CN107853695A - 一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其经过以下步骤：（1）将海参下脚料加入清水充分溶胀，并且沥干水分；（2）将此海参下脚料加入等量浸泡液中，浸泡并且沥干水分；（3）将步骤2得到的海参下脚料切割并且加水，加入胰蛋白酶并且酶解，高温灭酶；（4）将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入石油醚、浓氨水，搅拌后分液除去油相；（5）在步骤4得到的清液中加入水刺聚丙烯无纺布条，搅拌之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液得到最终产品。本发明的方法得到的多肽口服液口感好、游离蛋白含量高、过敏性低。该方法工艺合理、技术先进，可以广泛用于海参下脚料的深加工。
Description
技术领域
本发明涉及多肽的制备，尤其是一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法。
背景技术
海参，属海参纲（Holothuroidea），是生活在海边至8000米的海洋棘皮动物，全身长满肉刺，是以海底藻类和浮游生物为食。海参广布于世界各海洋中，中国沿海种类较多，约有二十余种海参可供食用。
海参不仅是珍贵的食品，也是名贵的药材。据《本草纲目拾遗》中记载：海参，味甘咸，补肾，益精髓，摄小便，壮阳疗痿，其性温补，足敌人参，故名海参。海参具有提高记忆力、延缓性腺衰老，防止动脉硬化以及抗肿瘤等作用。随着海参价值知识的普及，海参逐渐进入百姓餐桌。
海参在制备过程中会产生大量的碎参。这部分碎参以往只能打粉作为海参粉来出售。海参粉消化吸收不便，服用困难，并且难以制成具有较高档次的营养品。
如何利用海参下脚料如碎参，成为现有技术中亟待解决的问题。
发明内容
为了克服现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种工艺合理、技术先进的利用海参下脚料制备多肽口服液的方法。所得到的多肽口服液口感好，游离蛋白含量高，其过敏性低。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：其经过以下步骤：
（1）将海参下脚料加入清水充分溶胀，并且沥干水分；
（2）将步骤1得到的海参下脚料加入等量浸泡液中，在3-5摄氏度下浸泡2-4小时并且沥干水分，所述的浸泡液按重量计包括0.5-1.0%的氯化钙、0.5-1.5%的HCl和5-7%的乙醇；
（3）将步骤2得到的海参下脚料切割成1-5mm的颗粒并且加入4-9倍重量的清水，加入胰蛋白酶达到600-1200U/mL，并且在40-45摄氏度下搅拌酶解2-4小时，高温灭酶；
（4）将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入其重量15-20%的石油醚、1.5-3%的浓氨水，搅拌15-30分钟之后分液除去油相；
（5）在步骤4得到的清液中加入0.5-1.0%的干燥的水刺聚丙烯无纺布条，搅拌10-15分钟之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液，直到体积达到原体积的20-10%，得到最终产品。
在本发明优选的方面，在步骤2中，将步骤1得到的海参下脚料加入等量浸泡液中，在4摄氏度下浸泡2.5小时并且沥干水分，所述的浸泡液按重量计包括0.72%的氯化钙、0.84%的HCl和6.6%的乙醇。
在本发明优选的方面，在步骤3中，将步骤2得到的海参下脚料切割成3mm的颗粒并且加入6倍重量的清水，加入胰蛋白酶达到800 U/mL，并且在42摄氏度下搅拌酶解2.5小时，高温灭酶。
在本发明优选的方面，在步骤4中，将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入其重量18%的石油醚、2.4%的浓氨水，搅拌24分钟之后分液除去油相。
在本发明优选的方面，在步骤4中，将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液之后，还将滤渣使用0.3-0.5倍重量的清水洗涤1-2次，合并到上清液中。
在本发明优选的方面，在步骤5中，在步骤4得到的清液中加入0.8%的干燥的水刺聚丙烯无纺布条，搅拌12分钟之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液，直到体积达到原体积的14.1%，得到最终产品。
在本发明优选的方面，在步骤5之后，还将得到的多肽口服液在截留分子量为500的透析袋中进行透析除盐。
本发明的方法得到的多肽口服液具有较好的口感，并且具有较高的游离蛋白含量，其过敏性较低。该方法工艺合理、技术先进，可以广泛用于海参下脚料的深加工。
具体实施方式
除非另外地说明，本发明的“海参下脚料”是指在海参去除内脏之后，晒干等过程中产生的海参参体残渣、碎海参等物质。该下脚料可以是干品，也可以是湿润的海参下脚料。
除非另外地说明，本实施例中的胰蛋白酶购自东恒华道生物科技有限公司。该酶为80万U/克的干粉。在加入时，首先将该干粉加水制成10万U/mL的酶溶液，然后将一定体积的酶溶液加入到海鲜混合物中，达到期待的量。
实施例1
在本实施例中，从1千克海参下脚料开始进行实施。具体地，一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其经过以下步骤：
（1）将海参下脚料加入清水充分溶胀，并且沥干水分；
（2）将步骤1得到的海参下脚料加入等量浸泡液中，在4摄氏度下浸泡2.5小时并且沥干水分，所述的浸泡液按重量计包括0.72%的氯化钙、0.84%的HCl和6.6%的乙醇；
（3）将步骤2得到的海参下脚料切割成3mm的颗粒并且加入6倍重量的清水，加入胰蛋白酶达到800 U/mL，并且在42摄氏度下搅拌酶解2.5小时，高温灭酶；
（4）将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入其重量18%的石油醚、2.4%的浓氨水，搅拌24分钟之后分液除去油相；
（5）在步骤4得到的清液中加入0.8%的干燥的水刺聚丙烯无纺布条，搅拌12分钟之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液，直到体积达到原体积的14.1%，得到最终产品。
实施例2
在本实施例中，从1千克海参下脚料开始进行加工。具体地，一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其经过以下步骤：
（1）将海参下脚料加入清水充分溶胀，并且沥干水分；
（2）将步骤1得到的海参下脚料加入等量浸泡液中，在5摄氏度下浸泡2小时并且沥干水分，所述的浸泡液按重量计包括1.0%的氯化钙、1.5%的HCl和7%的乙醇；
（3）将步骤2得到的海参下脚料切割成1mm的颗粒并且加入9倍重量的清水，加入胰蛋白酶达到1200U/mL，并且在45摄氏度下搅拌酶解2小时，高温灭酶；
（4）将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入其重量20%的石油醚、1.5%的浓氨水，搅拌30分钟之后分液除去油相；
（5）在步骤4得到的清液中加入1.0%的干燥的水刺聚丙烯无纺布条，搅拌15分钟之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液，直到体积达到原体积的10%，得到最终产品。
实施例3
在本实施例中，从1千克海参下脚料开始进行实施。具体地，一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其经过以下步骤：
（1）将海参下脚料加入清水充分溶胀，并且沥干水分；
（2）将步骤1得到的海参下脚料加入等量浸泡液中，在3摄氏度下浸泡4小时并且沥干水分，所述的浸泡液按重量计包括0.5%的氯化钙、0.5%的HCl和5%的乙醇；
（3）将步骤2得到的海参下脚料切割成5mm的颗粒并且加入4倍重量的清水，加入胰蛋白酶达到600U/mL，并且在40摄氏度下搅拌酶解4小时，高温灭酶；
（4）将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入其重量15%的石油醚、3%的浓氨水，搅拌15分钟之后分液除去油相；
（5）在步骤4得到的清液中加入0.5%的干燥的水刺聚丙烯无纺布条，搅拌10分钟之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液，直到体积达到原体积的20%，得到最终产品。
对比例1
在本对比例中采用和实施例1基本相同的方法，其差别在于：不执行步骤2，而是在步骤3中额外加入氯化钙达到酶解混合物重量的1.0%的氯化钙。
对比例2
在本对比例中采用和实施例1基本相同的方法，其差别在于：不执行步骤2，而是在步骤3中额外加入氯化钙达到酶解混合物重量的0.5%的氯化钙。
对比例3
在本对比例中采用和实施例1基本相同的方法，其差别在于：不执行步骤2，而是在步骤3中额外加入氯化钙达到酶解混合物重量的0.25%的氯化钙。
对比例4
在本对比例中采用和实施例1基本相同的方法，其差别在于：不执行步骤4-5。
对比例5
在本对比例中采用和实施例1基本相同的方法，其差别在于：不执行步骤5。
对比例6
在本对比例中采用和实施例1基本相同的方法，其差别在于：不执行步骤4。
一、产品的游离蛋白含量测定试验
在本试验中，对得到的各组产品进行了游离蛋白含量的测定。
按照GB 5009.5-2010所述的凯氏定氮法来测量提取液的蛋白质含量（包括多肽、蛋白质和游离氨基酸）。测量结果记录在表1中。
表1：实施例1-3和对比例1-6的产品的游离蛋白含量
| 组号 | 游离蛋白含量g/100mL |
| 实施例1 | 2.71 |
| 实施例2 | 2.54 |
| 实施例3 | 2.47 |
| 对比例1 | 1.94 |
| 对比例2 | 1.72 |
| 对比例3 | 1.55 |
| 对比例4 | 2.63 |
| 对比例5 | 2.59 |
| 对比例6 | 2.47 |
在表1中我们可以看到，胰蛋白酶受到钙离子的促进效果在不同条件下有所不同。将底物首先使用含有钙离子的溶液进行浸泡时，其促进效果较好，而直接加入钙离子的时候，则没有如此好的效果。实施例1-3的方法所使用的钙盐含量少，并且得到的效果更好。后续的石油醚处理步骤和水刺聚丙烯条的处理基本不影响蛋白质含量。
除此之外，本发明人还对实施例1和对比例1分别进行了各时间段取样的游离蛋白含量试验。具体地，在0.5、1.0、1.5、2.0和2.5小时时分别对实施例1和对比例1进行了取样，高温灭酶并且完成后续的预定步骤，然后利用同上的方法来测量其游离蛋白的含量，结果显示在表2中：
表2：实施例1和对比例1的各个时间点的酶解液所得产品的蛋白含量
从表2中可以看到，实施例1与对比例1相比，其具有更加均匀的反应速率，其速率基本上可控，有助于产生各种游离蛋白含量的酶解液或者各种酶解水平的固体产品。
二、产品的组胺含量测定试验
本试验中，测量了各个实施例和对比例中最终产品的组胺含量。组胺含量使用HPLC内标法来进行，并且将最终测量结果换算为每千克产品中的组胺含量，该结果记录在表3中。该测量按照《粮油食品科技》2012年第20卷第2期《高效液相色谱法测定发酵食品中组胺的含量》一文所记载的方法来进行。
表3：实施例1-3和对比例1-6的产品的组胺含量
| 组号 | 组胺含量mg/1000克 |
| 实施例1 | 21.5 |
| 实施例2 | 27.2 |
| 实施例3 | 26.3 |
| 对比例1 | 31.4 |
| 对比例2 | 33.8 |
| 对比例3 | 27.5 |
| 对比例4 | 117.0 |
| 对比例5 | 86.2 |
| 对比例6 | 72.1 |
从表3中可以看到的是，尽管添加了碱性条件下除去过敏性物质的步骤，但是单个处理步骤不能充分除去组胺，而两种方法合并使用时，其去除效率很高，具体地，参见表4。以对比例4为100%，考察了实施例1、对比例5-6的除去比例：
表4：实施例1和对比例5-6的组胺除去比例：
| 组号 | 组胺含量mg/1000克 | 组胺除去比例% |
| 实施例1 | 21.5 | 81.62 |
| 对比例5 | 86.2 | 26.32 |
| 对比例6 | 72.1 | 38.38 |
| 对比例4 | 117.0 | 0.00 |
两种方法合并使用时，组胺除去比例从26.32%或者38.38%直接提升到百分之八十以上，显示出这两种方法的协同效应非常明显。
Claims (7)
1.一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：其经过以下步骤：
（1）将海参下脚料加入清水充分溶胀，并且沥干水分；
（2）将步骤1得到的海参下脚料加入等量浸泡液中，在3-5摄氏度下浸泡2-4小时并且沥干水分，所述的浸泡液按重量计包括0.5-1.0%的氯化钙、0.5-1.5%的HCl和5-7%的乙醇；
（3）将步骤2得到的海参下脚料切割成1-5mm的颗粒并且加入4-9倍重量的清水，加入胰蛋白酶达到600-1200U/mL，并且在40-45摄氏度下搅拌酶解2-4小时，高温灭酶；
（4）将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入其重量15-20%的石油醚、1.5-3%的浓氨水，搅拌15-30分钟之后分液除去油相；
（5）在步骤4得到的清液中加入0.5-1.0%的干燥的水刺聚丙烯无纺布条，搅拌10-15分钟之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液，直到体积达到原体积的20-10%，得到最终产品。
2.根据权利要求1所述的一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：在步骤2中，将步骤1得到的海参下脚料加入等量浸泡液中，在4摄氏度下浸泡2.5小时并且沥干水分，所述的浸泡液按重量计包括0.72%的氯化钙、0.84%的HCl和6.6%的乙醇。
3.根据权利要求1所述的一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：在步骤3中，将步骤2得到的海参下脚料切割成3mm的颗粒并且加入6倍重量的清水，加入胰蛋白酶达到800 U/mL，并且在42摄氏度下搅拌酶解2.5小时，高温灭酶。
4.根据权利要求1所述的一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：在步骤4中，将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液，并且将该上清液中加入其重量18%的石油醚、2.4%的浓氨水，搅拌24分钟之后分液除去油相。
5.根据权利要求1所述的一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：在步骤4中，将步骤3的酶解混合物过滤得到上清液之后，还将滤渣使用0.3-0.5倍重量的清水洗涤1-2次，合并到上清液中。
6.根据权利要求1所述的一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：在步骤5中，在步骤4得到的清液中加入0.8%的干燥的水刺聚丙烯无纺布条，搅拌12分钟之后过滤除去无纺布条，并且在减压下蒸馏该清液，直到体积达到原体积的14.1%，得到最终产品。
7.根据权利要求1所述的一种利用海参下脚料制备多肽口服液的方法，其特征在于：在步骤5之后，还将得到的多肽口服液在截留分子量为500的透析袋中进行透析除盐。
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