CN107860844B

CN107860844B - (s)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法

Info

Publication number: CN107860844B
Application number: CN201711088145.1A
Authority: CN
Inventors: 蒙发明; 曹欢燕; 徐亮; 邓超芹; 俞伟文; 樊志麒
Original assignee: Enantiotech Corp Ltd
Current assignee: Enantiotech Corp Ltd
Priority date: 2017-11-07
Filing date: 2017-11-07
Publication date: 2020-07-07
Anticipated expiration: 2037-11-07
Also published as: CN107860844A

Abstract

本发明公开了一种(S)‑1‑(3‑乙氧基‑4‑甲氧基苯基)‑2‑(甲磺酰基)乙胺的检测方法。该检测方法采用高效液相色谱仪进行检测，采用面积归一化法进行定量分析，其色谱条件如下：色谱柱为chiralcel AD‑H；进样量为15～25μl；流速为0.6～0.8ml/min；柱温为10～40℃；检测波长为228～232nm；流动相为正己烷：异丙醇：二乙胺，其体积比为(780～820)：(180～220)：1；稀释液为正己烷：异丙醇：二乙胺，其体积比为(40～60)：(40～60)：0.5；检测器为紫外检测器。本发明的检测方法可以实现(S)‑1‑(3‑乙氧基‑4‑甲氧基苯基)‑2‑(甲磺酰基)乙胺的快速准确测定，具有很高的灵敏度，且操作简便，可以实现完全分离，为研究此类化合物提供了研究开发和质量检测的基础。

Description

(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法

技术领域

本发明涉及阿普斯特中间体的检测方法，属于药物分析技术领域，具体涉及(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法。

背景技术

(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺，其CAS号为608141-42-0，是生产阿普斯特(Apremilast)的重要中间体，其手性纯度、异构体杂质直接影响阿普斯特的手性纯度、异构体杂质的多少，从而直接影响阿普斯特药物的疗效。

阿普斯特(Apremilast)是治疗活动性银屑病关节炎的口服药物，化学名称为(S)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基)苯基-2-甲磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮，CAS号为608141-41-9。该药物在2014年3月以商品名Otezla(Apremilast)获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准，是FDA批准的首个也是唯一一个用于斑块型银屑病治疗的口服药，是选择性磷酸二酯酶4(PDE4)抑制剂。

目前，还未发现(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的手性纯度检测方法的相关文献及报道，为了加强(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺质量控制，需要研发出(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法，特别是其手性纯度的检测方法。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法。

(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的结构式为：

(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的结构式为：

本发明采用以下技术方案：

一种(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，检测步骤如下：

(1)分别适量称取(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺、(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺这两种相应的工作品，并置于同一容量瓶中，用稀释液进行溶解定容，配制成一定浓度的系统适应性试验溶液；进一步地，所述系统适应性试验溶液的浓度为0.3～0.7mg/ml；进一步优选地，所述系统适应性试验溶液的浓度为0.5mg/ml。

(2)取适量的供试品，精密称定，加稀释液稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液，配制成供试品溶液，可以理解为所述供试品溶液的浓度为0.3～0.7mg/ml；

(3)精密量取系统适应性试验溶液，注入液相色谱仪，进样量为15～25μl，进一步优选地，所述进样量为20μl，记录色谱图。理论板数按(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺计算应不低于5000，异构体峰之间的分离度应不小于1.5。

根据《中国药典》，分离度(简称为R)也叫分辨率，是指相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，其计算公式为R＝2(tR2-tR1)/(W1+W2))，tR1和tR2为相邻两峰的保留时间，W1和W2为其相应的峰宽。

分离度表示相邻两峰的分离程度，R越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R＝1.0时，分离度可达98％；当R＝1.5时，分离度可达99.7％。通常用R＝1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。

精密量取供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为15～25μl，进一步优选地，所述进样量为20μl，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有与系统适应性溶液中异构体保留时间一致的色谱峰，按面积归一化法分别计算。

将所述系统适应性试验溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪中，采用面积归一化法进行检测，其色谱条件如下：

色谱柱：chiralcel AD-H；

流速：0.6～0.8ml/min；

柱温：10～40℃；

检测波长：228～232nm；

流动相：正己烷：异丙醇：二乙胺，其体积比为(780～820)：(180～220)：1；

稀释液：正己烷：异丙醇：二乙胺，其体积比为(40～60)：(40～60)：0.5；

检测器：紫外检测器。

采用大赛璐手性色谱柱，使(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺及其对应异构体实现有效分离，经紫外检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量。

进一步地，所述色谱柱的规格或尺寸为4.6*250mm，5μm。色谱柱的填料粒径为5μm，孔径为4.6mm，色谱柱柱长250mm。

进一步优选地，所述流速为0.7ml/min；所述柱温为20～30℃，也可以将所述柱温理解为正常的室温，进一步优选地，所述柱温为25℃。

进一步优选地，所述检测波长为230nm。

进一步优选地，所述流动相中正己烷：异丙醇：二乙胺的体积比为800：200：1，采用适当比例的正己烷、异丙醇，可以有效改善分离效果；增加少量二乙胺可以改善峰型。

进一步优选地，所述稀释液中的正己烷：异丙醇：二乙胺的体积比为50：50：0.5，稀释液中增加少量二乙胺可以使供试品完全溶解。

进一步地，定量方法为面积归一化法。

在本发明的方法中(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺及其对应异构体均能实现有效分离。

本发明的有益效果：

(1)本发明的检测方法可以实现(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的快速准确测定，具有很高的灵敏度；

(2)本发明的检测方法操作简便，分离度不小于1.5，符合完全分离的标准；

(3)本发明的检测方法为(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺类别的化合物提供了研究开发和质量检测的基础。

附图说明

图1为本发明实施例1的高效液相色谱图。

具体实施方式

为了更好的解释本发明，现结合以下具体实施例做进一步说明，但是本发明不限于具体实施例。

实施例1

一种(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法

一、仪器与检测条件

岛津LC-15C高效液相色谱仪，色谱柱选用chiralcel AD-H，色谱柱的规格为4.6*250mm，5μm。即色谱柱的填料粒径为5μm，孔径为4.6mm，色谱柱柱长250mm。流速：0.7ml/min；柱温：25℃；检测波长：230nm；检测器：紫外检测器，进样量为20μl。

流动相：正己烷：异丙醇：二乙胺，其体积比为800：200：1；

稀释液：正己烷：异丙醇：二乙胺，其体积比为50：50：0.5；

二、实验步骤

采用高效液相色谱法进行检测，检测步骤如下：

(1)适量称取(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺、(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺这两种相应的工作品，并置于同一容量瓶中，用稀释液进行溶解定容，配制成浓度为0.5mg/ml的系统适应性试验溶液。

(2)取适量的供试品，精密称定，加稀释液稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液，配制成供试品溶液；

(3)精密量取系统适应性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。理论板数按(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺计算应不低于5000，异构体峰之间的分离度应不小于1.5。

精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有与系统适应性溶液中异构体保留时间一致的色谱峰，按面积归一化法分别计算。

取四批同一生产规格指令生产的(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺产品，按照上述检测方法进行检测，采用面积归一化法进行手性纯度及对应异构体计算，检测结果见表1。

表1：四批(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺样品的检测结果。

批号	分离度	理论板数	(R)杂质	手性纯度
					样品1	1.796	8924	0.05％	99.95％
样品2	1.803	8867	0.03％	99.97％
					样品3	1.816	8902	0.03％	99.97％
样品4	1.811	8897	0.04％	99.96％

(R)杂质为(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺。

图1是实施例1中的高效液相色谱图，是系统适应性溶液典型图谱，出峰顺序为(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺、(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺。在9.8～11.0min之间的峰为(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺，在11.1～12.5min之间的峰为(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺，其中检测器A通道1/230nm。

本发明的检测方法能够简便、准确、快速、高效、可靠的检测(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的手性纯度及其异构体杂质，具有很高的灵敏度，且操作简便，可以实现完全分离，进而为研究此类化合物提供了研究开发和质量检测的基础。

以上所述仅为本发明的具体实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明作的等效变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之中。

Claims

1.一种(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，检测步骤如下：

(1)分别称取(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺、(R)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺这两种工作品，并置于同一容量瓶中，用稀释液进行溶解定容，配制成系统适应性试验溶液；

(2)精密称取(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺产品，用稀释液进行溶解，配制成供试品溶液；

(3)将所述系统适应性试验溶液和供试品溶液分别注入高效液相色谱仪中，采用面积归一化法进行测定，其色谱条件如下：

色谱柱：chiralcelAD-H；

进样量：15～25μl；

流速：0.6～0.8ml/min；

柱温：10～40℃；

检测波长：228～230nm；

检测器：紫外检测器；

所述系统适应性试验溶液的浓度为0.3～0.7mg/ml；所述供试品溶液的浓度为0.3～0.7mg/ml。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述系统适应性试验溶液的浓度为0.5mg/ml。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为4.6mm×250mm，5μm。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述进样量为20μl。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流速为0.7ml/min；所述柱温为20～30℃。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相中正己烷：异丙醇：二乙胺的体积比为800：200：1。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述稀释液中的正己烷：异丙醇：二乙胺的体积比为50：50：0.5。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，理论板数按(S)-1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲磺酰基)乙胺计算不低于5000，异构体峰之间的分离度不小于1.5。