TWI678210B - 蟬花水萃物或蟬花醇萃物用於預防、延緩或治療白內障之用途 - Google Patents

Abstract

本發明揭露一種用於預防、延緩或治療白內障的蟬花菌絲體、其活性物質、其菌絲體液態發酵物及其醫藥組合物，以及製備前述產品的方法。本發明的蟬花菌絲體、其活性物質、其菌絲體液態發酵物並可製備為用於預防或延緩白內障的保健食品。

Description

蟬花水萃物或蟬花醇萃物用於預防、延緩或治療白內障之用途

本發明關於一種活性物質。尤其，本發明關於一種蟬花(Cordyceps cicadae)液態發酵菌絲體活性物質、其醫藥組合物，用以預防、延緩或治療白內障。

人體眼睛內的水晶體是由水和蛋白纖維組成。蛋白纖維按照特定方式排列，使水晶體清晰及容許光線穿透。隨著年齡的增加或面臨危險因子，蛋白纖維退化並聚成一團，使水晶體發生硬化、混濁的情形，形成白內障。此時，光線無法或難以從角膜穿過水晶體聚焦投射在視網膜上，使得人體感覺視力模糊，甚至看不見物體。

因此，白內障是指水晶體中的可溶性蛋白質逐漸變成不可溶性蛋白質而形成混濁，導致視力模糊、近視度數加深(老花眼減輕)、影像重疊、光圈光暈、對比視力降低等等的視力障礙現象。其發生原因包括先天性、外傷性、併發性及老年性等，例如糖尿病、外傷、發炎、遺傳等等。臨床上最常見的白內障為老年性白內障。若以白內障在水晶體發生混濁的位置可區分為：核心型白內障、皮質型白內障、後囊型白內障以及混合型白內障。

隨著先進國家人口日趨老化以及人眼長時間、短距離注視手 持式行動裝置上的螢幕內容，人眼受到高強度光線的刺激或大自然輻射，使得更容易加速白內障的發生進程以及與提高白內障的發生率。

白內障是眼科最常見的疾病之一。初期症狀包括視力不穩定、模糊、複視、畏光、夜間炫光、不易分辨物體明暗對比、色調改變、物體顏色昏暗或變形。白內障晚期症狀則是視力障礙嚴重惡化、視覺呈現霧化、僅能辨別眼前的手指及僅剩的光覺視力，最終嚴重導致失明。目前尚未有藥物或營養補充劑證實能有效防止白內障形成。

白內障無法由眼外直接觀察來診斷。診斷白內障時，眼科醫師借助例如裂隙燈顯微鏡、眼壓計、超音波儀、自動電腦驗光機、彩色電腦角膜地圖等儀器來確定水晶體混濁的形狀、大小及位置。

現行預防白內障的方式包括服用維他命及抗氧化劑、配戴太陽眼鏡以減少紫外線曝曬、均衡飲食及避免抽煙。但接受白內障手術為目前唯一有效的治療手術方式。

目前在臨床上白內障的治療方法是以手術移除混濁不透明的水晶體，包括白內障超聲乳化手術及白內障囊外摘除手術，並植入非球面或多焦點人工水晶體。其中，在白內障切除手術中使用玻尿酸來保護角膜內皮層，然而目前並無文獻明確指出玻尿酸對白內障具有預防、延緩或治療效果。由於人工水晶體的費用並非全球所有地區民眾可以負擔，且仍有手術副作用及併發症的風險。因此，白內障仍然是目前人類最大的致盲原因。據此，開發預防、延緩或治療白內障發生的醫藥組合物、藥物或預防或延緩白內障發生的保健食品無疑具有廣大的市場。

本案申請人鑑於習知技術中的不足，經過悉心試驗與研究，並一本鍥而不捨的精神，終構思出本案，能夠克服先前技術的不足，以下為本案的簡要說明。

為了開發用以預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物，本發明製備蟬花(Cordyceps cicadae)菌絲體、蟬花菌絲體液態發酵物、蟬花菌絲體液態發酵物的活性物質以及醫藥組合物，以動物實驗證實前述蟬花菌絲體液態發酵物、蟬花菌絲體液態發酵物的活性物質以及醫藥組合物可有效預防、延緩或治療白內障。因此，前述蟬花菌絲體、蟬花菌絲體液態發酵物及蟬花菌絲體液態發酵物的活性物質也可製備為預防或延緩白內障的保健食品。

本發明揭露一種製備用於預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物的方法，醫藥組合物包括來自蟬花的活性物質，該方法包括：(a)將蟬花的菌絲體接種於平板培養基上來培養；(b)將步驟(a)的經培養的蟬花菌絲體接種於具有第一規模的第一培養基來培養；以及(c)將步驟(b)的經培養的蟬花菌絲體接種於具有第二規模的第二培養基來培養，以獲得包含活性物質的發酵物，其中第二規模大於第一規模。

在本發明的一個具體實施例中，步驟(a)的培養是在15℃~35℃之間進行5天~14天，且平板培養基可為馬鈴薯糊精洋菜(PDA)培養基。在本發明的一個具體實施例中，步驟(b)的培養是在15℃~35℃、pH 2~pH 8及10rpm~250rpm之間進行複數天。在本發明的一個具體實施例中，步驟(c)的培養是在15℃~35℃、0.5~1.0公斤/平方公分的槽壓、pH 2~8、第一攪拌速度或第二攪拌速度以及具有0.01~1.5VVM的通氣速率的氣體下進行3天~5天，第一攪拌速度為10rpm~250rpm，第二攪拌速度為0rpm(不攪拌)，且氣體選自由空氣、氧氣、二氧化碳、氮氣及其組合所組成的群組其中之一。

在本發明的一個具體實施例中，第一及第二培養基中的每一 者包括選自綜合性碳氮源、動物來源蛋白、動物來源蛋白水解物、植物來源蛋白、植物來源蛋白水解物、酵母抽出物、麥芽抽出物、無機鹽類、醣類及其組合所組成群組的其中之一，綜合性碳氮源為穀類及/或豆類，無機鹽類包括選自硫酸鎂、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀及硫酸鐵及其組合所組成群組的其中之一，且醣類包括選自葡萄糖、果糖、麥芽糖及蔗糖及其組合所組成群組的其中之一。

在本發明的一個具體實施例中，該製備方法更包括：(d)以選自由噴霧乾燥、熱風乾燥、滾筒乾燥及冷凍乾燥所組成的群組其中之一的乾燥技術乾燥發酵物，以獲得乾燥物。當步驟(d)是藉由冷凍乾燥來進行時，該乾燥物為凍乾粉。

在本發明的一個具體實施例中，該製備方法更包括：(e)以水或醇類萃取該乾燥物，以對應地獲得水萃取物或醇萃取物，其中醇類為1%~100%甲醇或1%~100%乙醇。

在本發明的一個具體實施例中，用於預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物包括來自蟬花的活性物質以及醫藥上可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑。在本發明的一個具體實施例中，用於預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物包括包含蟬花活性物質的蟬花菌絲體液態發酵物以及醫藥上可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑。在本發明的一個具體實施例中，用於預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物包括包含蟬花活性物質的蟬花液態發酵物的凍乾粉以及醫藥上可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑。在本發明的一個具體實施例中，用於預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物包括包含蟬花活性物質的蟬花水萃物或蟬花醇萃物，以及醫藥上可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑。

本發明另揭露一種將蟬花的活性物質製備用於預防、延緩或 治療白內障的醫藥組合物的用途，其中活性物質是以前述製備方法獲得。

本發明另揭露一種用於預防、延緩或治療白內障的蟬花的活性物質，其中活性物質是以前述製備方法獲得。

第1圖為本發明的水晶體仿裂隙燈掃描呈像的示意圖。A：水溶對照組，B：水溶傷害組，C：蟬花水萃物，D：油溶對照組，E：油溶傷害組，及F：蟬花醇萃物。

第2圖為本發明的水晶體方格圖呈像的示意圖。A：水溶對照組，B：水溶傷害組，C：蟬花水萃物，D：油溶對照組，E：油溶傷害組，及F：蟬花醇萃物。

第3圖為本發明的水晶體點狀圖呈像示意圖。A：水溶對照組，B：水溶傷害組，C：蟬花水萃物，D：油溶對照組，E：油溶傷害組，及F：蟬花醇萃物。

第4圖為本發明蟬花水萃物的水晶體光線穿透率的示意圖。

第5圖為本發明蟬花醇萃物的水晶體光線穿透率的示意圖。

第6圖為本發明蟬花水萃物的水晶體流明度差值的示意圖。

第7圖為本發明蟬花醇萃物的水晶體流明度差值的示意圖。

本案所提出的發明將可由以下的實施例說明而得到充分瞭解，使得所屬技術領域中具有通常知識者可以據以完成，然而本案的實施並非可由下列實施例而被限制其實施型態，所屬技術領域中具有通常知識者仍可依據除既揭露的實施例的精神推演出其他實施例，該等實施例皆當屬於本發明的範圍。

蟬花(Cordyceps cicadae)為真菌界(Fungi)、子囊菌門 (Ascomycota)、糞殼菌綱(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、麥角菌科(Clavicipitaceae)、蟲草屬(Cordyceps)真菌。其感染蟬蛹或蟬科山蟬(Cicada flammate)、蟪蛄(Platypleura kaempferi)、黑蚱(Crytotympana pustulata)及竹蟬(Platylomia pieli)等幼蟲使其死亡，再於蟬蛹前端或蟲體頭部形成花蕾狀子座，故名蟬花。因此，蟬花為一種菌蟲複合體。蟬花可依不同的寄主及感染菌種分類為大蟬花或金蟬草(C.cicadae)、小蟬花(C.sobolifera)及蟬草或蟬生蟲草(C.cicadicola)三種。蟬花多產於中國長江以南熱帶和亞熱帶地區，例如中國的福建、浙江、四川、雲南及江蘇等地。台灣部分山區亦有野生蟬花子實體蹤跡。

蟬花為名貴的傳統中藥材，性寒、味甘、無毒，曬乾後可入藥，有散風熱、鎮驚、透疹之功效，主治小兒天吊、驚癇、心悸、夜啼。現代藥理學實驗也表明，蟬花及其人工培養物具有明顯的調節免疫、神經系統調節、抗疲勞、鎮靜、鎮痛解熱、改善腎功能、降血糖、降低血壓、減慢心率、抑制動脈粥樣硬化形成、抗腫瘤、抗輻射和滋補強身等功效。

蟬花與冬蟲夏草同屬蟲生真菌複合體，蟬花之功能性與應用性不亞於冬蟲夏草和蛹蟲草，具相近的醫療保健功效，且含有相近的化學成分，所以常作為冬蟲夏草的代用品。然而，天然的冬蟲夏草及天然蟬花的產量不多且需依賴寄主，而且寄主又受氣候因子或人為因素的影響。因此，如何增進蟬花的產量及其經濟價值成為該產業極力解決的問題。

本發明揭露一種製備蟬花液態發酵菌絲體活性物質(簡稱活性物質)的方法，一種製備包含該活性物質的醫藥組合物的方法，以及一種將該活性物質或醫藥組合物用於預防、延緩或治療物理性傷害所誘導的白內障的用途。相較於手術摘除或西藥治療，本發明的製備方法更為安全、簡便，獲得的活性物質更天然、安全，並達到預防、延緩或治療眼睛病變 的效果。該活性物質亦可以一般的保健食品的製備為用於預防或延緩白內障的保健食品。

(一)實驗步驟：

1.蟬花材料：

本發明的具體實施例所使用的蟬花菌絲體是採集自台灣野生蟬花子實體，經分離而得其菌絲體，並繼代於平板培養基上，並經台灣財團法人食品工業發展研究所鑑定其基因序列而確認為蟬花。然而，可應用於本發明的蟬花活性物質不限於由此菌種(C.cicadae)所得。

2.蟬花菌絲體的液態發酵培養：

首先，將蟬花菌絲體無菌接種於平板培養基上，於15℃~35℃(較佳為25℃)下培養5天至2周(14天)，再以無菌接種技術刮取蟬花菌絲體並接種於具有第一規模的培養基(例如燒瓶內的培養基)。接著在15℃~35℃(較佳為25℃)、pH 2~8(較佳為pH 4~7，更佳者約pH 4.5)、震盪速率10rpm~250rpm下培養數天(例如3天或3天以上)。接著，將燒瓶內的培養物無菌接種至具有第二規模的培養基(例如發酵槽內的培養基)，在15℃~35℃(較佳為25℃)、0.5-1.0kg/cm²的槽壓、pH 2~8、10rpm~150rpm的攪拌速度或不攪拌(air lift)的情況，以0.01-1.5VVM通氣速率通入氣體(例如空氣、空氣與氧氣、二氧化碳或氮氣的混合物)，培養3天~5天，獲得蟬花菌絲體液態培養發酵物，其包括蟬花菌絲體與澄清液。該蟬花菌絲體液態培養發酵物含有來自蟬花的活性物質。為了擴大蟬花菌絲體液態培養發酵物的產量，第二規模通常大於第一規模。以0.01-1.5VVM通氣速率通入氣體較佳地是通入空氣。

前述具有第一規模及第二規模的培養基可包含相同或不相同的成分及配方。具有第一規模及第二規模的培養基可使用如表1所示的培 養基配方，但不限於此配方。

其中綜合性碳氮源可為穀類(例如麥粉類)或豆類(例如黃豆粉、綠豆粉、大豆粉等)，無機鹽類可為硫酸鎂、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鐵等，且醣類可為葡萄糖、果糖、麥芽糖、蔗糖等。

3.蟬花菌絲體液態培養發酵物的乾燥：

蟬花菌絲體液態培養發酵物可進一步乾燥為發酵物的凍乾粉。所使用的乾燥技術包含但不限於噴霧乾燥、熱風乾燥、滾筒乾燥、冷凍乾燥或其他適用本發明的習用乾燥技術。

4.蟬花菌絲體液態培養發酵物的萃取：

將蟬花菌絲體液態培養發酵物的凍乾粉加入蒸餾水，使之回溶並懸浮於蒸餾水中，以90℃~121℃的溫度加熱數分鐘。待冷卻後經減壓濃縮或再經前述乾燥技術而獲得蟬花菌絲體水萃物(簡稱蟬花水萃物)。

替代地，將蟬花菌絲體液體培養發酵物的凍乾粉加入醇類(1%(v/v)~100%(v/v)甲醇或乙醇)，使之回溶並懸浮於醇類中，以浸泡、攪拌、震盪或超音波萃取數分鐘，再經減壓濃縮法或前述乾燥技術而獲得 蟬花菌絲體醇萃物(簡稱蟬花醇萃物)。

5.含有蟬花活性物質的醫藥組合物的製備：

所屬技術領域中具有通常知識者可依據其製藥知識及技術將本發明的蟬花活性物質、包含蟬花活性物質的蟬花液態培養發酵物、包含蟬花活性物質的蟬花凍乾物或包含蟬花活性物質的蟬花水萃物或蟬花醇萃物，與醫藥上可接受的載劑、賦形劑、稀釋劑或輔劑製備為用於預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物。該醫藥組合物的劑型可包括但不限於膠囊、錠劑、丸劑、乳液、懸浮分散劑、溶劑。以錠劑為例，醫藥上可接受的載劑包括但不限於乳糖、玉米澱粉、潤滑劑及鎂硬脂酸鹽。而膠囊使用的稀釋劑包括但不限於乳糖、乾燥的玉米澱粉。

6.含有蟬花活性物質的保健食品的製備：

所屬技術領域中具有通常知識者可依據其食品工業知識及技術將本發明的蟬花活性物質、包含蟬花活性物質的蟬花液態培養發酵物、包含蟬花活性物質的蟬花凍乾物或包含蟬花活性物質的蟬花水萃物或蟬花醇萃物，與食品級的添加物(例如增量劑、著色劑、甜味劑、香料、防腐劑等)製備為用於預防或延緩白內障的保健食品。

(二)動物實驗：

紫外線按照其波長區段而區分為UVA(315~380nm)、UVB(280~315nm)及UVC(100~280nm)。紫外線的過度照射將造成光化學傷害，尤以UVB對眼球的傷害最明顯。

眼角膜可以吸收將近全部的UVC，但是對於波長較長的紫外線，透過性會急速增加。例如320nm的紫外線可透過60%。水晶體則進一步地吸收大部份進入眼內的紫外線。年輕人的水晶體可以吸收波長370nm以下的紫外線，但隨著年齡變長，老年人的水晶體變成黃褐色而吸收更多 的UVA及較短波長的藍色光。

動物實驗已證實紫外線輻射可引起白內障，尤其在水晶體皮質及後囊部位容易產生混濁的現象。在顯微鏡下可觀察到未分化的水晶體上皮細胞向後方移行，造成後囊混濁性白內障。在流行病學上的研究及臨床上的觀察，白內障的形成與陽光暴露量有關。住在愈靠近赤道地區、日照量愈大的區域及戶外活動愈頻繁的人有較高的白內障發生率。進一步研究顯示，白內障與UVB紫外線輻射有關，型態上則以水晶體皮質及後囊部位產生混濁的最多。

在本發明中，以紫外線誘導小鼠的水晶體損傷，評估蟬花菌絲體活性物質於預防、延緩或治療紫外線導致的白內障的效果，及其於眼睛保健的相關應用。

實施例一、蟬花液態發酵培養及活性物質的製備

1.平板培養：將蟬花菌絲體無菌接種於馬鈴薯糊精洋菜(potato dextrose agar,PDA)平板培養基上，於25℃下培養約5天。

2.燒瓶培養：以無菌操作技術刮取平板培養基上的蟬花菌絲體並接種於燒瓶內的培養基(含蔗糖2.0重量%、酵母抽出物0.5重量%、黃豆粉1.0重量%，加水至100重量%)，於25℃、pH 4.5、120rpm下震盪培養三天。

3.發酵槽培養：將燒瓶內的蟬花菌絲體無菌接種於發酵槽的培養基內。發酵槽內的培養基成分與燒瓶內的培養基成分相同。於25℃、0.5-1.0kg/cm²的槽壓、pH 4.5、10rpm~150rpm的攪拌速度或不攪拌(air lift)及具有0.5-1.0VVM的通氣速率的氣體下培養及發酵3天，獲得蟬花菌絲體液態培養發酵物，其包括蟬花菌絲體與澄清液。該蟬花菌絲體液態培養發酵物含有來自蟬花的活性物質。再將蟬花菌絲體液態培養發酵物進 行冷凍乾燥，獲得發酵物的凍乾粉，以利於保存。經20公噸發酵槽培養發酵後的蟬花菌絲體液態培養發酵物經冷凍乾燥後，可獲得約110公斤的發酵物凍乾粉。

4.蟬花水萃物的製備：

將蟬花菌絲體發酵物凍乾粉溶解於20倍體積的蒸餾水，以100℃加熱30分鐘，待冷卻後進行冷凍乾燥，獲得蟬花水萃物。

5.蟬花醇萃物的製備：

將蟬花菌絲體發酵物凍乾粉回溶於20倍體積的乙醇(1%至100%乙醇)，以超音波震盪萃取1小時。萃取懸浮液經離心後取上清液，經減壓濃縮獲得蟬花醇萃物。前述1%乙醇或低於100%乙醇係指將乙醇與溶劑(例如水)以體積比混合，前述100%乙醇係指未添加溶劑(例如水)的純乙醇。所屬技術領域中具有通常知識者可將甲醇或乙醇替代為與甲醇或乙醇具有類似物理化學性質的化合物。

實施例二、白內障動物模式及相關指標的分析

1.白內障小鼠動物模式的建立：

本實施例採用ICR品系、6週齡、25~33克的雌性小鼠(購自台灣樂斯科生物科技股份有限公司)，其飼養於台灣台中中山醫學大學實驗動物中心，提供正常潔淨飼料及飲水，飼養環境為12小時光照及12小時黑暗的循環光照，溫度控制於20±2℃，濕度控制在50±5%。

2.餵食劑量與實驗步驟：

以紫外燈(法國Vilber Lourmat公司，燈管型號VL-6MCUVB)射出的紫外線UVB誘導小鼠產生白內障。本試驗共進行29天，試驗前將小鼠隨機分為6組，每組3隻：(1)水溶對照組：每日管餵0.9% NaCl溶液； (2)水溶傷害組：每日管餵0.9% NaCl溶液，於第6天至第28天進行紫外線UVB傷害；(3)蟬花水萃物：每日管餵溶於0.9% NaCl溶液的100mg/kg體重的蟬花水萃物，於第6天至第28天進行紫外線UVB傷害；(4)油溶對照組：每日管餵市售大豆油；(5)油溶傷害組：每日管餵市售大豆油，於第6天至第28天進行紫外線UVB傷害；以及(6)蟬花醇萃物：每日管餵溶於市售大豆油的100mg/kg體重的蟬花醇萃物，於第6天至第28天進行紫外線UVB傷害。

在紫外線UVB的處理上(即水溶傷害組、蟬花水萃物、油溶傷害組及蟬花醇萃物)，將經2.5% Avertin麻醉的小鼠置於暗箱中，眼球朝上照射0.72J/cm²強度之紫外線90秒，使小鼠水晶體受到損傷。所有組別的小鼠於第29日犧牲。

3.水晶體損傷程度檢測及白內障評估相關指標分析：

此區分為眼球呈像(仿裂隙燈)與水晶體呈像(方格圖與點狀圖)檢測。

仿裂隙燈掃描呈像比對的目的在於經由側向投映的方式來判斷水晶體在眼球內部的透光程度，進而比對白內障的發展程度與呈像清晰度。小鼠犧牲後，取出右眼眼球並置於紅線白底背板上，並將輪部對齊紅線，並拍攝右眼眼球的側面呈像結果。

水晶體呈像比對又區分為方格圖呈像與點狀圖呈像。方格圖呈像比對的主要目的在於檢測水晶體中央成像效果是否正常，點狀圖呈像比對的主要目的在於檢測水晶體周邊呈像效果是否優良。小鼠犧牲後，取出左眼眼球的水晶體，置於方格圖與點狀圖上，並拍攝左眼眼球水晶體的 呈像結果。

4.光度計分析(光線穿透率與透光度)：

光線穿透率與透光度試驗的目的為檢測水晶體經過紫外線UVB傷害後與經由預先餵食蟬花活性物質後的抵抗損傷程度的差異。

光線穿透率是以光度計測量在不同波長下光線通過水晶體後的百分比。將小鼠左眼水晶體置於玻片上，並設置於光度計感應探針上，以固定光源照射水晶體並擷取其透光度與光線穿透率。

透光度測量是計算有多少流明值的光線通過水晶體。當通過的光線比較少時，表示水晶體的透清程度越低，也代表白內障程度越高，也就使通過水晶體的光線的流明值下降。原始光線的總流明值(綜合所有波長的色光)減去光源照射水晶體後測量到的流明值即表示水晶體的透光性。水晶體透光度越高，流明度差值越小。因此，白內障的嚴重程度可以流明度差值表示。

實施例三、蟬花活性物質對於預防、延緩或治療白內障及相關指標的效果評估

1.眼球呈像(仿裂隙燈)與水晶體呈像(方格圖與點狀圖)檢測

請參閱第1圖，其為本發明的水晶體仿裂隙燈掃描呈像的示意圖。在第1圖中，水溶對照組(A)和油溶對照組(D)二者皆無出現異常的水晶體特徵。相反的，水溶傷害組(B)和油溶傷害組(E)兩者皆出現水晶體混濁現象，表示以紫外線UVB成功地誘發小鼠白內障。在食用蟬花水萃物及蟬花醇萃物的小鼠組別(C、F)中，蟬花水萃物及蟬花醇萃物皆能有效維持小鼠眼球側面的透光程度。因此，含有蟬花活性物質的蟬花水萃物及蟬花醇萃物及由此製備的醫藥組合物可有效預防、延緩或治療物 理性傷害所誘導的白內障。

請參閱第2圖，其為本發明的水晶體方格圖呈像的示意圖。在第2圖中，除了可觀察到與眼球呈像比對(第1圖)相似的結果，當將水晶體中央區呈像的清晰度與方格圖失真程度比較時，可發現水溶對照組(A)與油溶對照組(D)具有清晰的方格圖呈像且幾無失真及扭曲，水溶傷害組(B)和油溶傷害組(E)兩者為不清晰的方格圖呈像且失真及扭曲。然而，蟬花水萃物(C)及蟬花醇萃物(F)則具有清晰的方格圖呈像且幾無失真及扭曲。因此，含有蟬花活性物質的蟬花水萃物及蟬花醇萃物及由此製備的醫藥組合物可有效預防、延緩或治療物理性傷害所誘導的白內障。

請參閱第3圖，其為本發明的水晶體點狀圖呈像的示意圖。第3圖的水晶體點狀圖周邊呈像也顯示出與第2圖的水晶體方格圖呈像一致的。因此，預先餵食蟬花水萃物或蟬花醇萃物的組別皆可有效預防、延緩或治療紫外線UVB誘導早期性白內障對水晶體的傷害。

2.光度計分析(光線穿透率及透光度)：

請參閱第4圖及第5圖，其分別為本發明蟬花水萃物及蟬花醇萃物的水晶體光線穿透率的示意圖。在第4圖及第5圖中，以固定暖色光的光源(400nm至725nm波長)照射水晶體，在局部放大的550nm~600nm波長區域中比較各組之間的光線穿透率，顯示出與仿裂隙燈掃描呈像比對(第1圖)和水晶體呈像比對(第2圖、第3圖)一致的結果。水溶對照組與油溶對照組以及蟬花水萃物與蟬花醇萃物具有一致的光線穿透率結果。因此，預先餵食蟬花水萃物或蟬花醇萃物的組別可使經紫外線UVB傷害後的小鼠水晶體維持應有的透光性，使其成像更為清晰。因此，預先餵食蟬花水萃物或蟬花醇萃物的組別可有效預防、延緩或治療紫外線UVB誘導早期性白內障對水晶體的傷害。

請參閱第6圖及第7圖，其分別為本發明蟬花水萃物及蟬花醇萃物的水晶體流明度差值的示意圖。在第6圖及第7圖中，在局部放大的425nm~550nm以及600nm~650nm波長區間比較各組之間的流明度差值，顯示出與上述數據相對應的結果。意即，在預先餵食蟬花水萃物及蟬花醇萃物的小鼠即使受到紫外線UVB的傷害，仍可維持其水晶體的透光性，因此包含蟬花活性物質的蟬花水萃物或蟬花醇萃物及由此製備的醫藥組合物可有效預防、延緩或治療紫外線誘導的白內障對水晶體的傷害。

綜合上述，本發明具體實施例揭露的蟬花菌絲體、蟬花菌絲體液態發酵物(及凍乾物)、蟬花菌絲體液態發酵物的活性物質以及由前述產物製備的醫藥組合物可有效預防、延緩或治療白內障以及因物理性的紫外線傷害所誘導的白內障。據此，前述蟬花菌絲體、蟬花菌絲體液態發酵物(及凍乾物)及蟬花菌絲體液態發酵物的活性物質也可按照本領域的保健食品製造技術製備為預防或延緩白內障的保健食品。

本發明實屬難能的創新發明，深具產業價值，援依法提出申請。此外，本發明可以由所屬技術領域中具有通常知識者做任何修改，但不脫離如所附申請專利範圍所要保護的範圍。

Claims (8)

1. 一種將一蟬花(Cordyceps cicadae)的一蟬花水萃物或一蟬花醇萃物製備用於預防、延緩或治療白內障的醫藥組合物的用途。
2. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該蟬花水萃物或該蟬花醇萃物是以以下的製備方法進行製備：(a)將該蟬花的一菌絲體接種於一平板培養基上來培養；(b)將步驟(a)的經培養的蟬花菌絲體接種於具有一第一規模的一第一培養基來培養；(c)將步驟(b)的經培養的蟬花菌絲體接種於具有一第二規模的一第二培養基來培養，以獲得一發酵物，其中該第二規模大於該第一規模；(d)以選自由噴霧乾燥、熱風乾燥、滾筒乾燥及冷凍乾燥所組成的群組其中之一的乾燥技術乾燥該發酵物，以獲得一乾燥物；以及(c)以水及一醇類其中之一萃取該乾燥物，以對應地獲得該蟬花水萃物或該蟬花醇萃物。
3. 如申請專利範圍第2項所述的用途，其中步驟(a)的培養是在15℃~35℃之間進行5天~14天，且該平板培養基為馬鈴薯糊精洋菜(PDA)培養基。
4. 如申請專利範圍第2項所述的用途，其中步驟(b)的培養是在15℃~35℃、pH 2~pH 8及10rpm~250rpm之間進行複數天。
5. 如申請專利範圍第2項所述的用途，其中步驟(c)的培養是在15℃~35℃、0.5~1.0公斤/平方公分的一槽壓、pH 2~8、一第一攪拌速度及一第二攪拌速度其中之一以及具有0.01~1.5VVM的一通氣速率的一氣體下進行3天~5天，該第一攪拌速度為10rpm~250rpm，該第二攪拌速度為0rpm，且該氣體選自由空氣、氧氣、二氧化碳、氮氣及其組合所組成的群組其中之一。
6. 如申請專利範圍第2項所述的用途，其中該第一及該第二培養基中的每一者包括選自一綜合性碳氮源、一動物來源蛋白、一動物來源蛋白水解物、一植物來源蛋白、一植物來源蛋白水解物、一酵母抽出物、一麥芽抽出物、一無機鹽類、一醣類及其組合所組成群組的其中之一，該綜合性碳氮源為穀類及豆類至少其中之一，該無機鹽類包括選自硫酸鎂、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀及硫酸鐵及其組合所組成群組的其中之一，且該醣類包括選自葡萄糖、果糖、麥芽糖及蔗糖及其組合所組成群組的其中之一。
7. 如申請專利範圍第2項所述的用途，其中當步驟(d)是藉由冷凍乾燥來進行時，該乾燥物為一凍乾粉。
8. 如申請專利範圍第2項所述的用途，其中該醇類為1%~100%甲醇及1%~100%乙醇其中之一。