CN107982285A - 蝉花活性物质及其用于降低眼压的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种蝉花活性物质及其用于降低眼压的用途。该蝉花活性物质经下列步骤制备：(a)取蝉花菌丝体于平板培养基上，于15‑35℃培养5‑14天；(b)将步骤(a)培养后的蝉花菌丝体接种至烧瓶内，于15‑35℃、pH 2‑8的条件培养3‑10天；(c)将步骤(b)培养后的蝉花菌丝体接种至发酵槽内，于15‑35℃、pH 2‑8的条件培养3‑10天，形成蝉花菌丝体发酵液；(d)将蝉花菌丝体发酵液冷冻干燥后磨粉，形成蝉花菌丝体冻干粉；及(e)将蝉花菌丝体冻干粉以溶剂萃取，形成含有蝉花活性物质的蝉花菌丝体萃取液。
Description
技术领域
本发明关于一种蝉花活性物质及包含其的组合物，特别是指该蝉花活性物质及其组合物在用于降低眼压的用途。
背景技术
房水(Aqueous humor)
眼睛由柔软而坚强的组织构成，能轻巧而快速的运动。房水于眼睛中循环，携带氧气、糖分以及滋养眼睛所需的其他必要养分。房水的成份与其流经路线的组织产生的新陈代谢物有关，例如水晶体会消耗房水中的葡萄糖、钾离子及氨基酸，而产生乳酸的代谢物；角膜也具类似情形，其代谢也会消耗由房水供给的养分。因此和眼球后房比较，前房(anterior chamber)的房水含有较低浓度的葡萄糖和较高浓度的乳酸。角膜的内皮细胞为了保持角膜的澄清透明，必需以每小时10mL的速度将水分排到前房；而正常情况下，每只眼分泌房水的速度约为每小时150mL。睫状体(ciliary body)负责分泌房水，房水的分泌速度与房水由小梁组织(trabecular meshwork,TM)和葡萄膜巩膜通路(uveoscleral outflow)流出的速度，是决定眼压高低的主要因素。
眼压
眼压又称之为眼内压(Intraocular pressure,IOP)，是指眼球内容物对眼球内壁的压力。正常眼压通常落在10-21mmHg之间，双眼的差异不大于5mmHg，且每天的波动范围在8mmHg之内。高眼压容易对视神经造成损害，导致青光眼。
眼压是通过房水生成和排出的动态平衡所维持，其可以由三个参数影响：房水的生成速率，房水排出的阻力以及静脉压力。静脉压力很少变化，故调节眼压的药物主要以调节房水的生成速率和排出阻力来控制眼压。
青光眼(Glaucoma)
青光眼(Glaucoma)的成因主要为睫状体分泌房水的速度过快，或房水由小梁组织和葡萄膜巩膜通路的排出受到阻塞，使得前房的房水滞留，而造成眼内压异常升高。长期高眼内压会造成视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells)慢性、不可逆的退化，进而导致视野缺损、视觉神经损伤及失明。青光眼依致病原因可分为先天性青光眼、继发性青光眼、慢性隅角开放性青光眼及急性隅角闭锁性青光眼。
青光眼药物
目前临床上常用治疗青光眼药物大致可分为七种，其中β-交感神经阻断剂或前列腺素衍生物若无使用禁忌，则为首选药物。青光眼治疗后需固定追踪，以确定疗效或副作用。若单一药品治疗效果不理想，可能需要多种药物合并治疗。使用一种以上眼药水时，需注意药水之间需间隔五分钟，悬浮液剂型眼药需最后使用，并应注意勿将药水瓶口触碰眼睛，以保持眼药水的无菌度。
β-交感神经阻断剂(β-Adrenergic blockers)
此类药品可降低房水分泌，降低眼压效果显著，目前为第一线用药。其主要副作用为眼睛刺激(刺痛感、灼热感)、结膜炎、角膜炎。另外，可能经由黏膜吸收而有全身性的副作用。非选择性的β-交感神经阻断剂，如timolol，可能引起的全身性副作用为心跳变慢、心律不整、眩晕、气喘发作，因此患有心律不整及气喘的病人应避免使用。
α2-交感神经致效剂(α2-Adrenergic agonists)
此类药品可减少房水分泌及增加葡萄膜巩膜路径房水流出而降低眼压，若病人对β-交感神经阻断剂耐受不佳或有禁忌时，可做为替代用药。其主要副作用为过敏性结膜炎、结膜充血、眼睛搔痒、灼热感、视觉模糊、口干。此类药品不可与精神科用药的单胺氧化酶抑制剂(Monoamine Oxidase Inhibitors,MAOIs)一起使用，可能加重其副作用。
胆碱激素致效剂(Cholinergic agonists)
此类药品为治疗青光眼的最早用药，通过缩小瞳孔拉紧虹膜来增大眼前房隅角的空间，增加前房隅角房水的流出而降低眼压。此类药品副作用较显著，如可能造成睫状肌收缩引起头痛，眼部刺痛感、灼热感、点药后瞳孔会缩小，患者在光线不佳时视力会减弱，现今使用率已降低。
碳酸酐酶抑制剂(Carbonic anhydrase inhibitors)
此类药品可以抑制房水的分泌来降低眼压，可分为口服与眼药水剂型。口服剂型的副作用为恶心、呕吐、手脚发麻、疲倦、肾结石、近视、味觉异常等。因其副作用多，现多用于辅助降眼压药物。其眼用制剂全身副作用较少，常见副作用为结膜炎、视力模糊、眼睛搔痒、灼热感、畏光。因其为磺胺类药物，对磺胺药过敏的患者，应避免使用。有严重肾功能不全的病人(肌酸酐廓清率<30mL/min)也不建议使用。
前列腺素衍生物(Prostaglandin analogs)
此类药品可增加葡萄膜巩膜路径房水的排出而降低眼压，因其药效长、降压效果好，每天仅需使用一次。其药价较高，虽有些文献将其列为治疗建议中的第一线用药，但健保规定限用于β-交感神经阻断剂效果不佳或不适用时方可使用。副作用为视力模糊、结膜充血、眼睛搔痒、干眼、角膜炎、眼周色素沉淀、睫毛增生及颜色变深(其为不规律增生，可能导致睫毛倒插，停药后可回复)、黄斑部水肿、虹彩炎、畏光(可于睡前给药，避免不适)等。
复方制剂
许多青光眼病人必须点两种以上的眼药，才能达到降眼压效果。复方眼药水结合了两种不同作用机转的药品，可减少每日点药次数，增加点药顺服性，也可减少防腐剂用量。复方制剂的副作用与所含各成分相似，病人可因其降压效力与耐受性做选择。
渗透压利尿剂(Osmotic diuretics)
此类药品如静脉注射mannitol及口服液isosorbide，因其可升高血液张力，使玻璃体体积因其内水分被吸取至血管中而减少，因而可降低眼压并使虹膜及水晶体往后位移，增加隅角深度。Mannitol注射液可用于急性青光眼快速降眼压，但不适用于有脱水状态、排尿困难、肾机能障碍及郁血性心脏病患。此类药物全身副作用多，如头痛、频尿、呕吐、电解质不平衡等，为非常态使用之降眼压药物。
蝉花(Cordyceps cicadae)
型态与分布
蝉花又名土蝉花、虫花、蝉草、胡蝉、蝉菌、蝉蛹草、金蝉花、蝉茸或蚕茸等，为子囊菌亚门(Ascomycotina)，麦角菌目(Claricipiyales)，麦角菌科(clavicipitaceae)，虫草属(Cordyceps)真菌，由感染蝉蛹或蝉科山蝉(Cicada flammate)、蝼蛄(Platypleurakaempferi)、黑蚱(Crytotympana pustulata)及竹蝉(Platylomia pieli)等幼虫身上使其死亡，后于蝉蛹前端或虫体头部形成花蕾状子座而成，故名蝉花，为一种菌虫复合体。蝉花可依不同的寄主及感染菌种分类为大蝉花或金蝉草(C.cicadae)、小蝉花(C.sobolifera)及蝉草，或蝉生虫草(C.cicadicola)三种。蝉花多产于长江以南热带和亚热带地区，在福建、浙江、四川、云南及江苏等地。在中国台湾部分山区亦有野生蝉花子实体踪迹。
蝉拟青霉的有性阶段，被认为是大蝉草(Cordyceps cicadae)，大蝉草俗名独角龙，子座棒状或角状，从寄主头部发出，单生或丛生，褐色。在自然界广为分布的是蝉拟青霉(蝉花)，大蝉草稀少。
功效
花为名贵传统中药材，性寒、味甘、无毒，晒干后可入药，有散风热、镇惊、明目、退翳障、透疹的功效。《本草纲目》称其主治小儿天吊、惊痫、心悸、夜啼。
蝉花入药已有一千多年历史，且野生蝉花的历史记载比冬虫夏草早了800年。蝉花之名最早见于南北朝刘宋时代的《雷公炮制论》，其中记载：凡使蝉花要白花全者。收得后于屋下悬干，去甲土后用浆水煮一日，至夜焙干，研细用之。
宋朝苏颂的传统医书《图经草本》记载“山蜀中，其蝉上有一角，如花冠状，谓之蝉花”；北宋唐慎微所著《证类草本》记载“蝉花味甘、性寒、无毒，具疏散风热、定惊解痉之效，主治小儿夜啼、心悸等症状”；《本草纲目》亦记载“蝉花功同蝉蜕，又止疟疾”；亦有中医药书记载主治翳膜遮睛，如：《景岳全书》“蝉花散：治肝经风热，毒瓦斯上攻，眼目赤痛，及一切内外翳障”。但上述功效目前仍无相关科学论证或发表。
现今亦有文献报导“蝉花五味散”及“万应蝉花散”等传统方剂应用于眼部相关疾病的研究。河南医科大学第一附属医院眼科的彭广华等曾以中药生液散和“蝉花五味散”配合西药治疗外伤性低眼压。外伤性低眼压是眼外伤的一种常见并发症，会严重影响视功能。该研究结果显示中西药治疗组14人达正常眼压(>1.33kPa)，有效率占46.67％，平均提高眼压0.76kPa，西药治疗组30人中8人达正常眼压，有效率占26.67％，平均提高眼压0.41kPa；中国新乡市中医院徐大梅等观察“万应蝉花散”加减内服外洗治疗春季结膜炎100例临床观察，并与西药治疗做对比观察。结果治疗组治愈率为78％，对照组为26％。一年后，治疗组复发率为22％，对照组为88％。
上述二例皆为添加蝉花子实体的复方药剂的应用，分别用于提高眼压与治疗春季结膜炎的临床观察，并无明确表示蝉花对降低眼压的功效或青光眼的预防效果。
蝉花与冬虫夏草同属虫生真菌复合体，蝉花的功能性与应用性不亚于冬虫夏草和蛹虫草，具相近医疗保健功效，且含有相近的化学成分，所以常作为冬虫夏草的代用品。而天然冬虫夏草产量日趋减少，且天然蝉花子实体亦不多，限制了大量的使用。故可以人工培养作为天然蝉花的替代品，人工培养物的主要生物活性成分、药理学作用均和天然蝉花相似或超出天然蝉花。天然蝉花的产生需依赖于寄主，而寄主又受自然环境的制约，特别是受气候因子或人为因素的影响。以人工培养品来替代日益枯竭的自然资源，为一条理想的途径，因此蝉花液态发酵菌丝体具高度经济应用价值。
发明内容
本发明的目的为提供一种蝉花活性物质的用途，其可以用来制备具降低眼压或治疗青光眼的药物。相较于现有技术所介绍的治疗青光眼药物皆为化学性的药物，本发明使用的蝉花活性物质更为天然、安全，且制备方法简便。
根据本发明，提供一种蝉花活性物质用于制备降低眼压的组合物的用途。该蝉花活性物质经下列步骤制备：
(a)取蝉花菌丝体于平板培养基上，于15-35℃培养5-14天；(b)将步骤(a)培养的蝉花菌丝体接种至烧瓶内，于15-35℃、pH 2-8的条件培养3-10天；(c)将步骤(b)培养的蝉花菌丝体接种至发酵槽内，于15-35℃、pH 2-8的条件培养3-10天，形成含有该蝉花活性物质的蝉花菌丝体发酵液；(d)将蝉花菌丝体发酵液干燥后磨粉，形成含有蝉花活性物质的蝉花菌丝体干燥品；及(e)将蝉花菌丝体干燥品以溶剂萃取，形成含有蝉花活性物质的蝉花菌丝体萃取液。
一实施例中，制备蝉花活性物质使用的蝉花菌丝体为寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号CGMCC No.10486，财团法人食品工业发展研究所寄存，寄存编号为MU30106的蝉花菌丝体。
一实施例中，制备蝉花活性物质的步骤更包括步骤(f)：将蝉花菌丝体萃取液干燥，以获得蝉花活性物质。
一实施例中，步骤(c)的发酵槽更进一步通入气体，此气体包括空气、氧气、二氧化碳、氦气或其组合。
一实施例中，步骤(c)中发酵槽的槽压为0.5-1.0kg/cm2且通气速率为0.01-1.5VVM。
一实施例中，所述降低眼压的组合物为食品组合物或医药组合物。
一实施例中，当所述降低眼压的组合物为医药组合物时，此组合物进一步包含药学上可接受的载剂、赋形剂、稀释剂或辅剂。
一实施例中，步骤(e)中使用的溶剂为醇类、水或水/醇混合液。
一实施例中，醇类的体积大于蝉花菌丝体发酵液冻干粉的体积至少20倍，优选为10倍。
一实施例中，蝉花活性物质的用途是用于制造治疗青光眼的口服组合物。
一实施例中，所述降低眼压的组合物以口服方式服用。
附图说明
图1至图3为兔子眼压变化的结果(分别对应表3至表6)。
图1为正常兔眼内压动物模式的眼内压。
图2为正常兔眼内压动物模式的眼内压变化量(Delta IOP)。
图3为正常兔眼内压动物模式的Delta IOP比例变化。
用于专利程序的微生物保存：
蝉花菌丝体；
保藏日期：2015年05月04日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；
保藏编号：CGMCC No.10486；
分类命名：Cordyceps cicadae。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。
实验原理
正常兔眼内压动物模式
本试验中使用成年、8-12周龄、雌性的新西兰白兔(New Zealand White(NZW)Rabbit)，此品是实验动物已有丰富的基础参考数据与数据，可适用于正常兔眼内压动物模式。试验中采用正常眼压模式，比起诱导性高眼压数据上较不易失真，为目前药物开发常采用的方式。
实验步骤
蝉花活性物质的制备
蝉花菌丝体来源
本发明的实施例所用的蝉花(Cordyceps cicadae)菌丝体是由采集而得的中国台湾野生蝉花子实体，经分离而得其菌丝，并继代保存于平板培养基上，经中国台湾食品工业发展研究所做鉴定证实其基因序列为蝉花(Cordyceps cicadae)，此菌株现已公开寄存于财团法人食品工业发展研究所的生物资源研究中心(BCRC)，寄存编号为MU30106(此菌株亦寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号CGMCC No.10486)。但本发明所述的蝉花活性物质不限于由此菌种所得。
液体培养
液态发酵培养可依规模大小而有不同程度的控制设备，包括摇瓶、槽体、搅拌控制、温度控制、pH控制、溶氧控制、消泡控制及发酵过程控制等，比起固态培养，不需耗费大量人力及时间成本，且工艺可完全在无菌环境中且能均匀取样控管质量，量产时再现性佳。本发明的蝉花活性物质，是将蝉花菌丝体以液体培养后萃取而得。液体培养是先将菌丝体接种于平板培养基上，于适当温度15-35℃(较佳为25℃)下培养5天至2周后，刮取菌丝接种于烧瓶内。在15-35℃(较佳为25℃)，pH 2-8，较佳为pH 4-7，更佳者约pH 4.5，震荡速率10-250rpm下培养3-10天。然后将烧瓶培养物接种于发酵槽培养基(成分如表1所示，与烧瓶培养基相同)内，在15-35℃(较佳为25℃)、槽压0.5-1.0kg/cm2、pH 2-8、10-150rpm搅拌速度或不搅拌(air lift)情况、0.01-1.5VVM通气速率(通入空气或空气与氧气、二氧化碳与氮气的混合物，较佳者为空气)的条件下培养3-10天，即得蝉花菌丝体发酵液，包括菌丝体与澄清液。此发酵液内即含本发明的蝉花活性物质。蝉花菌丝体发酵液可进一步通过干燥步骤制备为发酵液冻干粉。
表1培养基配方
| 成分 | 含量(重量％) |
| 综合性碳氮源 | 0.01-5 |
| 动植物来源蛋白及其水解物 | 0.01-2 |
| 酵母或麦芽抽出物(粉、膏) | 0.001-2 |
| 无机盐类 | 0.0001-0.05 |
| 醣类 | 0.01-10 |
上述培养基配方中，综合性碳氮源可为谷类(如：麦粉类)或豆类(如：黄豆粉、绿豆粉、大豆粉等)；无机盐类可为硫酸镁、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、硫酸铁等；醣类可为葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖等。特别说明的是，上述培养基配方仅为一范例，使用时成份可依需求调整，或搭配市售培养基使用，并无特别限制。
干燥
本发明使用的干燥方法包含但不限于：喷雾干燥、热风干燥、滚筒干燥、冷冻干燥、减压浓缩或其他适合的干燥方法，以将蝉花菌丝体发酵液制备成发酵液冻干粉。
醇萃取
蝉花菌丝体发酵液经干燥法制备而得的发酵液冻干粉加入醇类溶剂(1-100％甲醇或乙醇，重量百分浓度或体积百分浓度)回溶，萃取数分钟(包含但不限于浸泡、搅拌、震荡或超音波萃取法)，之后经减压浓缩法或上述的任一干燥法进行干燥，即得蝉花菌丝体醇萃物。
实施例1
蝉花液态发酵培养及活性物质的制备
菌丝体菌株：BCRC MU30106
平板培养：将蝉花菌丝体接种于平板培养基上，培养基为马铃薯糊精培养基(Potato Dextrose Agar,PDA)，于25℃下培养约5天。
烧瓶培养：刮取平板上的菌丝接种于烧瓶内，用表2中的培养基，在约25℃，pH 4.5下，于震荡机上以转速120rpm震荡培养3天。
表2培养基配方
| 成分 | 含量(重量％) |
| 蔗糖 | 2.0 |
| 酵母抽出物 | 0.5 |
| 黄豆粉 | 1.0 |
发酵槽培养：培养基同表2，将烧瓶培养物接种于发酵槽培养基内，在25℃，槽压0.5-1.0kg/cm2，pH 4.5下，10-150rpm搅拌速度或不搅拌(air lift)情况，以0.5-1.0VVM通气速率通入空气，培养3天，得菌丝体与澄清液，称为蝉花菌丝体发酵液。发酵液内含本发明的蝉花活性物质。将蝉花菌丝体发酵液经冷冻干燥可得发酵液冻干粉。
萃取物制备-醇萃取：取蝉花菌丝体发酵液冻干粉加入20倍体积乙醇(体积百分浓度95％)回溶，利用超音波震荡萃取1小时，萃取悬浮液离心后取上清液经减压浓缩，得蝉花菌丝体醇萃物(此例中为黏稠膏状)。
结果：20吨发酵槽培养完毕的蝉花菌丝体发酵液经冷冻干燥后，可得约110公斤发酵液冻干粉。经由萃取步骤可取得较高浓度的用以降低眼压或治疗青光眼所导致的病变的蝉花活性物质。蝉花活性物质的样品包含蝉花菌丝体发酵液(菌丝体与澄清液)、发酵液冻干粉、醇萃物或其他剂型。以下实施例2中，是以醇萃物作为蝉花活性物质样品。
实施例2
降眼压动物模式及相关指针的分析
实验动物
使用实验动物为成年、8-12周龄、雌性的新西兰白兔(New Zealand White(NZW)Rabbit)，以耳朵标记试验编号以区分实验动物个体，并于饲育笼上标示笼号、品种、周龄、动物试验编号、试验组别、入室日期及试验期间。饲养区的光照时间自动控制为12小时亮、12小时暗，室温23±2℃、相对湿度40-70％。动物可自由取得充分的食物及饮水。实验动物在检疫及试验期间分别由兽医师及试验人员每日进行临床症状观察并纪录，以确保实验动物健康状况。实验动物经检疫、驯化1周后，始可开始进行实验。
实验开始前(D0)，依据实验动物体重随机分组，使各组平均体重及体重分布趋势相近，并测得实验动物的右眼眼内压(intraocular pressure,IOP)作为基准点。
溶剂与试验物质
上述发酵所得黏稠膏状蝉花醇萃物，进行管喂时，将其溶于比例为大豆色拉油:生理食盐水＝1:1的溶剂中。正对照组为市售治疗青光眼药物Timolol，能降低眼球内房水的产生，间接降低眼内压，本试验中所用浓度为0.5％。Timolol是以眼药水滴剂方式施用。
试验分组
试验中将动物分为5组，每组各5只动物，每日投予试验物质一次，如表3所示。
表3试验动物的分组
试验方式
实验动物依组别每日分别投予溶剂、试验物质(即含有本发明蝉花醇萃物)或正对照药物(0.5％Timolo)一次。并于投予溶剂、试验物质或正对照药物前1小时、后1小时及后3小时分别测量右眼的眼内压。并分别比较眼内压、眼内压变化量(Delta IOP)、Delta IOP比例变化的表现。
眼内压：于各时间点以回弹式眼压计TonoVet Tonometer对受试动物进行右眼眼内压检测，其优点为不需麻醉受试动物，且无痛可直接检测，并渐少因麻醉带来的误差。
眼内压变化量(Delta IOP)：为各时间点相较于0hr的眼内压变化量
ΔIOP＝IOPtime point-IOP0hr
Delta IOP比例变化：为各时间点的ΔIOP相较于0hr的IOP变化量比例
Percentage ofΔIOP＝ΔIOP/IOP0hr
试验数据分析
本试验数据以实验结果的平均值(Mean)±标准偏差(standard error of mean,S.E.M.)来表示。采用Student's t-test比较各组间是否具差异性，若p值小于0.05则表示两试验组之间具有统计上显著差异。
实施例3
蝉花活性物质对于降眼压及相关指标的效果评估
眼内压(IOP)
眼内压的测量结果如表4及图1所示，其中星号标记(*)表示试验组与溶剂对照组有显著差异。单星号(*)代表P<0.05；双星号(**)代表P<0.01；三星号(***)代表P<0.001。
表4正常兔眼内压动物模式的眼内压
相较于溶剂对照组，蝉花2.5mg/kg/b.w.醇萃物组在第一天投药后1小时[D1(1)]，眼内压即显著降低。蝉花25mg/kg/b.w.醇萃物组在第一天投药后1小时[D1(1)]、3小时[D1(3)]及第二天投药后1小时[D2(1)]皆可显著降低眼内压。正对照组0.5％Timolol于投药后各时间点皆可明显降低眼内压。
眼内压变化量(ΔIOP)
眼内压变化量的测量结果如表5及图2所示，其中星号标记(*)的意义与表1及图1相同，表示试验组与溶剂对照组有显著差异。
表5正常兔眼内压动物模式的眼内压变化量
相较于溶剂控制组，蝉花25mg/kg/b.w.醇萃物组在第一天与第二天投药后1小时及3小时，皆可显著降低眼内压变化量。正对照组0.5％Timolol组除第二天投药后三小时无显著降低ΔIOP，其他时间点皆可显著降低ΔIOP。
眼内压变化量的百分率(Percentage of Delta IOP)
眼内压变化量百分率(比例变化)的测量结果如表6及图3所示，其中星号标记(*)的意义与上述相同，皆表示试验组与溶剂对照组有显著差异。
表6正常兔眼内压动物模式的Delta IOP比例变化
相较于溶剂控制组，蝉花25mg/kg/b.w.醇萃物组在第一天与第二天投药后1小时及3小时，皆可显著降低ΔIOP百分率。正对照组0.5％Timolol组除第二天投药后三小时无显著降低ΔIOP百分率之外，其余时间点皆可显著降低ΔIOP百分率。
上述实施例3的试验证明，以实施例1制备方法制成的蝉花活性物质，对于正常兔眼压模式动物，口服即有显著的降眼内压(IOP)效果，甚至可达成接近已证明疗效的Timolol药物的治疗效果。故蝉花活性物质可应用于降眼压及预防青光眼的领域。
根据上述动物低剂量与高剂量分组试验，换算出的人体有效剂量约介于52.34mg/人/天至523.4mg/人/天之间(以每人体重70公斤换算)。
Claims (13)
1.一种蝉花活性物质用于制造降低眼压的组合物的用途，其中，该蝉花活性物质经下列步骤制备：
步骤a：取蝉花菌丝体于平板培养基上，于15-35℃培养5-14天；
步骤b：将步骤a培养的蝉花菌丝体接种至烧瓶内，于15-35℃、pH2-8的条件培养3-10天；
步骤c：将步骤b培养的蝉花菌丝体接种至发酵槽内，于15-35℃、pH2-8的条件培养3-10天，形成含有该蝉花活性物质的蝉花菌丝体发酵液。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，制备该蝉花活性物质的步骤还包括步骤d：将该蝉花菌丝体发酵液干燥后，形成含有该蝉花活性物质的蝉花菌丝体干燥品。
3.根据权利要求2所述的用途，其中，制备该蝉花活性物质的步骤还包括步骤e：将所述蝉花菌丝体干燥品以溶剂萃取，形成含有该蝉花活性物质的蝉花菌丝体萃取液。
4.根据权利要求3所述的用途，其中，制备该蝉花活性物质的步骤还包括步骤f：将该蝉花菌丝体萃取液干燥，以获得该蝉花活性物质。
5.根据权利要求1所述的用途，其中，所述蝉花菌丝体为寄存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号CGMCC No.10486的蝉花菌丝体。
6.根据权利要求1所述的用途，其中，步骤c中所述发酵槽进一步通入气体，该气体包括空气、氧气、二氧化碳、氦气或其组合。
7.根据权利要求1所述的用途，其中，步骤c所述发酵槽的槽压为0.5-1.0kg/cm2且通气速率为0.01-1.5VVM。
8.根据权利要求1所述的用途，其中，所述降低眼压的组合物为食品组合物或医药组合物。
9.根据权利要求8所述的用途，其中，当所述降低眼压的组合物为医药组合物时，所述降低眼压的组合物进一步包含药学的载剂、赋形剂、稀释剂或辅剂。
10.根据权利要求3所述的用途，其中，步骤e中所述溶剂为水、醇类或水/醇混合物。
11.根据权利要求10所述的用途，其中，所述溶剂的体积大于蝉花菌丝体发酵液冻干粉的体积至少20倍。
12.根据权利要求1所述的用途，该蝉花活性物质是用于制造治疗青光眼的组合物。
13.根据权利要求1所述的用途，其中，所述降低眼压的组合物是以口服方式施用。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| CI02 | Correction of invention patent application | ||
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Correction item: Biological Conservation Information Correct: CGMCC No.10486 2015.05.04 Number: 18-02 Page: The title page Volume: 34 Correction item: Biological Conservation Information Correct: CGMCC No.10486 2015.05.04 Number: 18-02 Volume: 34 |
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| GR01 | Patent grant | ||
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