JP2019214604A - ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置するための有機組成物 - Google Patents

ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置するための有機組成物 Download PDF

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Abstract

【課題】ベータ−ＥＮａＣ関連疾患に関連する処置に有効な組成物の提供。【解決手段】センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、ベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物。ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患としては、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧など。【選択図】なし

Description

本出願は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ａ）−（ｄ）の下に、２０１０年４月２３日付け米国仮出願６１／３２７，３７９、ａｎｄ ２０１０年５月１１日付け米国仮出願６１／３３３，３９８（上記出願の内容を、出典明示によりその全体を包含させる）の優先権の利益を主張する。
発明の背景
環境および身体間の粘膜表面は、多数の防御機構を有する。防御の１つの形態は、液体での表面の洗浄である。液体の量は、上皮性液体分泌（しばしば、水および対カチオンイオンに加えてアニオン分泌を反映する）および液体吸収（しばしば、水および対アニオンに加えてＮａ＋吸収を反映する）間のバランスを反映する。粘膜表面の多数の疾患は、分泌（不足）および吸収（過剰）間のアンバランスにより引き起こされる液体不足により引き起こされる。液体層のバランスをとる１つの方法は、Ｎａ＋チャネル介在液体吸収を減少させることである。
電位非依存性アミロリド感受性ナトリウムチャネルは、多数の臓器において上皮を介する流体および電解質輸送をコントロールする。多数の密着上皮の頂端膜は、利尿・遮断剤アミロリドに対する高親和性により主に特徴付けられるナトリウムチャネルを含む。これらのチャネルは、身体の塩および水ホメオスタシスの維持のために重要な活性ナトリウム再吸収の第１の工程を介在する。脊椎動物において、チャネルは、腎臓、大腸、肺および汗腺におけるナトリウムの再吸収をコントロールし；それらはまた、味覚認識において役割を果たす。
Ｎａ＋および液体吸収の律速段階は、上皮性ナトリウム（Ｎａ＋）チャネル（ＥＮａＣ）が介在する。これらのナトリウムチャネルは、３つのサブユニット：アルファ−ＥＮａＣ、ベータ−ＥＮａＣおよびガンマ−ＥＮａＣからなる異種複合体である。
ベータ−ＥＮａＣ（ＳＣＮＮ１Ｂとしても知られている）は、該ナトリウムチャネルのベータサブユニットをコードし、この遺伝子の変異および／または改変された発現は、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧を含むいくつかの疾患と関連している（および／または疾患の処置と関連している）。
ベータ−ＥＮａＣ関連疾患に関連する処置に関する必要性が存在する。
発明の簡単な概要
本願発明は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患、例えば、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧の処置において有用であるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤を含む。本願発明はまた、少なくとも部分的にアルファ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的状態を有するヒト対象を処置する方法であって、治療有効量のＲＮＡｉ剤をベータ−ＥＮａＣを対象に投与する工程を含む方法を含む。
本願発明は、対象、例えば、哺乳動物、例えば、ヒトにおけるベータ−ＥＮａＣレベルの減少において有用である特定のＲＮＡｉ剤および方法を提供する。本願発明は、具体的には、ベータ−ＥＮａＣの少なくとも１５個またはそれ以上の連続したヌクレオチドを含む二本鎖ＲＮＡｉ剤を提供する。特に、本願発明は、例えば、表１において提供されるＲＮＡｉ剤のヌクレオチドと０、１、２または３個異なっている１５個またはそれ以上の連続したヌクレオチドの配列を含む薬剤を提供する。特に、ＲＮＡｉ剤は、１つの態様において、１鎖あたり３０個未満のヌクレオチド、例えば、１８−２３個のヌクレオチド、および／または１９−２１個のヌクレオチド、および／または、例えば、表１において提供されるものを含むことができる。
二本鎖ＲＮＡｉ剤は、３’および／または５’末端の一方または両方からの１、２、３または４個のヌクレオチド（すなわち、１−４ｎｔ）の平滑末端またはオーバーハングを有することができる。二本鎖ＲＮＡｉ剤はまた、所望により、１または２つの３’キャップおよび／または１つ以上の修飾ヌクレオチドを含むことができる。本明細書において提供される配列の修飾変異体は、対応する修飾ヌクレオチドの天然ヌクレオチドでの置換を含むが、他の点では同一であるものを含む。
さらに、ＲＮＡｉ剤は、天然リボヌクレオチドサブユニットのみ、または、リボヌクレオチドサブユニットまたはデオキシリボヌクレオチドサブユニットのいずれかを含む１つ以上の置換ヌクレオチドサブユニットの糖、リン酸または塩基に対する１つ以上の修飾のいずれかを含むことができる。１つの態様において、記載されているＲＮＡｉ剤の修飾変異体は、１つ以上のヌクレオチドサブユニットの１つ以上の糖、リン酸または塩基に対する１つ以上の修飾を有するが、同じ配列を有するＲＮＡｉ剤を含む。１つの態様において、修飾は、ＲＮＡｉ剤の有効性、安定性を改善し、そして／または免疫原性を減少させる。本願発明の１つの局面は、少なくとも１つの非天然核酸塩基を含む二本鎖オリゴヌクレオチドに関する。１つの態様において、非天然核酸塩基は、ジフルオロトリル、ニトロインドリル、ニトロピロリルまたはニトロイミダゾリルである。特定の態様において、非天然核酸塩基はジフルオロトリルである。１つの態様において、２つのオリゴヌクレオチド鎖の１つのみが非天然核酸塩基を含む。１つの態様において、オリゴヌクレオチド鎖の両方が非天然核酸塩基を含む。
ＲＮＡｉ剤は、所望により、薬剤の１つ以上の特性、例えば、安定性、分配および／または細胞摂取を改善するように選択されたリガンド、例えば、それらのコレステロールまたは誘導体に結合され得る。ＲＮＡｉ剤は、本明細書に記載されている方法のために使用される医薬組成物から単離されるか、または該組成物の一部であり得る。特に、医薬組成物は、肺または鼻の通過に対する送達用に製剤化、または非経口投与用に製剤化され得る。医薬組成物は、所望により、２つ以上のＲＮＡｉ剤を含むことができ、それぞれがベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの同じ、または異なるセグメントに指向する。所望により、医薬組成物は、さらに、何らかのベータ−ＥＮａＣ−関連疾患に対して何らかの既知の処置を含んでもよく、または該処置と共に使用されてもよい。
本願発明は、特に、ＥＮａＣの過剰発現または過剰活性により特徴付けられる疾患の場合、細胞におけるベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡのレベルを減少させるための方法をさらに提供する。本願発明はまた、ベータ−ＥＮａＣ発現が少なくとも部分的に介在する病理学的状態を有するヒト対象を処置する方法であって、治療有効量のＲＮＡｉ剤ベータ−ＥＮａＣを対象に投与する工程を含む方法を含む。このような方法は、以下にさらに記載されている本願発明のＲＮＡｉ剤の１つを対象に投与する工程を含む。該方法は、細胞中の標的ＲＮＡを選択的に破壊するＲＮＡ干渉に関与する細胞メカニズムを利用し、細胞を本願発明のＲＮＡｉ剤の１つと接触する工程を含む。このような方法は、細胞において直接的に行うことができるか、または、本願発明のＲＮＡｉ剤／医薬組成物の１つを対象に投与することにより哺乳動物対象において行うことができる。細胞における標的ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡの減少は、生産されるコードされたベータ−ＥＮａＣのタンパク質の量の減少をもたらす。生物体において、これは、上皮性電位差の減少、流体吸収の平衡化および粘液線毛クリアランスの増加をもたらすことができる。
本願発明の方法および組成物、例えば、方法およびベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤組成物は、本明細書に記載されている任意の用量および／または製剤、ならびに本明細書に記載されている任意の投与経路にて使用することができる。
本願発明の１つ以上の態様の詳細は、図面および明細書に記載されている。本願発明の他の特徴、目的および利点は、明細書、図面および特許請求の範囲から明らかである。
図１Ａ−１Ｂは、インビボでのベータ−ＥＮａＣ活性をノックダウンするＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８０７、ＡＤ２０８２６、ＡＤ２０８３２、ＡＳ２０８３４、ＡＤ２０８４８およびＡＤ２０８６１の能力を示す。
図２Ａ−２Ｃは、ヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣチャネル機能活性に対するベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８３２のインビトロ効果を示す。 図２Ａ−２Ｃは、ヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣチャネル機能活性に対するベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８３２のインビトロ効果を示す。
発明の詳細な説明
本願発明は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患（例えば、ベータ−ＥＮａＣにおける変異と関連する疾患、および／もしくはベータ−ＥＮａＣの発現、レベルおよび／または活性を変化させる疾患、ならびに／またはベータ−ＥＮａＣの発現、レベルおよび／または活性を調節することにより処置できる疾患）、例えば、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧の処置において有用であるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤を含む。本願発明はまた、少なくとも部分的にベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的状態を有するヒト対象を処置する方法であって、治療有効量のＲＮＡｉ剤 ベータ−ＥＮａＣを対象に投与する工程を含む方法を提供する。
本願発明の種々の態様は、以下のものを含む。
本明細書に記載されているアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、例えば、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤（またはベータ−ＥＮａＣに対して特異的な重複ＲＮＡｉ剤の任意のセット）のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される任意の配列からのＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願発明は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該第１の鎖は、第１の鎖の配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該第２の鎖は、本明細書において提供されるいずれかのＲＮＡｉ剤からの第２の鎖の配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む組成物に関する。
特定の二本鎖は、以下のものを包含し、それぞれの二本鎖は配列番号のセットを含み、第１の配列番号は第１の鎖（例えば、センス鎖）に対応し、そして第２の配列番号は第２の鎖（例えば、アンチセンス鎖）に対応する。ＡＤ−２０８０５（配列番号１１１および１１２）；ＡＤ−２０８０６（配列番号１１３および１１４）；ＡＤ−２０８０７（配列番号１１５および１１６）；ＡＤ−２０８０８（配列番号１１７および１１８）；ＡＤ−２０８０９（配列番号１１９および１２０）；ＡＤ−２０８１０（配列番号１２１および１２２）；ＡＤ−２０８１１（配列番号１２３および１２４）；ＡＤ−２０８１２（配列番号１２５および１２６）；ＡＤ−２０８１３（配列番号１２７および１２８）；ＡＤ−２０８１４（配列番号１２９および１３０）；ＡＤ−２０８１５（配列番号１３１および１３２）；ＡＤ−２０８１６（配列番号１３３および１３４）；ＡＤ−２０８１７（配列番号１３５および１３６）；ＡＤ−２０８１８（配列番号１３７および１３８）；ＡＤ−２０８１９（配列番号１３９および１４０）；ＡＤ−２０８２０（配列番号１４１および１４２）；ＡＤ−２０８２１（配列番号１４３および１４４）；ＡＤ−２０８２２（配列番号１４５および１４６）；ＡＤ−２０８２３（配列番号１４７および１４８）；ＡＤ−２０８２４（配列番号１４９および１５０）；ＡＤ−２０８２５（配列番号１５１および１５２）；ＡＤ−２０８２６（配列番号１５３および１５４）；ＡＤ−２０８２７（配列番号１５５および１５６）；ＡＤ−２０８２８（配列番号１５７および１５８）；ＡＤ−２０８２９（配列番号１５９および１６０）；ＡＤ−２０８３０（配列番号１６１および１６２）；ＡＤ−２０８３１（配列番号１６３および１６４）；ＡＤ−２０８３２（配列番号１６５および１６６）；ＡＤ−２０８３３（配列番号１６７および１６８）；ＡＤ−２０８３４（配列番号１６９および１７０）；ＡＤ−２０８３５（配列番号１７１および１７２）；ＡＤ−２０８３６（配列番号１７３および１７４）；ＡＤ−２０８３７（配列番号１７５および１７６）；ＡＤ−２０８３８（配列番号１７７および１７８）；ＡＤ−２０８３９（配列番号１７９および１８０）；ＡＤ−２０８４０（配列番号１８１および１８２）；ＡＤ−２０８４１（配列番号１８３および１８４）；ＡＤ−２０８４２（配列番号１８５および１８６）；ＡＤ−２０８４３（配列番号１８７および１８８）；ＡＤ−２０８４４（配列番号１８９および１９０）；ＡＤ−２０８４５（配列番号１９１および１９２）；ＡＤ−２０８４６（配列番号１９３および１９４）；ＡＤ−２０８４７（配列番号１９５および１９６）；ＡＤ−２０８４８（配列番号１９７および１９８）；ＡＤ−２０８４９（配列番号１９９および２００）；ＡＤ−２０８５０（配列番号２０１および２０２）；ＡＤ−２０８５１（配列番号２０３および２０４）；ＡＤ−２０８５２（配列番号２０５および２０６）；ＡＤ−２０８６１（配列番号２０７および２０８）；ＡＤ−２０８６２（配列番号２０９および２１０）；ＡＤ−２０８６３（配列番号２１１および２１２）；ＡＤ−２０８６４（配列番号２１３および２１４）；ＡＤ−２０８６５（配列番号２１５および２１６）；ＡＤ−２０８６６（配列番号２１７および２１８）；ならびにＡＤ−２０８６７（配列番号２１９および２２０）およびそれらの修飾変異体。
１つの態様は、以下のものからなる群から選択される特定の二本鎖の修飾変異体（ここに、それぞれの二本鎖は配列番号のセットを含み、第１の配列番号は第１の鎖（例えば、センス鎖）に対応し、そして第２の配列番号は第２の鎖（例えば、アンチセンス鎖）に対応する）を提供する。ＡＤ−２０８０５（配列番号１および２）；ＡＤ−２０８０６（配列番号３および４）；ＡＤ−２０８０７（配列番号５および６）；ＡＤ−２０８０８（配列番号７および８）；ＡＤ−２０８０９（配列番号９および１０）；ＡＤ−２０８１０（配列番号１１および１２）；ＡＤ−２０８１１（配列番号１３および１４）；ＡＤ−２０８１２（配列番号１５および１６）；ＡＤ−２０８１３（配列番号１７および１８）；ＡＤ−２０８１４（配列番号１９および２０）；ＡＤ−２０８１５（配列番号２１および２２）；ＡＤ−２０８１６（配列番号２３および２４）；ＡＤ−２０８１７（配列番号２５および２６）；ＡＤ−２０８１８（配列番号２７および２８）；ＡＤ−２０８１９（配列番号２９および３０）；ＡＤ−２０８２０（配列番号３１および３２）；ＡＤ−２０８２１（配列番号３３および３４）；ＡＤ−２０８２２（配列番号３５および３６）；ＡＤ−２０８２３（配列番号３７および３８）；ＡＤ−２０８２４（配列番号３９および４０）；ＡＤ−２０８２５（配列番号４１および４２）；ＡＤ−２０８２６（配列番号４３および４４）；ＡＤ−２０８２７（配列番号４５および４６）；ＡＤ−２０８２８（配列番号４７および４８）；ＡＤ−２０８２９（配列番号４９および５０）；ＡＤ−２０８３０（配列番号５１および５２）；ＡＤ−２０８３１（配列番号５３および５４）；ＡＤ−２０８３２（配列番号５５および５６）；ＡＤ−２０８３３（配列番号５７および５８）；ＡＤ−２０８３４（配列番号５９および６０）；ＡＤ−２０８３５（配列番号６１および６２）；ＡＤ−２０８３６（配列番号６３および６４）；ＡＤ−２０８３７（配列番号６５および６６）；ＡＤ−２０８３８（配列番号６７および６８）；ＡＤ−２０８３９（配列番号６９および７０）；ＡＤ−２０８４０（配列番号７１および７２）；ＡＤ−２０８４１（配列番号７３および７４）；ＡＤ−２０８４２（配列番号７５および７６）；ＡＤ−２０８４３（配列番号７７および７８）；ＡＤ−２０８４４（配列番号７９および８０）；ＡＤ−２０８４５（配列番号８１および８２）；ＡＤ−２０８４６（配列番号８３および８４）；ＡＤ−２０８４７（配列番号８５および８６）；ＡＤ−２０８４８（配列番号８７および８８）；ＡＤ−２０８４９（配列番号８９および９０）；ＡＤ−２０８５０（配列番号９１および９２）；ＡＤ−２０８５１（配列番号９３および９４）；ＡＤ−２０８５２（配列番号９５および９６）；ＡＤ−２０８６１（配列番号９７および９８）；ＡＤ−２０８６２（配列番号９９および１００）；ＡＤ−２０８６３（配列番号１０１および１０２）；ＡＤ−２０８６４（配列番号１０３および１０４）；ＡＤ−２０８６５（配列番号１０５および１０６）；ＡＤ−２０８６６（配列番号１０７および１０８）；ならびにＡＤ−２０８６７（配列番号１０９および１１０）。
特定の組成物
１つの態様において、本願発明は、アンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、本明細書の表（例えば、表１）において提供される任意の配列（または配列の重複セット）から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、本明細書の表（例えば、表１）において提供される任意の配列（または配列の重複セット）から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される任意の配列からのＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。別の態様において、本願発明は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該第１の鎖は、第１の鎖の配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、そして該第２の鎖は、本明細書において提供されるいずれかのＲＮＡｉ剤の第２の鎖の配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。特定の二本鎖は、上記提供されている特定の二本鎖、および表１の任意の１つ以上において記載されている特定の二本鎖を含む。上記それぞれの組成物のさらなる修飾配列（例えば、１つ以上の修飾塩基含む配列）もまた、本願発明の一部として考慮される。
以下の表Ａ１は、ベータ−ＥＮａＣに対する種々のＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖の非修飾および例示的修飾配列に対する配列番号を提供する。それぞれの塩基組成は、表１により詳細に提供されている配列番号により示される特定の配列であり、その一部は表２において提供される。
表Ａ１．ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の第１および第２の鎖（例えば、センス（「ＳＳ」）およびアンチセンス（「ＡＳ」）鎖）の配列番号





例えば、表Ａ１において、ＲＮＡｉ剤ＡＤ−２０８０５の典型的な修飾配列は、配列番号：１（センス鎖）および配列番号：２（アンチセンス鎖）により示される。ＡＤ−２０８０５の非修飾配列は、配列番号：１１１（センス鎖）および配列番号：１１２（アンチセンス鎖）により示される。したがって、表Ａ１は、ベータ−ＥＮａＣに対する種々のＲＮＡｉ剤のそれぞれに対する非修飾配列および少なくとも１つの典型的な修飾配列の第１および第２の鎖の配列番号識別コードを示す。
本明細書に記載されているアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤
１つの特定の態様において、本願発明は、アンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される、および例えば、表１に記載されている特定の二本鎖におけるアンチセンス鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。
本態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、組成物は、ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に分離されるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、共有結合されるか、または、他の方法で結合される）。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、約３０以下のヌクレオチドの長さである。
１つの態様において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、約１５から約３０ヌクレオチド対の長さの二本鎖領域を形成する。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、約１５から約３６ｎｔの長さ、例えば、約１８から約３０ｎｔの長さ、さらに、例えば、約１９から約２３ｎｔの長さである。１つの態様において、アンチセンス鎖は、約１５ｎｔ、約１６ｎｔ、約１７ｎｔ、約１８ｎｔ、約１９ｎｔ、約２０ｎｔ、約２１ｎｔ、約２２ｎｔ、約２３ｎｔ、約２４ｎｔ、約２５ｎｔ、約２６ｎｔ、約２７ｎｔ、約２８ｎｔ、約２９ｎｔおよび約３０ｎｔから選択される長さを少なくとも有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、生物学的サンプルまたは環境、例えば、血清または腸洗浄液における安定性を増加させる修飾を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの糖骨格修飾（例えば、ホスホロチオエート結合）および／または少なくとも１つの２’−修飾ヌクレオチドを含む。１つの態様において、全てのピリミジンは、２’ Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；および／または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；および／または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；および／または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチドを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む。１つの態様において、全てのピリミジンは、２’ Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、１から４個の不対ヌクレオチドを有するオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の３’−末端でオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール(uvaol)、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン(Friedelin)、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラクテート(oligo lactate)１５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約６０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約７０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約８０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約９０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．０１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．００１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
本明細書に記載されている第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤
１つの特定の態様において、本願発明は、第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該第１の鎖および第２の鎖は、本明細書において提供される、および例えば表１に記載されている特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の第１および第２の鎖のそれぞれと０、１、２または３個のヌクレオチドによりそれぞれ異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物に関する。
この態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、組成物は、ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に分離されるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、共有結合されるか、または、他の方法で結合される）。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、約３０以下のｎｔの長さである。
１つの態様において、センス鎖およびアンチセンス鎖は、約１５から約３０ｎｔ対の長さの二本鎖領域を形成する。
１つの態様において、アンチセンス鎖は、約１５から約３６ｎｔの長さ、例えば、約１８から約２３ｎｔの長さ、例えば、約１９から約２３ｎｔの長さである。１つの態様において、アンチセンス鎖は、約１５ｎｔ、約１６ｎｔ、約１７ｎｔ、約１８ｎｔ、約１９ｎｔ、約２０ｎｔ、約２１ｎｔ、約２２ｎｔ、約２３ｎｔ、約２４ｎｔ、約２５ｎｔ、約２６ｎｔ、約２７ｎｔ、約２８ｎｔ、約２９ｎｔおよび約３０ｎｔから選択される長さを少なくとも有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、生物学的サンプルまたは環境、例えば、血清または腸洗浄液における安定性を増加させる修飾を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つの糖骨格修飾（例えば、ホスホロチオエート結合）および／または少なくとも１つの２’−修飾ヌクレオチドを含む。１つの態様において、全てのピリミジンは、２’ Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；および／または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；および／または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；および／または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチドを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、１から４個の不対ヌクレオチドを有するオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の３’−末端でオーバーハングを含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラクテート １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約６０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約７０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約８０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約９０％阻害することができる。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．０１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
１つの態様において、ＲＮＡｉは、約０．００１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤を使用する処置方法
１つの特定の態様において、本願発明は、少なくとも１つのアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む治療有効量の組成物を個体に投与する工程を含む該個体におけるベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置する方法であって、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される、例えば表１に記載されているような、特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、方法に関する。別の態様において、本願発明は、該組成物がセンス鎖をさらに含むＲＮＡｉ剤を含むこのような方法であって、該センス鎖は。本明細書において提供される、例えば表１に記載されているような、特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、方法に関する。
この態様の種々の特定の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患は、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧である。
１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患は、嚢胞性線維症である。
１つの態様において、方法は、さらなる癌処置を施す工程をさらに含む。１つの態様において、さらなる処置は、治療有効量の組成物である。
１つの態様において、さらなる処置は、方法（または処理）である。
１つの態様において、さらなる処置およびＲＮＡｉ剤は、任意の順において施すことができ、または同時に施すことができる
１つの態様において、方法は、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧に対するさらなる処置を施す工程をさらに含む。
１つの態様において、方法は、ＥＮａＣに対するさらなるアンタゴニスト、カリウム保持性利尿薬、アミロリド、トリアムテレン、食塩摂取の制御、抗生物質、ＤＮａｓｅ療法、アルブテロール、Ｎ−アセチルシステイン、呼吸療法、パーカッション療法および有酸素運動のリストから選択されるさらなる処置または療法を施す工程をさらに含む。
１つの態様において、組成物は、ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤を含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に別個であるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、共有結合されるか、または、他の方法で結合される）。
１つの態様において、方法は、本明細書において提供される、例えば表１に記載されているような、特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むさらなるＲＮＡｉ剤を投与する工程をさらに含む。
本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤を使用してベータ−ＥＮａＣの発現を阻害する方法
１つの特定の態様において、本願発明は、本願発明のＲＮＡｉ剤を含む治療有効量の組成物を個体に投与する工程を含む、個体におけるベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を阻害する方法に関する。１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つのアンチセンス鎖を含み、および／またはセンスおよびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される、例えば表１に記載されているような、特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
本発明のこの局面の種々の態様は、以下に記載されている。
１つの態様において、個体は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患に罹患しているか、または罹患しやすい。
１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患は、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧である。
１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患は、嚢胞性線維症である。
１つの態様において、方法は、さらなる処置の投与をさらに含む。１つの態様において、さらなる処置は、治療有効量の組成物である。
１つの態様において、さらなる処置は、方法（または処理）である。
１つの態様において、さらなる処置およびＲＮＡｉ剤は、任意の順において施すことができ、または同時に施すことができる
１つの態様において、方法は、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧に対するさらなる処置を施す工程をさらに含む。
１つの態様において、方法は、ＥＮａＣに対するさらなるアンタゴニスト、カリウム保持性利尿薬、アミロリド、トリアムテレン、食塩摂取の制御、抗生物質、ＤＮａｓｅ療法、アルブテロール、Ｎ−アセチルシステイン、呼吸療法、パーカッション療法および有酸素運動のリストから選択されるさらなる処置または療法を施す工程をさらに含む。
１つの態様において、組成物は、ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤を含む。種々の態様において、第２のＲＮＡｉ剤は、第１のＲＮＡｉ剤から物理学的に別個であるか、または２つは、物理学的に連結される（例えば、共有結合されるか、または、他の方法で結合される）。
１つの態様において、方法は、本明細書において提供される、例えば表１に記載されているような、特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むさらなるＲＮＡｉ剤を投与する工程をさらに含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の医薬製剤
１つの特定の態様において、本願発明は、本願発明のＲＮＡｉ剤を含む組成物に関する。１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１つのアンチセンス鎖を含み、および／またはセンスおよびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される、例えば表１に記載されているような、特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該組成物は、薬学的に有効な製剤である。
１つの態様において、本願発明は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置のための医薬の製造におけるＲＮＡｉ剤の使用であって、該ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、本明細書において提供される、例えば表１に記載されているような、特定の二本鎖から選択されるベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、使用に関する。
ＥＮａＣ
「ＥＮａＣ」は、３つの異なるが同種のサブユニット（アルファ、ベータおよびガンマ）で作られる上皮性ナトリウムチャネル膜タンパク質を意味する。
ＥＮａＣは、遠位ネフロン（皮質および髄質集合管）および遠位大腸の上皮性細胞の頂端膜ならびに気道およびいくつかの腺の排出管において存在する。ＥＮａＣはまた、胎盤、脳および膀胱において発現される。それは、同じ細胞の側底膜に位置するＮａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅと一緒に、これらの臓器の管腔から上皮細胞へのＮａ＋に対するコントロールされた侵入経路を提供し、外部媒体から上皮性細胞を介して細胞外流体へのおよび血液の方へのＮａ＋の活性なベクトル輸送に関与する。ＥＮａＣは、管腔に面した頂端膜上に位置し、管腔から上皮細胞へのナトリウムの移動を可能にする。次に、ＥＮａＣを介して再吸収されたナトリウムは、上皮細胞から追い出され、Ｎａ＋／Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅにより血流に戻る。ＥＮａＣによるナトリウムの再吸収は、水の浸透摂取に付随して起こり、一定の細胞外Ｎａ＋濃度を維持する。これは、血液量を変化させ、結果として血圧に影響する。したがって、ＥＮａＣは、電解質ホメオスタシスならびに血液量および血圧のコントロールにおいて重要な役割を果たす。例えば、Saxenaら 1998 Biochem. Biophys. Res. Comm. 252: 208-213参照。
ＥＮａＣは、発現される種々の臓器において異なる機能的役割を有する。腎臓（集合管）において、ＥＮａＣを介するＮａ＋の調節された再吸収は、尿のＮａ＋排出の制御の主要なメカニズムを提供し、したがって、アルドステロンのホルモンコントロール下で全生物のＮａ＋バランスの微調整を可能にする。頂端膜電位における脱分極作用により、Ｎａ＋チャネルはまた、管のＫ＋分泌に関する駆動力を提供する。
ＥＮａＣの特定の阻害剤は、尿のＮａ＋排出を促進し、Ｋ＋分泌を阻害する。したがって、これらの薬物（アミロリドおよびトリアムテレンを含む）は、Ｋ＋−保持性利尿薬として使用される。ＥＮａＣは、遠位大腸において同様の機能的役割を有し、排泄物における過剰Ｎａ＋喪失を防止する。気道において、重要な役割は、誕生時に気道を満たす流体の再吸収であり、流体の分泌（出生前）から流体の再吸収（出生後）へのシフトを促進する
嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子と共に、それはまた、粘液クリアランスのために必要な薄い粘膜流体膜を維持する気道における流体バランスの微妙な制御に関与する。唾液および汗腺の排出管において、ＥＮａＣの活性は、管腔Ｎａ＋濃度を減少させる傾向にあり、あまり塩辛くない唾液を排出させ、汗におけるＮａ＋の多量の喪失を防止する。例えば、Hummlerら 1999 Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 276: 567-571およびそれに引用されている文献、参照。
ＥＮａＣの配列および／または発現における改変および変異は、ＥＮａＣの過剰発現または過剰活性を引き起こし得る。本明細書において提供するＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣのレベルを減少させることにより、Ｎａ＋の調節された再吸収のバランスを回復させる。
ベータ−ＥＮａＣ
「ベータ−ＥＮａＣ」は、遺伝子またはタンパク質アミロリド感受性ナトリウムチャネルサブユニットベータ（または該タンパク質をコードする任意の核酸）を意味し、種々に設計される：ナトリウムチャネル、電位非依存性１、ベータ；ＳＣＮＮ１Ｂ；ｂＥＮａＣ；ＥＮａＣｂ；ＥＮａＣ−ベータ；ＳＣＮＥＢまたはβ−ＥＮａＣ。さらなる識別コードは以下のものを含む：ＯＭＩＭ：６００７６０；ＭＧＩ：１０４６９６；ＨｏｍｏｌｏＧｅｎｅ：２８４；およびＧｅｎｅＣａｒｄｓ：ＳＣＮＮ１Ｂ。さらなる情報を見出すことができる：ヒト：Ｅｎｔｒｅｚ ６３３８；Ｅｎｓｅｍｂｌ ＥＮＳＧ０００００１６８４４７；ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ５１１６８；ＲｅｆＳｅｑ（ｍＲＮＡ）ＮＭ＿０００３３６；ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿０００３２７；Ｌｏｃａｔｉｏｎ（ＵＣＳＣ） Ｃｈｒ １６：２３．２２−２３．３Ｍｂ。マウス：Ｅｎｔｒｅｚ ２０２７７；Ｅｎｓｅｍｂｌ ＥＮＳＭＵＳＧ００００００３０８７３；ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ３ＴＰ５１；ＲｅｆＳｅｑ（ｍＲＮＡ）ＮＭ＿０１１３２５ ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿０３５４５５；Ｌｏｃａｔｉｏｎ（ＵＣＳＣ）Ｃｈｒ ７：１２１．６６−１２１．７１Ｍｂ。
ヒトベータ−ＥＮａＣのアミノ酸配列は、Saxenaら 1998 Biochem. Biophys. Res. Comm. 252: 208-213において提供される。
ベータ−ＥＮａＣの機能性ドメインは、明らかにされている。該タンパク質は、細胞内Ｎ−末端ドメイン［アミノ酸（「ａａ」）１から５０］、第１の膜貫通ドメイン（ａａ５１から７１）、細胞外ループ（ａａ７２から５３３）、第２の膜貫通ドメイン（ａａ５３４から５５３）およびＣ−末端細胞内ドメイン（ａａ５５４から６４０）を有する。
Ｃ−末端細胞内ドメインは、変異がリドル症候群および他の疾患に関する２つの領域：アミノ酸５６４から５９５の領域および「ＰＹ」モチーフ［ａａ（アミノ酸）６１５から６１８でのアミノ酸コンセンサス配列ＰＰＸＹ］を含む。例えば、Saxenaら 1998参照。
本願発明のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、特定の機能性ドメインまたはベータ−ＥＮａＣのドメインに対応するｍＲＮＡの一部と相互作用することができる。種々の態様において、本願明細書におけるＲＮＡｉ剤は、機能性ドメインに対応する配列、例えば、Ｎ−末端細胞内ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、細胞外ループ、第２の膜貫通ドメインもしくはＣ−末端細胞内ドメイン、またはさらに具体的には、アミノ酸５６４から５９５の領域もしくはＰＹモチーフ（アミノ酸６１５から６１８）におけるベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡに特異的に結合する。
種々の態様において、本願発明のＲＮＡｉ剤は、５’または３’ＵＴＲ（すなわち、非翻訳領域）に結合する。
種々の態様において、本願発明のＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡに結合するが、特定の機能性ドメインに対応する配列、例えば、Ｎ−末端細胞内ドメイン、第１の膜貫通ドメイン、細胞外ループ、第２の膜貫通ドメインもしくはＣ−末端細胞内ドメイン、またはさらに具体的には、アミノ酸５６４から５９５の領域もしくはＰＹモチーフ（アミノ酸６１５から６１８）におけるベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡに特異的に結合しない。
本明細書における態様において、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの特定の領域へのＲＮＡｉ剤の結合は、ベータ−ＥＮａＣの発現、レベルおよび／または活性の減少をもたらす。
ベータ−ＥＮａＣのレベルの減少におけるＲＮＡｉ剤の有効性は、例えば、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡ存在量のレベルまたはタンパク質それ自体のレベルを測定することにより、直接的に測定することができる。あるいは、ＲＮＡｉの有効性は、ベータ−ＥＮａＣの既知の任意の１つ以上の活性のレベルを測定することにより、またはベータ−ＥＮａＣの経路の下流の成分の活性における変化を測定することにより、間接的に測定することができる。
該タンパク質の主要な活性は、アルファ−ＥＮａＣおよびガンマ−ＥＮａＣ、恐らく時々、デルタ−ＥＮａＣと共に、ナトリウムチャネルＥＮａＣを形成することである。ベータ−ＥＮａＣ、ガンマ−ＥＮａＣおよびデルタ−ＥＮａＣはまた、膵臓、精巣および卵巣において見出されるチャネルの特定の型を形成し得る。ベータ−ＥＮａＣはまた、ＷＷＰ２およびＮＥＤＤ４と相互作用することが示されている。Ｓｅｅ．、例えば、McDonaldら (2002). Am. J. Physiol. Renal Physiol. 283 (3): F431-6; Harveyら 2001. J. Biol. Chem. 276 (11): 8597-601; Farrら (2000). Biochem. J. 345 Pt 3: 503-9。ベータ−ＥＮａＣの活性は、例えば、結合し、これらの他の生物学的成分を有する機能ユニットを形成する能力により測定することができる。ＲＮＡｉ剤の有効性はまた、粘液膜上の表面液体の量を測定することにより、およびベータ−ＥＮａＣを発現する組織の組織学的試験を介して、間接的に測定することができる。
種々の種におけるベータ−ＥＮａＣ配列
ベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤は、それらの配列が、ヒトベータ−ＥＮａＣ遺伝子および試験動物由来の同種遺伝子に対応するｍＲＮＡと完全に一致するように設計され得る。したがって、全く同じＲＮＡｉ剤を、両方の試験動物（例えば、ラット、マウス、カニクイザルなど）およびヒトにおいて使用することができる。種々のＥＮａＣ遺伝子に対する配列は、とりわけ、Gartyら 1997 Physiol. Rev. 77: 359-396;およびAhnら 1999 Am. J. Physiol. 277:F121-F129に記載されているとおり、多数の種、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウシおよびニワトリにおいて決定されている。
カニクイザル（Macaca fascicularisまたは「Cyno」）におけるベータ−ＥＮａＣ配列は、決定されている。
カニクイザルベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡ（配列番号：２２１）およびヒトベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡ（配列番号：２２２）配列のアラインメントを以下に示す。
カニクイザルおよびヒト配列の開始（ＡＴＧ）および停止（ＴＡＡ）コドンを下線で示す。ヒトおよびカニクイザル配列間のヌクレオチドの一致は、アスタリスク（＊）でマークされている。
１つの態様において、本願発明のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、ヒト、ラットおよびカニクイザルベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡにおいて同一である配列を含む。この配列同一性は、ヒト試験の前に動物試験を容易にする。別の態様において、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、ヒト、マウスおよびカニクイザルベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡにおいて同一である配列を含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のさらなる態様
１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、いずれか他のｍＲＮＡまたは遺伝子の配列と合致しない配列を含む。１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、全ての他の既知の非ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡまたは遺伝子と少なくとも０、１、２または３個のヌクレオチドで異なっている配列を含む。
１つの態様において、本願発明のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、それを必要とする患者（例えば、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧に罹患している患者）に投与される。
患者はまた、１つ以上のベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤を投与され得る。１つの態様において、本願発明のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、所望により、疾患に対して適当な１つ以上のさらなる医薬と共に投与され得る。１つの態様において、本願発明のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤は、所望により、任意の他の適当なさらなる処置と施すことができ、該さらなる処置は組成物または方法であり得る。
嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧の場合、ＲＮＡｉ剤およびさらなる疾患処置は、任意の順番で、同時にもしくは連続して、または単回もしくは時間をかけて複数回投与で投与することができる。
定義
便宜上、本明細書、実施例および特許請求の範囲において使用される特定の用語および句の意味を、以下に提供する。本明細書の他の部分における用語の慣習およびこのセクションにおいて提供されるその定義間で明らかな矛盾がある場合、このセクションにおける定義を優先する。
ＲＮＡｉ剤
１つの態様において、本願発明は、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤もしくはベータ−ＥＮａＣ核酸（またはその部分）に相補的である少なくとも１つのアンチセンス核酸配列を含む他の組成物に関するか、または、ｓｉＲＮＡをコードする組換え発現ベクターもしくは以下で定義されるＲＮＡｉとして機能することができるアンチセンス核酸を含む組成物に関する。本明細書において使用される、「アンチセンス」核酸は、ベータ−ＥＮａＣのタンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、二本鎖ＤＮＡのコード鎖に相補的である、ｍＲＮＡに相補的である、またはベータ−ＥＮａＣ遺伝子または核酸のコード鎖に相補的である）ヌクレオチド配列を含む。
本明細書において使用される、「ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤」、「ベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤」、「ベータ−ＥＮａＣに対するｉＲＮＡ」、「ベータ−ＥＮａＣに対するｓｉＲＮＡ」、「ベータ−ＥＮａＣ ｓｉＲＮＡ」などなる用語は、ｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）、ｓｈＲＮＡ（短もしくは小ヘアピン型ＲＮＡ）、ｉＲＮＡ（干渉ＲＮＡ）剤、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ干渉）剤、ｄｓＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）、ｍｉｃｒｏＲＮＡなどを示し、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡを特異的に標的とする、該ｍＲＮＡに対して特異的である、および／または該ｍＲＮＡに結合する組成物を示す。本明細書において使用される、「アンチセンス核酸」または「アンチセンス核酸を含む組成物」などなる用語は、標的に対するアンチセンスである少なくとも１つの核酸鎖を含むあらゆる組成物を含むことを広く意味する；これは、限定はしないが、あらゆるｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｉＲＨＡ、ｄｓＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびアンチセンス核酸を含む任意の他の組成物を含む。本明細書において使用される「ｉＲＮＡ」または「ＲＮＡｉ」なる用語は、ＲＮＡ（またはその誘導体）を含み、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介して別のＲＮＡ転写産物の標的化開裂を介在する薬剤を示す。１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＲＩＳＣ複合体／経路を活性化するオリゴヌクレオチド組成物である。別の態様において、ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖配列（アンチセンスオリゴヌクレオチド）を含む。
本願発明のＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡを標的とする（例えば、結合する、アニーリングする、など）。ベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤の使用は、ベータ−ＥＮａＣ活性、レベルおよび／または発現の減少、例えば、標的遺伝子または標的配列の「ノックダウン」または「ノックアウト」をもたらす。特に、１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣの過剰発現または過剰活性により特徴付けられる疾患状態の場合、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の投与は、ベータ−ＥＮａＣ活性の正常レベルおよび／またはＮａ＋再吸収の正常レベルに回復させるために十分なベータ−ＥＮａＣ標的をノックダウンする
１つの態様において、ＲＮＡｉは、単一の鎖（例えば、本明細書に記載されているｓｈＲＮＡ）を含む。
種々の態様において、一方または両方の鎖はニックを有する。
１つの態様において、一本鎖ＲＮＡｉ剤のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドは、センスおよび／またはアンチセンス鎖を含むことができる。例えば、Sioud 2005 J. Mol. Biol. 348:1079-1090および本明細書に記載されている文献、参照。したがって、本願発明は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のセンスまたはアンチセンス鎖のいずれかを含む単一の鎖を有するＲＮＡｉ剤を包含する。
本明細書において特に有用であるｓｉＲＮＡは、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの領域に特異的に結合することができ、１つ以上の以下の性質：ベータ−ＥＮａＣのコーディングセグメントに結合する；５’非翻訳領域の結合部およびコーディングセグメントの開始部またはその付近に結合する；ｍＲＮＡの翻訳開始部位またはその付近に結合する；エキソンおよびイントロンの接合部またはその付近に結合する；他の遺伝子のｍＲＮＡまたは転写産物に全くもしくはほとんど結合しない（全くもしくはほとんど「的外れの効果」）；二本鎖またはステム領域ではない領域またはその付近、例えば、ループまたは一本鎖部分でベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡに結合する；免疫原性をほとんどもしくは全く引き起こさない；保存された配列の存在が種々の実験動物を使用する試験を容易にするため、種々の動物種（ヒト、マウス、ラット、カニクイザルなどを含む）中で保存されているベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡ配列のセグメントに結合する；ｍＲＮＡの二本鎖領域に結合する；ＡＴ−リッチ領域（例えば、少なくとも約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０％ＡＴリッチ）に結合する；ならびに／またはｓｉＲＮＡ活性を減少させることが知られているか、または疑われている特定の配列、例えば、ｓｉＲＮＡの二本鎖部分の分離を減少させ得る５’末端のＧＧ配列の存在を欠いている性質を有するものを含む。１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤は、任意の１つ以上のこれらの特性を有する二本鎖ＲＮＡであり得る。
本明細書において使用される「二本鎖ＲＮＡ」または「ｄｓＲＮＡ」なる用語は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤；例えば、２つの逆平行のおよび実質的に相補的な核酸鎖を含むハイブリダイズされた二本鎖領域（すなわち、第１の鎖および第２の鎖のヌクレオチド塩基が対をなす領域）を有するＲＮＡ分子または分子の複合体を含む組成物を示し、標的ＲＮＡに対して「センス」および「アンチセンス」方向を有すると称される。ｍＲＮＡ標的に対するアンチセンス鎖はまた、「ガイド」鎖とも呼ばれ、センス鎖はまた、「パッセンジャー」鎖とも呼ばれる。「パッセンジャー」鎖は、少なくとも１つ以上の以下のもの：他の鎖と比較して１つ以上の余分なヌクレオチド（例えば、バルジ(bulge)または１ｎｔのループ）、他の鎖と比較してニック、ギャップなどを含むことができる。種々の態様において、ＲＮＡｉ剤は、第１の鎖および第２の鎖を含む。種々の態様において、第１の鎖はセンス鎖であり、第２の鎖はアンチセンス鎖である。他の態様において、第１の鎖は、アンチセンス鎖であり、第２の鎖はセンス鎖である。
二本鎖領域は、ＲＩＳＣ経路を介する所望の標的ＲＮＡの特異的な分解を可能にするが、一般的に９から３６塩基対（「ｂｐ」）の長さ、例えば、１５−３０ｂｐの長さの範囲であるあらゆる長さであり得る。９から３６ｂｐの二本鎖を考慮すると、二本鎖は、この範囲のあらゆる長さ、例えば、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５または３６ｂｐおよび限定はしないが、１５−３０ｂｐ、１５−２６ｂｐ、１５−２３ｂｐ、１５−２２ｂｐ、１５−２１ｂｐ、１５−２０ｂｐ、１５−１９ｂｐ、１５−１８ｂｐ、１５−１７ｂｐ、１８−３０ｂｐ、１８−２６ｂｐ、１８−２３ｂｐ、１８−２２ｂｐ、１８−２１ｂｐ、１８−２０ｂｐ、１９−３０ｂｐ、１９−２６ｂｐ、１９−２３ｂｐ、１９−２２ｂｐ、１９−２１ｂｐ、１９−２０ｂｐ、１９ｂｐ、２０−３０ｂｐ、２０−２６ｂｐ、２０−２５ｂｐ、２０−２４ｂｐ、２０−２３ｂｐ、２０−２２ｂｐ、２０−２１ｂｐ、２０塩基対、２１−３０ｂｐ、２１−２６ｂｐ、２１−２５ｂｐ、２１−２４ｂｐ、２１−２３ｂｐ、２１−２２ｂｐ、２１ｂｐ、２２ｂｐまたは２３ｂｐを含むそれらの間のあらゆる小領域であり得る。Ｄｉｃｅｒおよび同様の酵素で処理することにより細胞中で産生されるｄｓＲＮＡは、一般的に約１９から２２ｂｐの範囲の長さである。ｄｓＤＮＡの二本鎖領域の一本鎖は、標的ＲＮＡの領域に実質的に相補的である配列を含む。二本鎖構造を形成する２つの鎖は、少なくとも１つの自己相補的二本鎖領域を有する単一のＲＮＡ分子から形成され得るか、または二本鎖を形成するようにハイブリダイズする２つ以上の別々のＲＮＡ分子から形成され得る。二本鎖領域が単一の分子の２つの自己相補的領域から形成される場合、分子は、二本鎖構造を形成する一方の鎖の３’−末端およびそれぞれの他方の鎖の５’−末端間で、ヌクレオチドの一本鎖（本明細書において、例えば、ｓｈＲＮＡ構築物において見出される、「ヘアピンループ」と称される）により分離される二本鎖領域を有し得る。ヘアピンループは、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含むことができ；いくつかの態様において、ヘアピンループは、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも２３またはそれ以上の不対ヌクレオチドを含むことができる。ｄｓＲＮＡの２つの実質的に相補的な鎖が別々のＲＮＡ分子からなる場合、これらの分子は、必ずしもではないが、共有的に結合され得る。２つの鎖がヘアピンループにより共有的に結合されるとき、構造は一般的に本明細書および当分野において「ｓｈＲＮＡ」と称される。２つの鎖がヘアピンループ以外の手段により共有的に結合されるとき、結合構造は「リンカー」と称される。
ＲＮＡ干渉
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を使用して、ｄｓＲＮＡと同じ配列を含むメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を破壊する転写後標的化遺伝子サイレンシング技術である。ＲＮＡｉのプロセスは、リボヌクレアーゼＩＩＩ（Ｄｉｃｅｒ）がより長いｄｓＲＮＡをｓｉＲＮＡと呼ばれるより短いフラグメントに開裂するときに起こる。ｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）は、一般的に約２１から２３個のヌクレオチド長であり、約１９塩基対の二本鎖を含む。次に、より短いＲＮＡセグメントは、標的ｍＲＮＡの分解を介在する。Ｄｉｃｅｒはまた、翻訳調節に関与する保存された構造の前駆体ＲＮＡからの２１および２２−ヌクレオチドのスモールテンポラル(small temporal)ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ）の切断に関与している。Hutvagnerら 2001, Science, 293, 834。ＲＮＡｉ応答はまた、ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖に相補的な一本鎖ｍＲＮＡの開裂を介在する、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として一般的に称されるエンドヌクレアーゼ複合体を特徴とする。標的ＲＮＡの開裂は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中央で起こる。
１つの局面において、ＲＮＡ干渉剤は、標的ＲＮＡ配列と相互作用し、標的ＲＮＡの開裂を指向する一本鎖ＲＮＡを含む。理論に縛られることは望まないが、植物および無脊椎動物細胞に導入された長い二本鎖ＲＮＡは、Ｄｉｃｅｒとして知られているＩＩＩ型エンドヌクレアーゼによりｓｉＲＮＡに破壊される（Sharpら Genes Dev. 2001, 15:485）。リボヌクレアーゼ−ＩＩＩ−様酵素であるＤｉｃｅｒは、ｄｓＲＮＡを特徴的な２つの塩基の３’オーバーハングを有する１９−２３塩基対の低分子干渉ＲＮＡに処理する（Bernsteinら (2001) Nature 409:363）。次に、ｓｉＲＮＡはＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に取り込まれ、１つ以上のヘリカーゼがｓｉＲＮＡ二本鎖をほどくと、現在、不対ｓｉＲＮＡ鎖の１つが「ガイド」鎖として作用して標的認識に導くことを可能にする（Nykanenら (2001) Cell 107:309）。適当な標的ｍＲＮＡにアンチセンスガイド鎖が結合すると、ＲＩＳＣ内の１つ以上のエンドヌクレアーゼは標的を開裂し、サイレンシングを誘導する（Elbashirら (2001) Genes Dev. 15:188）。したがって、１つの局面において、本願発明は、標的遺伝子のサイレンシングをもたらすためにＲＩＳＣ複合体の形成を促進する一本鎖ＲＮＡに関する。
ＲＮＡ干渉はまた、種々の系において研究されている。ショウジョウバエの胚溶解物における研究は（Elbashirら 2001 EMBO J. 20: 6877およびTuschlら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／７５１６４）、ｓｉＲＮＡの長さ、構造、化学的組成、および種々の系、とりわけ哺乳動物において効率的なＲＮＡｉ活性を介在するために重要である配列の特定の必要条件を示した。これらの試験は、２１−ヌクレオチドのｓｉＲＮＡ二本鎖が、３’−末端ジヌクレオチドオーバーハングを含むとき、非常に活性であることを示した。２’−デオキシヌクレオチド（２’−Ｈ）での３’−末端ｓｉＲＮＡオーバーハングヌクレオチドの置換は、許容された。加えて、ｓｉＲＮＡ二本鎖の標的相補鎖上の５’−リン酸は、通常、ｓｉＲＮＡ活性のために必要である。治療的使用に関してより重要なことは、約５０ｂｐより短いｓｉＲＮＡ二本鎖は、哺乳動物細胞におけるインターフェロン応答を活性化しない。例えば、Ｔｕｓｃｈｌら、ＷＯ０１／７５２１６４参照。
したがって、本明細書に記載されているｄｓＲＮＡ分子（ＲＮＡｉ剤）は、ベータ−ＥＮａＣのＲＮＡ干渉において有用である。
ＲＮＡｉ剤：センス鎖、アンチセンス鎖および（任意の）オーバーハングの特徴
種々の態様において、ＲＮＡｉ剤は、第１の鎖および第２の鎖、例えば、センス鎖およびアンチセンス鎖、および所望により、本明細書においてオーバーハングと称される不対ヌクレオチドを含む二本鎖の一方または両方の鎖を含む。
「アンチセンス鎖」なる用語は、標的配列に実質的に相補的である領域を含むＲＮＡｉ剤の鎖を示す。本明細書において使用される「相補性の領域」なる用語は、本明細書で定義されている配列、例えば、標的配列に実質的に相補的であるアンチセンス鎖の領域を示す。相補性の領域が標的配列に完全に相補的でないとき、不一致は、分子の内部または末端領域であり得る。一般的に、最も耐用性の不一致は、末端領域、例えば、５’および／または３’末端の５、４、３または２個のヌクレオチド内である。
本明細書において使用される「センス鎖」なる用語は、本明細書において定義されているアンチセンス鎖の領域に実質的に相補的である領域を含むＲＮＡｉ剤の鎖を示す。
遺伝子の配列は、とりわけコーディングセグメント内のゆらぎ(wobble)の位置または非翻訳領域で個体から個体で変化し得る；個体はまた、コード配列で互いに異なり、ｍＲＮＡにおいてさらなる違いをもたらし得る。したがって、ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンス鎖の配列は、必要なとき、個体患者に対応するように設計され得る。ＲＮＡｉ剤はまた、免疫原性を減少させる、望ましくないｍＲＮＡ（例えば、「的外れの効果」）に結合する、または、血液中の安定性を増加させるように配列を修飾することもできる。これらの配列変異体は、ＲＮＡｉ剤の塩基の化学修飾または５’もしくは３’または他の末端キャップと独立している。
ＲＮＡｉ剤はまた、０、１または２個のオーバーハングを有し得；０ｎｔのオーバーハングの場合、それらが平滑末端である。ＲＮＡｉ剤は０、１または２個の平滑末端を有し得る。「平滑末端ＲＮＡｉ剤」において、両方の鎖は塩基対にて終了する；したがって、平滑末端分子は３’または５’のいずれかの一本鎖ヌクレオチドオーバーハングを欠いている。
本明細書において使用される、「オーバーハング」または「ヌクレオチドオーバーハング」なる用語は、ＲＮＡｉ剤の二本鎖構造の二本鎖の少なくとも１つの末端から突き出ている少なくとも１つの不対ヌクレオチドを示す。例えば、ｄｓＲＮＡの一本鎖の３’−末端が他の鎖の５’−末端を越えて伸びているとき（または逆もまた同様）、不対ヌクレオチドはオーバーハングを形成する。ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを含むことができ；あるいは、オーバーハングは、少なくとも２個のヌクレオチド、少なくとも３個のヌクレオチド、少なくとも４個のヌクレオチド、少なくとも５個のヌクレオチドまたはそれ以上を含むことができる。オーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドを含むヌクレオチド／ヌクレオシド類似体を含むか、それらからなり得る。オーバーハングは、センス鎖、アンチセンス鎖またはそれらの任意の組合せ上であり得る。さらに、オーバーハングのヌクレオチドは、ｄｓＲＮＡのアンチセンスまたはセンス鎖のいずれかの５’末端、３’末端または両方の末端上であり得る。
ＲＮＡｉ剤はまた、所望によりキャップを含むことができる。「キャップ」などなる用語は、二本鎖ヌクレオチド二本鎖の末端に結合した化学部分を含むが、ヌクレオチドまたはヌクレオシドである化学部分を排除するように、本明細書において使用される。「３’キャップ」は、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドの３’末端で結合される。「５’キャップ」は、ヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドの５’末端で結合される。１つの態様において、３’エンドキャップは、例えば、ＷＯ２００５／０２１７４９およびＷＯ２００７／１２８４７７に記載されているものである。
したがって、本願発明は、ＲＮＡｉ剤中にアンチセンス鎖（リンカーまたはループを介して連続または結合していてもよい）を含むベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤を考慮する。さらなる特定の態様において、ＲＮＡｉ剤は、二本鎖または相補的領域を共に含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。１つの態様において、それはまた、所望により、１または２つのオーバーハングおよび／または１または２つのキャップを含むことができる。ＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣのＲＮＡ干渉を誘導するために使用される。
標的および相補的配列
本願発明のＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣの遺伝子をコードするｍＲＮＡを標的とする（例えば、に特異的に結合する、にアニーリングする、など）。ベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤の使用は、ベータ−ＥＮａＣ活性、レベルおよび／または発現の減少、例えば、標的遺伝子または標的配列の「ノックダウン」または「ノックアウト」をもたらす。特に、１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣの過剰発現または過剰活性により特徴付けられる疾患状態の場合、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の投与は、ベータ−ＥＮａＣ活性の正常レベルおよび／またはＮａ＋再吸収の正常レベルに回復させるために十分なベータ−ＥＮａＣ遺伝子をノックダウンする。
本明細書において使用される「標的配列」または「標的遺伝子」は、一次転写産物のＲＮＡプロセッシング産物であるｍＲＮＡを含む、遺伝子、例えば、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の転写中に形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の連続した部分を示す。配列の標的部分は、その位置でまたはその位置付近でｉＲＮＡ指向性開裂に関して基質として働くために少なくとも十分な長さである。例えば、標的配列は、一般的に９−３６ヌクレオチド（「ｎｔ」）の長さ、例えば、１５−３０ｎｔの長さであり、それらの間の全ての部分的な範囲を含む。非限定的な例として、標的配列は、１５−３０ｎｔ、１５−２６ｎｔ、１５−２３ｎｔ、１５−２２ｎｔ、１５−２１ｎｔ、１５−２０ｎｔ、１５−１９ｎｔ、１５−１８ｎｔ、１５−１７ｎｔ、１８−３０ｎｔ、１８−２６ｎｔ、１８−２３ｎｔ、１８−２２ｎｔ、１８−２１ｎｔ、１８−２０ｎｔ、１９−３０ｎｔ、１９−２６ｎｔ、１９−２３ｎｔ、１９−２２ｎｔ、１９−２１ｎｔ、１９−２０ｎｔ、１９ｎｔ、２０−３０ｎｔ、２０−２６ｎｔ、２０−２５ｎｔ、２０−２４ｎｔ、２０−２３ｎｔ、２０−２２ｎｔ、２０−２１ｎｔ、２０ｎｔ、２１−３０ｎｔ、２１−２６ｎｔ、２１−２５ｎｔ、２１−２４ｎｔ、２１−２３ｎｔまたは２１−２２ｎｔ、２１ｎｔ、２２ｎｔまたは２３ｎｔであり得る。ＲＮＡｉのセンスおよびアンチセンス鎖は、標的核酸であるベータ−ＥＮａＣに相補的である配列を含む。
本明細書において使用され、他に記載のない限り、「相補的」なる用語は、特定の条件で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとハイブリダイズし、二本鎖構造を形成する第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの能力を示す。このような条件は、例えば、ストリンジェント、例えば、４００ｍＭのＮａＣｌ、４０ｍＭのＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０℃または７０℃ １２−１６時間、その後洗浄であり得る。他の条件、例えば、生物体内で遭遇し得る生理学的に関連した条件を、適用できる。当業者は、ハイブリダイズされたヌクレオチドの最終的な適用にしたがって、２つの配列の相補性の試験のために非常に適当な条件セットを決定することができる。
本明細書において使用される「相補的」配列はまた、ハイブリダイズする能力に対して上記必要条件を満たす限り、非ワトソンクリック塩基対および／または非天然および修飾されたヌクレオチドから形成される塩基対を含むか、またはこれらの塩基対から完全に形成され得る。このような非ワトソンクリック塩基対は、限定はしないが、Ｇ：Ｕ ＷｏｂｂｌｅまたはＨｏｏｇｓｔｅｉｎ塩基対合を含む。
本明細書において「相補的」、「完全に相補的」および「実質的に相補的」なる用語は、さらに、ｄｓＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖および標的配列間の塩基マッチングに対して使用され得、これらの使用の文脈から理解される。
本明細書において使用されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）「の少なくとも一部に実質的に相補的」であるポリヌクレオチドは、興味あるｍＲＮＡ（例えば、ベータ−ＥＮａＣをコードするｍＲＮＡ）の連続した部分に実質的に相補的であるポリヌクレオチドを示す。例えば、配列がベータ−ＥＮａＣをコードするｍＲＮＡの非中断部分に実質的に相補的であるとき、ポリヌクレオチドはベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの少なくとも一部に相補的である。
本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤内、例えば、ｄｓＲＮＡ内での相補的配列は、１つまたは両方のヌクレオチド配列の全長にわたって、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドへの塩基対合を含む。このような配列は、本明細書において互いに「完全に相補的」であると称さることができる。しかしながら、第１の配列が本明細書において第２の配列に対して「実質的に相補的」であると称されるとき、２つの配列は完全に相補的であり得、またはそれらは最大３０塩基対の二本鎖のためのハイブリダイゼーション時に１つ以上であるが、一般的に最大５、４、３または２個の不一致な塩基対を形成し得るが、それらの最終的な適用に非常に関連した条件下でハイブリダイズする能力、例えば、ＲＩＳＣ経路を介する遺伝子発現の阻害を保持している。しかしながら、２つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーション時に、１つ以上の一本鎖オーバーハングを形成するように設計されるとき、このようなオーバーハングは相補性の決定に関して不一致と見なしてはならない。例えば、１つの２１ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドおよび別の２３ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドを含む二本鎖は（ここで、より長いオリゴヌクレオチドは、より短いオリゴヌクレオチドに完全に相補的である２１ヌクレオチドの配列を含む）、本明細書における目的のために「完全に相補的」となお称され得る。オーバーハングなる用語は、上記のとおり、二本鎖ヌクレオチド二本鎖の３’または５’末端での不対ヌクレオチドを示す。１つの態様において、オーバーハングは、０から４ｎｔの長さであり、３’末端上である。
したがって、本願発明のＲＮＡｉ剤は、標的ベータ−ＥＮａＣにおける標的配列に相補的または実質的に相補的であり、センスおよびアンチセンス鎖（ループを介して連続または連結していてもよい、あるいは結合していてもよい）を含む二本鎖であって、ここで、該二本鎖領域は、９から３６ｂｐの長さ（特に、例えば、１９−２２ｂｐまたは１９−２３ｂｐの長さ）であり、さらに、所望により３’または５’オーバーハングを含むことができ、該ＲＮＡｉ剤は３’キャップを含むことができる。ＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣのレベル、発現および／または活性を下方調節または阻害する、および／またはほぼ正常レベルのＥＮａＣおよび／またはベータ−ＥＮａＣ活性またはＥＮａＣに関連する他の生物学的機能を確立または再確立するＲＮＡ干渉を介在する。
ベータ−ＥＮａＣレベル、発現および／または活性を低下させるＲＮＡｉ剤
ベータ−ＥＮａＣを標的化するためのＲＮＡｉ剤は、本明細書において提供されるベータ−ＥＮａＣ配列に結合し、ＲＮＡｉメカニズムを介するベータ−ＥＮａＣを減少させるように働くものを含む。典型的なベータ−ＥＮａＣに対するｓｉＲＮＡは、例えば、表１において提供される。
本願発明のＲＮＡｉ剤は、ほぼ正常レベルのベータ−ＥＮａＣ活性、発現および／またはレベルおよび／またはＮａ＋再吸収がなし遂げられるように、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現をサイレンスする、阻害する、下方調節する、および／または抑制する。
加えて、種々の態様において、疾患状態および生物学的関係に依存して、正常レベル以下または正常レベル以上であるベータ−ＥＮａＣ発現レベル、活性および／またはレベルを確立するために、本願発明のＲＮＡｉ剤を使用することが許容される。
当分野で知られている任意の方法を、ベータ−ＥＮａＣ ｓｉＲＮＡにより誘導されるベータ−ＥＮａＣ活性、レベルおよび／または発現の変化を測定するために使用することができる。測定をｓｉＲＮＡの投与前、中および後の複数の時点で行い、ｓｉＲＮＡの効果を測定することができる。
発現を「サイレンシング」、「阻害」、「発現を下方調節」、「発現を抑制」などの用語は、本明細書において、それらがベータ−ＥＮａＣ遺伝子を示す限りにおいて、処理されているか、または処理されていない第１の細胞または細胞群（コントロール細胞）と実質的に同一の第２の細胞または細胞群と比較して、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現が阻害されるようにベータ−ＥＮａＣ遺伝子を転写する第１の細胞または細胞群から単離されるか、またはそれらにおいて検出され得る、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの量の減少により明らかにされるベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制を示す。阻害の程度は、通常
において示される。
あるいは、阻害の程度は、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子発現に機能的に関連したパラメーター、例えば、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子によってコードされるタンパク質の量の減少、肺液レベルまたは粘液レベルなどにおける変化に関して得ることができる。原則として、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子サイレンシングは、構成的に、もしくはゲノム工学のいずれか、および任意の適当なアッセイにより、ベータ−ＥＮａＣを発現するあらゆる細胞において決定され得る。しかしながら、与えられたＲＮＡｉ剤が特定の程度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を阻害し、したがって本願発明に包含されるのか否かを決定するために、参照またはコントロールが必要であるとき、以下の実施例において提供されるアッセイは、このような参照として役に立つ。
例えば、場合によっては、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現は、本願発明において特徴付けられているＲＮＡｉ剤の投与により、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％または５０％抑制される。いくつかの態様において、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子は、本願発明において特徴付けられているＲＮＡｉ剤の投与により、少なくとも約６０％、７０％または８０％抑制される。いくつかの態様において、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤の投与により、少なくとも約８５％、９０％もしくは９５％またはそれ以上抑制される。
ベータ−ＥＮａＣを抑制するＲＮＡｉ剤の能力は、最初にインビトロにて試験され得る（例えば、試験細胞、例えば、Ｈ４４１を使用して）。
次に、インビトロでベータ−ＥＮａＣを抑制することができるＲＮＡｉ剤は、例えば、ＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）アッセイを使用して免疫刺激について試験することができる。ＲＮＡｉ剤はまた、動物試験において試験することができる。試験およびコントロール動物は、例えば、Hummerら 2005 J. Am. Soc. Nephrol. 16: 3160-3166; Randrianarisonら 2007 Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 294: 409-416; Caoら 2006 Am. J. Physiol. Renal Physiolおよびこれらに引用されている文献に記載されているベータ−ＥＮａＣを過剰発現または過小発現するものを含む。ベータ−ＥＮａＣのレベル、活性および／または発現を抑制または改変するＲＮＡｉ剤を、種々のベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置する薬物において使用することができる。
ベータ−ＥＮａＣまたはベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の症状の文脈において「より低い」は、このようなレベルにおける統計的に有意な減少を意味する。減少は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％またはそれ以上であり得る。特定の疾患、または特定の疾患に罹患している個体について、ベータ−ＥＮａＣのレベルまたは発現が上昇しているとき、本願発明のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤での処置は、特に、ベータ−ＥＮａＣのレベルまたは発現をこのような障害のない個体について通常の範囲内と文献において考えられるレベルに減少させることができる。ベータ−ＥＮａＣのレベルまたは発現は、ｍＲＮＡ（例えば、ノーザンブロットまたはＰＣＲによる）またはタンパク質（例えば、ウェスタンブロット）の評価により測定することができる。ベータ−ＥＮａＣ発現に対するＲＮＡｉ剤の効果は、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の転写速度（例えば、ノーザンブロット；または逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応またはリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応による）を測定することにより決定することができる。ＲＴ−ＰＣＲは、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡレベルが腎臓、膵臓および前立腺において高く、肝臓および脾臓において中程度であることを示すために使用された。Brauner-Osborneら 2001. Biochim. Biophys. Acta 1518: 237-248。直接測定は、例えば、ベータ−ＥＮａＣが発現される組織のウェスタンブロットにより、ベータ−ＥＮａＣ（細胞表面により発現される）のレベルで行うことができる。
本明細書において使用される「下方調節する」は、ベータ−ＥＮａＣの生物学的活性および／または発現におけるあらゆる統計的に有意な減少、例えば、活性（すなわち、完全阻害）および／または発現の完全な阻止を示す。例えば、「下方調節」は、ベータ−ＥＮａＣレベル、活性および／または発現において少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％の減少を示し得る。
本明細書において使用されるベータ−ＥＮａＣにおいて「阻害する」または「阻害」は、ベータ−ＥＮａＣの生物学的レベル、活性および／または発現におけるあらゆる統計的に有意な減少、例えば、活性および／または発現の完全な阻止を示す。例えば、「阻害」は、ベータ−ＥＮａＣレベル、活性および／または発現において少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％の減少を示し得る。本明細書において使用される「阻害する」なる用語は、同様に、他のあらゆる生物学的剤または組成物におけるレベル、活性および／または発現における有意な減少を示す。
「レベル」に関して、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤が、ベータ−ＥＮａＣのレベル、例えば、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡのレベルまたはベータ−ＥＮａＣのタンパク質のレベルまたはベータ−ＥＮａＣの活性のレベルを変えることができることを意味する。
いくつかの疾患、例えば、嚢胞性線維症は、過剰ＥＮａＣ−介在Ｎａ＋吸収により特徴付けられる。特に１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣの過剰発現および／または過剰活性により特徴付けられる疾患の場合、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の投与は、ベータ−ＥＮａＣのレベル、発現および／または活性を減少させる。しかしながら、過剰に低いレベルのベータ−ＥＮａＣはまた、肺液クリアランスの障害および腎臓機能障害を引き起こし得る。Randrianarisonら 2007 Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 294: 409-416。したがって、種々の態様において、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の投与は、特に正常またはほぼ正常レベルのベータ−ＥＮａＣ活性、発現および／またはレベルを確立または再確立する。
レベル、発現および／または活性に関して「正常」または「ほぼ正常」は、健常細胞、組織または臓器においてベータ−ＥＮａＣのレベル、発現または活性の少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％および／または約１００％；および／または最大約１００％、約１２０％、約１３０％、約１４０％または約１５０％を意味する。これは、例えば、Gamblingら 2004 Kidney Intl. 65: 1774-1781に記載されている肺または腎臓ホモジネートを使用して測定することができる。特に、１つの態様において、適当なベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤の適当な量の投与は、ベータ−ＥＮａＣレベル、活性および／または発現および／またはＮａ＋再吸収レベルを、健常細胞、組織または臓器の約５０％から約１５０％、さらに特に約６０％から約１４０％、さらに特に約７０％から約１３０％、さらに特に約８０％から約１２０％、さらに特に約９０％から約１１０％、およびさらに特に約１００％に回復させる。ベータ−ＥＮａＣ活性のレベルはまた、肺液バランスにより間接的に測定することができる。肺液バランスは、余分な血管肺水の量を反映する無血の肺の湿乾重量比を計算することにより概算することができる。Randrianarisonら 2007 Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 294: 409-416。ベータ−ＥＮａＣ活性のレベルはまた、肺、特に細気管支、肺胞管、肺胞上皮および血管の組織学的試験により間接的に測定することができる。Randrianarisonら 2007;およびZhouら 2008 Am. J. Resp. Crit. Care Med. 178: 1245-1256。したがって、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を有する患者へのベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉの投与は、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡまたはタンパク質レベルの直接的測定または、例えば、組織学的サンプルまたは肺液レベルの分析の間接的測定により決定されるとき、特に、ベータ−ＥＮａＣのレベル、活性、および／または発現およびＮａ＋再吸収のレベルをほぼ正常レベルに回復させる。
加えて、種々の態様において、疾患状態および生物学的関係に依存して、正常レベル以下または正常レベル以上であるベータ−ＥＮａＣ発現レベル、活性および／またはレベルを確立するために、本願発明のＲＮＡｉ剤を使用することが許容される。
種々の因子が、ＥＮａＣ、または具体的にはベータ−ＥＮａＣのレベルを改変させることが知られている。ＥＮａＣの生理学的活性を増加させるホルモンは、アルドステロン、バソプレシンおよびインスリンを含む。ベータ−ＥＮａＣは、具体的には、ラットにおいて、バソプレシンおよび水制限により、ならびに重炭酸ナトリウム負荷中に上方調節される。これらの種々の因子は、ベータ−ＥＮａＣレベルに対するＲＮＡｉ剤の効果を決定することにおいて、コントロールとして使用することができる。
ＲＮＡｉ剤およびその修飾の型
細胞において特定のタンパク質の発現を下方調整するためのアンチセンス核酸を含むＲＮＡｉ剤または組成物の使用は、当分野でよく知られている。ＲＮＡｉ剤は、別の核酸のコード鎖（例えば、ｍＲＮＡ）に相補的である配列を含み、該鎖へ水素結合することができる。したがって、種々の態様において、本願発明のＲＮＡｉ剤は、例えば、表１に示されている任意の配列を標的化する（例えば、該配列と相補的である、該配列に水素結合することができる、など）あらゆるＲＮＡｉ剤を含む。
ｍＲＮＡに相補的であるアンチセンス配列は、コード領域、ｍＲＮＡの５’または３’非翻訳領域、および／またはコードおよび非翻訳領域を架橋する領域、および／またはそれらの部分に相補的であり得る。さらに、ＲＮＡｉ剤またはその部分は、ｍＲＮＡをコードする遺伝子の調節領域、例えば、転写または翻訳開始配列または調節要素に相補的であり得る。特に、ＲＮＡｉ剤またはその部分は、ｍＲＮＡのコード鎖における開始コドンに先立つもしくは架かる領域またはｍＲＮＡの３’非翻訳領域に相補的であり得る。
ＲＮＡｉ剤分子は、ワトソンクリック塩基対の規則にしたがって設計することができる。ＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの全コード領域に相補的であり得るが、さらに特にベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡのコードまたは非コード領域の一部のみに対してアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの翻訳開始部位の周囲の領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５、１０、１５、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５または５０ヌクレオチド長であり得る。
ＲＮＡｉ剤は、内部に、または末端の一方にもしくは末端の両方に修飾を有し得る。末端での修飾は、ＲＮＡｉ剤を安定化させる手助けをし、血液中のヌクレアーゼによる分解から保護することができる。ＲＮＡｉ剤は、所望により、遺伝子のスプライス部位、例えば、エキソン−イントロン接合部付近でまたは該部位で知られているまたは予測されたベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの領域に指向され得る（例えば、Saxenaら 1998に記載されている）。
ＲＮＡｉ剤はまた、所望により、ｍＲＮＡの知られているまたは予測された暴露および／または一本鎖領域（例えば、ループ）をアニールするように設計することができる。
ＲＮＡｉ剤は、当分野で知られている手段を使用する化学合成および酵素ライゲーション反応を使用して構築することができる。例えば、ＲＮＡｉ剤は、天然ヌクレオチド、または、的外れの効果を減少させる、および／または分子の生物学的安定性を増加させるか、またはアンチセンスおよびセンス核酸間で形成される二本鎖の物理的安定性を増加させるように設計された様々に修飾されたヌクレオチドを使用して化学的に合成することができ、例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドを使用することができる。
「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」および「Ｕ」のそれぞれは、一般的に、塩基としてグアニン、シトシン、アデニン、チミジンおよびウラシルをそれぞれ含むヌクレオチドを表す。しかしながら、「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」なる用語はまた、修飾されたヌクレオチドまたは代理置換部分を示すことができる。当業者は、グアニン、シトシン、アデニンおよびウラシルが、このような置換部分を有するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対特性を実質的に変化させることなく、他の部分により置き換えられ得ることをよく知っている。例えば、限定されないが、その塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシンまたはウラシルを含むヌクレオチドと塩基対形成し得る。したがって、ウラシル、グアニンまたはアデニンを含むヌクレオチドは、本願発明において特徴付けられるｄｓＲＮＡのヌクレオチド配列において、例えば、イノシンを含むヌクレオチドにより置換され得る。別の例において、オリゴヌクレオチドにおいてアデニンおよびシトシンは、どこでも、それぞれグアニンおよびウラシルで置換され、標的ｍＲＮＡとＧ−Ｕゆらぎ塩基対を形成することができる。このような置換部分を含む配列は、本願発明において特徴付けられる組成物および方法に適当である。
当業者は、「ＲＮＡ分子」または「リボヌクレオチド分子」なる用語は、自然（すなわち、天然）に発現される、または見いだせるＲＮＡ分子のみでなく、本明細書に記載されている、または当分野で知られている１つ以上のリボヌクレオチド／リボヌクレオシド類似体または誘導体を含むＲＮＡの非天然類似体および誘導体も包含すると認識できる。厳密に言えば、「リボヌクレオシド」は、ヌクレオシド塩基およびリボース糖を含み、「リボヌクレオチド」は、１、２または３つのリン酸部分を有するリボヌクレオシドである。しかしながら、「リボヌクレオシド」および「リボヌクレオチド」なる用語は、本明細書において使用されるとき均等であると考えることができる。ＲＮＡは、例えば、本明細書の以下に記載されている核酸塩基構造またはリボース−リン酸骨格構造において修飾され得る。しかしながら、リボヌクレオシド類似体または誘導体を含む分子は、二本鎖を形成する能力を保持しなければならない。非限定的な例として、ＲＮＡ分子はまた、限定はしないが、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’ホスホロチオエート結合基を含むヌクレオシド、コレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基に連結した末端ヌクレオシド、ロックヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオシド、２’−アミノ−修飾ヌクレオシド、２’−アルキル−修飾ヌクレオシド、モルホリノヌクレオシド、非ロックリボヌクレオチド（例えば、ＷＯ２００８／１４７８２４に記載されている非環状ヌクレオチドモノマー）、ヌクレオシドを含むホスホロアミダートもしくは非天然塩基、またはそれらの任意の組合せを含む、少なくとも１つ修飾されたリボヌクレオシドを含むことができる。あるいは、ＲＮＡ分子は、少なくとも２つの修飾されたリボヌクレオシド、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０またはそれ以上、最大全長のｄｓＲＮＡ分子を含むことができる。修飾は、必ずしも、ＲＮＡ分子におけるこのような複数の修飾されたリボヌクレオシドのそれぞれで同じではない。１つの態様において、本明細書に記載されている方法および組成物における使用のために考慮される修飾ＲＮＡは、必要な二本鎖構造を形成する能力を有し、ＲＩＳＣ経路を介して標的ＲＮＡの特異的な分解を可能にするか、または介在するペプチド核酸（ＰＮＡ）である。
ＲＮＡｉ剤を産生するために使用することができる修飾ヌクレオチドの例は、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ−Ｄ−ガラクトシルケウオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、ベータ−Ｄ−マンノシルケウオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、ケウオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリンを含む。
１つの態様において、本願発明は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のいずれかの修飾変異体を含む。修飾変異体は、同じ配列を含むが、リン酸、糖、塩基、ヌクレオチドなどにおける修飾を含むように修飾することができる。例えば、修飾変異体は、本明細書に記載されている１つ以上の修飾ヌクレオチド、例えば、２’−修飾Ｃにより置き換えられたＣを含むことができる。
１つの局面において、修飾リボヌクレオシドは、デオキシリボヌクレオシドを含む。このような場合、ＲＮＡｉ剤は、１つ以上のデオキシヌクレオシド、例えば、デオキシヌクレオシドオーバーハング、またはｄｓＲＮＡの二本鎖部分内の１つ以上のデオキシヌクレオシドを含むことができる。しかしながら、いかなる場合でも、二本鎖ＤＮＡ分子が「ＲＮＡｉ剤」なる用語により包含されないことは自明である。
２つのヌクレオチド３’−オーバーハングを有する２１−ｍｅｒ ｓｉＲＮＡ二本鎖の３’−末端ヌクレオチドオーバーハングセグメントをデオキシリボヌクレオチドで置換することは、ＲＮＡｉ活性における副作用を有さない。ｓｉＲＮＡのそれぞれの末端での最大４つのヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドで置換することは、許容されるが、デオキシリボヌクレオチドでの完全な置換は、ＲＮＡｉ活性をもたらさない。国際ＰＣＴ公開ＷＯ００／４４９１４、およびＢｅａｃｈら国際ＰＣＴ公開ＷＯ０１／６８８３６は、ｓｉＲＮＡが、リン酸−糖骨格またはヌクレオシドのいずれかに修飾を含み、少なくとも１つの窒素または硫黄ヘテロ原子を含み得ることをあらかじめ示唆している。 Ｋｒｅｕｔｚｅｒらカナダ特許出願第２，３５９，１８０号はまた、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼＰＫＲの活性化を中和するために、ｄｓＲＮＡ構築物における使用のための特定の化学修飾、具体的には、２’−アミノまたは２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、および２’−Ｏまたは４’−Ｃメチレン架橋を含むヌクレオチドを記載している。さらなる３’−末端ヌクレオチドオーバーハングは、ｄＴ（デオキシチミジン）、２’−Ｏ，４’−Ｃ−エチレンチミジン（ｅＴ）、および２−ヒドロキシエチルホスフェート（ｈｐ）を含む。
Parrishら 2000 Molecular Cell 6: 1077-1087は、長い（＞２５ｎｔ）ｓｉＲＮＡ転写産物を使用してＣ．エレガンスにおけるｕｎｃ−２２遺伝子を標的とする特定の化学修飾を試験した。著者らは、Ｔ７およびＴ３ ＲＮＡポリメラーゼでチオリン酸エステルヌクレオチド類似体を組み込むことによって、これらのｓｉＲＮＡ転写産物へのチオリン酸エステル残基の導入を記載しており、２つのホスホロチオエート修飾塩基を有するＲＮＡもまた、ＲＮＡｉとしての有効性における実質的な減少を有したことを観察した。さらに、Ｐａｒｒｉｓｈらは、２つ以上の残基のホスホロチオエート修飾が、干渉活性がアッセイできないほどに、インビトロでＲＮＡを非常に不安定化させることを報告した。同上１０８１。著者らはまた、長いｓｉＲＮＡ転写産物におけるヌクレオチド糖の２’位での特定の修飾を試験し、リボヌクレオチドに対するデオキシヌクレオチドの置換が、とりわけウリジンのチミジンへのおよび／またはシチジンのデオキシ−シチジンへの置換の場合、干渉活性において実質的な減少を生じることを見出した。同上。加えて、著者らは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖において、ウラシルに対して４−チオウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシルおよび３−（アミノアリル）ウラシル、ならびにグアノシンに対してイノシンで置換することを含む特定の塩基修飾を試験した。４−チオウラシルおよび５−ブロモウラシル置換は許容されるようであるが、Ｐａｒｒｉｓｈは、いずれかの鎖に組み込まれるとき、イノシンが干渉活性において実質的な減少を生産することを報告した。Ｐａｒｒｉｓｈはまた、アンチセンス鎖中の５−ヨードウラシルおよび３−（アミノアリル）ウラシルの組み込みが、同様にＲＮＡｉ活性において実質的な減少をもたらすことを報告した。
当業者は、所望により、当分野で知られている任意の慣用の方法を使用して、ｓｉＲＮＡを合成および修飾することができることを理解している（Henschelら 2004 DEQOR: a web-based tool for the design and quality control of siRNAs. Nucleic Acids Research 32 (Web Server Issue):W113-W120参照）。さらに、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ発現構築物／ベクターに対して有用である種々の調節配列（例えば、構成的または誘導プロモーター、組織−特異的プロモーターまたはそれらの機能性フラグメントなど）があることが当業者には明らかである。
ヌクレアーゼ安定性および有効性における有意な増強で核酸分子に導入することができる糖、塩基、リン酸および骨格修飾を記載している当分野でいくつかの例がある。例えば、オリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性基での修飾、例えば、２’−アミノ、２’−Ｃ−アリル、２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−アリル、２’−Ｈ、ヌクレオチド塩基修飾により、安定性を増加する、および／または生物学的活性を増加するように修飾される（概観のために、Usman and Cedergren 1992 TIBS. 17: 34; Usmanら 1994 Nucleic Acids Symp. Ser. 31: 163; Burginら 1996 Biochemistry 35: 14090参照）。核酸の糖修飾は、当分野で広範囲に記載されている。
ＲＮＡｉ剤のさらなる修飾および結合は、記載されている。Soutschekら 2004 Nature 432: 173-178は、ピロリジンリンカーの手段によりｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖の３’−末端へのコレステロールの結合を与え、それにより共有および不可逆性複合体を産生した。ＲＮＡｉ剤の化学修飾（他の分子との結合を含む）はまた、インビボで薬物動態学の保持時間および効率を改善するために作られ得る。
種々の態様において、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；および／または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチドを含む。
種々の態様において、ＲＮＡｉ剤は、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む。
別の態様において、ＲＮＡｉは、ギャップまたは塩基の欠落を含む。例えば、リン酸−糖骨格は、存在するが、塩基の欠落があり得る。
別の態様において、ＲＮＡｉ剤は、一本鎖ニックを有する（例えば、骨格において断絶または結合の欠落）。種々の態様において、一本鎖ニックは、センスまたはアンチセンス鎖のいずれか、またはその両方であり得る。
このニックは、例えば、センス鎖においてであり、ニックなしの対応するＲＮＡｉ剤よりも的外れの効果が小さくてもよい低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡまたはｓｉｓｉＲＮＡを生産することができる。
アンチセンス核酸またはＲＮＡｉ剤はまた、代替骨格、例えば、ロック核酸（ＬＮＡ）、モルホリノ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、またはグリコール核酸（ＧＮＡ）を有することができ、および／または、標識することができる（例えば、放射性標識または他の点ではタグ）。
１つまたは両方の鎖は、代替骨格を含むことができる。
さらに別の態様において、本願発明の方法により使用されるＲＮＡｉ剤は、α−アノマー核酸分子を含むことができる。α−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特定の二本鎖ハイブリッドを形成し、通常のβユニットに反して、鎖は互いに平行する。Gaultierら 1987 Nucleic Acids. Res. 15: 6625-6641。
アンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（Inoueら 1987 Nucleic Acids Res. 15: 6131-6148）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ類似体（Inoueら 1987 FEBS Lett. 215: 327-330）を含むことができる。
さらに別の態様において、ＲＮＡｉ剤はリボザイムである。リボザイムは、相補的領域を有する一本鎖核酸、例えば、ｍＲＮＡを開裂させることができるリボヌクレアーゼ活性を有する触媒ＲＮＡ分子である。したがって、リボザイム［例えば、ハンマーヘッド型リボザイム（Haselhoffら 1988, Nature 334: 585-591に記載されている）］は、ベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡ転写産物を触媒的に開裂させるために使用して、それによりベータ−ＥＮａＣのｍＲＮＡの翻訳を阻害することができる。
あるいは、遺伝子発現は、ベータ−ＥＮａＣの調節領域（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的であるヌクレオチド配列を標的化することにより阻害され、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の転写を防止する三重らせん構造を形成することができる。一般的に、Helene 1991 Anticancer Drug Des. 6(6): 569-84; Heleneら 1992 Ann. N.Y. Acad. Sci. 660: 27-36;およびMaher 1992, Bioassays 14(12): 807-15参照。
ＲＮＡｉ剤の生産
ＲＮＡｉ剤は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、興味ある標的核酸に対してアンチセンス方向となる）発現ベクターを使用して生物学的に生産することができる。ＲＮＡｉ剤はまた、核酸がｓｈＲＮＡ構築物においてサブクローンされている発現ベクターを使用して、生物学的に生産することができる（すなわち、挿入核酸から転写されるＲＮＡは、興味ある標的核酸に対してアンチセンス方向における第１の領域、ループまたはヒンジを含む第２の領域、および興味ある標的核酸に対してセンス方向における第３の領域を有し、ここで、転写産物の第１および第３の領域は、好ましくはそれ自体でハイブリダイズし、それにより、ステム−アンド−ループ構造を形成する）。
ＲＮＡｉ剤を生産する方法は、当分野でよく知られており、当業者に利用可能である。
ＲＮＡｉ合成のためのキットは、例えば、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ ＢｉｏｌａｂｓおよびＡｍｂｉｏｎから市販されている。
ＲＮＡｉ剤の送達
本願発明のＲＮＡｉ剤は、当分野で知られている任意の方法により、（例えば、インビトロで細胞、試験動物またはヒトに）送達または導入することができる。
本願発明のＲＮＡｉ剤は、一般的に、ベータ−ＥＮａＣをコードする細胞ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズし、転写および／または翻訳を阻害することによって発現を阻害するように、対象に投与されるか、またはインサイチューで生成される。ＲＮＡｉ剤の投与経路の例は、組織部位への直接注射を含む。あるいは、ＲＮＡｉ剤は、選択細胞を標的とするように修飾され、次に全身的に投与され得る。例えば、全身投与において、アンチセンス分子は、例えば、アンチセンス核酸分子を細胞表面受容体または抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結することにより、選択細胞表面上で発現される受容体または抗原に特異的に結合することができるように修飾することができる。アンチセンス核酸分子はまた、当分野でよく知られている、および、例えば、ＵＳ２００７０１１１２３０（この全内容を本明細書に包含させる）に記載されているベクターを使用して細胞に送達することができる。十分な細胞内濃度のアンチセンス分子をなし遂げるために、アンチセンス核酸分子が強いｐｏｌ ＩＩまたはｐｏｌ ＩＩＩプロモーターのコントロール下に置かれているベクター構築物が、好ましい。
ＲＮＡｉ剤を言及しているとき、「細胞に導入」は、当業者により理解されるとおり、細胞への摂取または吸収を容易にするか、または生じることを意味する。ＲＮＡｉ剤の吸収または摂取は、自発的拡散性の、もしくは活性な細胞過程により、または助剤もしくはデバイスにより起こり得る。この用語の意味は、インビトロでの細胞に限定されず；ＲＮＡｉ剤はまた、生体の一部である「細胞に導入」され得る。このような場合、細胞への導入は、生物体への送達を含む。例えば、インビボ送達において、ＲＮＡｉ剤は、組織部位に注射されるか、または全身的に投与され得る。インビボでの送達はまた、ベータグルカン送達系、例えば、米国特許第５，０３２，４０１および５，６０７，６７７号、ならびに米国公開第２００５／０２８１７８１号に記載されているものによってもよい。細胞へのインビトロでの導入は、当分野で知られている方法、例えば、エレクトロポレーションおよびリポフェクションを含む。さらなるアプローチは、本明細書に記載されているか、または当分野で知られている。
組織へのＲＮＡｉ剤の送達は、物質が標的臓器に到達しなければならず、また、標的細胞の細胞質に入らなければならないという両方の問題がある。ＲＮＡは細胞膜を貫通することができず、裸のＲＮＡｉ剤の全身送達は成功しそうにない。ＲＮＡは、血清中のＲＮＡｓｅ活性により迅速に破壊される。これらの理由のため、ＲＮＡｉ剤を標的細胞に送達するための他のメカニズムが、考案されている。当分野で知られている方法は、限定はしないが：ウイルス送達（レトロウイルス、アデノウイルス、レンチウイルス、バキュロウイルス、ＡＡＶ）；リポソーム（リポフェクタミン、陽イオン性ＤＯＴＡＰ、天然ＤＯＰＣ）またはナノ粒子（陽イオン性ポリマー、ＰＥＩ）、細菌送達（ｔｋＲＮＡｉ）、および安定性を改善するためのｓｉＲＮＡの化学修飾（ＬＮＡ）を含む。Xiaら 2002 Nat. Biotechnol. 20およびDevroeら 2002. BMC Biotechnol. 2 1: 15は、ウイルスベクターへのｓｉＲＮＡの取り込みを記載している。ＲＮＡｉ剤の送達のための他の系が考えられており、本願発明のＲＮＡｉ剤は、ＦＤＡまたは他の管轄機関によりすでに認められたおよび／または承認された種々の方法により送達することができる。本願発明のＲＮＡｉ剤は、適当な医薬組成物中で送達することができる。
ＲＮＡｉ剤の医薬組成物
本明細書において使用される「医薬組成物」は、薬理学的に有効量の１つ以上のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤、薬学的に許容される担体、および所望により、ＲＮＡｉ剤と相乗的に働くさらなる疾患処置を含む。本明細書において使用される「薬理学的に有効量」、「治療有効量」または単に「有効量」は、意図される薬理学的、治療的または予防的結果を生じるために有効なＲＮＡｉ剤の量を示す。例えば、与えられた臨床的処置が、疾患または障害と関連する測定可能なパラメーターにおいて少なくとも１０％の減少があるとき、有効であると考慮されるとき、治療有効量の疾患または障害の処置のための薬物は、該パラメーターにおいて少なくとも１０％減少をもたらすために必要な量である。この態様において、治療有効量のベータ−ＥＮａＣを標的とするＲＮＡｉ剤は、少なくとも１０％のベータ−ＥＮａＣのタンパク質レベルを減少させることができる。さらなる態様において、挙げられている臨床的処置は、疾患または障害と関連する測定可能なパラメーターにおいて少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％減少であるとき有効であると考え、疾患または障害の処置のための治療有効量の薬物は、該パラメーターにおいて少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％減少各々の効果のために必要である量である。
「薬学的に許容される担体」なる用語は、治療剤の投与のための担体を示す。このような担体は、限定はしないが、塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの組合せを含む。該用語は、細胞培養培地を明確に排除する。経口的に投与される薬物において、薬学的に許容される担体は、薬学的に許容される賦形剤、例えば、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤および防腐剤を含むが、これらに限定されない。適当な不活性希釈剤は、炭酸ナトリウムおよびカルシウム、リン酸ナトリウムおよびカルシウム、ならびにラクトースを含み、コーンデンプンおよびアルギン酸は、適当な崩壊剤である。結合剤は、デンプンおよびゼラチンを含み得、滑剤は、存在するとき、一般的に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。所望により、錠剤は、胃腸管における吸収を遅延するために、物質、例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルでコーティングされ得る。薬物製剤に含まれる薬剤は、本明細書にさらに記載されている。
ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、固体形態、例えば、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、ジェルキャップ、ゼラチンカプセル、リポソーム、坐薬、チュアブル形態またはパッチであり得る。ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物はまた、液体形態、例えば、溶液、エマルジョン、懸濁液、エリキシル剤またはシロップ中で存在することができる。適当な液体支持体は、水中で様々な比率で、例えば、水、有機溶媒、例えば、ポリオール、例えば、グリセロールまたはグリコール、例えば、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール、またはエタノール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ、またはそれらの混合物であり得る。組成物は、アルブミンまたは界面活性剤でコーティングされたナノサイズの非結晶もしくは結晶顆粒を含むことができる。
適当な支持体は、例えば、抗菌および抗真菌剤、緩衝剤、リン酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、クロロブタノール、ココアバター、着色剤、デキストリン、乳化剤、腸溶コーティング、香味剤、ゼラチン、等張剤、レシチン、ステアリン酸マグネシウム、芳香剤、多価アルコール、例えば、マンニトール、注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチル、パラベン、フェノールソルビン酸、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリジン、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、保存剤、プロピレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、塩化ナトリウム、ソルビトール、種々の糖（スクロース、フルクトース、ガラクトース、ラクトースおよびトレハロースを含むが、これらに限定されない）、デンプン、坐坐薬ロウ、タルク、植物油、例えば、オリーブ油およびコーンオイル、ビタミン、ロウ、および／または湿潤剤を含むことができる。ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤について、好ましい支持体は、デキストランおよび水、例えば、水中で５％のデキストロース（Ｄ５Ｗ）を含む。
医薬組成物の生物学的に不活性な部分は、所望により侵食され、ＲＮＡｉ剤の持続放出を可能にする。
医薬組成物は、送達、安定性、有効性または免疫原性の減少において助けるさらなる成分を含むことができる。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物のさらなる成分は、送達、安定性、有効性または免疫原性の減少において助けるために加えることができる。
リポソームは、以前に薬物送達（例えば、化学療法の送達）のために使用されている。リポソーム（例えば、陽イオン性リポソーム）は、ＰＣＴ公開ＷＯ０２／１００４３５Ａ１、ＷＯ０３／０１５７５７Ａ１およびＷＯ０４０２９２１３Ａ２；米国特許第５，９６２，０１６；５，０３０，４５３；および６，６８０，０６８号；および米国特許出願２００４／０２０８９２１に記載されている。リポソームを製造する方法はまた、ＷＯ０４／００２４５３Ａ１に記載されている。さらに、中性脂質が、陽イオン性リポソームに組み込まれている（例えば、Farhoodら 1995）。
陽イオン性リポソームは、ＲＮＡｉ剤を種々の細胞型へ送達するために使用されている（Sioud and Sorensen 2003；米国特許出願２００４／０２０４３７７；Duxburyら 2004; Donze and Picard, 2002）。
中性リポソームの使用は、Millerら 1998および米国特許出願２００３／００１２８１２に記載されている。
本明細書において使用される「ＳＮＡＬＰ」なる用語は、安定な核酸脂質粒子を示す。ＳＮＡＬＰは、核酸、例えば、ｉＲＮＡまたはｉＲＮＡが転写されるプラスミドを含む減少した水性内部をコートしている脂質の小胞を示す。ＳＮＡＬＰは、例えば、米国特許出願公開第２００６０２４００９３、２００７０１３５３７２および国際出願ＷＯ２００９０８２８１７に記載されている。
脂質ベース、アミンベースおよびポリマーベースの技術を使用する化学的トランスフェクションは、Ambion Inc., Austin, Tex.; and Novagen, EMD Biosciences, Inc, an Affiliate of Merck KGaA, Darmstadt, Germany); Ovcharenko D (2003) “Efficient delivery of siRNAs to human primary cells.” Ambion TechNotes 10 (5): 15-16) の産物において記載されている。さらに、Songら(Nat Med. published online (Fete l 0, 2003) doi: 10.1038/nm828)および他のもの[Caplenら 2001 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 98: 9742-9747;およびMcCaffreyら Nature 414: 34-39] は、肝臓細胞が哺乳動物の循環系へのｓｉＲＮＡの注射により効率的にトランスフェクトすることができることを記載している。
種々の分子が、細胞特異的なＲＮＡｉ剤送達のために使用されている。例えば、プロタミンの核酸を凝縮する特性は、ｓｉＲＮＡを送達するために特異的抗体と混合されている。Songら 2005 Nat Biotech. 23: 709-717。自己集合ペグ化ポリカチオンポリエチレンイミン（ＰＥＩ）はまた、ｓｉＲＮＡを凝縮および保護するために使用されている。Schiffelersら 2004 Nucl. Acids Res. 32: el49, 141-1 10。
次に、ｓｉＲＮＡ含有ナノ粒子は、インテグリンを過剰発現する腫瘍新生血管に成功裏に送達された。Hu-Lieskovanら 2005 Cancer Res. 65: 8984-8992。
本願発明のＲＮＡｉ剤は、例えば、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）；中性リポソーム（ＮＬ）；ポリマーナノ粒子；二本鎖ＲＮＡ結合モチーフ（ｄｓＲＢＭ）を介して；またはＲＮＡｉ剤の修飾（例えば、ｄｓＲＮＡへの共有結合）を介して送達することができる。
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、自己集合性陽イオン性脂質ベース系である。これらは、例えば、中性脂質（リポソームベース）；陽イオン性脂質（ｓｉＲＮＡ負荷のため）；コレステロール（リポソームを安定化するため）；およびＰＥＧ脂質（製剤の安定化、電荷遮蔽および血流中の循環の延長のため）を含むことができる。
陽イオン性脂質は、例えば、頭部基、リンカー、テイルおよびコレステロールテイルを含むことができる。ＬＮＰは、例えば、良い腫瘍送達、血液中の循環の延長、小粒子（例えば、１００ｎｍ未満）および腫瘍微小環境（低いｐＨを有し、低酸素である）中での安定性を有することができる。
中性リポソーム（ＮＬ）は、非陽イオン性脂質ベースの粒子である。
ポリマーナノ粒子は、自己集合性ポリマーベースの粒子である。
二本鎖ＲＮＡ結合モチーフ（ｄｓＲＢＭ）は、修飾が必要である自己集合性ＲＮＡ結合タンパク質である。
種々の態様において、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、１つ以上の診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラクテート １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンに結合している。
本願発明のＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤の投与の特定の方法のために適当な種々の成分を含む医薬組成物において製造することができる
ＲＮＡｉ剤の投与
ベータ−ＥＮａＣを含む医薬組成物は、口腔、吸入（吸入および深い吸入を含む）、経鼻、経口、非経口、インプラント、硬膜外、動脈内、関節内、嚢内、心臓内、脳室内、頭蓋内、皮内、筋肉内、眼窩内、腹腔内、髄腔内、胸骨内、髄腔内、静脈内、くも膜下、被膜下、皮下、表皮下、経内皮、経気管、経血管、経直腸、舌下、局所および／または膣経路を介する注射または注入により投与することができる。これは、注射、注入、皮膚パッチ、または当分野で知られている他のいずれかの方法によるものであってもよい。製剤は、粉末、噴霧型、エアロゾル、粒状、または、そうでなければ送達用に適当に製造された形態であり得る。投与は、液体のとき、ゆっくり、またはボーラスによるものであり得るが、当分野で知られているある環境下では、ボーラス注射は、腎臓を介して物質の喪失をもたらし得る。
ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、当分野で知られている医薬デバイスで投与することができる。例えば、特定の態様において、ＲＮＡｉ剤は、無針皮下注射デバイス、例えば、米国特許第５，３９９，１６３、５，３８３，８５１、５，３１２，３３５、５，０６４，４１３、４，９４１，８８０、４，７９０，８２４または４，５９６，５５６号に記載されているデバイスで投与することができる。本願発明において有用なよく知られているインプラントおよびモジュールの例は、制御された速度で医薬を供給するためのインプラント可能な微小注入ポンプを記載する米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して医薬を投与するための治療用デバイスを記載する米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で医薬を送達するための医薬注入ポンプを記載する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のためのインプラント可能な流速可変型注入装置を記載する米国特許第４，４４７，２２４号；複数のチャンバー区画を有する浸透圧薬送達系を記載する米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧薬送達系を記載する米国特許第４，４７５，１９６号を含む。多様な他のこのようなインプラント、送達系およびモジュールは、当業者に知られている。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、インビボで適切な分配を確保するように製剤化することができる。ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の投与は、全身（体中）であるか、または特に、ｔａｒｇｅｔｅｄ ｔｏ ベータ−ＥＮａＣを発現する（またはベータ−ＥＮａＣを過剰発現するか、またはベータ−ＥＮａＣの過剰活性を示す）組織または臓器、例えば、肺、腎臓、大腸および腺に標的化することができる。これらの特定の組織または臓器を標的化するための方法は、本明細書に記載されている、および／または当分野で知られている。例えば、それらは、リポソーム中で製剤化され得る。リポソームを製造する方法について、例えば、米国特許４，５２２，８１１；５，３７４，５４８；および５，３９９，３３１参照。リポソームは、特定の細胞または臓器に選択的に輸送される１つ以上の部分を含み、したがって標的薬物送達を増強することができる（例えば、V.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29: 685参照）。
標的化部分の例は、葉酸またはビオチン（例えば、Lowらの米国特許５，４１６，０１６参照）；マンノシド（Umezawaら (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153: 1038）；抗体（P.G. Bloemanら (1995) FEBS Lett. 357: 140; M. Owaisら (1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39: 180）；界面活性剤タンパク質Ａ受容体（Briscoeら (1995) Am. J. Physiol. 1233: 134）、本願発明の製剤ならびに本発明の分子の成分を含み得る異なる種；ｐ１２０（Schreierら (1994) J. Biol. Chem. 269: 9090）を含む；また、K. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346: 123; J.J. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4: 273参照。
したがって、本願発明は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置における使用のための、所望により種々の修飾および／またはさらなる成分を含むことができる、１つ以上のベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を含む。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患
本願発明は、種々のベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置するための、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤およびヒトおよび非ヒト動物へのＲＮＡｉ剤の投与を含む。
「ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患」は、ベータ−ＥＮａＣのレベル、発現および／または活性における機能障害に関連するあらゆる疾患、および／またはベータ−ＥＮａＣのレベル、発現および／または活性を調節することにより処置および／または改善され得るあらゆる疾患を意味する。特に、それは、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧を含む。
「嚢胞性線維症」または「ＣＦ」は、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子における変異と関連する一般的な遺伝的疾患を意味する。ＣＦＴＲは、ｃＡＭＰ−依存性Ｃｌ−チャネルをコードし、ＥＮａＣを調節する。ＣＦ気道上皮において、ＣＦＴＲ−介在Ｃｌ−分泌は不良であり、ＥＮａＣ−介在Ｎａ＋吸収は増加する。ＣＦ気道におけるこれらのイオン輸送の不良は、気道表面液体（ＡＳＬ）容量減少、粘液クリアランスの不良および粘液接着を引き起こし、ＡＳＬ容量減少がＣＦ肺疾患の病因において重要なメカニズムであることを示唆する。実験マウスにおいて、ベータ−ＥＮａＣの気道特異的過剰発現は、加速されたＮａ＋輸送の単独は、ＡＳＬ容量減少およびＣＦ様肺疾患、例えば、気道粘液閉塞、杯細胞化生、慢性好中球性気道炎症、細菌性病原体のクリアランスの異常、および最後に死亡率を生じるために十分であることを証明する。Zhouら 2008およびそれらに引用される文献、参照。
「リドル症候群」は、しばしば代謝アルカローシスおよび低カリウム血漿、アルドステロンの過剰の特性である全ての症状（コーン症候群）を伴う、早期および重症高血圧により特徴付けられる高血圧の常染色体優性遺伝的形態を意味する。
しかしながら、アルドステロンの血漿レベルは低い。したがって、リドル症候群はまた、仮性アルドステロン症と呼ばれる。この高血圧の重症型は、減塩食およびＮａ＋チャネル阻害剤（Ｋ＋−保持性利尿薬）での処置に対して応答し、ＥＮａＣの原発性異常調節を示唆する。該疾患は、ガンマ−ＥＮａＣ、また、ベータ−ＥＮａＣにおけるいくつかの変異における変異と関連する（ＰＰＸＹのコンセンサス配列を有する「ＰＹ」モチーフにおけるＰ６１５Ｓ、Ｐ６１６ＬおよびＹ６１８Ｈ；ならびに、Ｒ５６４ｓｔ、Ｗ５７４ｓｔ、５７９ｄｅｌ３２、Ｑ５８９ｓｔ、Ｔ５９２ｆｒ、Ａ５９３ｆｒおよびＲ５９５ｆｒ、ここで、「ｆｒ」はフレームシフトであり、「ｄｅｌ」は欠失であり、「ｓｔ」は未成熟終止コドンである）。
これらの変異は、野生型ＥＮａＣと比較して高活性であるＮａ＋チャネルの過剰発現を引き起こす。該変異はまた、通常、細胞内Ｎａ＋の上昇をもたらすチャネルの下方調節を妨げ；リドル変異を有するＥＮａＣチャネルは、高い細胞内Ｎａ＋濃度にもかかわらず高度に活性状態を維持する。したがって、リドル症候群を有する変異ＥＮａＣのレベルおよび／または活性は、ベータ−ＥＮａＣに対するｓｉＲＮＡ、またはリドル症候群に対する既知の処置、例えば、減塩食およびＮａ＋チャネル阻害剤（Ｋ＋−保持性利尿薬）と組み合わせて該ｓｉＲＮＡにより調節することができる。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患のさらなる情報のために、例えば、Hummlerら 1999. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 276: 567-571参照。
「肥満関連高血圧」は、肥満と関連する、または肥満に不随する高血圧などを意味する。肥満は、高血圧と関連する。多数のメカニズム、例えば、（肥満における）交感神経活性の増加；レニン−アンジオテンシン−アルドステロン系の活性の増加；心拍出量の増加；ならびに臓器の周囲の間質脂質、高インスリン血症および／またはインスリン抵抗性由来の機械的圧力の増加が、この相関関係において説明するために提案されている。腎臓によるナトリウム保持は、これらのメカニズムのいずれかに起因する。連結管および尿細管において、ナトリウム再吸収は、ＥＮａＣを介して起こる。ベータ−ＥＮａＣのレベルは、Ｚｕｃｋｅｒラット（肥満に対するモデル動物）における腎臓において増加していた。
Bickelら 2001 Am. J. Physiol. Renal Physiol. 281: 639-648。他のナトリウム輸送体における減少なしに、豊富なこの、および他のナトリウム輸送体における相対的増加は、恐らく、尿細管ナトリウム再吸収の増加をもたらす。結果として、腎臓ナトリウム輸送体存在量におけるこれらの変化が、肥満の哺乳動物、例えば、ヒトにおける上昇した血圧の発達および／または維持において役割を果たし得る。
「偽性低アルドステロン症１型」、「ＰＨＡ１」、「ＰＨＡ−１」などは、ミネラルコルチコイド末端器官抵抗性、すなわち、アルドステロンの上昇したレベルにもかかわらずＮａ＋の尿中への排せつおよびＫ＋排出の減少により特徴付けられる異種臨床的症候群を意味する。該症候群の重症型は、常染色体劣性遺伝としての遺伝であり、低ナトリウム血症、低血圧および高カリウム血症のときどき致死的発現となり、いくつかの臓器、腎臓、唾液腺、汗腺および大腸におけるＮａ＋輸送の変化を示す。ＰＨＡ−１の該形態を示すいくつかのファミリーにおいて、３つのＥＮａＣサブユニットのいずれか１つの変異との関連が見られる（ベータ−ＥＮａＣにおいてＧ３７Ｓを含む）。
遺伝形質の常染色体優性モードでのＰＨＡ−１の比較的軽度の形態は、ほとんど幼児期中に対症的であり、年齢と共に改善する。Hummlerら 1999. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 276: 567-571参照。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患、特にベータ−ＥＮａＣの改変された発現、活性および／またはレベルと関連する疾患を処置するために使用することができる。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置のためのＲＮＡｉ剤の使用
本明細書に記載されているベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、ヒトまたは非ヒト動物に投与することができる医薬組成物に製剤化することができる。これらの組成物は、１つ以上のＲＮＡｉ剤、および所望により、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置するために有用なさらなる処置を含むことができる。それらは、早期／予防処置の一部として投与することができ、治療有効量において投与することができる。医薬組成物は、医薬担体を含むことができ、当分野で知られているいずれかの方法により投与することができる。本願発明のこれらの種々の局面は、以下にさらに詳細に記載されている。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置のためにヒトおよび非ヒト動物に投与することができる。
本願発明の１つの態様において、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、非ヒト動物に投与することができる。例えば、組成物は、ニワトリ、シチメンチョウ、家畜動物（例えば、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシなど）、ペット（例えば、ネコおよびイヌ）に与えることができ、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧および同様の疾患の処置において有効性を有することができる。それぞれの場合において、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、動物のゲノムのベータ−ＥＮａＣの配列に合うように、特に、動物のゲノム中のすべての他の遺伝子から少なくとも１ｎｔの不一致を含むように選択される。したがって、本願発明のＲＮＡｉ剤は、ヒトおよび非ヒト動物におけるベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置において使用することができる。
ベータ−ＥＮａＣ発現の文脈において本明細書において使用される、「処置する」、「処置」などなる用語は、ベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的プロセスの軽減または緩和を示す。本願発明の文脈において、以下の本明細書に記載されている他のいずれかの状態（ベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的プロセス以外）に関する限りにおいて、「処置する」、「処置」などなる用語は、このような状態と関連する少なくとも１つの症状を軽減または緩和する、またはこのような状態の進行もしくは予測される進行の遅延または逆転、例えば、脂質障害、例えば、アテローム性動脈硬化症の進行の遅延を意味する。
「処置」はまた、予防、治療、治癒、または身体状態の改善または低下の非存在を示す患者の状態における他のあらゆる変化を意味する。「処置」は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患（例えば、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および肥満関連高血圧）の処置、または患者が有する他の何らかの病気のあらゆる適当な処置を示す。本明細書において使用される「処置」および「処置する」なる用語、疾患にかかる危険性があるか、または疾患を有する疑いがある患者、ならびにすでに病気であるか、または状態に罹患していると診断された患者の処置を含む、予防もしくは防止処置および治療の両方または疾患修飾性処置を示す。「処置」および「処置する」なる用語はまた、疾患に罹患していないが、不健康状態、例えば、窒素平衡失調または筋力低下に罹患しやすい個体における健康の保持および／または促進を示す。１つの態様において、「処置」は、疾患状態の予防を包含しない。したがって、本願発明は、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を患っている個体、またはベータ−ＥＮａＣ−関連疾患に罹患しやすい個体においてベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を抑制する、および／またはベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置するために有用である。ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を「患っている」個体は、疾患の検出可能な症状特性を証明するか、または、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患病原体またはマーカーに暴露されているか、またはそれらを有すると臨床的に示されている。非限定的な例として、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を患っている個体は、外面的症状を示すか、または、外面的症状を示さないが、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患と関連するタンパク質マーカー、または血液中の病原体と関連するタンパク質もしくは遺伝物質を有することを臨床試験で示され得る。
いくつかのベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の早期処置は、後期よりもむしろ早期に投与されるとき、さらに有効であり得る。アミロリド（ＥＮａＣ阻害剤）の予防的早期投与は、ＣＦモデルマウスの処置において有用であるが、後期投与は有用でなかった。同様に、ＣＦにおける抗菌剤での早期介入は、感染が確立された後の処置よりもより有効であった。Zhouら 2008。したがって、１つの特定の態様において、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、疾患の兆候の早期、前に、および／または、疾患の確立後に投与されるよりもむしろ予防剤として投与される。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置は、ベータＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤を含み、所望により、方法（または処置）またはさらなる組成物（例えば、薬剤またはさらなるＲＮＡｉ剤）であり得るさらなる処置をさらに含む種々の処置を含むことができる。
ＲＮＡｉ剤の用量および有効量
本願発明のＲＮＡｉ剤は、治療有効量の用量で必要とする患者に投与される。
「有効量」または「治療有効量」は、個体の疾患または医学的状態を処置するか、または、さらに一般的に、個体に栄養学的、生理学的または薬学的利点を提供する量である。本明細書において使用される「治療有効量」および「予防有効量」なるフレーズは、ベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的プロセスまたはベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的プロセスの明白な症状の処置、予防または管理における治療的利点を提供する量を示す。治療的に有効である特定の量は、通常の開業医により容易に決定することができ、当分野で知られている因子、例えば、例えば、ベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的プロセスの型、患者の病歴および年齢、ベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的プロセスの段階、ならびにベータ−ＥＮａＣ発現が介在する病理学的プロセスを阻害する他の薬剤の投与に依存して変化し得る。
本願発明の種々の態様において、患者は、少なくとも約１、３、６もしくは９月齢、または１、５、１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０もしくは７５年齢である。種々の態様において、患者は、約１、３、６もしくは９月齢、または１、５、１０、２０、３０、４０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０もしくは１００年齢以下である。種々の態様において、患者は、少なくとも約５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０または４００ｌｂの体重を有する。種々の態様において、患者は、約５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３２０、３４０、３６０、３８０または４００ｌｂ以下の体重を有する。
本願発明の種々の態様において、用量は［活性成分のみで測定する］、少なくとも約１、５、１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００ｎｇ、１、５、１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００マイクログラム、１、５、１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００ｍｇであり得る。種々の態様において、用量は、約１０、２５、５０、１００、２００、２５０、３００、２５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００ｍｇ以下であり得る。種々の態様において、用量は、少なくとも１日に１回以上、１日ごと、１週間に１回以上、１週間ごと、２週間ごと、１月ごと、および／または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２月ごと、またはそれらの組合せで投与することができる。
種々の態様において、用量は、個体の体重または体表面積と相関がある。実際の用量レベルは、患者に毒性がなく、特定の患者、組成物および投与経路について有効である活性剤の量を得るように変化することができる。選択される用量は、使用される特定のＲＮＡｉ剤の活性、投与経路、ＲＮＡｉ剤の排出速度、処置の期間、ＲＮＡｉ剤と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態および以前の病歴、ならびに医療分野でよく知られている同様の因子を含む種々の薬物動態学因子に依存する。当分野で通常の技術を有する医師または獣医は、必要とされるＲＮＡｉ剤の有効量を容易に決定することができる。適当な用量は、治療効果を生じるために有効である最も低い用量、または副作用を引き起こすことなく治療効果を生じるために十分低い用量である量であり得る。
治療有効量の１つ以上のベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤に加えて、本願発明の医薬組成物は、ＲＮＡｉ剤と相乗的に働くさらなる疾患処置を含むか、または共に使用され得る。例えば、医薬組成物は、ＥＮａＣに対するさらなるアンタゴニスト、例えば、カリウム保持性利尿薬、アミロリドおよびトリアムテレンを含むことができる。さらなる処置は、非限定的な例として、食塩摂取の制御を含む医薬組成物と共に投与することができる。嚢胞性線維症を処置するために使用するとき、医薬組成物は、嚢胞性線維症と関連する病気（例えば、下痢、骨粗鬆症、糖尿病、出血など）を処置するために当分野で知られている種々の医薬および療法、例えば、限定はしないが、抗生物質、ＤＮａｓｅ療法、アルブテロール、Ｎ−アセチルシステイン、呼吸療法、パーカッション療法、有酸素運動および種々の医薬および療法と共に使用することができる。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のさらなる態様
特定の態様において、本願発明は、１つ以上のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を含む。１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。１つの態様において、アンチセンス鎖は、例えば、表１に記載されているＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の配列からなる、本質的にからなる、または含む。１つの態様において、アンチセンス鎖は、例えば、表１に記載されている任意のＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個の不一致を有する配列からなる、本質的にからなる、または含む。１つの態様において、アンチセンス鎖は、例えば、表１に記載されているＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の配列からなり、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のヌクレオチドをさらに含む。１つの態様において、アンチセンス鎖は、例えば、表１に記載されているＲＮＡｉ剤と０、１、２または３個の不一致を有する配列からなり、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のヌクレオチドをさらに含む。
別の態様において、本出願で請求されている組成物は、例えば、表１に記載されている任意の特定の個々のＲＮＡｉ剤を含まない。本願発明の別の態様において、ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、特許または科学文献、例えば、米国特許出願第６０／３４６，０６９（ＰＣＴ／ＵＳ０２／４１８５０）に記載されている任意のベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤、およびHydeら 2009, The 23rd North American Cystic Fibrosis Conference, Minneapolis, October 14-17, 2009；または、Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CAからのｓｃ−４２４１８（および関連産物）として利用できるものの配列を含まない。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の特定の態様
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の特定の態様は、本明細書に記載されている。二本鎖配列の例は、本明細書、例えば、表１において提供される。本願発明の特定の態様は、例えば、表１に記載されているＲＮＡｉ剤の配列と０、１、２または３ｎｔもしくはｂｐにより異なっている（例えば、０、１、２または３個の不一致）配列を含むＲＮＡｉ剤を含む。
不一致は、本明細書において、２つの配列が最大にアラインされ、比較されているとき、塩基配列または長さの間の違いとして定義される。不一致は、一方の配列の塩基が他の配列の塩基と一致していない位置として定義される。したがって、不一致は、例えば、一方の配列における位置が特定の塩基（例えば、Ａ）を有するとき、他の配列における対応する位置が異なる塩基（例えば、Ｇ）を有するときカウントする。
不一致はまた、例えば、一方の配列における位置が塩基（例えば、Ａ）を有し、他方の配列における対応する位置が塩基を有さない（例えば、例えば、リン酸−糖骨格を有するが塩基を有さない脱塩基ヌクレオチドである位置）を有するときカウントする。いずれかの配列（またはセンスまたはアンチセンス鎖）における一本鎖ニックは、不一致として数えない。したがって、非限定的な例として、一方の配列が配列ＡＧを含むが、他方の配列がＡおよびＧ間で一本鎖ニックを有する配列ＡＧを含むとき不一致とは数えない。塩基修飾はまた、不一致とは考えない。一方の配列がＣを含み、他方の配列が同じ位置で修飾されたＣ（例えば、２’−修飾）を含むとき、不一致はカウントしない。
１つの特定の態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０７の（配列番号：５および６または配列番号：１１５および１１６）のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８０７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはＡＤ−２０８０７を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８０７の配列からなる配列を有する。
１つの特定の態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２６（配列番号：４３および４４または配列番号：１５３および１５４）のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８２６のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはＡＤ−２０８２６を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０６２６の配列からなる配列を有する。
１つの特定の態様において、本願発明は、配列番号：５５および５６または配列番号：１６５および１６６を含むＡＤ−２０８３２のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８３２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはＡＤ−２０８３２を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２の配列からなる配列を有する。
１つの特定の態様において、本願発明は、配列番号５９および６０または配列番号１６９および１７０を含むＡＤ−２０８３４のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８３４のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３４を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３４のものからなる配列を含む。
１つの特定の態様において、本願発明は、配列番号８７および８８または配列番号１９７および１９８を含むＡＤ−２０８４８のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８４８のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８４８を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８４８のものからなる配列を有する。
１つの特定の態様において、本願発明は、配列番号９７および９８または配列番号２０７および２０８を含むＡＤ−２０８６１のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８６１のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８６１を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８６１のものからなる配列を有する。
１つの態様において、本願発明は、Ｈ４４１細胞において１０ｎＭのインビトロ濃度で、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の少なくとも約８０％ノックダウン（約２０％以下の残りの遺伝子活性）を示すＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、１つの特定の態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；またはＡＤ−２０８３４のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；またはＡＤ−２０８３４のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；またはＡＤ−２０８３４を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；またはＡＤ−２０８３４からなる配列を有する。
１つの態様において、本願発明は、Ｈ４４１細胞において１０ｎＭのインビトロ濃度で、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の少なくとも約７０％ノックダウン（約３０％以下の残りの遺伝子活性）を示すＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、１つの特定の態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；またはＡＤ−２０８６７のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；またはＡＤ−２０８６７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；またはＡＤ−２０８６７を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；またはＡＤ−２０８６７からなる配列を有する。
１つの態様において、本願発明は、Ｈ４４１細胞において１０ｎＭのインビトロ濃度で、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の少なくとも約６０％ノックダウン（約４０％以下の残りの遺伝子活性）を示すＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、１つの特定の態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；またはＡＤ−２０８２７のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；またはＡＤ−２０８２７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；またはＡＤ−２０８２７を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；またはＡＤ−２０８２７からなる配列を有する。
１つの態様において、本願発明は、Ｈ４４１細胞において１０ｎＭのインビトロ濃度で、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の少なくとも約５０％ノックダウン（約５０％以下の残りの遺伝子活性）を示すＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、１つの特定の態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；ＡＤ−２０８２７；ＡＤ−２０８２８；ＡＤ−２０８１２；ＡＤ−２０８３６；またはＡＤ−２０８２２のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡはまた、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；ＡＤ−２０８２７；ＡＤ−２０８２８；ＡＤ−２０８１２；ＡＤ−２０８３６；またはＡＤ−２０８２２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖をさらに含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；ＡＤ−２０８２７；ＡＤ−２０８２８；ＡＤ−２０８１２；ＡＤ−２０８３６；またはＡＤ−２０８２２を含む。
別の特定の態様において、ｓｉＲＮＡは、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４；ＡＤ−２０８０６；ＡＤ−２０８５１；ＡＤ−２０８６５；ＡＤ−２０８１１；ＡＤ−２０８１９；ＡＤ−２０８３９；ＡＤ−２０８３５；ＡＤ−２０８２５；ＡＤ−２０８６７；ＡＤ−２０８１３；ＡＤ−２０８２３；ＡＤ−２０８０５；ＡＤ−２０８３１；ＡＤ−２０８６２；ＡＤ−２０８０８；ＡＤ−２０８２７；ＡＤ−２０８２８；ＡＤ−２０８１２；ＡＤ−２０８３６；またはＡＤ−２０８２２のものからなる配列を有する。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の態様
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０５のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０６のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０８のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０９のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１０のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１１のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１３のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１４のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１５のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１６のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１８のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１９のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２０のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２１のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２３のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２４のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２５のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２６のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２８のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２９のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３０のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３１のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３３のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３４のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３５のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３６のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３８のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３９のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４０のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４１のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４３のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４４のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４５のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４６のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４８のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４９のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８５０のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８５１のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８５２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６１のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６２のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６３のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６４のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６５のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６６のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６７のセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖および／またはアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の態様
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１１１−１１２を含むＡＤ−２０８０５およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１１３−１１４を含むＡＤ−２０８０６およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１１５−１１６を含むＡＤ−２０８０７およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１１７−１１８を含むＡＤ−２０８０８およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１１９−１２０を含むＡＤ−２０８０９およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１２１−１２２を含むＡＤ−２０８１０およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１２３−１２４を含むＡＤ−２０８１１およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１２５−１２６を含むＡＤ−２０８１２およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１２７−１２８を含むＡＤ−２０８１３およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１２９−１３０を含むＡＤ−２０８１４およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１３１−１３２を含むＡＤ−２０８１５およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１３３−１３４を含むＡＤ−２０８１６およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１３５−１３６を含むＡＤ−２０８１７およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１３７−１３８を含むＡＤ−２０８１８およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１３９−１４０を含むＡＤ−２０８１９およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１４１−１４２を含むＡＤ−２０８２０およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１４３−１４４を含むＡＤ−２０８２１およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１４５−１４６を含むＡＤ−２０８２２およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１４７−１４８を含むＡＤ−２０８２３およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１４９−１５０を含むＡＤ−２０８２４およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１５１−１５２を含むＡＤ−２０８２５およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１５３−１５４を含むＡＤ−２０８２６およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１５５−１５６を含むＡＤ−２０８２７およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１５７−１５８を含むＡＤ−２０８２８およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１５９−１６０を含むＡＤ−２０８２９およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１６１−１６２を含むＡＤ−２０８３０およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１６３−１６４を含むＡＤ−２０８３１およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１６５−１６６を含むＡＤ−２０８３２およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１６７−１６８を含むＡＤ−２０８３３およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１６９−１７０を含むＡＤ−２０８３４およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１７１−１７２を含むＡＤ−２０８３５およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１７３−１７４を含むＡＤ−２０８３６およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１７５−１７６を含むＡＤ−２０８３７およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１７７−１７８を含むＡＤ−２０８３８およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１７９−１８０を含むＡＤ−２０８３９およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１８１−１８２を含むＡＤ−２０８４０およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１８３−１８４を含むＡＤ−２０８４１およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１８５−１８６を含むＡＤ−２０８４２およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１８７−１８８を含むＡＤ−２０８４３およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１８９−１９０を含むＡＤ−２０８４４およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１９１−１９２を含むＡＤ−２０８４５およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１９３−１９４を含むＡＤ−２０８４６およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１９５−１９６を含むＡＤ−２０８４７およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１９７−１９８を含むＡＤ−２０８４８およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号１９９−２００を含むＡＤ−２０８４９およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２０１−２０２を含むＡＤ−２０８５０およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２０３−２０４を含むＡＤ−２０８５１およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２０５−２０６を含むＡＤ−２０８５２およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２０７−２０８を含むＡＤ−２０８６１およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２０９−２１０を含むＡＤ−２０８６２およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２１１−２１２を含むＡＤ−２０８６３およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２１３−２１４を含むＡＤ−２０８６４およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２１５−２１６を含むＡＤ−２０８６５およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２１７−２１８を含むＡＤ−２０８６６およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、本願発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物に関し、該アンチセンス鎖は、配列番号２１９−２２０を含むＡＤ−２０８６７およびその修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の態様
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１１１および１１２を含むＡＤ−２０８０５のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１１３および１１４ＡＤ−２０８０６のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１１５および１１６を含むＡＤ−２０８０７のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１１７および１１８を含むＡＤ−２０８０８のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１１９および１２０を含むＡＤ−２０８０９のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１２１および１２２を含むＡＤ−２０８１０のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１２３および１２４を含むＡＤ−２０８１１のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１２５および１２６を含むＡＤ−２０８１２のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１２７および１２８を含むＡＤ−２０８１３のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１２９および１３０を含むＡＤ−２０８１４のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１３１および１３２を含むＡＤ−２０８１５のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１３３および１３４を含むＡＤ−２０８１６のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１３５および１３６を含むＡＤ−２０８１７のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１３７および１３８を含むＡＤ−２０８１８のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１３９および１４０を含むＡＤ−２０８１９のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１４１および１４２を含むＡＤ−２０８２０のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１４３および１４４を含むＡＤ−２０８２１のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１４５および１４６を含むＡＤ−２０８２２のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１４７および１４８を含むＡＤ−２０８２３のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１４９および１５０を含むＡＤ−２０８２４のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１５１および１５２を含むＡＤ−２０８２５のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１５３および１５４を含むＡＤ−２０８２６のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１５５および１５６を含むＡＤ−２０８２７のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１５７および１５８を含むＡＤ−２０８２８のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１５９および１６０を含むＡＤ−２０８２９のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１６１および１６２を含むＡＤ−２０８３０のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１６３および１６４を含むＡＤ−２０８３１のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１６５および１６６を含むＡＤ−２０８３２のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１６７および１６８を含むＡＤ−２０８３３のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１６９および１７０を含むＡＤ−２０８３４のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１７１および１７２を含むＡＤ−２０８３５のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１７３および１７４を含むＡＤ−２０８３６のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１７５および１７６を含むＡＤ−２０８３７のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１７７および１７８を含むＡＤ−２０８３８のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１７９および１８０を含むＡＤ−２０８３９のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１８１および１８２を含むＡＤ−２０８４０のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１８３および１８４を含むＡＤ−２０８４１のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１８５および１８６を含むＡＤ−２０８４２のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１８７および１８８を含むＡＤ−２０８４３のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１８９および１９０を含むＡＤ−２０８４４のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１９１および１９２を含むＡＤ−２０８４５のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１９３および１９４を含むＡＤ−２０８４６のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１９５および１９６を含むＡＤ−２０８４７のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１９７および１９８を含むＡＤ−２０８４８のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１９９および２００を含むＡＤ−２０８４９のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２０１および２０２を含むＡＤ−２０８５０のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２０３および２０４を含むＡＤ−２０８５１のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２０５および２０６を含むＡＤ−２０８５２のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２０７および２０８を含むＡＤ−２０８６１のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２０９および２１０を含むＡＤ−２０８６２のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２１１および２１２を含むＡＤ−２０８６３のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２１３および２１４を含むＡＤ−２０８６４のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２１５および２１６を含むＡＤ−２０８６５のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２１７および２１８を含むＡＤ−２０８６６のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２１９および２２０を含むＡＤ−２０８６７のアンチセンス配列と０個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の態様
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１および２を含むＡＤ−２０８０５のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号３および４を含むＡＤ−２０８０６のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号５および６を含むＡＤ−２０８０７のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号７および８を含むＡＤ−２０８０８のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号９および１０を含むＡＤ−２０８０９のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１１および１２を含むＡＤ−２０８１０のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１３および１４を含むＡＤ−２０８１１のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１５および１６を含むＡＤ−２０８１２のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１７および１８を含むＡＤ−２０８１３のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１９および２０を含むＡＤ−２０８１４のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２１および２２を含むＡＤ−２０８１５のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２３および２４を含むＡＤ−２０８１６のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２５および２６を含むＡＤ−２０８１７のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２７および２８を含むＡＤ−２０８１８のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号２９および３０を含むＡＤ−２０８１９のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号３１および３２を含むＡＤ−２０８２０のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号３３および３４を含むＡＤ−２０８２１のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号３５および３６を含むＡＤ−２０８２２のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号３７および３８を含むＡＤ−２０８２３のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号３９および４０を含むＡＤ−２０８２４のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号４１および４２を含むＡＤ−２０８２５のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号４３および４４を含むＡＤ−２０８２６のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号４５および４６を含むＡＤ−２０８２７のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号４７および４８を含むＡＤ−２０８２８のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号４９および５０を含むＡＤ−２０８２９のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号５１および５２を含むＡＤ−２０８３０のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号５３および５４を含むＡＤ−２０８３１のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号５５および５６を含むＡＤ−２０８３２のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号５７および５８を含むＡＤ−２０８３３のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号５９および６０を含むＡＤ−２０８３４のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号６１および６２を含むＡＤ−２０８３５のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号６３および６４を含むＡＤ−２０８３６のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号６５および６６を含むＡＤ−２０８３７のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号６７および６８を含むＡＤ−２０８３８のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号６９および７０を含むＡＤ−２０８３９のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号７１および７２を含むＡＤ−２０８４０のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号７３および７４を含むＡＤ−２０８４１のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号７５および７６を含むＡＤ−２０８４２のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号７７および７８を含むＡＤ−２０８４３のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号７９および８０を含むＡＤ−２０８４４のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号８１および８２を含むＡＤ−２０８４５のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号８３および８４を含むＡＤ−２０８４６のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号８５および８６を含むＡＤ−２０８４７のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号８７および８８を含むＡＤ−２０８４８のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号８９および９０を含むＡＤ−２０８４９のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号９１および９２を含むＡＤ−２０８５０のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号９３および９４を含むＡＤ−２０８５１のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号９５および９６を含むＡＤ−２０８５２のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号９７および９８を含むＡＤ−２０８６１のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号９９および１００を含むＡＤ−２０８６２のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１０１および１０２を含むＡＤ−２０８６３のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１０３および１０４を含むＡＤ−２０８６４のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１０５および１０６を含むＡＤ−２０８６５のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１０７および１０８を含むＡＤ−２０８６６のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
１つの態様において、組成物は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤の修飾変異体を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号１０９および１１０を含むＡＤ−２０８６７のアンチセンス配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の態様
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０５（配列番号：１および２または配列番号：１１１および１１２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０６（配列番号：３および４または配列番号：１１３および１１４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０７（配列番号：５および６または配列番号：１１５および１１６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０８（配列番号：７および８または配列番号：１１７および１１８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８０９（配列番号：９および１０または配列番号：１１９および１２０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１０（配列番号：１１および１２または配列番号：１２１および１２２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１１（配列番号：１３および１４または配列番号：１２３および１２４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１２（配列番号：１５および１６または配列番号：１２５および１２６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１３（配列番号：１７および１８または配列番号：１２７および１２８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１４（配列番号：１９および２０または配列番号：１２９および１３０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１５（配列番号：２１および２２または配列番号：１３１および１３２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１６（配列番号：２３および２４または配列番号：１３３および１３４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１７（配列番号：２５および２６または配列番号：１３５および１３６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１８（配列番号：２７および２８または配列番号：１３７および１３８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８１９（配列番号：２９および３０または配列番号：１３９および１４０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２０（配列番号：３１および３２または配列番号：１４１および１４２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２１（配列番号：３３および３４または配列番号：１４３および１４４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２２（配列番号：３５および３６または配列番号：１４５および１４６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２３（配列番号：３７および３８または配列番号：１４７および１４８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２４（配列番号：３９および４０または配列番号：１４９および１５０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２５（配列番号：４１および４２または配列番号：１５１および１５２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２６（配列番号：４３および４４または配列番号：１５３および１５４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２７（配列番号：４５および４６または配列番号：１５５および１５６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２８（配列番号：４７および４８または配列番号：１５７および１５８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８２９（配列番号：４９および５０または配列番号：１５９および１６０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３０（配列番号：５１および５２または配列番号：１６１および１６２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３１（配列番号：５３および５４または配列番号：１６３および１６４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３２（配列番号：５５および５６または配列番号：１６５および１６６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３３（配列番号：５７および５８または配列番号：１６７および１６８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３４（配列番号：５９および６０または配列番号：１６９および１７０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３５（配列番号：６１および６２または配列番号：１７１および１７２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３６（配列番号：６３および６４または配列番号：１７３および１７４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３７（配列番号：６５および６６または配列番号：１７５および１７６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３８（配列番号：６７および６８または配列番号：１７７および１７８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８３９（配列番号：６９および７０または配列番号：１７９および１８０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４０（配列番号：７１および７２または配列番号：１８１および１８２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４１（配列番号：７３および７４または配列番号：１８３および１８４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４２（配列番号：７５および７６または配列番号：１８５および１８６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４３（配列番号：７７および７８または配列番号：１８７および１８８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４４（配列番号：７９および８０または配列番号：１８９および１９０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４５（配列番号：８１および８２または配列番号：１９１および１９２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４６（配列番号：８３および８４または配列番号：１９３および１９４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４７（配列番号：８５および８６または配列番号：１９５および１９６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４８（配列番号：８７および８８または配列番号：１９７および１９８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８４９（配列番号：８９および９０または配列番号：１９９および２００）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８５０（配列番号：９１および９２または配列番号：２０１および２０２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８５１（配列番号：９３および９４または配列番号：２０３および２０４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８５２（配列番号：９５および９６または配列番号：２０５および２０６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６１（配列番号：９７および９８または配列番号：２０７および２０８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６２（配列番号：９９および１００または配列番号：２０９および２１０）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６３（配列番号：１０１および１０２または配列番号：２１１および２１２）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６４（配列番号：１０３および１０４または配列番号：２１３および２１４）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６５（配列番号：１０５および１０６または配列番号：２１５および２１６）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６６（配列番号：１０７および１０８または配列番号：２１７および２１８）を含む。
１つの態様において、本願発明は、ＡＤ−２０８６７（配列番号：１０９および１１０または配列番号：２１９および２２０）を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０５のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０６のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０７のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０８のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０９のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１０のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１１のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１２のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１３のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１４のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１５のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１６のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１７のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１８のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１９のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２０のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２１のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２２のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２３のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２４のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２５のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２６のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２７のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２８のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２９のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３０のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３１のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３２のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３３のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３４のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３５のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３６のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３７のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３８のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３９のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４０のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４１のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４２のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４３のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４４のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４５のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４６のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４７のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４８のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４９のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５０のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５１のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５２のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６１のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６２のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６３のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６４のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６５のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６６のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６７のアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含む。これらの種々の態様において、記載されているＲＮＡｉ剤の記載されているアンチセンス鎖の正確な配列および長さであるアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド、３’−末端キャップ、および／またはＲＮＡｉ剤の配列または長さを変化させない他の修飾を含むことができる。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の態様
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々の態様
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲、例えば、０−１、１−２、１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−８、１−９、１−１０、２−３、２−４または２−５ｎｔなど）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８０９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８１９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８２９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８３９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４８のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８４９のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５０のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８５２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６１のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６２のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６３のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６４のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６５のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６６のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
１つの態様において、ＲＮＡｉ剤は、ＡＤ−２０８６７のアンチセンス鎖のものから０、１、２または３個の不一致を有する配列からなるアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ｎｔ（または、任意のそれらの範囲）をさらに含む。
さらなる特定の態様
種々の態様において、本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のいずれかのアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、種々の態様において：
本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、１つ以上の以下の二本鎖、またはそれらの修飾または非修飾変異体のいずれかのアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む：ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４、ＡＤ−２０８０５、ＡＤ−２０８０６、ＡＤ−２０８０８、ＡＤ−２０８０９、ＡＤ−２０８１０、ＡＤ−２０８１１、ＡＤ−２０８１２、ＡＤ−２０８１３、ＡＤ−２０８１４、ＡＤ−２０８１５、ＡＤ−２０８１６、ＡＤ−２０８１７、ＡＤ−２０８１８、ＡＤ−２０８１９、ＡＤ−２０８２０、ＡＤ−２０８２１、ＡＤ−２０８２２、ＡＤ−２０８２３、ＡＤ−２０８２４、ＡＤ−２０８２５、ＡＤ−２０８２７、ＡＤ−２０８２８、ＡＤ−２０８２９、ＡＤ−２０８３０、ＡＤ−２０８３１、ＡＤ−２０８３３、ＡＤ−２０８３５、ＡＤ−２０８３６、ＡＤ−２０８３８、ＡＤ−２０８３９、ＡＤ−２０８４０、ＡＤ−２０８４１、ＡＤ−２０８４２、ＡＤ−２０８４３、ＡＤ−２０８４４、ＡＤ−２０８４５、ＡＤ−２０８４６、ＡＤ−２０８４７、ＡＤ−２０８４９、ＡＤ−２０８５０、ＡＤ−２０８５１、ＡＤ−２０８５２、ＡＤ−２０８６２、ＡＤ−２０８６３、ＡＤ−２０８６４、ＡＤ−２０８６５、ＡＤ−２０８６６、ＡＤ−２０８６７、またはそれらの修飾または非修飾変異体。
さらなる特定の態様
種々の態様において、本願発明は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１の鎖の配列は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のいずれかの第１の鎖の配列と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、第２の鎖の配列は、第２の鎖の配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、種々の態様において：
本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１の鎖の配列は、１つ以上の以下の二本鎖、またはそれらの修飾または非修飾変異体のいずれかの第１の鎖の配列と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含み、第２の鎖の配列は、第２の鎖の配列と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む：ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４、ＡＤ−２０８０５、ＡＤ−２０８０６、ＡＤ−２０８０８、ＡＤ−２０８０９、ＡＤ−２０８１０、ＡＤ−２０８１１、ＡＤ−２０８１２、ＡＤ−２０８１３、ＡＤ−２０８１４、ＡＤ−２０８１５、ＡＤ−２０８１６、ＡＤ−２０８１７、ＡＤ−２０８１８、ＡＤ−２０８１９、ＡＤ−２０８２０、ＡＤ−２０８２１、ＡＤ−２０８２２、ＡＤ−２０８２３、ＡＤ−２０８２４、ＡＤ−２０８２５、ＡＤ−２０８２７、ＡＤ−２０８２８、ＡＤ−２０８２９、ＡＤ−２０８３０、ＡＤ−２０８３１、ＡＤ−２０８３３、ＡＤ−２０８３５、ＡＤ−２０８３６、ＡＤ−２０８３８、ＡＤ−２０８３９、ＡＤ−２０８４０、ＡＤ−２０８４１、ＡＤ−２０８４２、ＡＤ−２０８４３、ＡＤ−２０８４４、ＡＤ−２０８４５、ＡＤ−２０８４６、ＡＤ−２０８４７、ＡＤ−２０８４９、ＡＤ−２０８５０、ＡＤ−２０８５１、ＡＤ−２０８５２、ＡＤ−２０８６２、ＡＤ−２０８６３、ＡＤ−２０８６４、ＡＤ−２０８６５、ＡＤ−２０８６６、ＡＤ−２０８６７、またはそれらの修飾または非修飾変異体。
さらなる特定の態様
種々の態様において、本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のいずれかのアンチセンス鎖を含むか、またはからなるＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、以下に、種々の態様の例を提供する。
本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４、ＡＤ−２０８０５、ＡＤ−２０８０６、ＡＤ−２０８０８、ＡＤ−２０８０９、ＡＤ−２０８１０、ＡＤ−２０８１１、ＡＤ−２０８１２、ＡＤ−２０８１３、ＡＤ−２０８１４、ＡＤ−２０８１５、ＡＤ−２０８１６、ＡＤ−２０８１７、ＡＤ−２０８１８、ＡＤ−２０８１９、ＡＤ−２０８２０、ＡＤ−２０８２１、ＡＤ−２０８２２、ＡＤ−２０８２３、ＡＤ−２０８２４、ＡＤ−２０８２５、ＡＤ−２０８２７、ＡＤ−２０８２８、ＡＤ−２０８２９、ＡＤ−２０８３０、ＡＤ−２０８３１、ＡＤ−２０８３３、ＡＤ−２０８３５、ＡＤ−２０８３６、ＡＤ−２０８３８、ＡＤ−２０８３９、ＡＤ−２０８４０、ＡＤ−２０８４１、ＡＤ−２０８４２、ＡＤ−２０８４３、ＡＤ−２０８４４、ＡＤ−２０８４５、ＡＤ−２０８４６、ＡＤ−２０８４７、ＡＤ−２０８４９、ＡＤ−２０８５０、ＡＤ−２０８５１、ＡＤ−２０８５２、ＡＤ−２０８６２、ＡＤ−２０８６３、ＡＤ−２０８６４、ＡＤ−２０８６５、ＡＤ−２０８６６、ＡＤ−２０８６７、またはそれらの修飾または非修飾変異体のアンチセンス鎖を含むか、またはからなるＲＮＡｉ剤を含む。
種々の態様において、本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤またはそれらの修飾または非修飾変異体のいずれかのアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０またはそれ以上のｎｔ（またはそれらの任意の範囲、例えば、０−１、１−２、１−３、１−４ｎｔなど）をさらに含むＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、種々の態様において、本願発明は、センスおよびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、該アンチセンス鎖は、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４、ＡＤ−２０８０５、ＡＤ−２０８０６、ＡＤ−２０８０８、ＡＤ−２０８０９、ＡＤ−２０８１０、ＡＤ−２０８１１、ＡＤ−２０８１２、ＡＤ−２０８１３、ＡＤ−２０８１４、ＡＤ−２０８１５、ＡＤ−２０８１６、ＡＤ−２０８１７、ＡＤ−２０８１８、ＡＤ−２０８１９、ＡＤ−２０８２０、ＡＤ−２０８２１、ＡＤ−２０８２２、ＡＤ−２０８２３、ＡＤ−２０８２４、ＡＤ−２０８２５、ＡＤ−２０８２７、ＡＤ−２０８２８、ＡＤ−２０８２９、ＡＤ−２０８３０、ＡＤ−２０８３１、ＡＤ−２０８３３、ＡＤ−２０８３５、ＡＤ−２０８３６、ＡＤ−２０８３８、ＡＤ−２０８３９、ＡＤ−２０８４０、ＡＤ−２０８４１、ＡＤ−２０８４２、ＡＤ−２０８４３、ＡＤ−２０８４４、ＡＤ−２０８４５、ＡＤ−２０８４６、ＡＤ−２０８４７、ＡＤ−２０８４９、ＡＤ−２０８５０、ＡＤ−２０８５１、ＡＤ−２０８５２、ＡＤ−２０８６２、ＡＤ−２０８６３、ＡＤ−２０８６４、ＡＤ−２０８６５、ＡＤ−２０８６６、ＡＤ−２０８６７、またはそれらの修飾または非修飾変異体のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含み、該アンチセンス鎖は、所望により０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０またはそれ以上のｎｔ（またはそれらの任意の範囲、例えば、０−１、１−２、１−３、１−４ｎｔなど）をさらに含むＲＮＡｉ剤を含む。
種々の態様において、本願発明は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１の鎖の配列は、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のいずれか、またはそれらの修飾または非修飾変異体の第１の鎖の配列を含むか、またはからなり、第２の鎖の配列は、第２の鎖の配列を含むか、またはからなるＲＮＡｉ剤を含む。
したがって、種々の態様において、本願発明は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１の鎖の配列は、ＡＤ−２０８３２；ＡＤ−２０８４８；ＡＤ−２０８０７；ＡＤ−２０８２６；ＡＤ−２０８３７；ＡＤ−２０８６１；ＡＤ−２０８３４、ＡＤ−２０８０５、ＡＤ−２０８０６、ＡＤ−２０８０８、ＡＤ−２０８０９、ＡＤ−２０８１０、ＡＤ−２０８１１、ＡＤ−２０８１２、ＡＤ−２０８１３、ＡＤ−２０８１４、ＡＤ−２０８１５、ＡＤ−２０８１６、ＡＤ−２０８１７、ＡＤ−２０８１８、ＡＤ−２０８１９、ＡＤ−２０８２０、ＡＤ−２０８２１、ＡＤ−２０８２２、ＡＤ−２０８２３、ＡＤ−２０８２４、ＡＤ−２０８２５、ＡＤ−２０８２７、ＡＤ−２０８２８、ＡＤ−２０８２９、ＡＤ−２０８３０、ＡＤ−２０８３１、ＡＤ−２０８３３、ＡＤ−２０８３５、ＡＤ−２０８３６、ＡＤ−２０８３８、ＡＤ−２０８３９、ＡＤ−２０８４０、ＡＤ−２０８４１、ＡＤ−２０８４２、ＡＤ−２０８４３、ＡＤ−２０８４４、ＡＤ−２０８４５、ＡＤ−２０８４６、ＡＤ−２０８４７、ＡＤ−２０８４９、ＡＤ−２０８５０、ＡＤ−２０８５１、ＡＤ−２０８５２、ＡＤ−２０８６２、ＡＤ−２０８６３、ＡＤ−２０８６４、ＡＤ−２０８６５、ＡＤ−２０８６６、ＡＤ−２０８６７の第１の鎖の配列を含むか、またはからなり、第２の鎖の配列は第２の鎖の配列を含むか、またはからなるＲＮＡｉ剤を含む。
１つの態様において、本願発明は、本明細書に記載されているいずれかの１つ以上のＲＮＡｉ剤を含む。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の重複セット
種々の態様において、本願発明は、重複配列を有するベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のグループに関する。したがって、本願発明は、ＲＮＡｉ剤のグループを含み、ここで、グループ中のそれぞれのＲＮＡｉ剤は、同じグループ中のＲＮＡｉ剤と互いに少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９個またはそれ以上のヌクレオチドで重複している。特に、１つの態様において、重複は少なくとも１２ｎｔである。
本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のいくつかは、配列において互いに重複している。表２は、重複ＲＮＡｉ剤のこれらのグループの編集を示し、グループのそれぞれのメンバーは、少なくとも１２ｎｔで、同じグループのそれぞれの他のメンバーと重複している。センスおよびアンチセンス鎖の重複の１２ｎｔ部分が示されている。
したがって、例えば、表２に示されるとおり、ＲＮＡｉ剤ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２の配列は重複しており、センス鎖における重複は、配列ＵＧＡＡＧＡＡＧＵＡＣＣ（配列番号：２２３）を含み；これらのＲＮＡｉ剤はまた、アンチセンス鎖配列において重複しており、重複が、配列ＧＧＵＡＣＵＵＣＵＵＣＡ（配列番号：２２４）を含む。ＲＮＡｉ剤ＡＤ−２０８０７、ＡＤ−２０８６２およびＡＤ−２０８３２は、全て、センス鎖において重複しており、重複は配列ＧＡＡＧＡＡＧＵＡＣＣＵ（配列番号：２２５）を含み；これらのＲＮＡｉ剤はまた、アンチセンス鎖において重複しており、重複は配列ＡＧＧＵＡＣＵＵＣＵＵＣ（配列番号：２２６）を含む。したがって、表２に示されている重複ＲＮＡｉ剤のこれらおよび他の種々のセットは、共通の技術的特徴、例えば、センスおよびアンチセンス鎖における重複を共有する。
ベータ−ＥＮａＣに対する重複ＲＮＡｉ剤の特定のセットを、以下の表２に提供する。
したがって、本願発明は、共通の技術的特徴を含むＲＮＡｉ剤のいずれかのグループまたはサブグループを含み、該共通の技術的特徴は、センスまたはアンチセンス鎖において（例えば、少なくとも１２ｎｔ）の配列の重複である。
したがって：
本願発明は、ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２のいずれかのグループ（または表２に示されているいずれかの他のグループ）のアンチセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖、および／またはセンス鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願発明は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１の鎖は、ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２のいずれかのグループ（または表２に示されているいずれかの他のグループ）の第１の鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、および／または第２の鎖は、第２の鎖と０、１、２または３ｎｔにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むＲＮＡｉ剤を含む。
本願発明は、第１および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、第１の鎖は、ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２のいずれかのグループ（または表２に示されているいずれかの他のグループ）の第１の鎖の配列を含むか、またはからなり、および／または第２の鎖は、配列を含むか、またはからなるＲＮＡｉ剤を含む。
本願発明は、第１および第２の鎖（該第１および第２の鎖は、所望により、共有的に結合しているか、ループもしくはリンカーを介して結合しているか、または連結されていてもよい）を含むＲＮＡｉ剤であって、該第１および／または第２の鎖は、ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２のいずれかのグループ（または表２に示されているいずれかの他のグループ）の０、１、２または３ｎｔまたはｂｐ（所望により０−１０ｎｔまたはｂｐをさらに含む）の不一致を有する配列を含むか、本質的にからなるか、またはからなるＲＮＡｉ剤を含む。
本願発明は、同様に、表２に示されている重複ＲＮＡｉ剤のグループを含む種々の態様を含む。
さらなる定義
本明細書および特許請求の範囲において使用される、冠詞、例えば、「ａ」および「ａｎ」は、１つ以上の（少なくとも１つの）冠詞の文法的目的語を示す。
「ＲＮＡｉ剤」なる用語は、限定はしないが、本願発明の１つ以上のＲＮＡｉ剤を示す。
本明細書に記載されているベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の二本鎖の特定の例の名称は。時々、接尾辞「ｂ」に続く番号を有する。これは、バッチ数を示す。したがって、接尾辞「ｂ１」は、「バッチ１」を示す。したがって、例えば、「ＡＤ−２０８０７−ｂ１」で示されるＲＮＡｉ二本鎖は、具体的にバッチ１からであり、「ＡＤ−２０８０７」で示されるいずれかのＲＮＡｉ剤と同じ配列を有する。
他に定義がない限り、本明細書において使用されている専門および科学用語は、本願発明は属する分野でよく知っている専門家により通常理解されるのと同じ意味を有する。
他に示されていない限り、具体的に詳細に記載されていないすべての方法、工程、技術および操作は、当業者に明らかであるため、それ自体既知の方法で行うことができる。例えば、標準ハンドブックおよび本明細書に記載されている一般的な背景技術および本明細書で引用されているさらなる文献も参照されたい。
特許請求の範囲は、非限定的であり、以下で提供される。
特定の態様および特許請求の範囲は、本明細書に詳細に記載されているが、これは、説明の目的のためのみのほんの一例としてであり、特許請求の範囲、または、あらゆる対応するさらなる適用の特許請求の範囲の対象の範囲に対して限定することを意図しない。特に、種々の置換、変化および修飾が、特許請求の範囲により定義されている記載の精神および範囲から逸脱することなく、本願発明から作られ得ると本発明者らは考える。核酸出発物質、興味あるクローンまたはライブラリー型の選択は、本明細書に記載されている態様の知識を有する当業者に対して日常的な事柄であると考えられる。他の局面、有利なものおよび修飾は、特許請求の範囲内であると考える。後に出願された対応する出願における特許請求の範囲の補正は、種々の国の特許法による限定のためであって、特許請求の範囲の対象を放棄すると解釈されるべきではない。
記載されているベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の種々のさらなる製剤および明らかな変異体は、当業者により考案され得る。ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤の非限定的な例は、以下の実施例に記載されているが、これらは、特許請求の範囲に記載されているとおり本願発明の範囲を限定しない。
実施例
実施例１
バイオインフォマティクスおよびベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤（ｓｉＲＮＡ）配列
ベータ−ＥＮａＣオリゴヌクレオチド設計を行い、ベータ−ＥＮａＣ遺伝子［ヒト由来の「ナトリウムチャネル、電位非依存性１ベータ」（ＮＣＢＩヒト記号ＳＣＮＮ１Ｂ）およびカニクイザルおよびラット（ドブネズミ）由来のオルソログ配列］をコードするｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡを同定する。設計プロセスは、ＳＣＮＮＢ１転写産物ヒト由来のＮＭ＿０００３３６．２（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩｄ ６３３８）、ラット由来のＮＭ＿０１２６４８．１（ＮＣＢＩ ＧｅｎｅＩｄ ２４７６７）および全長カニクイザル配列（本明細書に記載されている）を使用する。
全てのｓｉＲＮＡ二本鎖は、全３つのＳＣＮＮＢ１転写産物に対して１００％同一性を有するように設計される。全ての配列は、転写産物ＮＭ＿０００３３６由来である。
非修飾および修飾配列は表１に記載されている。非修飾配列は、配列番号：１１１から２２０として記載されているセンスおよびアンチセンス配列の両方を含む。配列番号：２２２におけるヒトベータ−ＥＮａＣ転写産物と比較しての第１の残基の相対位置を、また、提供する。
以下に記載されるとおり、表１はまた、これらの配列（配列番号：１から１１０）の修飾変異体の例を提供する。表１の欄において、「Ｓ」はセンス鎖を示し、「ＡＳ」はアンチセンス鎖を示し、「Ｐｏｓ’ｎ」は第１のヌクレオチドの位置を示す。小文字（例えば、「ｃ」および「ｕ」）により示される修飾ヌクレオチドは、以下の表１Ａに記載されている。
表１における配列において、修飾および非修飾配列は、所望により、３’末端で配列「ｄＴｓｄＴ」を含むことができる。したがって、例えば、ＡＤ−２０８０５は、所望により、センス鎖において修飾配列ｃＡＧｕＧＡｃｕＡｃＡＡｃＡｃＧＡｃｃｄＴｓｄＴ（配列番号：４２９）およびアンチセンス鎖においてＧＧＵＣＧＵＧＵＵＧｕＡＧＵｃＡＣＵＧｄＴｓｄＴ（配列番号：４３０）を有することができる。以下の表１Ａに示されるとおり、ｄＴは２’−デオキシ−チミジン−５’−ホスフェートであり、ｓｄＴは２’−デオキシチミジン５’−ホスホロチオエートである。
表１．ベータ−ＥＮａＣ配列
配列番号：１１１から２２０のＲＮＡｉ剤の配列の修飾は、当業者により容易に想像される。これらの配列の非限定的な例および修飾はまた、表１、例えば、配列番号：１から１１０におけるセンスおよびアンチセンス（ＡＳ）配列において記載されている。
いくつかの修飾は、エンドヌクレアーゼに対して感受性であると予測される部位に置かれる。いくつかの修飾は、ｓｉＲＮＡに対する免疫応答を除去するが、活性を妨害しないように設計される。一般的に、センス鎖は重く修飾され、アンチセンス鎖は軽く修飾される。いくつかの修飾は、複数の目的を満たす。
表１および他の表における配列はこれらの略語により示される：
表１Ａ．略語
ｓｉＲＮＡ配列選択
全５５個のセンスおよび５５個のアンチセンス ヒトＳＣＮＮＢ１由来ｓｉＲＮＡオリゴ（ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤）を、実施例２に記載されているとおりに合成する。センスおよびそれらのそれぞれのアンチセンスオリゴは、二本鎖にアニーリングされる。
実施例１Ａ
ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤の重複セット
本願発明はまた、重複配列を有するベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤のグループに関する。したがって、本願発明は、ＲＮＡｉ剤のグループを含み、ここで、グループ中のそれぞれのＲＮＡｉ剤は、同じグループ中の他のそれぞれのＲＮＡｉ剤と少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９個またはそれ以上のヌクレオチドで重複している。特に、１つの態様において、重複は少なくとも１２ｎｔである。
本明細書に記載されているいくつかのＲＮＡｉ剤は、互いに配列において重複している。表２は、グループのそれぞれのメンバーは、少なくとも１２ｎｔで同じグループのそれぞれの他のメンバーと重複している、重複ＲＮＡｉ剤のこれらのグループのいくつかの編集を示す。センスおよびアンチセンス鎖の重複の１２−ｎｔ部分を示す。
したがって、例えば、表２に示されるとおり、ＲＮＡｉ剤ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２の配列は重複しており、センス鎖における重複は、配列ＵＧＡＡＧＡＡＧＵＡＣＣ（配列番号：２２３）を含み；これらのＲＮＡｉ剤はまた、アンチセンス鎖配列において重複しており、重複が、配列ＧＧＵＡＣＵＵＣＵＵＣＡ（配列番号：２２４）を含む。ＲＮＡｉ剤ＡＤ−２０８０７、ＡＤ−２０８６２およびＡＤ−２０８３２は、全て、センス鎖において重複しており、重複は配列ＧＡＡＧＡＡＧＵＡＣＣＵ（配列番号：２２５）を含み；これらのＲＮＡｉ剤はまた、アンチセンス鎖において重複しており、重複は配列ＡＧＧＵＡＣＵＵＣＵＵＣ（配列番号：２２６）を含む。したがって、表２に示されている重複ＲＮＡｉ剤のこれらおよび他の種々のセットは、共通の技術的特徴、例えば、センスおよびアンチセンス鎖における重複を共有する。
ベータ−ＥＮａＣに対する重複ＲＮＡｉ剤の特定のセットを、以下の表２に提供する。
したがって、本願発明は、共通の技術的特徴を含むＲＮＡｉ剤のいずれかのグループまたはサブグループを含み、該共通の技術的特徴は、センスまたはアンチセンス鎖において重複（例えば、少なくとも１２ｎｔ）の配列の重複である。
表２．
ＮＭ＿０００３３６．２における位置（「Ｐｏｓ」）を示す。典型的な１２ｎｔのセンスおよびアンチセンス鎖における重複を示す；多数の場合、重複は実際により長い。
実施例２
ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤配列の合成
表１における配列番号：１から１１０として挙げられている修飾ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤配列を、１μｍｏｌ規模でＭｅｒＭａｄｅ １９２ シンセサイザーにて合成する。
リスト中の全ての配列に関して、「エンドライト」化学を、以下に記載されているとおりに適用する：
センス鎖中の全てのピリミジン（シトシンおよびウリジン）は、２’−Ｏ−メチル塩基（２’ Ｏ−メチル Ｃおよび２’−Ｏ−メチル Ｕ）を含む。
アンチセンス鎖において、リボＡヌクレオシドに隣接したピリミジン（すなわち、５’位置方向）を、それらの対応する２−Ｏ−メチルヌクレオシドで置換する。
センスおよびアンチセンス配列の両方の３’末端で、２つの塩基ｄＴｄＴ伸長を導入する。
配列ファイルを、ＭｅｒＭａｄｅ １９２ 合成 ソフトウェアにおけるローディングに適合させるためにテキストファイルに変換する。
合成、開裂および脱保護：
ベータ−ＥＮａＣ配列の合成は、ホスホラミダイト(phosphoramidite)化学を使用して固体支持オリゴヌクレオチド合成を使用する。
上記配列の合成は、９６ウェルプレートにおいて１ｕｍ規模で行う。アミダート溶液を０．１Ｍの濃度で製造し、エチルチオテトラゾール（アセトニトリル中で０．６Ｍ）を、アクチベーターとして使用する。
合成された配列を、第１工程においてメチルアミンおよび第２工程においてフッ化物試薬を使用して、９６ウェルプレート中で開裂させ、脱保護させる。粗配列をアセトン：エタノール（８０：２０）混合物を使用して沈澱させ、ペレットを０．２Ｍの酢酸ナトリウムバッファーに再懸濁する。それぞれの配列からのサンプルを、同一性を確認するためにＬＣ−ＭＳ、定量化のためにＵＶにより分析し、選択されたサンプルセットを、純度を決定するためにＩＥＸクロマトグラフィーにより分析する。
精製および脱塩化：
ベータ−ＥＮａＣ配列を、供給源１５Ｑカラムを使用するＡＫＴＡ ｅｘｐｌｏｒｅｒ精製系にて精製する。６５Ｃのカラム温度を精製中、維持する。サンプル注射および回収を９６ウェル（１．８ｍＬ−ディープウェル）プレートにおいて行う。ｓ全長配列に対応する単一のピークを、溶離剤中で回収する。精製された配列を、ＡＫＴＡ ｐｕｒｉｆｉｅｒを使用してＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５ カラムで脱塩する。脱塩されたベータ−ＥＮａＣ配列を、濃度（Ａ２６０でのＵＶ測定による）および純度（イオン交換ＨＰＬＣによる）について分析する。
次に、単鎖をアニーリングに付す。
ベータ−ＥＮａＣ単一の鎖および二本鎖の詳細なリストを上記表１に示す。ベータ−ＥＮａＣ 遺伝子レベルをノックダウンする二本鎖の能力を試験するために、二本鎖をインビトロでのスクリーニングに使用する。
実施例３．
ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤のインビトロでのスクリーニング
ベータ−ＥＮａＣ遺伝子レベルをノックダウンするベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤の能力を決定するために、二本鎖をインビトロでのスクリーニングに使用する。
細胞培養およびトランスフェクション：
Ｈ４４１（ATCC, Manassas, VA）細胞を、１０％のＦＢＳ、ストレプトマイシンおよびグルタミン（ＡＴＣＣ）を補ったＲＰＭＩ １６４０（ＡＴＣＣ）中で５％のＣＯ２雰囲気下で３７℃でほぼコンフルエンスにまで増殖させ、トリプシン処理によりプレートから単離する。逆トランスフェクションを、ウェルあたり５μｌのｓｉＲＮＡ二本鎖に対して５μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭを９６−ウェルプレートに、ウェルあたり１０μｌのＯｐｔｉ−ＭＥＭプラス０．２μｌのリポフェクタミン ＲＮＡｉＭａｘ(Invitrogen, Carlsbad CA. cat # 13778-150)と共に加えることにより実施し、室温で１５分間インキュベートする。次に、２．０×１０４個のＨ４４１細胞を含み抗生物質を含まない８０μｌの完全増殖培地を加える。細胞を２４時間インキュベートし、ＲＮＡ精製する。それぞれの５５ ベータ−ＥＮａＣ二本鎖での単回投与スクリーンについて、０．１または１０ｎＭの最終二本鎖濃度で実験を行う。それぞれのｓｉＲＮＡを、試験されるそれぞれの用量で３回トランスフェクトする。該結果は、表３に示される。
１０ｎＭおよび０．１ｎＭスクリーンにおいて強力なサイレンシングを示した二本鎖のサブセットを、連続希釈を使用して１０ｎＭから１０ｆＭの濃度範囲にわたってアッセイし、それらのＩＣ５０を決定する。該結果は、表４に示される。
全ＲＮＡ単離：
細胞を回収し、１４０μｌの溶解／結合溶液に溶解させ、次にエッペンドルフサーモミキサー(Eppendorf Thermomixer)（混合速度はプロセスにわたって同じである）を使用して８５０ｒｐｍで１分間混合する。
ＭａｇＭＡＸ−９６ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ(Applied Biosystem, Foster City CA, part #: AM1830) を使用して、全ＲＮＡを単離する。２０マイクロリットルの電磁ビーズおよび溶解／結合エンハンサー混合物を細胞溶解物に加え、５分間混合する。電磁ビーズを、磁気台を使用して捕獲し、ビーズを邪魔することなく上清を除去する。上清の除去後、電磁ビーズを洗浄溶液１（イソプロパノール付加）で洗浄し、１分間混合する。ビーズを再び捕獲し、上清を除去する。次に、ビーズを１５０μｌの洗浄溶液２（エタノール付加）で洗浄し、捕獲し、上清を除去する。次に、５０ｕｌのＤＮａｓｅ混合物（MagMax turbo DNase Buffer and Turbo DNase）をビーズに加え、それらを１０から１５分間混合する。混合後、１００μｌのＲＮＡ Ｒｅｂｉｎｄｉｎｇ溶液を加え、３分間混合する。上清を除去し、電磁ビーズを再び１５０μｌの洗浄溶液２で洗浄し、１分間混合し、上清を完全に除去する。電磁ビーズを２分間混合し、乾燥させ、ＲＮＡを５０μｌの水で溶離する。
ｃＤＮＡ合成：
ＡＢＩ大容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Applied Biosystems, Cat #4368813）をｃＤＮＡ合成のために使用する。反応あたり２μｌの１０×バッファー、０．８μｌの２５×ｄＮＴＰ、２μｌのランダムプライマー、１μｌの逆転写酵素、１μｌのＲＮａｓｅ阻害剤および３．２μｌのＨ２Ｏのマスター混合物を、１０μｌの全ＲＮＡに加える。ｃＤＮＡを、以下の工程：２５℃ １０分、３７℃ １２０分、８５℃ ５秒、４℃ 維持を介してＢｉｏ−Ｒａｄ Ｃ−１０００またはＳ−１０００サーマルサイクラー(Hercules, CA)を使用して産生する。
リアルタイムＰＣＲ：
２μｌのｃＤＮＡを、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ ３８４ウェルプレート（Roche cat # 0472974001）において、ウェルあたり全１０μｌでの０．５ｕｌのＧＡＰＤＨ ＴａｑＭａｎ プローブ（Applied Biosystems. Cat # 4326317E）、０．５μｌのベータ−ＥＮａＣ ＴａｑＭａｎ プローブ（Applied Biosystems cat # Hs00165722_m1）および５μｌのＲｏｃｈｅプローブマスター混合物（Roche Cat # 04887301001）を含むマスター混合物に加える。リアルタイムＰＣＲをＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ４８０ リアルタイムＰＣＲ機（Ｒｏｃｈｅ）にて行う。それぞれの二本鎖を、２つの独立したトランスフェクションにおいて試験し、それぞれのトランスフェクションをデュプリケートでアッセイする。
リアルタイムデータは、ΔΔＣｔ方法を使用して分析する。それぞれのサンプルをＧＡＰＤＨ発現に対して標準化し、ノックダウンを非標的二本鎖ＡＤ−１９５５でトランスフェクトされた細胞と比較して評価する。ＩＣ５０は、ＸＬｆｉｔにおいて４つのパラメーターフィットモデルを使用して定義される。
該結果は以下に示される。表３は、５５個のベータ−ＥＮａＣ二本鎖のそれぞれで単回投与スクリーンのために０．１ｎＭまたは１０ｎＭ最終二本鎖濃度で行われた実験結果を示す。「画分メッセージ残存」は、１０ｎｍまたは０．１ｎＭで、残りの遺伝子レベルを示す。したがって、ＡＤ−２０８３２−ｂ１に対する第２のカラムにおける「０．１７」は、１０ｎＭの濃度で、１７％の残りの遺伝子レベルまたは８３％の発現ノックダウンであったことを示す。接尾辞「ｂ１」が「バッチ１」を示すことにも注意すること。したがって、例えば、名称「ＡＤ−２０８３２−ｂ１」でのＲＮＡｉ剤は、「ＡＤ−２０８３２」と名付けられたＲＮＡｉ剤と同じ配列を有する。
表３．ベータ−ＥＮａＣの１０ｎＭおよび０．１ｎＭでのノックダウン

これらの実験において使用される全ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤は、表１に記載されている修飾配列（配列番号：１から１１０）であった。
表４は、１０ｎＭおよび０．１ｎＭスクリーンにおいて強力なサイレンシングを示す二本鎖のサブセットを、連続希釈を使用して１０ｎＭから１０ｆＭの濃度範囲にわたってアッセイし、それらのＩＣ５０を決定した実験結果を示す。
表４．ベータ−ＥＮａＣ用量応答スクリーン
実施例４
ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２のインビボ分析
インビボ実験において、２つのベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ−２０８０７およびＡＤ−２０８３２を、ラットにおける全肺におけるベータ−ＥＮａＣ遺伝子レベルをノックダウンする能力について試験する。該目的は、用量応答を決定することである。免疫刺激も測定する。
使用されるラット血統はＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙである；個体は約２８０−３００グラムの体重を有する。ラットに、１日に１回、２日間投与する。次に、それらを、第２の投与から約２４時間後に殺す。左肺を取り出し、ベータ−ＥＮａＣレベルのｑＰＣＲ測定のためにすりつぶす；右肺を冷凍し、保存する。
表５．

＊４匹のグループにおいて、最初に５匹のラットに投与したが、それぞれのグループにおける１匹が実験において生存せず、最終データに含んでいない。
ベータ−ＥＮａＣに対するＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８０７およびＡＤ２０８３２の両方は、用量依存的にベータ−ＥＮａＣレベルの減少を示す。ＡＤ２０８０７において、ベータ−ＥＮａＣのレベルは、１、３および１０ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ約３０％、４０％および５０％減少する。
対照的に、ベータ−ＥＮａＣ（ｂＥＮａＣ）ＲＮＡｉ剤は、アルファ−ＥＮａＣ（ａＥＮａＣ）のレベルを減少させない。しかしながら、ＡＤ２０８３２の投与でアルファ−ＥＮａＣにおいて増加がある。
ネガティブコントロールは以下のものを含む：
Ｄ５Ｗ：水中に５％のデキストロースの溶液；それは、投与時に、ｓｉＲＮＡを希釈するために使用されるビヒクルである；ＡＤ１９５５：アルファ−もしくはベータ−ＥＮａＣのいずれかを特異的に標的化しないが、ホタルルシフェラーゼを標的化するｓｉＲＮＡ；およびＡＤ２０１９１：ベータ−ＥＮａＣに結合しないが、ラットアルファ−ＥＮａＣを標的化するｓｉＲＮＡ；およびアルファ−ＥＮａＣを標的化するＡＤ−９２０１（特定の実施例において使用されていない）。
したがって、ベータ−ＥＮａＣの特定のノックダウンは、本実験においてＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８０７およびＡＤ２０８３２で見られる。
実施例５
ベータ−ＥＮａＣ ＡＤ−２０８３４のインビボ分析
インビボ実験において、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８３４を、ラットにおける全肺におけるベータ−ＥＮａＣ遺伝子レベルをノックダウンする能力について試験する。該目的は、用量応答を決定することである。免疫刺激も測定する。
ラット血統はＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙである；個体は約２８０−３００グラムの体重を有する。ラットに、１日に１回、２日間投与する。次に、それらを、第２の投与から約２４時間後に殺す。左肺を取り出し、ベータ−ＥＮａＣレベルのｑＰＣＲ測定のためにすりつぶす；右肺を冷凍し、保存する。
表６．

＊４匹のグループにおいて、最初に５匹のラットに投与したが、それぞれのグループにおける１匹が実験において生存せず、最終データに含んでいない。
３００グラム（０．３ｋｇ）の体重と仮定すると、以下の希釈物を作る：
１０ｍｇ／ｋｇ＝２００ｕＬ容量中に３ｍｇのｓｉＲＮＡ＝１５ｍｇ／ｍＬ
３ｍｇ／ｋｇ＝２００ｕＬ容量中に１ｍｇのｓｉＲＮＡ＝５ｍｇ／ｍＬ
１ｍｇ／ｋｇ＝２００ｕＬ容量中に０．３ｍｇのｓｉＲＮＡ＝１．５ｍｇ／ｍＬ
データは、ＰＰＩＢ［ハウスキーピング（標準化）遺伝子として使用されるペプチジル−プロリル シス−トランスイソメラーゼＢ］に対して標準化する。
該実験は、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８３４がＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいてベータ−ＥＮａＣレベルの約４０％の減少を示すことを証明する。該効果は、ベータ−ＥＮａＣに対して特異的である。
コントロールは以下のとおりである：Ｄ５Ｗ（水中に５％のデキストロース）はネガティブコントロールであり、アルファ−ＥＮａＣまたはベータ−ＥＮａＣレベルに対する影響を示さない。アルファ−もしくはベータ−ＥＮａＣに結合せず、また、アルファ−もしくはベータ−ＥＮａＣレベルに対してあまり影響を示さないコントロールｓｉＲＮＡであるＡＤ１９５５。アルファ−ＥＮａＣを標的化するが、ベータ−ＥＮａＣを標的化せず、アルファ−ＥＮａＣレベルにおいて約５０％の減少を示すが、ベータ−ＥＮａＣにおいて示さないポシティブコントロールｓｉＲＮＡであるＡＤ２０１９１。
したがって、用量１０ｍｇ／ｋｇのベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８３４は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいてベータ−ＥＮａＣ遺伝子発現の少なくとも約４０％の阻害を証明する。
実施例６
ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤の分析
さらなる実験は、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおいてインビボでベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８０７、ＡＤ２０８３２、ＡＤ２０８３４、ＡＤ２０８４８およびＡＤ２０８６１で行う。ラットを、１日目および２日目にＤ５Ｗにおいて１０ｍｇ／ｋｇで投与し、３日目に殺し、肺を回収する。
該結果は図１に示される。該結果は、コントロール遺伝子ＰＰＩＢに対して標準化された左肺由来のｑＰＣＲデータを示す。
図１におけるコントロールは以下のとおりである：Ｄ５Ｗ（水中５％のデキストロース）はネガティブコントロールであり、アルファ−ＥＮａＣまたはベータ−ＥＮａＣレベルにおける効果を示さない。ポジティブコントロールはアルファ−ＥＮａＣ（ａＥＮａＣ）を標的化するＡＤ−９２０１である。
図１に示されている結果は、ＡＤ２０８０７、ＡＤ２０８３２、ＡＤ２０８３４、ＡＤ２０８４８およびＡＤ２０８６１によるベータ−ＥＮａＣ（ｂＥＮａＣ）の統計的に有意および特異的なノックダウンを示す。ベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現は、Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおいてこれらのＲＮＡｉ剤の１０ｍｇ／ｋｇの濃度で少なくとも約４０％阻害する。
実施例７
ヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣチャネル機能活性に対するベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８３２のインビトロ効果
ヒト気管支上皮性細胞（ＨＢＥＣ）を、ベータ−ＥＮａＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ２０８３２を含む指示されたｓｉＲＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクト細胞をＳｎａｐｗｅｌｌインサート(insert)上に播種し、２４時間培養する。次に、上点側の培養培地をそれぞれのインサートから取り出し、細胞を気液界面（ＡＬＩ）で培養する。細胞を、記載されているとおりＡＬＩの８日後にＥＮａＣおよびＣＦＴＲ活性に対してアッセイする。細胞生存能力についてコントロールするために、ＥＮａＣ機能をＣＦＴＲ活性に対して標準化し、該データを非トランスフェクトコントロールに対する比較パーセントとして示す（図２Ａ）。さらなる生存能力コントロールとして、膜貫通抵抗性もまた測定する（図２Ｂ）。アルファおよびベータＥＮａＣサブユニットｍＲＮＡの発現分析をそれぞれのインサートに対して行い、ＧＡＰＤＨ発現に対して標準化する。（図２Ｃ）。該データは、ｍＲＮＡ発現の７０％阻害がＥＮａＣチャネルの５０％機能性阻害を生じるために十分であることを証明する。これは、非トランスフェクト（ｎｅｇ）および非特異的（ｎｓ）ｓｉＲＮＡコントロールと比較して、アルファまたはベータサブユニットのいずれかのノックダウンについて事実である。該データはまた、ベータＥＮａＣ ｓｉＲＮＡがアルファＥＮａＣ ｍＲＮＡ発現を阻害しない（逆もまた同様）ことを示す。
方法：ヒト気管支上皮細胞におけるＥＮａＣ機能活性
ヒト気管支上皮性細胞（ＨＢＥＣ）をＬｏｎｚａから購入し、凍結前に、増殖培地（ＢＥＧＭ プラス ｓｉｎｇｌｅｑｕｏｔｓ−Ｌｏｎｚａ）に１回通す。次に、細胞を解凍し、コンフルエンスにまで拡張し、トランスフェクションのために１：１０に分ける。Ｏｎｃｅ ａｔ ８０％コンフルエンス、それぞれのフラスコの細胞を、全容量３０ｍＬのトランスフェクション培地（ＢＥＧＭ（Ｌｏｎｚａ）およびＤＭＥＭ高グルコース（Ｇｉｂｃｏ）の１：１混合物、付加物なし）中の２μＬ／ｍＬのリポフェクタミン ２０００を使用して、３０ｎＭで指示されたｓｉＲＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクション２４時間後、細胞を分化培地（ＢＥＢＭおよびＤＭＥＭ／高グルコース（ｓｉｎｇｌｅｑｕｏｔｓを有する）の５０：５０の混合物（マイナス トリヨードスレオニンおよびレチノイン酸補足物、別々に５０ｎＭで加えられたオール−トランスレチノイン酸を有する）中で２．５×１０５細胞／インサートで６ウェルのＳｎａｐｗｅｌｌインサート（Ｃｏｓｔａｒ）上に播種する。細胞に、上点側に０．５ｍＬの分化培地および側底側に２．５ｍＬの分化培地を補う。インサート上のさらなる２４時間の培養後、側底側培地を置き換え、上点側培地を取り出し、したがって細胞を気液界面（ＡＬＩ）培養物に取る。細胞を、ＡＬＩの８日（Ｄ８）後にＥＮａＣおよびＣＦＴＲ活性についてアッセイする。
トランスフェクト細胞のイオン輸送表現型を評価するために、ＳｎａｐｗｅｌｌインサートをＶｅｒｔｉｃａｌ Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ Ｃｈａｍｂｅｒｓ（Ｃｏｓｔａｒ）にマウントし、３７℃で（ｍＭにおいて）：１２０ ＮａＣｌ、２５ ＮａＨＣＯ３、３．３ ＫＨ２ＰＯ４、０．８ Ｋ２ＨＰＯ４、１．２ ＣａＣｌ２、１．２ ＭｇＣｌ２および１０ グルコース（２８０から３００ｍｏｓｍｏｌ／ｌ間に維持されたモル浸透圧濃度(Osmolarity)）を含むガス化(gassed)Ｒｉｎｇｅｒ溶液（Ｏ２中５％ＣＯ２；ｐＨ７．４）で連続的に浸す。細胞は、０ｍＶ（モデルＥＶＣ４０００；ＷＰＩ）に固定されたボルト数である。膜貫通抵抗性（ＴＭ ｒｅｓ）は、３０秒間隔で２−ｍＶパルスを適用し、オームの法則を使用してＴＭ ｒｅｓを計算することにより測定される。短絡回路電流データを、ＰｏｗｅｒＬａｂ ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（ＡＤＩ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して記録する。それぞれのグループにおけるＥＮａＣチャネルの活性は、１０μＭのＥＮａＣブロッカーアミロリドの上点側添加後の短絡回路電流（アミロリド感受性電流）における変化により評価される。ＣＦＴＲを介するクロライド分泌は、ＣＦＴＲを活性化することが知られている０．６μＭのＦｏｒｓｋｏｌｉｎの上点側および側底側添加後の、短絡回路電流における変化（Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ応答）により評価される。それぞれのインサートについて、アミロリド感受性電流をＦｏｒｓｋｏｌｉｎ応答に対して標準化し、データは非トランスフェクトコントロールに対するパーセントとして示される。試験の最後に、それぞれのインサートをＲＮＡ分析（３００μＬのＲＬＴ Ｂｕｆｆｅｒ−Ｑｉａｇｅｎ）のために溶解し、サンプルを記載されているｒｔＰＣＲによるｍＲＮＡノックダウンの後の分析のために保持する。
均等物
センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物。
ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
アンチセンス鎖が３０以下のヌクレオチド長である、段落［００８７９］に記載の組成物。
センス鎖およびアンチセンス鎖が、１５から３０ヌクレオチド対の長さの二本鎖領域を形成する、段落［００８７９］に記載の組成物。
該アンチセンス鎖およびセンス鎖が、独立して１９から２３ヌクレオチド長である、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、生物学的サンプルまたは環境における安定性を増加させる修飾を含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの修飾骨格および／または少なくとも１つの２’−修飾ヌクレオチドを含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、
ａ）ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；および／または
ｂ）５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；および／または
ｃ）５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；および／または
ｄ）５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチド
を含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群から選択される２’−修飾を含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、平滑末端を含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、１から４個の不対ヌクレオチドを有するオーバーハングを含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の３’−末端でオーバーハングを含む、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラクテート １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンから選択される１つ以上の薬剤に結合している、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約６０％阻害することができる、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約７０％阻害することができる、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約８０％阻害することができる、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約９０％阻害することができる、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉが、約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉが、約０．０１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する、段落［００８７９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉが、約０．００１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する、段落［００８７９］に記載の組成物。
第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該第１の鎖および第２の鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤の第１および第２の鎖のそれぞれと０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物。
組成物が、ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤を含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
第２の鎖が、３０以下のヌクレオチドの長さである、段落［００８９９］に記載の組成物。
第１の鎖および第２の鎖が、１５から３０ヌクレオチド対の長さの二本鎖領域を形成する、段落［００８９９］に記載の組成物。
第１の鎖および第２の鎖が、独立して１９から２３ヌクレオチド長である、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、生物学的サンプルまたは環境における安定性を増加させる修飾を含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、ホスホロチオエートおよび／または２’−修飾ヌクレオチドを含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、
ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ｕａ−３’）ジヌクレオチド；
および／または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ｕｇ−３’）ジヌクレオチド；
および／または５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ｃａ−３’）ジヌクレオチド；
および／または５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも１つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ｕｕ−３’）ジヌクレオチド
を含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、
２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）および２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）
からなる群から選択される１つ以上の２’−修飾を含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、平滑末端を含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、１から４個の不対ヌクレオチドを有するオーバーハングを含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、アンチセンス鎖の３’−末端でオーバーハングを含む、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラクテート １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンから選択される１つ以上の薬剤に結合している、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約６０％阻害することができる、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約７０％阻害することができる、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約８０％阻害することができる、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉ剤が、インビトロでＨ４４１細胞において１０ｎＭの濃度でベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を少なくとも約９０％阻害することができる、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉが、約０．１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉが、約０．０１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する、段落［００８９９］に記載の組成物。
ＲＮＡｉが、約０．００１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する、段落［００８９９］に記載の組成物。
センス鎖およびアンチセンス鎖を含む治療有効量のＲＮＡｉ剤を含む組成物を個体に投与する工程を含む該個体におけるベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置する方法であって、該アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、方法。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患が、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧である、段落［００９１９］に記載の方法。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患が嚢胞性線維症である、段落［００９１９］に記載の方法。
嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧に対するさらなる処置を施す工程をさらに含む、段落［００９１９］に記載の方法。
組成物が、ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤を含む、段落［００９１９］に記載の方法。
ベータ−ＥＮａＣに対するさらなるＲＮＡｉ剤を投与する工程をさらに含む、段落［００９１９］に記載の方法。
さらなる処置の投与をさらに含む、段落［００９１９］に記載の方法。
さらなる処置が組成物である、段落［００９１９］に記載の方法。
さらなる処置が方法である、段落［００９１９］に記載の方法。
さらなる処置およびＲＮＡｉ剤が、任意の順において投与することができる、段落［００９１９］に記載の方法。
センス鎖およびアンチセンス鎖を含む治療有効量のＲＮＡｉ剤を含む組成物を個体に投与する工程を含む個体におけるベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を阻害する方法であって、該アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、方法。
個体が、ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患に罹患しているか、または罹患しやすい、段落［００９２９］に記載の方法。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患が、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧である、段落［００９２９］に記載の方法。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患が、嚢胞性線維症である、段落［００９２９］に記載の方法。
さらなる処置の投与をさらに含む、段落［００９３２］に記載の方法。
さらなる処置が組成物である、段落［００９３３］に記載の方法。
さらなる処置が方法である、段落［００９３３］に記載の方法。
さらなる処置およびＲＮＡｉ剤が、任意の順において投与することができる、段落［００９３３］に記載の方法。
センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含むＲＮＡｉ製剤における使用のための医薬であって、該アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、医薬。
薬学的に有効な製剤における上記いずれかの組成物。
個体におけるベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置する方法における使用のための段落［００８７９］に記載の組成物であって、該方法は、段落［００８７９］に記載の治療有効量の組成物を個体に投与する工程を含む組成物。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置のための医薬の製造における、段落［００８７９］に記載の組成物の使用。
ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患が、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧である、段落［００９４０］に記載の使用。
全てのピリミジンが２’ Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである、段落［００８７９］に記載の組成物。
全てのピリミジンが２’ Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである、段落［００８９９］に記載の組成物。

Claims (20)

  1. センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物。
  2. ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
  3. ＲＮＡｉ剤が、少なくとも１つの修飾骨格および／または少なくとも１つの２’−修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組成物。
  4. ＲＮＡｉ剤が、診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール(uvaol)、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン(Friedelin)、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラクテート(oligo lactate)１５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンから選択される１つ以上の薬剤に結合している、請求項１に記載の組成物。
  5. 第１の鎖および第２の鎖を含むＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、該第１の鎖および第２の鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤の第１および第２の鎖のそれぞれと０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、組成物。
  6. ベータ−ＥＮａＣに対する第２のＲＮＡｉ剤を含む、請求項１に記載の組成物。
  7. ＲＮＡｉ剤がホスホロチオエートおよび／または２’−修飾ヌクレオチドを含む、請求項１に記載の組成物。
  8. ＲＮＡｉ剤が、１つ以上の薬剤に結合しており、該薬剤が、診断化合物、レポーター基、架橋剤、ヌクレアーゼ耐性付与部分、天然もしくは異常核酸塩基、親油性分子、コレステロール、脂質、レクチン、ステロイド、ウバオール、ヘコゲニン、ジオスゲニン、テルペン、トリテルペン、サルササポゲニン、フリーデリン、エピフリーデラノール誘導体化リトコール酸、ビタミン、炭水化物、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、合成炭水化物、オリゴラクテート １５−ｍｅｒ、天然ポリマー、低もしくは中間分子量ポリマー、イヌリン、シクロデキストリン、ヒアルロン酸、タンパク質、タンパク質−結合剤、インテグリン標的分子、ポリカチオン、ペプチド、ポリアミン、ペプチド模倣物および／またはトランスフェリンから選択される、請求項１に記載の組成物。
  9. センス鎖およびアンチセンス鎖を含む治療有効量のＲＮＡｉ剤を含む組成物を個体に投与する工程を含む該個体におけるベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置する方法であって、アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、方法。
  10. ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患が、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧である、請求項９に記載の方法。
  11. 嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧に対するさらなる処置を施す工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。
  12. ベータ−ＥＮａＣに対するさらなるＲＮＡｉ剤を投与する工程をさらに含む、請求項１１に記載の方法。
  13. センス鎖およびアンチセンス鎖を含む治療有効量のＲＮＡｉ剤を含む組成物を個体に投与する工程を含む該個体におけるベータ−ＥＮａＣ遺伝子の発現を阻害する方法であって、該アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、方法。
  14. ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患が、嚢胞性線維症、偽性低アルドステロン症１型（ＰＨＡ１）、リドル症候群、高血圧、アルカローシス、低カリウム血漿および／または肥満関連高血圧である、請求項１３に記載の方法。
  15. センス鎖およびアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を含むＲＮＡｉ製剤における使用のための医薬であって、該アンチセンス鎖は、表１において提供されるベータ−ＥＮａＣに対して特異的なＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖と０、１、２または３個のヌクレオチドにより異なっている少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含む、医薬。
  16. 薬学的に有効な製剤中の前記いずれかの組成物。
  17. 個体におけるベータ−ＥＮａＣ−関連疾患を処置する方法における使用のための請求項１に記載の組成物であって、該方法は、治療有効量の請求項１に記載の組成物を該個体に投与する工程を含む、組成物。
  18. ベータ−ＥＮａＣ−関連疾患の処置のための医薬の製造における請求項１に記載の組成物の使用。
  19. 全てのピリミジンが、２’ Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載の組成物。
  20. 全てのピリミジンが、２’ Ｏ−メチル−修飾ヌクレオチドである、請求項５に記載の組成物。
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