％ 400mL
第10天 - - 400mL
第11天 1.74×108 14.5％ 400mL
第12天 - - 0mL
第13天 3.53×108 47％ 0mL
注：“-”表示没有检测数据。
2、PED-IGG抗体的制备
buffer A：含0.15M NaCl的pH7.2、20mM的PBS缓冲液。
buffer B的溶质及其浓度为4.5mM柠檬酸钠和25mM柠檬酸，溶剂为水，pH值为3.0。
(1)取步骤1得到的发酵液，4℃、5000rpm离心8min，收集上清液，然后用直径为0.22μm的滤膜过滤，收集滤液。
(2)取亲和层析柱(Takara公司的产品)，加入3个柱体积的buffer A，平衡(电导18.128ms/cm)。
(3)完成步骤(2)后，将步骤(1)收集的滤液上样于亲和层析柱，加入5个柱体积的buffer A淋洗平衡。
(4)完成步骤(3)后，取所述亲和层析柱，加入5个柱体积的buffer B洗脱(电导1.27ms/cm)目的蛋白，收集过柱后溶液。
(5)取步骤(4)得到的过柱后溶液，将体系置换为pH7.4、0.2mM的PBS缓冲液，得到PED-IGG抗体溶液。
实施例2、安全性实验
将20头健康的3周龄的仔猪(雌雄各半)随机分为一组至四组，每组5头。将20头健康的5月龄的猪(雌雄各半)随机分为五组至八组，每组5头。
各组进行如下处理：
一组：实验第一天，每头仔猪颈部肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液2mL，注射剂量为每头2mgPED-IGG抗体；
二组：实验第一天至第七天，每天进行如下处理：每头仔猪颈部肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液2mL，注射剂量为每头2mgPED-IGG抗体；
三组：分别与实验第一天、第三天、第五天和第七天，每天进行如下处理：每头仔猪颈部肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液5mL，注射剂量为每头5mgPED-IGG抗体；
四组、实验第一天，每头仔猪颈部肌肉注射生理盐水2mL；
五组：实验第一天，每头猪颈部肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液2mL，注射剂量为每头2mgPED-IGG抗体；
六组：实验第一天至第七天，每天进行如下处理：每头猪颈部肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液2mL，注射剂量为每头2mgPED-IGG抗体；
七组：分别与实验第一天、第三天、第五天和第七天，每天进行如下处理：每头猪颈部肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液5mL，注射剂量为每头5mgPED-IGG抗体；
八组、实验第一天，每头猪颈部肌肉注射生理盐水2mL。
实验期间，每天观测各组猪的临床症状变化，包括精神、采食、活动、呼吸、饮水、注射炎症反应、排泄状况，每天体温检测，记录动物异常情况，如果有死亡猪需解剖，观测病例变化。
经过2周连续观测，对注射PED-IGG抗体前后的临床症状进行比较，发现一组、二组、三组、五组、六组和七组的猪均饮食正常，精神无不良变化，呼吸及排泄未见异常，注射部位无发炎现象，实验期间没有遇到动物有任何不良反应，无死亡猪出现，注射后每天检测动物体温，发现三组和七组的个别猪有体温升高现象，停药后发烧不超过3天，大部分猪体温维持39℃左右。对三组和七组的猪的肝脏组织、肠道组织和肾组织进行免疫组化(见图2，A为三组的肠道组织，B为七组的肝脏组织)，发现组织质地均匀没有病例改变。上述结果表明，实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液安全性高，动物应激反应小，即使高剂量注射(如注射剂量为每头5mgPED-IGG抗体)也无明显副作用。
实施例3、动物保护实验
本实施例中的猪流行腹泻株病毒株为猪流行性腹泻病毒S蛋白。
将25头健康的3周龄的仔猪(雌雄各半)随机分为五组，每组5头。各组进行如下处理：
一组：实验第0h，每头仔猪肌肉注射猪流行腹泻株病毒株(攻毒剂量为1×105TCID50/只)进行攻毒；实验第12h，每头仔猪肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液，注射剂量为每头0.5mgPED-IGG抗体；
二组：实验第0h，每头仔猪肌肉注射猪流行腹泻株病毒株(攻毒剂量为1×105TCID50/只)进行攻毒；实验第12h，每头仔猪肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液，注射剂量为每头1mgPED-IGG抗体；
三组：实验第0h，每头仔猪肌肉注射猪流行腹泻株病毒株(攻毒剂量为1×105TCID50/只)进行攻毒；实验第12h，每头仔猪肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液，注射剂量为每头5mgPED-IGG抗体；
四组：实验第0h，每头仔猪肌肉注射猪流行腹泻株病毒株(攻毒剂量为1×105TCID50/只)进行攻毒；实验第12h，每头仔猪肌肉注射实施例1步骤四2中(5)制备的PED-IGG抗体溶液和猪干扰素，注射剂量为每头1mgPED-IGG抗体和1mg猪干扰素；
五组(对照组)：实验第0h，每头仔猪肌肉注射猪流行腹泻株病毒株(攻毒剂量为1×105TCID50/只)进行攻毒；实验第12h，每头仔猪肌肉注射生理盐水2mL。
整个实验过程中，每天观测仔猪临床症状变化，包括精神、采食、活动、呼吸、饮水、注射炎症反应、排泄状况，每天检测体温，记录异常情况，如果有死亡仔猪需解剖，观测病例变化。
实验结果如下：
1、实验第12h，各组仔猪的体温升高(在40℃-41.8℃之间)，开始拉黄绿色粪便；实验第18h，一组的1头仔猪死亡，4头仔猪的症状开始明显缓解；实验第18h，二组的1头仔猪死亡，4头仔猪的症状开始明显缓解；实验第18h，三组的5头仔猪和四组的5头仔猪的症状均开始明显缓解；实验第24h，五组的仔猪在24-36h出现食欲下降，精神萎靡，运动功能障碍，严重腹泻，猪群扎堆现象，逐渐死亡。
2、将五组死亡的仔猪和其它组存活的仔猪进行剖检，观察肠道组织的病理变化。
部分实验结果见图3(A为四组存活的仔猪，B为五组死亡的仔猪)。结果表明，五组死亡的仔猪的肠道组织出现明显的肠道水肿。
3、实验过程中，收集各头仔猪的肠排泄物，依次进行如下处理：
(1)分别提取各头仔猪的肠排泄物的总RNA并以其为模板，反转录得到cDNA。
(2)分别以cDNA为模板，以PED-F：5’-GACGTTTCTTTTATGACTCTG-3’和PED-R：5’-AATACTCATACTAAAGTTG-3’为引物进行RT-PCR，得到PCR扩增产物，然后进行如下判断：如果PCR扩增产物中含有459bp的DNA片段，则其对应的仔猪依旧感染猪流行腹泻株病毒；如果PCR扩增产物中不含有459bp的DNA片段，则其对应的仔猪不再感染猪流行腹泻株病毒。PCR扩增产物中459bp的DNA片段的条带越亮，则猪流行腹泻株病毒复制越活跃。
结果表明，五组的仔猪的肠排泄物的PCR扩增产物中均含有459bp的DNA片段，且条带越来越亮。其它四组存活的仔猪中，实验前12h收集的肠排泄物的PCR扩增产物中均含有459bp的DNA片段，注射PED-IGG抗体后，条带越来越暗甚至消失。
上述结果表明，向4～6周龄仔猪每头注射0.5mgPED-IGG抗体，即可治疗猪流行腹泻，达到治疗目的。
<110> 青岛博隆基因工程有限公司
<120> 一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体及应用
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<170> PatentIn version 3.5
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Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ser Val Leu Gln
165 170 175
Pro Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Met Val Thr Val Pro Ala Ser
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Lys Ser Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Pro Ala Thr
195 200 205
Thr Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Gly Thr Lys Thr Lys Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ile Cys Pro Gly Cys Glu Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Gln Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Lys Glu His Ala Glu Val Gln Phe
260 265 270
Ser Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Glu Thr Arg Pro
275 280 285
Lys Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro
290 295 300
Ile Gln His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Asn Asn Val Asp Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Ile Gly Gln Ser Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Ala
340 345 350
Glu Glu Leu Ser Arg Ser Lys Val Thr Val Thr Cys Leu Val Ile Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Pro Asp Ile His Val Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Pro Glu Gly Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp
385 390 395 400
Gly Thr Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Arg Trp
405 410 415
Asp His Gly Glu Thr Phe Glu Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Lys Thr Gln Gly
435 440 445
<210> 3
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 3
atggccatcc agatgaccca gtctccagcc tccctggctg catctctcgg agacacggtc 60
tccatcactt gccgggccag tcagagcatt agcagttatt tagcctggta tcaacaacaa 120
ccagggacgg ctcctaaacg cttgatctat gctgcatcca gtttgcaaag tggggtccca 180
tcccggttca agggcagtgg atctggcacc gatttcaccc tcaccatcag tggcctgcag 240
gctgaagatg ttgcaactta ttactgtttg cagaataata atgtacctcc gacgttcggc 300
caaggaacca agctggaact caaacgggct gatgccaagc catccgtctt catcttcccg 360
ccatcgaagg agcagttagc gaccccaact gtctctgtgg tgtgcttgat caataacttc 420
ttccccagag aaatcagtgt caagtggaaa gtggatgggg tggtccaaag cagtggtcat 480
ccggatagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctc 540
tcgctgccca cgtcacagta cctaagtcat aatttatatt cctgtgaggt cacccacaag 600
accctggcct cccctctggt cacaagcttc aacaggaacg agtgtgaggc ttaa 654
<210> 4
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 4
Met Ala Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Ala Ser Leu
1 5 10 15
Gly Asp Thr Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Gln Pro Gly Thr Ala Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ala Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asn Asn Asn Val Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Ala Asp Ala
100 105 110
Lys Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Lys Glu Gln Leu Ala Thr
115 120 125
Pro Thr Val Ser Val Val Cys Leu Ile Asn Asn Phe Phe Pro Arg Glu
130 135 140
Ile Ser Val Lys Trp Lys Val Asp Gly Val Val Gln Ser Ser Gly His
145 150 155 160
Pro Asp Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Ser Leu Pro Thr Ser Gln Tyr Leu Ser His Asn Leu
180 185 190
Tyr Ser Cys Glu Val Thr His Lys Thr Leu Ala Ser Pro Leu Val Thr
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys Glu Ala
210 215

Claims (10)

1.一种单克隆抗体，由重链和轻链组成；所述重链的氨基酸序列如序列表的序列2所示；所述轻链的氨基酸序列如序列表的序列4所示。
2.编码权利要求1所述单克隆抗体的核酸分子，由所述重链的编码基因和所述轻链的编码基因组成。
3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于：所述重链的编码基因如序列表的序列1自5’末端起第1至1335位所示；所述轻链的编码基因如序列表的序列3所示。
4.权利要求1所述单克隆抗体、或、权利要求2或3所述核酸分子在制备用于抑制猪流行性腹泻病毒的药物中的应用。
5.权利要求1所述单克隆抗体、或、权利要求2或3所述核酸分子在抑制猪流行性腹泻病毒中的应用。
6.权利要求1所述单克隆抗体、或、权利要求2或3所述核酸分子在制备用于预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病的药物中的应用。
7.权利要求1所述单克隆抗体、或、权利要求2或3所述核酸分子在预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病中的应用。
8.一种用于抑制猪流行性腹泻病毒的药物，其含有权利要求1所述的单克隆抗体。
9.一种用于预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒引起的疾病的药物，其含有权利要求1所述的单克隆抗体。
10.如权利要求6或7所述的应用、或、权利要求9所述的药物，其特征在于：所述猪流行性腹泻病毒引起的疾病为猪流行性腹泻。
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