CN107942081A - 一种脂蛋白检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医学检测技术领域,特别涉及一种脂蛋白检测试剂盒。该试剂盒包括R1试剂和R2试剂:所述R1试剂包括缓冲液、BSA、乳糜微粒解离剂、表面活性剂、氯化钠、防腐剂;所述R2试剂包括缓冲液、脂蛋白多抗胶乳微球、丙氨酸、EDTA、BSA、糖类、防腐剂。本发明的试剂盒能够有效地消除待测样本中乳糜微粒的干扰作用,实现了乳糜微粒含量较高的标本中脂蛋白的准确测定,且灵敏度高、线性检测范围宽。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测技术领域,特别涉及一种脂蛋白检测试剂盒。
背景技术
脂蛋白(a)(Lipoprpotein(a))是与LDL(低密度脂蛋白)结构相近的人体血清中的蛋白,密度介于HDL(高密度脂蛋白)与LDL之间。脂蛋白(a)核心部分为中性脂质和apoB-100分子,其外围包绕着亲水性的apo(a),二者以二硫键共价连接;其中apo(a)是高度糖化的亲水性蛋白质,肽链长度很不一致,分子大小呈明显多态性。血清中高浓度的Lpa是动脉硬化和心脏疾病危险程度的指标。血浆脂蛋白(a)升高与多种心血管疾病,包括外周血管病、脑血管病、早发冠心病和糖尿病血管并发症等有关。
目前市售的脂蛋白(a)测定试剂盒多采用胶乳增强免疫比浊法,普遍存在测定乳糜微粒含量较高的标本时报告假阴性结果的缺陷。其原因在于脂蛋白(a)与乳糜微粒有较相似的特性,且乳糜微粒直径远大于脂蛋白(a),对于乳糜微粒浓度较高的标本,脂蛋白(a)易被乳糜微粒所包裹,导致样本中的脂蛋白(a)难以与试剂盒组分中的脂蛋白(a)特异性抗体结合,使得测定值低于真实值而报告为假阴性结果。
发明内容
鉴于此,本发明的目的在于提供一种脂蛋白检测试剂盒,使得该试剂盒能够消除待测样本中乳糜微粒的干扰作用,实现乳糜微粒含量较高的标本中脂蛋白的准确测定。
本发明提供了一种脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,包括R1试剂和R2试剂:
所述R1试剂包括缓冲液、BSA、乳糜微粒解离剂、表面活性剂、氯化钠、防腐剂;
所述R2试剂包括缓冲液、脂蛋白多抗胶乳微球、丙氨酸、EDTA、BSA、糖类、防腐剂。
在本发明提供的一些具体实施例中,本发明的试剂盒中,所述R1试剂包括25~200mmol/L缓冲液、0.05%~0.2%(w/v)BSA、2%~15%(v/v)乳糜微粒解离剂、0.05%~0.2%(w/v)表面活性剂、0.5%~1.5%(w/v)氯化钠和0.05%~0.15%(w/v)防腐剂。
作为优选,所述乳糜微粒解离剂为2-丁酮、丙酮、四氢呋喃、二甲砜或二甲亚砜。
作为优选,所述R1试剂中缓冲液选自PB缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液或HEPES缓冲液,缓冲液的pH为7.0~9.0。
作为优选,所述R1试剂中表面活性剂选自Tween 20、Triton X-100或NP40。
作为优选,所述R1试剂中防腐剂选自叠氮钠、proclin 300或硫柳汞。
在本发明提供的一些具体实施例中,所述R1试剂包括100mmol/L Tris-HCl缓冲液、0.1%(w/v)BSA、10%(v/v)二甲砜、0.1%(w/v)Tween20、0.9%(w/v)氯化钠和0.1%(w/v)叠氮钠。
作为优选,所述R2试剂包括25~200mmol/L缓冲液、0.1%~0.35%(w/v)脂蛋白多抗胶乳微球、10~50mmol/L丙氨酸、0.5~4mmol/LEDTA、0.05%~0.2%(w/v)BSA、2%~10%(w/v)糖类和0.05%~0.2%(w/v)防腐剂。
作为优选,所述R2试剂中缓冲液选自PB缓冲液、Tris-HCl缓冲液或硼酸缓冲液,缓冲液的pH为6.5~8.5。
作为优选,脂蛋白多抗胶乳微球为聚苯乙烯微球,其表面官能团为羧基。
作为优选,所述R2试剂中糖类选自蔗糖、海藻糖或乳糖。
作为优选,所述R1试剂中防腐剂选自叠氮钠、proclin 300或硫柳汞。
本发明提供的脂蛋白检测试剂盒,还包括校准品溶液,其中包括脂蛋白、缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂。
在本发明提供的一些具体实施例中,所述R2试剂包括50mmol/LPB缓冲液、0.5%(w/v)脂蛋白多克隆抗体标记的羧基胶乳微球、20mmol/L丙氨酸、2mmol/LEDTA、0.05%~0.2%(w/v)BSA、5%(w/v)蔗糖和0.1%(w/v)Proclin300。
该试剂盒包括R1试剂和R2试剂:所述R1试剂包括缓冲液、BSA、乳糜微粒解离剂、表面活性剂、氯化钠、防腐剂;所述R2试剂包括缓冲液、脂蛋白多抗胶乳微球、丙氨酸、EDTA、BSA、糖类、防腐剂。实验结果表明,本发明的试剂盒能够有效地消除待测样本中乳糜微粒的干扰作用,实现了乳糜微粒含量较高的标本中脂蛋白的准确测定,且灵敏度高、线性检测范围宽。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示本发明实施例1的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒对乳糜样本和正常样本中脂蛋白含量进行检测的相关性曲线图;
图2示本发明实施例2的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒对乳糜样本和正常样本中脂蛋白含量进行检测的相关性曲线图;
图3示本发明实施例3的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒对乳糜样本和正常样本中脂蛋白含量进行检测的相关性曲线图;
图4示对比例1的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒对乳糜样本和正常样本中脂蛋白含量进行检测的相关性曲线图;
图5示本发明实施例1~3、对比例1的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒对20个正常样本中脂蛋白含量进行检测的相关性曲线图;其中,实施例1的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒的相关性曲线方程为:y=0.9615x+3.6227,R2=0.9939;实施例2的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒的相关性曲线方程为:y=0.9876x+2.8425,R2=0.9994;实施例3试剂盒的与日本生研LP(a)测定试剂盒的相关性曲线方程为:y=0.9831x+4.9843,R2=0.9963;对比例1的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒的相关性曲线方程为:y=0.9752x+6.0873,R2=0.998;
图6示实施例1试剂盒的线性关系图;
图7示实施例2试剂盒的线性关系图;
图8示实施例3试剂盒的线性关系图。
具体实施方式
本发明公开了一种脂蛋白检测试剂盒,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
对所公开的实施例的说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1本发明提供的试剂盒
试剂组成:
实施例2本发明提供的试剂盒
试剂组成:
实施例3本发明提供的试剂盒
试剂组成:
对比例1脂蛋白检测试剂盒
试剂组成:
实施例4本发明试剂盒的使用方法
仪器:迈瑞BS380全自动生化分析仪。
校准品:内部参考品(溯源至日本生研LP(a)测定试剂盒)。
采用本发明的试剂盒进行检测,检测方法及程序如表1所示:
表1
实施例5本发明试剂盒的相关性检测
采用实施例1~3及对比例1的试剂盒,按照实施例4的方法对20例正常标本,20例乳糜血标本进行测试,同时采用日本生研LP(a)测定试剂盒对上述标本进行检测,检测结果如表2所示:
表2
注:LP测定值>300为阳性结果(单位:mg/L)
以乳糜样本1~20和正常样本1~20共40个样本为检测对象进行检测,以日本生研LP(a)测定试剂盒测试结果为横坐标自变量,分别以本发明实施例1~3和对比例1的试剂盒的测试结果为纵坐标应变量,做线性回归曲线,相关性曲线见图1~4。
以正常样本1~20为检测对象进行检测,以日本生研LP(a)测定试剂盒测试结果为横坐标自变量,分别以本发明实施例1~3和对比例1的试剂盒的测试结果为纵坐标应变量,做线性回归曲线,相关性曲线见图5。
由表1和图1~4可知,同时对乳糜标本和正常标本进行检测时,本发明实施例2的试剂盒与日本生研LP(a)测定试剂盒的相关性良好,线性相关系数R2=0.9996,测试结果可以有效作为临床检验,表明本发明实施例2的试剂盒在临床上可以代替进口试剂盒使用。未加乳糜微粒解离剂的对比例1的试剂盒与生研试剂盒相关性极差,线性相关系数R2=0.188,不能作为有效的临床检测结果,加入解离剂的实施例1、2、3相关性皆优于对比例1。
由图5可知对正常样本进行测试时,本发明实施例1~3的试剂盒及对比例1的试剂盒均与日本生研LP(a)测定试剂盒相关性良好,线性相关系数接近1。
实施例6本发明试剂盒的精密度分析
采用实施例1~3、对比例1以及日本生研公司的试剂盒按照实施例4的检测方法,分别选取1例正常标本(正常14号标本)和1例乳糜标本(乳糜10号标本)进行精密度测试,每个样本测试十次,分别计算检测结果的平均值(AVE)、标准差(SD)和变异系数(CV%),结果见表3。
表3本发明试剂盒的精密度
结果显示,采用本发明实施例1~3、对比例1、以及日本生研公司的试剂盒对正常标本中脂蛋白进行测试,均满足免疫类测定项目通常精密度<10%的要求,精密度良好。而对乳糜标本中脂蛋白进行检测时,本发明实施例1~3的试剂盒及日本生研公司试剂盒的测试结果都较好,满足免疫类测定项目通常精密度<10%的要求,未加入乳糜微粒解离剂的对比例的4精密度较差。
实施例7本发明试剂盒的线性范围
选取一例接近该线性范围上限的LP(a)高值标本(标记为H)及一例接近线性范围下限的LP(a)低值标本(标记为L),经日本生研公司试剂盒测试结果分别为981mg/L和31mg/L。分别取H标本和L标本按以下体积比例配制线性样本,1L、4/5L+1/5H、3/5L+2/5H、2/5L+3/5H、1/5L+4/5H、1H,得到浓度依次为31mg/L、221mg/L、411mg/L、601mg/L、791mg/L、981mg/L的六个样本。
a)以配制浓度为自变量(xi);以各实施例试剂盒的测试浓度为因变量(yi)。计算线性回归相关系数(r),(r)应大于0.99。
b)将xi代入线性回归方程,按公式(1)、(2)计算yi的估计值及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差。在(0-200)mg/L范围内的绝对偏差不超过±30mg/L,在(200-1000)mg/L范围内的相对偏差不超过±15%。
相对偏差=[(yi-yi估计值)/yi估计值]×100%……………(1)
绝对偏差=yi-yi估计值………………………………………(2)
市售LP(a)检测试剂盒(胶乳增强免疫比浊法)的线性范围通常在(20~1000)mg/L,要求在(20-200)mg/L范围内的绝对偏差不超过±30mg/L,在(200-1000)mg/L范围内的相对偏差不超过±15%。
采用本发明实施例1的试剂盒进行检测时,线性回归方程为Y=0.983X+0.098,相关系数R2=0.999,在31-221mg/L范围内的绝对偏差不超过±10mg/L,在221-981mg/L范围内的相对偏差不超过±5%。表明本发明实施例1的试剂盒在31~981mg/L内线性回归良好。结果如图6所示,具体数据见表4。
表4实施例1试剂盒的线性范围
采用本发明实施例2的试剂盒进行检测时,线性回归方程为Y=0.999X-8.514,相关系数R2=0.999,在31-221mg/L范围内的绝对偏差不超过±5mg/L,在221-981mg/L范围内的相对偏差不超过±5%。表明本发明试剂盒在31~981mg/L内线性回归良好。结果如图7所示,具体数据见表5。
表5实施例2试剂盒的线性范围
采用本发明实施例3的试剂盒进行检测时,线性回归方程为Y=0.986X-3.213,相关系数R2=0.999,在31-981mg/L范围内的绝对偏差不超过±5mg/L,相对偏差不超过±5%。表明本发明试剂盒在31~981mg/L内线性回归良好。结果如图8所示,具体数据见表6。
表6实施例3试剂盒的线性范围
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,包括R1试剂和R2试剂:
所述R1试剂包括缓冲液、BSA、乳糜微粒解离剂、表面活性剂、氯化钠、防腐剂;
所述R2试剂包括缓冲液、脂蛋白多抗胶乳微球、丙氨酸、EDTA、BSA、糖类、防腐剂。
2.根据权利要求1所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述R1试剂包括25~200mmol/L缓冲液、0.05%~0.2%(w/v)BSA、2%~15%(v/v)乳糜微粒解离剂、0.05%~0.2%(w/v)表面活性剂、0.5%~1.5%(w/v)氯化钠和0.05%~0.15%(w/v)防腐剂。
3.根据权利要求1或2所述的脂蛋白检测试剂盒,所述乳糜微粒解离剂为2-丁酮、丙酮、四氢呋喃、二甲砜或二甲亚砜。
4.根据权利要求1~3任一项所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述R1试剂中缓冲液选自PB缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液或HEPES缓冲液,缓冲液的pH为7.0~9.0。
5.根据权利要求1~4任一项所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述R1试剂中表面活性剂选自Tween 20、Triton X-100或NP 40。
6.根据权利要求1所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述R2试剂包括25~200mmol/L缓冲液、0.1%~0.35%(w/v)脂蛋白多抗胶乳微球、10~50mmol/L丙氨酸、0.5~4mmol/LEDTA、0.05%~0.2%(w/v)BSA、2%~10%(w/v)糖类和0.05%~0.2%(w/v)防腐剂。
7.根据权利要求1~6任一项所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述R2试剂中缓冲液选自PB缓冲液、Tris-HCl缓冲液或硼酸缓冲液,缓冲液的pH为6.5~8.5。
8.根据权利要求1~7任一项所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述脂蛋白多抗胶乳微球为聚苯乙烯微球,其表面官能团为羧基。
9.根据权利要求1~8任一项所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,所述R2试剂中糖类选自蔗糖、海藻糖或乳糖。
10.根据权利要求1~9任一项所述的脂蛋白检测试剂盒,其特征在于,还包括校准品溶液,其中包括脂蛋白、缓冲液、氯化钠、BSA和防腐剂。
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