CN107929306B - 治疗β-ENaC-相关疾病的有机组合物 - Google Patents

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Abstract

本公开内容涉及用于治疗β‑ENaC相关性疾病的方法中的RNAi活性剂，所述疾病例如囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压，使用治疗有效量的针对β‑ENaC的RNAi活性剂。

Description

治疗β-ENaC-相关疾病的有机组合物
本申请是申请日为2011年4月20日、发明名称为“治疗β-ENaC-相关疾病的有机组合物”的中国专利申请201180030997.X(国际申请号PCT/EP2011/056299)的分案申请。
基于35U.S.C.§119(a)-(d)，本申请要求于2010年4月23日提交的美国临时申请61/327,379，和于2010年5月11日提交的美国临时申请61/333,398的优先权，其内容通过引用全文整合到本文中。
发明背景
环境和机体之间的粘膜表面具有多种保护机制。一种防御形式是用液体清洁表面。液体的量反映了在上皮液体分泌(通常反映了与水和阳离子的反荷离子偶联的阴离子分泌作用)和液体吸收(通常反映了与水和反荷阴离子偶联的Na+吸收)之间的平衡。许多粘膜表面疾病是由分泌(太少)和吸收(太多)之间失衡导致液体过少而引起的。一种平衡液体层的方法是减少Na+通道介导的液体吸收。
非电压门控的阿米洛利敏感型钠通道控制许多器官中的液体和电解质的跨上皮运输。许多紧密型上皮的顶膜含有钠通道，其主要特征是与利尿剂阻断剂阿米洛利的高亲和力。这些通道介导钠主动重吸收的第一步，这是对维持体内的水盐体内稳态关键性的步骤。在脊椎动物中，通道控制肾、结肠、肺和汗腺中的钠重吸收；且还在味觉中发挥作用。
Na+和液体吸收的限速步骤是受表皮的钠(Na+)通道(ENaC)介导的。这些钠通道是由3个亚基组成的异聚复合物：α-ENaC、β-ENaC和γ-ENaC。
β-ENaC(也被称为SCNN1B)编码该钠通道的β亚基，该基因中的突变和/或表达改变与若干种疾病相关(和/或与疾病治疗相关)，包括囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压。
对于β-ENaC相关性疾病的治疗存在需要。
发明概述
本公开内容涵盖了针对β-ENaC的RNAi活性剂，其用于治疗β-ENaC相关性疾病，例如囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压。本公开内容还涵盖了治疗具有至少部分由α-ENaC表达介导的病理性状态的人对象的方法，方法包括向对象施用治疗有效量的针对β-ENaC的RNAi活性剂。
本公开内容提供了可用于降低对象中的β-ENaC水平的特定的RNAi活性剂和方法，所述对象例如哺乳动物，如人。本公开内容具体提供了包含β-ENaC的至少15个或更多个连续核苷酸的双链RNAi活性剂。具体而言，本公开内容提供了这样的活性剂，所述活性剂包含15个或更多个连续核苷酸，所述连续核苷酸与例如表1提供的RNAi活性剂的连续核苷酸存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在一个实施方案中，RNAi活性剂可以包含每条链少于30个核苷酸，例如18-23个核苷酸，和/或19-21个核苷酸，和/或例如表1中提供的那些。
双链RNAi活性剂可以在3’和/或5’端的一端或两端具有平端或1、2、3或4个核苷酸(即，1-4nt)的突出端。双链RNAi活性剂还可以任选的包含一个或两个3’帽和/或一个或多个修饰的核苷酸。本文提供的修饰的序列变体包括其余相同，但含有用相应的修饰核苷酸对天然存在的核苷酸的取代的序列。
此外，RNAi活性剂可以仅含有天然存在的核糖核苷酸亚基，或者在一个或多个取代的核苷酸亚基上含有一个或多个对糖、磷酸或碱基的修饰，不论所述亚基包含核糖核苷酸亚基还是脱氧核糖核苷酸亚基。在一个实施方案中，所公开的RNAi活性剂的修饰的变体包括这样的RNAi活性剂，所述RNAi活性剂具有相同的序列，但在一个或多个核苷酸亚基上具有对一个或多个糖、磷酸或碱基的一个或多个修饰。在一个实施方案中，修饰改善RNAi活性剂的功效、稳定性和/或降低RNAi活性剂的免疫原性。本公开内容的一个方面涉及包含至少一个非天然核苷碱基的双链寡核苷酸。在某些实施方案中，非天然的核苷碱基是二氟甲苯基、硝基吲哚基、硝基吡咯基或硝基咪唑基。在特定的实施方案中，非天然的核苷碱基是二氟甲苯基。在某些实施方案中，两条寡核苷酸链中仅一条链含有非天然的核苷碱基。在某些实施方案中，两条寡核苷酸链都含有非天然的核苷碱基。
RNAi活性剂可以任选的与经选择改善一种或多种特征的配体结合，所述特征是例如活性剂(例如，胆固醇或其衍生物)的稳定性、分布和/或细胞摄入。RNAi活性剂可以是分离的或者是本文描述方法使用的药物组合物的一部分。特别的是，所述药物组合物可以配制成用于向肺或鼻道递送，或者配制成用于肠胃外施用的。药物组合物可以任选的包含两种或多种RNAi活性剂，每种活性剂针对β-ENaC mRNA的相同或不同的区段。任选的，药物组合物可以进一步包含用于任何β-ENaC-相关性疾病的任何已知治疗，或与所述β-ENaC-相关性疾病的任何已知治疗联合使用。
本公开内容还提供了用于降低细胞中的β-ENaC mRNA水平的方法，特别是在以ENaC的过表达或活性过高为特征的疾病的情况下。本公开内容还涵盖了治疗具有这样的病理学状态的人对象的方法，所述状态至少是部分由β-ENaC的表达介导的，方法包括向对象施用治疗有效量的RNAi活性剂β-ENaC的步骤。此类方法包括向对象施用一种本公开内容的RNAi活性剂的步骤，如下文进一步所述。本方法利用了选择性降解细胞中的靶RNA的RNA干扰所涉及的细胞机制，并且包括将细胞与本公开内容的RNAi活性剂之一接触的步骤。此类方法可以直接在细胞上实施，或者可以在哺乳动物对象上实施，后者是通过向所述对象施用一种本公开内容的RNAi活性剂/药物组合物。降低细胞中的靶β-ENaC RNA导致所产生的编码β-ENaC蛋白质的量降低。在生物体中，这可以导致上皮电位差降低、流体吸收平衡和粘膜纤毛清除率增加。
本公开内容的方法和组合物(例如方法和β-ENaC RNAi活性剂组合物)可以以本文描述的任何剂量和/或制剂使用，以及用本文描述的任何施用途径使用。
本公开内容的一个或多个实施方案的细节描述在附图和下文的说明中。根据说明书、附图和权利要求，本公开内容的其他特征、目标和优点是显而易见的。
附图简介
图1A-1B描述了RNAi活性剂AD20807、AD20826、
AD20832、AS20834、AD20848和AD20861在体内敲低β-ENaC活性的能力。
图2A-2C描述了β-ENaC RNAi活性剂AD20832对人支气管上皮细胞中的ENaC通道功能活性的体外效应。
发明详述
本公开内容涵盖了针对β-ENaC的RNAi活性剂，所述RNAi活性剂用于治疗β-ENaC-相关性疾病(例如，与β-ENaC中的突变和/或改变的表达、水平和/或活性相关的疾病，和/或通过调控β-ENaC的表达、水平和/或活性可治疗的疾病)，例如囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压。本公开内容还提供了治疗具有这样的病理学状态的人对象的方法，所述状态至少是部分由β-ENaC的表达介导的，方法包括向对象施用治疗有效量的RNAi活性剂β-ENaC的步骤。
本公开内容的多种实施方案包括：
包括本文描述的反义链的RNAi活性剂。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，所述至少15个连续的核苷酸与例如表1提供的β-ENaC特异性RNAi活性剂的反义链(或者任何β-ENaC特异性重叠RNAi活性剂的集合)存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与本文提供的任何序列的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含第一链和第二链，其中第一链包含与本文提供的任何RNAi活性剂的第一链的序列存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸，第二链包含与本文提供的任何RNAi活性剂的第二链的序列存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
特定的双链体包括以下的，其中每种双链体包含一组SEQ ID NO，其中第一个SEQID NO对应于第一链(例如，正义链)，而第二个SEQ ID NO对应于第二链(例如，反义链)：AD-20805(SEQ ID NO.111和112)；AD-20806(SEQ ID NO.113和114)；AD-20807(SEQ ID NO.115和116)；AD-20808(SEQ ID NO.117和118)；AD-20809(SEQ ID NO.119和120)；AD-20810(SEQID NO.121和122)；AD-20811(SEQ ID NO.123和124)；AD-20812(SEQ ID NO.125和126)；AD-20813(SEQ ID NO.127和128)；AD-20814(SEQ ID NO.129和130)；AD-20815(SEQ ID NO.131和132)；AD-20816(SEQ ID NO.133和134)；AD-20817(SEQ ID NO.135和136)；AD-20818(SEQID NO.137和138)；AD-20819(SEQ ID NO.139和140)；AD-20820(SEQ ID NO.141和142)；AD-20821(SEQ ID NO.143和144)；AD-20822(SEQ ID NO.145和146)；AD-20823(SEQ ID NO.147和148)；AD-20824(SEQ ID NO.149和150)；AD-20825(SEQ ID NO.151和152)；AD-20826(SEQID NO.153和154)；AD-20827(SEQ ID NO.155和156)；AD-20828(SEQ ID NO.157和158)；AD-20829(SEQ ID NO.159和160)；AD-20830(SEQ ID NO.161和162)；AD-20831(SEQ ID NO.163和164)；AD-20832(SEQ ID NO.165和166)；AD-20833(SEQ ID NO.167和168)；AD-20834(SEQID NO.169和170)；AD-20835(SEQ ID NO.171和172)；AD-20836(SEQ ID NO.173和174)；AD-20837(SEQ ID NO.175和176)；AD-20838(SEQ ID NO.177和178)；AD-20839(SEQ ID NO.179和180)；AD-20840(SEQ ID NO.181和182)；AD-20841(SEQ ID NO.183和184)；AD-20842(SEQID NO.185和186)；AD-20843(SEQ ID NO.187和188)；AD-20844(SEQ ID NO.189和190)；AD-20845(SEQ ID NO.191和192)；AD-20846(SEQ ID NO.193和194)；AD-20847(SEQ ID NO.195和196)；AD-20848(SEQ ID NO.197和198)；AD-20849(SEQ ID NO.199和200)；AD-20850(SEQID NO.201和202)；AD-20851(SEQ ID NO.203和204)；AD-20852(SEQ ID NO.205和206)；AD-20861(SEQ ID NO.207和208)；AD-20862(SEQ ID NO.209和210)；AD-20863(SEQ ID NO.211和212)；AD-20864(SEQ ID NO.213和214)；AD-20865(SEQ ID NO.215和216)；AD-20866(SEQID NO.217和218)；和AD-20867(SEQ ID NO.219和220)，及其修饰的变体。
一个实施方案提供了特定双链体的修饰的变体，其中每种双链体包括一组SEQ IDNO，其中第一个SEQ ID NO对应于第一链(例如，正义链)，而第二个SEQ ID NO对应于第二链(例如，反义链)，选自：AD-20805(SEQ ID NO.1和2)；AD-20806(SEQ ID NO.3和4)；AD-20807(SEQ ID NO.5和6)；AD-20808(SEQ ID NO.7和8)；AD-20809(SEQ ID NO.9和10)；AD-20810(SEQ ID NO.11和12)；AD-20811(SEQ ID NO.13和14)；AD-20812(SEQ ID NO.15和16)；AD-20813(SEQ ID NO.17和18)；AD-20814(SEQ ID NO.19和20)；AD-20815(SEQ ID NO.21和22)；AD-20816(SEQ ID NO.23和24)；AD-20817(SEQ ID NO.25和26)；AD-20818(SEQ IDNO.27和28)；AD-20819(SEQ ID NO.29和30)；AD-20820(SEQ ID NO.31和32)；AD-20821(SEQID NO.33和34)；AD-20822(SEQ ID NO.35和36)；AD-20823(SEQ ID NO.37和38)；AD-20824(SEQ ID NO.39和40)；AD-20825(SEQ ID NO.41和42)；AD-20826(SEQ ID NO.43和44)；AD-20827(SEQ ID NO.45和46)；AD-20828(SEQ ID NO.47和48)；AD-20829(SEQ ID NO.49和50)；AD-20830(SEQ ID NO.51和52)；AD-20831(SEQ ID NO.53和54)；AD-20832(SEQ IDNO.55和56)；AD-20833(SEQ ID NO.57和58)；AD-20834(SEQ ID NO.59和60)；AD-20835(SEQID NO.61和62)；AD-20836(SEQ ID NO.63和64)；AD-20837(SEQ ID NO.65和66)；AD-20838(SEQ ID NO.67和68)；AD-20839(SEQ ID NO.69和70)；AD-20840(SEQ ID NO.71和72)；AD-20841(SEQ ID NO.73和74)；AD-20842(SEQ ID NO.75和76)；AD-20843(SEQ ID NO.77和78)；AD-20844(SEQ ID NO.79和80)；AD-20845(SEQ ID NO.81和82)；AD-20846(SEQ IDNO.83和84)；AD-20847(SEQ ID NO.85和86)；AD-20848(SEQ ID NO.87和88)；AD-20849(SEQID NO.89和90)；AD-20850(SEQ ID NO.91和92)；AD-20851(SEQ ID NO.93和94)；AD-20852(SEQ ID NO.95和96)；AD-20861(SEQ ID NO.97和98)；AD-20862(SEQ ID NO.99和100)；AD-20863(SEQ ID NO.101和102)；AD-20864(SEQ ID NO.103和104)；AD-20865(SEQ ID NO.105和106)；AD-20866(SEQ ID NO.107和108)；和AD-20867(SEQ ID NO.109和110)。
特定组合物
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与针对β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异，其中所述RNAi活性剂选自本文表格(例如表1)中提供的任何序列(或与序列集合重叠)。在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与针对β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异，其中所述RNAi活性剂选自本文表格(例如表1)中提供的任何序列(或与序列集合重叠)。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与本文提供的任何序列的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含第一链和第二链，其中第一链包含至少15个连续的核苷酸，其与本文提供的任何RNAi活性剂的第一链的序列存在0、1、2或3个核苷酸的差异，第二链包含至少15个连续的核苷酸，其与本文提供的任何RNAi活性剂的第二链的序列存在0、1、2或3个核苷酸的差异。特定的双链体包括上文提供的和列举在表1中的任何一个或多个的特定双链体。上述各种组合物的其他的修饰序列(例如，包含一个或多个修饰碱基的序列)也被视为本公开内容的一部分。
下表A1提供了β-ENaC的多种RNAi活性剂的未修饰的和示例性的修饰的正义和反义链的序列的SEQ ID NO。各种基本组合物是由表1详细提供的SEQ ID NO所代表的具体序列，其部分提供在表2中。
表A1.针对β-ENaC的RNAi活性剂的第一链和第二链(例如，正义链(“SS”)和反义链(“AS”)链)的SEQ ID NO
Figure BDA0001485032840000081
Figure BDA0001485032840000091
Figure BDA0001485032840000101
Figure BDA0001485032840000111
Figure BDA0001485032840000121
例如，在表A1中，示例性的RNAi活性剂AD-20805的修饰序列由SEQ ID NO：1(正义链)和SEQ ID NO：2(反义链)表示。AD-20805的未修饰的序列由SEQ ID NO：111(正义链)和SEQ ID NO：112(反义链)表示。因此，表A1针对多种针对β-ENaC的RNAi活性剂的每一种呈现了未修饰序列以及至少一种示例性的修饰序列的第一链和第二链的SEQ ID NO编号。
包含本文描述的反义链的RNAi活性剂
在一个特定的具体实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与针对β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异，其中所述RNAi活性剂选自本文提供的以及例如表1所列出的特定双链体中的那些反义链。
该实施方案的多种具体实施方案描述如下。
在一个实施方案中，组合物还包含β-ENaC的第二种RNAi活性剂。在多种实施方案中，第二种RNAi活性剂是与第一种物理上分离的，或者两者是物理上连接的(例如，共价连接的或者缀合的)。
在一个实施方案中，反义链的长度是约30或更短。
在一个实施方案中，正义链和反义链形成的双链体区域的长度是约15至约30对核苷酸对。
在一个实施方案中，反义链的长度是约15至约36nt，包括长度约18至约30nt，进一步包括长度约19至约23nt。在一个实施方案中，反义链具有选自至少约15nt、约16nt、约17nt、约18nt、约19nt、约20nt、约21nt、约22nt、约23nt、约24nt、约25nt、约26nt、约27nt、约28nt、约29nt和约30nt的长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含导致RNAi活性剂在生物学样品或环境中具有增加的稳定性的修饰，所述生物学样品或环境例如血清或肠道清洗液。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含至少一种糖主链修饰(例如硫代磷酸键(phosphorothioate linkage))和/或至少一个2’-修饰的核苷酸。在一个实施方案中，所有的嘧啶是2’O-甲基-修饰的核苷酸。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含：至少一个5’-尿苷-腺嘌呤-3’(5’-ua-3’)二核苷酸，其中尿苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-尿苷-鸟嘌呤-3’(5’-ug-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-胞苷-腺嘌呤-3’(5’-ca-3’)二核苷酸，其中5’-胞苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-尿苷-尿苷-3’(5’-uu-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含选自下组的2’-修饰，所述组由2'-脱氧、2'-脱氧-2’-氟代、2’-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)构成。在一种实施方式中，所有嘧啶是2’O-甲基-修饰的核苷酸。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含平端。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含具有1至4个未配对的核苷酸的突出端。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含位于RNAi活性剂反义链3’-端的突出端。
在一种实施方式中，RNAi活性剂与一种或多种诊断性化合物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分(moiety)、天然或非常见核苷碱基(nucleobase)、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基(sarsasapogenin)、无羁萜、无羁萜-3β-醇-衍生的石胆酸
(epifriedelanol-derivatized lithocholic acid)、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖(pullulan)、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体(oligolactate 15-mer)、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子(polycationic)、肽、聚胺、肽模拟物和/或转铁蛋白连接。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约60％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约70％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约80％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约90％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi具有不超过约0.1nM的EC50。
在一个实施方案中，RNAi具有不超过约0.01nM的EC50。
在一个实施方案中，RNAi具有不超过约0.001nM的EC50。
包含本文描述的第一和第二链的RNAi活性剂
在一个特定的具体实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含第一和第二链，其中第一链和第二链包含至少15个连续的核苷酸，各自与针对β-ENaC的RNAi活性剂的分别的第一和第二链存在0、1、2或3个核苷酸的差异，其中所述RNAi活性剂选自本文提供的以及例如表1所列出的特定双链体。
该实施方案的多种具体实施方案描述如下。
在一个实施方案中，组合物还包含β-ENaC的第二种RNAi活性剂。在多种实施方案中，第二种RNAi活性剂是与第一种物理上分离的，或者两者是物理上连接的(例如，共价连接的或者缀合的)。
在一个实施方案中，反义链的长度是约30或更短。
在一个实施方案中，正义链和反义链形成的双链体区域的长度是约15至约30nt对。
在一个实施方案中，反义链的长度是约15至约36nt，包括长度约18至约23nt，并且包括长度约19至约23nt。在一个实施方案中，反义链具有选自至少约15nt、约16nt、约17nt、约18nt、约19nt、约20nt、约21nt、约22nt、约23nt、约24nt、约25nt、约26nt、约27nt、约28nt、约29nt和约30nt的长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含导致RNAi活性剂在生物学样品或环境中具有增加的稳定性的修饰，所述生物学样品或环境例如血清或肠道清洗液。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含至少一种糖主链修饰(例如硫代磷酸键(phosphorothioate linkage))和/或至少一个2’-修饰的核苷酸。在一个实施方案中，所有的嘧啶是2’O-甲基-修饰的核苷酸。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含：至少一个5’-尿苷-腺嘌呤-3’(5’-ua-3’)二核苷酸，其中尿苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-尿苷-鸟嘌呤-3’(5’-ug-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-胞苷-腺嘌呤-3’(5’-ca-3’)二核苷酸，其中5’-胞苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-尿苷-尿苷-3’(5’-uu-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含选自下组的2’-修饰，所述组由2'-脱氧、2'-脱氧-2’-氟代、2’-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)构成。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含平端。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含具有1至4个未配对的核苷酸的突出端。
在一种实施方式中，RNAi活性剂包含位于RNAi活性剂反义链3’-端的突出端。
在一种实施方式中，RNAi活性剂与一种或多种诊断性化合物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分(moiety)、天然或非常见核苷碱基(nucleobase)、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基(sarsasapogenin)、无羁萜、无羁萜-3β-醇-衍生的石胆酸(epifriedelanol-derivatized lithocholic acid)、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖(pullulan)、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体(oligo lactate 15-mer)、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子(polycationic)、肽、聚胺、肽模拟物和/或转铁蛋白连接。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约60％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约70％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约80％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约90％的β-ENaC基因表达。
在一个实施方案中，RNAi具有不超过约0.1nM的EC50。
在一个实施方案中，RNAi具有不超过约0.01nM的EC50。
在一个实施方案中，RNAi具有不超过约0.001nM的EC50。
使用本文描述的RNAi活性剂的治疗方法
在一个特定的具体实施方案中，本公开内容涉及治疗个体的β-ENaC相关性疾病的方法，包括步骤：向个体施用治疗有效量的包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂至少包含反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与选自本文提供以及列举在例如表1中的特定双链体的β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个实施方案中，本公开内容涉及此类方法，其中包含RNAi活性剂的组合物还包含正义链，其中正义链包含至少15个连续的核苷酸，其与选自本文提供并列举在例如表1中的特定双链体的β-ENaC的RNAi活性剂的正义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。
该实施方案的多种特定的具体实施方案描述如下。
在一个实施方案中，β-ENaC-相关性疾病是囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压。
在一个实施方案中，β-ENaC-相关性疾病是囊性纤维化。
在一个实施方案中，方法还包括施用其他治疗。在一个实施方案中，其他治疗是治疗有效量的组合物。
在一个实施方案中，其他治疗是方法(或程序)。
在一个实施方案中，其他治疗和RNAi活性剂可以以任何顺序施用，或者可以同时施用。
在一个实施方案中，方法还包括施用囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压的其他治疗的步骤。
在一个实施方案中，方法还包括施用其他治疗或疗法的步骤，所述治疗或疗法选自ENaC的其他拮抗剂、留钾利尿药、阿米洛利、氨苯蝶啶(triamterene)、调节饮食盐分摄入、抗生素、DNA酶疗法、albutrol、N-乙酰半胱氨酸、呼吸疗法、冲击疗法(percussivetherapy)和需氧运动。
在一个实施方案中，组合物包含β-ENaC的第二种RNAi活性剂。在多种实施方案中，第二种RNAi活性剂是与第一种物理上分离的，或者两者是物理上连接的(例如，共价连接的或者缀合的)。
在一个实施方案中，方法还包括施用其他RNAi活性剂的步骤，所述RNAi活性剂包含至少15个连续的核苷酸，其与选自本文提供以及列举在例如表1中的特定双链体中的β-ENaC RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。
使用本文描述的RNAi活性剂抑制β-ENaC表达的方法
在一个特定的具体实施方案中，本公开内容涉及抑制个体中的β-ENaC基因表达的方法，包括步骤：向个体施用治疗有效量的包含本公开内容的RNAi活性剂的组合物。在一个实施方案中，RNAi活性剂至少包含反义链，和/或包含正义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与选自本文提供的并且例如列举在表1中的特定双链体中的β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。
本发明的这一发明的多种实施方案描述如下。
在一个实施方案中，个体患有或易感β-ENaC相关性疾病。
在一个实施方案中，β-ENaC-相关性疾病是囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压。
在一个实施方案中，β-ENaC-相关性疾病是囊性纤维化。
在一个实施方案中，方法还包括施用其他的治疗。在一个实施方案中，其他的治疗是治疗有效量的组合物。
在一个实施方案中，其他的治疗是方法(或程序)。
在一个实施方案中，其他的治疗和RNAi活性剂可以以任何顺序施用，或者可以同时施用。
在一个实施方案中，方法还包括施用囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压的其他治疗的步骤。
在一个实施方案中，方法还包括施用其他治疗或疗法的步骤，所述治疗或疗法选自ENaC的其他拮抗剂、留钾利尿药、阿米洛利、氨苯蝶啶、调节饮食盐分摄入、抗生素、DNA酶疗法、albutrol、N-乙酰半胱氨酸、呼吸疗法、冲击疗法和需氧运动。
在一个实施方案中，组合物包含β-ENaC的第二种RNAi活性剂。在多种实施方案中，第二种RNAi活性剂是与第一种物理上分离的，或者两者是物理上连接的(例如，共价连接的或者缀合的)。
在一个实施方案中，方法还包括施用其他RNAi活性剂的步骤，所述RNAi活性剂包含至少15个连续的核苷酸，其与选自本文提供以及列举在例如表1中的特定双链体中的β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的药物制剂
在一个特定的具体实施方案中，本公开内容涉及包含本公开内容的RNAi活性剂的组合物。在一个实施方案中，RNAi活性剂至少包含反义链，和/或包含正义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与选自本文提供以及列举在例如表1中的那些特定双链体的针对β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异，其中所述组合物是药学有效的制剂。
在一个实施方案中，本公开内容涉及RNAi活性剂在生产用于治疗β-ENaC-相关性疾病的药物中的用途，其中RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含至少15个连续的核苷酸，其与选自本文提供以及列举在例如表1中的那些特定双链体的针对β-ENaC的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。
ENaC
“ENaC”意指上皮钠通道，一种由三个不同但同源的亚基(α、β和γ)构成的膜蛋白。
ENaC存在于远侧肾单位(皮质和髓质的集合小管)和远侧结肠的上皮细胞的顶膜中、呼吸道中，以及若干腺体的排泄管中。ENaC还在胎盘、脑和膀胱中表达。与位于相同细胞的基底外侧膜中的Na+/K+-ATP酶一起，ENaC提供了Na+从这些器官的管腔进入上皮细胞中的可控进入通路，并对Na+从外基质通过上皮细胞进入胞外液和血液的主动的、方向性运输负责。ENaC位于朝向管腔的顶膜上，允许钠从管腔移动到上皮细胞中。然后，通过ENaC重吸收的钠由Na+/K+-ATP酶从上皮细胞排出回到血液中。ENaC对钠的重吸收伴随了水的渗透摄入，以维持恒定的胞外Na+浓度。这改变了血量，因而影响血压。因此，ENaC在电解质内稳态和控制血量和血压中发挥重要的作用。参见例如，Saxena等人，1998Biochem.Biophys.Res.Comm.252：208-213。
ENaC在表达其的多种器官中发挥不同的功能作用。在肾(集合小管)中，通过ENaC调控的Na+重吸收提供了尿Na+排泄调控的主要机制，因而允许在醛固酮激素控制的条件下精细控制整个生物体的Na+平衡。通过对顶膜电势的去极化效应，Na+通道还提供了管K+分泌的驱动力。
ENaC的特定抑制剂促进尿Na+分泌，和抑制K+分泌；因此使用这些药物(包括阿米洛利和氨苯蝶啶)作为留K+利尿药。ENaC在远端结肠具有相似的功能作用，阻止粪便中过多的Na+丢失。在呼吸道中，重要的作用是在出生时填满呼吸道的液体的重吸收，促进从液体分泌(出生前)至液体重吸收(出生后)的转变。
关于囊性纤维化的跨膜电导调控剂，其还参与呼吸道的液体平衡的精细调节，所述调节维持粘液清除必需的薄粘膜液体膜。在唾液腺和汗腺的分泌导管中，ENaC的活性倾向于减少腔内Na+浓度，允许分泌较低盐的唾液，和阻止Na+在汗液中的大量丢失。参见例如，Hummler等人，1999Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.276：567-571及其中引用的参考文献。
ENaC的序列和/或表达中的改变和突变可以导致ENaC的过表达或活性过高。提供该公开内容的RNAi活性剂通过降低β-ENaC的水平，恢复对受调控的Na+重吸收的平衡。
β-ENaC
“β-ENaC”意指阿米洛利敏感型钠通道β亚基的基因或蛋白质(或任何编码该蛋白质的核酸)，还被多样的命名为：非电压门控的钠通道1，β；SCNN1B；bENaC；ENaCb；ENaC-β；SCNEB或β-ENaC。其他的名称包括：OMIM：600760；MGI：104696；HomoloGene：284；和GeneCards：SCNN1B。其他信息可见于：人：Entrez 6338；Ensembl ENSG00000168447；UniProt P51168；RefSeq(mRNA)NM_000336；RefSeq(蛋白质)NP_000327；位置(UCSC)Chr16：23.22-23.3Mb。小鼠：Entrez 20277；Ensembl ENSMUSG00000030873；UniProt Q3TP51；RefSeq(mRNA)NM_011325RefSeq(蛋白质)NP_035455；位置(UCSC)Chr 7：121.66-121.71Mb。
Saxena等人，1998Biochem.Biophys.Res.Comm.252：208-213中提供了人β-ENaC的氨基酸序列。
已描述了β-ENaC的功能结构域。所述蛋白质具有胞外的N-端结构域(氨基酸(“aa”)1至50)、第一跨膜结构域(aa 51至71)、胞外环(aa 72至533)、第二跨膜结构域(aa534至553)和C-端胞内结构域(aa 554至640)。
C-端胞内结构域含有2个区域，所述区域中的突变涉及李德尔综合征和其他疾病：氨基酸564至595的区域和“PY”基序(具有氨基酸共同序列PPXY，位于aa(氨基酸)615至618]。参见例如，Saxena等人，1998。
本公开内容的β-ENaC RNAi活性剂可以与对应于β-ENaC的一个或多个特定功能结构域的mRNA的部分相互作用。在多种实施方案中，本文中的RNAi活性剂特异性结合β-ENaCmRNA于对应于功能结构域的序列中，例如在N-端胞外结构域、第一跨膜结构域、胞外环、第二跨膜结构域或C-端胞内结构域中，或更特异的，结合在氨基酸564至595的区域或PY基序(氨基酸615至618)中。
在多个实施方案中，本公开内容的RNAi活性剂结合5’或3’UTR(即，非翻译区)。
在多种实施方案中，本公开内容的RNAi活性剂结合β-ENaC mRNA，而不在对应于特定功能结构域的序列中，例如不结合在N-端胞外结构域、第一跨膜结构域、胞外环、第二跨膜结构域或C-端胞内结构域中，或更特异的，不结合在氨基酸564至595的区域或PY基序(氨基酸615至618)中。
在本文的实施方案中，RNAi活性剂与β-ENaC mRNA的特定区域的结合导致β-ENaC的降低的表达、水平和/或活性。
可以直接测量RNAi活性剂在降低β-ENaC水平中的功效，例如通过测量β-ENaCmRNA丰度的水平，或蛋白质本身的水平。可选的，可以通过测量任何一种或多种已知β-ENaC活性的水平，或者通过测量β-ENaC的下游通路组分的活性改变，间接的测量RNAi的功效。
蛋白质的主要活性是与α-ENaC和γ-ENaC，可能有时与δ-ENaC形成钠通道ENaC。β-ENaC、γ-ENaC和δ-ENaC也可以形成可见于胰腺、睾丸和卵巢中的特定类型的通道。β-ENaC还表现出与WWP2和NEDD4相互作用。参见例如，McDonald等人(2002),Am.J.Physiol.RenalPhysiol.283(3):F431-6；Harvey等人，2001.J.Biol.Chem.276(11)：8597–601；Farr等人(2000)。Biochem.J.345Pt 3：503–9.可以测量β-EnaC的活性，例如，通过其与其他生物学组分结合和形成功能单元的能力。还可以通过测量粘膜表面脂类的量，和通过表达β-ENaC的组织的组织学研究，间接的测量RNAi活性剂的功效。
多种物种中的β-EnaC序列
可以设计β-ENaC特异性的RNAi活性剂，使其序列完全匹配与人β-ENaC基因和测试动物中的同源基因对应的mRNA的序列。因此，可以在测试动物(例如，大鼠、小鼠、食蟹猴等)和人中使用完全相同的RNAi活性剂。已经确定了许多物种中的多种ENaC基因的序列，包括人、小鼠、大鼠、牛和鸡，尤其是如Garty等人，1997Physiol.Rev.77：359-396；和Ahn等人，1999Am.J.Physiol.277:F121-F129中描述的。
已经确定了食蟹猴(Macaca fascicularis，或“cyno”)中的β-ENaC序列。
cynoβ-ENaC mRNA(SEQ ID NO：221)与人β-ENaC mRNA(SEQ ID NO：222)序列的比对显示如下。
Figure BDA0001485032840000251
Figure BDA0001485032840000261
Figure BDA0001485032840000271
Figure BDA0001485032840000281
食蟹猴和人序列的起始密码子(ATG)和终止密码子(TAA)是下划线的。用星号(*)标记在人和食蟹猴序列之间匹配的核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容的β-ENaC RNAi活性剂包含在人、大鼠和食蟹猴β-ENaC mRNA中相同的序列。该序列同一性有利于在人测试前的动物测试。在另一个实施方案中，β-ENaC RNAi活性剂包含在人、小鼠和食蟹猴β-ENaC mRNA中相同的序列。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的其他实施方案
在一个实施方案中，β-ENaC RNAi活性剂包含不与任何其他mRNA或基因匹配的序列。在一个实施方案中，β-ENaC RNAi活性剂包含在至少0、1、2或3个核苷酸不同于所有其他已知的非β-ENaC mRNA或基因的序列。
在一个实施方案中，将本公开内容的β-ENaC RNAi活性剂施用给需要它的患者(例如，患囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压的患者)。
患者还可以被施用一种以上的β-ENaC特异性RNAi活性剂。在一个实施方案中，本公开内容的β-ENaC RNAi活性剂可以任选的与一种或多种其他的适合该疾病的药剂一起施用。在一个实施方案中，本公开内容的β-ENaC RNAi活性剂可以任选的与任何其他恰当的额外治疗一起施用，其中额外的治疗可以是组合物或方法。
在囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压的情况下，RNAi活性剂和其他的疾病治疗可以以任何顺序同时或顺序的施用，或者以一次或多次的剂量随时间施用。
定义
出于便利，下文提供了说明书、实施例和所附权利要求中使用的某些术语和词组的含义。如果术语的用法在本说明书的其他部分与该章节中提供的定义之间存在明显矛盾，则以本章节中的定义为先。
RNAi活性剂
在一个实施方案中，本公开内容涉及至少包含与β-ENaC核酸(或其部分)互补的反义核酸序列的β-ENaC RNAi活性剂或其他组合物，或者涉及编码siRNA的重组表达载体或包含反义核酸的组合物，其中所述反义核酸可以作为下文定义的RNAi发挥作用。如本文中使用的，“反义”核酸包含与编码β-ENaC蛋白的“正义“核酸互补的核苷酸序列(例如，与双链DNA的编码链互补、与mRNA互补或与β-ENaC基因或核酸的编码链互补)。
如本文中使用的，术语“(针对)β-ENaC的RNAi活性剂”、
“β-ENaC特异性的RNAi活性剂”、“β-ENaC的iRNA活性剂”、“β-ENaC的siRNA”、“β-ENaC siRNA”等指siRNA(短抑制性RNA)、shRNA(短或小发夹RNA)、iRNA(干扰RNA)活性剂、RNAi(RNA干扰)活性剂、dsRNA(双链RNA)、微小RNA等，和指特异性靶向、特异性针对和/或结合β-ENaC mRNA的组合物。如本文中使用的，术语“反义核酸”或“包含反义核酸的组合物”等广义的涵盖了包含至少一条与其靶反义的核酸链的任何组合物；这包括但不限于任何siRNA、shRNA、iRHA、dsRNA、微小RNA、反义寡核苷酸和任何包含反义核酸的其他组合物。如本文中使用的，术语“iRNA”和“RNAi”指含有RNA(或其衍生物)的活性剂，所述活性剂通过RNA诱导的沉默复合体(RISC)通路，介导另一种RNA转录物的靶向切割。在一个实施方案中，RNAi活性剂是激活RISC复合体/通路的寡核苷酸组合物。在另一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链序列(反义寡核苷酸)。
本公开内容的RNAi活性剂靶向(例如，结合、退火等)β-ENaC mRNA。使用β-ENaC特异性的RNAi活性剂导致β-ENaC活性、水平和/或表达的减少，例如“敲低(knock-down)”或“敲除(knock-out)”靶基因或靶序列。特别是在一个实施方案中，在疾病状态的特征是β-ENaC过表达或活性过高的情况下，施用针对β-ENaC的RNAi活性剂敲低了β-ENaC靶至足以恢复正常的β-ENaC活性水平和/或正常的Na+重吸收水平。
在一个实施方案中，RNAi包含单链(例如本文所述的shRNA)。
在多种实施方案中，一条或两条链是带切口的。
在一个实施方案中，单链RNAi活性剂寡核苷酸或多核苷酸可以包含正义和/或反义链。参见例如，Sioud 2005J.Mol.Biol.348:1079-1090，及其中引用的参考文献。因此，本公开内容涵盖了具有这样的单链的RNAi活性剂，所述单链包含本文所述RNAi活性剂的正义或反义链。
特别用于本公开内容的siRNA包括可以特异性结合β-ENaC mRNA区域的，和具有一个或多个下列性质的那些：结合在β-ENaC的编码区段中；结合在或靠近5’非翻译区和编码区段起始的连接处；结合在或靠近mRNA的翻译起始位点；结合在、覆盖或靠近外显子和内含子的连接处；几乎不或不结合其他基因的mRNA或转录物(几乎没有或没有“脱靶效应”)；在不是双链或茎的一个或多个区域内或附近结合β-ENaC mRNA，例如，在环或单链部分；几乎不或不引发免疫原性；结合在在多种动物物种(包括人、小鼠、大鼠、食蟹猴等)之间保守的β-ENaC mRNA序列的区段中，因为保守序列的存在有利于使用多种实验动物测试；结合mRNA的双链区域；结合富含AT的区域(例如，至少约50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60％AT丰富的)；和/或缺少已知或怀疑减少siRNA活性的特定序列，例如，在5’端存在GG序列，其可能减少siRNA双链部分的分离。在一个实施方案中，β-ENaC特异性的RNAi活性剂可以是具有任何一种或多种这些性质的双链RNA。
如本文中使用的，术语“双链RNA”或“dsRNA”指包含第一链和第二链的RNAi活性剂；例如，包含具有杂交双链体区域的RNA分子或分子复合体的组合物(即，第一链和第二链的核苷酸碱基配对的区域)，所述区域包含两条反向平行和基本互补的核酸链，被称为相对于靶RNA具有“正义”和“反义”方向。涉及mRNA靶时，反义链也被称为“指导”链，正义链也被称为“过客”链。过客链可以包括至少一个或多个下列性质：相比其他链的一个或多个额外核苷酸(例如，凸起或1nt环)、相比其他链的缺口、空位等。在多个实施方案中，RNAi活性剂包含第一链和第二链。在多种实施方案中，第一链是正义链，第二链是反义链。在其他实施方案中，第一链是反正义链，第二链是正义链。
双链体区域可以是允许通过RISC通路特异性降解所需靶RNA的任何长度，但通常范围是长度从9至36对碱基对(“bp”)，例如，长度15-30bp。考虑到在9和36bp之间的双链体，双链体可以是该范围内的任何长度，例如9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36bp，及其之间的任何子范围，包括但不限于15-30bp、15-26bp、15-23bp、15-22bp、15-21bp、15-20bp、15-19bp、15-18bp、15-17bp、18-30bp、18-26bp、18-23bp、18-22bp、18-21bp、18-20bp、19-30bp、19-26bp、19-23bp、19-22bp、19-21bp、19-20bp、19bp、20-30bp、20-26bp、20-25bp、20-24bp、20-23bp、20-22bp、20-21bp、20碱基对、21-30bp、21-26bp、21-25bp、21-24bp、21-23bp、21-22bp、21bp、22bp或23bp。通过Dicer和类似酶加工，在细胞内产生的dsRNA的长度通常在约19至约22bp的范围内。dsRNA的双链体区域的一条链包含与靶RNA的区域基本互补的序列。形成双链体结构的两条链可以来自具有至少一个自身互补的双链体区域的单个RNA分子，或者可以自两个或多个杂交形成双链体的分离的RNA分子形成。当双链体区域是由单个分子的2个自身互补区域形成时，分子可以具有被单链核苷酸(在本文中称为“发夹环”，例如，可见于shRNA结构中的)隔开的双链体区域，所述单链核苷酸位于形成双链体结构的一条链的3’端和相应另一条链的5’端之间。发夹环可以包含至少一个未成对的核苷酸；在一些实施方案中，发夹环可以包含至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少20个、至少23个或更多个未配对的核苷酸。当2条基本互补的dsRNA链包含在分离的RNA分子中时，这些分子不必但可以是共价连接的。当两条链是通过发夹环共价连接之时，所述结构在本文和本领域中一般被称为“shRNA”。当两条链是通过发夹环以外的方式共价连接之时，所述连接结构被称为“接头”。
RNA干扰
RNA干扰(RNAi)是转录后的靶向基因沉默技术，其使用双链RNA(dsRNA)以降解含有与dsRNA相同的序列的信使RNA(mRNA)。RNAi的过程在核糖核酸酶III(Dicer)将较长的dsRNA切割为被称为siRNA的较短片段时发生。siRNA(小干扰RNA)通常大约为21至23个核苷酸长，并且包含大约19个碱基对双链体。较小的RNA区段然后介导靶mRNA的降解。Dicer还已被牵连于从翻译控制所涉及的保守结构的前体RNA切割21和22个核苷酸的小时序RNA(stRNA)。Hutvagner等人，2001,Science,293,834。RNAi应答还可有下述特征：内切核酸酶复合体(常被称为RNA诱导的沉默复合体(RISC))，其介导与siRNA的反义链互补的单链mRNA的切割。对靶RNA的切割发生在与siRNA双链体的反义链互补的区域中段。
在一个方面，RNA干扰活性剂包含与靶RNA序列相互作用以指导对靶RNA的切割的单链RNA。在不希望被理论束缚的情况下，通过已知为Dicer的III型内切核酸酶将被引入植物和无脊椎动物细胞的长双链RNA破碎成siRNA(Sharp等人,Genes Dev.2001,15:485)。Dicer，即核糖核酸酶III样的酶，将dsRNA加工为具有特征性的两碱基3’突出端的19-23个碱基对的短干扰RNA(Bernstein等人,(2001)Nature 409:363)。siRNA然后被并入RNA诱导的沉默复合体(RISC)，其中一个或多个蜗牛酶解开siRNA双链体，使一条目前未配对的siRNA链能够作为“指导”链发挥作用，指导靶识别(Nykanen等人(2001)Cell 107:309)。基于反义指导链与恰当的靶mRNA的结合，RISC中的一种或多种内切核酸酶切割靶，导致沉默(Elbashir等人(2001)Genes Dev.15:188)。因此，在一个方面，本公开内容涉及促进RISC复合体形成以产生靶基因沉默效应的单链RNA。
还在多个系统中研究了RNA干扰。在果蝇胚裂解物中的工作(Elbashir等人，2001EMBO J.20：6877和Tuschl等人，国际PCT公开号WO 01/75164)揭示了对于在多种系统(尤其包括哺乳动物)中介导有效的RNAi活性而言关键性的siRNA长度、结构、化学组成和序列的某些要求。这些研究显示，当含有3'-端二核苷酸突出端时，21个核苷酸的siRNA双链体是活性最高的。耐受用2'-脱氧核苷酸(2'-H)取代3'-端siRNA突出端核苷酸。此外，siRNA活性通常需要siRNA双链体的靶互补链上的5'-磷酸。对于治疗应用最重要的是，短于大约50bp的siRNA双链体在哺乳动物细胞中不激活干扰素反应。参见例如，Tuschl等人，WO 01/752164。
因此，本文描述的dsRNA分子(RNAi活性剂)可用于β-ENaC的RNA干扰。
RNAi活性剂的特征：正义链、反义链和(任选的)突出端
在多个实施方案中，RNAi活性剂包含第一链和第二链，例如，正义链和反义链以及任选的，在双链体的一个或两个末端含有在本文中被称为突出端的未配对的核苷酸。
术语“反义链”指RNAi活性剂的这样的链，所述链包含基本与靶序列互补的区域。如本文中使用的，术语“互补的区域”指反义链上与本文定义的序列(例如，靶序列)基本互补的区域。当互补的区域与靶序列不完全互补时，错配可以位于分子的内部或末端区域。一般而言，最耐受的错配位于内部区域中，例如，在5’和/或3’末端的5、4、3或2个核苷酸内。
如本文中使用的，术语“正义链”指RNAi活性剂的这样的链，所述链包含与本文定义的术语的反义链的区域基本互补的区域。
基因序列在个体之间可以是不同的，尤其是在编码区段内的摆动位置，或在非翻译区中；个体的编码序列也可以彼此不同，导致mRNA的额外差异。因此需要时，RNAi活性剂的正义链和反义链序列可被设计为与个体患者的序列对应。还可以修饰RNAi活性剂的序列来降低免疫原性、与不理想的mRNA的结合(例如，“脱靶效应”)或增加在血液中的稳定性。这些序列变体不依赖于对RNAi活性剂的碱基或5’或3’或其他末端帽的化学修饰。
RNAi活性剂还可以具有0、1或2个突出端的突出端，在0nt突出端的情况下，活性剂是平端的。RNAi活性剂可以具有0、1或2个平端。在“平端RNAi活性剂”中，两条链都以碱基对结束；因此，平端分子缺少3’或5’单链核苷酸突出端。
如本文中使用的，术语“突出端”或“核苷酸突出端”指从RNAi活性剂的双链体结构两条链中的至少一条的末端突出来的至少一个未配对的核苷酸。例如，当dsRNA的一条链的3’端延伸超过另一条链的5'端或反之时，未配对的核苷酸形成突出端。dsRNA可以包含至少一个核苷酸的突出端；可选的，突出端可以包含至少两个核苷酸、至少3个核苷酸、至少4个核苷酸、至少5个核苷酸或更多。突出端可以包含核苷酸/核苷类似物，或由核苷酸/核苷类似物组成，包括脱氧核苷酸/核苷。突出端可以位于正义链、反义链或其任意组合上。此外，突出端的核苷酸可以位于dsRNA的反义链或正义链的5'端、3'端或两端。
RNAi活性剂还可以任选的包含帽。术语“帽”等包括与双链核苷酸双链体连接的化学部分，但在本文中用于排除是核苷酸或核苷的化学部分。“3”帽连接在核苷酸或寡核苷酸的3’端。“5”帽连接在核苷酸或寡核苷酸的5’端。在一个实施方案中，3’端帽如例如WO2005/021749和WO2007/128477中公开的。
因此，本公开内容考虑了β-ENaC特异性的RNAi活性剂，其在所述RNAi活性剂中包含反义链(可以是通过接头或环连续的或连接的)。在更具体的实施方案中，RNAi活性剂包含反义链和正义链，并且一起包含双链或互补区域。在一个实施方案中，还可以任选的包含一个或两个突出端和/或一个或两个帽。RNAi活性剂用于诱导β-ENaC的RNA干扰。
靶和互补序列
本公开内容的RNAi活性剂靶向(例如，特异性结合、退火等)编码基因β-ENaC的mRNA。使用β-ENaC特异性的RNAi活性剂导致β-ENaC活性、水平和/或表达的减少，例如“敲低(knock-down)”或“敲除(knock-out)”靶基因或靶序列。特别是在一个实施方案中，在疾病状态的特征是β-ENaC过表达或活性过高的情况下，施用针对β-ENaC的
RNAi活性剂敲低β-ENaC基因至足以恢复正常的β-ENaC活性水平和/或正常的Na+重吸收水平。
在本文中使用时，“靶序列”或“靶基因”指在基因(例如β-ENaC基因)转录期间形成的mRNA分子的核苷酸序列的连续部分，包括是对一级转录产物进行RNA加工的产物的mRNA。序列的靶部分将至少长到足以用作为在该部分或该部分附近iRNA指导的切割的底物。例如，靶序列将通常为9-36个核苷酸(“nt”)长，例如15-30nt长，这包括其间的所有子区域。作为非限制性的例子，靶序列可15-30nt，15-26nt、15-23nt、15-22nt、15-21nt、15-20nt、15-19nt、15-18nt、15-17nt、18-30nt、18-26nt、18-23nt、18-22nt、18-21nt、18-20nt、19-30nt、19-26nt、19-23nt、19-22nt、19-21nt、19-20nt、19nt、20-30nt、20-26nt、20-25nt、20-24nt、20-23nt、20-22nt、20-21nt、20nt、21-30nt、21-26nt、21-25nt、21-24nt、21-23nt或21-22nt、21nt、22nt或23nt。RNAi的正义链和反义链包含与靶核酸β-ENaC互补的序列。
在本文中使用时，并且如无另外指明，术语“互补”表示包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在某些条件下与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸杂交并形成双链体结构的能力。此类条件可例如是严格的，例如400mM NaCl，40mM PIPES pH 6.4，1mM EDTA，50℃或70℃进行12-16小时，接着进行洗涤。其它条件，例如在生物体内可能遇到的生理相关条件也可应用。技术人员将能根据杂交的核苷酸的最终应用来确定最适用于测试两条序列的互补性的条件组。
“互补”序列在本文中使用时还可包括非Watson-Crick碱基对和/或从非天然和经修饰的核苷酸形成的碱基对，或完全由非Watson-Crick碱基对和/或从非天然和经修饰的核苷酸形成的碱基对形成，只要能满足关于其杂交能力的上述要求即可。此类非Watson-Crick碱基对包括但不限于G:U Wobble或Hoogstein碱基配对。
术语“互补”、“完全互补”和“实质上互补”在本文中还可在提到dsRNA的正义链和反义链之间的碱基匹配或RNAi活性剂的反义链和靶序列之间的碱基匹配时使用，如从关于其用途的上下文中所理解的那样。
在本文中使用时，与信使RNA(mRNA)“的至少部分实质上互补”的多核苷酸指与目标mRNA(例如编码β-ENaC的mRNA)的连续部分实质上互补的多核苷酸。例如，如果序列与编码β-ENaC的mRNA的非间断部分实质上互补的话，多核苷酸就与β-ENaCmRNA的至少部分互补。
RNAi活性剂内(例如本文所述的dsRNA内)的互补序列包括包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在一条或两条核苷酸序列全长上的碱基配对。在本文中此类序列可被称为互相“完全互补”。但是，当第一序列在本文中被称为与第二序列“实质上互补”时，两条序列可完全互补，或者它们可在针对多至30个碱基对的双链体进行杂交时形成一个或多个但通常不超过5、4、3或2个错配的碱基对，但保持在与它们的最终应用(例如，经由RISC途径抑制基因表达)最相关的条件下杂交的能力。但是，当两条寡核苷酸被设计来在杂交期间形成一个或多个单链突出端时，在测定互补性时此类突出端将被不认为是错配。例如，就本文所述的目的而言，包含长度为21个核苷酸的一条寡核苷酸和长度为23个核苷酸的另一寡核苷酸的双链体(其中，较长的寡核苷酸包含与较短的寡核苷酸完全互补的21个核苷酸的序列)仍可被认为是“完全互补”的。术语突出端描述了在双链核苷酸双链体的3'或5'端未配对的核苷酸，如上所述。在一个实施方案中，突出端是0至4nt长，并位于3’端。
因此，本公开内容的RNAi活性剂与靶β-ENaC中的靶序列互补或基本互补，且是双链的，包含正义链和反义链(可以是连续的、通过环连接、或连接的)，其中双链区是9至36bp长(特别是例如，19-22bp或19-23bp长)，并可以进一步任选的包含3'或5'突出端，并且RNAi活性剂可以进一步包含3’帽。RNAi活性剂介导RNA干扰，下调或抑制β-ENaC的水平、表达和/或活性，和/或建立或重新建立几乎正常的ENaC水平和/或β-ENaC活性，或其他与ENaC相关的生物学功能。
降低β-ENaC水平、表达和/或活性的RNAi活性剂
用于靶向β-ENaC的RNAi活性剂包括结合本文提供的β-ENaC序列并通过RNAi机制作用为降低β-ENaC的活性剂。β-ENaC的示例性siRNA提供在例如表1中。
本公开内容的RNAi活性剂沉默、抑制β-ENaC基因的表达，下调β-ENaC基因的表达，和/或阻抑β-ENaC基因的表达，使得实现几乎正常水平的β-ENaC活性、表达和/或水平，和/或Na+重吸收。
此外，在多个实施方案中，根据疾病病症和生物学环境，可接受使用本公开内容的RNAi活性剂来建立低于正常水平、或高于正常水平的β-ENaC表达、活性和/或水平的水平。
可使用本领域已知的任何方法测量由β-ENaC siRNA诱导的β-ENaC活性、水平和/或表达的改变。测量可以在施用siRNA之前、之间或之后的多个时间点实施，以确定siRNA的效应。
术语“沉默”、“抑制……的表达”、“下调……的表达”、“阻抑……的表达”等等在提到β-ENAC基因的时候在本文中是表示对β-ENAC基因表达的至少部分阻抑，表现为：在β-ENAC基因在其中转录并且已经受到处理以抑制β-ENAC基因表达的第一细胞或细胞组中，可分离或检测到的β-ENAC mRNA量的降低，这是较之与第一细胞或细胞组基本上相同但是未受此类处理的第二细胞或细胞组(对照细胞)而言的。抑制的程度通常表示为：
Figure BDA0001485032840000381
可选的，抑制程度可以作为与β-ENaC基因表达功能性相关的参数的降低来给出，例如，由β-ENaC基因编码的蛋白质的量，肺部液体水平或粘液水平的改变，等。原则上，可以在任何组成型或通过基因组工程表达β-ENaC的细胞中，通过任何恰当的测定，来确定β-ENaC基因沉默。然而，当为了确定所给出的RNAi活性剂是否抑制β-ENaC基因表达至某程度，从而是否涵盖在本公开内容中，而需要参照或对照时，下文实施例中提供的测定可作为此类参考。
例如，在某些例子中，通过施用本公开内容中特征性的RNAi活性剂，抑制β-ENaC基因的表达至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％和50％。在一些实施方案中，通过施用本公开内容中特征性的RNAi活性剂，抑制β-ENaC基因至少约60％、70％或80％。在一些实施方案中，通过施用本文所述的RNAi活性剂，抑制β-ENaC基因至少约85％、90％或95％或更多。
可以首先在体外测试RNAi活性剂抑制β-ENaC的能力(例如，使用测试细胞，如H441)。
然后，使用例如PBMC(外周血单核细胞)测定，可以测试能够在体外抑制针对β-ENaC的RNAi活性剂的免疫刺激作用。还可以在动物测试中测试RNAi活性剂。测试和对照动物包括过表达或低表达β-ENaC的动物，描述在例如，Hummer等人，2005J.Am.Soc.Nephrol.16：3160-3166；Randrianarison等人，2007 Am.J.Physiol.LungCell.Mol.Physiol.294：409-416；Cao等人，2006Am.J.Physiol.Renal Physiol.，及其中引用的参考文献。抑制或改变β-ENaC的水平、活性和/或表达的RNAi活性剂可用于治疗多种β-ENaC-相关性疾病的药物中。
在β-ENac或β-ENaC相关性疾病的症状的上下文中，“降低”表示此类水平的统计上显著的减少。这种减少可例如为至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或更多。针对特定疾病或针对遭受特定疾病的个体，如果β-ENaC的水平或表达升高，则用本文公开内容的β-ENaC RNAi活性剂进行的治疗可特别地将β-ENaC的水平或表达降低至处于文献中认为对没有此类病症的个体来说正常的范围内的水平。β-ENaC的水平或表达可通过对mRNA(例如通过Northern印迹或PCR)或蛋白质(例如Western印迹)的评价来测量。RNAi活性剂对β-ENaC表达的影响可通过测量β-ENaC基因转录速率来测定(例如通过Northern印迹；或逆转录酶聚合酶链式反应或实时聚合酶链式反应)。已用RT-PCR显示：β-ENaC的mRNA水平在肾、胰腺和前列腺中较高，在肝和脾中中等。Brauner-Osborne等人，2001.Biochim.Biophys.Acta1518:237-248。直接测量可对(细胞表面表达的)β-ENaC的水平进行，例如通过对其中表达β-ENaC的组织进行Western印迹来进行。
如本文中使用的，“下调”指β-ENaC的生物学活性和/或表达的任何统计学显著的减少，包括完全阻断活性(即，完全抑制)和/或表达。例如，“下调”可以指β-ENaC水平、活性和/或表达减少至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90或100％。
如本文中使用的，术语“抑制”β-ENaC指β-ENaC的生物学水平、活性和/或表达的任何统计学显著的减少，包括完全阻断活性和/或表达。例如，“抑制”可以指β-ENaC水平、活性和/或表达减少至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90或100％。如本文中使用的，术语“抑制”类似的指水平、活性和/或表达的显著的减少，同时针对任何其他的生物学活性剂或组合物。
“水平”意指β-ENaC RNAi活性剂可以改变β-ENaC的水平，例如，β-ENaC mRNA的水平或β-ENaC蛋白质的水平，或者β-ENaC的活性水平。
一些疾病，例如囊性纤维化的特征是过多的ENaC-介导的Na+吸收。特别是在一个实施方案中，在疾病的特征是β-ENaC过表达和/或活性过高的情况下，施用β-ENaC的RNAi活性剂降低了β-ENaC的水平、表达和/或活性。然而，过低的β-ENaC水平也可以导致肺液体清除受损和肾功能紊乱。Randrianarison等人，2007Am.J.Physiol.LungCell.Mol.Physiol.294：409-416。因此，在多个实施方案中，施用β-ENaC的RNAi活性剂特别建立或重建了正常的或几乎正常水平的β-ENaC活性、表达和/或水平。
对于水平、表达和/或活性而言，“正常”或“几乎正常”意指在健康细胞、组织或器官中的β-ENaC的水平、表达或活性的至少约50％、约60％、约70％、约80％、约90％和/或约100％；和/或不超过约100％、约120％、约130％、约140％或约150％。可以使用例如肺或肾匀浆进行测量，如Gambling等人，2004Kidney Intl.65：1774-1781所述。特别是在一个实施方案中，施用恰当量的恰当的β-ENaC RNAi活性剂恢复了β-ENaC水平、活性和/或表达和/或Na+重吸收水平，至健康细胞、组织或器官中的约50％至约150％，更特别的约60％至约140％，更特别的约70％至约130％，更特别的约80％至约120％，更特别的约90％至约110％，和最特别的约100％。还可以通过肺液体平衡，间接的测量β-ENaC活性水平。可以通过计算不含血液的、湿：干肺重量比，评估肺液体平衡，所述比例反映了血管外的肺部水量。Randrianarison等人，2007 Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.294：409-416。还可以通过肺的组织学研究，特别是细支气管、肺泡管、肺泡上皮和血管，间接的测量β-ENaC活性水平。Randrianarison等人，2007；和Zhou等人，2008Am.J.Resp.Crit.Care Med.178：1245-1256。因此，向β-ENaC-相关性疾病的患者施用β-ENaC RNAi，特别恢复了β-ENaC水平、活性和/或表达和Na+重吸收水平，至几乎正常的水平，如根据直接测量β-ENaC mRNA或蛋白质水平确定的，或通过例如分析组织学样品或肺部液体水平而间接确定的。
此外，在多个实施方案中，根据疾病病症和生物学环境，可接受使用本公开内容的RNAi活性剂来建立低于正常水平，或高于正常水平的β-ENaC表达、活性和/或水平的水平。
已知多种因素改变ENaC或者尤其是β-ENaC的水平。增加ENaC的生理学活性的激素包括醛固酮、血管升压素(vasopressin)和胰岛素。β-ENaC在大鼠中通过血管升压素和水限制以及碳酸氢钠过载期间而特异性上调。这些多种因素可用作确定RNAi活性剂对β-ENaC水平的作用的对照。
RNAi活性剂的类型及其修饰
使用包含反义核酸的RNAi活性剂或组合物下调特定蛋白质在细胞内的表达是本领域普遍已知的。RNAi活性剂包括与另一种核酸的编码链(例如，mRNA)互补并且能够与之氢结合的序列。因此，在多个实施方案中，本公开内容的RNAi活性剂涵盖了任何靶向(例如，与之互补，能够氢结合等)例如表1所展示的序列的RNAi活性剂。
与mRNA互补的反义序列可以与编码区、mRNA的5'或3'非翻译区，和/或桥接编码区和非翻译区的区域，和/或其部分互补。此外，RNAi活性剂或其部分可以与编码mRNA的基因的调控区互补，所述调控区例如转录或翻译起始序列或调控元件。特别的是，RNAi活性剂或其部分可以与位于编码链的起始密码子之前的区域，或与包含起始密码子的区域，或与mRNA的3'非翻译区中的区域互补。
可以根据Watson和Crick碱基配对规则，设计RNAi活性剂分子。RNAi活性剂可以与β-ENaC mRNA的完全编码区互补，但更特别的是仅与β-ENaC mRNA的编码区或非编码区的一部分反义的寡核苷酸。例如，反义寡核苷酸可以与位于β-ENaC mRNA翻译起始位点周围的区域互补。反义寡核苷酸可以是例如长度约5、10、15、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45或50个核苷酸。
RNAi活性剂可以在内部或在一端或两端具有修饰。末端的修饰可以帮助稳定RNAi活性剂，保护其免受血液中的核酸酶降解。RNAi活性剂可任选的针对β-ENaC mRNA中已知或预测靠近或位于基因剪接位点的区域；例如，外显子-内含子连接(例如，Saxena等人，1998中所述)。
RNAi活性剂还可以任选的被设计为与mRNA的已知或预测的暴露和/或单链区域(例如，环)退火。
可使用本领域已知的流程，使用化学合成和酶促连接反应，来构建RNAi活性剂。例如，可使用天然存在的核苷酸或经多种修饰的核苷酸(设计来减少脱靶效果，和/或增加分子的生物稳定性，或增加反义和正义核酸之间形成的双链体的物理稳定性)，来化学合成RNAi活性剂，例如可使用硫代磷酸衍生物，和经吖啶取代的核苷酸。
“G”、“C”、“A”、“T”和“U”每个通常代表分别含有鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶核苷和尿嘧啶作为碱基的核苷酸。但是术语“核糖核苷酸”或“核苷酸”还可表示经修饰的核苷酸或替代置换部分(surrogate replacement moiety)。本领域技术人员熟知鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶可被其它部分替换，而不会实质上改变包含具有此类置换部分的核苷酸的寡核苷酸的碱基配对性质。例如但不限于，包含肌苷作为其碱基的核苷酸可与含有腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶的核苷酸碱基配对。因此，在本文公开内容所涉及的dsRNA的核苷酸序列中，含有尿嘧啶、鸟嘌呤或腺嘌呤的核苷酸可被含有例如肌苷的核苷酸置换。在另一实例中，在寡核苷酸中任何位置的腺嘌呤和胞嘧啶可被鸟嘌呤和尿嘧啶分别替换，以与靶mRNA形成G-U Wobble碱基配对。含有此类置换部分的序列适用于本文公开内容所涉及的组合物和方法。
技术人员将认识到，术语“RNA分子”或“核糖核酸分子”不仅包括在自然界中发现或表达的RNA分子(即天然存在的)，其还包括非天然存在的包含有本文所述或本领域已知的一个或多个核糖核苷酸/核糖核苷类似物或衍生物的RNA类似物和衍生物。严格地说，“核糖核苷”包括核苷碱基和核糖，而“核糖核苷酸”是核糖核苷与一个、两个或三个磷酸部分。但是，术语“核糖核苷”和“核糖核苷酸”在本文中使用时可被认为是等同的。RNA可在核苷碱基结构或在核糖-磷酸主链结构中被修饰，例如如本文下文所述的。但是，包含核糖核苷类似物或衍生物的分子必须保持形成双链体的能力。作为非限制性的例子，RNA分子还可包括至少一个经修饰的核糖核苷，这包括但不限于：2'-O-甲基修饰的核苷酸、包含5’硫代磷酸基团的核苷、与胆固醇基衍生物或十二烷酸二癸酰胺基团连接的末端核苷、锁定核苷、无碱基核苷、2'-脱氧-2'-氟修饰的核苷、2'-氨基-修饰的核苷、2'-烷基修饰的核苷、吗啉代核苷、解锁核糖核苷酸(例如无环核苷酸单体，如WO 2008/147824所述)、氨基磷酸酯或包含非天然碱基的核苷，或它们的任何组合。或者，RNA分子可包含至少两个经修饰的核糖核苷，至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少15个、至少20个或更多个，多至dsRNA分子的全长。对于RNA分子中多个经修饰的核糖核苷中的每个而言，修饰无须是相同的。在一种实施方式中，考虑用于本文所述的方法和组合物中的经修饰的RNA是具有形成所需双链体结构的能力并且允许或介导经由RISC途径对靶RNA的特异性降解的肽核酸(PNA)。
可用于产生RNAi活性剂的经修饰的核苷酸的例子包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤(xantine)、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟基甲基)尿嘧啶、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫尿苷、5-羧基甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基Q核苷(β-D-galactosylqueosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2,2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫代尿嘧啶、β-D-甘露糖基Q核苷、5'-甲氧基羧基甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲基硫代-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-羟乙酸(v)、wybutoxosine、假尿嘧啶、Q核苷(queosine)、2-硫代胞嘧啶、5-甲基-2-硫代尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-羟乙酸甲基酯、尿嘧啶-5-羟乙酸(v)、5-甲基-2-硫代尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。
在一个实施方案中，本公开内容涵盖了本文公开的任何RNAi活性剂的修饰的任何修饰的变体。修饰的变体含有相同的序列，但可以经过修饰含有在磷酸、糖、碱基、核苷酸等中的修饰。例如，修饰的变体可以含有一个或多个本文列举的修饰的核苷酸，例如用2’-修饰的C取代C。
在一个方面，经修饰的核糖核苷包括脱氧核糖核苷。在这种情况下，RNAi活性剂可包含一个或多个脱氧核苷，包括例如，脱氧核苷突出端，或dsRNA双链部分内的一个或多个脱氧核苷。但是，不言而喻地，术语“RNAi活性剂”在任何情况下都不包括双链DNA分子。
用脱氧核糖核苷酸替换具有两个核苷酸的3’突出端的21体siRNA双链体的3’末端核苷酸突出端区段，对RNAi活性没有不利影响。用脱氧核糖核苷酸替换siRNA每个末端的多至四个核苷酸已被良好容许，而用脱氧核糖核苷酸进行完全取代会导致没有RNAi活性。国际PCT公开No.WO 00/44914和Beach等人，国际PCT公开No.WO 01/68836初步暗示，siRNA可将修饰包括至磷酸-糖主链或核苷上，以包括至少一个氮或硫杂原子。Kreutzer等人，加拿大专利申请No.2,359,180也描述了用于dsRNA构建体的某些化学修饰，以抵消双链RNA依赖性的蛋白质激酶PKR的活化，特别是2’-氨基或2’O-甲基核苷酸，以及含有2’-O或4’-C亚甲桥的核苷酸。另外的3’-末端核苷酸突出端包括dt(脱氧胸苷)、2’-O,4’-C-乙烯胸苷(eT)和2-羟乙基磷酸酯(hp)。
Parrish等人2000 Molecular Cell 6:1077-1087使用长(>25nt)siRNA转录本，在秀丽隐杆线虫(C.elegans)中测试了靶向unc-22基因的某些化学修饰。作者描述了通过用T7和T3RNA聚合酶并入硫代磷酸核苷酸类似物，将硫代磷酸残基引入这些siRNA转录本，并且观察到，具有两个经硫代磷酸酯修饰的碱基的RNA与RNAi一样在有效性上也具有相当的减少。此外，Parrish等人报道，对超过两个残基进行硫代磷酸修饰在体外使得RNA被大大去稳定，从而干扰活性不可测定。Id.at1081。作者还测试了长siRNA转录本中核苷酸糖2’-位的某些修饰，并发现用脱氧核苷酸取代核糖核苷酸，使得干扰活性大为减少，尤其是在尿苷到胸苷和/或胞苷到脱氧胞苷取代的情况下。Id。此外，作者测试了某些碱基修饰，包括在siRNA的正义链和反义链中用4-硫代尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶和3-(氨基烯丙基)尿嘧啶取代尿嘧啶以及用肌苷取代鸟苷。虽然4-硫代尿嘧啶和5-溴尿嘧啶取代显示出是容许的，Parrish报道称，肌苷并入任一链时产生了干扰活性的实质性减少。Parrish还报道称，5-碘尿嘧啶和3-(氨基烯丙基)尿嘧啶并入反义链导致RNAi活性也实质减少。
本领域技术人员将认识到，可使用本领域已知的任何常规方法(见Henschel等人，2004 DEQOR:a web-based tool for the design and quality control ofsiRNA.Nucleic Acids Research 32(Web Server Issue):W113-W120)，按需求合成和修饰siRNA。此外，本领域技术人员还显而易见，有多种调控序列(例如组成型或可诱导启动子、组织特异性启动子或其功能片段等等)可用于反义寡核苷酸、siRNA或shRNA表达构建体/载体。
本领域中有多个例子描述了可被引入核酸分子并且显著增强了其核酸酶稳定性和效力的糖、碱基、磷酸和主链修饰。例如，修饰寡核苷酸以增强稳定性和/或增强生物活性，这通过采用核酸酶抗性基团(例如，2’-氨基、2’-C-烯丙基、2’-氟代、2’-O-甲基、2’-O-烯丙基、2’-H)的修饰，核苷酸碱基修饰来实现(综述见Usman和Cedergren 1992 TIBS.17:34；Usman等人，1994 Nucleic Acids Symp.Ser.31:163；Burgin等人，1996 Biochemistry35:14090)。对核酸分子的糖修饰在本领域中被广泛描述。
对RNAi活性剂的另外的修饰和缀合已被描述过。Soutschek等人，2004 Nature432:173-178展示了通过吡咯烷接头将胆固醇缀合到siRNA分子的正义链的3’端，由此产生共价和不可逆缀合物。还可对RNAi活性剂进行化学修饰(包括与其它分子缀合)，以改进体内药物动力学驻留时间和效率。
在多种实施方式中，针对β-ENaC的RNAi活性剂包含：至少一个5’-尿苷-腺嘌呤-3’(5’-ua-3’)二核苷酸，其中尿苷是2’-修饰的核苷酸；至少一个5’-尿苷-鸟嘌呤-3’(5’-ug-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸；至少一个5’-胞苷-腺嘌呤-3’(5’-ca-3’)二核苷酸，其中5’-胞苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-尿苷-尿苷-3’(5’-uu-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸。
在多种实施方式中，RNAi活性剂包含选自下组的2’-修饰，所述组由2'-脱氧、2'-脱氧-2’-氟代、2’-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)构成。
在另一实施方式中，RNAi包含缺口或丢失的碱基。例如，磷酸-糖主链可存在，但碱基丢失。
在另一实施方式中，RNAi活性剂具有单链切口(例如主链中的断裂或丢失的键)。在多个实施方案中，单链缺口可以在正义链或反义链或两条链中。
该切口可例如在正义链中，产生小的内部片断化的干扰RNA，或sisiRNA，其可比没有切口的相应RNAi活性剂具有更少的脱靶效果。
反义核酸或RNAi活性剂还可具有替代性的主链，例如锁核酸(LNA)、吗啉代、肽核酸(PNA)、苏糖核酸(TNA)或乙二醇核酸(GNA)，和/或其可被标记(例如经放射性标记或加标签的)。
一条链或两条链可包含替代性的主链。
在另一实施方式中，本文公开内容的方法所利用的RNAi活性剂可包括α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特异性双链杂交体，其中，与通常的β-单元相反，链互相平行排列。Gaultier等人，1987 Nucleic Acids.Res.15:6625-6641。
反义核酸分子还可包含2'-o-甲基核糖核苷酸(Inoue等人，1987 Nucleic AcidsRes.15:6131-6148)或嵌合RNA-DNA类似物(Inoue等人，1987 FEBS Lett.215:327-330)。
在还一实施方式中，RNAi活性剂是核酶。核酶是具有核糖核酸酶活性的催化性RNA分子，其能切割与它们具有互补区域的单链核酸，例如mRNA。因此，核酶[例如锤头核酶(被描述于Haselhoff等人，1988,Nature 334:585-591中)]可用于催化性切割β-ENaC mRNA转录本，由此抑制β-ENaC mRNA的翻译。
或者，可通过靶向与β-ENaC的调控区域(例如启动子和/或增强子)互补的核苷酸序列，以形成防止β-ENaC基因转录的三螺旋结构，来抑制基因表达。一般而言，见Helene1991 Anticancer Drug Des.6(6):569-84；Helene等人，1992 Ann.N.Y.Acad.Sci.660:27-36；和Maher 1992,Bioassays 14(12):807-15。
生产RNAi活性剂
可以使用表达载体生物学生产RNAi活性剂，所述表达载体中以反义方向亚克隆了核酸(即，从插入核酸转录的RNA与目标靶核酸为反义方向)。还可以使用表达载体生物学生产RNAi活性剂，所述表达载体中被亚克隆了核酸为shRNA构建体(即，从插入的核酸转录的RNA具有与目标靶核酸反义方向的第一区，包括环或铰链的第二区和与目标靶核酸正义方向的第三区，其中转录物的第一和第三区优选与其自身杂交，从而形成茎环结构)。
生产RNAi活性剂的方法是本领域普遍已知的，是本领域普通技术人员可获得的。
用于合成RNAi的试剂盒是可以从例如New England Biolabs和Ambion商业获得的。
RNAi活性剂的递送
可以通过本领域已知的任何方式递送或导入本公开内容的RNAi活性剂(例如，向体外的细胞，向测试动物或向人)。
本公开内容的RNAi活性剂通常向对象施用或在原位产生，使其与编码β-ENaC的细胞mRNA和/或基因组DNA杂交，并通过抑制转录和/或翻译来抑制表达。施用RNAi活性剂的途径的例子包括直接注射在组织位点。可选的，RNAi活性剂可以被修饰以靶向选定的细胞，然后全身施用。例如，对于全身施用，可以修饰反义分子，使其与选定的细胞表面表达的受体或抗原特异性结合，例如，通过连接反义核酸分子与结合细胞表面受体或抗原的肽或抗体。还可以使用本领域普遍已知的和例如US20070111230(其全文内容整合到本文中)中描述的载体向细胞递送反义核酸分子。为了实现在细胞内充分的反义分子浓度，反义核酸分子处于强pol II或pol III启动子控制下的载体构建体是优选的。
当提到RNAi活性剂时，“引入至细胞”表示协助或实现摄入或吸收进细胞，如本领域技术人员所理解的。吸收或摄入RNAi活性剂可通过无协助的扩散性细胞过程或主动性细胞过程而发生，或者通过辅助性活性剂或设备而发生。该术语的含义并不限于体外的细胞；RNAi活性剂还可“被引入至细胞”，其中所述细胞是活的生物的一部分。在此类情况下，引入至细胞将包括递送至生物。例如，为进行体内递送，RNAi活性剂可被注射至组织位点，或全身性施用。体内递送还可通过β-葡聚糖递送系统来进行，例如美国专利Nos.5,032,401和5,607,677以及美国公开No.2005/0281781中描述的。体外引入至细胞包括本领域已知的方法，例如电穿孔和脂质转染。其它手段被描述于本文中或者是本领域已知的。
将RNAi活性剂递送至组织是一个问题，这是因为材料必须到达靶器官并且还必须进入靶细胞的胞质。RNA不能穿透细胞膜，所以全身性递送裸RNAi活性剂不可能成功。RNA会被血清中的RNA酶活性快速降解。就这些原因而言，递送RNAi活性剂至靶细胞的其它机制已被提出。本领域已知的方法包括但不限于：病毒递送(逆转录病毒、腺病毒、慢病毒、杆状病毒、AAV)；脂质体(Lipofectamine、阳离子DOTAP、中性DOPC)或纳米颗粒(阳离子聚合物，PEI)，细菌递送(tkRNAi)以及对siRNA化学修饰(LNA)以增加稳定性。Xia等人，2002Nat.Biotechnol.20和Devroe等人，2002.BMC Biotechnol.2 1:15公开了将siRNA并入病毒载体。用于递送RNAi活性剂的其它系统被考虑，并且可通过有待被发现和/或被FDA或其它管理机构批准的多种方法来递送本文公开内容的RNAi活性剂。本公开内容的RNAi活性剂可以在合适的药物组合物中递送。
RNAi活性剂的药物组合物
如本文中使用的，“药物组合物”包括药学上有效量的一种或多种β-ENaC RNAi活性剂、可药用载体和，任选的与RNAi活性剂协同作用的其他疾病治疗。如本文中使用的，“药学上有效量”、“治疗有效量”或简单的“有效量”指RNAi活性剂的量有效的产生预期的药理学、治疗或预防结果。例如，如果与疾病或病症相关的可测量参数存在至少10％的降低，则给定的临床治疗被认为是有效的，用于治疗所述疾病或病症的药物的治疗有效量是使所述参数产生至少10％的降低所必需的量。在该实施方案中，治疗有效量的靶向β-ENaC的RNAi活性剂可以降低β-ENaC蛋白质水平至少10％。在其他实施方案中，当与疾病或病症相关的可测量参数存在至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％的降低，则给定的临床治疗被认为是有效的，用于治疗所述疾病或病症的药物的治疗有效量是分别使所述参数产生至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％的降低所必需的量。
术语“可药用载体”指的是施用治疗活性剂的载体。此类载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、丙三醇、乙醇、和它们的组合。术语明确排除细胞培养基。对于经口施用的药物，可药用载体包括但不限于可药用赋形剂，例如惰性稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂。适当的惰性稀释剂包括钠和钙的碳酸盐、钠和钙的磷酸盐、以及乳糖，而玉米淀粉和褐藻酸则是适当的崩解剂。粘合剂可以包括淀粉和明胶，而润滑剂(如果存在的话)通常为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。如果需要的话，片剂可以用例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯的材料包衣来延迟在胃肠道的吸收。药物制剂中包括的活性剂也在本文中被描述。
包含β-ENaC RNAi活性剂的药物组合物可以是固体形式的，例如粉末、颗粒、片剂、丸剂、软胶囊(gelcaps)、胶囊(gelatin capsules)、脂质体、栓剂、咀嚼形式或贴剂。包含β-ENaC RNAi活性剂的药物组合物还可呈现为液体形式，例如溶液、乳液、悬浮液、酏剂或糖浆。合适的液体支持物可以是例如水、有机溶剂(例如多元醇，例如甘油或乙二醇，包括丙二醇和聚乙二醇)或乙醇、聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)或其混合物(以多种比例，在水中)。组合物可包含纳米尺寸的无定型或晶体颗粒，其被铝或表面活性剂涂覆。
合适的支持物可包括例如，抗细菌和抗真菌剂，缓冲剂，磷酸钙，纤维素，甲基纤维素，氯丁醇(chlorobutanol)，可可脂(cocoa butter)，着色剂，糊精，乳化剂，肠溶衣(enteric coatings)，调味剂，明胶，等张剂，卵磷脂，硬脂酸镁，芳香剂，多元醇例如甘露醇，可注射的有机酯类，例如油酸乙酯，对羟基苯甲酸酯(paraben)，山梨酸苯酚(phenolsorbic acid)，聚乙二醇，聚乙烯吡咯烷(polyvinylpyrrolidine)，磷酸缓冲盐溶液(PBS)，防腐剂，丙二醇，羧甲基纤维素钠，氯化钠，山梨糖醇，多种糖(包括但不限于蔗糖、果糖、半乳糖、乳糖和海藻糖)，淀粉，栓剂蜡(suppository wax)，滑石，植物油，例如橄榄油和玉米油，维生素，蜡和/或润湿剂。对于β-ENaC RNAi活性剂，优选的支持物包含右旋糖酐(dextran)和水，例如，水中5％右旋糖(D5W)。
药物组合物的生物惰性部分可任选地是易蚀的，以允许RNAi活性剂随时间释放。
药物组合物可以包括其他组分，所述组分有助于递送、稳定性、功效或降低免疫原性。
包含针对β-ENaC的RNAi活性剂的药物组合物
可以添加包含针对β-ENaC的RNAi活性剂的药物组合物的其他组分，帮助递送、稳定性、功效或降低免疫原性。
脂质体之前已被用于药物递送(例如递送化疗剂)。脂质体(例如阳离子脂质体)被描述于PCT公开WO02/100435A1、WO03/015757A1和WO04029213A2；美国专利Nos.5,962,016；5,030,453和6,680,068；以及美国专利申请2004/0208921中。制造脂质体的方法还被描述于WO04/002453A1中。此外，中性脂类已被加入至阳离子脂质体(例如Farhood等人，1995)。
阳离子脂质体已被用于将RNAi活性剂递送至多种细胞类型(Sioud和Sorensen2003；美国专利申请2004/0204377；Duxbury等人,2004；Donze和Picard,2002)。
中性脂质体的使用公开于Miller等人，1998和美国专利申请2003/0012812中。
在本文中使用时，术语“SNALP”指稳定的核酸-脂类颗粒。SNALP代表脂类小泡，其包覆降低的水性内部(包含核酸，例如iRNA或iRNA从其中转录而来的质粒)。SNALPs被描述于例如美国专利申请公开Nos.20060240093、20070135372和国际申请No.WO 2009082817中。
使用基于脂类的、基于胺的和基于聚合物的技术进行的化学转染被公开于来自Ambion Inc.,Austin,Tex.和Novagen,EMD Biosciences,Inc,Merck KgaA的旗下企业,Darmstadt德国的产品中；Ovcharenko D(2003)“Efficient delivery of siRNAs tohuman primary cells.”Ambion TechNotes 10(5):15-16)。此外，Song等人(Nat Med.网络公开(Fete l 0,2003)doi:10.1038/nm828)等等[Caplen等人，2001 Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),98:9742-9747和McCaffrey等人，Nature 414:34-39]公开了可通过将siRNA注射进哺乳动物循环系统来高效转染肝细胞。
已经使用了多种分子用于细胞特异性RNAi活性剂递送。例如，鱼精蛋白的核酸凝聚(condensing)性质已与用于递送siRNA的特定抗体组合。Song等人，2005 NatBiotech.23:709-717。自装配的PEG化的聚阳离子聚乙烯亚胺(PEI)也已被用于凝聚和保护siRNA。Schiffelers等人，2004 Nucl.Acids Res.32:el49,141-1 10。
然后，含有siRNA的纳米颗粒可被成功递送至过表达整联蛋白的肿瘤新血管系统。Hu-Lieskovan等人，2005 Cancer Res.65:8984-8992。
本文公开内容的RNAi活性剂可经由例如脂类纳米颗粒(LNP)；中性脂质体(NL)；聚合物纳米颗粒；双链RNA结合基序(dsRBMs)；或者经由对RNAi活性剂的修饰(例如共价连结至dsRNA)而被递送。
脂类纳米颗粒(LNP)是自装配的基于阳离子脂类的系统。它们可包含例如中性脂类(脂质体基础)；阳离子脂类(用于siRNA装载)；胆固醇(用于稳定脂质体)；和PEG-脂类(用于稳定制剂、电荷掩蔽和血流中的延伸的循环)。
阳离子脂类可包含例如首基(headgroup)、接头、尾部和胆固醇尾。LNP可具有例如良好的肿瘤递送、血液中延伸的循环、小颗粒(例如小于100nm)和在肿瘤微环境中的稳定性(其具有低pH并且含氧量低)。
中性脂质体(NL)是基于非阳离子脂类的颗粒。
多聚纳米颗粒是基于自我装配的聚合物的颗粒。
双链RNA结合基序(dsRBM)是自我装配的RNA结合蛋白，其将需要修饰。
在多个实施方案中，针对β-ENaC的RNAi活性剂与一种或多种诊断性化合物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分(moiety)、天然或非常见核苷碱基(nucleobase)、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基(sarsasapogenin)、无羁萜、无羁萜-3β-醇-衍生的石胆酸(epifriedelanol-derivatized lithocholic acid)、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖(pullulan)、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体(oligo lactate 15-mer)、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子(polycationic)、肽、聚胺、肽模拟物和/或转铁蛋白连接。
可以在包含多种适合施用RNAi活性剂的特定方法的组分的药物组合物中制备本公开内容的RNAi活性剂。
RNAi活性剂的施用
包含β-ENaC的药物组合物可通过颊(buccal)、吸入(包括吹入或深度吸入(deepinhalation))、鼻、口服、肠胃外、植入、注射或输注(经由硬膜外、动脉内、关节内、囊内、心内、脑室内、颅内、皮内、肌内、眶内、腹膜内、脊柱内、胸骨内、鞘内、静脉内、蛛网膜下、被膜下(subcapsular)、皮下、表皮下、经内皮、经气管、经血管、直肠、舌下、局部和/或阴道途径)施用。这可通过注射、输注、皮肤贴片或本领域已知的任何其它方法来进行。制剂可以是粉末化的、雾化的、气溶胶化的(aerosolized)、颗粒化的或者经合适制备用于递送的。如果是液体的话，施用可以缓慢进行，或者通过推注(bolus)进行，虽然在本领域已知的一些情况下，推注注射可能导致材料经肾脏损失。
可用本领域已知的医学设备来施用包含β-ENaC RNAi活性剂的药物组合物。例如，在特定的实施方式中，可用无针头皮下注射设备，例如美国专利Nos.5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4,790,824或4,596,556中公开的设备，来施用RNAi活性剂。可用于本文公开内容中的公知植入体和模块的例子包括：美国专利No.4,487,603，其公开了可植入的微输注泵，用于以受控速率来分配药剂；美国专利No.4.,486,194，其公开了用于经由皮肤施用药剂的治疗设备；美国专利No.4,447,233，其公开了用于以精确输注速率递送药剂的药剂输注泵；美国专利No.4,447,224，其公开了用于连续药物递送的可变流速可植入输注装置；美国专利No.4,439,196，其公开了具有多腔区室的渗透性药物递送系统；以及美国专利No.4,475,196，其公开了渗透性药物递送系统。很多其它此类植入体、递送系统和模块是本领域技术人员已知的。
在某些实施方案中，可以配制包含RNAi活性剂的药物组合物以保证在体内的正确分布。施用针对β-ENaC的RNAi活性剂可以是全身的(全身)或特别是靶向表达(或过表达或展示出活性过高的)β-ENaC的组织或器官，例如肺、肾、结肠和腺体。靶向这些特定组织或器官的方法描述在本文中，和/或是本领域已知的。例如，可以将它们配制在脂质体中。就制造脂质体的方法，参见例如美国专利4,522,811；5,374,548和5,399,331。脂质体可包含被选择性运输进特别的细胞或器官的一种或多种部分，由此增强靶向药物递送(见例如V.V.Ranade(1989)J.Clin.Pharmacol.29:685)。
示例性的靶向部分包括叶酸或生物素(见例如Low等人的美国专利5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等人.,(1988)Biochem.Biophys.Res.Commun.153:1038)；抗生素(P.G.Bloeman等人(1995)FEBS Lett.357:140；M.Owais等人(1995)Antimicrob.AgentsChemother.39:180)；表面活性剂蛋白A受体(Briscoe等人(1995)Am.J.Physiol.1233:134)，其不同种类可包含本文公开内容的制剂以及所发明的分子的组分；p120(Schreier等人(1994)J.Biol.Chem.269:9090)；还见K.Keinanen；M.L.Laukkanen(1994)FEBSLett.346:123；J.J.Killion；I.J.Fidler(1994)Immunomethods 4:273。
因此，本公开内容涵盖了包含一种或多种针对β-ENaC的RNAi活性剂的药物组合物，其可以任选的包含多种修饰和/或其他组分，用于治疗β-ENaC-相关性疾病。
β-ENaC-相关性疾病
本公开内容涵盖了针对β-ENaC的RNAi活性剂，和向人和非人动物施用RNAi活性剂治疗多种β-ENaC-相关性疾病。
“β-ENaC-相关性疾病”意指任何涉及β-ENaC的水平、表达和/或活性的功能失调的疾病，和/或任何可以通过调节β-ENaC的水平、表达和/或活性治疗和/或缓解的疾病。特别是，包括囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压。
“囊性纤维化”或“CF”意指与囊性纤维化跨膜电导调节子(CFTR)基因中的突变相关的常见遗传疾病。CFTR编码cAMP-依赖性Cl-通道，调控ENaC。在CF呼吸道上皮中，CFTR-介导的Cl-分泌是缺陷的，而ENaC-介导的Na+吸附增加。在CF呼吸道中的这些离子运输缺陷导致呼吸道表面液体(ASL)容量不足、有缺陷的粘液清除和粘液吸附，提示ASL容量不足是CF肺病的病理发生的关键机制。在实验小鼠中，β-ENaC在呼吸道中的特异性过表达证实了仅加快Na+运输足以产生ASL容量不足和CF-样肺病，包括呼吸道粘液堵塞、杯形细胞化生、慢性嗜中性呼吸道炎症、细菌病原体清除受损和最终致死。参见Zhou等人，2008以及其中引用的文献。
“李德尔综合征”意指高血压的常染色体显性遗传形式，其特征是早期和严重的高血压，通常伴随代谢性碱中毒和低钾血症，所有症状都是以醛固酮过多(康恩综合征)为特征。
然而，醛固酮的血浆水平是低的。因此，李德尔综合征也被称为假多醛固酮症。这一严重的高血压形式响应低盐饮食和Na+通道抑制剂(留K+利尿药)的治疗，提示了主要的ENaC调控缺陷。疾病与γ-ENaC中的突变相关，以及还与β-ENaC中的若干突变(具有PPXY共同序列的“PY”基序中的P615S、P616L和Y618H；以及R564st、W574st、579del32、Q589st、T592fr、A593fr和R595fr，其中“fr”是移码，“del”是缺失，而“st”是过早的终止密码子)相关。
这些突变导致过表达比野生型ENaC活跃过度的Na+通道。突变还阻止通常在胞内Na+升高时出现的通道下调；具有Liddle突变的ENaC通道仍然保持在高度活跃的状态，而不管高的胞内Na+浓度。因此，可以通过β-ENaC的siRNA或此类siRNA与已知的李德尔综合征治疗(例如低盐饮食和Na+通道抑制剂(留K+利尿药))的组合，调控具有李德尔综合征的突变的ENaC的水平和/或活性。
关于β-ENaC-相关性疾病的其他信息，参见例如，Hummler等人，1999.Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.276：567-571。
“肥胖相关性高血压”意指与肥胖等相关或关联的高血压。肥胖与高血压相关。已提出了多种机制解释该相关性，包括(在肥胖中)增加的交感神经活性；增加的肾素-血管紧张素-醛固酮系统活性；增加的心输出；和来自器官周围的间质脂肪的增加的机械压、高胰岛素血症(hyperinsulinemia)和/或胰岛素耐受。任何这些机制都可以导致肾脏钠滞留。在肾连接小管和集合管中，通过ENaC发生钠重吸收。在Zucker大鼠(肥胖的模式动物)中，肾脏的β-ENaC水平增加。
Bickel等人，2001Am.J.Physiol.Renal Physiol.281：639-648。这些和其他钠运输体丰度的相对增加，不伴随其他钠运输体的减少，可能导致增强的管钠重吸收。其结果是，在肾脏钠运输体丰度的这些变化在肥胖哺乳动物(包括人)的血压升高的发展和/或持续中发挥了作用。
“1型假性醛固酮减少症”、“PHA1”、“PHA-1”等意指异源性临床综合征，其特征是盐皮质激素终端器官耐受，即，尽管醛固酮水平升高，仍然尿丢失Na+和降低的K+分泌。这一综合症的严重形式是作为常染色体隐性性状遗传，有时导致低钠血症、低血压和高钾血症的致死性发作，并表现出在一些器官(肾、唾液腺、汗腺和结肠)中的Na+运输改变。在一些表现出该类型PHA-1的家族中，发现了与三种ENaC亚基的任一种的突变相关联(包括β-ENaC中的G37S)。
具有常染色体显性模式遗传的、较不严重的PHA-1形式是在婴儿期症状最明显，并随年龄增大而改善。参见Hummler等人，1999.Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.276：567-571。
针对β-ENaC的RNAi活性剂可用于治疗β-ENaC-相关性疾病，特别是与β-ENaC的表达、活性和/或水平改变相关的疾病。
RNAi活性剂用于治疗β-ENaC-相关性疾病的用途
本文描述的针对β-ENaC的RNAi活性剂可配制成可以施用给人和非人动物的药物组合物。这些组合物可以包括一种或多种RNAi活性剂，和任选的其他可用于治疗β-ENaC-相关性疾病的治疗。其可以作为早期/预防性治疗的一部分施用，可以以治疗有效剂量施用。药物组合物可以包括药学载体，可以通过本领域已知的任何方法施用。本公开内容的各个方面另外详细描述如下。
针对β-ENaC的RNAi活性剂可以施用给人和非人动物，用于治疗β-ENaC-相关性疾。
在本公开内容的一个实施方案中，包含β-ENaC RNAi活性剂的组合物可以施用给非人动物。例如，组合物可以给予鸡、火鸡、家畜动物(例如羊、猪、马、牛等)、伴侣动物(例如，猫和狗)，在治疗囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压和相似疾病中有效。在此情况下，可选择针对β-ENaC的RNAi活性剂从而匹配动物基因组的β-ENaC的序列，以及特别地从而与动物基因组中的所有其他基因含有至少1nt错配。因此，本公开内容的RNAi活性剂可用于在人和非人动物中治疗β-ENaC-相关性疾病。
如本文在β-ENaC表达的上下文中使用的，术语“治疗”及其各种形式等指缓解或减轻由β-ENaC表达介导的病理学过程。在本公开内容的上下文中，只要涉及下文提及的任何其他病症(除了由β-ENaC表达介导的病理学过程外),术语“治疗”及其各种形式等意味着缓解或减轻与此类病症相关的至少一个症状，或减慢或逆转此类病症的发展或预期发展，例如减慢脂类病况的发展，如动脉粥样硬化。
“治疗”也意指患者病症的预防、治疗、治愈或任何其他改变，表示生理病症的改善或缺少退化。“治疗”意指治疗β-ENaC-相关性疾病(例如，囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和肥胖相关性高血压)或患者所患的任何其他疾病的任何恰当的治疗。在本文中使用时，术语“治疗”及其其它词性形式表示预防性(prophylactic和preventative)治疗和治愈性或疾病改善性治疗两者，包括对处于感染疾病风险中或怀疑具有疾病的患者以及已经生病或诊断为遭受状况(condition)的患者进行治疗。术语“治疗”及其其它词性形式还表示在未遭受疾病但是可能对不健康状况(例如氮不平衡或肌肉损失)的发展易感的个体中保持和/或促进健康。在一种实施方式中，“治疗”不包括预防疾病状态。因此，本文公开内容可用于在患β-ENaC相关疾病的个体中或在对β-ENaC相关疾病易感的个体中阻抑β-ENaC基因的表达和/或治疗β-ENaC相关疾病。“患”β-ENaC相关疾病的个体已显示出疾病特征性的可检测到的症状，或者已临床显示出暴露给或携带β-ENaC相关疾病的病原体或标志。作为非限制性的例子，患β-ENaC相关疾病的个体可显示出表面症状，或者可不显示表面症状但在临床测试中显示出携带与β-ENaC相关疾病相关的蛋白质标志、或血液中与病原体相关的蛋白质或遗传材料。
如果较早而非较晚施用，则一些β-ENaC-相关性疾病的早期治疗可以是更有效的。预防性的早期施用阿米洛利(ENaC抑制剂)可用于治疗CF模式小鼠，而晚期施用则不行。相似的，在CF中用抗微生物剂进行早期干预，比在已确立感染后治疗更有效。Zhou等人，2008。因此，在一个特定的实施方案中，在疾病显示之前，较早施用针对β-ENaC的RNAi活性剂，和/或作为预防剂而非在疾病确立后施用。
β-ENaC-相关性疾病的治疗可以包括多种治疗，包括βENaC RNAi活性剂，和任选的还包括其他治疗，可以是方法(或程序)或其他组合物(例如，活性剂或其他RNAi活性剂)。
RNAi活性剂的剂量和有效量
向需要的患者施用治疗有效量的剂量的本公开内容的RNAi活性剂。
“有效量”或“治疗有效量”是治疗个体的疾病或医学状况的量，或者更一般性地，向个体提供营养、生理或医学益处的量。在本文中使用时，短语“治疗有效量”和“预防有效量”表示在对β-ENaC表达所介导的病理过程或β-ENaC表达所介导的病理过程的明显症状的治疗、预防或管理中提供治疗性益处的量。具体的治疗有效的量可容易地被普通执业医师确定，并且可取决于本领域已知的因素而变动，所述因素例如β-ENaC表达所介导的病理性过程的类型、患者的病史和年龄、β-ENaC表达所介导的病理性过程的阶段以及抑制β-ENaC表达介导的病理性过程的其它活性剂的施用。
在本文公开内容的多种实施方式中，患者年龄为至少大约1、3、6或9个月，或1、5、10、20、30、40、50、55、60、65、70或75岁。在多种实施方式中，患者年龄不超过大约1、3、6或9个月，或1、5、10、20、30、40、50、55、60、65、70、75、80、90或100岁。在多种实施方式中，患者具有至少大约5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380或400lbs的体重。在多种实施方式中，患者具有不超过大约5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120、140、160、180、200、220、240、260、280、300、320、340、360、380或400lbs的体重。
在本文公开内容的多种实施方式中，剂量[仅测量活性成分]可以是至少大约1、5、10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000ng，1、5、10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000微克，1、5、10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000mg。在多种实施方式中，剂量可以不超过大约10、25、50、100、200、250、300、250、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000mg。在多种实施方式中，剂量可以至少每天不止一次，每日、每周不止一次、每周、隔周、每月和/或每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月施用，或其组合施用。
在多种实施方式中，剂量与个体的体重或体表面积相关。实际剂量水平可有所变动，以获得对于特定患者、组合物和施用模式有效但对患者无毒性的有活性的活性剂的量。所选择的剂量将取决于多种药物动力学因素，包括所用的特定RNAi活性剂的活性，施用途径，RNAi活性剂排出速率，治疗持续期，与RNAi活性剂组合使用的其它药物、化合物和/或材料，患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康和之前医疗史，以及医学领域公知的类似因素。具有本领域普通技术的医师或兽医可容易地确定需要的RNAi活性剂的有效量。合适的剂量将是这样的量，其实对于产生治疗性效果来说有效的最低剂量，或者足够低到能产生治疗性效果但是不导致副作用的剂量。
除一种或多种针对β-ENaC的RNAi活性剂的治疗有效剂量外，本公开内容的药物组合物可以包括与RNAi活性剂协同作用的其他疾病治疗，或与上述疾病治疗联合使用。例如，药物组合物可以包括ENaC的其他拮抗剂，例如留钾利尿药、阿米洛利和氨苯蝶啶。其他治疗可以与药物组合物一起施用，包括作为非限制性例子——调控饮食的盐摄入。当用于治疗囊性纤维化时，药物组合物可与本领域已知的多种药物和疗法联合使用，包括但不限于抗体、DNA酶疗法、albutrol、N-乙酰半胱氨酸、呼吸疗法、冲击疗法、需氧运动和治疗与囊性纤维化相关的疾病(例如，腹泻、骨质疏松症、糖尿病、流血等)的多种药物和疗法。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的其他实施方案
在特定的实施方案中，本公开内容涵盖了包含一种或多种β-ENaC RNAi活性剂的组合物。在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂。在一个实施方案中，反义链由或基本由列举的(例如，在表1中)RNAi活性剂的反义链的序列组成，或者包含列举的(例如，在表1中)RNAi活性剂的反义链的序列。在一个实施方案中，反义链由或基本由与列举的(例如，在表1中)任何RNAi活性剂的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成，或包括与列举的(例如，在表1中)任何RNAi活性剂的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列。在一个实施方案中，反义链由列举的(例如，在表1中)RNAi活性剂的反义链序列组成，且还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷酸。在一个实施方案中，反义链由与列举的(例如，在表1中)任何RNAi活性剂的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成，且还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷酸。
在另一个实施方案中，本公开内容要求保护的组合物不包括列举的(例如，在表1中)任何特定的单个RNAi活性剂。在本公开内容的另一个实施方案中，针对β-ENaC的RNAi活性剂不包括在专利或科技文献(例如美国专利申请号60/346,069(PCT/US02/41850)和Hyde等人，2009,The 23rd North American Cystic Fibrosis Conference,Minneapolis,October 14-17,2009)中公开的任何β-ENaC RNAi活性剂的序列；或作为sc-42418(和相关产品)可从Santa Cruz Biotechnology,Santa Cruz,CA获得的序列。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的具体实施方案
本文公开了针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种具体实施方案。本文和例如表1中提供了双链体序列实例。本公开内容的具体实施方案包括这样的RNAi活性剂，所述RNAi活性剂包括与列举的(例如，在表1中)RNAi活性剂的序列有0、1、2或3nt或bp(例如，具有0、1、2或3个错配)不同的序列。
错配在本文中定义为当最大的比对和比较两条序列时，碱基序列或长度之间的差异。错配定义为这样的位置，其中一条序列的碱基与另一序列的碱基不匹配。因此，例如，如果一条序列中的位置具有特定的碱基(例如，A)，而在另一序列的相应位置具有不同的碱基(例如，G)，则计算为错配。
例如，如果一条序列中的位置具有碱基(例如，A)，而在另一序列的相应位置没有碱基(例如，所述位置是包括磷酸-糖主链而没有碱基的无碱基核苷酸)，则也计算为错配。任一序列(或正义链或反义链)中的单链缺口不计为错配。因此，作为非限制性例子，如果一条序列包括序列AG，而另一序列包括在A和G之间具有单链缺口的序列AG，则不计为错配。碱基修饰也不被认为是错配。因此，如果一条序列包括C，而另一序列在相同的位置包括修饰的C(例如，2’-修饰)，则不计为错配。
在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20807(SEQ ID NO：5和6或SEQ ID NO:115和116)的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20807的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20807。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20807组成的序列。
在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20826(SEQ ID NO：43和44或SEQ ID NO:153和154)的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20826的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20826。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20626组成的序列。
在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20832(其包括SEQ ID NO：55和56或SEQ ID NO:165和166)的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20832的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20832。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20832组成的序列。
在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20834(其包括SEQ ID NO：59和60或SEQ ID NO:169和170)的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20834的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20834。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20834组成的序列。
在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20848(其包括SEQ ID NO：87和88或SEQ ID NO:197和198)的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20848的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20848。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20848组成的序列。
在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20861(其包括SEQ ID NO：97和98或SEQ ID NO:207和208)的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20861的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20861。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20861组成的序列。
在一个实施方案中，本公开内容包括这样的RNAi活性剂，所述RNAi活性剂在H441细胞中，在10nM的体外浓度下，表现出敲低至少约80％β-ENaC基因(不超过约20％剩余基因活性)。
因此，在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；或AD-20834的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；或AD-20834的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；或AD-20834。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；或AD-20834组成的序列。
在一个实施方案中，本公开内容包括这样的RNAi活性剂，所述RNAi活性剂在H441细胞中，在10nM的体外浓度下，表现出敲低至少约70％β-ENaC基因(不超过约30％剩余基因活性)。
因此,在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；或AD-20867的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；或AD-20867的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；或AD-20867。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；或AD-20867组成的序列。
在一个实施方案中，本公开内容包括这样的RNAi活性剂，所述RNAi活性剂在H441细胞中，在10nM的体外浓度下，表现出敲低至少约60％β-ENaC基因(不超过约40％剩余基因活性)。
因此在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；或AD-20827的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；或AD-20827的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；或AD-20827。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；或AD-20827组成的序列。
在一个实施方案中，本公开内容包括这样的RNAi活性剂，所述RNAi活性剂在H441细胞中，在10nM的体外浓度下，表现出敲低至少约50％β-ENaC基因(不超过约50％剩余基因活性)。
因此，在一个特定的实施方案中，本公开内容包括包含这样的反义链的RNAi活性剂，所述反义链包含与AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；AD-20827；AD-20828；AD-20812；AD-20836；或AD-20822的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA还进一步包含这样的正义链，所述正义链包含与AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；AD-20827；AD-20828；AD-20812；AD-20836；或AD-20822的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
在另一个特定的实施方案中，siRNA包含AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；AD-20827；AD-20828；AD-20812；AD-20836；或AD-20822。
在另一个特定的实施方案中，siRNA具有由AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834；AD-20806；AD-20851；AD-20865；AD-20811；AD-20819；AD-20839；AD-20835；AD-20825；AD-20867；AD-20813；AD-20823；AD-20805；AD-20831；AD-20862；AD-20808；AD-20827；AD-20828；AD-20812；AD-20836；或AD-20822组成的序列。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种实施方案
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20805的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20805的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20806的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20806的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20807的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20807的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20808的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20808的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20809的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20809的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20810的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20810的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20811的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20811的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20812的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20812的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20813的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20813的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20814的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20814的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20815的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20815的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20816的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20816的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20817的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20817的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20818的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20818的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20819的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20819的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20820的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20820的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20821的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20821的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20822的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20822的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20823的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20823的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20824的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20824的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20825的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20825的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20826的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20826的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20827的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20827的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20828的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20828的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20829的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20829的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20830的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20830的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20831的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20831的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20832的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20832的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20833的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20833的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20834的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20834的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20835的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20835的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20836的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20836的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20837的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20837的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20838的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20838的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20839的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20839的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20840的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20840的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20841的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20841的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20842的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20842的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20843的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20843的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20844的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20844的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20845的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20845的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20846的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20846的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20847的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20847的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20848的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20848的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20849的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20849的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20850的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20850的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20851的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20851的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20852的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20852的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20861的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20861的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20862的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20862的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20863的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20863的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20864的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20864的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20865的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20865的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20866的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20866的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
在一个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和/或反义链的RNAi活性剂，其中正义链包含与AD-20867的正义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸，反义链包含与AD-20867的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续核苷酸。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种实施方案
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20805及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20805包括SEQ ID NO.111–112。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20806及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20806包括SEQ ID NO.113-114。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20807及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20807包括SEQ ID NO.115-116。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20808及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20808包括SEQ ID NO.117-118。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20809及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20809包括SEQ ID NO.119-120。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20810及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20810包括SEQ ID NO.121-122。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20811及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20811包括SEQ ID NO.123-124。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20812及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20812包括SEQ ID NO.125-126。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20813及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20813包括SEQ ID NO.127-128。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20814及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20814包括SEQ ID NO.129-130。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20815及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20815包括SEQ ID NO.131-132。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20816及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20816包括SEQ ID NO.133-134。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20817及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20817包括SEQ ID NO.135-136。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20818及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20818包括SEQ ID NO.137-138。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20819及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20819包括SEQ ID NO.139-140。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20820及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20820包括SEQ ID NO.141-142。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20821及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20821包括SEQ ID NO.143-144。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20822及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20822包括SEQ ID NO.145-146。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20823及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20823包括SEQ ID NO.147-148。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20824及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20824包括SEQ ID NO.149-150。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20825及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20825包括SEQ ID NO.151-152。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20826及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20826包括SEQ ID NO.153-154。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20827及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20827包括SEQ ID NO.155-156。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20828及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20828包括SEQ ID NO.157-158。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20829及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20829包括SEQ ID NO.159-160。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20830及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20830包括SEQ ID NO.161-162。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20831及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20831包括SEQ ID NO.163-164。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20832及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20832包括SEQ ID NO.165-166。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20833及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20833包括SEQ ID NO.167-168。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20834及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20834包括SEQ ID NO.169-170。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20835及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20835包括SEQ ID NO.171-172。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20836及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20836包括SEQ ID NO.173-174。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20837及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20837包括SEQ ID NO.175-176。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20838及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20838包括SEQ ID NO.177-178。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20839及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20839包括SEQ ID NO.179-180。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20840及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20840包括SEQ ID NO.181-182。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20841及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20841包括SEQ ID NO.183-184。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20842及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20842包括SEQ ID NO.185-186。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20843及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20843包括SEQ ID NO.187-188。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20844及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20844包括SEQ ID NO.189-190。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20845及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20845包括SEQ ID NO.191-192。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20846及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20846包括SEQ ID NO.193-194。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20847及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20847包括SEQ ID NO.195-196。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20848及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20848包括SEQ ID NO.197-198。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20849及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20849包括SEQ ID NO.199-200。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20850及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20850包括SEQ ID NO.201-202。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20851及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20851包括SEQ ID NO.203-204。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20852及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20852包括SEQ ID NO.205-206。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20861及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20861包括SEQ ID NO.207-208。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20862及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20862包括SEQ ID NO.209-210。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20863及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20863包括SEQ ID NO.211-212。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20864及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20864包括SEQ ID NO.213-214。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20865及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20865包括SEQ ID NO.215-216。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20866及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20866包括SEQ ID NO.217-218。
在一个实施方案中，本公开内容涉及包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与AD-20867及其修饰的变体的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20867包括SEQ ID NO.219-220。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种实施方案
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20805的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20805包括SEQ ID NO.111和112。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20806的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20806包括SEQ ID NO.113和114。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20807的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20807包括SEQ ID NO.115和116。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20808的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20808包括SEQ ID NO.117和118。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20809的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20809包括SEQ ID NO.119和120。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20810的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20810包括SEQ ID NO.121和122。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20811的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20811包括SEQ ID NO.123和124。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20812的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20812包括SEQ ID NO.125和126。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20813的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20813包括SEQ ID NO.127和128。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20814的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20814包括SEQ ID NO.129和130。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20815的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20815包括SEQ ID NO.131和132。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20816的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20816包括SEQ ID NO.133和134。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20817的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20817包括SEQ ID NO.135和136。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20818的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20818包括SEQ ID NO.137和138。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20819的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20819包括SEQ ID NO.139和140。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20820的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20820包括SEQ ID NO.141和142。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20821的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20821包括SEQ ID NO.143和144。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20822的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20822包括SEQ ID NO.145和146。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20823的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20823包括SEQ ID NO.147和148。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20824的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20824包括SEQ ID NO.149和150。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20825的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20825包括SEQ ID NO.151和152。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20826的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20826包括SEQ ID NO.153和154。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20827的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20827包括SEQ ID NO.155和156。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20828的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20828包括SEQ ID NO.157和158。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20829的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20829包括SEQ ID NO.159和160。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20830的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20830包括SEQ ID NO.161和162。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20831的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20831包括SEQ ID NO.163和164。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20832的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20832包括SEQ ID NO.165和166。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20833的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20833包括SEQ ID NO.167和168。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20834的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20834包括SEQ ID NO.169和170。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20835的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20835包括SEQ ID NO.171和172。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20836的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20836包括SEQ ID NO.173和174。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20837的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20837包括SEQ ID NO.175和176。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20838的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20838包括SEQ ID NO.177和178。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20839的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20839包括SEQ ID NO.179和180。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20840的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20840包括SEQ ID NO.181和182。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20841的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20841包括SEQ ID NO.183和184。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20842的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20842包括SEQ ID NO.185和186。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20843的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20843包括SEQ ID NO.187和188。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20844的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20844包括SEQ ID NO.189和190。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20845的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20845包括SEQ ID NO.191和192。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20846的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20846包括SEQ ID NO.193和194。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20847的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20847包括SEQ ID NO.195和196。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20848的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20848包括SEQ ID NO.197和198。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20849的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20849包括SEQ ID NO.199和200。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20850的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20850包括SEQ ID NO.201和202。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20851的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20851包括SEQ ID NO.203和204。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20852的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20852包括SEQ ID NO.205和206。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20861的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20861包括SEQ ID NO.207和208。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20862的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20862包括SEQ ID NO.209和210。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20863的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20863包括SEQ ID NO.211和212。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20864的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20864包括SEQ ID NO.213和214。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20865的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20865包括SEQ ID NO.215和216。
在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20866的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20866包括SEQ ID NO.217和218。
以及在一个实施方案中，组合物包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与AD-20867的反义链存在0个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸，所述AD-20867包括SEQ ID NO.219和220。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种实施方案
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20805，其包括SEQ ID NO.1和2。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20806，其包括SEQ ID NO.3和4。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20807，其包括SEQ ID NO.5和6。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20808，其包括SEQ ID NO.7和8。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20809，其包括SEQ ID NO.9和10。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20810，其包括SEQ ID NO.11和12。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20811，其包括SEQ ID NO.13和14。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20812，其包括SEQ ID NO.15和16。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20813，其包括SEQ ID NO.17和18。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20814，其包括SEQ ID NO.19和20。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20815，其包括SEQ ID NO.21和22。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20816，其包括SEQ ID NO.23和24。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20817，其包括SEQ ID NO.25和26。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20818，其包括SEQ ID NO.27和28。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20819，其包括SEQ ID NO.29和30。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20820，其包括SEQ ID NO.31和32。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20821，其包括SEQ ID NO.33和34。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20822，其包括SEQ ID NO.35和36。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20823，其包括SEQ ID NO.37和38。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20824，其包括SEQ ID NO.39和40。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20825，其包括SEQ ID NO.41和42。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20826，其包括SEQ ID NO.43和44。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20827，其包括SEQ ID NO.45和46。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20828，其包括SEQ ID NO.47和48。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20829，其包括SEQ ID NO.49和50。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20830，其包括SEQ ID NO.51和52。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20831，其包括SEQ ID NO.53和54。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20832，其包括SEQ ID NO.55和56。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20833，其包括SEQ ID NO.57和58。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20834，其包括SEQ ID NO.59和60。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20835，其包括SEQ ID NO.61和62。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20836，其包括SEQ ID NO.63和64。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20837，其包括SEQ ID NO.65和66。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20838，其包括SEQ ID NO.67和68。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20839，其包括SEQ ID NO.69和70。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20840，其包括SEQ ID NO.71和72。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20841，其包括SEQ ID NO.73和74。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20842，其包括SEQ ID NO.75和76。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20843，其包括SEQ ID NO.77和78。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20844，其包括SEQ ID NO.79和80。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20845，其包括SEQ ID NO.81和82。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20846，其包括SEQ ID NO.83和84。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20847，其包括SEQ ID NO.85和86。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20848，其包括SEQ ID NO.87和88。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20849，其包括SEQ ID NO.89和90。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20850，其包括SEQ ID NO.91和92。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20851，其包括SEQ ID NO.93和94。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20852，其包括SEQ ID NO.95和96。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20861，其包括SEQ ID NO.97和98。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20862，其包括SEQ ID NO.99和100。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20863，其包括SEQ ID NO.101和102。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20864，其包括SEQ ID NO.103和104。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20865，其包括SEQ ID NO.105和106。
在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20866，其包括SEQ ID NO.107和108。
以及在一种实施方案中，组合物包含RNAi活性剂的经修饰的变体，其中所述变体包含正义链和反义链，其中所述反义链包含与下述的反义链序列有0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续核苷酸：AD-20867，其包括SEQ ID NO.109和110。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种实施方案
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20805(SEQ ID NO:1和2，或SEQ ID NO:111和112)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20806(SEQ ID NO:3和4，或SEQ ID NO:113和114)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20807(SEQ ID NO:5和6，或SEQ ID NO:115和116)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20808(SEQ ID NO:7和8，或SEQ ID NO:117和118)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20809(SEQ ID NO:9和10，或SEQ ID NO:119和120)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20810(SEQ ID NO:11和12，或SEQ ID NO:121和122)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20811(SEQ ID NO:13和14，或SEQ ID NO:123和124)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20812(SEQ ID NO:15和16，或SEQ ID NO:125和126)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20813(SEQ ID NO:17和18，或SEQ ID NO:127和128)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20814(SEQ ID NO:19和20，或SEQ ID NO:129和130)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20815(SEQ ID NO:21和22，或SEQ ID NO:131和132)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20816(SEQ ID NO:23和24，或SEQ ID NO:133和134)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20817(SEQ ID NO:25和26，或SEQ ID NO:135和136)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20818(SEQ ID NO:27和28，或SEQ ID NO:137和138)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20819(SEQ ID NO:29和30，或SEQ ID NO:139和140)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20820(SEQ ID NO:31和32，或SEQ ID NO:141和142)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20821(SEQ ID NO:33和34，或SEQ ID NO:143和144)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20822(SEQ ID NO:35和36，或SEQ ID NO:145和146)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20823(SEQ ID NO:37和38，或SEQ ID NO:147和148)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20824(SEQ ID NO:39和40，或SEQ ID NO:149和150)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20825(SEQ ID NO:41和42，或SEQ ID NO:151和152)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20826(SEQ ID NO:43和44，或SEQ ID NO:153和154)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20827(SEQ ID NO:45和46，或SEQ ID NO:155和156)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20828(SEQ ID NO:47和48，或SEQ ID NO:157和158)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20829(SEQ ID NO:49和50，或SEQ ID NO:159和160)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20830(SEQ ID NO:51和52，或SEQ ID NO:161和162)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20831(SEQ ID NO:53和54，或SEQ ID NO:163和164)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20832(SEQ ID NO:55和56，或SEQ ID NO:165和166)。
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在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20835(SEQ ID NO:61和62，或SEQ ID NO:171和172)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20836(SEQ ID NO:63和64，或SEQ ID NO:173和174)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20837(SEQ ID NO:65和66，或SEQ ID NO:175和176)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20838(SEQ ID NO:67和68，或SEQ ID NO:177和178)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20839(SEQ ID NO:69和70，或SEQ ID NO:179和180)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20840(SEQ ID NO:71和72，或SEQ ID NO:181和182)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20841(SEQ ID NO:73和74，或SEQ ID NO:183和184)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20842(SEQ ID NO:75和76，或SEQ ID NO:185和186)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20843(SEQ ID NO:77和78，或SEQ ID NO:187和188)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20844(SEQ ID NO:79和80，或SEQ ID NO:189和190)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20845(SEQ ID NO:81和82，或SEQ ID NO:191和192)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20846(SEQ ID NO:83和84，或SEQ ID NO:193和194)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20847(SEQ ID NO:85和86，或SEQ ID NO:195和196)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20848(SEQ ID NO:87和88，或SEQ ID NO:197和198)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20849(SEQ ID NO:89和90，或SEQ ID NO:199和200)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20850(SEQ ID NO:91和92，或SEQ ID NO:201和202)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20851(SEQ ID NO:93和94，或SEQ ID NO:203和204)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20852(SEQ ID NO:95和96，或SEQ ID NO:205和206)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20861(SEQ ID NO:97和98，或SEQ ID NO:207和208)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20862(SEQ ID NO:99和100，或SEQ IDNO:209和210)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20863(SEQ ID NO:101和102，或SEQ IDNO:211和212)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20864(SEQ ID NO:103和104，或SEQ IDNO:213和214)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20865(SEQ ID NO:105和106，或SEQ IDNO:215和216)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20866(SEQ ID NO:107和108，或SEQ IDNO:217和218)。
在一种实施方案中，本公开文本包括AD-20867(SEQ ID NO:109和110，或SEQ IDNO:219和220)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20805的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20806的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20807的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20808的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20809的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20810的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20811的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20812的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20813的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20814的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20815的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20816的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20817的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20818的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20819的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20820的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20821的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20822的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20823的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20824的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20825的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20826的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20827的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20828的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20829的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20830的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20831的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20832的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20833的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20834的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20835的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20836的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20837的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20838的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20839的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20840的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20841的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20842的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20843的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20844的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20845的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20846的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20847的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20848的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20849的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20850的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20851的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20852的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20861的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20862的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20863的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20864的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20865的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20866的反义链的精确序列和长度。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含反义链，所述反义链是AD-20867的反义链的精确序列和长度。在上述多种实施方案中，包含这样的反义链的RNAi活性剂可以包括修饰的核苷酸,3’-端帽,和/或不改变RNAi活性剂的序列或长度的其他修饰，所述反义链是所述RNAi活性剂的所述反义链的精确序列和长度。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种实施方案
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20805的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20806的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20807的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20808的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20809的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20810的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20811的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20812的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20813的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20814的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20815的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20816的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20817的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20818的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20819的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20820的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20821的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20822的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20823的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20824的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20825的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20826的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20827的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20828的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20829的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20830的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20831的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20832的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20833的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20834的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20835的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20836的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20837的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20838的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20839的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20840的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20841的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20842的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20843的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20844的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20845的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20846的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20847的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20848的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20849的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20850的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20851的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20852的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20861的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20862的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20863的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20864的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20865的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20866的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20867的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种实施方案
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20805的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围，例如，0-1、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10、2-3、2-4或2-5nt等)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20806的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20807的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20808的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20809的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20810的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20811的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20812的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20813的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20814的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20815的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20816的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20817的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20818的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20819的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20820的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20821的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20822的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20823的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20824的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20825的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20826的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20827的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20828的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20829的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20830的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20831的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20832的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20833的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20834的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20835的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20836的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20837的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20838的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20839的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20840的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20841的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20842的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20843的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20844的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20845的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20846的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20847的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20848的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20849的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20850的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20851的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20852的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20861的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20862的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20863的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20864的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20865的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20866的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
在一个实施方案中，RNAi活性剂包含由与AD-20867的反义链的序列具有0、1、2或3个错配的序列组成的反义链，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10nt(或其任意范围)。
其他特定的具体实施方案
在多个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与本文公开的任何RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸。
因此，在多个实施方案中：
本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包括与下列双链体或其修饰的或未修饰的变体的任何一种或多种的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续的核苷酸：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834、AD-20805、AD-20806、AD-20808、AD-20809、AD-20810、AD-20811、AD-20812、AD-20813、AD-20814、AD-20815、AD-20816、AD-20817、AD-20818、AD-20819、AD-20820、AD-20821、AD-20822、AD-20823、AD-20824、AD-20825、AD-20827、AD-20828、AD-20829、AD-20830、AD-20831、AD-20833、AD-20835、AD-20836、AD-20838、AD-20839、AD-20840、AD-20841、AD-20842、AD-20843、AD-20844、AD-20845、AD-20846、AD-20847、AD-20849、AD-20850、AD-20851、AD-20852、AD-20862、AD-20863、AD-20864、AD-20865、AD-20866、AD-20867或其修饰的或未修饰的变体。
其他特定的具体实施方案
在多个实施方案中，本公开内容包括包含第一链和第二链的RNAi活性剂，其中第一链的序列包含与本文公开的任何RNAi活性剂的第一链序列存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续的核苷酸，而第二链的序列包含与本文公开的任何RNAi活性剂的第二链序列存在0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续的核苷酸。
因此，在多个实施方案中：
本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中第一链的序列包含与下列双链体或其修饰的或未修饰的变体的任何一种或多种的第一链的序列存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续的核苷酸，而第二链的序列包含与下列双链体或其修饰的或未修饰的变体的任何一种或多种的第二链序列存在0、1、2或3个核苷酸差异的至少15个连续的核苷酸：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834、AD-20805、AD-20806、AD-20808、AD-20809、AD-20810、AD-20811、AD-20812、AD-20813、AD-20814、AD-20815、AD-20816、AD-20817、AD-20818、AD-20819、AD-20820、AD-20821、AD-20822、AD-20823、AD-20824、AD-20825、AD-20827、AD-20828、AD-20829、AD-20830、AD-20831、AD-20833、AD-20835、AD-20836、AD-20838、AD-20839、AD-20840、AD-20841、AD-20842、AD-20843、AD-20844、AD-20845、AD-20846、AD-20847、AD-20849、AD-20850、AD-20851、AD-20852、AD-20862、AD-20863、AD-20864、AD-20865、AD-20866、AD-20867或其修饰的或未修饰的变体。
其他特定的实施方案
在多个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包括本文公开的任何RNAi活性剂的反义链，或者由本文公开的任何RNAi活性剂的反义链组成。
因此，提供下列作为多种实施方案的实例。
本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包括下述的反义链，或者由下述的反义链组成：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834、AD-20805、AD-20806、AD-20808、AD-20809、AD-20810、AD-20811、AD-20812、AD-20813、AD-20814、AD-20815、AD-20816、AD-20817、AD-20818、AD-20819、AD-20820、AD-20821、AD-20822、AD-20823、AD-20824、AD-20825、AD-20827、AD-20828、AD-20829、AD-20830、AD-20831、AD-20833、AD-20835、AD-20836、AD-20838、AD-20839、AD-20840、AD-20841、AD-20842、AD-20843、AD-20844、AD-20845、AD-20846、AD-20847、AD-20849、AD-20850、AD-20851、AD-20852、AD-20862、AD-20863、AD-20864、AD-20865、AD-20866、AD-20867或其修饰的或未修饰的变体。
在多个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与本文公开的任何RNAi活性剂或其修饰的或未修饰的变体的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续的核苷酸，其中反义链任选的还包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多nt(或其任意范围，例如，0-1、1-2、1-3、1-4nt等)。
因此，在多个实施方案中，本公开内容包括包含正义链和反义链的RNAi活性剂，其中反义链包含与下述的反义链存在0、1、2或3nt的差异的至少15个连续的核苷酸：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834、AD-20805、AD-20806、AD-20808、AD-20809、AD-20810、AD-20811、AD-20812、AD-20813、AD-20814、AD-20815、AD-20816、AD-20817、AD-20818、AD-20819、AD-20820、AD-20821、AD-20822、AD-20823、AD-20824、AD-20825、AD-20827、AD-20828、AD-20829、AD-20830、AD-20831、AD-20833、AD-20835、AD-20836、AD-20838、AD-20839、AD-20840、AD-20841、AD-20842、AD-20843、AD-20844、AD-20845、AD-20846、AD-20847、AD-20849、AD-20850、AD-20851、AD-20852、AD-20862、AD-20863、AD-20864、AD-20865、AD-20866、AD-20867或其修饰的或未修饰的变体，其中反义链任选的还包括0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多nt(或其任意范围，例如，0-1、1-2、1-3、1-4nt等)。
在多个实施方案中，本公开内容包括包含第一链和第二链的RNAi活性剂，其中第一链的序列包括本文公开的任何RNAi活性剂或其修饰的或未修饰的变体的第一链序列，或者由本文公开的任何RNAi活性剂或其修饰的或未修饰的变体的第一链序列组成，以及第二链的序列包括本文公开的任何RNAi活性剂或其修饰的或未修饰的变体的第二链序列，或者由本文公开的任何RNAi活性剂或其修饰的或未修饰的变体的第二链序列组成。
因此，在多个实施方案中，本公开内容包含第一链和第二链的RNAi活性剂，其中第一链的序列包括下述的第一链序列，或由下述的第一链序列组成，以及第二链的序列包括下述的第二链序列，或由下述的第二链序列组成：AD-20832；AD-20848；AD-20807；AD-20826；AD-20837；AD-20861；AD-20834、AD-20805、AD-20806、AD-20808、AD-20809、AD-20810、AD-20811、AD-20812、AD-20813、AD-20814、AD-20815、AD-20816、AD-20817、AD-20818、AD-20819、AD-20820、AD-20821、AD-20822、AD-20823、AD-20824、AD-20825、AD-20827、AD-20828、AD-20829、AD-20830、AD-20831、AD-20833、AD-20835、AD-20836、AD-20838、AD-20839、AD-20840、AD-20841、AD-20842、AD-20843、AD-20844、AD-20845、AD-20846、AD-20847、AD-20849、AD-20850、AD-20851、AD-20852、AD-20862、AD-20863、AD-20864、AD-20865、AD-20866、AD-20867。
在一个实施方案中，本公开内容包括本文列举的任何一种或多种RNAi活性剂。
针对β-ENaC的RNAi活性剂的重叠集合
在多个实施方案中，本公开内容涉及具有重叠序列的针对β-ENaC的RNAi活性剂组。因此，本公开内容涵盖了这样的RNAi活性剂组，其中组内的每种RNAi活性剂与同一组中的RNAi活性剂彼此重叠至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或更多个核苷酸。特别的，在一个实施方案中，重叠是至少12nt。
本文列举的一些RNAi活性剂的序列彼此重叠。表2展示了这些重叠RNAi活性剂组中一些的集合，其中组中的每个成员与同一组的成员彼此重叠至少12nt。展示了正义链和反义链的12-nt重叠部分。
因此，例如，如表2所示，RNAi活性剂AD-20807和AD-20832的序列重叠，其中正义链中的重叠包括序列UGAAGAAGUACC(SEQ ID NO：223)；这些RNAi活性剂还在反义链序列中重叠，其中重叠包括序列GGUACUUCUUCA(SEQ ID NO：224)。RNAi活性剂AD-20807、AD-20862和AD-20832都在正义链中重叠，其中重叠包括序列GAAGAAGUACCU(SEQ ID NO：225)；这些RNAi活性剂还在反义链中重叠，其中重叠包括序列AGGUACUUCUUC(SEQ ID NO：226)。因此，表2中展示的重叠RNAi活性剂的上述和其他多种集合共享共同技术特征，例如，正义链和反义链中的重叠。
下表2提供了重叠的针对β-ENaC的RNAi活性剂的特定组合。
因此，本公开内容涵盖了包含共同技术特征的RNAi活性剂的任何组或亚组，其中共同技术特征是正义链或反义链序列中的重叠(例如，至少12nt)。
因此：
本公开内容涵盖了这样的RNAi活性剂，其包含：包含与下述组的任何的反义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸，和/或包含与下述组的任何的正义链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸，所述组是AD-20807和AD-20832的组(或表2中展示的任何其他组)。
本公开内容涵盖了包含第一链和第二链的RNAi活性剂，其中第一链包含与下述组的任何的第一链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸，和/或第二链包含与下述组的任何的第二链存在0、1、2或3nt差异的至少15个连续的核苷酸，所述组是AD-20807和AD-20832的组(或表2中展示的任何其他组)。
本公开内容涵盖了包含第一链和第二链的RNAi活性剂，其中第一链包括AD-20807和AD-20832的组(或表2中展示的任何其他组)的任何第一链序列或由其组成，和/或第二链包括AD-20807和AD-20832的组(或表2中展示的任何其他组)的任何序列或由其组成。
本公开内容涵盖了包含第一链和第二链的RNAi活性剂(其中第一链和第二链可以任选的共价连接、通过环或接头连接或者是连续的)，且其中第一和/或第二链包括这样的序列、基本上由或由这样的序列组成，所述序列与AD-20807和AD-20832的组(或表2中展示的任何其他组)的任何(序列)具有0、1、2或3nt或bp错配，任选的还包括0-10nt或bp。
类似的，本公开内容涵盖了包括表2中展示的重叠RNAi活性剂组的多种实施方案。
其他定义
冠词“单数形式”在本文中和权利要求中指一个或多于一个(至少一个)冠词的语法对象。
术语“RNAi活性剂”及其各种词性形式都没有限制的指本公开内容的一种或多种RNAi活性剂。
本文公开的针对β-ENaC的RNAi活性剂的特定双链体实例的名称偶尔在数字后具有后缀“b”。这表示批次号。因此，后缀“b1”表示“批次1”。因此，命名为例如“AD-20807-b1”的RNAi双链体具体是来自批次1，具有与命名为“AD-20807”的任何RNAi活性剂相同的序列。
除非另外定义，本文使用的技术和科学术语具有与熟悉本公开内容所属领域的技术人员通常理解的相同含义。
除非另外指出，没有具体详细描述的所有方法、步骤、技术和操作都可以按熟练的技术人员清楚的本身已知的方式实施。再次对例如本文提及的标准手册和普通背景技术，及其中引用的其他参考文献进行引用。
本公开内容的权利要求是非限制性的，提供如下。
虽然本文中详细的公开了特定的实施方案和权利要求，但这是仅出于例如示例的目的的，并非意在限制所附权利要求的范围或任何相应的未来申请的权利要求主题的范围。特别的是，本发明人考虑，在不脱离权利要求定义的本公开内容的精神和范围的条件下，对本公开内容进行多种替代、改变和修饰。核酸起始材料、目标克隆或文库类型的选择被认为对于具有本文所述实施方案的知识的本领域普通技术人员而言是常规的。其他方面、优点和修饰被认为落入下列权利要求的范围内。在之后提交的相应申请中重新撰写权利要求范围可能是由于各国专利法的限制，而不应被视为放弃权利要求的主题。
本领域的普通技术人员可以探寻所描述的针对β-ENaC的RNAi活性剂的多种其他制剂和明显变体。针对β-ENaC的RNAi活性剂的非限制性实例描述在下文实施例中，实施例不限制权利要求描述的本公开内容的范围。
实施例
实施例1
生物信息学和β-ENaC RNAi活性剂(siRNA)序列
设计β-ENaC寡核苷酸，鉴别编码β-ENaC基因(人的“钠通道、非电压门控1β”(NCBI人符号SCNN1B)和来自食蟹猴(Macaca fascicularis)和大鼠(Rattus norvegicus)的直向同源序列)的siRNA靶向mRNA。设计方法使用人的SCNNB1转录物NM_000336.2(NCBI GeneId6338)、大鼠的NM_012648.1(NCBI GeneId 24767)和食蟹猴的全长序列(本文所述)。
所有的siRNA双链体都被设计为与所有三种SCNNB1转录物具有100％同一性。所有序列都来自转录物NM_000336。
未修饰的和修饰的序列列举在表1中。未修饰的序列包括列为SEQ ID NO：111至220的正义和反义序列。还提供了相比在SEQ ID NO：222中人β-ENaC转录物的第一残基的相对位置。
如下所述，表1还提供了这些序列的修饰变体的实例(SEQ ID NO：1至110)。关于表1的列，“S”代表正义链，“AS”代表反义链，而“Pos’n”代表第一核苷酸的位置。修饰的核苷酸，如小写字母所示(例如，“c”和“u”)，如下表1A所述。
在表1的序列中，修饰的和未修饰的序列可以任选的在3’端包括序列“dTsdT”。因此例如，AD-20805可任选的在正义链中具有修饰的序列cAGuGAcuAcAAcAcGAccdTsdT(SEQID NO：429)和在反义链中具有GGUCGUGUUGuAGUcACUGdTsdT(SEQ ID NO：430)。如下表1A所述，dT是2'-脱氧胸苷-5’-磷酸，而sdT是2'-脱氧胸苷5'-硫代磷酸。
表1.β-ENaC序列
Figure BDA0001485032840001251
Figure BDA0001485032840001261
Figure BDA0001485032840001271
Figure BDA0001485032840001281
本领域技术人员易于构想SEQ ID NO：111至220的RNAi活性剂的序列修饰。考虑了这些序列的例子和非限制性修饰，并列举在表1中，例如，SEQ ID NO：1至110中的正义和反义(AS)序列。
在预测对内切核酸酶敏感的位点放置了一些修饰。设计了一些修饰，以消除对siRNA的免疫应答同时保持活性。通常，正义链被重度修饰，反义链被轻度修饰。一些修饰是出于一个以上目的。
表1和其他表格中的序列用下列缩写表示：
表1A.缩写
Figure BDA0001485032840001282
Figure BDA0001485032840001291
siRNA序列选择
如表2所述，共计合成了55条正义和55条反义人SCNNB1-来源的siRNA寡聚体(针对β-ENaC的RNAi活性剂)。正义及其相应的反义寡聚体退火成为双链体。
实施例1A
β-ENaC RNAi活性剂的重叠集合
本公开内容还涉及具有重叠序列的针对β-ENaC的RNAi活性剂组。因此，本公开内容涵盖了这样的RNAi活性剂组，其中组内的每种RNAi活性剂都与同一组内的RNAi活性剂彼此重叠至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或更多个核苷酸。特别的，在一个实施方案中，重叠是至少12nt。
本文列举的一些RNAi活性剂的序列彼此重叠。表2展示了这些重叠RNAi活性剂组中的一些的集合，其中组中的每个成员与同一组的成员彼此重叠至少12nt。展示了正义链和反义链的12-nt重叠部分。
因此，例如，如表2所示，RNAi活性剂AD-20807和AD-20832的序列重叠，其中正义链中的重叠包括序列UGAAGAAGUACC(SEQ ID NO：223)；这些RNAi活性剂还在反义链序列中重叠，其中重叠包括序列GGUACUUCUUCA(SEQ ID NO：224)。RNAi活性剂AD-20807、AD-20862和AD-20832都在正义链中重叠，其中重叠包括序列GAAGAAGUACCU(SEQ ID NO：225)；这些RNAi活性剂还在反义链序列中重叠，其中重叠包括序列AGGUACUUCUUC(SEQ ID NO：226)。因此，表2中展示的重叠RNAi活性剂的上述和其他多种集合共享共同技术特征，例如，正义链和反义链中的重叠。
下表2提供了重叠的针对β-ENaC的RNAi活性剂的特定集合。
因此，本公开内容涵盖了包含共同技术特征的任何RNAi活性剂组或亚组，其中共同技术特征是正义链或反义链中序列的重叠(例如，至少12nt的重叠)。
表2
Figure BDA0001485032840001301
Figure BDA0001485032840001311
Figure BDA0001485032840001321
Figure BDA0001485032840001331
Figure BDA0001485032840001341
标出了NM_000336.2中的位置(“Pos”)。展示了正义和反义链中的示例性12nt重叠；在许多情况下，重叠实际上更长。
实施例2
合成β-ENaC RNAi活性剂序列
在MerMade 192合成仪上，按1μmol规模合成表1的列为SEQ ID NO：1至110的修饰的β-ENaC RNAi活性剂序列。
对于列表中的所有序列而言，“endolight”化学按照如下详述来应用。
正义链中所以嘧啶类(胞嘧啶和尿苷)含有2’-O-甲基碱基(2’O-甲基C和2’-O-甲基U)。
在反义链中，与核糖A核苷相邻的嘧啶(即朝向5’位置)被其相应的2-O-甲基核苷替换。
正义和反义序列二者的3’端引入二碱基dTsdT延伸。
将序列文件转换为文本文件，使其兼容于载入MerMade 192合成软件。
合成、切割和去保护：
β-ENaC序列的合成利用使用亚磷酰胺化学的固体支持的寡核苷酸合成来进行。
上述序列的合成按1um规模在96孔板中进行。制备0.1M浓度的amidite溶液，乙基硫代四唑(乙腈中0.6M)被用作为活化剂。
在第一步中使用甲基胺，以及在第二步中使用氟化物试剂，在96孔板中对合成的序列进行切割和去保护。使用丙酮:乙醇(80:20)混合物来沉淀粗制的序列，将沉淀重悬于0.2M乙酸钠缓冲液中。分析来自每种序列的样品，通过LC-MS验证身份，通过UV进行定量，通过IEX色谱对选择的样品的组测定纯度。
纯化和脱盐：
在AKTA explorer纯化系统上使用Source 15Q柱来纯化β-ENaC序列。纯化期间保持柱温65C。样品注射和收集在96孔(1.8mL-深孔)板上进行。对应全长序列的单个峰被收集于洗脱液中。在Sephadex G25柱上，使用AKTA纯化仪，对经纯化的序列脱盐。分析脱盐的β-ENaC序列的浓度(通过在A260的UV测量)和纯度(通过离子交换HPLC)。
然后，将单链进行退火。
β-ENaC单链和双链体的详细列表显示在上表1中。双链体用于体外筛选，测试其敲低β-ENaC基因水平的能力。
实施例3.
体外筛选β-ENaC RNAi活性剂
在体外筛选β-ENaC RNAi活性剂，确定其敲低β-ENaC基因水平的能力。
细胞培养和转染：
在用胰蛋白酶消化从平板释放之前，将H441(ATCC,Manassas,VA)细胞在补充了10％FBS、链霉素和谷氨酰胺(ATCC)的RPMI 1640(ATCC)中，37℃和5％CO2大气压下生长至基本汇合。通过向96孔板的每个孔的5μl siRNA双链体中加入5μl Opti-MEM以及10μlOpti-MEM和0.2μl Lipofectamine RNAiMax/孔(Invitrogen,Carlsbad CA.cat#13778-150)，在室温孵育15分钟，进行反向转染。然后，加入不含抗生素的80μl完全生长培养基，其中含有2.0x104H441细胞。在RNA纯化前，孵育细胞24小时。在0.1或10nM最终双链体浓度下，用55种β-ENaC双链体中的每一种，进行单个剂量筛选的实验。在每个测试剂量，转染每种siRNA3次。结果显示在表3中。
在从10nM至10fM的浓度范围，使用系列稀释测定在10nM和0.1nM筛选中表现出强沉默的双链体亚组，确定其IC50。结果显示在表4。
总RNA分离：
收获细胞，在140μl裂解/结合溶液中裂解，然后使用Eppendorf Thermomixer在850rpm混合1分钟(在过程中混合速度相同)。
使用MagMAX-96总RNA分离试剂盒(Applied Biosystem,Foster City CA,part#：AM1830)分离总RNA。向细胞裂解物中加入20微升磁珠和裂解/结合增强剂混合物。使用磁座(magnetic stand)捕获磁珠，在不扰动珠子的情况下移出上清液。移出上清液后，用洗涤溶液1(加入了异丙醇)洗磁珠，并混合1分钟。再次捕获珠子并移出上清液。然后用150μl洗涤溶液2(加入了乙醇)洗珠子，捕获，并移出上清液。然后向珠子中加入50ul DNase混合物(MagMax turbo Dnase缓冲液和Turbo DNase)，并对它们混合10至15分钟。混合后，加入100μl RNA再结合溶液，并混合3分钟。移出上清液，再用150μl洗涤溶液2洗磁珠，并混合1分钟，完全移出上清液。在用50μl水洗脱RNA之前，对磁珠混合2分钟至干。
cDNA合成：
使用ABI高容量cDNA逆转录试剂盒(Applied Biosystems,Foster City,CA,Cat#4368813)进行cDNA合成。向10μl总RNA中加入2μl 10X缓冲液、0.8μl 25X dNTP、2μl随机引物、1μl逆转录酶、1μl RNA酶抑制剂和3.2μl H2O/反应的主混合物。使用Bio-Rad C-1000或S-1000热循环仪(Hercules,CA)，通过下列步骤：25℃ 10min，37℃ 120min，85℃ 5sec，4℃维持，产生cDNA。
实时PCR：
在LightCycler 480 384孔板(Roche cat#0472974001)中，按每孔共计10μl，向含有0.5ul GAPDH TaqMan探针(Applied Biosystems.Cat#4326317E)、0.5μlβ-ENaC TaqMan探针(Applied Biosystems cat#Hs00165722_m1)和5μl Roche Probes Master Mix(RocheCat#04887301001)的主混合物中加入2μl cDNA。在LightCycler 480实时PCR机器(Roche)中进行实时PCR。在2次独立的转染中测试每种双链体，每次转染重复测定2次。
使用ΔΔCt方法分析实时数据。根据GAPDH表达将各个样品归一化，相对于用非靶向双链体AD-1955转染的细胞评估敲低。使用XL拟合中的4参数拟合模型定义IC50。
结果显示如下。表3显示了在0.1nM或10nM终双链体浓度条件下，用55种β-ENaC双链体中的每一种实施单剂量筛选的实验结果。“剩余的信息分数(Fraction messageremaining)”表示在10nM或0.1nM时剩余的基因水平。因此，在AD-20832-b1第2列的“0.17”表示在10nM浓度时，有17％剩余基因水平或83％的表达敲低。还注意后缀“b1”表示“批次1”。因此，例如，具有名称“AD-20832-b1”的RNAi活性剂具有与名称为“AD-20832”的RNAi活性剂相同的序列。
表3.10nM和0.1nM的β-ENaC降低
Figure BDA0001485032840001381
Figure BDA0001485032840001391
Figure BDA0001485032840001401
这些实验中使用的所有β-ENaC RNAi活性剂是表1列举的修饰的序列(SEQ ID NO：1至110)。
表4显示了实验结果，其中，在从10nM至10fM的浓度范围，使用系列稀释测定在10nM和0.1nM筛选中表现出强沉默的双链体亚组，确定其IC50。
表4.β-ENaC剂量响应筛选
Figure BDA0001485032840001402
实施例4
β-ENaC RNAi活性剂AD-20807和AD-20832的体内分析
在体内实验中，测试2种β-ENaC RNAi活性剂：AD-20807和AD-20832在大鼠中敲低全肺的β-ENaC基因水平的能力。目的是确定剂量响应。还测量了免疫刺激。
使用的大鼠品系是Sprague-Dawley；个体具有约280-300克体重。2天时间内每天向大鼠给药1次。然后，在第2次给药约24小时后处死大鼠。取出左肺，磨碎进行qPCR确定β-ENaC水平；冷冻并储藏右肺。
表5.
Figure BDA0001485032840001411
*在4只的组中，最初给药5只大鼠，但组内1只未能在实验过程中存活，未包括在最终数据内。
以剂量依赖性方式，β-ENaC的RNAi活性剂AD20807和AD20832表现出β-ENaC水平降低。对于AD20807，在1、3和10mg/kg的剂量下，β-ENaC的水平分别降低约30％、40％和50％。
相反，β-ENaC(bENaC)RNAi活性剂不减少α-ENaC(aENaC)的水平。然而，施用AD20832增加α-ENaC.
阴性对照包括：
D5W：5％右旋糖的水溶液；这是给药时用于稀释siRNA的载体；AD1955：不特异性靶向α-或β-ENaC，但靶向萤火虫荧光素酶的siRNA；AD20191：不结合β-ENaC但靶向大鼠α-ENaC的siRNA；AD-9201，靶向α-ENaC(未用于该特定实施例中)。
因此，在该实验中，可见用RNAi活性剂AD20807和AD20832特异性敲低β-ENaC。
实施例5
β-ENaC AD-20834的体内分析
在体内实验中，测试β-ENaC RNAi活性剂AD20834在大鼠中敲低全肺的β-ENaC基因水平的能力。目的是确定剂量响应。还测量了免疫刺激。
大鼠品系是Sprague-Dawley；个体具有约280-300克体重。2天时间内每天向大鼠给药1次。然后，在第2次给药约24小时后处死大鼠。取出左肺，磨碎进行qPCR确定β-ENaC水平；冷冻并储藏右肺。
表6.
组 大鼠#s 制剂 (浓度 只大鼠/组
1 1-5 D5W NA 5
2 6-10 AD1955 10mg/kg 4＊
3 11-15 AD20191 10mg/kg 5
4 16-20 AD20834 10mg/kg 5
5 21-25 AD20834 3mg/kg 5
6 26-30 AD20834 1mg/kg 4＊
＊在4只的组中，最初给药5只大鼠，但每组内1只未能在实验过程中存活，未包括在最终数据内。
假设体重300克(0.3kg)，进行下列稀释：
10mg/kg＝200uL体积中3mg siRNA＝15mg/mL
3mg/kg＝200uL体积中1mg siRNA＝5mg/mL
1mg/kg＝200uL体积中0.3mg siRNA＝1.5mg/mL
根据PPIB(肽基-脯氨酰顺反异构酶B，用作持家(归一化)基因)将数据归一化。
实验显示β-ENaC RNAi活性剂AD20834在Sprague-Dawley大鼠中降低β-ENaC水平约40％.该效应是β-ENaC特异性的。
对照如下：D5W(5％右旋糖的水溶液)是阴性对照，未表现出对α-ENaC或β-ENaC水平的影响。AD1955，不结合α-或β-ENaC的对照siRNA，对α-或β-ENaC水平也表现出几乎没有影响。靶向α-而非β-ENaC的阳性对照siRNA AD20191，对α-ENaC水平表现出降低约50％，而不影响β-ENaC。
因此，在Sprague-Dawley大鼠中，10mg/kgβ-ENaC RNAi活性剂AD20834的剂量表现出抑制至少约40％的β-ENaC基因表达。
实施例6
分析β-ENaC RNAi活性剂
在Sprague-Dawley大鼠中，用β-ENaC RNAi活性剂AD20807、AD20832、AD20834、AD20848和AD20861进行体内其他实验。在第1和第2天，对大鼠给药在D5W中的10mg/kg，在第3天处死，收集肺。
结果显示在图1中。结果显示了左肺的qPCR数据，根据对照基因PPIB归一化。
图1的对照如下：D5W(5％右旋糖的水溶液)是阴性对照，未表现出对α-ENaC或β-ENaC水平的影响。阳性对照是靶向α-ENaC(aENaC)的AD-9201。
如图1所示，结果显示AD20807、AD20832、AD20834、AD20848和AD20861对β-ENaC(bENaC)的统计学显著和特异性的敲低。在Sprague-Dawley大鼠中，浓度为10mg/kg的这些RNAi活性剂抑制β-ENaC基因表达至少约40％。
实施例7
在人支气管上皮细胞中，β-ENaC RNAi活性剂AD20832对ENaC通道功能活性的体外影响
用指出的siRNA(包括β-ENaC RNAi活性剂AD20832)转染人支气管上皮细胞(HBEC)。将转染的细胞接种到Snapwell插入物上，培养24小时。之后，从每个插入物去除顶层培养基，在气液界面(ALI)培养细胞。在所述ALI后第8天，测定细胞的ENaC和CFTR活性。为了控制细胞活力，根据CFTR活性将ENaC功能归一化，数据显示为相对于未转染对照的百分比(图2A)。作为额外的活力对照，还测量跨膜抗阻(图2B)。对每种插入物实施α和βENaC亚基mRNA的表达分析，并根据GAPDH表达归一化(图2C)。数据证实抑制mRNA 70％表达足以产生ENaC通道50％功能抑制。对于α或β亚基，这一各自相比未转染(neg)和非特异性(ns)siRNA对照的敲低都是真实的。数据还显示βENaC siRNA不抑制αENaC mRNA表达，反之亦然。
方法：人支气管上皮细胞中的ENaC功能活性
人支气管上皮细胞(HBEC)购自Lonza，并在生长培养基(BEGM和singlequots-Lonza)中冷冻前传代1次。之后，解冻细胞，扩增至汇合，1:10分离用于转染。一旦达到80％汇合度，就在总体积30mL转染培养基(BEGM(Lonza)和DMEM高糖(Gibco)的1:1混合物，不含添加剂)中，使用2μL/mL Lipofectamine 2000向每瓶细胞转染30nM指出的siRNA。在转染24小时后，按2.5x105细胞/插入物，在不同的培养基(BEBM和DMEM/高糖的50:50混合物，含singlequots(减去三-碘代苏氨酸和视黄酸添加物，分别加入50nM全反视黄酸))中，将细胞接种到6孔Snapwell插入物(Costar)上。从顶层给细胞补充0.5mL分化培养基，从底部侧面补充2.5mL分化培养基。再在插入物上培养24小时后，更换底部侧面的培养基并去除顶层培养基，使细胞进入气液界面(ALI)培养。在ALI后第8天(D8)，测定细胞的ENaC和CFTR活性。
为了评估转染细胞的离子运输表型，将Snapwell插入物放置在VerticalDiffusion Chambers(Costar)中，并用保持在37℃的充气的Ringer溶液(O2中含5％CO2；pH7.4)连续浸浴，所述Ringer溶液中含有(mM)：120 NaCl、25 NaHCO3、3.3 KH2PO4、0.8 K2HPO4、1.2 CaCl2、1.2 MgCl2和10葡萄糖(摩尔渗透压浓度维持在280至300mosmol/l)。细胞被电压钳至0mV(模型EVC4000；WPI)。使用30-s间隔的2-mv脉冲，测量跨膜抗阻(TM res)，使用欧姆定律计算TM res。使用PowerLab工作站(ADI Instruments)记录短路电流数据。通过顶层添加10μM ENaC阻断剂阿米洛利(阿米洛利敏感型电流)后短路电流的改变，评估各组的ENaC通道活性。通过顶层和底部侧面添加0.6μM Forskolin(已知激活CFTR)后短路电流的改变(Forskolin响应)，评估通过CFTR的氯分泌。对于每个插入物，根据Forskolin响应将阿米洛利敏感型电流归一化，数据显示为相对于未转染对照的百分比。在研究结束时，裂解每个插入物进行RNA分析(
Figure BDA0001485032840001451
RLT缓冲液-Qiagen)，保留样品用于如所述通过rtPCR进行的后续的mRNA敲低分析。
缩写：
ALI 气液界面
BEGM 支气管上皮生长培养基
D6,D8 第6天，第8天
DMEM Dulbecco改良的Eagle培养基
HBEC 人支气管上皮细胞
TM res 跨膜抗阻
等价形式
包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与表1提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
[00879]段的组合物，其中组合物还包含β-ENaC的第二种RNAi活性剂。
[00879]段的组合物，其中反义链的长度是30个或更少的核苷酸。
[00879]段的组合物，其中正义链和反义链形成长度为15至30个核苷酸对的双链体区。
[00879]段的组合物，其中反义链和正义链的长度分别是19至23个核苷酸。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂包含导致RNAi活性剂在生物学样品或环境中具有增加的稳定性的修饰。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂包含至少一个修饰的主链和/或至少一个2’-修饰的核苷酸。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂包括：
a)至少一个5’-尿苷-腺嘌呤-3’(5’-ua-3’)二核苷酸，其中尿苷是2’-修饰的核苷酸；和/或
b)至少一个5’-尿苷-鸟嘌呤-3’(5’-ug-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸；和/或
c)至少一个5’-胞苷-腺嘌呤-3’(5’-ca-3’)二核苷酸，其中5’-胞苷是2’-修饰的核苷酸；和/或
d)至少一个5’-尿苷-尿苷-3’(5’-uu-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸。
[00879]段的组合物，RNAi活性剂包含选自下组的2’-修饰，所述组由2'-脱氧、2'-脱氧-2’-氟代、2’-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)构成。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂包含平端。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂包含具有1至4个未配对的核苷酸的突出端。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂包含位于RNAi活性剂反义链3’-端的突出端。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂与一种或多种选自诊断性化合物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分(moiety)、天然或非常见核苷碱基(nucleobase)、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基(sarsasapogenin)、无羁萜、无羁萜-3β-醇-衍生的石胆酸(epifriedelanol-derivatized lithocholic acid)、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖(pullulan)、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体(oligo lactate 15-mer)、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子(polycationic)、肽、聚胺、肽模拟物和/或转铁蛋白的活性剂连接。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约60％的β-ENaC基因表达。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约70％的β-ENaC基因表达。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约80％的β-ENaC基因表达。
[00879]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约90％的β-ENaC基因表达。
[00879]段的组合物，其中RNAi具有不超过约0.1nM的EC50。
[00879]段的组合物，其中RNAi具有不超过约0.01nM的EC50。
[00879]段的组合物，其中RNAi具有不超过约0.001nM的EC50。
包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含第一链和第二链，其中第一链和第二链分别包含与表1提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的第一链和第二链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
[00899]段的组合物，其中组合物包含β-ENaC的第二种RNAi活性剂。
[00899]段的组合物，其中第二链的长度是30个或更少的核苷酸。
[00899]段的组合物，其中第一链和第二链形成长度为15至30个核苷酸对的双链体区。
[00899]段的组合物，其中第一链和第二链的长度分别是19至23个核苷酸。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂包含导致RNAi活性剂在生物学样品或环境中具有增加的稳定性的修饰。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂包含硫代磷酸和/或2’-修饰的核苷酸。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂包括：
至少一个5’-尿苷-腺嘌呤-3’(5’-ua-3’)二核苷酸，其中尿苷是2’-修饰的核苷酸；和/或至少一个5’-尿苷-鸟嘌呤-3’(5’-ug-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸；
和/或至少一个5’-胞苷-腺嘌呤-3’(5’-ca-3’)二核苷酸，其中5’-胞苷是2’-修饰的核苷酸；
和/或至少一个5’-尿苷-尿苷-3’(5’-uu-3’)二核苷酸，其中5’-尿苷是2’-修饰的核苷酸。
[00899]段的组合物，RNAi活性剂包含一个或多个选自下组的2’-修饰，所述组由2'-脱氧、2'-脱氧-2’-氟代、2’-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)构成。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂包含平端。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂包含具有1至4个未配对的核苷酸的突出端。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂包含位于反义链3’-端的突出端。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂与一种或多种活性剂连接，所述活性剂选自诊断性化合物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分(moiety)、天然或非常见核苷碱基(nucleobase)、亲脂性分子、胆固醇、脂类、凝集素、类固醇、山楂醇、龙舌兰皂苷配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、萨洒皂苷配基(sarsasapogenin)、无羁萜、无羁萜-3β-醇-衍生的石胆酸(epifriedelanol-derivatized lithocholic acid)、维生素、碳水化合物、右旋糖酐、普鲁兰多糖(pullulan)、壳多糖、壳聚糖、合成碳水化合物、低聚乳酸15体(oligo lactate 15-mer)、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、菊粉、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子(polycationic)、肽、聚胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约60％的β-ENaC基因表达。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约70％的β-ENaC基因表达。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约80％的β-ENaC基因表达。
[00899]段的组合物，其中RNAi活性剂在浓度10nM时，能够在体外抑制H441细胞中至少约90％的β-ENaC基因表达。
[00899]段的组合物，其中RNAi具有不超过约0.1nM的EC50。
[00899]段的组合物，其中RNAi具有不超过约0.01nM的EC50。
[00899]段的组合物，其中RNAi具有不超过约0.001nM的EC50。
治疗个体的β-ENaC相关性疾病的方法，包括步骤：向个体施用治疗有效量的包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与表1提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
[00900]段的方法，其中β-ENaC相关性疾病是囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压。
[00900]段的方法，其中β-ENaC相关性疾病是囊性纤维化。
[00900]段的方法，其中方法还包括施用囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压的其他治疗的步骤。
[00900]段的方法，其中组合物包括针对β-ENaC的第二种RNAi活性剂。
[00900]段的方法，其中方法还包括施用其他针对β-ENaC的RNAi活性剂的步骤。
[00900]段的方法，还包括施用其他的治疗。
[00900]段的方法，其中其他的治疗是组合物。
[00900]段的方法，其中其他的治疗是方法。
[00900]段的方法，其中其他的治疗和RNAi活性剂可以以任何顺序被施用。
抑制个体中的β-ENaC基因表达的方法，包括步骤：向个体施用治疗有效量的包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与表1提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
[00929]段的方法，其中个体患有或易感β-ENaC相关性疾病。
[00929]段的方法，其中β-ENaC相关性疾病是囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压。
[00929]段的方法，其中β-ENaC相关性疾病是囊性纤维化。
[00932]段的方法，还包括施用其他的治疗。
[00933]段的方法，其中其他的治疗是组合物。
[00933]段的方法，其中其他的治疗是方法。
[00933]段的方法，其中其他的治疗和RNAi活性剂可以以任何顺序施用。
用于包含RNAi活性剂的RNAi制剂中的药物，所述RNAi活性剂包含正义链和反义链，其中反义链包含与表1提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异的至少15个连续的核苷酸。
在药学上有效制剂中的任何上述组合物。
[00879]段的组合物，用于治疗个体的β-ENaC相关性疾病的方法中，所述方法包括向个体施用治疗有效量的根据[00879]段的组合物的步骤。
[00879]段的组合物的用途，用于生产治疗β-ENaC相关性疾病的药物。
[00940]段的用途，其中β-ENaC相关性疾病是囊性纤维化、1型假性醛固酮减少症(PHA1)、李德尔综合征、高血压、碱中毒、低钾血症和/或肥胖相关性高血压。
[00879]段的组合物，其中所有的嘧啶都是2’O-甲基修饰的核苷酸。
[00899]段的组合物，其中所有的嘧啶都是2’O-甲基修饰的核苷酸。
序列表
<110> 箭头研究公司
<120> 治疗β-ENaC-相关疾病的有机组合物
<130> 54121
<160> 430
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 1
cagugacuac aacacgacc 19
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
<400> 6
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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aggucguguu guagucacu 19
<210> 23
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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aauaucaccc ugagcagga 19
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<223> RNAi活性剂
<400> 24
uccugcucag ggugauauu 19
<210> 25
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 25
ccugcaggcc accaacauc 19
<210> 26
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 26
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<210> 27
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 27
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<210> 28
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 28
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<210> 29
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 29
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 30
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<210> 31
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 31
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<210> 32
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 32
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 33
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<210> 34
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 34
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 35
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<213> 人工
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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<213> 人工
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<213> 人工
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<212> RNA
<213> 人工
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<220>
<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
<400> 49
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<220>
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
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<223> RNAi活性剂
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<213> 人工
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<220>
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<220>
<223> RNAi活性剂
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<220>
<223> RNAi活性剂
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<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<220>
<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 95
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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ugacagagaa ggcacuucc 19
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 98
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 104
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 106
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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cugcaggcca ccaacaucu 19
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<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 108
agauguuggu ggccugcag 19
<210> 109
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 109
gggcaugaca gagaaggca 19
<210> 110
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 110
ugccuucucu gucaugccc 19
<210> 111
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 111
cagugacuac aacacgacc 19
<210> 112
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 112
ggucguguug uagucacug 19
<210> 113
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 113
augacagaga aggcacuuc 19
<210> 114
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 114
gaagugccuu cucugucau 19
<210> 115
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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gugaagaagu accugcuga 19
<210> 116
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<210> 117
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 117
gugacuacaa cacgaccua 19
<210> 118
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 118
uaggucgugu uguagucac 19
<210> 119
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 119
gguggaggcc cacaccaac 19
<210> 120
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 120
guuggugugg gccuccacc 19
<210> 121
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 121
ugguggaggc ccacaccaa 19
<210> 122
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 122
uugguguggg ccuccacca 19
<210> 123
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 123
uuccaagacc acaugaucc 19
<210> 124
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 124
ggaucaugug gucuuggaa 19
<210> 125
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 125
agcugggagg ucagcgucu 19
<210> 126
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 126
agacgcugac cucccagcu 19
<210> 127
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 127
gggagaaaua cugcaacaa 19
<210> 128
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 128
uuguugcagu auuucuccc 19
<210> 129
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 129
ccaguuuggc uucuggaug 19
<210> 130
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 130
cauccagaag ccaaacugg 19
<210> 131
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 131
agugacuaca acacgaccu 19
<210> 132
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 132
aggucguguu guagucacu 19
<210> 133
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 133
aauaucaccc ugagcagga 19
<210> 134
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 134
uccugcucag ggugauauu 19
<210> 135
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 135
ccugcaggcc accaacauc 19
<210> 136
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 136
gauguuggug gccugcagg 19
<210> 137
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 137
aucacccuga gcaggaagg 19
<210> 138
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 138
ccuuccugcu cagggugau 19
<210> 139
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 139
gcugggaggu cagcgucuc 19
<210> 140
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 140
gagacgcuga ccucccagc 19
<210> 141
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 141
gagcugggag gucagcguc 19
<210> 142
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 142
gacgcugacc ucccagcuc 19
<210> 143
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 143
guggccaguu uggcuucug 19
<210> 144
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 144
cagaagccaa acuggccac 19
<210> 145
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 145
caguuuggcu ucuggaugg 19
<210> 146
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 146
ccauccagaa gccaaacug 19
<210> 147
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 147
ggccaguuug gcuucugga 19
<210> 148
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 148
uccagaagcc aaacuggcc 19
<210> 149
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 149
cuggguggcc aguuuggcu 19
<210> 150
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 150
agccaaacug gccacccag 19
<210> 151
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 151
ucuacaguga cuacaacac 19
<210> 152
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 152
guguuguagu cacuguaga 19
<210> 153
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 153
gcaugacaga gaaggcacu 19
<210> 154
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 154
agugccuucu cugucaugc 19
<210> 155
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 155
auaucacccu gagcaggaa 19
<210> 156
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 156
uuccugcuca gggugauau 19
<210> 157
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 157
cuacagugac uacaacacg 19
<210> 158
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 158
cguguuguag ucacuguag 19
<210> 159
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 159
uaucacccug agcaggaag 19
<210> 160
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 160
cuuccugcuc agggugaua 19
<210> 161
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 161
ugcaggccac caacaucuu 19
<210> 162
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 162
aagauguugg uggccugca 19
<210> 163
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 163
caugacagag aaggcacuu 19
<210> 164
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 164
aagugccuuc ucugucaug 19
<210> 165
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 165
ugaagaagua ccugcugaa 19
<210> 166
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 166
uucagcaggu acuucuuca 19
<210> 167
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 167
gcugguggag gcccacacc 19
<210> 168
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 168
ggugugggcc uccaccagc 19
<210> 169
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 169
uacagugacu acaacacga 19
<210> 170
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 170
ucguguugua gucacugua 19
<210> 171
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 171
acagagaagg cacuuccuu 19
<210> 172
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 172
aaggaagugc cuucucugu 19
<210> 173
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 173
acagugacua caacacgac 19
<210> 174
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 174
gucguguugu agucacugu 19
<210> 175
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 175
ugagcuggga ggucagcgu 19
<210> 176
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 176
acgcugaccu cccagcuca 19
<210> 177
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 177
uggccaguuu ggcuucugg 19
<210> 178
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 178
ccagaagcca aacuggcca 19
<210> 179
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 179
ugucucagga gcgggacca 19
<210> 180
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 180
uggucccgcu ccugagaca 19
<210> 181
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 181
guggaggccc acaccaacu 19
<210> 182
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 182
aguuggugug ggccuccac 19
<210> 183
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 183
ggguggccag uuuggcuuc 19
<210> 184
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 184
gaagccaaac uggccaccc 19
<210> 185
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 185
gguggccagu uuggcuucu 19
<210> 186
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 186
agaagccaaa cuggccacc 19
<210> 187
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 187
ucacccugag caggaaggg 19
<210> 188
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 188
cccuuccugc ucaggguga 19
<210> 189
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 189
gccaguuugg cuucuggau 19
<210> 190
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 190
auccagaagc caaacuggc 19
<210> 191
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 191
agcuggugga ggcccacac 19
<210> 192
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 192
gugugggccu ccaccagcu 19
<210> 193
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 193
aucuccaugg cugacuggc 19
<210> 194
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 194
gccagucagc cauggagau 19
<210> 195
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 195
ggcaugacag agaaggcac 19
<210> 196
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 196
gugccuucuc ugucaugcc 19
<210> 197
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 197
ggagaaauac ugcaacaac 19
<210> 198
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 198
guuguugcag uauuucucc 19
<210> 199
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 199
uggguggcca guuuggcuu 19
<210> 200
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 200
aagccaaacu ggccaccca 19
<210> 201
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 201
gagcuggugg aggcccaca 19
<210> 202
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 202
ugugggccuc caccagcuc 19
<210> 203
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 203
gacagagaag gcacuuccu 19
<210> 204
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 204
aggaagugcc uucucuguc 19
<210> 205
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 205
aguuuggcuu cuggauggg 19
<210> 206
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 206
cccauccaga agccaaacu 19
<210> 207
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 207
ugacagagaa ggcacuucc 19
<210> 208
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 208
ggaagugccu ucucuguca 19
<210> 209
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 209
gaagaaguac cugcugaag 19
<210> 210
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 210
cuucagcagg uacuucuuc 19
<210> 211
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 211
ucuccauggc ugacuggcc 19
<210> 212
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 212
ggccagucag ccauggaga 19
<210> 213
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 213
cugguggagg cccacacca 19
<210> 214
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 214
uggugugggc cuccaccag 19
<210> 215
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 215
cagagaaggc acuuccuuc 19
<210> 216
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 216
gaaggaagug ccuucucug 19
<210> 217
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 217
cugcaggcca ccaacaucu 19
<210> 218
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 218
agauguuggu ggccugcag 19
<210> 219
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 219
gggcaugaca gagaaggca 19
<210> 220
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 220
ugccuucucu gucaugccc 19
<210> 221
<211> 2280
<212> DNA
<213> 食蟹猴
<400> 221
ggtacccagc ttgcttgttc tttttgcaga agctcagaat aaacgctcaa ctttggcaga 60
tcaattcccc ggggatccga attcgccacc atgcacgtga agaagtacct gctgaagtgc 120
ctgcaccggc tgcagaaggg ccccggctac acgtacaagg agctgctggt gtggtactgc 180
gataacacca acacccacgg ccccaagcgt atcatctgcg aggggcccaa gaagaaagcc 240
gtgtggttcc tgctcaccct gctcttcact gctctcgtct gctggcagtg gggcatcttc 300
atcaggacct acttgagctg ggaggtcagc gtctccctct ccgtaggctt caagaccatg 360
gacttccccg ccgtcaccat ctgcaatgct agccccttca agtattccaa agtcaagcat 420
ttgctgaagg acctggatga gctgatggaa gctgtcctgg agagaatcct ggctcctgag 480
ctaagccatg ccaatgccac caggaccctg aactcttcca tctggaacca cacaccactg 540
gtccttattg atgaacggaa cccccaccac cccatggtcc tcgatctctt tggagataac 600
cacaatggct taacaaacag ctcagcatca gaaaagatct gtaatgccca tgggtgcaaa 660
atggccatga gactatgtag cctcaacggg acccagtgca ccttccggaa cttcaccagc 720
gctacccagg cagtgacaga gtggtacagc ctgcaggcca ccaacatctt tgcgcaggtg 780
ccgcagcagg agctggtgga gatgagctac cccggcgagc agatgatcct ggcctgcctg 840
tttggagctg agccctgcaa ctaccggaac ttcacgtcca tcttctaccc tcactatggc 900
aactgttaca tcttcaactg gggcatgaca gagaaggcac ttccttcggc caaccctgga 960
cctgaatttg gcctgaagtt gatcctggac ataggccagg aagactacgt ccccttcctc 1020
gcgtccacgg ctggggtcag gctgatgctt cacgagcaga ggtcataccc cttcatcaga 1080
gacgagggca tctatgccat gtcggggaca gagacgtcca tcggggtact cgtggacaag 1140
cttcagcgca tgggggagcc ctacagcccg tgcaccgtga atggctccga ggtccccgtc 1200
caaaacttct acagtgacta caacacgacc tactccatcc aggcctgtct tcgctcctgc 1260
ttccaagacc acatgatccg tagctgcaag tgtgggcact acctctaccc actgccccgt 1320
ggggagaaat actgcaacaa ccgggacttc ccagactggg cccattgcta ctcagatctg 1380
cagatgagcg tggcgcagag agagacctgc attggcatgt gcaaggaatc ctgcaatgac 1440
acccagtaca agatgactat ctccatggct gactggcctt ctgaggcctc tgaggactgg 1500
attttccacg tcttgtctca ggagcgggac caaagcacca atatcaccct gagcaggaag 1560
ggaattgtca agctcaacat ctacttccaa gaatttaact atcgcaccat tgaagaatca 1620
gcagccaata acctcgtctg gctgctctca aatctgggtg gccagtttgg cttctggatg 1680
gggggctctg tgctgtgcct catcgagttt ggggagatca tcatcgactt tgtgtggatc 1740
accatcatca agctggtggc cttggccaag agcctccggc agcggcgagc ccaagccagc 1800
tactccggcc caccgcccac ggtggctgag ctggtggagg cccacaccaa cttcggctac 1860
cagcctgaca cggccccccg cagccccaac accgggccct accccagtga gcaggccctg 1920
cccatcccgg gcaccccgcc ccccaactat gactccctgc gtctgcagcc actggacgtc 1980
atcgagtctg acagtgaggg tgatgccatc taagcggccg cctagaaata gcttgatctg 2040
gttaccacta aaccagcctc aagaacaccc gaatggagtc tctaagctac ataataccaa 2100
cttacacttt acaaaatgtt gtcccccaaa atgtagccat tcgtatctgc tcctaataaa 2160
aagaaagttt cttcacattc taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaccccc 2220
cccccccccc ccctgcagag atctgctagc ttgagtattc tatagagtca cctaaatact 2280
<210> 222
<211> 2597
<212> DNA
<213> 人（Homo sapien）
<400> 222
gtgcttcccc gcccctgaac ctgctccctc ccagtcggtc tcgccgcgct cgccgggtgt 60
cccagtgtca ccaacactcg gccgccgccg ccagcttggc gcgcaccgcc gcctccgcca 120
ccgccgacag cgcgcatcct ccgtgtcccc gctccgccgc ccgagcaggt gccactatgc 180
acgtgaagaa gtacctgctg aagggcctgc atcggctgca gaagggcccc ggctacacgt 240
acaaggagct gctggtgtgg tactgcgaca acaccaacac ccacggcccc aagcgcatca 300
tctgtgaggg gcccaagaag aaagccatgt ggttcctgct caccctgctc ttcgccgccc 360
tcgtctgctg gcagtggggc atcttcatca ggacctactt gagctgggag gtcagcgtct 420
ccctctccgt aggcttcaag accatggact tccctgccgt caccatctgc aatgctagcc 480
ccttcaagta ttccaaaatc aagcatttgc tgaaggacct ggatgagctg atggaagctg 540
tcctggagag aatcctggct cctgagctaa gccatgccaa tgccaccagg aacctgaact 600
tctccatctg gaaccacaca cccctggtcc ttattgatga acggaacccc caccacccca 660
tggtccttga tctctttgga gacaaccaca atggcttaac aagcagctca gcatcagaaa 720
agatctgtaa tgcccacggg tgcaaaatgg ccatgagact atgtagcctc aacaggaccc 780
agtgtacctt ccggaacttc accagtgcta cccaggcatt gacagagtgg tacatcctgc 840
aggccaccaa catctttgca caggtgccac agcaggagct agtagagatg agctaccccg 900
gcgagcagat gatcctggcc tgcctattcg gagctgagcc ctgcaactac cggaacttca 960
cgtccatctt ctaccctcac tatggcaact gttacatctt caactggggc atgacagaga 1020
aggcacttcc ttcggccaac cctggaactg aattcggcct gaagttgatc ctggacatag 1080
gccaggaaga ctacgtcccc ttccttgcgt ccacggccgg ggtcaggctg atgcttcacg 1140
agcagaggtc ataccccttc atcagagatg agggcatcta cgccatgtcg gggacagaga 1200
cgtccatcgg ggtactcgtg gacaagcttc agcgcatggg ggagccctac agcccgtgca 1260
ccgtgaatgg ttctgaggtc cccgtccaaa acttctacag tgactacaac acgacctact 1320
ccatccaggc ctgtcttcgc tcctgcttcc aagaccacat gatccgtaac tgcaactgtg 1380
gccactacct gtacccactg ccccgtgggg agaaatactg caacaaccgg gacttcccag 1440
actgggccca ttgctactca gatctacaga tgagcgtggc gcagagagag acctgcattg 1500
gcatgtgcaa ggagtcctgc aatgacaccc agtacaagat gaccatctcc atggctgact 1560
ggccttctga ggcctccgag gactggattt tccacgtctt gtctcaggag cgggaccaaa 1620
gcaccaatat caccctgagc aggaagggaa ttgtcaagct caacatctac ttccaagaat 1680
ttaactatcg caccattgaa gaatcagcag ccaataacat cgtctggctg ctctcgaatc 1740
tgggtggcca gtttggcttc tggatggggg gctctgtgct gtgcctcatc gagtttgggg 1800
agatcatcat cgactttgtg tggatcacca tcatcaagct ggtggccttg gccaagagcc 1860
tacggcagcg gcgagcccaa gccagctacg ctggcccacc gcccaccgtg gccgagctgg 1920
tggaggccca caccaacttt ggcttccagc ctgacacggc cccccgcagc cccaacactg 1980
ggccctaccc cagtgagcag gccctgccca tcccaggcac cccgcccccc aactatgact 2040
ccctgcgtct gcagccgctg gacgtcatcg agtctgacag tgagggtgat gccatctaac 2100
cctgcccctg cccaccccgg gcggctgaaa ctcactgagc agccaagact gttgcccgag 2160
gcctcactgt atggtgccct ctccaaaggg tcgggagggt agctctccag gccagagctt 2220
gtgtccttca acagagaggc cagcggcaac tggtccgtta ctggccaagg gctctgtaga 2280
atcacggtgc tggtacagga tgcaggaata aattgtatct tcacctggtt cctaccctcg 2340
tccctacctg tcctgatcct ggtcctgaag acccctcgga acaccctctc ctggtggcag 2400
gccacttccc tcccagtgcc agtctccatc caccccagag aggaacaggc gggtgggcca 2460
tgtggttttc tccttcctgg ccttggctgg cctctggggc aggggtggtg gagagatgga 2520
agggcatcag gtgtagggac cctgccaagt ggcacctgat ttactctaga aaataaaagt 2580
agaaaatact gagtcca 2597
<210> 223
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 223
ugaagaagua cc 12
<210> 224
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 224
gguacuucuu ca 12
<210> 225
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 225
gaagaaguac cu 12
<210> 226
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 226
agguacuucu uc 12
<210> 227
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 227
aagaaguacc ug 12
<210> 228
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 228
cagguacuuc uu 12
<210> 229
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 229
agaaguaccu gc 12
<210> 230
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 230
gcagguacuu cu 12
<210> 231
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 231
gaaguaccug cu 12
<210> 232
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 232
agcagguacu uc 12
<210> 233
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 233
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 234
cagcagguac uu 12
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 235
aguaccugcu ga 12
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 236
ucagcaggua cu 12
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 237
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 238
uucagcaggu ac 12
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 239
gagcugggag gu 12
<210> 240
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 240
accucccagc uc 12
<210> 241
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 241
agcugggagg uc 12
<210> 242
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 242
gaccucccag cu 12
<210> 243
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 243
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 244
ugaccuccca gc 12
<210> 245
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 245
cugggagguc ag 12
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 246
cugaccuccc ag 12
<210> 247
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 247
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 248
gcugaccucc ca 12
<210> 249
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 249
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<210> 250
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 250
cgcugaccuc cc 12
<210> 251
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 251
ggaggucagc gu 12
<210> 252
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 252
acgcugaccu cc 12
<210> 253
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 253
gaggucagcg uc 12
<210> 254
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 254
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<210> 255
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 255
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<210> 256
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 256
agacgcugac cu 12
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<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 257
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 258
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<210> 259
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 259
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<210> 260
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 260
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<210> 261
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 261
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<210> 262
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 262
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<210> 263
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 263
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 264
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 265
aggccaccaa ca 12
<210> 266
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 266
uguugguggc cu 12
<210> 267
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 267
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<212> RNA
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<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 268
auguuggugg cc 12
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 269
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<210> 270
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 270
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<210> 271
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 271
ccaccaacau cu 12
<210> 272
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 272
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<210> 273
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 273
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 274
cucugucaug cc 12
<210> 275
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 275
gcaugacaga ga 12
<210> 276
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 276
ucucugucau gc 12
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<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 279
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<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 280
cuucucuguc au 12
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 281
ugacagagaa gg 12
<210> 282
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 282
ccuucucugu ca 12
<210> 283
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 283
gacagagaag gc 12
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 284
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 285
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<210> 286
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 286
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 287
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<210> 288
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<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 288
gugccuucuc ug 12
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<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 289
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<210> 290
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 290
agugccuucu cu 12
<210> 291
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 291
gagaaggcac uu 12
<210> 292
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 292
aagugccuuc uc 12
<210> 293
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 293
agaaggcacu uc 12
<210> 294
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 294
gaagugccuu cu 12
<210> 295
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 295
gaaggcacuu cc 12
<210> 296
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 296
ggaagugccu uc 12
<210> 297
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 297
aaggcacuuc cu 12
<210> 298
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 298
aggaagugcc uu 12
<210> 299
<211> 12
<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 299
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<213> 人工
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 302
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<213> 人工
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<212> RNA
<213> 人工
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
<400> 387
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
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<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
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<220>
<223> RNAi活性剂
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<223> RNAi活性剂
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<220>
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
<223> RNAi活性剂
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
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<212> RNA
<213> 人工
<220>
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<212> RNA
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ccauccagaa gc 12
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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agcuggugga gg 12
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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ccuccaccag cu 12
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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gcugguggag gc 12
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<223> RNAi活性剂
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gccuccacca gc 12
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
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cugguggagg cc 12
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<223> RNAi活性剂
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ggccuccacc ag 12
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ugguggaggc cc 12
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gggccuccac ca 12
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gguggaggcc ca 12
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<223> RNAi活性剂
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guggaggccc ac 12
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gaggcccaca cc 12
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ggugugggcc uc 12
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aggcccacac ca 12
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ggcccacacc aa 12
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<223> RNAi活性剂
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cagugacuac aacacgacc 19
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<212> RNA
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<223> RNAi活性剂
<400> 430
ggucguguug uagucacug 19
1

Claims (10)

1.包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂由正义链和反义链组成，其中反义链由19至23个核苷酸组成，且其中的至少15个连续的核苷酸与表3提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。
2.权利要求1的组合物，其中组合物进一步包含针对β-ENaC的第二种RNAi活性剂。
3.权利要求1的组合物，其中RNAi活性剂包含至少一种修饰的主链和/或至少一个2’-修饰的核苷酸。
4.权利要求1的组合物，其中RNAi活性剂与一种或多种选自诊断性化合物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分、天然或非常见核苷碱基、无羁萜-3β-醇-衍生的石胆酸、维生素、碳水化合物、合成碳水化合物、低聚乳酸15体、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、聚胺、和肽模拟物的活性剂连接。
5.包含RNAi活性剂的组合物，所述RNAi活性剂由第一链和第二链组成，其中第一链和第二链分别由19-23个核苷酸组成，且其中的至少15个连续的核苷酸分别与表3提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的第一链和第二链存在0、1、2或3个核苷酸差异。
6.权利要求1的组合物，其中组合物包含针对β-ENaC的第二种RNAi活性剂。
7.权利要求1的组合物，其中RNAi活性剂包含硫代磷酸酯和/或2’-修饰的核苷酸。
8.权利要求1的组合物，其中RNAi活性剂与一种或多种活性剂连接，所述活性剂选自诊断性化合物、报道基团、交联剂、核酸酶抗性赋予部分、天然或非常见核苷碱基、无羁萜-3β-醇-衍生的石胆酸、维生素、碳水化合物、合成碳水化合物、低聚乳酸15体、天然聚合物、低分子量或中等分子量聚合物、蛋白质、蛋白质结合活性剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、聚胺、和肽模拟物。
9.一种组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-8中任一项所述的组合物和药学上可接受的载体。
10.RNAi活性剂用于制备组合物的用途，其中所述组合物用于降低受试者中的β-ENaC水平和/或表达，并且还包含药学上可接受的载体，所述RNAi活性剂由正义链和反义链组成，其中反义链由19-23个核苷酸组成，且其中的至少15个连续的核苷酸与表3提供的β-ENaC特异性的RNAi活性剂的反义链存在0、1、2或3个核苷酸的差异。
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