CN108934769B - 一种皱盖假芝深层发酵培养基及其制备和使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种食用菌深层发酵领域，尤其涉及一种皱盖假芝深层发酵培养基及其制备方法，包括土豆150‑250g、葡萄糖15‑25g、磷酸二氢钠1.5‑2.5g、硫酸镁0.2‑0.6g、玉米碴5‑15g、水1000mL，所述培养基的pH为5‑6。本发明采用廉价易得的原料，经过反复研究，得到在深层发酵过程中，利于皱盖假芝菌丝体生长和胞外物质积累的培养基，该培养基在灭菌后不产生明显的色素和沉淀，从而不会影响菌丝体产物收获。
Description
技术领域
本发明涉及一种食用菌深层发酵领域，尤其涉及一种皱盖假芝深层发酵培养基及其制备方法。
背景技术
皱盖假芝(Amauroderma rude)是我国传统的药用真菌，自然产于江苏、福建、云南、广东等省份。皱盖假芝在分类学上属于灵芝科(Ganodermataceae)、假芝属(Amauroderma)内，被认为是《神农本草经》中“六芝”的“黑芝”。据中医药学报道，皱盖假芝具有消炎、利尿功效。
皱盖假芝在安徽省有较大面积的人工栽培。发明专利“一种皱盖假芝的人工栽培方法” (201310737785.6)中描述了皱盖假芝的母种、原种、生产种制作以及接种、栽培和出芝管理等步骤，但是，现有技术并未涉及菌丝体的大量获得。皱盖假芝的菌丝体获得方式主要采用液体培养基培养，而子实体获得方式则使用固体培养基培养。据研究报道，进食含有5％皱盖假芝菌丝体水提物的雄性果蝇，其寿命与对照相比，延长幅度超过30％。可见皱盖假芝菌丝体中可能含有抗衰老的水溶性活性成分，具有极大开发研究前景。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种适用于皱盖假芝的深层发酵培养基及其制备方法，该培养基用于皱盖假芝，可以获得很好的菌丝体产量，以及胞外活性物质的产量。
本发明通过以下方案达到上述目的：
在第一方面，提供一种皱盖假芝的深层发酵培养基，包括土豆150-250g、葡萄糖15-25g、磷酸二氢钠1.5-2.5g、硫酸镁0.2-0.6g、玉米碴5-15g、水1000mL，所述培养基的pH为5-6。
优选的，所述土豆为新鲜去皮土豆。
优选的，还包括pH调节剂，所述pH调节剂优选为盐酸溶液，例如1N盐酸溶液。
在一个优选的实施例中，一种皱盖假芝的深层发酵培养基，包括土豆150-250g、葡萄糖 15-25g、磷酸二氢钠1.5-2.5g、硫酸镁0.2-0.6g、玉米碴5-15g、水1000mL、以及适量的1N 盐酸溶液，所述培养基的pH为5-6。
在一个优选的实施例中，一种皱盖假芝的深层发酵培养基，包括土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钠2g、硫酸镁0.4g、玉米碴10g、水1000mL、以及适量的1N盐酸溶液，所述培养基的pH为5.5。
优选的，所述培养基中的土豆在培养基中在水中煮沸后收集滤液(土豆煮液)使用。
优选的，所述培养基中的玉米碴在培养基中加入到土豆的滤液(土豆煮液)中后回流提取并离心，取上清使用。
在第二方面，提供一种上述皱盖假芝的深层发酵培养基的制备方法，包括：将土豆加水煮沸，收集滤液，土豆煮液，向土豆煮液中加入玉米碴，回流提取并离心后得到上清，加入其余组分，溶解，调节pH值，得到深层发酵培养基。
优选的，所述土豆加水煮沸为煮沸后保持15-25分钟，优选20分钟。
优选的，所述煮沸后，采用100-200目滤布滤去土豆，收集滤液，优选200目。
优选的，所述土豆采用土豆颗粒，例如1cm左右立方体土豆颗粒。
优选的，所述收集滤液后，加水补足至煮沸前的水体积，得到土豆煮液。
优选的，所述回流提取为100℃回流提取1.5-2.5小时，优选2小时。
在一个优选的实施例中，一种上述皱盖假芝的深层发酵培养基的制备方法，包括：新鲜去皮土豆切粒土豆颗粒，加水浸没，加热煮沸后保持15-25分钟，以100-200目滤布滤去土豆颗粒，收集滤液，用水补足至加入煮沸前的水体积，得土豆煮液，往土豆煮液内加入玉米碴，100℃水浴回流加热1.5-2.5小时，冷却并离心后，取上清，往上清中按配方比例加入剩余组分，溶解，调节培养基pH至5-6，得深层发酵培养基。
在一个优选的实施例中，一种上述皱盖假芝的深层发酵培养基的制备方法，包括：新鲜去皮土豆切粒成1cm左右立方体土豆颗粒，加水浸没，加热煮沸后保持20min，以200目滤布滤去土豆颗粒，收集滤液，用水补足至加入煮沸前的水体积，得土豆煮液，往土豆煮液内加入经40目筛滤的玉米碴，100℃水浴回流加热2小时，冷却并离心至离心后上清中无明显悬浮物，取上清，往上清中加入剩余组分，溶解，调节培养基pH至5-6，得深层发酵培养基。
在第三方面，提供一种上述制备方法制备得到的皱盖假芝的深层发酵培养基。
在第四方面，提供一种上述皱盖假芝的深层发酵培养基的使用，将所述培养基用于皱盖假芝菌丝体培养。
优选的，所述培养基灭菌后用于皱盖假芝菌丝体培养，所述灭菌例如为121℃、0.1MPa 蒸汽灭菌20min。
研究者发现，目前商业化的真菌培养基虽然可基本满足大多数食药用菌的菌丝体生长发育需要，但是，不同食药用菌在培养基碳氮源比例、营养成分分子构型、培养基总体物理状态等有不同要求，因此，有必要对不同食药用菌菌株最优培养条件进行筛选。
进一步地，含有不同营养成分的培养基，会直接影响食用菌菌丝体的产量及内含物。这一现象提示，通过添加液体培养基适当的营养成分，可能提高假芝菌丝体的产量及活性物质含量。
本发明采用廉价易得的原料，经过反复研究，得到在深层发酵过程中，利于皱盖假芝菌丝体生长和胞外物质积累的培养基，该培养基在灭菌后不产生明显的色素和沉淀，从而不会影响菌丝体产物收获。
附图说明
图1为对比例1的皱盖假芝在不同配方的深层发酵培养16d后菌丝体干重比较。
图2为对比例2的皱盖假芝在不同配方深层发酵培养16d后发酵残液冻干物重比较。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1：
一种上述皱盖假芝的深层发酵培养基的制备方法，该培养基的组分包括新鲜去皮土豆 200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钠2g、硫酸镁0.4g、玉米碴10.0g、水1000mL、以及适量的pH调节剂，pH为5.5，制备方法包括：新鲜去皮土豆切粒成1cm左右立方体颗粒，加入离子水1000mL浸没，加热煮沸后保持20min，以200目滤布滤去土豆颗粒，收集滤液，用水补足1000mL，得土豆煮液，往土豆煮液内加入经40目筛滤的玉米碴10g，100℃水浴回流加热2 小时，冷却并离心(8000rpm，10min)后，取上清，往上清中加入葡萄糖20g、磷酸二氢钠 2g、硫酸镁0.4g，使完全溶解，使用1N盐酸溶液调节培养基pH至pH5.5，得到培养基。
将100mL的上述深层发酵培养基按需要加入250mL三角瓶中，在121℃、0.1MPa下蒸汽灭菌20min后，冷却，接种用于皱盖假芝菌丝体培养。
试验例1
将实施例1的培养基接入等量的皱盖假芝菌种，25℃，避光摇瓶培养16d，测量，结果为：菌丝体(干重)811±47mg；发酵残液冻干物(胞外多糖)重57±13mg。
对比例1：培养基对菌丝体干重的影响
采用实施例1的深层发酵培养基，将其中的玉米碴替换为高粱粉和麸皮粉，按同样的配方和制备方法制得培养基，用以比较，向所有配置好的培养基接入等量的皱盖假芝菌种，25℃，避光摇瓶培养16d，取菌丝体干重作为指标，结果见图1(组间p＜0.05)。
从图1可以看出，含玉米碴的深层发酵培养基培养皱盖假芝时，其收获的菌丝体干重显著大于其他配方，表明本发明的培养基能收获显著增加菌丝体产量。
对比例2：培养基对发酵残液冻干物重的影响
采用实施例1的深层发酵培养基，将其中的玉米碴替换为麸皮粉，按同样的配方和制备方法制得培养基，用以比较，向所有配置好的培养基接入等量的皱盖假芝菌种，25℃，避光摇瓶培养16d，取发酵残液冻干物重作为指标，结果见图2(组间p＜0.05)。
从图2可以看出，含玉米碴的深层发酵培养基培养皱盖假芝时，其发酵残液冻干物重显著大于麸皮粉配方，表明本发明的培养基能显著增加胞外活性物质的产量。
对比例3
采用实施例1的培养基深层发酵培养基，将其中的玉米碴替换为大豆粉，按同样的配方和制备方法制得培养基，用以比较，将两种培养基灭菌后，发现：实施例1的培养基还是澄清液体，而采用大豆粉替换玉米碴的培养基澄清液体因蛋白变性出现结块现象，因此，含玉米碴的深层发酵培养基更加优选作为菌丝体培养的培养基。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (3)
1.一种皱盖假芝的深层发酵培养基，其特征在于，包括土豆150-250g、葡萄糖15-25g、磷酸二氢钠1.5-2.5g、硫酸镁0.2-0.6g、玉米碴5-15g、水1000mL、以及适量的1N盐酸溶液，所述培养基的pH为5-6；所述深层发酵培养基的制备方法包括：新鲜去皮土豆切粒土豆颗粒，加水浸没，加热煮沸后保持15-25分钟，以100-200目滤布滤去土豆颗粒，收集滤液，用水补足至加入煮沸前的水体积，得土豆煮液，往土豆煮液内加入玉米碴，100℃水浴回流加热1.5-2.5小时，冷却并离心后，取上清，往上清中按配方比例加入剩余组分，溶解，调节培养基pH至5-6，得深层发酵培养基。
2.一种权利要求1所述的皱盖假芝的深层发酵培养基的制备方法，其特征在于，包括：新鲜去皮土豆切粒土豆颗粒，加水浸没，加热煮沸后保持15-25分钟，以100-200目滤布滤去土豆颗粒，收集滤液，用水补足至加入煮沸前的水体积，得土豆煮液，往土豆煮液内加入玉米碴，100℃水浴回流加热1.5-2.5小时，冷却并离心后，取上清，往上清中按配方比例加入剩余组分，溶解，调节培养基pH至5-6，得深层发酵培养基。
3.一种权利要求1所述的皱盖假芝的深层发酵培养基的使用方法，其特征在于，将所述培养基用于皱盖假芝菌丝体培养。
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| CN1163930A (zh) * | 1996-12-04 | 1997-11-05 | 张世伟 | 深层发酵法生产灵芝保健饮料 |
| CN101611685A (zh) * | 2009-06-04 | 2009-12-30 | 欧阳小雪 | 一种灵芝菌丝原浆的生产方法 |
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| CN105660191A (zh) * | 2016-03-03 | 2016-06-15 | 广东省农业科学院蔬菜研究所 | 一种乌芝子实体的培养方法 |
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 血芝深层发酵条件优化初探;郑林用等;《西南农业学报》;20070331;第20卷(第1期);107-110 * |
Also Published As
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