CN109021076B - 一种降血糖七肽 - Google Patents
一种降血糖七肽 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109021076B CN109021076B CN201811015828.9A CN201811015828A CN109021076B CN 109021076 B CN109021076 B CN 109021076B CN 201811015828 A CN201811015828 A CN 201811015828A CN 109021076 B CN109021076 B CN 109021076B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- heptapeptide
- alpha
- solution
- hypoglycemic
- amylase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种降血糖七肽,所述降血糖七肽的氨基酸序列如下所示:Gly‑Val‑Pro‑Met‑Pro‑Asn‑Lys,缩写为GVPMPNK,分子量741.90Da,纯度为96.1%。本发明的多肽使用多肽合成仪,采用固相合成法合成。体外α‑淀粉酶和α‑葡萄糖苷酶的抑制活性检测表明,对2种酶都有良好抑制作用,对α‑淀粉酶的50%抑制浓度(IC50)为236.23μg/mL,对α‑葡萄糖苷酶的50%抑制浓度(IC50)为151.46μg/mL。本发明提供一种降血糖七肽,可应用于生物制药领域。
Description
技术领域
本发明属于生物制药领域,具体涉及一种合成多肽及其应用。
背景技术
糖尿病是一种慢性病,是由于体内胰岛素不足引起的蛋白质、脂肪、碳水化合物代谢紊乱,主要特点是慢性高血糖。研究发现有许多天然的抗糖尿病有效成分,譬如:银杏叶提取物、植物多糖等。生物活性多肽的降血糖方面的研究较少。已有的一些研究表明,生物活性肽能有效改善糖尿病的作用。例如,在王军波等的研究中,海洋胶原肽能够缓解高胰岛素血症大鼠的胰岛β细胞的结构损伤,增加颗粒的分泌,减少脂滴的形成,显著提高胰岛素的生物学活性;显著降低的空腹胰岛素水平,对空腹血糖和口服葡萄糖耐量也有一定的改善作用。在黄凤杰等的研究中,鲨鱼肝活性肽S-8300有抗氧化作用,通过清除自由基保护胰岛β细胞,调节糖脂代谢,延缓胰岛β细胞的衰竭,在一定程度上能够治疗糖尿病。
人体中淀粉等糖类物质的消化吸收,需要依赖α-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶这两种关键酶。因此,抑制这两种关键酶的活性便能减缓碳水化合物降解为单糖的速度,以达到调控餐后血糖升高过快的目的。
发明内容
本发明选取α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶为研究对象,测定合成肽的体外抑制活性。本发明的目的是提供一种具有体外降血糖活性的合成多肽,可应用于生物制药领域。
本发明所述的合成多肽缩写为GVPMPNK,分子量741.9Da,纯度为96.1%,序列为:Gly-Val-Pro-Met-Pro-Asn-Lys。其中,
Gly表示英文名称为Glycine,中文名称为甘氨酸的氨基酸的相应残基;
Val表示英文名称为Valine,中文名称为颉氨酸的氨基酸的相应残基;
Pro表示英文名称为Proline,中文名称为脯氨酸的氨基酸的相应残基;
Met表示英文名称为Methionine,中文名称为甲硫氨酸的氨基酸的相应残基;
Pro表示英文名称为Proline,中文名称为脯氨酸的氨基酸的相应残基;
Asn表示英文名称为Asparagine,中文名称为天冬酰胺的氨基酸的相应残基;
Lys表示英文名称为Lysine,中文名称为赖氨酸的氨基酸的相应残基。
本发明所述的氨基酸序列采用标准Fmoc方案,通过树脂的筛选,合理的多肽合成方法。将目标多肽的C-端羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这个氨基酸的氨基作为起点,与另一分子氨基酸的羧基作用形成肽键。不断重复这一过程,即可以得到目标多肽产物。合成反应完成后,去除保护基,将肽链与树脂分离,即得到目标产物。多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程,固相合成顺序从C端向N端合成。
本发明通过研究合成肽对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用来评价其降血糖作用。
进一步地,所述七肽GVPMPNK对α-淀粉酶有抑制活性,IC50值为236.23μg/mL。
进一步地,所述七肽对α-葡萄糖苷酶的50%抑制浓度(IC50)为151.46μg/mL。
进一步地,所述七肽在2.5-5mg/mL浓度范围内,对α-淀粉酶抑制率是78%-83%。
进一步地,所述七肽在1-2.5mg/mL浓度范围内,对α-葡萄糖苷酶抑制率是115%-112%。
与现有技术相比,本发明具有如下优点和技术效果:
本发明首次合成了该七肽,并且检测了合成多肽对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性,所述合成多肽具有降血糖能力。
附图说明
图1a为合成多肽Gly-Val-Pro-Met-Pro-Asn-Lys的HPLC图。
图1b为合成多肽Gly-Val-Pro-Met-Pro-Asn-Lys的MS图。
图2a为合成多肽Gly-Val-Pro-Met-Pro-Asn-Lys对α-淀粉酶的抑制活性曲线。
图2b为合成多肽Gly-Val-Pro-Met-Pro-Asn-Lys对α-葡萄糖苷酶的抑制活性曲线。
具体实施方式
以下结合具体实例对本发明作进一步说明,但本发明的实施和保护范围不限于此,需指出的是,以下若有未特别详细说明之过程或参数,均是本领域技术人员可参照现有技术理解或实现的。
多肽固相合成
选用高分子树脂(中肽生化有限公司),按照氨基酸序列Gly-Val-Pro-Met-Pro-Asn-Lys的特征,先将Gly的羧基以共价键的形式与一个树脂相连,然后Gly的氨基和Val的羧基缩水反应,处理后,再添加Pro,Val的氨基和Pro的羧基反应,依次从右到左添加氨基酸,加好最后一个Lys氨基酸后,再切除树脂即得到目标多肽。采用高效液相色谱进行纯化,色谱柱型号为Phenomenex C18,尺寸4.6*150mm,流动相A:含有0.1%三氟乙酸(TFA)(v/v)的水;流动相B:含有0.09%TFA(v/v)的溶液(80%乙腈+20%水);20min内B相由14.0%上升到24.0%,流速1.0mL/min,检测波长220nm。液氮速冻,冷冻干燥,得到最后的产品,要求纯度达到95%以上,并经MS鉴定结构(如图1所示)。
合成多肽对α-淀粉酶的体外抑制活性
1试剂的配制
1)0.2M磷酸缓冲液:称取Na2HPO4 2.84g、KH2PO4 2.72g分别溶于100mL蒸馏水中,取适量的两种溶液在磁力搅拌器的作用下混合至pH=6.9,搅拌过程用pH计测量实时酸碱度。
2)1U/mL淀粉酶溶液:取淀粉酶4μL,与1996μL蒸馏水混合,配成2mL酶液。
3)1%淀粉溶液:取1g可溶性淀粉,溶于99mL缓冲液中。
4)样品溶液:取一定质量的样品,配置成不同剂量的样品溶液(0~10mg/mL),溶剂为10%DMSO。
5)DNS终止反应液:称取1g DNS,12g酒石酸钠钾于锥型瓶中,加入87mL0.4MNa2CO3溶液。
6)阿卡波糖溶液:用于阳性对照,称取一定量阿卡波糖配制成不同浓度梯度的溶液(0~8mg/mL)。
2实验步骤
1)1%淀粉溶液95℃水浴8min,预处理使其变性。
2)实验组用移液枪吸取抑制剂(0~10mg/mL)20μL与酶液10μL于试管中混合,对照组缓冲液20μL与酶液10μL混合,阳性对照组取阿卡波糖(0~8mg/mL)20μL与酶液10μL混合,于37℃摇床反应15min。
3)加入经预处理的淀粉溶液500μL,于37℃摇床反应5min。
4)加入DNS溶液600μL,100℃水浴15min。
5)反应结束后,用移液枪吸取200μL反应液,于540nm测吸光度,实验组与对照组分别用A实验组与A对照组表示。
合成多肽对α-葡萄糖苷酶的体外抑制活性
1试剂的配制
1)0.2M磷酸缓冲液:称取Na2HPO4 2.84g、KH2PO4 2.72g分别溶于100mL蒸馏水中,取适量的两种溶液在磁力搅拌器的作用下混合至pH=6.9,搅拌过程用pH计测量实时酸碱度。
2)P-NPG溶液:底物溶液,称取0.003765g p-NPG,溶于15mL蒸馏水中。
3)0.2U/mLα葡萄糖苷酶液:吸取已分装的酶液(200U/ml)5μL,用蒸馏水配成5mL。
4)样品溶液:取一定质量的样品,配置成不同浓度的样品溶液(0~10mg/mL),溶剂为10%DMSO。
5)0.2M Na2CO3:称取0.848g Na2CO3,溶于40mL蒸馏水中。
2实验步骤
1)于96孔板中反应,实验组、背景组、对照组、阳性对照组添加试剂如表1所示,于37℃摇床反应20min。
表1样品的添加量
2)各孔中加入缓冲液50μL,底物溶液40μL,于37℃摇床反应20min后去除,加入140μL Na2CO3溶液终止反应。
3)于405nm测吸光度。
应用实施例1
取1%淀粉溶液95℃水浴8min,预处理使其变性。实验组用移液枪吸取七肽(2.5mg/mL)20μL与α-淀粉酶酶液10μL于试管中混合,对照组缓冲液20μL与α-淀粉酶酶液10μL混合,阳性对照组取阿卡波糖(5mg/mL)20μL与α-淀粉酶酶液10μL混合,于37℃摇床反应15min。加入经预处理的淀粉溶液500μL,于37℃摇床反应5min。加入DNS溶液600μL,100℃水浴15min。反应结束后,用移液枪吸取200μL反应液,于540nm测吸光度,计算抑制率。由图2a可知,七肽对α-淀粉酶的抑制率是78%。
应用实施例2
取1%淀粉溶液95℃水浴8min,预处理使其变性。实验组用移液枪吸取七肽(5mg/mL)20μL与α-淀粉酶酶液10μL于试管中混合,对照组缓冲液20μL与α-淀粉酶酶液10μL混合,阳性对照组取阿卡波糖(5mg/mL)20μL与α-淀粉酶酶液10μL混合,于37℃摇床反应15min。加入经预处理的淀粉溶液500μL,于37℃摇床反应5min。加入DNS溶液600μL,100℃水浴15min。反应结束后,用移液枪吸取200μL反应液,于540nm测吸光度,计算抑制率。由图2a可知,七肽对α-淀粉酶的抑制率是83%。
应用实施例3
于96孔板中添加实验组(七肽(2.5mg/mL)20μL与α-葡萄糖苷酶酶液10μL)、背景组(七肽(2.5mg/mL)20μL与缓冲液10μL)、对照组(缓冲液10μL与α-葡萄糖苷酶酶液10μL)、阳性对照组(阿卡波糖溶液(2.5mg/mL)20μL与α-葡萄糖苷酶酶液10μL),于37℃摇床反应20min。各孔中加入缓冲液50μL,底物溶液40μL,于37℃摇床反应20min后去除,加入140μLNa2CO3溶液终止反应。于405nm测吸光度并计算抑制率。由图2b可知,七肽对α-葡萄糖苷酶的抑制率是112%,是阿卡波糖抑制率(50%)的2倍。
应用实施例4
于96孔板中添加实验组(七肽(1mg/mL)20μL与α-葡萄糖苷酶酶液10μL)、背景组(七肽(1mg/mL)20μL与缓冲液10μL)、对照组(缓冲液10μL与α-葡萄糖苷酶酶液10μL)、阳性对照组(阿卡波糖溶液(1mg/mL)20μL与α-葡萄糖苷酶酶液10μL),于37℃摇床反应20min。各孔中加入缓冲液50μL,底物溶液40μL,于37℃摇床反应20min后去除,加入140μL Na2CO3溶液终止反应。于405nm测吸光度并计算抑制率。由图2b可知,七肽对α-葡萄糖苷酶的抑制率是115%,是阿卡波糖抑制率(28%)的4倍。
序列表
<110> 华南理工大学
<120> 一种降血糖七肽
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 七肽(GVPMPN)
<400> 2
Gly Val Pro Met Pro Asn Lys
1 5
Claims (5)
1.一种降血糖七肽,其特征是该七肽氨基酸序列为Gly-Val-Pro-Met-Pro-Asn-Lys,缩写为GVPMPNK。
2.权利要求1 所述的降血糖七肽在制备降血糖药物中的应用,其特征在于所述七肽GVPMPNK对α-淀粉酶有抑制活性,IC50值为236.23μg/mL。
3.权利要求1 所述的降血糖七肽在制备降血糖药物中的应用,其特征在于所述七肽对α-葡萄糖苷酶的50%抑制浓度(IC50)为151.46μg/mL。
4.权利要求1 所述的降血糖七肽在制备降血糖药物中的应用,其特征在于所述七肽在2.5-5 mg/mL浓度范围内,对α-淀粉酶抑制率是78%-83%。
5.权利要求1 所述的降血糖七肽在制备降血糖药物中的应用,其特征在于所述七肽在1-2.5 mg/mL浓度范围内,对α-葡萄糖苷酶抑制率是115%-112%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811015828.9A CN109021076B (zh) | 2018-08-31 | 2018-08-31 | 一种降血糖七肽 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811015828.9A CN109021076B (zh) | 2018-08-31 | 2018-08-31 | 一种降血糖七肽 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109021076A CN109021076A (zh) | 2018-12-18 |
CN109021076B true CN109021076B (zh) | 2020-12-22 |
Family
ID=64623333
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811015828.9A Active CN109021076B (zh) | 2018-08-31 | 2018-08-31 | 一种降血糖七肽 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109021076B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109021074B (zh) * | 2018-08-31 | 2021-08-10 | 华南理工大学 | 一种改善糖尿病和老年性痴呆症症状的七肽 |
CN112010941B (zh) * | 2019-05-31 | 2022-08-16 | 华南理工大学 | 一种降血糖七肽 |
CN110590905B (zh) * | 2019-05-31 | 2021-10-26 | 华南理工大学 | 一种降血糖六肽 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104497105A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-04-08 | 渤海大学 | 具有辅助降血糖功能的五肽klpgf |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101185045B1 (ko) * | 2008-12-09 | 2012-09-26 | 서울대학교산학협력단 | 펩타이드?당 결합체를 이용한 당 가수분해 효소에 대한 특이적 저해제 및 이의 스크리닝 방법 |
CN101724015A (zh) * | 2009-10-30 | 2010-06-09 | 广西南宁智天生物科技有限公司 | 一种α-葡萄糖苷酶抑制剂及其制备方法 |
CN103539831B (zh) * | 2013-09-29 | 2016-02-03 | 北京林业大学 | 山杏α-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法和用途 |
CN103992374B (zh) * | 2014-06-04 | 2016-06-22 | 浙江省农业科学院 | 具有降血糖和降血脂双功能的二肽di及其用途 |
CN107868810B (zh) * | 2017-11-13 | 2021-04-09 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种具有降血糖活性的海地瓜活性肽 |
CN109021074B (zh) * | 2018-08-31 | 2021-08-10 | 华南理工大学 | 一种改善糖尿病和老年性痴呆症症状的七肽 |
-
2018
- 2018-08-31 CN CN201811015828.9A patent/CN109021076B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104497105A (zh) * | 2014-11-20 | 2015-04-08 | 渤海大学 | 具有辅助降血糖功能的五肽klpgf |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109021076A (zh) | 2018-12-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109021075B (zh) | 一种降血糖十肽 | |
CN109021079B (zh) | 一种降血糖十六肽 | |
CN109021076B (zh) | 一种降血糖七肽 | |
CN109400678B (zh) | 一种刺参来源的抗氧化和dpp-iv抑制活性肽 | |
Seidah et al. | Complete amino acid sequence of BSP-A3 from bovine seminal plasma. Homology to PDC-109 and to the collagen-binding domain of fibronectin | |
Levy et al. | The synthesis of triaminoacyl-insulins and the use of the t-butyloxycarbonyl group for the reversible blocking of the amino groups of insulin | |
WO2017027848A1 (en) | Glycosylated peptides with pseudoproline residues and having enhanced half-lives and ability to cross the blood brain barrier | |
CN108676073B (zh) | 一种抗肥胖十肽llvvypwtqr及其应用 | |
CN110590905B (zh) | 一种降血糖六肽 | |
CN111269290B (zh) | 一种鲟鱼抗炎肽的制备方法 | |
Brandenburg et al. | The effect of a non-peptide interchain crosslink on the reoxidation of reduced insulin | |
CN110183517B (zh) | 一种降血糖十一肽 | |
CN106699846B (zh) | 一种抗肥胖十一肽nalkcchscpa | |
CN110128526A (zh) | 长效化艾塞那肽衍生物及其盐与制备方法和用途 | |
CN109369782B (zh) | 一种改善糖尿病和老年性痴呆的十肽 | |
CN112010941B (zh) | 一种降血糖七肽 | |
CN106905417B (zh) | 一种二肽基肽酶-4抑制肽及其制备方法与其应用 | |
CN114891065B (zh) | 一种具有α-淀粉酶抑制活性的降血糖海参肽及其制备方法和应用 | |
CN106518971B (zh) | 一种抗肥胖十肽canphelpnk | |
CN109021074B (zh) | 一种改善糖尿病和老年性痴呆症症状的七肽 | |
CN113072621B (zh) | 一种牦牛骨降血压肽及其制备方法与应用 | |
CN107082796A (zh) | 一种提纯蛋白酶解物中小分子多肽的方法 | |
CN110655553B (zh) | 一种芝麻来源的ace抑制肽、制备方法及其在制备降血压药物方面的应用 | |
CN114315965A (zh) | 抗肥胖肽及其应用 | |
CN106749533B (zh) | 一种抗肥胖十七肽lnnpsvcdcdcmmkaar |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |