CN107922363B - 与金属和/或自由基螯合构型有关的邻伯二胺，及其抗羰基和氧化应激的活性，及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I化合物：

Description

与金属和/或自由基螯合构型有关的邻伯二胺，及其抗羰基和 氧化应激的活性，及其用途
技术领域
本发明涉及alpha-氧代醛(α-氧代醛)和alpha，beta-不饱和醛(α，β-不饱和醛)和金属螯合剂的新型二胺衍生物清除剂及其用途，特别是在治疗和/或预防与AGE(晚期糖基化终产物)和/或ALE(晚期脂质过氧化终产物)积聚有关的疾病或失调中的用途。
背景技术
在糖酵解和脂质过氧化期间，羰基化合物形成并与蛋白质的亲核基团(赖氨酸、精氨酸、半胱氨酸等)反应以产生AGE(“晚期糖基化终产物”)(Pathologie,Biologie,2006,54,405-419)和ALE(“晚期脂质过氧化终产物”)(Br.J.Pharm.,2008,153,6-20)。因而，在游离的氨基基团与不同的α-氧代醛衍生物(诸如来自糖类的氧化代谢的乙二醛(GO)、甲基乙二醛(MGO)和脱氧葡萄糖酮醛(3-DG))进行Amadori重排以形成席夫碱之后，AGE表现为蛋白质的有害修饰(Diabetes Res.Clin.Pract.2013,99,261-271)。以相同的方式，在将蛋白质的这些胺基1.2或1.4Michael加成到α，β-不饱和醛(诸如丙二醛(MDA)、丙烯醛、4-羟基壬烯醛(4-HNE)或4-羟基-2-己醛(4-HHE))上后，形成AGE，该α，β-不饱和醛来自多不饱和脂肪酸在特别是通过过渡金属诱导(Cu2+、Fe3+)的氧化应激作用下的降解(Prog.Lipid Res.,2003,42,318-343)。另外，这些有毒的羰基衍生物还可以根据非酶促过程与DNA的碱基反应，以产生支链或非支链AGE/ALE。酶促解毒机制存在诸如(GSH)-依赖型谷胱甘肽乙二醛酶系统(乙二醛酶I和II)，其将活性羰基化合物转化为D-乳酸盐、乙醇酸盐或丙酮醇，但其机能失调可以引起AGE积聚。
AGE积聚有两个主要的生物学后果。首先，它们可以源自特别是在长寿命蛋白质(诸如胶原蛋白、晶状体蛋白、纤连蛋白、白蛋白和血红蛋白)上观察到的蛋白交联。因此这种现象在各种机能失调(皮肤组织或血管内皮的弹性丧失、皮肤色素沉着等)和与年龄相关性病理(白内障、风湿病等)的出现中起主要作用。然后，氧化应激将促进炎症和血栓形成反应的出现，并且通过AGE与其特异性受体(RAGE)之间的相互作用而促进细胞凋亡。由此，这些机制特别会涉及动脉粥样硬化和各种并发症的出现，特别是与糖尿病有关的微血管病，诸如心血管障碍、肾病、视网膜病、神经病等(Biofactors 2012,38,266-274；Int.J.Mol,Med.,2010,26,813-818；Mol.Metabolism,2014,3,94-108)。但是，与活性氧簇(ROS)过量产生引起的氧化不平衡有关的AGE积聚和糖尿病患者中发现的抗氧化细胞防御系统减弱也将源自脂质过氧化加剧(Chem.Biol.Interact.,2008,171,251-271)。因而，这种氧化级联将同时产生ALE的形成，诸如LDL(低密度脂蛋白)天然物的载脂蛋白B与氧化的LDL的产生中涉及的MDA之间的复合物。然后，后者将被巨噬细胞吸收，巨噬细胞一旦负载脂质液滴，将被转化成泡沫状细胞，构成动脉粥样斑块(Int.J.Mol,Med.,2010,26,813-818)。
以相同的方式，在氧化应激和脂质过氧化反应加剧之后，在患有神经退行性疾病(诸如阿尔茨海默病和帕金森病)的患者中发现大量的与神经蛋白有关的ALE。由此，在阿尔茨海默病的情况下，β-淀粉样蛋白级联的病理生理学模型倾向于证明构成疾病的主要标志物之一的β-淀粉样蛋白斑块的积聚源自有害的氧化级联(Trends Mol.Med.2001,7,548-554；Free Radic.Biol.Med.,2002,32,1050-1060)。事实上，在各种遗传和环境因素的影响下，通过β-分泌酶裂解淀粉样前体蛋白(APP)变得优先于涉及α-分泌酶的降解途径的损害。然后，形成无毒的Aβ单体，其在由金属离子诱导的聚集后，被转化成构成源自氧化应激加剧的β-淀粉样斑块的毒性低聚物(Chem.Eur.J.,2012,18,15910-15920；Neurochem.Int.,2013,62,367-378)。最后，来自脂质过氧化的α，β-不饱和醛的神经毒性将大量参与痴呆的发生(Curr.Alzheimer Res.,2011,8,452-469)。在后者中，可以提及丙烯醛，其似乎是与蛋白质的半胱氨酸、组氨酸和赖氨酸残基或4-HNE相关的最具活性的化合物。由此，丙烯醛将导致形成源自细胞骨架的改变的ALE和出现神经原纤维缠结，其是阿尔茨海默病的另一个重要标志物。然后，特别地，在离子通道上形成ALE并且最终导致源自细胞凋亡的钙失衡后，4-HNE将诱导神经元膜上的不稳定。另外，来自在蛋白质的赖氨酸残基上的MDA缩合的ALE能够以二氢吡啶衍生物的形式被识别，并且会参与降低皮肤对UV的抗性，这将促进皮肤的老化并且可能发展成皮肤癌(Mech.Ageing Dev.,2001,122,735-755)。最后，在DNA碱基的并且特别是脱氧鸟苷的胺官能团上反应后，MDA也可以作为致突变剂，并且由此有利于发展某些癌症(Toxicology,2002,181-182,219-222)。但是，可以注意到这种类型的DNA修饰也已经以与MGO的加合物的形式描述于文献中(Chem.Res.Toxicol.,2005,18,1586-1592)。
之前在文献中已经描述了几种抗AGE/ALE试剂。由此，氨基胍
Figure BDA0001574366190000031
在体外和体内显示为是糖尿病动物模型的优异的MGO清除剂(Arch.Biochem.Biophys.,2003,419,31-40；Diabetes,2012,61,549-559)。但是，在人中的III期临床试验没有提供显示弱血管保护性抗氧化性能以及肝和胃肠副作用的结论性结果(Am.J.Nephrol.,2004,4,32-40)。由此，在该分子上的试验被放弃了。
但是，其他几种化合物在体外和体内显示出它们在减缓AGE和ALE形成中的有效性。例如，Nagai等(Bioorg.Med.Chem.2009,17,2310-2320)报道了吡哆胺
Figure BDA0001574366190000032
2,3-二氨基吩嗪、硫胺、苯磷硫胺、TM-2002、替尼西坦以及LR-9，20，59，74和90的抗AGE性质，以及PTB(“苯甲酰噻唑溴化物”)和ALT-711已经显示能够破坏AGE和ALE的事实。也已经描述了肌肽(Neurosci.Lett.,1997,238,135-13)和OPB-9195(J.Am.Soc.Nephrol.,2000,11,1719-1725)的抗AGE作用。请注意，OPB-9195的首次临床试验没有提供决定性结果，并且由于发生主要副作用而不得不中止(Pathologie,Biologie,2006,54,405-419)。大多数其他分子的研究仍处于实验阶段，除了其临床试验也被暂停的ALT-711。
专利申请WO 2006/103274A1和WO2013/050721A1描述了先前由Sasaki等合成的2,3-二氨基丙酸衍生物及其抗AGE/ALE性质。
重要的是注意到，各种工作主要集中在抗AGE试剂的开发上。事实上，到目前为止，几乎没有进行关于潜在抗ALE试剂开发的研究。目前还没有关于同时为抗AGE/ALE和金属螯合剂的多能化合物设计的描述。
仍然需要具有抗AGE/ALE性质并且优选为也是金属螯合剂的新型化合物。
发明内容
本发明人现已成功开发了alpha-氧代醛(α-氧代醛)和alpha，beta-不饱和醛(α，β-不饱和醛)和金属螯合剂的新型二胺衍生物清除剂。这些多能化合物具有将羰基化合物的清除剂性质与金属螯合性质和抗自由基性质相结合的优点。
因而，本发明涉及式I化合物、其药学上可接受的盐以及这些化合物或其药学上可接受的盐在药物、农业食品或化妆品组合物中的用途。
第一方面，本发明涉及式I化合物：
Figure BDA0001574366190000041
及其盐，特别是其药学上可接受的盐，
其中，n为1-6的整数；
X为CO或CH2；
Y为NR1R2或R2或
Figure BDA0001574366190000051
R1为H或烷基或烷基-芳基；
R2为Z-L-R3；
Z为不存在、CO或CH2；
L为不存在、CH＝CH或(CH2)m；
m为1-6的整数；
R3为被至少一个OH基团和选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的一个或多个取代基取代的苯基，或R3为被至少一个OH基团取代并且可能被选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的一个或多个取代基取代的N-吡啶酮基。
式I化合物包含一组不对称碳原子，它们以两种对映异构体的形式存在。这些对映异构体以及它们的混合物，包括外消旋混合物，都是本发明的一部分。
另一方面，本发明涉及药物、化妆品或农业食品组合物，其包含至少一种根据本发明的化合物或其盐(特别是药学上可接受的盐)之一和至少一种从药物、化妆品和/或农业食品角度可接受的赋形剂。
如上所述，本发明的化合物及其药学上可接受的盐具有在治疗和/或预防与AGE(晚期糖基化终产物)和/或ALE(晚期脂质过氧化终产物)的积聚有关的疾病或失调的特定应用。
发明详述
如上所详述，本发明涉及式I化合物及其盐，特别是从药物、化妆品和/或农业食品角度可接受的盐。
式I化合物及其优选的盐是其中n、Y、R1、R2、Z、L、m和R3中的一个、几个或每一个如以下方式所定义的那些：
n为1-4的整数；优选地，n为1、2或3；更优选地，n为2或3；
Y为NR1R2或R2或
Figure BDA0001574366190000061
R1为H、甲基或苄基；优选地，R1为H或甲基，更优选地，R1为H；
R2为Z-L-R3；
Z为CO或CH2；
L为不存在、CH＝CH或(CH2)m；优选地，L为不存在、反式-CH＝CH或(CH2)m；
m为1-6的整数；优选为1-4的整数，更优选地，m为1、2或3；
R3为被至少一个OH基团和选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的一个或多个取代基取代的苯基，或R3为被至少一个OH基团取代并且可能被选自OH、C1-C2烷氧基和C1-C2烷基，优选选自OH、甲氧基和甲基，更优选选自OH和甲氧基或OH和甲基或OH的的一个或多个取代基取代的N-吡啶酮基，更优选地R3选自：
Figure BDA0001574366190000062
在一个具体实施方案中，式I化合物及其盐是R2选自以下的那些：
Figure BDA0001574366190000071
其中Z为CO或CH2。
事实上，不希望受任何理论束缚，发明人认为在二胺基团的水平上获得了根据本发明的化合物与MGO和MDA形成加合物的能力以及铜螯合能力。同时，归功于衍生自阿魏酸(4-羟基-3-甲氧基肉桂酸)、没食子酸(3,4,5-三羟基苯甲酸)和羟基吡啶酮的基团，获得了根据本发明的化合物的铁螯合能力和抗自由基性质。
在第一个实施方案中，本发明的化合物是式II化合物：
Figure BDA0001574366190000081
及其盐，特别是其药学上可接受的盐，其中n和Y如上文中式I所定义。
在第二个实施方案中，本发明的化合物是式III化合物：
Figure BDA0001574366190000082
及其盐，特别是其药学上可接受的盐，其中n和Y如上文中的式I所定义。
在第三个实施方案中，本发明的化合物是式IV化合物：
Figure BDA0001574366190000083
及其盐，特别是其药学上可接受的盐，其中n、X、R1、Z、L和R3如式I所定义。
优选的式IV化合物是Z-L-R3选自以下的那些：
Figure BDA0001574366190000091
其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20和R21彼此独立地选自H、OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基，优选选自H、OH、C1-C2烷氧基和C1-C2烷基，优选选自H、OH、甲氧基和甲基，更优选选自H、OH和甲氧基；H或OH和H、甲基或OH；条件是R4、R5、R6、R7和R8中的至少一个，R9、R10、R11、R12和R13中的至少一个，R14、R15、R16和R17中的至少一个，R18、R19、R20和R21中的至少一个为OH。
特别优选的式IV化合物是Z-L-R3选自以下的那些：
Figure BDA0001574366190000101
其中R5、R6、R9、R10、R11、R16、R17和R21彼此独立地选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基，优选选自OH、C1-C2烷氧基和C1-C2烷基，优选选自OH、甲氧基和甲基，更优选选自OH和甲氧基或OH和甲基或OH；条件是R5和R6中的至少一个，R9、R10和R11中的至少一个，R16和R17中的至少一个以及R21为OH。特别有利的式IV化合物中：
-R5和R6彼此独立地选自OH和C1-C4烷氧基，优选选自OH和C1-C2烷氧基，更优选选自OH和甲氧基；有利地，R5为C1-C4烷氧基，优选为C1-C2烷氧基，更优选为甲氧基并且R6为OH；
-R9、R10和R11为OH；
-R16和R17彼此独立地选自OH和C1-C4烷基，优选选自OH和C1-C2烷基，更优选选自OH和甲基；有利地，R16为OH并且R17为C1-C4烷基，优选为C1-C2烷基，更优选为甲基；
-R21为OH。
在一个实施方案中，式IV化合物是Z-L-R3选自以下的那些：
Figure BDA0001574366190000111
其中R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20和R21彼此独立地选自H、OH和C1-C4烷基，优选选自H、OH和C1-C2烷基，优选选自H、OH和甲基；条件是R14、R15、R16和R17中的至少一个，以及R18、R19、R20和R21中的至少一个为OH。有利地，Z-L-R3选自：
Figure BDA0001574366190000112
其中R16、R17和R21彼此独立地选自OH和C1-C4烷基，优选选自OH和C1-C2烷基，更优选选自OH和甲基；条件是R16和R17中的至少一个以及R21为OH。特别有利的化合物中：
-R16和R17彼此独立地选自OH和C1-C4烷基，优选选自OH和C1-C2烷基，更优选选自OH和甲基；有利地R16为OH并且R17为C1-C4烷基，优选为C1-C2烷基，更优选为甲基；
-R21为OH。
在第四个实施方案中，本发明的化合物是式V化合物：
Figure BDA0001574366190000113
及其盐，特别是其药学上可接受的盐，其中n、X、Z、L和R3如式I所定义。
优选的式V化合物是Z-L-R3选自以下的那些：
Figure BDA0001574366190000121
其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20和R21彼此独立地选自H、OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基，优选选自H、OH、C1-C2烷氧基和C1-C2烷基，优选选自H、OH、甲氧基和甲基，更优选选自H、OH和甲氧基；H或OH和H、甲基或OH；条件是R4、R5、R6、R7和R8中的至少一个，R9、R10、R11、R12和R13中的至少一个，R14、R15、R16和R17中的至少一个，以及R18、R19、R20和R21中的至少一个为OH。
特别优选的式V化合物是Z-L-R3选自以下的那些：
Figure BDA0001574366190000131
其中R5、R6、R9、R10、R11、R16、R17和R21彼此独立地选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基，优选选自OH、C1-C2烷氧基和C1-C2烷基，优选选自OH、甲氧基和甲基，更优选选自OH和甲氧基或OH和甲基或OH；条件是R5、R6中的至少一个，R9、R10和R11中的至少一个，R16和R17中的至少一个为OH以及R21为OH。特别有利的式IV化合物中：
-R5和R6彼此独立地选自OH和C1-C4烷氧基，优选选自OH和C1-C2烷氧基，更优选选自OH和甲氧基；有利地，R5为C1-C4烷氧基，优选为C1-C2烷氧基，更优选为甲氧基并且R6为OH；
-R9、R10和R11为OH；
-R16和R17彼此独立地选自OH和C1-C4烷基，优选选自OH和C1-C2烷基，更优选选自OH和甲基；有利地，R16为OH并且R17为C1-C4烷基，优选为C1-C2烷基，更优选为甲基；
-R21为OH。
在一个实施方案中，式V化合物是Z-L-R3选自以下的那些：
Figure BDA0001574366190000141
其中R14、R15、R16、R17、R18、R19、R20和R21彼此独立地选自H、OH和C1-C4烷基，优选选自H、OH和C1-C2烷基，优选选自H、OH和甲基；条件是R14、R15、R16和R17中的至少一个以及R18、R19、R20和R21中的至少一个为OH。有利地，Z-L-R3选自：
Figure BDA0001574366190000142
其中R16、R17和R21彼此独立地选自OH和C1-C4烷基，优选选自OH和C1-C2烷基，更优选选自OH和甲基；条件是R16和R17中的至少一个为OH以及R21为OH。特别有利的化合物中：
-R16和R17彼此独立地选自OH和C1-C4烷基，优选选自OH和C1-C2烷基，更优选选自OH和甲基；有利地，R16为OH并且R17为C1-C4烷基，优选为C1-C2烷基，更优选为甲基；
-R21为OH。
在第五个实施方案中，本发明的化合物是式VI化合物：
Figure BDA0001574366190000143
及其盐，特别是其药学上可接受的盐，其中n、X、L和R3如式I所定义。
优选的式VI的化合物中，n为1或2，X为CH2和/或L-R3为
Figure BDA0001574366190000151
其中R14、R15、R16和R17彼此独立地选自H、OH和C1-C4烷基，优选选自H、OH和C1-C2烷基，优选选自H、OH和甲基；条件是R14、R15、R16和R17中的至少一个为OH。有利地，L-R3选自：
Figure BDA0001574366190000152
其中R16和R17彼此独立地选自OH和C1-C4烷基，优选选自OH和C1-C2烷基，更优选选自OH和甲基；条件是R16和R17中的至少一个为OH。特别有利的化合物是R16为OH并且R17为C1-C4烷基，优选为C1-C2烷基，更优选为甲基的那些。
本发明特别优选的化合物在下表1中列出：
表1
Figure BDA0001574366190000153
Figure BDA0001574366190000161
Figure BDA0001574366190000171
式I化合物可以根据本领域技术人员已知的反应制备。在“实施例”部分中描述的反应方案显示了可能的合成途径。
由于它们清除α-氧代醛和/或α，β-不饱和醛的能力，其螯合金属的能力及其抗氧化性质，本发明的化合物及其盐，特别是其从药学上和/或化妆品角度可接受的盐，在药学和/或化妆品产业有应用。
因此，第二方面，本发明涉及根据本发明的化合物作为药物的用途。
更具体地，本发明的化合物同样适用于治疗和/或预防与晚期糖基化终产物(AGE)和/或晚期脂质过氧化终产物(ALE)积聚有关的疾病或失调。
这些疾病或失调包括神经退行性疾病、与氧化和羰基应激相关的微血管病和大血管病、糖尿病相关性失调和年龄相关性病理。
在一个具体实施方案中，疾病或失调选自神经退行性疾病，特别是选自阿尔茨海默病和帕金森病。
在另一个具体实施方案中，疾病或失调选自与动脉粥样硬化型的氧化和羰基应激有关的微血管病和大血管病。
在另一个具体实施方案中，疾病或失调选自糖尿病相关性失调，特别选自动脉粥样硬化、视网膜病、肾病、神经病、微血管病和大血管病、白内障、淀粉样变性、风湿病和静脉曲张和动脉溃疡。
在另一个具体实施方案中，疾病或失调选自年龄相关性病理，诸如白内障和风湿病。
根据本发明的另一方面，本发明还涉及用于治疗上文所述的疾病和病症的方法，所述方法包括向患者施用有效量的根据本发明的化合物或其药学上可接受的溶剂合物之一。优选地，患者为温血动物，更优选为人。
本发明还涉及药物组合物，其包含至少一种根据本发明的化合物或至少一种所述化合物的药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。所述赋形剂根据所需的药物形式和施用方式从本领域技术人员已知的常用赋形剂中选择。
本发明的药物组合物可以选自通过口服、舌下、皮下、肌内、静脉内、外用、局部、气管内、鼻内、透皮或直肠途径施用的药物组合物。在这些组合物中，上述式I的活性成分或其药学上可接受的溶剂合物可以作为与传统药物赋形剂的混合物的单位施用形式向动物和人施用以用于治疗和/或预防上文指出的疾病或失调。合适的单位施用形式包括诸如片剂、软硬胶囊、粉末、颗粒剂和口服溶液或悬浮液的口服途径，舌下、口腔、气管内、眼内、鼻内的施用形式，通过吸入、局部、透皮、皮下、肌内或静脉内施用形式、直肠施用形式和植入物。对于局部施用，根据本发明的化合物可以用于霜剂、凝胶、软膏或洗剂中。在一个优选的实施方案中，它是用于口服施用的药物组合物。参考最新版本的“雷明顿药物科学”，根据施用方式可以具有固体、半固体或液体形式的合适的施用形式是本领域技术人员通常已知的。
由于AGE的积聚通常与具有美容影响的机能失调有关，诸如皮肤组织或血管内皮的弹性丧失以及皮肤色素沉着(Dermatoendocrinol.2012,4,259-270)，本发明的化合物可用作化妆品组合物中的活性成分。
定义
下文的定义和解释涉及包含说明书和权利要求的本申请中使用的术语和表达。
对于本发明化合物的描述，除非另有说明，所使用的术语和表述必须根据下文的定义来解释。
单独或作为另一基团的一部分的术语“烷基”是指式CnH2n+1的烃基，其中n是大于或等于1的整数。
术语“盐”是指式I化合物的酸加成盐。它涵盖无机和有机酸的盐，诸如盐酸、硝酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、马来酸、乙酸、琥珀酸、酒石酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、草酸等。
所有对式I化合物的引用也指后者的盐。
术语“患者”是指等待或接受治疗的温血动物，优选人。
术语“人”是指两性的受试者，并且处于任何发育阶段(即新生儿、婴儿、少年、青少年和成人)。在一个实施方案中，人是青少年或成人，优选成人。
术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”必须以其一般意义来理解，并且包括改善和消除病理病症。
术语“预防(prevent)”和“预防(prevention)”是指避免或延迟疾病或病症和相关症状的出现，如此排除患者发展疾病或病症或降低患者发展疾病或病症的风险。
术语“治疗有效量”或“有效量”是指足以在其施用的患者中达到所需的治疗或预防结果的活性成分(式I化合物)的量。
术语“药学上可接受的”或“从药学角度可接受的”是指化合物或组分对患者无害，并且在药物组合物的框架内与其它组分相容。
术语“美容上可接受的”是指化合物或组分对使用者，特别是人无害，并且在化妆品组合物的框架内与其他组分相容。
术语“从农业食品角度可接受的”是指在摄取期间，化合物或组分对于温血动物，特别是对人无害，并且在农业食品组合物的框架内与其他组分相容。
参照以下实施例将更好地理解本发明。这些实施例代表了本发明的某些实施方案，其并不以任何方式限制本发明的范围。使用附图来说明实验结果。
附图说明
图1：研究的各种化合物的结构。
图2：MGO与根据本发明的化合物之间形成加合物的动力学研究。
图3：质谱，其提供了在37℃保温15min后MGO与化合物37a之间形成至少三种类型加合物的证据。
图4：MDA与根据本发明的化合物之间形成加合物的动力学研究。
图5：质谱，其提供了在37℃保温5h后MDA与化合物37a之间形成至少一种加合物的证据。
图6：在Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M(pH＝5)中进行的校正曲线。
图7：在Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M(pH＝5)和MeOH75/25的混合物中进行的校正曲线。
图8：根据其浓度的根据本发明的不同化合物的Cu2+络合％的比较。
图9：与化合物37b有关的测试其Cu2+螯合性质的两种化合物。
图10：根据其浓度的化合物37b与仅具有一个游离Cu2+螯合末端的两种相关化合物的的Cu2+络合％的比较。
图11：trolox的校正曲线(净AUC vs浓度)。显示的值由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三次平均值±SEM表示。
图12：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及trolox不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图13：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及肌肽不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图14：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及Dap-Pip不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图15：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物29a不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图16：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物29b不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图17：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物30a不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图18：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物30b不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图19：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物37a不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图20：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物37b不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图21：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物37c不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图22：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物37d不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图23：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物37f不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图24：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物37i不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图25：由AAPH诱导的荧光素的荧光衰减曲线。所显示的值涉及化合物37j不存在(对照)或以不同浓度存在下获得的结果，并且由构成来自所进行的三个独立实验的代表性实验的三份平均值±SEM表示。
图26：在10μM下，根据本发明的化合物的抗氧化能力(ORACFL)。所显示的结果对应于分三份进行的三个独立实验的平均值±SEM。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001vs trolox(学生t-测试：如果p<0.05，则认为差异是显著的)。
图27：评估第二代化合物Dap-Pip的抗自由基性质。
图28：评估根据本发明的化合物29a的抗自由基性质。
图29：评估根据本发明的化合物29b的抗自由基性质。
图30：评估根据本发明的化合物30b的抗自由基性质。
图31：评估根据本发明的化合物37a的抗自由基性质。
图32：评估根据本发明的化合物37c的抗自由基性质。
图33：在浓度为10μM下，维生素E、第二代Dap-Pip以及根据本发明的各种化合物的抗自由基性质的比较。
图34：在浓度为1μM下，维生素E、第二代Dap-Pip以及根据本发明的各种化合物的抗自由基性质的比较。
图35：在处理24h后，根据本发明的化合物对鼠内皮脑细胞(bEnd.3)的细胞毒性研究。细胞活力由三份平均值±标准偏差表示。(a)化合物29a、29b、30b、37a和37c；(b)化合物30a和37b。
图36：在处理24h后，根据本发明的化合物对作为神经元细胞(PC12)处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的细胞毒性研究。细胞活力由三份平均值±标准偏差表示。(a)化合物29a、29b、30b、37a和37c；(b)化合物30a和37b。
图37：在处理24h后，根据本发明的化合物对人成纤维细胞(MRC-5)的细胞毒性研究。细胞活力由三份平均值±标准偏差表示。(a)化合物29a、29b、30b、37a和37c；(b)化合物30a和37b。
图38：在处理48h后，根据本发明的化合物对鼠内皮脑细胞(bEnd.3)的细胞毒性研究。细胞活力由三份平均值±标准偏差表示。(a)化合物29a、29b、30b、37a和37c；(b)化合物30a和37b。
图39：在处理48h后，根据本发明的化合物对作为神经元细胞(PC12)处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的细胞毒性研究。细胞活力由三份平均值±标准偏差表示。(a)化合物29a、29b、30b、37a和37c；(b)化合物30a和37b。
图40：在处理48h后，根据本发明的化合物对人成纤维细胞(MRC-5)的细胞毒性研究。细胞活力由三份平均值±标准偏差表示。(a)化合物29a、29b、30b、37a和37c；(b)化合物30a和37b。
图41：在处理24h后，根据本发明的化合物(29a、29b、30a、30b、37a、37b、37c、37d、37f、37i和37j)对作为神经元细胞(PC12)处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的细胞毒性研究。细胞活力由一式三份进行的三个独立实验的平均值±SEM表示。
图42：评估化合物30b对鼠内皮脑细胞(bEnd.3)的抗凋亡性质。将细胞bEnd.3用10μM或100μM的30b预处理30min，然后添加2mM的MGO，然后孵育24h。细胞的凋亡由三份平均值±标准偏差表示。
图43：评估化合物37c对鼠内皮脑细胞(bEnd.3)的抗凋亡性质。将细胞bEnd.3用10μM或100μM的37c预处理30min，然后添加2mM的MGO，然后孵育24h。细胞的凋亡由三份平均值±标准偏差表示。
图44：评估化合物30b对作为神经元细胞(PC12)处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的抗凋亡性质。将细胞PC12用10μM或100μM的30b预处理30min，然后添加1mM的MGO，然后孵育24h。细胞的凋亡由三份平均值±标准偏差表示。
图45：评估化合物37c对作为神经元细胞(PC12)处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的抗凋亡性质。将细胞PC12用10μM或100μM的37c预处理30min，然后添加1mM的MGO，然后孵育24h。细胞的凋亡由三份的平均值±标准偏差表示。
图46：评估化合物37b对人成纤维细胞(MRC-5)的抗凋亡性质。将细胞MRC-5用10μM或100μM的37b预处理1h，然后添加2mM的MGO，然后孵育24h。细胞的凋亡由三份平均值±标准偏差表示。
图47：评估化合物37c对人成纤维细胞(MRC-5)的抗凋亡性质。将细胞MRC-5用10μM或100μM的37c预处理1h，然后添加2mM的MGO，然后孵育24h。细胞的凋亡由三份平均值±标准偏差表示。
图48：评估化合物37c对作为神经元细胞(PC12)处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的抗凋亡性能。将细胞PC12用10μM或100μM的37c预处理1h，然后添加1mM的MGO，然后保温24h。所显示的结果由分三份进行的三个独立实验的mean±SEM表示。*p<0.05；**p<0.01vs对照(没有用MGO处理的细胞)(学生t-测试：如果p<0.05，则认为差异是显著的)。
具体实施方式
A.合成
I)设备和方法
各种反应产物购自Sigma-Aldrich(里昂，法国)，并且不经额外的纯化而使用。TLC在Merck 60F254硅胶板上进行，在紫外光(λ＝254nm)中观察，然后使用磷钼酸的乙醇(95％)溶液显色，然后加热直至最大着色。制备柱层析通过在Kielselgel 60硅胶(40-63μm)(Merck)上的层析技术或使用
Figure BDA0001574366190000251
(Grace)快速层析系统在正相中进行。
NMR分析在Bruker AC300、400或600设备上进行。化学位移以相对于用作内部参考的氘代溶剂的百万分率(ppm)表示。偶合常数(J)以赫兹(Hz)表示，并且信号多重性表示如下：s(单峰)、d(双峰)、t(三峰)、q(四峰)和m(多峰)。质谱是在用于MS的Shimadzu LCMS-2020设备和用于HRMS的Micromass Q-TOF Ultima设备上以正电喷雾电离模式(ESI+)获得的。
II)合成根据本发明的化合物
1-合成起始二胺合成子
a)来自天冬氨酸和谷氨酸的衍生物(方案1)
Figure BDA0001574366190000261
方案1:开发衍生自天冬氨酸和谷氨酸的合成子
*化合物1(Bioconjug.Chem.,2007,18,1625-1636)和2(J.Med.Chem.,2009 52, 4650-4656):
合成的第一步(方案1)使得可以从先前由Wojciechowski等(BioconjugateChem.,2007,18,1625-1636)开发的天冬氨酸起始获得甲酯，并且在这种情况下，转移到谷氨酸。
*化合物3(WO 2013/030193 A1)和4(J.Med.Chem.,200952,4650-4656):
Ollivier等(Tetrahedron Lett.,2010,51,4147-4149)和More等(J.Med.Chem.,2009,52,4650-4656)分别描述了通过叔丁氧羰基用于甲酯1和2的胺基的保护条件。
*化合物5和6(J.Chem.Soc.,PerkinTrans.1,1999,2057-2060):
向置于-15℃和Ar下搅拌的化合物3或4(38.3-40.4mmol)的无水THF(150mL)溶液中依次滴加溶解于无水THF(50mL)中的三乙胺(1.1eq)和氯甲酸乙酯(1.4eq)。在-15℃下搅拌30min后，将25％的氨水溶液(在终体积16mL中为2.5-2.7eq)引入反应介质中，然后置于-15℃下搅拌，然后置于室温下18h。然后减压蒸发THF，并使用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用1N的KHSO4溶液洗涤，然后用10％的NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以分别得到白色粉末状的衍生物5或6(68或77％)。
化合物5：1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)6.59(s,1H)；6.20(s,1H)；5.79-5.76(s,1H)；4.50-4.49(m,1H)；3.65(s,3H)；2.91(dd,J＝16.9Hz and J'＝4.8Hz,1H)；2.66(dd,J＝18.7Hz and J'＝5.7Hz,1H)；1.40(s,9H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)173.2；171.9；155.1；80.1；51.7；49.9；35.6；27.9(3C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]247.1；[M+Na]269.1；[M+MeCN+Na]310.1。
HRMS(ESI+):m/z C10H18N2O5Na[M+Na]计算值＝269.1113；实测值＝269.1103。
*化合物7和8:
向置于-10℃下搅拌的化合物5或6(26.4-28.8mmol)的THF(100mL)溶液中，添加三氟乙酸酐(1.5eq)和三乙胺(3eq)(Synth.Commun.,2009,39,395-406)。然后将反应介质置于相同温度下搅拌2-4h。然后减压蒸发THF，并使用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用1N的KHSO4溶液洗涤，然后用10％的NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在使用CH2Cl2/MeOH98:2混合物的硅胶柱上纯化后，或通过使用CH2Cl2/MeOH 100:0-90:10梯度的正相快速层析纯化后，分别得到黄色固体状的衍生物7或8(60％或74％)。
化合物7：1H NMR(CDCl3,300MHz)δ(ppm):5.61(s,1H)；4.90(m,1H)；3.75(s,3H)；2.86-2.82(m,2H)；1.39(s,9H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz)δ(ppm):159.0；117.9；80.3；52.6；37.4；28.4(3C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]229.2；[M+MeCN+Na]292.1；[2M+Na+H]480.2。
HRMS(ESI+):m/z C10H16N2O4Na[M+Na]计算值＝251.1008；实测值＝251.1000。
化合物8：1H NMR(CDCl3,600MHz):δ(ppm)5.41(s,1H)；4.62(m,1H)；3.67(s,3H)；2.53-2.46(m,2H)；2.13-2.10(m,2H)；1.41(s,9H)。
13C NMR(CDCl3,150MHz):δ(ppm)172.6；154.5；118.8；81.2；52.0；41.6；29.6；28.2(3C)；28.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]243.1；[M+Na]265.1；[M+K]281.0；[M+MeCN+Na]306.1。
HRMS(ESI+):m/z C11H18N2O4Na[M+Na]计算值＝265.1164；实测值＝265.1159。
*化合物9和10：
向置于0℃下搅拌的化合物7或8(15.3-19.8mmol)的MeOH(150mL)溶液中，添加二碳酸二叔丁酯(2eq)和NiCl2.6H2O(0.1eq)。然后在1h内将硼氢化钠(8eq)以小份引入，并将混合物置于室温下搅拌3h(Tetrahedron,2003,59,5417-5423)。在添加二亚乙基三胺(2eq)并且再次搅拌30min-1h后，减压蒸发甲醇，并使用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用饱和NaHCO3溶液洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发。然后将获得的中间体化合物溶解于THF/H2O 1:1混合物(40mL)中，然后将4N的LiOH(4eq)水溶液引入介质中，保持搅拌1h-1h30。减压蒸发THF，然后将混合物加入乙醚或乙酸乙酯中，并用10％的Na2CO3溶液碱化以除去残留在有机相中的甲酯和二碳酸二叔丁酯。然后用6N的HCl溶液酸化水相，然后用乙醚或乙酸乙酯萃取所需产物。用饱和NaCl溶液洗涤后，最后经Na2SO4干燥有机相并减压蒸发，以分别得到白色粉末状的衍生物9或10(50或67％)。
化合物9：1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)8.70-8.61(s,1H)；5.54-5.41(s,1H)；5.15(s,1H)；4.00-3.98(m,1H)；3.37-3.25(m,2H)；2.65-2.59(m,2H)；1.43(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)174.7；174.6；146.2(2C)；79.9；79.8；48.0；43.4；36.4；28.1(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]319.2；[M+Na]341.2；[M+MeCN+Na]382.2。
HRMS(ESI+):m/z C14H26N2O6Na[M+Na]计算值＝341.1689；实测值＝341.1676。
化合物10：1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)8.35-8.28(s,1H)；5.06(s,1H)；4.99-4.96(s,1H)；3.72-3.66(m,1H)；3.18-3.16(m,2H)；2.43-2.37(m,2H)；1.87-1.76(m,2H)；1.43(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)177.4；156.8；156.5；79.6(2C)；51.0；44.6；30.5；28.3(6C),27.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+Na]355.9；[M+MeCN+Na]396.2。
HRMS(ESI+):m/z C15H28N2O6Na[M+Na]计算值＝355.1845；实测值＝355.1855。
b)鸟氨酸和赖氨酸的衍生物(方案2)
Figure BDA0001574366190000301
方案2：开发衍生自鸟氨酸和赖氨酸的合成子
*化合物11和12(现成的)
*化合物13(WO 07/011623 A1)和14(WO00/64865A1):
向置于-10℃下搅拌的化合物11或12(1eq)(13.7-24.5mmol)的THF(50-150mL)溶液中，依次添加N-甲基吗啉(1.1eq)和氯甲酸乙酯(1.1eq)。在-10℃下搅拌20min后，将25％的氨水溶液(在16mL的最终体积中为2.5eq)引入反应介质中，然后将该反应介质储存放置4h。减压蒸发THF，并使用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用1N的KHSO4溶液洗涤，然后用10％的NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在使用AcOEt/环己烷20:80的混合物进行重结晶后，分别得到白色粉末状的衍生物13或14(91或80％)。
*化合物15和16(WO2000/64865A1):
向置于-10℃下搅拌的化合物13或14(8.1-10mmol)的THF(60-70mL)溶液中，添加三氟乙酸酐(1.5eq)和吡啶(3eq)。然后将反应介质置于相同温度下搅拌2h。然后，减压蒸发THF，并使用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用1N的KHSO4溶液洗涤，然后用10％的NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在使用AcOEt/环己烷20:80的混合物进行重结晶后，分别得到白色粉末状的衍生物15或16(99或95％)。
化合物15:1H NMR(CDCl3,600MHz):δ(ppm)7.36-7.29(m,5H)；5.11(s,1H)；5.08(s,2H)；4.96(s,1H)；4.55(m,1H)；3.24-3.23(m,2H)；1.81-1.79(m,2H)；1.68-1.65(m,2H)；1.44(s,9H)。
13C NMR(CDCl3,150MHz):δ(ppm)156.6(2C)；136.4；128.5(2C)；128.2；128.1(2C)；118.7；79.1；66.8；42.0；40.0；29.6；28.2(3C)；26.1。
MS(ESI+):m/z＝[M+Na]370.2；[2M+Na]717.3。
HRMS(ESI+):m/z C18H25N3O4Na[M+Na]计算值＝370.1743；实测值＝370.1749。
*化合物17和18:
向置于0℃下搅拌的化合物15或16(8-10mmol)的甲醇(60-80mL)溶液中，添加二碳酸二叔丁酯(2eq)和NiCl2.6H2O(0.1eq)。然后在30min-1h内将硼氢化钠(7eq)以小份引入，并将混合物置于室温下搅拌1h。在添加二亚乙基三胺(1eq)并且再次搅拌30min-1h后，减压蒸发甲醇，并使用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用饱和NaHCO3溶液洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以分别得到白色粉末状的衍生物17或18(92或89％)。
化合物17:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.34-7.31(m,5H)；5.06(s,2H)；5.06(s,1H)；4.94(s,1H)；4.80-4.77(s,1H)；3.58(m,1H)；3.21-3.12(m,4H)；1.56-1.52(m,2H)；1.45-1.44(m,2H)；1.43(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)172.0；156.9(2C)；136.9；128.8(2C)；127.4(3C)；79.7(2C)；67.0；51.5；44.8；41.1；30.4；28.7(6C)；26.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]452.1；[M+Na]474.0.
HRMS(ESI+):m/z C23H37N3O6Na[M+Na]计算值＝474.2580；实测值＝474.2560。
化合物18:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.34-7.29(m,5H)；5.07(s,2H)；4.98-4.91(s,2H)；4.72(s,1H)；3.56(m,1H)；3.17-3.13(m,4H)；1.46-1.41(m,6H)；1.41(m,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)176.3；155.8(2C)；136.0；127.8(2C)；127.4(3C)；78.7(2C)；65.9；50.5；43.9；39.8；31.6；29.1；27.7(6C)；22.1。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]466.3；[M+Na]488.3。
HRMS(ESI+):m/z C24H39N3O6Na[M+Na]计算值＝488.2737；实测值＝488.2730。
*化合物19和20:
向化合物17或18(1.1-5.7mmol)的甲醇(10-40mL)溶液中，添加Pd/C(10％m/m)。将反应介质置于真空下并在室温下搅拌30min，然后在H2流中保持6h。然后用纸过滤，并减压蒸发甲醇，以分别得到白色粉末状的衍生物19或20(92或100％)。
化合物19:1H NMR(CDCl3,600MHz):δ(ppm)4.98(s,1H)；4.96(s,1H)；3.56(m,1H)；3.18-3.12(m,2H)；2.74(s,2H)；2.74(m,2H)；1.48-1.43(m,4H)；1.41(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,150MHz):δ(ppm)156.7；156.3；79.3(2C)；51.2；44.7；41.6；30.1；29.3；28.4(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]318.2；[M+Na]340.2。
HRMS(ESI+):m/z C15H31N3O4[M+H]计算值＝318.2393；实测值＝318.2379。
化合物20:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)4.99(s,2H)；4.76-4.73(s,2H)；3.55(m,1H)；3.10(m,2H)；2.61-2.59(m,2H)；1.57(m,2H)；1.37(m,22H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)170.8；167.9；78.9(2C)；51.0；44.4；41.5；33.1；32.4；28.0(6C)；22.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]332.2；[M+Na]354.2。
HRMS(ESI+):m/z C16H33N3O4[M+H]计算值＝332.2549；实测值＝332.2564。
2-偶联Ra或NR'aRb基团
a)假肽偶联
α-方法A(方案3)
Figure BDA0001574366190000331
方案3：假肽偶联R'a或NR'aRb基团(方法A)
*第一步:向带有酸性官能团(0.4-3.0mmol)的衍生物10、33a-b、41a-b的二氯甲烷或1,4-二噁烷(10-25mL)溶液中，依次添加N-羟基琥珀酰亚胺(1.1-1.5eq)和DCC(1-1.2eq)。将反应介质保持在室温下搅拌24h，然后真空过滤。然后将滤液减压蒸发，得到活化的酸中间体。
*第二步:将胺衍生物20、26、27、35或42(1-1.7eq)溶于二氯甲烷(8-30mL)中，并设定为在室温下与三乙胺(0-4eq)反应30min。然后将活化的酸中间体(1eq)引入反应介质中，然后置于室温下搅拌18h。然后将有机相用1N的HCl溶液洗涤，然后用NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在硅胶柱上纯化(CH2Cl2/MeOH 98:2-95:5)后，得到化合物21a-b、22a-b、23c-f或23j(25-82％)(表2)。
β-方法B(方案4)
Figure BDA0001574366190000341
方案4：假肽偶联R'a基团(方法B)
向置于0℃下搅拌的带有酸性官能团的衍生物33b、41a-b(1-6.5mmol)的二氯甲烷、DMF或THF(25-100mL)溶液中，依次添加1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.2eq)、1-羟基苯并三唑一水合物(1.1-1.2eq)。在0℃下搅拌30min后，将胺衍生物19、20或27(1eq)与三乙胺(1.2eq)一起引入反应介质中，然后在室温下搅拌4-18h。将DMF或THF蒸发后，将残余物溶解于二氯甲烷中，将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在硅胶柱(AcOEt/环己烷60:40或AcOEt/MeOH 80:20)上纯化后，得到化合物23a-b、23g-i或23k(51-86％)(表2)。
表1:化合物21-23
Figure BDA0001574366190000351
Figure BDA0001574366190000361
化合物21a:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.63(d,J＝15.0Hz,1H)；7.09(dd,J1＝8.4Hz,J2＝1.8Hz,1H)；6.99(d,J＝1.8Hz,1H)；6.91(d,J＝8.1Hz,1H)；6.67(d,J＝15.3Hz,1H)；6.08(s,1H)；4.93(s,2H)；3.92(s,3H)；3.73-3.50(m,9H)；3.20(t,J＝5.4Hz,2H)；2.45-2.39(m,2H)；1.86-1.80(m,2H)；1.42(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)170.8；170.5；165.5(2C)；147.2；146.4；143.4；127.1；121.7；114.4；113.3；109.5；77.5(2C)；55.6；51.0；44.8；44.2(2C)；41.3(2C)；29.1；27.9(6C)；27.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]577.3；[M+Na]599.3。
HRMS(ESI+):m/z C29H44N4O8[M+Na]计算值＝599.3057；实测值＝599.3043。
化合物21b:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.52(d,J＝15.6Hz,1H)；7.02(dd,J1＝8.1Hz,J2＝1.8Hz,1H)；6.96(d,J＝1.8Hz,1H)；6.87(d,J＝8.1Hz,1H)；6.31(d,J＝15.6Hz,1H)；6.28(s,1H)；5.01-4.99(s,1H)；4.84-4.82(s,1H)；3.86(s,3H)；3.59-3.58(m,1H)；3.34-3.33(m,2H)；3.16(m,2H)；1.57-1.55(m,2H)；1.42(m,22H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)167.4(2C)；157.3；148.3；147.8；141.6；128.4；122.9；119.5；115.8；110.8；80.4(2C)；56.8；52.2；45.3；39.9；33.1；30.6；29.3(6C)；23.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]508.2；[M+Na]530.2。
HRMS(ESI+):m/z C26H41N3O7Na[M+Na]计算值＝530.2842；实测值＝530.2856。
化合物22a:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.40-7.33(m,12H)；7.28-7.26(m,3H)；6.65(s,2H)；5.12(s,4H)；5.10(s,2H)；3.65-3.19(m,11H)；2.42-2.39(m,2H)；1.90-1.84(m,2H)；1.70-1.64(m,2H)；1.43(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)171.0；169.9；156.5；156.2；152.5(2C)；139.7；137.3；136.5(2C)；129.9；128.4(6C)；128.0；127.8(2C)；127.1(6C)；107.1(2C)；79.2(2C)；75.0；71.0(2C)；51.2；45.0(2C)；44.4；41.5(2C)；33.7；29.3；28.2(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]823.3；[M+Na]845.3。
HRMS(ESI+):m/z C47H58N4O9Na[M+Na]计算值＝845.4101；实测值＝845.4138。
化合物22b:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.38-7.28(m,12H)；7.28-7.26(m,3H)；7.17(s,2H)；6.62(s,1H)；5.13(s,4H)；5.09(s,2H)；4.97(s,1H)；4.78-4.75(s,1H)；3.63-3.62(m,1H)；3.40(m,2H)；3.20-3.18(m,2H)；1.62(m,2H)；1.46-1.44(m,22H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)167.2；156.2(2C)；152.8(2C)；141.1；137.6；136.9(2C)；130.3；128.6(6C)；128.3；128.1(2C)；127.7(6C)；107.0(2C)；79.6(2C)；75.3(2C)；71.5；51.4；44.2；39.5；32.1；29.2；28.5(6C)；22.8。
MS(ESI+):m/z＝[M-3Bn+3H+Na]506.3；[M+H+Na]777.2。
HRMS(ESI+):m/z C44H55N3O8Na[M+Na]计算值＝776.3887；实测值＝776.3905。
化合物23a:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.38-7.28(m,5H)；7.22-7.19(s,1H)；7.08(dd,J1＝6.9Hz,J2＝1.5Hz,1H)；6.70(dd,J1＝7.5Hz,J2＝1.2Hz,1H)；6.04(t,J＝7.2Hz,1H)；5.07-5.01(s,2H)；4.93-4.90(s,1H)；4.28-4.18(m,2H)；3.51-3.47(m,1H)；3.05-3.03(m,4H)；2.63(t,J＝6.0Hz,2H)；2.27-1.40(s,9H)；1.38(s,9H)；1.32-1.17(m,4H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)169.7(2C)；157.7；156.1；148.1；135.4；130.0；128.1(2C)；127.7；127.2(2C)；115.1；104.4；78.7(2C)；70.3；50.5；46.5；44.6；38.6；34.5；29.4；27.9(6C)；25.0。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]573.2；[M+Na]595.1。
HRMS(ESI+):m/z C30H44N4O7Na[M+Na]计算值＝595.3108；实测值＝595.3098。
化合物23b:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.36-7.25(m,5H)；7.06(dd,J1＝6.9Hz,J2＝1.5Hz,1H)；6.99(s,1H)；6.66(dd,J1＝7.5Hz,J2＝1.5Hz,1H)；6.00(t,J＝7.2Hz,1H)；5.00(s,1H)；5.00(s,2H)；4.83-4.80(s,1H)；4.21(t,J＝6.3Hz,2H)；3.50-3.48(m,1H)；3.07-3.00(m,4H)；2.65(t,J＝6.0Hz,2H)；1.38(s,18H)；1.33-1.23(m,6H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)170.1(2C)；158.1(2C)；148.5；135.9；130.3；128.5(2C)；128.1；127.4(2C)；115.6；104.7；79.2(2C)；70.6；51.1；47.0；44.6；38.8；35.0；32.0；28.9；28.3(6C)；22.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]587.5；[M+Na]609.3。
HRMS(ESI+):m/z C31H46N4O7Na[M+Na]计算值＝609.3264；实测值＝609.3254。
化合物23c:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.40(s,1H)；7.38-7.25(m,5H)；6.95(d,J＝6.0Hz,1H)；6.67(d,J＝6.8Hz,1H)；6.10(t,J＝7.2Hz,1H)；5.40-5.23(s,2H)；5.03(s,2H)；4.00(t,J＝5.1Hz,2H)；3.61-3.59(m,1H)；3.11(m,4H)；2.33-2.26(m,2H)；1.87-1.61(m,4H)；1.35(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)172.3(2C)；156.4；156.2；148.2；135.6；128.5；128.2(2C)；128.0；127.8(2C)；115.5；105.8；79.0(2C)；70.4；50.9；46.8；44.2；35.7；32.6；30.3；28.8；28.0(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]573.5；[M+Na]595.4。
HRMS(ESI+):m/z C30H44N4O7Na[M+Na]计算值＝595.3108；实测值＝595.3078。
化合物23d:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.32-7.18(m,5H)；7.01(d,J＝6.1Hz,1H)；6.56(d,J＝5.4Hz,1H)；5.92(t,J＝6.9Hz,1H)；5.62-5.60(s,1H)；5.03-4.97(s,1H)；4.97(s,2H)；4.14(t,J＝6.3Hz,2H)；3.81-3.79(m,1H)；3.54-3.32(m,8H)；3.23-3.13(m,2H)；2.79(t,J＝6.0Hz,2H)；2.57-2.38(m,2H)；1.30(s,18H).13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)168.7；168.6；157.8；156.2；155.2；142.0；135.6；129.8；128.1(2C)；127.5；126.8(2C)；115.1；104.1,79.1(2C)；70.2；48.6；46.7；44.8(2C)；43.1；41.0(2C)；34.7；31.2；27.9(6C).MS(ESI+):m/z＝[M+H]642.3；[M+Na]664.3。
HRMS(ESI+):m/z C33H47N5O8Na[M+Na]计算值＝664.3322；实测值＝664.3322。
化合物23e:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.38(d,J＝7.1Hz,2H)；7.32(t,J＝7.5Hz,2H)；7.26(t,J＝7.8Hz,1H)；7.27(m,1H)；6.65(d,J＝7.5Hz,1H)；6.05(t,J＝7.0Hz,1H)；5.06(s,2H)；5.04-5.02(s,2H)；4.76-4.69(m,2H)；3.75-3.41(m,9H)；3.17-3.14(m,2H)；2.40-2.34(m,2H)；1.85-1.63(m,2H)；1.39(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)171.3；165.6(2C)；158.0；156.1；148.3；135.9；129.6；128.5(2C)；127.9；127.2(2C)；115.9；104.8；79.3(2C)；70.7；51.4；49.2；45.2；44.8；44.4；42.0；41.4；29.7；28.3(6C)；27.8。
MS(ESI+):m/z＝[M-Boc+2H]542.3；[M+H]642.3；[M+Na]664.3。
HRMS(ESI+):m/z C33H47N5O8Na[M+Na]计算值＝664.3322；实测值＝664.3324。
化合物23f:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.42(d,J＝6.6Hz,2H)；7.37-7.28(m,3H)；7.11(d,J＝5.9Hz,1H)；6.65(d,J＝6.2Hz,1H)；6.02(t,J＝7.2Hz,1H)；5.08(s,2H)；4.94-4.93(s,2H)；4.24(t,J＝6.3Hz,2H)；3.54-3.32(m,9H)；3.17(t,J＝5.4Hz,2H)；2.89(t,J＝6.3Hz,2H)；2.41-2.34(m,2H)；1.94-1.82(m,2H)；1.40(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)171.4(2C)；158.6；156.7；149.1；140.1；138.2；130.7；128.9(2C)；128.4；127.7(2C)；115.9；104.9；87.1；87.0；71.1；51.8；47.6；45.9(2C)；45.0；41.9(2C)；32.0；30.1；28.7(6C)；28.3。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]656.3；[M+Na]678.3。
HRMS(ESI+):m/z C34H49N5O8Na[M+Na]计算值＝678.3479；实测值＝678.3474。
化合物23g:1H NMR(CD3OD,300MHz):δ(ppm)7.61(d,J＝7.5Hz,1H)；7.41-7.31(m,5H)；6.46(d,J＝7.5Hz,1H)；5.05(s,2H)；4.68(s,2H)；3.58-3.54(m,1H)；3.23-3.18(m,2H)；3.12-2.97(m,2H)；2.07(s,3H)；1.58-1.30(m,22H)。
13C NMR(CD3OD,75MHz):δ(ppm)175.6；168.5；163.7；158.7；147.3；145.9；143.0；138.8；130.4(2C)；129.8(2C)；129.6；117.4；80.4；80.3；75.0；57.2；52.2；45.8；40.9；31.2；29.1(6C)；27.2；13.3。
MS(ESI+):m/z＝[M+Na]595.3。
HRMS(ESI+):m/z C30H44N4O7Na[M+Na]计算值＝595.3108；实测值＝595.3121。
化合物23h:1H NMR(CD3OD,300MHz):δ(ppm)7.62(d,J＝7.2Hz,1H)；7.42-7.32(m,5H)；6.47(d,J＝7.2Hz,1H)；5.06(s,2H)；4.68(s,2H)；3.56-3.54(m,1H)；3.23-3.18(m,2H)；3.14-2.98(m,2H)；2.08(s,3H)；1.49-1.35(m,24H)。
13C NMR(CD3OD,75MHz):δ(ppm)175.3；168.2；161.1；158.7；147.0；145.6；142.7；138.5；130.2(2C)；129.5(2C)；129.3；117.1；80.1；80.0；74.7；56.9；52.1；45.5；40.6；33.1；30.1；28.9(6C)；24.4；13.0。
MS(ESI+):m/z＝[M+Na]609.3。
HRMS(ESI+):m/z C31H46N4O7Na[M+Na]计算值＝609.3264；实测值＝609.3271。
化合物23i:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.70(s,1H)；7.37-7.30(m,6H)；6.28(d,J＝5.6Hz,1H)；5.40(s,1H)；5.18(s,1H)；5.06(s,2H)；4.10-4.06(m,2H)；3.51-3.49(m,1H)；3.24-3.04(m,4H)；2.65-2.50(m,4H)；2.12(s,3H)；1.44-1.37(m,4H)；1.37(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)173.6；169.1；157.0；156.4；145.8；141.6；139.2；137.2；128.9；128.4(2C)；128.3(2C)；116.9；79.2(2C)；72.9；52.3；50.1；44.4；39.1；36.2；35.0；31.9；28.4(6C)；22.7；12.4。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]601.3；[M+Na]623.3。
HRMS(ESI+):m/z C32H49N4O7[M+H]计算值＝601.3601；实测值＝601.3621。
化合物23j:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.58-7.55(s,1H)；7.37-7.24(m,6H)；6.32(d,J＝5.6Hz,1H)；5.47-5.45(s,2H)；5.08(s,2H)；3.80-3.77(m,2H)；3.54-3.53(m,1H)；3.24-3.10(m,4H)；2.22(t,J＝4.9Hz,2H)；2.03(s,3H)；1.93-1.70(m,4H)；1.36(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)173.8；173.3；156.9(2C)；146.3；141.4；139.0；137.4；129.0(2C)；128.4(2C)；128.2；117.1；79.6(2C)；73.1；51.9；51.3；44.4；36.2；32.9；30.7；29.2；28.4(6C),12.4。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]587.3；[M+Na]609.3。
HRMS(ESI+):m/z C31H46N4O7Na[M+Na]计算值＝609.3264；实测值＝609.3265。
化合物23k:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.35-7.28(m,6H)；6.42(d,J＝7.2Hz,1H)；5.17(s,2H)；5.03(s,2H)；4.83(m,2H)；3.60-3.42(m,9H)；3.19(m,2H)；2.43-2.37(m,2H)；2.04(s,3H)；1.88-1.67(m,2H)；1.43(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)173.1；171.4；164.5；157.0；156.3；145.6；144.1；140.8；137.6；129.0(2C)；128.7(2C)；128.4；116.3；79.6(2C)；73.8；55.3；51.6；45.1；44.7；42.5；41.7；41.4；29.7；28.6(6C)；28.0；13.0。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]656.4；[M+Na]678.3。
HRMS(ESI+):m/z C34H49N5O8Na[M+Na]计算值＝678.3479；实测值＝678.3464。
γ-将来自天冬氨酸和谷氨酸的合成子与哌嗪偶联(方案5)
Figure BDA0001574366190000421
方案5：将天冬氨酸和谷氨酸的衍生物与哌嗪偶联
通过采用Dener等(WO 1998/04537A1)开发的方法，通过4-苄氧基羰基哌嗪-1-甲酸叔丁酯合成苄基哌嗪-1-羧酸酯。由此，哌嗪-1-甲酸叔丁酯根据Moussa等(J.Med.Chem.,2010,53,6228-6239)描述的过程获得。然后，在0℃下，将其(18.8mmol)设定为与二氯甲烷(50mL)中的三乙胺(1.2eq)反应10min。然后将氯甲酸苄酯(1.2eq)的二氯甲烷(30mL)溶液引入介质中，置于室温下搅拌18h。然后将二氯甲烷减压蒸发，并将残余物加入乙酸乙酯中。最后将有机相用1M的KHSO4和5％的NaHCO3溶液洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在硅胶柱(CH2Cl2/MeOH99:1)上纯化后，得到白色粉末状的4-苄氧基羰基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(87％)。在存在现成的4N HCl的1,4-二噁烷(20eq)溶液的情况下，将该中间体(10.9mmol)最终溶于1,4-二噁烷(15mL)中。然后将反应介质置于室温下搅拌45min。减压蒸发1,4-二噁烷，并将残余物在乙醚中粉碎，以在真空过滤后，得到白色粉末状的苄基哌嗪-1-羧酸酯(92％)。
*化合物24和25:
*第一步:向化合物9或10(3.1-4.5mmol)的二氯甲烷(25-30mL)溶液中，依次添加N-羟基琥珀酰亚胺(1.2-1.5eq)和DCC(1.1-1.2eq)。将反应介质保持在室温下搅拌1h30-24h，然后真空过滤。然后将滤液减压蒸发，得到活化的酸中间体。
*第二步:将苄基哌嗪-1-羧酸酯(1.2eq)溶于二氯甲烷(40mL)中，并在室温下与三乙胺(3eq)反应30min。然后将活化的酸中间体(1eq)引入反应介质中，然后置于室温下搅拌15-24h。然后将有机相用1N的HCl溶液洗涤，然后用NaHCO3溶液和饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在硅胶柱上纯化(CH2Cl2/MeOH 98:2)后，得到白色粉末状的化合物24或25(77或97％)。
化合物24:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.33(m,5H)；5.69(s,1H)；5.12(s,2H)；5.03(s,1H)；3.89(m,1H)；3.62-3.45(m,10H)；2.65-2.41(m,2H)；1.40(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)173.0；163.7；161.1；147.7；132.4；128.9(2C)；128.5；128.3(2C)；81.2(2C)；67.8；49.7；45.9；44.1(2C)；41.8(2C)；35.3；28.7(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]521.3；[M+Na]543.2。
HRMS(ESI+):m/z C26H40N4O7Na[M+Na]计算值＝543.2795；实测值＝543.2794。
化合物25:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.36-7.32(m,5H)；5.13(s,2H)；4.92(s,2H)；3.60-3.44(m,9H)；3.20-3.16(m,2H)；2.41-2.38(m,2H)；1.83-1.81(m,2H)；1.40(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)170.8；164.1；163.8；154.7；136.0；128.2(2C)；127.8；127.6(2C)；79.0(2C)；67.1；51.1；44.8(2C)；44.3；43.4；41.1(2C)；29.2；28.0(6C)；27.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]535.3；[M+Na]557.3。
HRMS(ESI+):m/z C27H42N4O7Na[M+Na]计算值＝557.2951；实测值＝557.2945。
*化合物26和27:
向化合物24或25(0.7-2.7mmol)的甲醇(8-30mL)溶液中，添加Pd/C(10％m/m)。将反应介质置于真空下并在室温下搅拌30min，然后在H2流中保持6h。然后用纸过滤，并减压蒸发甲醇，以分别得到白色粉末状的衍生物26或27(100或96％)。
化合物26:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.33(s,1H)；5.69-5.66(s,1H)；5.12(s,1H)；3.89-3.88(m,1H)；3.66-3.23(m,8H)；2.93-2.83(m,2H)；2.67-2.43(m,2H)；1.41(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)167.1；157.5；155.4；79.1(2C)；48.6；45.0；44.6；43.1；40.9；34.8；27.9(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]387.3；[M+Na]409.3。
HRMS(ESI+):m/z C18H34N4O5Na[M+Na]计算值＝409.2427；实测值＝409.2418。
化合物27:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)5.13-5.09(s,2H)；3.56-3.52(m,3H)；3.39-3.36(m,2H)；3.15-3.12(m,2H)；2.80-2.76(m,4H)；2.37-2.31(m,2H)；1.81-1.63(m,2H)；1.37(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)170.8；156.5；156.2；80.3；79.1；51.3；46.0；45.3；44.5；42.6；41.5；29.4；28.2(6C)；27.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]401.4；[M+Na]423.3。
HRMS(ESI+):m/z C19H36N4O5Na[M+Na]计算值＝423.2583；实测值＝423.2573。
b)带有衍生自阿魏酸或没食子酸的基团的化合物
α-制备来自没食子酸的合成子R'a-OH
文献(Carbohydr.Res.,2007,342,1510-1513)描述了来自没食子酸的酚基的三重O-苄基化。
β-来自没食子酸的R'a基团的脱苄基化(方案6)
Figure BDA0001574366190000451
方案6：来自没食子酸的R'a基团的脱苄基化
向化合物22a或22b(0.5mmol)的甲醇(20mL)溶液中，添加Pd/C(10％m/m)。将反应介质置于真空下并在室温下搅拌30min，然后在H2流中保持6h。然后用纸过滤，并减压蒸发甲醇，以分别得到白色粉末状的或橙色油状的衍生物28a或28b(与起始产物相反，溶于甲醇中)(99或100％)。
化合物28a:1H NMR(CD3OD,400MHz):δ(ppm)6.45(s,2H)；3.59-3.43(m,8H)；3.32-3.31(m,1H)；3.06-3.01(m,2H)；2.47-2.45(m,2H)；2.01-1.70(m,2H)；1.43(s,18H)。
13C NMR(CD3OD,100MHz):δ(ppm)172.4；171.9；157.3(2C)；157.0；145.8(2C)；135.3；125.0；106.3(2C)；78.7(2C)；50.5；45.1(2C)；43.8；42.3(2C)；33.5；29.1；27.4(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]553.1；[M+Na]575.1。
HRMS(ESI+):m/z C26H40N4O9Na[M+Na]计算值＝575.2693；实测值＝575.2719。
化合物28b:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.25(s,3H)；6.84(s,2H)；5.43(s,1H)；5.24-5.21(s,2H)；3.15-3.04(m,5H)；1.41-1.35(m,22H)；1.20-1.16(m,2H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)168.4；156.7；156.4；144.3(2C)；135.7；124.6；106.9(2C)；79.1(2C)；50.7；44.2；39.5；31.9；29.2；27.9(6C)；22.6。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]484.2；[M+Na]506.3。
HRMS(ESI+):m/z C23H37N3O8Na[M+Na]计算值＝506.2478；实测值＝506.2501。
γ-最终脱保护二胺基团(方案7)
Figure BDA0001574366190000461
方案7：最终脱保护二胺基团
在存在现成的4N HCl的1,4-二噁烷(20eq)溶液的情况下，将化合物21a、21b、28a或28b(0.3-0.4mmol)溶于1,4-二噁烷(7-12mL)中。然后将反应介质置于室温下搅拌45min-6h。减压蒸发1,4-二噁烷，并且将残余物在乙醚中粉碎。真空过滤后(高度吸湿的产物)，将获得的沉淀物冻干以分别得到黄色或米色粉末状的衍生物29a、29b、30a或30b(75、66、100或57％)。
化合物29a:1H NMR(d6-DMSO,300MHz):δ(ppm)9.52(s,1H)；8.57(s,2H)；8.46(s,2H)；7.44(d,J＝15.0Hz,1H)；7.33(s,1H)；7.10(m,2H)；6.79(d,J＝8.4Hz,1H)；3.83(s,3H)；3.71-3.45(m,9H)；3.12(m,2H)；2.60-2.58(m,2H)；1.89(m,2H)。
13C NMR(d6-DMSO,75MHz):δ(ppm)169.7；165.0；162.9；148.5；142.4；126.4；122.5；115.3；114.2；111.2；55.7；48.7；39.7(5C)；28.1；25.3。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]377.2。
HRMS(ESI+):m/z C19H29N4O4[M+H]计算值＝377.2189；实测值＝377.2198。
化合物29b:1H NMR(d6-DMSO,300MHz):δ(ppm)8.49(s,4H)；8.11-8.09(s,1H)；7.30(d,J＝15.9Hz,1H)；7.11(d,J＝1.8Hz,1H)；6.97(dd,J1＝8.4Hz and J2＝1.8Hz,1H)；6.79(d,J＝8.1Hz,1H)；6.49(d,J＝15.9Hz,1H)；3.78(s,3H)；3.42-3.39(m,1H)；3.17-3.05(m,4H)；1.64-1.62(m,2H)；1.46-1.40(m,4H)。
13C NMR(d6-DMSO,75MHz):δ(ppm)165.3；148.2；147.7；138.7；126.3；121.4；119.0；115.6；110.7；55.4；48.9；38.1(2C)；29.5；28.6；21.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]308.1。
HRMS(ESI+):m/z C16H26N3O3[M+H]计算值＝308.1974；实测值＝308.1986。
化合物30a:1H NMR(d6-DMSO,300MHz):δ(ppm)8.65(s,2H)；8.55(s,2H)；6.37(s,2H)；3.49-3.48(m,9H)；3.13(m,2H)；2.59(t,J＝4.8Hz,2H)；1.90-1.88(m,2H)。
13C NMR(d6-DMSO,75MHz):δ(ppm)169.5；169.3；145.3(2C)；134.5；124.9；106.3(2C)；48.5；40.0(2C)；39.7；38.3；27.8；25.0。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]352.9。
HRMS(ESI+):m/z C16H25N4O5[M+H]计算值＝353.1825；实测值＝353.1813。
化合物30b:1H NMR(d6-DMSO,300MHz):δ(ppm)8.47(s,4H)；8.11(s,1H)；6.82(s,2H)；3.24-3.07(m,5H)；1.65-1.35(m,6H)。
13C NMR(d6-DMSO,75MHz):δ(ppm)166.5；145.4；136.1；125.0；106.8(2C)；49.0；40.4(2C)；29.6；28.8；21.8。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]284.2。
HRMS(ESI+):m/z C13H22N3O4[M+H]计算值＝284.1610；实测值＝284.1612。
c)带有羟基吡啶酮基团的化合物22
α-制备合成子R'a-OH和R'a-NHRb
*制备3-苄氧基吡啶-2-酮类型的合成子R'a-OH和R'a-NHRb(方案7):
Figure BDA0001574366190000481
方案7：制备3-苄氧基吡啶-2-酮类型的合成子R'a-OH和R'a-NHRb
*化合物31(Synthesis,2011,57-64):
向2,3-二羟基吡啶(135mmol)的乙腈(120mL)溶液中添加氟化铯(0.1eq)和丙烯腈(3eq)(Tetrahedron Lett.,2002,43,7379-7383；Synthesis,2011,57-64)。将反应介质加热回流16h。然后减压蒸发乙腈，用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用10％的Na2CO3溶液洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在AcOEt/环己烷50:50的混合物中重结晶后，得到白色粉末状的衍生物31(93％)。
*化合物32(Synthesis,2011,57-64):
根据Arumugam等(Synthesis,2011,57-64)描述的合成法制备衍生物32。
*化合物33a(J.Med.Chem.,1990,33,1749-1755,Molecules,2015,20,19393-19405):
第一步:将2,3-二羟基吡啶(50mmol)添加到溴乙酸乙酯(5eq)中。然后，将反应介质在Ar下加热回流48h，最后在乙酸乙酯中沉淀并真空过滤后获得所需产物。
第二步:向该中间体(18mmol)的MeOH/H2O 9:1混合物(150mL)的溶液中添加10.5NNaOH溶液(2eq)。然后将反应介质加热回流30min。然后在室温下30min内逐滴引入苄基氯(2eq)，并将混合物再次加热回流18h。真空过滤并减压蒸发甲醇后，用二氯甲烷萃取水相，然后用6N的HCl酸化。最后用二氯甲烷萃取所需产物。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥并减压蒸发，以得到白色粉末状的衍生物33a(36％)。
ο化合物33b:
向化合物32(1eq)的水溶液(20mL/mmol)中添加氢氧化钠(12.5eq)。然后将反应介质加热回流1h，然后用乙酸乙酯萃取以除去剩余的原料。然后用6N的HCl溶液酸化水相，用乙酸乙酯萃取所需化合物。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以得到淡黄色粉末状的衍生物33(65％)。
化合物33b:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.43-7.32(m,5H)；7.25(dd,J1＝6.9Hzand J2＝1.5Hz,1H)；6.87(dd,J1＝7.3Hz and J2＝1.8Hz,1H)；6.09(t,J＝7.2Hz,1H)；4.99(s,2H)；4.07(t,J＝6.9Hz,2H)；2.65(t,J＝6.9Hz,2H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)171.9；156.5；147.5；136.2；130.1；128.0(2C)；127.5；127.4(2C)；115.1；103.4；69.4；45.0；32.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]273.8。
HRMS(ESI+):m/z C15H15NO4Na[M+Na]计算值＝296.0899；实测值＝296.0893。
*化合物34:
向置于0℃下搅拌的化合物32(7.9mmol)的甲醇(80mL)溶液中，添加二碳酸二叔丁酯(2eq)和NiCl2.6H2O(0.1eq)。然后在30min内将硼氢化钠(7eq)以小份引入，并将混合物置于室温下搅拌1h。在添加二亚乙基三胺(1eq)并再次搅拌1h后，减压蒸发甲醇，并使用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用饱和NaHCO3溶液洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以得到稍白的粉末状的衍生物34(84％)。
化合物34:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.33(d,J＝7.6Hz,2H)；7.25(t,J＝6.8Hz,2H)；7.19(t,J＝6.8Hz,1H)；6.80(d,J＝6.3Hz,1H)；6.55(d,J＝7.4Hz,1H)；5.96(t,J＝7.3Hz,1H)；5.49(s,1H)；5.01(s,2H)；3.95(t,J＝6.3Hz,2H)；3.01-2.96(m,2H)；1.81-1.75(m,2H)；1.33(s,9H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)158.3；155.9；148.5；135.8；128.4；128.3(2C)；127.8；127.1(2C)；115.1；105.2；78.6；70.5；46.0；36.3；29.7；28.3(3C)。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]358.9；[M+Na]380.9。
HRMS(ESI+):m/z C20H26N2O4Na[M+Na]计算值＝381.1790；实测值＝381.1782。
*化合物35:
在现成的4N HCl的1,4-二噁烷(20eq)溶液存在的情况下，将化合物34(2.4mmol)溶于1,4-二噁烷(10mL)中。然后将反应介质置于室温下搅拌18h。减压蒸发1,4-二噁烷，并且将残余物在乙醚中粉碎，以在真空过滤后，得到米色粉末状的衍生物35(100％)。
化合物35:1H NMR(d6-DMSO,300MHz):δ(ppm)8.06-8.05(s,2H)；7.45-7.33(m,6H)；6.93(d,J＝7.5Hz,1H)；6.18(t,J＝7.2Hz,1H)；5.01(s,2H)；4.00(t,J＝6.9Hz,2H)；2.75(t,J＝7.2Hz,2H)；1.98-1.93(m,2H)。
13C NMR(d6-DMSO,75MHz):δ(ppm)175.1；147.6；136.1；129.5；128.0(2C)；127.5(3C)；115.3；104.1；69.4；45.4；35.9；26.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]259.1；[M+H+MeCN]300.2。
HRMS(ESI+):m/z C15H19N2O2[M+H]计算值＝259.1436；实测值＝259.1447。
ο化合物39:
向化合物34(1.5mmol)的DMF(3mL)溶液中添加氢化钠(1.4eq)。在室温下搅拌10min后，引入甲基碘(1.2eq)，并将混合物置于室温下搅拌18h(Org.Lett.,2014,16,3196-3199)。减压蒸发DMF后，将残余物溶解于乙酸乙酯中。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在硅胶柱(AcOEt/MeOH 50:50)上纯化后，得到黄色油状的衍生物39(91％)。
化合物39:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.40(d,J＝8.0Hz,2H)；7.31(t,J＝8.5Hz,2H)；7.26(t,J＝7.2Hz,1H)；6.93-6.86(m,1H)；6.61(d,J1＝7.4Hz and J2＝1.6Hz,1H)；5.99(t,J＝7.1Hz,1H)；5.07(s,2H)；3.92(t,J＝7.2Hz,2H)；3.27(m,2H)；2.82(s,3H)；1.96(t,J＝7.2Hz,2H)；1.41(s,9H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)158.2；149.0；136.4；128.6(2C)；128.0；127.4(2C)；115.5；104.8；79.6；70.8；47.8；45.8；34.1；28.5(3C)；27.1。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]373.2；[M+Na]395.2。
HRMS(ESI+):m/z C21H29N2O4[M+H]计算值＝373.2127；实测值＝373.2137。
*制备3-苄氧基-2-甲基吡啶-4-酮类型的合成子R'a-OH和R'a-NHRb(方案8):
Figure BDA0001574366190000521
方案8：制备3-苄氧基-2-甲基吡啶-4-酮类型的合成子R'a-OH和R'a-NHRb
ο化合物40(J.Med.Chem.,1998,41,3347-3359,J.Inorg.Biochem.,2000,78,303-311):
向麦芽酚(79.3mmol)的甲醇(80mL)溶液中添加10.5N的NaOH(1.1eq)溶液。然后将反应介质加热回流30min。然后在室温下、30min内滴加引入苄基氯(1.2eq)，并将混合物再次加热回流18h。真空过滤后，减压蒸发甲醇，然后将残余物加入水中，并用二氯甲烷萃取所需产物。将有机相用5％的NaOH溶液洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以得到黄色油状的衍生物40(88％)。
ο化合物41a(J.Heterocyclic Chem.,1994,31,947-56)和41b(J.Inorg.Biochem.,2000,78,303-311):
向NaOH(3eq)的EtOH/H2O 1:1混合物(100mL)的溶液中，添加化合物40(18.5mmol)和甘氨酸钠或β-丙氨酸钠(2eq)(Bioconjugate Chem.2005,16,1597-1609)。然后将反应介质加热回流18h。真空蒸发乙醇，将残余物加入水中并用乙酸乙酯萃取，以除去剩余的原料。然后将水相减压浓缩并用6N的HCl溶液酸化，在沉淀、真空过滤并水洗后，最后得到稍白的粉末状的衍生物41a或41b(48或45％)。
ο化合物42(Dalton Trans.,2004,3772-3781):
向NaOH(0.5eq)的EtOH/H2O 1:1混合物(20mL)的溶液中，添加化合物40(18.5mmol)和1,3-丙二胺(1.1eq)。然后将反应介质加热回流18h。真空蒸发乙醇，水相用6N的HCl酸化并用乙酸乙酯萃取，以除去剩余的原料。然后将水相用6N的NaOH溶液中和并用乙酸乙酯萃取所需产物。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发。在现成的4N HCl的1,4-二噁烷(5eq)溶液存在的情况下，在室温下将1,4-二噁烷(20mL)中的中间体化合物搅拌2h后，减压蒸发1,4-二噁烷，将得到的残余物在乙醚中粉碎，以得到白色粉末状的衍生物42(48％)。
β-在“连接物”上进行各种药物调制
*还原化合物23f的羰基(方案9):
Figure BDA0001574366190000541
方案9:还原化合物23f的羰基
向化合物23f(1mmol)的THF(100mL)溶液中，滴加硼烷/二甲基硫2M复合物的THF溶液(5eq)(J.Med.Chem.,2005,48,3891-3902)。然后将反应介质加热回流2h。冷却后，用MeOH清除硼烷，将混合物再次加热回流18h。真空蒸发MeOH，将残余物加入EtOH/NaOH 1N 5:1混合物中，回流2h。蒸发乙醇后，最后用乙酸乙酯萃取水相。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥并减压蒸发，以在硅胶柱(AcOEt/MeOH 50:50)上纯化后，得到无色油状的衍生物43(44％)。
化合物43:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.40(d,J＝7.3Hz,2H)；7.32(t,J＝7.2Hz,2H)；7.26(t,J＝7.8Hz,1H)；6.93(d,J＝6.8Hz,1H)；6.61(d,J＝7.4Hz,1H)；5.96(t,J＝7.1Hz,1H)；5.27(s,3H)；5.08(m,2H)；4.98(s,1H)；3.99(t,J＝6.8Hz,2H)；3.57(m,1H)；3.14(m,2H)；2.43-2.31(m,10H)；1.92(t,J＝6.8Hz,2H)；1.54-1.52(m,2H)；1.40(m,20H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)158.5(2C)；149.0；136.8；129.8；128.7(2C)；128.1；127.5(2C)；115.7；104.5；79.4(2C)；70.9；58.2；54.8(2C)；53.4；53.0；51.2；48.2；45.1；30.7；29.9；28.6(6C)；26.0；23.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]628.3；[M+Na]650.3。
HRMS(ESI+):m/z C34H54N5O6[M+H]计算值＝628.4074；实测值＝628.4080。
*制备化合物23c的N-甲基化和脱羰基化的类似物(方案10)：
Figure BDA0001574366190000551
方案10：制备化合物23c的N-甲基化和脱羰基化的类似物
ο化合物44
第一步：在现成的4N HCl的1,4-二噁烷(20eq)溶液存在的情况下，将化合物39(0.7mmol)溶于1,4-二噁烷(2mL)中。然后将反应介质置于室温下搅拌6h。减压蒸发二噁烷，并且将残余物在乙醚中粉碎，以得到相应的沉淀物状氨盐酸盐。
第二步：向置于0℃下搅拌的化合物10(0.8mmol)的DMF(20mL)溶液中依次添加1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.2eq)、1-羟基苯并三唑一水合物(1.1eq)。在0℃下搅拌30min后，将中间体胺衍生物(1eq)与三乙胺(1.2eq)一起引入反应介质中，然后在室温下搅拌18h。在蒸发DMF并将残余物加入乙酸乙酯之后，将有机相用1N的HCl溶液洗涤，用NaHCO3溶液洗涤，然后用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在硅胶柱(AcOEt/MeOH 50:50)上纯化后，得到化合物45(89％)。
化合物44:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.39(d,J＝7.1Hz,2H)；7.31(t,J＝7.6Hz,2H)；7.27-7.25(m,1H)；7.01(d,J＝6.5Hz,1H)；6.61(d,J＝7.5Hz,1H)；5.99(t,J＝7.1Hz,1H)；5.06(s,2H)；5.02(m,2H)；3.95-3.88(m,2H)；3.60-3.59(m,1H)；3.46-3.29(m,2H)；3.17-3.15(m,2H)；2.95(s,3H)；2.43-2.29(m,2H)；2.02-1.92(m,2H)；1.85-1.77(m,2H)；1.39(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)173.0；158.4(2C)；149.2；136.6；129.7；128.8(2C)；128.3；127.6(2C)；115.9；104.9；79.5；79.4；71.0；51.7；48.1；45.3；45.1；35.4；30.1；28.6(6C)；27.9；27.0。
MS(ESI+):m/z＝[M+Na]609.3。
HRMS(ESI+):m/z C31H46N4O7Na[M+Na]计算值＝609.3264；实测值＝609.3268。
ο化合物45
向化合物44(0.5mmol)的THF(30mL)溶液中，滴加硼烷/二甲基硫2M复合物的THF溶液(2.5eq)。然后将反应介质加热回流2h。冷却后，用MeOH清除硼烷，将混合物再次加热回流18h。真空蒸发MeOH，将残余物加入EtOH/NaOH 1N 5:1混合物中，回流2h。蒸发乙醇后，最后用乙酸乙酯萃取水相。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥并减压蒸发，以在硅胶柱(AcOEt/MeOH 70:30)上纯化后，得到棕色粉末状的衍生物45(82％)。
化合物45:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.41(d,J＝7.3Hz,2H)；7.33(t,J＝6.7Hz,2H)；7.26(t,J＝6.8Hz,1H)；6.94(d,J＝6.9Hz,1H)；6.63(d,J＝7.4Hz,1H)；6.00(t,J＝7.2Hz,1H)；5.08(s,2H)；5.08(s,2H)；5.06-5.01(m,2H)；3.99(t,J＝6.7Hz,2H)；3.58(m,1H)；3.16-3.15(m,2H)；2.37-2.30(m,4H)；2.17(s,3H)；1.92(t,J＝7.1Hz,2H)；1.51-1.50(m,2H)；1.40(m,20H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)158.2(2C)；149.0；136.5；129.6；128.6(2C)；128.0；127.4(2C)；115.7；104.6；79.3(2C)；70.8；57.2；54.4；51.3；48.1；45.0；41.6；30.7；28.5(6C)；23.4；21.1。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]573.4；[M+Na]595.3。
HRMS(ESI+):m/z C31H49N4O6[M+H]计算值＝573.3652；实测值＝573.3664。
*制备不含酰胺官能团的脂族“连接物”载体(方案11)：
Figure BDA0001574366190000571
方案11：制备不含酰胺官能团的脂族“连接物”载体
ο化合物46:
向NaOH(0.5eq)的EtOH/H2O 1:1混合物(120mL)的溶液中，添加化合物40(5.1mmol)和化合物20(0.7eq)。然后将反应介质加热回流24h(Dalton Trans.,2004,3772-3781)。真空蒸发乙醇后，将水相用6N的HCl中和并用乙酸乙酯萃取。将有机相用饱和NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥，最后减压蒸发，以在硅胶柱(AcOEt/MeOH90:10)上纯化后，得到黄色粉末状的衍生物46(61％)。
化合物46:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.38(d,J＝6.7Hz,2H)；7.32-7.26(m,3H)；7.16(d,J＝7.5Hz,1H)；6.39(d,J＝7.5Hz,1H)；5.03(s,2H)；4.95-4.93(s,2H)；3.71-3.76(m,2H)；3.59(m,1H)；3.14(m,2H)；2.06(s,3H)；1.66-1.55(m,2H)；1.40-1.35(m,22H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)173.5；156.6(2C)；146.4；141.0；138.3；137.9；129.3(2C)；128.4(2C)；128.1；117.5；79.7(2C)；73.1；53.9；51.2；44.7；32.6；30.9；28.5(6C)；23.0；12.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]530.3。
HRMS(ESI+):m/z C29H44N3O6[M+H]计算值＝530.3230；实测值＝530.3245。
γ-R'a基团的脱苄基化(方案12)
Figure BDA0001574366190000581
方案12:R'a基团的脱苄基化
向化合物23a-k、43、45或46(0.2-1.6mmol)的MeOH(5-40mL)溶液中，添加Pd/C(10％m/m)。将反应介质置于真空下并在室温下搅拌30min，然后在H2流中保持6h。然后用纸过滤并减压蒸发甲醇，以得到衍生物36a-n(60-100％)(表3)。
表2:化合物36
Figure BDA0001574366190000582
Figure BDA0001574366190000591
化合物36a:1H NMR(CDCl3,600MHz):δ(ppm)6.95(d,J＝6.7Hz,1H)；6.92(s,1H)；6.82(d,J＝7.2Hz,1H)；6.14(t,J＝7.1Hz,1H)；5.18(s,1H)；5.04-5.03(s,1H)；4.25(m,2H)；3.56-3.54(m,1H)；3.17-3.16(m,2H)；3.09(m,2H)；2.68(t,J＝6.4Hz,2H)；1.50-1.40(m,22H)。
13C NMR(CDCl3,150MHz):δ(ppm)170.3；158.7；157.0；156.7；146.7；128.6；115.2；107.2；79.7(2C)；50.8；47.3；44.8；39.5；35.5；29.9；28.6(6C)；25.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]483.3；[M+Na]505.3。
HRMS(ESI+):m/z C23H38N4O7Na[M+Na]计算值＝505.2638；实测值＝505.2644。
化合物36b:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)6.96(dd,J1＝6.9Hz and J2＝1.5Hz,1H)；6.80(dd,J1＝7.4Hz and J2＝1.5Hz,1H)；6.52-6.51(s,1H)；6.12(t,J＝7.2Hz,1H)；5.04(s,1H)；4.88-4.86(s,1H)；4.26(t,J＝6.3Hz,2H)；3.55-3.53(m,1H)；3.13-3.08(m,4H)；2.68(t,J＝6.3Hz,2H)；1.79-1.50(m,2H)；1.40(s,18H)；1.35-1.23(m,4H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)169.7；158.3(2C)；146.2；128.2；114.6；106.7；79.5(2C)；51.1；46.9；44.3；38.8；35.1；31.9；28.8；28.2(6C)；22.6。
MS(ESI+):m/z＝[M-2Boc+3H]296.9；[M-Boc+2H]397.0；[M+H]497.1；[M+Na]519.1。
HRMS(ESI+):m/z C24H40N4O7Na[M+Na]计算值＝519.2795；实测值＝519.2801。
化合物36c:1H NMR(CDCl3,300MHz):δ(ppm)7.34(s,1H)；6.89(dd,J1＝6.9Hz andJ2＝1.2Hz,1H)；6.83(d,J＝7.2Hz,1H)；6.19(t,J＝6.9Hz,1H)；5.33-5.23(s,2H)；4.06(t,J＝5.2Hz,2H)；3.67-3.64(m,1H)；3.28-3.17(m,4H)；2.30(t,J＝7.2Hz,2H)；1.93(t,J＝6.3Hz,2H)；1.95-1.60(m,2H)；1.40(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,75MHz):δ(ppm)173.3；172.4；158.6；156.8；146.5；127.0；114.6；107.6；79.4(2C)；51.2；47.1；44.5；35.9；33.0；29.3；28.2(6C)；25.4。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]483.4；[M+Na]505.3。
HRMS(ESI+):m/z C23H38N4O7Na[M+Na]计算值＝505.2638；实测值＝505.2652。
化合物36d:1H NMR(CDCl3,600MHz):δ(ppm)7.03-7.01(m,1H)；6.80(d,J＝7.3Hz,1H)；6.10(t,J＝7.1Hz,1H)；5.66(s,1H)；4.98(s,1H)；4.27(t,J＝7.1Hz,2H)；3.89(m,1H)；3.66-3.31(m,8H)；3.23-3.21(m,2H)；2.87-2.85(m,2H)；2.67-2.46(m,2H)；1.39(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,150MHz):δ(ppm)169.5；169.0；158.6；157.0；156.1；146.5；128.9；115.1；107.0；79.8；79.7；49.5；47.3；45.8(2C)；43.9；41.8(2C)；35.4；32.1；28.6(6C)。
MS(ESI+):m/z＝[M-2Boc+3H]352.1；[M-Boc+2H]452.2；[M+H]552.2；[M+Na]574.2。
HRMS(ESI+):m/z C26H41N5O8Na[M+Na]计算值＝574.2853；实测值＝574.2849。
化合物36e:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)6.80(d,J＝6.4Hz,2H)；6.18(t,J＝7.1Hz,1H)；5.06-4.99(s,2H)；4.85-4.71(m,2H)；3.86-3.38(m,9H)；3.21-3.15(m,2H)；2.46-2.32(m,2H)；1.92-1.64(m,2H)；1.40(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)171.6；165.4；158.9；157.2；156.6；146.7；128.1；114.9；107.2；79.8(2C)；51.6；49.9；45.2；44.8；42.5；41.8；41.5；30.0；28.6(6C)；28.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]552.3；[M+Na]574.3。
HRMS(ESI+):m/z C26H41N5O8Na[M+Na]计算值＝574.2853；实测值＝574.2832。
化合物36f:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.01-7.00(m,1H)；7.76(d,J＝7.1Hz,1H)；6.09(t,J＝6.9Hz,1H)；5.04(s,2H)；4.23(t,J＝5.9Hz,2H)；3.67-3.36(m,9H)；3.12(m,2H)；2.83(m,2H)；2.36-2.30(m,2H)；1.80-1.62(m,2H)；1.35(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)171.3；169.0；158.6；156.7；156.4；146.5；128.6；114.8；106.7；79.3(2C)；51.4；47.1；45.2；44.4(2C)；41.6(2C)；31.7；29.4；28.4(6C)；27.7.MS(ESI+):m/z＝[M+H]566.3；[M+Na]588.3。
HRMS(ESI+):m/z C27H43N5O8Na[M+Na]计算值＝588.3009；实测值＝588.2980。
化合物36g:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.49(d,J＝4.8Hz,1H)；6.33(d,J＝4.8Hz,1H)；4.70(s,2H)；3.53-3.51(m,1H)；3.19-3.17(m,2H)；3.07-2.91(m,2H)；2.26(s,3H)；1.56-1.44(m,4H)；1.42(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)169.9；167.1；157.3；157.0；145.5；139.0；131.9；111.1；78.6(2C)；55.5；50.5；44.1；39.2；29.6；27.4(6C)；25.4；10.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]483.2。
HRMS(ESI+):m/z C23H38N4O7Na[M+Na]计算值＝505.2638；实测值＝505.2636。
化合物36h:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.57(d,J＝4.8Hz,1H)；6.41(d,J＝4.8Hz,1H)；4.77(s,2H)；3.57(m,1H)；3.14-3.11(m,2H)；3.02-2.98(m,2H)；2.34(s,3H)；1.58-1.49(m,2H)；1.40(s,20H)；1.39-1.35(m,2H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)169.9；167.1；157.3；157.0；145.5；139.0；131.9；111.1；78.6(2C)；55.5；50.7；44.0；39.1；31.6；28.7；27.4(6C)；22.9；10.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]497.3；[M+Na]519.2。
HRMS(ESI+):m/z C24H40N4O7Na[M+Na]计算值＝519.2795；实测值＝519.2789。
化合物36i:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.56(d,J＝7.2Hz,1H)；6.37(d,J＝7.2Hz,1H)；4.37-4.33(m,2H)；3.53(m,1H)；3.13-3.07(m,2H)；3.00-2.95(m,2H)；2.64(t,J＝6.5Hz,2H)；2.46(s,3H)；1.44(s,18H)；1.44-1.40(m,4H)；1.40-1.23(m,2H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)171.5；170.8；158.5；158.2；147.1；139.0；132.5；112.5；80.0(2C)；51.4；50.3；45.4；40.2；37.6；32.9；30.0；28.8(6C)；24.3；11.8。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]511.3；[M+Na]533.2。
HRMS(ESI+):m/z C25H42N4O7Na[M+Na]计算值＝533.2951；实测值＝533.2935。
化合物36j:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.39(m,2H)；6.31(m,1H)；5.40-5.33(s,2H)；3.95(m,2H)；3.55(m,1H)；3.40-3.13(m,4H)；2.35(s,3H)；2.24(m,2H)；1.96-1.60(m,4H),1.40(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)174.2；169.8；157.7(2C)；146.8；137.5；129.3；111.6；80.2(2C)；52.2；51.6；44.9；36.8；33.5；31.4；30.2；28.7(6C)；12.1。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]497.2；[M+Na]519.3。
HRMS(ESI+):m/z C24H40N4O7Na[M+Na]计算值＝519.2795；实测值＝519.2795。
化合物36k:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.26(m,1H)；6.35(m,1H)；5.98(s,2H)；5.13(m,2H)；4.88(m,1H)；3.67-3.66(m,8H)；3.14(m,2H)；2.35(m,2H)；2.17(s,3H)；1.80-1.63(m,2H),1.40(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)171.6；168.9；164.5；156.9(2C)；142.8；138.6；128.5；111.5；79.6(2C)；55.0；50.7；45.2；44.9；44.6；42.1；41.5；29.9；28.4(6C)；28.1；12.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]566.3；[M+Na]588.3。
HRMS(ESI+):m/z C27H43N5O8Na[M+Na]计算值＝588.3009；实测值＝588.3002。
化合物36l:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)6.83(d,J＝6.8Hz,1H)；6.76(d,J＝7.3Hz,1H)；6.11(t,J＝7.1Hz,1H)；5.17-5.08(s,2H)；4.02(t,J＝6.9Hz,2H)；3.56(m,1H)；3.15-3.12(m,4H)；2.91-2.83(m,6H)；2.57-2.56(m,2H)；2.12(m,2H)；1.80-1.78(m,2H)；1.37(m,22H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)159.0；157.2；156.3；147.0；127.4；114.3；107.1；79.7(2C)；56.9；54.4；51.1；50.2(2C)；48.4；44.7(2C)；30.1；28.6(6C)；27.3；25.5；21.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]538.3。
HRMS(ESI+):m/z C27H48N5O6[M+H]计算值＝538.3605；实测值＝538.3611。
化合物36m:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)6.85(d,J＝6.6Hz,1H)；6.77(dd,J1＝7.3Hz and J2＝1.5Hz,1H)；6.12(t,J＝7.1Hz,1H)；5.07(s,2H)；4.02-3.88(m,2H)；3.59(m,1H)；3.16(m,2H)；2.34-2.32(m,4H)；2.16(s,3H)；1.90(t,J＝6.6Hz,2H)；1.51(m,4H)；1.41(s,18H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)159.3；156.9(2C)；147.1；127.6；113.7；106.8；79.5(2C)；57.5；54.5；51.4；48.3；45.1；42.0；31.4；28.6(6C)；26.8；24.4。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]483.4；[M+Na]505.3。
HRMS(ESI+):m/z C24H43N4O6[M+]计算值＝483.3183；实测值＝483.3172。
化合物36n:1H NMR(CDCl3,400MHz):δ(ppm)7.86(m,1H)；7.03-7.02(m,2H)；5.19-5.10(m,2H)；4.19(m,2H)；3.59(m,1H)；3.13(m,2H)；2.51(s,3H)；1.84-1.78(m,2H)；1.39-1.38(m,22H)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ(ppm)161.5；157.1；156.6；144.5；138.4；137.5；112.3；79.6(2C)；56.3；51.2；44.6；32.3；30.3；28.6(6C)；22.8；12.8。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]440.3。
HRMS(ESI+):m/z C22H38N3O6[M+H]计算值＝440.2761；实测值＝440.2749。
δ-最终脱保护二胺基团(方案13)
Figure BDA0001574366190000641
方案13：最终脱保护二胺基团
在现成的4N HCl的1,4-二噁烷(20eq)溶液存在的情况下，将化合物36a-n或23b(0.2-1.7mmol)溶于1,4-二噁烷(4-10mL)中。然后将反应介质在室温下搅拌45min-16h。减压蒸发二噁烷，将残余物在乙醚中粉碎。真空蒸发后(高度吸湿的产物)，将获得的沉淀物冻干以得到衍生物37a-n或38(78-100％)(表4)。
表3：化合物37和38
Figure BDA0001574366190000651
Figure BDA0001574366190000661
化合物37a:1H NMR(D2O,400MHz):δ(ppm)7.16(dd,J1＝6.8Hz and J2＝1.4Hz,1H)；7.05(dd,J1＝7.5Hz and J2＝1.4Hz,1H)；6.41(t,J＝7.1Hz,1H)；4.30(t,J＝6.4Hz,2H)；3.67-3.64(m,1H)；3.35-3.34(m,2H)；3.18(t,J＝6.7Hz,2H)；2.72(t,J＝6.4Hz,2H)；1.76-1.57(m,4H)。
13C NMR(D2O,100MHz):δ(ppm)173.3；158.5；145.5；129.4；118.8；108.5；49.0；47.4；40.9；38.7；35.3；27.5；24.1。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]283.1。
HRMS(ESI+):m/z C13H23N4O3[M+H]计算值＝283.1770；实测值＝283.1765。
化合物37b:1H NMR(d6-DMSO,300MHz):δ(ppm)8.59(s,4H)；8.10-8.07(s,1H)；7.08(dd,J1＝6.9Hz and J2＝1.5Hz,1H)；6.70(dd,J1＝7.2Hz and J2＝1.5Hz,1H)；6.07(t,J＝7.2Hz,1H)；4.10(t,J＝6.9Hz,2H)；3.40-3.38(m,1H)；3.09-3.00(m,4H)；2.53-2.49(m,2H)；1.63-1.58(m,2H)；1.19(m,4H)。
13C NMR(d6-DMSO,75MHz):δ(ppm)169.6；157.8；146.8；128.6；115.0；105.4；49.1；45.9；40.6；38.2；34.8；29.7；28.6；21.9。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]296.9。
HRMS(ESI+):m/z C14H25N4O3[M+H]计算值＝297.1927；实测值＝297.1914。
化合物37c:1H NMR(d6-DMSO,300MHz):δ(ppm)8.63(s,2H)；8.54(s,2H)；8.30(s,1H)；7.20(dd,J1＝6.8Hz and J2＝1.5Hz,1H)；6.72(dd,J1＝7.2Hz and J2＝1.8Hz,1H)；6.11(t,J＝6.9Hz,1H)；3.96-3.87(m,2H)；3.49-3.46(m,1H)；3.11-3.04(m,4H)；2.32-2.31(m,2H)；1.90-1.75(m,4H)。
13C NMR(d6-DMSO,75MHz):δ(ppm)171.2；157.6；146.6；128.2；114.8；105.5；48.7；46.6；40.3；35.8；30.8；28.7；26.1。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]283.0。
HRMS(ESI+):m/z C13H23N4O3[M+H]计算值＝283.1810；实测值＝283.1800。
化合物37d:1H NMR(D2O,400MHz):δ(ppm)7.20(d,J＝6.4Hz,1H)；7.03(d,J＝6.6Hz,1H)；6.39(t,J＝6.9Hz,1H)；4.32-4.28(m,1H)；4.06-4.02(m,2H)；3.69-3.45(m,8H)；3.17-3.10(m,2H)；3.04-3.01(m,2H)；2.99-2.95(m,2H)。
13C NMR(D2O,100MHz):δ(ppm)172.8；171.5；168.8；158.5；129.5；118.9；108.3；47.1；45.5；45.3；44.7；44.3；41.5；40.7；33.2；31.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]352.2。
HRMS(ESI+):m/z C16H26N5O4[M+H]计算值＝352.1985；实测值＝352.1977。
化合物37e:1H NMR(D2O,400MHz):δ(ppm)7.14-7.08(m,2H)；6.44(m,1H)；5.01(s,2H)；3.94-3.85(m,1H)；3.66(m,8H)；3.17(m,2H)；2.78-2.76(m,2H)；2.13-2.08(m,2H)。
13C NMR(D2O,100MHz):δ(ppm)172.5；167.2；158.7；145.4；130.1；119.2；108.3；51.2；49.2；44.6；44.1；42.9；41.7；41.3；28.5；25.3。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]352.2。
HRMS(ESI+):m/z C16H26N5O4[M+H]计算值＝352.1985；实测值＝352.1981。
化合物37f:1H NMR(D2O,400MHz):δ(ppm)7.20(d,J＝6.3Hz,1H)；7.03(d,J＝6.4Hz,1H)；6.39(t,J＝6.8Hz,1H)；4.30(t,J＝6.3Hz,2H)；3.75-3.60(m,4H)；3.55-3.52(m,5H)；3.37-3.35(m,2H)；2.98-2.95(m,2H)；2.74-2.68(m,2H)；2.11-2.03(m,2H)。
13C NMR(D2O,100MHz):δ(ppm)172.7；161.7；158.8；145.3；129.5；118.6；108.3；49.0；47.0；45.1；44.4；41.5；41.2；40.6；31.4；28.3；25.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]366.2。
HRMS(ESI+):m/z C17H28N5O4[M+H]计算值＝366.2146；实测值＝366.2134。
化合物37g:1H NMR(CD3OD,400MHz):δ(ppm)8.22(d,J＝5.8Hz,1H)；7.16(d,J＝5.8Hz,1H)；5.29(s,2H)；3.66-3.61(m,1H)；3.35-3.31(m,4H)；2.53(s,3H)；1.90-1.73(m,4H)。
13C NMR(CD3OD,100MHz):δ(ppm)167.1；160.7；145.0；144.3；141.2；111.5；59.4；51.0；42.4；40.1；29.1；26.2；13.3。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]283.2。
HRMS(ESI+):m/z C13H23N4O3[M+H]计算值＝283.1770；实测值＝283.1772。
化合物37h:1H NMR(CD3OD,400MHz):δ(ppm)8.15(d,J＝6.8Hz,1H)；7.12(d,J＝6.6Hz,1H)；5.22(s,2H)；3.58-3.56(m,1H)；3.29-3.25(m,4H)；2.48(s,3H)；1.81-1.73(m,2H)；1.62-1.49(m,4H)。
13C NMR(CD3OD,100MHz):δ(ppm)166.8；160.4；144.8；143.9；140.8；111.4；59.1；50.9；42.9；40.3；31.0；29.7；23.2；12.9。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]297.2；[M+Na]319.2。
HRMS(ESI+):m/z C14H25N4O3[M+H]计算值＝297.1927；实测值＝297.1913。
化合物37i:1H NMR(D2O,400MHz):δ(ppm)7.97(d,J＝6.6Hz,1H)；7.18(d,J＝7.0Hz,1H)；4.68(t,J＝6.4Hz,2H)；3.71-3.65(m,1H)；3.38-3.37(m,2H)；3.16(t,J＝6.7Hz,2H)；3.08-3.04(s,1H)；2.88(t,J＝6.5Hz,2H)；2.56(s,3H)；1.85-1.74(m,2H)；1.52-1.38(m,4H)。
13C NMR(D2O,100MHz):δ(ppm)171.3(2C)；158.2；142.4；138.7；110.9；52.7；49.2；40.8；38.9；35.8；29.6；27.9；21.6；12.3。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]311.2。
HRMS(ESI+):m/z C15H27N4O3[M+H]计算值＝311.2083；实测值＝311.2075。
化合物37j:1H NMR(D2O,400MHz):δ(ppm)8.28(d,J＝6.5Hz,1H)；7.13(d,J＝6.5Hz,1H)；4.44(m,2H)；3.33-3.29(m,5H)；2.64(s,3H)；2.57(m,2H)；2.08-2.07(m,4H)。
13C NMR(D2O,100MHz):δ(ppm)174.9；159.8；145.2；143.4；139.4；111.7；55.7；50.6；41.9；37.3；32.2；31.0；27.1；12.8。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]297.2。
HRMS(ESI+):m/z C14H25N4O3[M+H]计算值＝297.1927；实测值＝297.1931。
化合物37k:1H NMR(D2O,400MHz):δ(ppm)8.01(d,J＝6.8Hz,1H)；7.19(d,J＝6.9Hz,1H)；5.53(s,2H)；3.72-3.55(m,9H)；3.41-3.39(m,2H)；2.81-2.75(m,2H)；2.47(s,3H)；2.16-2.08(m,2H)。
13C NMR(D2O,100MHz):δ(ppm)172.4；165.2；159.4；143.4；142.5；139.9；111.1；57.2；49.1；44.5；44.1；42.2；41.4；40.7；28.5；25.3；12.5。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]366.2。
HRMS(ESI+):m/z C17H28N5O4[M+H]计算值＝366.2141；实测值＝366.2133。
化合物37l:1H NMR(d6-DMSO,400MHz):δ(ppm)6.83(d,J＝6.8Hz,1H)；6.76(d,J＝7.3Hz,1H)；6.11(t,J＝7.1Hz,1H)；5.17-5.08(s,2H)；4.02(t,J＝6.9Hz,2H)；3.56(m,1H)；3.15-3.12(m,4H)；2.91-2.83(m,6H)；2.57-2.56(m,2H)；2.12(m,2H)；1.80-1.78(m,2H)；1.37(m,22H)。
13C NMR(d6-DMSO,100MHz):δ(ppm)159.0；157.2；156.3；147.0；127.4；114.3；107.1；79.7(2C)；56.9；54.4；51.1；50.2(2C)；48.4；44.7(2C)；30.1；28.6(6C)；27.3；25.5；21.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]338.3。
HRMS(ESI+):m/z C17H32N5O2[M+H]计算值＝338.2556；实测值＝338.2552。
化合物37m:1H NMR(CD3OD,400MHz):δ(ppm)7.49(m,1H)；7.14(m,1H)；6.60-6.59(m,1H)；4.34-4.30(m,2H)；3.82-3.78(m,1H)；3.40-3.34(m,4H)；3.31-3.26(m,2H)；2.95(s,3H)；2.35-2.31(m,2H)；2.03-1.91(m,4H)。
13C NMR(CD3OD,100MHz):δ(ppm)158.8；147.8；130.1；121.2；112.2；56.8；54.6；50.3；49.8；42.1；40.9；28.5；25.4；21.2。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]283.2。
HRMS(ESI+):m/z C14H27N4O2[M+]计算值＝283.2134；实测值＝283.2133。
化合物37n:1H NMR(CD3OD,400MHz):δ(ppm)8.25(d,J＝7.0Hz,1H)；7.13(d,J＝6.9Hz,1H)；4.42(t,J＝7.6Hz,2H)；3.64-3.61(m,1H)；3.31-3.27(m,2H)；2.64(s,3H)；1.93-1.82(m,4H)；1.57-1.56(m,2H)。
13C NMR(CD3OD,100MHz):δ(ppm)159.5；145.0；143.1；139.6；111.8；57.4；50.6；42.0；31.0；30.7；22.7；12.7。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]240.2。
HRMS(ESI+):m/z C12H22N3O2[M+H]计算值＝240.1712；实测值＝240.1713。
化合物38:1H NMR(CD3OD,400MHz):δ(ppm)7.46(s,2H)；7.37-7.27(m,3H)；6.58(m,1H)；5.21(m,2H)；4.40(m,2H)；3.62(m,1H)；3.32-3.31(m,2H)；3.19(m,2H)；2.77(m,2H)；1.80(m,2H)；1.53(m,4H)。
13C NMR(CD3OD,100MHz):δ(ppm)171.4；157.1；147.2；135.7；130.3；128.6(2C)；128.2；127.8(2C)；119.3；109.5；71.0；49.6；40.8；38.5；34.7；32.4；29.7；28.3；21.8。
MS(ESI+):m/z＝[M+H]387.2。
HRMS(ESI+):m/z C21H31N4O3[M+H]计算值＝387.2396；实测值＝387.2382。
B.物理化学研究
I)通过HPLC分析，评估根据本发明的化合物(29a、29b、30a、30b；37a、37b、37c、37d、37f、37i、37j)与α-氧代醛或α,β-不饱和醛之间的加合物的形成。
1-原理
在MGO或MDA存在下，将待测试化合物在37℃下保温。然后，通过HPLC分析进行目的在于报导与MGO或MDA形成加合物的动力学研究。
2-方法
a)制备溶液
将待测化合物(30μmol)溶于PBS(1.5mL)中。然后制备浓度为40％的MGO的水(250μmol)溶液(qsp 1.25mL)，同时，将MDA双-(二OEt)-缩醛(250μmol)设定为在室温下，与1NHCl(2eq)的水溶液(qsp1.25mL)反应1h。还需要0.05N的NaOH水溶液来中和反应介质(5mL)。
b)在37℃下保温混合物
然后在0.05N NaOH(0.5mL)存在下，将待测化合物的溶液(625μL-培养基中的最终浓度＝10mM)设定为与临时制备的MGO溶液或MDA溶液反应(125μL-培养基中的最终浓度＝20mM)。
然后将各种混合物在37℃的烘箱中保温24h。
c)通过HPLC分析
每隔固定的时间间隔(0.25；0.5；1；5和24h)取每种混合物的样品(100μL)并保存在-20℃以停止反应。室温下，在MeCN/H2O 98:2混合物中稀释后，在40℃、流速为0.3mL/min的使用溶剂梯度H2O+HCOOH 0.1％/MeCN+HCOOH 0.1％(98/2 2min，然后55/45 2min以及45/55 3min)并且注射1μL体积的Waters Acquity柱上分离后(“检测模式：扫描，界面电压：调整文件，DL电压：100V，Q-阵列DC：40V，Q-阵列RF：40V”)，在Shimadzu LCMS-2020仪器上进行HPLC分析(在190nm处的UV色谱和在正电喷雾离子化模式(ESI+)下的质谱)。首先使用含有无清除剂的反应介质的溶液进行空白试验。然后，将10mM的游离清除剂溶液用作阴性对照，并将肌肽作为文献参考。然后，在测量UV光谱上的相应峰(对代表性样品进行的测量)的曲线下面积后，测量与MGO或MDA形成的加合物(通常，tR＝4.1-6.8min)相对于剩余游离清除剂的量的比例(通常，tR＝0.8-4.6min)。
3-结果与讨论
a)评估与MGO形成加合物(图2)
首先，观察到游离清除剂的消失有益于与MGO的各种加合，所述MGO与根据本发明的新化合物的加合远快于与第二代衍生物(Dap-Pip和Dap-(nBu)Pip)或肌肽的加合(图2)。因而，能够证明这种与相对于二胺官能团与羰基的分离有关的作为MGO清除剂的新型二胺衍生物系列的有效性增加。带有羟基吡啶酮基团的化合物37a、37b、37c、37f、37i和37j额外显示为具有与肼苯哒嗪相当的最高反应性，并且保温15min后游离清除剂几乎全部消失。我们还能够识别三种可能类型的与MGO的加合物(加合物A(AdA)1：1型，其是两个MGO分子的清除剂分子；加合物B(AdB)1：2型；加合物C(AdC)2：1型)，其频繁地改变带有吡嗪环(AdB)的1：2型主要加合物的观察(图3)。最后，注意用化合物29a得到的结果不能用图形表示(ND＝未测定)，因为这种情况下，在HPLC分析过程中，不可能获得游离清除剂和MGO加合物之间的分离。但是，朝向与游离清除剂有关的AdB大部分存在的趋势似乎在反应5h后形成。
b)评估与MDA形成加合物(图4)
特别地，根据本发明的所有化合物都观察到带有2,3-二氢-1H-1,4-二氮杂(加合物D(AdD))环的加合物的形成(图4和图5)。已证明衍生物30b、37c、37d、37f、37i和37j最具反应性，其结果是1h后测试为有利于与MDA加合的清除剂消失(>加合物的81％)。注意，用化合物29a得到的结果再次不能用图形表示(ND＝未测定)，因为与MGO一样，在HPLC分析期间我们不能发现游离清除剂和与MDA的加合物之间的任何分离。在这种情况下，朝向与游离清除剂有关的AdD大部分存在的趋势似乎仅在反应24h后才形成。
II)通过UV/可见光分光光度法评估根据本发明的化合物(29a、29b、30a、30b；37a、37b、37c、37d、37f、37i、37j)的Cu2+螯合性能
1-原理:
在Cu2+存在下，将待测试化合物在室温下保温10min。由紫脲酸铵络合后，测定游离Cu2+的剩余量(Int.J.Mol.Sci.,2009,10,5485–5497；Molecules,2012,17,13457–13472)。UV/可见光分光光度法的确测量了Cu2+/紫脲酸铵(橙)复合物在485nm处的吸光度(A485)和游离的紫脲酸铵(粉红)在520nm处的吸光度(A520)。然后，根据事先获得的Cu2+浓度，使用给出比率A485/A520的直线校正方程来评估游离Cu2+的剩余量。通过测试化合物最终推断出Cu2+复合物的络合百分比。
2-方法:
a)制备溶液
首先制备Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M(qsp 200mL)，使用1N的HCl溶液将其pH调节至5。然后将0.5mM(20mL)和0.25mM(100mL)的CuSO4.5H2O溶液加入该缓冲液中，首先用于获得校正曲线。还必须临时制备1mM的紫脲酸铵水溶液(10mL)以及将4.2mM的化合物的原液在Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M中或缓冲液和MeOH 75/25混合物中(6.2mL)进行测试。
b)在室温下保温混合物
将不同浓度的待测试化合物分配在用于溶血的管中的Hexamine缓冲液0.01M/KCl0.01M(pH＝5)中(表5)或在缓冲液和MeOH 75/25的混合物中(表6)。然后添加0.25mM的CuSO4.5H2O溶液(1mL)，并使其在室温下保温10min。最后，引入1mM(0.1mL)的紫脲酸铵水溶液并再次在室温下保温1min。然后通过UV/可见光分光光度测定法(V-650JASCO分光计)在485nm(A485)和520nm(A520)处测量吸光度(测量三份)。使用含有0.01M/KCl 0.01M(pH＝5)(2mL)和水(0.1mL)的Hexamine缓冲液，以及乙二胺(EDA)作为文献参考的Cu2+螯合剂的空白。
表5在Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M(pH＝5)中制备各种浓度的待测试化合物
Figure BDA0001574366190000741
Figure BDA0001574366190000751
表6在Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M(pH＝5)和MeOH75/25的混合物中制备各种浓度的待测试化合物
Figure BDA0001574366190000752
在将不同浓度的CuSO4.5H2O分配在用于溶血的管中的Hexamine缓冲液0.01M/KCl0.01M(pH＝5)中(表7)或在缓冲液和MeOH 75/25的混合物中(表8)后，预先产生校正曲线(测量三份)。在引入1mM(0.1mL)的紫脲酸铵水溶液后，将其在室温下保温1min，最后通过UV/可见光分光光度法在485nm(A485)和520nm(A520)处测量吸光度。
表7：在Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M(pH＝5)中制备各种浓度的CuSO4.5H2O，以产生校正曲线
Figure BDA0001574366190000761
表8：在Hexamine缓冲液0.01M/KCl 0.01M(pH＝5)和MeOH75/25的混合物中制备各种浓度的CuSO4.5H2O，以产生校正曲线
Figure BDA0001574366190000762
Figure BDA0001574366190000771
3-结果与讨论:
a)校正曲线
获得直线(图6、图7)，其方程将使得它可以在待测化合物络合之后，测定游离Cu2+的剩余量，并最终评估Cu2+的络合能力。
b)比较测试化合物的Cu2+螯合性质
首先，根据本发明的新化合物似乎是比第二代衍生物(Dap-Pip和Dap-(nBu)Pip)更好的Cu2+螯合剂(图8)。由此，化合物30b、37b、37i和37j显示出了最高的活性，它们具有与参考文献使用的EDA相近的络合能力，特别是对于化合物30b而言。在同一系列中，化合物37a和37b(与化合物37a相比，化合物37b是更好的络合剂)的Cu2+螯合性质的比较表明，带有末端二胺基团的碳链的延伸似乎如预期的那样改进了活性。分离羰基官能团的确增强了二胺基团的螯合能力。但是，与其中碳链也衍生自赖氨酸的化合物30b和37b的结果相比，用化合物29b获得的差结果提示了在衍生自阿魏酸、没食子酸或从分子另一端引入的羟基吡啶酮的基团的Cu2+络合中的联合干预。因而，为了验证这一假设，我们比较了化合物37b和仅具有一个游离Cu2+螯合端的两种相关化合物(化合物36b和38)的Cu2+螯合性质(图9和图10)。由此，与羟基吡啶酮基团(化合物38)的结果相反，丧失二胺基团(化合物36b)显示几乎没有任何后果，因而羟基吡啶酮基团对于根据本发明的新化合物的Cu2+螯合活性确实是必要的。另外，比较化合物37c和37j获得的结果显示，相对于3-羟基吡啶-2-酮构型，3-羟基-2-甲基吡啶-4-酮构型具有更实质性的Cu2+络合能力。最后，鉴于用化合物29a和29b获得的差结果，衍生自阿魏酸的基团似乎具有最差的Cu2+络合能力，其是最不令人感兴趣的。
III)通过ORAC测试(“氧自由基吸收能力”)评估本发明化合物(29a、29b、30a、30b；37a、37b、37c、37d、37f、37i、37j)的抗氧化性质
1-原理:
使用荧光素的ORACFL测试(J.Agric.Food Chem.,2004 52,48-54；J.Agric.FoodChem.,2005,53,4290-4302)评估本发明化合物的抗氧化性质。由此，在37℃下，在AAPH(2,2'-偶氮二(2-甲基丙脒)二盐酸盐)存在下产生的过氧化物自由基与该荧光传感器反应以得到非荧光产物。然后，可以通过跟踪荧光素随时间的荧光衰减曲线，并相对于相应的不存在抗氧化剂的对照，测量样品的曲线下面积(AUC)，来测定测试化合物的保护作用。
使用trolox(6-羟基-2,5,7,8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸)(维生素E的水溶性类似物)作为用于计算10μM的测试化合物的抗氧化能力(ORACFL)的标准，以trolox当量(TE)的μmol/测试化合物的μmol表示。由此，根据不同trolox浓度的曲线下面积，使用直线校正方程获得该值(Bioorg.Med.Chem.,2015,23,1135-1148)(图11)。
2-方法:
将荧光素溶液(FL)(12nM；150μL)引入黑色96-孔板(Dutscher,Brumath,France)中。将溶于D-PBS中的待测试化合物(1-20μM；25μL)或trolox(1-50μM；25μL)添加到每个孔中。在37℃下保温至少30min期间平衡平板后，使用临时制备的AAPH溶液(30mM；25μL)引发自由基反应。使用温度控制的Tecan
Figure BDA0001574366190000781
200PRO酶标仪，每90秒测量60次循环的荧光(λEx:485nm；λEm:520nm)(在三个独立实验期间进行三次重复测量)。
3-结果与讨论:
根据本发明的化合物显示了实质性的抗氧化能力(表9：ORACFL≥1μmol TE/μmol)，特别是与发现的肌肽的非常低的活性相比。另外，鉴于没有发现第二代Dap-Pip衍生物的活性，引入来自阿魏酸、没食子酸或来自羟基吡啶酮构型的基团对于获得这些抗氧化剂性质是不可或缺的。由此，化合物30b和37c显示为最具活性，因而将其作为其领导者保留在其各自的家族中。注意，在这种情况下，比较化合物37c和37j所获得的结果有利于3-羟基吡啶-2-酮构型的更好的抗氧化能力。
表9：在10μM下的根据本发明的化合物的抗氧化能力(ORACFL)(数值由三个独立实验的三份平均值±SEM(“平均值的标准误差”)表示)。
Figure BDA0001574366190000791
C.体外的生物学评估
I)体外评估根据本发明的化合物(29a、29b、30a、30b；37a、37b、37c)的抗自由基性质
1-原理:
通过在低密度脂蛋白(LDL)的氧化的体外模型中抑制脂质过氧化作用来测定各种化合物的抗自由基性质(Free Radic.Biol.Med.,1992,13,341–390)。脂质过氧化由LDL中存在的多不饱和脂肪酸双键的自由基攻击引发。这导致从CH2基团中去除氢原子。该不稳定的自由基被重排，以产生更稳定的构型，即共轭二烯。一旦开始，LDL的氧化是由自由基产生的脂质过氧化的连锁反应。通过添加水溶性化合物2,2'-偶氮双(2-甲基丙脒)二盐酸盐(AAPH)，在37℃下诱导LDL的体外氧化，这在其自发热分解期间产生自由基。
2-方法:
简而言之，在存在或不存在溶于D-PBS的20μL的待测化合物的各种溶液(最终浓度0.1-100μM)的情况下，通过将20μL的AAPH(2mM)溶液添加到LDL的D-PBS(160μL)溶液(100μg/mL)中，在37℃下，诱导在96-孔板中进行的氧化。单独使用LDL而不添加AAPH作为阴性对照。每次氧化都进行两次。在氧化期间，共轭二烯形成之后，使用温度控制的TECAN分光光度计，在37℃、234nm处,每10min测量光密度8h。将在该体外模型中识别的强效抗氧化剂维生素E(α-生育酚)用作参考分子(J.Nutr.Biochem.,2012,23,845–51)。
3-结果与讨论:
即使在高浓度(100μM)下，第二代Dap-Pip衍生物也不显示任何抗自由基作用(图27)。
衍生自阿魏酸的化合物29a和29b以类似的方式表现(图28和图29)。事实上，结果表明，这些产物的抗氧化剂浓度范围为25-100μM，但在较低浓度(0.1-10μM)时变成促氧化剂。
衍生自没食子酸的化合物30b在浓度50-100μM时为高度促氧化剂，但在最低浓度(0.1-10μM)时变成高度抗氧化剂(图30)。
带有羟基吡啶酮基团的化合物37a和37c以类似方式表现。它们在1-100μM浓度范围内具有增加的抗氧化作用(图31和图32)。
在1-10μM的较低浓度下，根据本发明的化合物30b、37a和37c具有比第二代Dap-Pip衍生物更高的抗自由基性质，并且甚至高于维生素E(图33和图34)。因而，能够证明这种第三代抗氧化剂化合物相对于先前的相关衍生物以及参考产物的有效性。
化合物30b(低浓度的抗氧化剂和高浓度的促氧化剂)的相当非典型的表现还有待研究。相反，化合物29a和29b(低浓度的促氧化剂和高浓度的抗氧化剂)的特征可以在文献(J.Agric.Food Chem.,2000,48,3597–3604；J.Agric.Food Chem.,2010,58,9273–9280)描述的近期工作中得到回应。
最后，带有羟基吡啶酮基团的化合物37a和37c似乎具有最好的抗氧化性质，并且其在约1μM的低浓度下获得。
II)研究根据本发明的化合物的细胞毒性
为了根据本发明的化合物用于化妆品或特别是治疗和/或预防动脉粥样硬化和神经退行性疾病的目的，用于研究本发明化合物的细胞毒性以及评估其抗凋亡性质的细胞系根据前述权利要求选择。由此，这些各种研究能够在人成纤维细胞(MRC-5)、鼠内皮脑细胞(bEnd.3)和作为神经元细胞(PC12)处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞上进行(Eur.J.Med.Chem.,2014,83,355–365；Chem.Biol.Interact.,2014,224,108–116；Neurochem.Int.,2013,62,620–625)。
1-原理:
基于通过代谢活性细胞检测四唑盐(WST-8)的转化，通过比色法评估细胞活力(Molecules,2014,19(8),12048–12064；J.Pharmacol.Toxicol.Methods.,2007,56(1),58–62)。活细胞具有将WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺基苯基)-2H-四唑)，单钠盐)还原成甲臜的线粒体脱氢酶，其在1-甲氧基PMS(1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓甲基硫酸盐)存在下直接溶于培养基中。在37℃孵育1h后，在450nm处测量甲臜的吸光度。吸光度与活细胞的数量成正比。
2-方法:
简而言之，在100μL合适的培养基中，将细胞以每孔5.103个细胞的速度接种在96-孔板中，直到亚汇合。然后用D-PBS洗涤细胞，然后用不同浓度(10μM、100μM)的待测试产物各三份处理24和48h。用10％的DMSO进行阳性对照。然后将CCK-8(10μL)溶液添加到每个孔中，在37℃下孵育1h。使用Perkin Elmer 2103
Figure BDA0001574366190000822
酶标仪在450nm处测量吸光度。
细胞活力通过形成代表性实验的三份平均值±标准偏差或进行的三个独立实验的三份平均值±标准偏差，以对照(未处理细胞)的％表示。
3-结果与讨论:
表10：处理24h后，研究根据本发明的化合物对三种细胞系(鼠内皮脑细胞(bEnd.3)、作为神经元细胞处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)和人成纤维细胞(MRC-5))的细胞毒性。细胞活力表示为未处理细胞的百分比(100％对照条件)。
Figure BDA0001574366190000821
Figure BDA0001574366190000831
表11：处理48h后，研究根据本发明的化合物对三种细胞系(鼠内皮脑细胞(bEnd.3)、作为神经元细胞处理的大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12)和人成纤维细胞(MRC-5))的细胞毒性。细胞活力表示为未处理细胞的百分比(100％对照条件)。
Figure BDA0001574366190000832
由这些第一结果形成的一般趋势(形成代表性实验的三次重复测量)揭示了，在10和100μM下经24h(表10、图35、图36、图37)或48h(表11、图38、图39、图40)处理后测试的根据本发明的化合物对的三种细胞系的先验的低细胞毒性以及甚至没有细胞毒性。但是，特别是对于具体化合物29a、30b和37c的100μM的高浓度，确实出现了一些令人不满意的数据。由此，在100μM下并且对PC12细胞处理48h后，化合物30b处于不可忽略的细胞活力降低的起点(对照为67％)。但是，这种细胞毒性可以通过在体外评估其抗自由基性质期间的高浓度下已经观察到的其促氧化性能来解释(图30)。最后，对于浓度小于或等于10μM的最有趣的衍生物，已经发现高于维生素E的抗自由基活性(图33、图34)，这些根据本发明的化合物的细胞毒性的第一结果对本发明来说是非常令人鼓舞的。
最后，在各三次进行的三个独立实验期间，在PC12细胞上处理24h后，能够证实根据本发明的化合物不存在细胞毒性(图41)。
III)评估根据本发明的化合物(29a、29b、30a、30b；37a、37b、30c)对不同细胞系的抗凋亡性质
1-原理:
细胞凋亡是细胞死亡的内在程序性细胞机制，受到高度调节，其构成了生物对生理或病理刺激的反应，引起细胞产生和消除之间的不平衡。这种程序化的死亡机制使得维持组织的稳态成为可能。形态学上，细胞凋亡对应于细胞的逐渐收缩，带有染色质和细胞质的缩合，随后是DNA的规则特征性片段化，导致形成细胞片段(核小体内片段化)或凋亡体。细胞凋亡的不适当调节在诸如癌症、自身免疫性疾病、阿尔茨海默病等许多病理性病症中起主要作用(The Lancet,1993,381,1251–1254；Toxicol Pathol.,2007,35(4),495–516)。
各种研究已经显示甲基乙二醛(MGO)在许多细胞类型中诱导细胞凋亡(Int.J.Mol,Med.,2010,26,813–818)。
使用两种鼠单克隆抗体，一种抗DNA，另一种抗组蛋白，通过ELISA方法评估细胞的凋亡(ELISAPLUS细胞死亡检测试剂盒，Roche，Meylan，法国)。该技术使得可以特定地测量细胞裂解物的细胞质部分中的单核小体和寡核小体。
2-方法:
简而言之，在合适的培养基中，对于Bend.3和PC12以5.103个细胞/孔的速度以及对于MRC5以75.103个细胞/孔的速度将细胞接种于96-孔板或24-孔板中，直至接近亚融合。然后用PBS洗涤细胞，然后在37℃用不同浓度(10μM、100μM)的待测试产物各三份处理30min-1h(细胞PC12和Bend.3)或1h(细胞MRC5)。然后，添加MGO溶液(对于细胞PC12为1mM，对于细胞Bend.3和MRC5为2mM)，孵育24h。根据文献和我们进行的细胞毒性测试(CCK8)选择每种细胞类型的MGO浓度。然后，在室温下，将裂解溶液添加到各孔中30min。然后，将200g的细胞裂解物离心10min。然后，根据供应商描述的过程将20微升的该细胞裂解物用于ELISA。如此，将细胞裂解物应用于覆盖有抗组蛋白抗体的平板，使得可以观察到DNA的片段化。然后，与抗DNA抗体结合的过氧化物酶在其底物ABTS(2,2'-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二铵)和H2O2的存在下反应，以得到光密度反映细胞凋亡水平的其绿色衍生物。使用Perkin Elmer 2103
Figure BDA0001574366190000851
酶标仪在405nm处测量吸光度。在单独的MGO存在下进行阳性对照。
细胞的凋亡由形成代表性实验的三份平均值±标准偏差或进行的三个独立实验的三份平均值±标准偏差表示。
3-结果与讨论:
在通过MGO诱导鼠内皮脑细胞(bEnd.3)的细胞凋亡之后，化合物30b和37c从10μM开始显示出非常令人感兴趣的抗凋亡性质(图42、图43)。因而，它们似乎能够减缓与氧化和羰基应激有关的有害细胞级联，其目的是使用根据本发明的化合物治疗和/或预防动脉粥样硬化。
在通过MGO诱导大鼠嗜铬细胞瘤细胞(作为神经元细胞处理(PC12))的细胞凋亡之后，化合物37c从10μM开始揭示了非常令人感兴趣的抗凋亡性质(图44、图45)。因而，它似乎能够减缓与氧化和羰基应激有关的有害细胞级联，其目的是使用根据本发明的化合物治疗和/或预防神经退行性疾病。对于化合物30b，这一趋势在100μM得到证实。
在通过MGO诱导人成纤维细胞(MRC-5)的细胞凋亡之后，化合物37b和37c在100μM下具有有希望的抗凋亡性质(图46、图47)。因而，它们似乎能够减缓与氧化和羰基应激有关的有害细胞级联，其目的是在化妆品产业中施用根据本发明的化合物以预防皮肤过早老化。
最后，在通过MGO诱导作为神经元细胞处理(PC12)的大鼠嗜铬细胞瘤细胞的细胞凋亡之后，化合物37c在100μM下的抗细胞凋亡性质能够在各三份进行的三个独立实验期间得到证实(图48)。

Claims (12)

1.式I化合物：
Figure FDA0003463502610000011
及其盐，
其中，
n为1-6的整数；
X为CO或CH2；
Y为NR1R2或R2或
Figure FDA0003463502610000012
R1为H或甲基或苄基；
R2为Z-L-R3；
Z为不存在、CO或CH2；
L为不存在、CH＝CH或(CH2)m；
m为1-6的整数；
R3为被至少一个OH基团和选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的一个或多个取代基取代的苯基，或R3为被至少一个OH基团取代并且可能被选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基的一个或多个取代基取代的N-吡啶酮基。
2.根据权利要求1所述的化合物或盐，其具有式II
Figure FDA0003463502610000013
3.根据权利要求1所述的化合物或盐，其具有式III
Figure FDA0003463502610000021
4.根据权利要求1所述的化合物或盐，其具有式IV
Figure FDA0003463502610000022
5.根据权利要求1所述的化合物或盐，其具有式V
Figure FDA0003463502610000023
6.根据权利要求4或5所述的化合物或盐，其中Z-L-R3选自：
Figure FDA0003463502610000024
其中，R5、R6、R9、R10、R11、R16、R17和R21彼此独立地选自OH、C1-C4烷氧基和C1-C4烷基。
7.根据权利要求1所述的化合物或盐，其具有式VI
Figure FDA0003463502610000031
8.根据权利要求1所述的化合物或盐，选自：
(E)-4,5-二氨基-1-(4-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰基)哌嗪-1-基)戊-1-酮,
(E)-N-(5,6-二氨基己基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺,
4,5-二氨基1-(4-(3,4,5-三羟基苯甲酰)哌嗪-1-基)戊-1-酮,
N-(5,6-二氨基己基)-3,4,5-三羟基苯甲酰胺,
N-(4,5-二氨基戊基)-3-(3-羟基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺,
N-(5,6-二氨基己基)-3-(3-羟基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺,
4,5-二氨基-N-(3-(3-羟基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙基)戊酰胺，
1-(3-(4-(3,4-二氨基丁酰基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-3-羟基吡啶-2(1H)-酮，
1-(2-(4-(4,5-二氨基戊酰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-3-羟基吡啶-2(1H)-酮，
1-(3-(4-(4,5-二氨基戊酰基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-3-羟基吡啶-2(1H)-酮，
N-(4,5-二氨基戊基)-2-(3-羟基-2-甲基-4-氧代吡啶-1(4H)-基)乙酰胺，
N-(5,6-二氨基己基)-2-(3-羟基-2-甲基-4-氧代吡啶-1(4H)-基)乙酰胺，
N-(5,6-二氨基己基)-3-(3-羟基-2-甲基-4-氧代吡啶-1(4H)-基)丙酰胺，
4,5-二氨基-N-(3-(3-羟基-2-甲基-4-氧代吡啶-1(4H)-基)丙基)戊酰胺，
1-(2-(4-(4,5-二氨基戊酰基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-3-羟基-2-甲基吡啶-4(1H)-酮，
1-(3-(4-(4,5-二氨基戊基)哌嗪-1-基)丙基)-3-羟基吡啶-2(1H)-酮，
1-(3-((4,5-二氨基戊基)(甲基)氨基)丙基)-3-羟基吡啶-2(1H)-酮，
1-(5,6-二氨基己基)-3-羟基-2-甲基吡啶-4(1H)-酮。
9.药物组合物，其包含至少一种根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐之一和至少一种药学上可接受的赋形剂。
10.有效量的根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗和/或预防与晚期糖基化终产物和/或晚期脂质过氧化终产物积聚有关的疾病或失调的药物中的用途，其中所述疾病或失调选自神经退行性疾病和动脉粥样硬化。
11.根据权利要求10所述的用途，其中所述疾病或失调选自阿尔茨海默病或帕金森病。
12.化妆品组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物。
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
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GR01 Patent grant
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