CN107868810B - 一种具有降血糖活性的海地瓜活性肽 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种具有降血糖活性的海地瓜活性肽，利用海地瓜降糖肽制备口服液的方法，采用海地瓜作为原料，能够从海地瓜中制备海地瓜活性多肽，成本低且绿色环保，口服海地瓜活性多肽能够辅助降低血糖，具有辅助降血糖功效，可以将海地瓜降糖肽作为有效成分，制备口服液，具有良好的市场前景。本发明利用海地瓜降糖肽制备口服液的方法，制备简单，可控性好，易于操作和实施，易于工业化大规模生产，具有广阔的应用前景和良好的经济效益。
Description
技术领域
本发明属于活性物质开发技术领域，具体涉及一种具有降血糖活性的海地瓜活性肽及其应用。
背景技术
糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特征的代谢性疾病，主要表现为烦渴、多饮、多尿、多食、乏力、消瘦等症状。持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致全身组织器官，特别是眼、肾、心血管及神经系统的损害及其功能障碍和衰竭。目前，已批准上市的降血糖药物很多，但均具有较强的副作用，因此，口服食源性的具有降血糖作用的口服液是一种非常有效的方法。
海地瓜盛产于亚热带沙质海区，日本、菲律宾、印度尼西亚及我国山东到海南岛的海域均有分布，资源丰富。其营养成分和口感与刺参相差不大，但价格低廉，因而常作为刺参的替代品。海地瓜含有很丰富的氨基酸和有益于人体的多种微量元素及维生素。目前海地瓜的开发都是简单的作为食品，缺少深加工。因此，以海地瓜为原料，利用现代分离技术分离制备海地瓜活性肽，进而研发以此为原料的健康产品，充分利用这一海洋资源，具有重要的意义。
发明内容
本发明提供一种具有降血糖活性的海地瓜活性肽及其应用，本发明从海地瓜中制备海地瓜降糖肽，成本低且绿色环保，再将海地瓜降糖肽作为有效成分，制备口服液，具有辅助降血糖的功效。
本发明首先提供一种具有降血糖活性的活性肽，是从海地瓜中分离制备的；
所述的活性肽，其分子量为360Da-1000Da；
本发明所提供的活性肽，其制备方法如下：
1)将原料海地瓜粉碎后，加入蒸馏水获得悬浊液；
2)在步骤1)的悬浊液中加入复合蛋白酶进行酶解，酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，离心取上清，得到总海地瓜多肽溶液；
其中蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶，
酶解条件为时间1-5h，温度50℃，pH值6-8；
所述的离心条件如下：8000-12000rpm，离心10-30min；
3)将总海地瓜多肽溶液进行分离后得到海地瓜活性多肽溶液；所述的分离条件如下：先利用分子量1000Da的膜分离，再利用分子量360Da的膜进行分离，得到360-1000Da范围的多肽；
本发明的活性肽用于制备降血糖的制品；
所述的制品，作为实施例的具体记载为口服液；
所述的口服液，其溶液为水、果葡萄糖浆、海地瓜活性肽、枸杞，活性肽的浓度为0.5％-10％。
本发明利用海地瓜降糖肽制备口服液的方法，采用海地瓜作为原料，能够从海地瓜中制备海地瓜活性多肽，成本低且绿色环保，口服海地瓜活性多肽能够辅助降低血糖，具有辅助降血糖功效，可以将海地瓜降糖肽作为有效成分，制备口服液，具有良好的市场前景。本发明利用海地瓜降糖肽制备口服液的方法，制备简单，可控性好，易于操作和实施，易于工业化大规模生产，具有广阔的应用前景和良好的经济效益。
具体实施方式
通过以下具体实施例对本发明做进一步的具体说明，但应该理解本发明并不受这些内容所限制。
实施例1：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:6；然后加入2％胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶(1:1)酶解，酶解过程中使用磁力搅拌器，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心20min后取上清，上清液经1000Da和360Da的膜进行过滤，收集360-1000分子量的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到10.65g海地瓜多肽。通过α-淀粉酶抑制剂筛选模型、α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型、DPP4抑制剂筛选模型及高糖损伤后胰岛细胞分泌胰岛素模型等多种筛选评价方法确定经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶酶解所得的海地瓜多肽具有降血糖功效。采用高效液相色谱仪测定法，以分子量360-1000Da的多肽为指标，分析酶解产物中多肽的比例，具体方法见GB/T22729-2008。根据色谱图可知，通过与蛋白质标准分子量对比，本实施例中得到的海地瓜降糖肽在360Da-1000Da分子量之间。将海地瓜降糖肽以2％的比例添加制备口服液，配料主要有果葡萄糖浆和枸杞。
实施例2：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:6；然后加入2％胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶(3:2)酶解，酶解过程中使用磁力搅拌器，酶解时间2h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心20min后取上清，上清液经1000Da和360Da的膜进行过滤，收集360-1000分子量的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到13.5g海地瓜多肽。通过α-淀粉酶抑制剂筛选模型、α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型、DPP4抑制剂筛选模型及高糖损伤后胰岛细胞分泌胰岛素模型等多种筛选评价方法确定经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶酶解所得的海地瓜多肽具有降血糖功效。采用高效液相色谱仪测定法，以分子量360-1000Da的多肽为指标，分析酶解产物中多肽的比例，具体方法见GB/T22729-2008。根据色谱图可知，通过与蛋白质标准分子量对比，本实施例中得到的海地瓜降糖肽在360Da-2500Da分子量之间。
实施例3：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:6；然后加入4％胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶(3:1)酶解，酶解过程中使用磁力搅拌器，酶解时间2h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心20min后取上清，上清液经1000Da和360Da的膜进行过滤，收集360-1000分子量的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到17.8g海地瓜多肽。通过α-淀粉酶抑制剂筛选模型、α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型、DPP4抑制剂筛选模型及高糖损伤后胰岛细胞分泌胰岛素模型等多种筛选评价方法确定经胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶酶解所得的海地瓜多肽具有降血糖功效。采用高效液相色谱仪测定法，以分子量360-1000Da的多肽为指标，分析酶解产物中多肽的比例，具体方法见GB/T22729-2008。根据色谱图可知，通过与蛋白质标准分子量对比，本实施例中得到的海地瓜降糖肽在360Da-1000Da分子量之间。
实施例4：
将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:6；然后加入2％胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶(1:1)酶解，酶解过程中使用磁力搅拌器，酶解时间2h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心20min后取上清，上清液经1000Da和360Da的膜进行过滤，收集360-1000分子量的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到11.4g海地瓜降糖肽。经检测，海地瓜降糖肽菌落总数为25CFU·g-1，大肠菌群＜30MPN·(100g)-1，霉菌＜10CFU·g-1，沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌均未检出，因此微生物检测指标均符合要求；总砷含量(以As计)为0.021mg·kg-1，铅(Pb)含量为0.13mg·kg-1，铜(Cu)未检出，因此，重金属均符合食品安全要求。
一、海地瓜活性多肽辅助降血糖功效的确定
在通过α-淀粉酶抑制剂筛选模型、α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型、DPP4抑制剂筛选模型及高糖损伤后胰岛细胞分泌胰岛素模型等多种筛选评价方法确定本发明技术制备的海地瓜多肽具有降血糖功效的基础上，参照保健食品检验与评价技术规范(2003版)描述的方法测定采用本发明技术制备的海地瓜活性多肽辅助降血糖功效。
实验动物：SD大鼠(180±20g)，雄性，每组8-12只。高血糖动物模型建立：大鼠禁食24h后，给予四氧嘧啶造型，5-7天后禁食3-5小时，测血糖，血糖值10-25mmol/L为高血糖模型成功动物。
选高血糖模型动物按禁食3-5小时的血糖水平分组，随机选1个模型对照组和3个剂量组(5、10、15mg/kg体重)。剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予溶剂，连续30天，测空腹血糖值(禁食同实验前)。比较各组动物血糖值及血糖下降百分率。
结果表明，当剂量组大鼠给予海地瓜活性多肽10mg/kg体重时，30天后，空腹血糖试验后与试验前具有显著性差异，且试验后平均血糖下降12％；试验后10mg/kg体重剂量组大鼠血糖值与模型对照组相比，差异具有显著性，说明海地瓜活性多肽具有辅助降血糖功效。
Claims (6)
1.一种活性多肽，其特征在于，所述的多肽是从海地瓜中分离制备的；其分子量为360-1000Da；所述的多肽的制备方法包括如下的步骤：
1）将原料海地瓜粉碎后，加入蒸馏水获得悬浊液；
2）在步骤1) 的悬浊液中加入复合蛋白酶进行酶解，酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，离心取上清，得到总海地瓜多肽溶液；
所述的蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶；
3）将总海地瓜多肽溶液进行分离后得到海地瓜活性多肽溶液；所述的分离条件如下：先利用分子量1000Da的膜分离，再利用分子量360Da的膜进行分离，得到360-1000Da范围的多肽。
2.如权利要求1所述的活性多肽，其特征在于，所述的步骤2）中酶解条件为时间1-5 h，温度50℃，pH值6-8。
3.如权利要求1所述的活性多肽，其特征在于，所述的步骤2）中离心条件如下：8000-12000rpm，离心10-30min。
4.权利要求1所述的多肽在制备降血糖的制品中的应用。
5.一种降血糖的制品，其特征在于，所述的制品包含有药理有效浓度的权利要求1所述的多肽。
6.如权利要求5所述的降血糖的制品，其特征在于，所述的制品为口服液。
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