CN102224879B - 香菇多肽的制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种香菇多肽的制备方法，包括以下步骤：①将干香菇子实体粉碎，加入8～16倍重量的水，加热至80℃～100℃，维持30min～120min，降至室温；②超声波处理，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的胰酶或蛋白酶，水解120～240min；③调水解液pH值至4.0～6.0，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的木瓜酶或蛋白酶，水解300～500min；酶灭活，降至室温；④水解液pH值至6.0～7.5，加热至90℃～100℃，保持60min～240min，降至室温，离心过滤，收集滤液；⑤按碳重量与滤液体积比为0.5％～2.0％加入活性炭脱色，过滤，滤液为淡黄色澄清液体；经5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集超滤液；干燥，得到香菇多肽。本发明制得的香菇多肽粉纯度为50％以上，具有抗疲劳作用。
Description
技术领域
本发明涉及食品技术领域，尤其是香菇多肽的制备方法和用途。
背景技术
香菇是世界第二大食用菌，在我国民间素有“山珍”之称。据分析，干香菇食用部分占72％，每100g食用部分中含蛋白13g、脂肪1.8g、碳水化合物54g、粗纤维7.8g、灰分4.9g、钙124mg、磷415mg、铁25.3mg、维生素B10.07mg、维生素B21.13mg、尼克酸18.9mg。
香菇含有香菇多糖、香菇多肽等活性成分，具有很高的药用价值，国内外许多专家学者很注重对香菇多糖研究，为了追求高纯度的香菇多糖，香菇多肽在制备香菇多糖的过程中往往被丢弃浪费。
香菇多肽(Lentinan简称LNT)系从真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的的蛋白多糖。肽链由天冬氨酸、组氨酸等18种氨基酸组成，多糖以甘露糖为主，含少量的葡萄糖、木糖等，平均分子量约为50万道尔顿。香菇多肽是香菇中的主要生物活性物质，是理想的免疫促进剂，具有提高人体免疫力、抑制肿瘤、降低转氨酶、护肝以及降低胆固醇等作用。目前对于香菇多肽的报道比较少，CN101709320A中报道利用纤维素酶及蛋白酶对香菇多肽进行提取，此方法比较简单，所得的香菇多肽无论从纯度还是分子量都无法控制。
发明内容
本发明针对不足，提出一种香菇多肽的制备方法，得到纯度高、分子量小的香菇多肽。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种香菇多肽的制备方法，包括以下步骤：
①、将干香菇子实体粉碎，加入8～16倍重量的水，搅拌均匀，加热至80℃～100℃，维持30min～120min，降温至室温；
②、步骤①水溶液进行超声波处理，调pH值至8.0～9.0，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的胰酶或蛋白酶，于40℃～50℃水解120～240min；
③、调节步骤②水解液pH值至4.0～6.0，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的木瓜酶或蛋白酶，40℃～50℃水解300～500min；酶灭活，降至室温；
④、调步骤③灭活后的水解液pH值至6.0～7.5，加热至90℃～100℃，保持60min～240min，降至室温，离心过滤，收集滤液；
⑤、向步骤④滤液中按碳重量与滤液体积比为0.5％～2.0％加入活性碳脱色，过滤，滤液为淡黄色澄清液体；滤液经5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集超滤液；干燥，得到香菇多肽。
优选的，步骤②超声波处理的条件为1000W～4000W、30min～120min。
优选的，步骤③酶灭活条件为100℃，5～15min。
优选的，步骤⑤脱色条件为80～100℃，搅拌20min～60min；脱色和过滤为重复多次操作。
优选的，步骤⑤超滤液过葡聚糖凝胶柱、离子交换树脂或大孔吸附树脂除杂后再干燥。
优选的，所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。
与现有技术相比，本发明通过超声波、酶解、超滤及过柱纯化等方法提纯香菇多肽，产品纯度高达60％以上，香菇多肽分子量控制在5000道尔顿以下，产品功能效果明显，具有调节血脂及抗疲劳作用。
本发明通过对香菇进行双酶水解，将大分子蛋白质水解成小分子多肽，然后用分子截留为5000道尔顿的超滤膜进行超滤，滤过液再过柱纯化，可得纯度高、分子量小的香菇多肽。这种方法具有如下优点：
1、不加入试剂发酵，香菇直接经双酶酶解等生产工艺提取香菇多肽等活性物质，具安全无污染、少投入生产设备、减少生产环节等优点。
2、香菇直接经双酶酶解、超滤、纯化等生产工艺提取香菇多肽，最大限度地将香菇蛋白质水解成各种小分子多肽。所得的香菇多肽分子量小、纯度高，产品功能更明显。
3、此制备工艺简单易行，反应条件温和，收率高，稳定性好，而且周期短，对制备设备及场所要求也很低，适合于大规模工业化生产。
本发明还提供了上述制备方法得到的香菇多肽，分子量小于5000道尔顿；以及该香菇多肽在制备抗疲劳的药物、食品或保健品中的应用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。
实施例1
取干香菇子实体2000.0kg，粉碎，加入32.0L的水，搅拌均匀，加热至100℃，加热时间为120min，降温至室温。超声波处理，处理条件为4000W、120min。用10mo l/L的NaOH溶液调节pH值至9.0，加入12.0万国际单位(比活力)的胰酶，搅匀后，维持pH至9.0，50℃的条件水解，水解240min。用6.0mo l/L的HCl溶液调pH至6.0，加入12.0万国际单位(比活力)的木瓜酶，搅匀后，维持pH至6.0，50℃的条件水解，水解500min。酶解结束后加热升温至100℃，保温15分钟进行酶灭活，降温至室温。
用10mol/L的NaOH溶液调pH至7.5，加热至100℃，保持240min，降至室温，离心过滤，收集滤液26.0L。在滤液加入活性碳520.0g，在温度为100℃条件下搅拌脱色60min，过滤，重复以上操作，离心过滤，得淡黄色澄清液体25.4L。澄清液体用5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集滤过液22.0L。
将葡聚糖凝胶颗粒加入10倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝胶颗粒充分溶涨3小时，装入凝胶柱中，用水平衡；滤过液过葡聚糖凝胶柱(或离子交换树脂、大孔吸附树脂等)，用水洗脱，收集洗脱液12.0L。
冷冻干燥或喷雾干燥，得香菇多肽粉68.32g。
检验结果：
多肽：91.36％(参照标准：GB18186-2000)；
平均分子量：小于3000道尔顿(参照标准：JY/T024-1996)
实施例2
取干香菇子实体2000.0kg，粉碎，加入16.0L的水，搅拌均匀，加热至80℃，加热时间为30min，降温至室温。超声波处理，处理条件为1000W、30min。用10mol/L的KOH溶液调节pH值至8.0，加入2.0万国际单位(比活力)的胰酶，搅匀后，维持pH至8.0，40℃的条件水解，水解120min。用6.0mol/L的H2SO4溶液调pH至4.0，加入2.0万国际单位(比活力)的木瓜酶，搅匀后，维持pH至4.0，40℃的条件水解，水解300min。酶解结束后加热升温至100℃，保温15分钟进行酶灭活，降温至室温。
用10mol/L的KOH溶液调pH至6.0，加热至90℃，保持60min，降至室温，离心过滤，收集滤液12.0L。在滤液加入活性碳60.0g，在温度为80℃条件下搅拌脱色20min，过滤，重复以上操作，离心过滤，得淡黄色澄清液体11.0L。澄清液体用5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集滤过液10.0L。
将葡聚糖凝胶颗粒加入10倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝胶颗粒充分溶涨3小时，装入凝胶柱中，用水平衡；滤过液过葡聚糖凝胶柱(或离子交换树脂、大孔吸附树脂等)，用水洗脱，收集洗脱液8.0L。
冷冻干燥或喷雾干燥，得香菇多肽粉61.08g。
检验结果：
多肽：90.82％(参照标准：GB18186-2000)；
平均分子量：小于3000道尔顿(参照标准：JY/T024-1996)
实施例3
取干香菇子实体2000.0kg，粉碎，加入24.0L的水，搅拌均匀，加热至85℃，加热时间为80min，降温至室温。超声波处理，处理条件为1000W、30min。用10mol/L的KOH溶液调节pH值至8.5，加入4.0万国际单位(比活力)的蛋白酶，搅匀后，维持pH至8.5，45℃的条件水解，水解170min。用4.0mol/L的H2SO4溶液调pH至5.0，加入5.0万国际单位(比活力)的蛋白酶，搅匀后，维持pH至5.0，45℃的条件水解，水解350min。酶解结束后加热升温至95℃，保温20分钟进行酶灭活，降温至室温。
用8mol/L的KOH溶液调pH至6.8，加热至92℃，保持160min，降至室温，离心过滤，收集滤液14.0L。在滤液加入活性碳70.0g，在温度为80℃条件下搅拌脱色20min，过滤，重复以上操作，离心过滤，得淡黄色澄清液体12.0L。澄清液体用5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集滤过液11.2L。
将葡聚糖凝胶颗粒加入11倍量的水，置于沸水浴中，使葡聚糖凝胶颗粒充分溶涨3小时，装入凝胶柱中，用水平衡；滤过液过葡聚糖凝胶柱(或离子交换树脂、大孔吸附树脂等)，用水洗脱，收集洗脱液8.0L。
冷冻干燥或喷雾干燥，得香菇多肽粉61.18g。
检验结果：
多肽：91.32％(参照标准：GB18186-2000)；
平均分子量：小于3500道尔顿(参照标准：JY/T024-1996)
试验实施例：香菇多肽抗疲劳作用
1.试验动物：昆明雄性小鼠，2.5～3.0月龄，体重(20±2)g。
2.供试样品：上述实施例1、2和3的样品。
3.试验方法：
将40只小鼠随机分为4组，每组10只，每天灌胃给药1次，以蒸馏水为空白组，实施例1、2和3的样品分别以40，80，160mg/kg的剂量，连续灌胃给药30d。然后测定小鼠的负重游泳试验时间、血乳酸值、肝糖原及血清尿素氮，实验结果如下表1和表2：
表1香菇多肽对小鼠负重游泳时间的影响：
与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表2香菇多肽对小鼠血乳酸、肝糖原、血清尿素氮含量的影响
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
经表1和表2所示的试验结果，可证明香菇多肽对小鼠的抗疲劳作用非常明显，香菇多肽主要含有多肽。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种香菇多肽的制备方法，包括以下步骤：
①、将干香菇子实体粉碎，加入8～16倍重量的水，搅拌均匀，加热至80℃～100℃，维持30min～120min，降温至室温；
②、步骤①水溶液进行超声波处理，调pH值至8.0～9.0，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的胰酶或蛋白酶，于40℃～50℃水解120～240min；
③、调节步骤②水解液pH值至4.0～6.0，按每kg干香菇加入1.0～6.0万国际单位比活力的蛋白酶，40℃～50℃水解300～500min；酶灭活，降至室温；
④、调步骤③灭活后的水解液pH值至6.0～7.5，加热至90℃～100℃，保持60min～240min，降至室温，离心过滤，收集滤液；
⑤、向步骤④滤液中按碳重量与滤液体积比为0.005-0.02kg/L加入活性碳脱色，过滤，滤液为淡黄色澄清液体；滤液经5000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集超滤液；干燥，得到香菇多肽。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤②超声波处理的条件为1000W～4000W、30min～120min。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤③酶灭活条件为100℃，5～15min。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤⑤脱色条件为80～100℃，搅拌20min～60min；脱色和过滤为重复多次操作。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤⑤超滤液过葡聚糖凝胶柱、离子交换树脂或大孔吸附树脂除杂后再干燥。
6.如权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于：所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。
7.一种如权利要求1所述制备方法制得的香菇多肽，其特征在于：该香菇多肽的分子量小于5000道尔顿。
8.如权利要求7所述香菇多肽在制备抗疲劳的药物、食品或保健品中的应用。
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