CN107893056A - 山羊疱疹病毒ⅰ型疫苗株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株及其应用，涉及兽医生物制品领域。山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株，是山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株，保藏编号为CCTCC NO：V201745。采用牛肾传代细胞增殖上述病毒得到病毒液。本发明还提供所述疫苗株在制备山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗中的应用。本发明山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株对山羊有较强的致病性，且具有良好的免疫原性。应用山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株制备的油佐剂灭活疫苗安全可靠，山羊免疫后能够产生较高水平的抗体，抗体持续期达到6个月，并且对同源毒种攻毒具有非常好的保护效果，免疫后羊群的发病率明显减少，能够有效预防山羊疱疹病毒Ⅰ型的流行。

Description

山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株及其应用

技术领域

本发明涉及兽医生物制品领域，特别是涉及一株山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株及其应用。

背景技术

山羊疱疹病毒Ⅰ型(Caprine herpesvirus 1，CpHV-1)属于疱疹病毒科疱疹病毒甲亚科水痘病毒属的双链DNA病毒。该病毒感染成年山羊后表现为亚临床感染，可导致产生不同的症状，包括呼吸系统疾病、发热和白细胞减少，外阴阴道炎和包皮龟头炎。怀孕3至4个月的山羊感染后可诱发流产。新生儿表现严重感染，主要症状为发热、结膜炎、眼分泌物增多、呼吸困难、肠道溃疡性和坏死性病变，并伴随着较高的发病率和死亡率。1974年，CpHV-1首先在美国加利福尼亚表现为肠炎的新生羔羊病料中分离到，此后相继在欧洲、澳大利亚、新西兰和加拿大出现该病毒的流行，严重危害养羊业的发展。此前我国一直没有该病报道。目前我国尚无可以预防山羊疱疹病毒Ⅰ型感染的疫苗。因此，研制针对我国流行毒株的灭活疫苗与相应的活疫苗综合应用迫在眉睫。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一株山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株，该疫苗株具有较强的毒力和很高的免疫原性。

本发明的另一目的是提供山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株的应用，采用所述山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株制备的山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗，山羊免疫后能够产生较高水平的抗体，抗体持续期达到6个月，并且对同源毒种攻毒具有非常好的保护效果，免疫后羊群的发病率明显减少，能够有效预防山羊疱疹病毒Ⅰ型的流行。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株，是山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株，保藏编号为CCTCC NO：V201745。

本发明还提供所述山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株病毒液，采用牛肾传代细胞增殖所述山羊疱疹病毒Ⅰ型，得到所述病毒液。

本发明还提供所述山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株在制备山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗中的应用。

本发明还提供一种疫苗，所述疫苗含有山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株。

在本发明中，所述疫苗含有灭活的山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株。

优选的技术方案中，所述疫苗的剂型为油乳剂。

优选的技术方案中，所述疫苗采用如下方法制备：将注射用白油和司盘-80混匀，得到油相；将山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株灭活病毒液与吐温-80混匀，得到水相；将水相和油相混合，乳化，得到所述疫苗。

有益效果：本发明的山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株具有稳定的生物学特性，对山羊有较强的致病性，且具有良好的免疫原性。应用山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株制备的油佐剂灭活疫苗安全可靠，山羊免疫后能够产生较高水平的抗体，抗体持续期达到6个月，并且对同源毒种攻毒具有非常好的保护效果(不发病、不排毒)，免疫后羊群的发病率明显减少，能够有效预防山羊疱疹病毒Ⅰ型的流行。

附图说明

图1致病性试验中羊群体温变化图。

图2免疫后攻毒各组羊群体温变化图。

图3免疫后第1、2组羊群血清中和抗体水平动态变化图，横坐标的时间为免疫后时间，其中0天是指第1组山羊第二次免疫时间。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域内的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书的保护范围。

实施例1山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株的分离与鉴定

1、现地样品和细胞

2014年，我国江苏省海安县等地规模化山羊场陆续出现以呼吸道症状为主的疾病，表现为精神沉郁、喘气、咳嗽、流浆液或浓性鼻液。采集发病山羊的鼻拭子，-80℃保存。牛肾传代细胞(MDBK)购自中国兽医药品监察所。

2、病毒的分离及鉴定

2.1病毒的分离纯化

将采集的发病山羊的鼻拭子样本经0.22μm滤膜过滤除菌，接种于MDBK单层细胞培养，于37℃、5％CO₂细胞培养箱中避光培养，每天观察细胞病变(CPE)。盲传至第3代时，在接毒后24-48h产生明显CPE。传至第5代后可出现稳定的CPE。将分离到的病毒接种于24孔板中已培养至致密单层MDBK细胞上，摇匀后置37℃感作1h，吸弃病毒液，用PBS洗涤3次后，将含1.5％中性红的琼脂糖培养基铺于细胞上，置于37℃、5％CO₂细胞培养箱中避光培养，挑选单个蚀斑，冻融3次后接种于MDBK细胞上扩大培养。经三轮蚀斑纯化后，将最后一次挑取的蚀斑接种于MDBK细胞上扩大培养，作为第1代纯化病毒。

2.2病毒粒子形态学观察：第1代纯化病毒传代至第4代，感染MDBK细胞后所得培养物200mL，于1 2000rpm/min离心5min去除细胞碎片，上清经40 000rpm/min超速离心2h，取沉淀用PBS溶解过夜，得到病毒悬浮液。将病毒悬浮液加样于铜网上，2％磷钨酸负染后，透射电子显微镜(Tecnai 12，PHILIPS)下观察病毒粒子形态。结果可见直径约100nm球状的病毒颗粒，核衣壳呈正二十面体对称，有囊膜且囊膜表面可见明显的突起。符合疱疹病毒Ⅰ型的一般形态特征。

2.3gB基因克隆及进化分析：根据GenBank不同毒株基因序列设计引物分两段扩增完整的CpHV-1gB基因：F1和R1，F2和R2。其中F1的序列如下：5’-GTGCCCCAGCGGCGTCTACCTAA-3’，R1的序列如下：5’-CGCCAGGTACGTGTCCGTCTTCCC-3’；F2的序列如下：5’-CGGGACGAAAGTCGCGGAAAC-3’；R2的序列如下：5’-TCATGCCCCCCCGACGTC-3’。按照下述PCR体系和程序分别进行PCR扩增：(1)PCR体系1：总体积20μL，其中2×GC Buffer 10μL，dNTPs 2μL，LATaq酶0.2μL，F1、R1各1μL，DNA模板(第1代纯化病毒传代至第4代后提取的DNA)2μL，ddH₂O补足体积至20μL。扩增程序1：95℃5min；95℃1min，52℃1min，72℃45s，35个循环；72℃10min。(2)PCR体系2：总体积20μL，其中2×GC Buffer 10μL，dNTPs 2μL，LA Taq酶0.2μL，F2、R2各1μL，DNA模板(第1代纯化病毒传代至第4代后提取的DNA)2μL，ddH₂O补足体积至20μL。扩增程序2：95℃5min；95℃1min，48℃1min，72℃45s，35个循环；72℃10min。将PCR产物纯化后分别克隆至pMD18-T载体，阳性质粒送南京擎科生物科技有限公司进行测序。将测序结果进行拼接，最终得到完整的CpHV-1gB基因(如SEQ ID No：1所示)，该分离株gB基因共2763bp，与GenBank上国外山羊疱疹病毒Ⅰ型毒株的gB基因序列进行比对，同源性达99％。

第1代纯化病毒传代至第4代，经病毒粒子形态学鉴定及gB基因序列分析，鉴定为山羊疱疹病毒Ⅰ型，根据该毒株的来源地将其命名为JSHA1405株。

3、病毒的致病性试验

3.1攻毒用毒种的制备：将JSHA1405株病毒液按0.01MOI接种70％汇合度的MDBK细胞，置于37℃、5％CO₂细胞培养箱中避光培养，在接毒后48h收集细胞培养物，反复冻融3次后离心取上清液，即为JSHA1405株病毒液。按Reed-Muench法计算TCID₅₀，并按照现行《中华人民共和国兽药典》附录进行纯净性检验。病毒液应无杂菌生长，且病毒含量≥10⁷TCID₅₀·mL^-1为合格。

3.2动物分组及病毒感染程序：选取CpHV-1抗原和抗体检测均为阴性的2-3月龄健康山羊10只，随机分为攻毒组和对照组，每组5只；其中攻毒组进行JSHA1405株病毒感染，每头肌注JSHA1405株病毒液3mL(3×10^7.5TCID₅₀)。对照组，按相同剂量和方法接种MDBK细胞培养上清。攻毒后两组分圈饲养，观察21天，每天定时测定直肠温度，观察并记录各组山羊的临床症状。攻毒后第1、3、5、7、9、12、14天采集各组山羊的鼻拭子和肛拭子，-80℃保存。

3.3PCR检测与病毒分离：采用试剂盒提取鼻拭子、肛拭子总DNA，PCR扩增CpHV-1gB基因检测排毒情况，PCR总体积20μL，其中2×GC Buffer 10μL，dNTPs 2μL，LA Taq酶0.2μL，上下游引物各1μL(F5’-TCGAAGGCCGAGTACCTGCG-3’，R5’-CCAGTCCCAGGCCACGGTCAC-3’)，DNA模板2μL，ddH₂O补足体积至20μL。扩增程序：95℃5min；95℃30s，60℃1min，72℃30s，35个循环；72℃10min。反应结束后取PCR产物于1.2％的琼脂糖凝胶中电泳检测，并拍照记录。将PCR检测为阳性的样品，按2.1中方法在MDBK细胞上进行病毒分离，观察细胞病变。

3.4结果：攻毒组山羊在感染病毒后第1天开始出现体温升高(＞40℃)，发热过程最长可持续至攻毒后10天(图1)，第3天出现呼吸道症状并持续到12天，羊群表现为精神沉郁、流浆液性或脓性鼻涕(表1)。对照组山羊表现正常(图1，表1)。

PCR检测采集的临床样本，结果显示，攻毒组山羊可以通过鼻腔和肠道排毒，感染后3天可在鼻拭子和肛拭子中检测到病毒，排毒可持续6天左右(表1)。对照组山羊临床样本检测均为阴性(表1)。将检测为阳性的条带回收后送测序公司测序，结果显示扩增毒株为CpHV-1JSHA1405株。

PCR检测阳性样品经MDBK细胞分离能产生稳定的细胞病变，收集传代病毒经PCR检测为CpHV-1JSHA1405株。

表1各组山羊临床症状、排毒情况检测结果

注：表1中“-”表示无；“+”表示轻度；“++”表示中度。

实施例2山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)的免疫效力试验

1、毒种

制苗用毒种为山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏信息如下：

分类命名：山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株

Caprine Herpesvirus 1JSHA1405；

地址：中国武汉武汉大学，邮编430072；

保藏编号：CCTCC NO：V201745；

保藏日期：2017年10月24日。

2、毒种的制备

培养MDBK细胞至汇合度达到70％，去掉培养液，接种山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株，加入细胞维持液(含2％胎牛血清的DMEM培养液)，于37℃、5％CO₂细胞培养箱中避光培养，在接毒后48h收集细胞培养物，反复冻融3次，离心后取上清液，作为JSHA1405株病毒液。按Reed-Muench法计算TCID₅₀，并按照现行《中华人民共和国兽药典》附录进行纯净性检验。病毒液无杂菌生长，且病毒液的病毒含量为10⁵TCID₅₀·mL^-1。

在生产过程中，含量≥10⁵TCID₅₀·mL^-1的病毒液，均可以用于制苗。

3、病毒液的灭活与灭活检验

在JSHA1405株病毒液中，加入终浓度为0.3％(体积百分浓度)的甲醛，随后充分摇匀，置37℃下灭活24h，得到JSHA1405株灭活病毒液。灭活后的病毒液置于2-8℃保存备用。

将灭活后的病毒液样本用细胞维持液作10倍稀释，接种长至70％汇合度的MDBK细胞，接种量为10％(V/V)，37℃吸附1h，加入细胞维持液培养24h后倾去细胞维持液，加入细胞维持液继续培养48h，反复冻融3次后收获病毒液，按上述方法在MDBK细胞上盲传1代。结果：盲传一代后MDBK细胞正常生长，因此灭活完全。

4、灭活疫苗的制备

将注射用白油与司盘-80按照体积比为94：6混合，充分混匀，高压灭菌制成油相。将JSHA1405株灭活病毒液与吐温-80按照体积比为100:4混合均匀，制成水相。将油相与水相按照体积比为2:1混合，乳化，制得山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗。取10mL疫苗以3 000rpm/min离心15min，水相析出不超过0.5mL，判定为乳化合格。将乳化合格疫苗分装于灭菌后的疫苗瓶内，2-8℃保存，以备检验。

5、山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗的效力评价

5.1试验分组：选取CpHV-1抗原和抗体检测均为阴性的2-3月龄健康山羊15只，随机分为三组(攻毒组、免疫攻毒组和对照组)，每组5只。免疫攻毒组，免疫山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(本实施例标题4制备)，剂量为2mL/只，首次免疫后2周用同等剂量疫苗加强免疫一次；攻毒组和对照组不免疫。免疫攻毒组首免后30天，攻毒组和免疫攻毒组山羊采用JSHA1405株进行攻毒，每头肌注JSHA1405株病毒液3mL(3×10^7_.5TCID₅₀)。对照组山羊按相同剂量和方法肌注MDBK细胞培养上清。攻毒后三组分圈饲养，观察21天，每天定时测定直肠温度，观察并记录各组山羊的临床症状。攻毒后第1、3、5、7、9、12、14天采集各组山羊的鼻拭子和肛拭子，PCR检测排毒(PCR检测方法参照实施例1)。

5.2结果：攻毒组5只山羊全部发病，羊群表现为精神沉郁、发热(＞40℃，图2)且发热过程可达7天左右、流浆液性或脓性鼻涕(表2)；PCR检测采集的临床样本，攻毒组山羊可以通过鼻腔和肠道排毒，个别山羊排毒可持续10天左右(表2)；对照组山羊和免疫攻毒组山羊均表现正常，且未检出排毒(图2，表2)。说明山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)可以有效预防山羊疱疹病毒Ⅰ型的感染。

表2各组山羊临床症状、排毒情况检测结果

注：表2中“-”表示无；“+”表示轻度；“++”表示中度。

实施例3山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)安全性试验

1、试验用疫苗

按照实施例2中的方法于实验室制备了3个批次山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗，批号分别为：SZ-001、SZ-002、SZ-003，500头份/瓶，2-8℃保存。

2、实验动物

CpHV-1抗原抗体均为阴性的健康怀孕母羊和2-3月龄健康羔羊，购自江苏省句容市某山羊养殖场。

3、羔羊安全性试验

3.1分组及方案：将2-3月龄羔羊50只随机分为4组(单倍剂量组、双倍剂量组、单倍剂量重复组和对照组)，其中单倍剂量组、双倍剂量组、单倍剂量重复组各组15只，分为3种不同程序进行免疫，对照组5只。单倍剂量组，颈部肌肉注射灭活疫苗，2mL/只；、双倍剂量组，颈部肌肉注射灭活疫苗，4mL/只；单倍剂量重复组，首免2mL/只，首免后14天按照首免相同方法重复注射一次；对照组，免疫PBS缓冲液。注射后观察有无过敏反应及一过性热反应；每天测量直肠温度，并观察各组山羊精神状况、饮水及进食等情况；触摸检查每头山羊注射部位，是否有红肿热痛等局部炎症反应；分别在免疫前和免疫后21天称量体重，免疫组和非免疫组比较平均相对日增重有无明显差异；免疫21天后剖杀试验山羊，检查注射部位疫苗吸收情况及病理变化。

3.2结果：将45只羔羊分别按照单倍剂量、双倍剂量及单倍剂量重复接种3批山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗，连续观察21天，结果各组羔羊精神状态、采食、饮水均正常，未出现过敏反应及一过性热反应，触摸接种部位，未发现肿胀；称重免疫组与非免疫组体重无显著差异(详见表3)。免疫21天后，将各组羔羊进行剖杀，观察疫苗吸收情况，结果注射部位吸收良好，无水肿、渗出和出血等病理变化。因此，山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)对2-3月龄羔羊是安全的。

表3羔羊安全性试验

4、怀孕母羊安全性试验

4.1分组及方案：对50只怀孕母羊进行山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)的安全性试验，具体分组情况同羔羊。单倍剂量组，产前1个月接种2mL/只；双倍剂量组，产前1个月接种4mL/只；单倍剂量重复组，配种前1个月首免2mL/只，产前1个月按照首免方法重复注射一次；对照组注射PBS，2mL/只。注射后每天观察各组羊精神状况、饮水、进食量等情况；有无过敏反应；每天测量体温，并观察有无一过性热反应；免疫后7、14、21天触摸检查各免疫组羊注射部位，是否有红肿等局部注射炎症反应，连续观察21天，注意有无流产现象发生。

4.2结果：各组怀孕母羊精神状态、采食、饮水均正常；未出现流产、死胎及一过性热反应等，详见表4。

表4怀孕母羊安全性试验

因此，山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)对怀孕母羊是安全的。

实施例4山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)免疫持续期试验

1、试验用疫苗

山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)按照实施例2中方法所制，批号为SZ-002。

2、动物分组及方案

2-3月龄的健康羔羊20只，随机分成4组，每组5只。第1组为免疫7个月试验组；第2组为免疫6个月试验组。第1组、第2组均免疫两次，第1组首次免疫一个月后第2组开始第一次免疫，免疫方法如下：每只颈部肌肉注射批号为SZ-002的山羊疱疹病毒Ⅰ型灭活疫苗(JSHA1405株)2mL，首次免疫后2周用同等剂量疫苗加强免疫一次。第3组为非免疫攻毒对照组，第4组为健康对照组，第3、4组均不免疫。各组分圈饲养。第1组山羊第二次免疫时间记为免疫后0天，第1、2组山羊在免疫后0天及免疫后1、2、3、4、5、6、7个月采血监测血清中和抗体水平。

第1组免疫后7个月(即第2组免疫后6个月)对第1-3组山羊分别采用JSHA1405株病毒液进行攻毒，每头肌注JSHA1405株病毒液3mL(3×10^7.5TCID₅₀)。第4组山羊按相同剂量和方法肌注MDBK细胞培养上清。攻毒后各组分圈饲养，观察21天，每天定时测定直肠温度，观察并记录各组山羊的临床症状。攻毒后第1、3、5、7、9、12、14天采集各组山羊的鼻拭子和肛拭子，PCR检测排毒(PCR检测方法参照实施例1)。

3、免疫后血清中和抗体水平监测

第1组山羊在第一次免疫后14天(即0天)已出现中和抗体，可持续至二免后7个月；第2组山羊在第一次免疫后14天出现中和抗体，二免后6个月仍能监测到较高的中和抗体水平。具体结果见图3。

4、攻毒后各组临床症状及排毒检测结果

攻毒后，第3组(非免疫攻毒对照组)5只山羊全部发病，羊群表现为精神沉郁、发热、流浆液性或脓性鼻涕，PCR检测采集的临床样本，攻毒组山羊可以通过鼻腔和肠道排毒；第2组(免疫6个月组)山羊在攻毒后均表现正常，且未检出排毒；免疫7个月组5只山羊在攻毒后有2只出现体温升高，流鼻涕，且能检测出排毒；健康对照组山羊表现正常。具体结果详见表5。因此，本发明疫苗免疫持续期可达6个月。

表5攻毒后各组山羊临床症状、排毒情况检测结果

注：表5中“-”表示正常；“+”表示轻度；“++”表示中度。

SEQUENCE LISTING

<110> 江苏省农业科学院

<120> 山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株及其应用

<130> 20171212

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 2763

<212> DNA

<213> 山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株

<400> 1

atgccccctc gcggcagtgc tgaacggcgc gcgggccccg gcgaccgtca acgaggacag 60

cgttgtcatc tacgaccggg acgtgttttc cctgctctac gcggtcttgc agcacctggc 120

gccggcggcc cgcgggccgc gctagcggcg gcgctgctct gggccgcctg ggctctgctg 180

ctggcggcgc cggcggcggc gctgccgacg gcgccgccct cggcgccggc gacgagcccc 240

gccccgccgt ctgcggacgg cgcgaccgcg gcggcgggca acgagacggc cgcggacgac 300

gtgcgcgcgg tgctccggga ggcgcaggcg gcgggcgagc attcgcagtt ttttgtgtgc 360

ccgcccccct cgggcgccac ggtggtccgc ctcgcgcccg ggcggccgtg ccccgagtac 420

gagctcggcc ggaactacac cgaggggatc ggcatcatct acaaggagaa catcgccccg 480

tacaagttca aggcccacat atactacaag aacgtgatcg tcaccaccac gtggtcgggg 540

agcacgtacg cggccatcac aaaccagcac accgaccgcg ttcccgtggg cgtgagcgag 600

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gggcgcaagg tcgtggcctt tgaccgcgac gcagacccct gggaggcgcc gctcaagccg 720

tcgcggctca acgcgcccgg ggcccgcggg tggcacacga cggacgaggt gcacaccgtg 780

gtggggtccg tcgggctcta ccgcacgggc acctctgtga actgcatcgt ggaggaggtg 840

gaggcccgct ccgtgtaccc gtacgactcg ttcgccctct ctaccggcga cattatttac 900

atgtcgccgt tctacgggct ccgcgagggc gcgcaccgcg agcacaccag ctactcgccg 960

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ggggaccccg tgtcgcggaa cttcctgcgc acccagcacg tgaccgtggc ctgggactgg 1080

gtccccaagc gcaagaacgt gtgctcgctg gcccggtggc gcgcggccga ggagatgctc 1140

cgggacgaaa gtcgcggaaa ctaccgcttc acggcccgcg cgctctcggc caccttcgtg 1200

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gggaagacgg acacgtacct ggcgcgcggc ggcttcgtcg tggccttccg gccgctgctc 1380

agcaacgagc tggccaagct gtacctccag gagctggccc gctcgaaccg cacgctcgac 1440

ggcgtcctcg gcccgcgcct ccccgccggc gccgcgccgt ctggcgccct ccgccgggcg 1500

cgccgcgcgg cacccggcgg gggcggcggg gcggggcggg tgaccacagt aagctcggcc 1560

gagttcgccg cgctgcagtt tacgtacgac cacatccagg accacgtaaa cgccatgttt 1620

agccgcctgg ccacgtcgtg gtgtctgctg cagaacaagg agcgggccct gtgggccgag 1680

gcggccaagc tcaaccccag cgcggcggcc agcgccgcgc tgaaccgccg cgccgcggcg 1740

cgcatgctgg gggacgccat ggccgtgacg tactgccggg agctgggcgc cgggcgcgtg 1800

ttcatcgaaa actcgatgcg catgcccggc ggcgccgcgt gctacagccg gccgctggtc 1860

tccttcgcct acggcaacga gagcgagccg ctggagggcc agctgggcga ggacaacgag 1920

ctgctgctca gccgggacct cgtcgagccc tgcgccgcca accaccggcg ctacttccgc 1980

ttcggcgcgg actacgtgta ctacgagaac tacgcgtacg tccggcgggt cccgctcacg 2040

gagatcgaga cgatcagcac gttcgtggac ctgaacctca cggtcctcga ggaccgcgag 2100

ttcctgccgc tggaggtgta cacccgcgcg gagctcgccg acacgggcct cctggactac 2160

agcgagatcc agcgccgcag ccagctgcac gagctcaagt tctacgacat agaccgcgta 2220

gtgaagctgg acagcaacat ggtcatcatg cgcggcctcg cgagcttctt ccagggcatg 2280

ggcgccgtcg ggcaggcggt gggcacggtt gtgctgggcg ctgcgggggc ggcgctgtcg 2340

acggtcgccg gcatcacctc gttcctctcg aacccgttcg gcgcgctggc cgtggggctc 2400

ctagtagtcg ccgggctcgt ggccgccttc ctggcgtacc ggtacatctc caagattcgc 2460

agcaacccca tgaaggccct gtacccgatc accacgcgcg cgctcaagga cgacgcgcgc 2520

ggcggcgccg gcggagacgc cgcgggcgac gaggagttcg acgaggccaa actagagcag 2580

gcccgcgaga tgattaagta catgtcgttt gtgtcggcgg ccgagcgcca ggagcacaag 2640

gcgaagaagc ggaacaaggg cgggccgctg ctggcgaacc gcctgacgca gcttgccctg 2700

cggcagcggg cgcgccccgc gtaccagcag ctcccgatgt ccgacctcga ggaacacagc 2760

tga 2763

Claims (7)

1.山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株，是山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株，保藏编号为CCTCC NO：V201745。

2.权利要求1所述山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株病毒液，其特征在于采用牛肾传代细胞增殖所述山羊疱疹病毒Ⅰ型，得到所述病毒液。

3.权利要求1所述山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗株在制备山羊疱疹病毒Ⅰ型疫苗中的应用。

4.一种疫苗，其特征在于所述疫苗含有山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株。

5.根据权利要求4所述疫苗，其特征在于所述疫苗含有灭活的山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株。

6.根据权利要求5所述疫苗，其特征在于所述疫苗的剂型为油乳剂。

7.根据权利要求6所述疫苗，其特征在于所述疫苗采用如下方法制备：将注射用白油和司盘-80混匀，得到油相；将山羊疱疹病毒Ⅰ型JSHA1405株灭活病毒液与吐温-80混匀，得到水相；将水相和油相混合，乳化，得到所述疫苗。