CN107841512A

CN107841512A - 利用植物棉子糖合成通路提高种子活力及耐贮性的应用

Info

Publication number: CN107841512A
Application number: CN201711091834.8A
Authority: CN
Inventors: 赵天永; 李涛; 张玉民; 王东; 刘应
Original assignee: Northwest A&F University
Current assignee: Northwest A&F University
Priority date: 2017-11-08
Filing date: 2017-11-08
Publication date: 2018-03-27

Abstract

本发明公开了利用植物棉子糖合成通路提高种子活力及耐贮性的应用，该方法克隆了玉米棉子糖合成关键酶基因ZmGOLS2、ZmRS，通过构建真核表达载体，利用农杆菌转化法分别获得ZmGOLS2、ZmRS单过表达及ZmGOLS2/ZmRS双过表达转化株系，调控了拟南芥种子中棉子糖系列寡糖RFOs的含量及分配，增强了种子活力及其耐贮性。ZmGOLS2单过表达可使拟南芥种子耐贮性提高43％。ZmGOLS2/ZmRS双过表达较ZmGOLS2单过表达相比效果更为优异，可使拟南芥种子耐贮性提高102％。

Description

利用植物棉子糖合成通路提高种子活力及耐贮性的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及利用调控植物棉子糖合成通路提高种子活力及耐贮性的应用，具体地说，涉及通过双过表达GOLS与RS基因提高种子活力及耐贮性的研究。

背景技术

棉子糖系列寡糖(Raffinose family oligosaccharides，RFOs)是植物中特有的一类半乳糖苷系列寡糖，国内外研究表明其在抵抗非生物逆境胁迫、种子脱水耐性及其活力形成过程中可能发挥重要功能。RFOs合成通路第一步限速酶肌醇半乳糖苷酶(Galactinol synthase，GOLS)与种子活力形成密切相关。在拟南芥中过表达鹰嘴豆CaGOLS基因能够提高种子耐贮性。关于RFOs第二步关键酶棉子糖合成酶(Raffinose synthase，RS)调控种子活力目前未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供利用调控植物棉子糖合成通路提高种子活力及耐贮性的应用，通过PCR方法克隆了玉米GRMZM2G150906基因(命名为ZmRS)。将该基因与玉米肌醇半乳糖苷合成酶基因ZmGOLS2(GRMZM5G872256)在拟南芥中进行共表达，提高了拟南芥种子中RFOs的总含量，增强了种子活力及耐贮性，且其表现远优于单表达ZmGOLS2株系。本发明主要内容为：在植物中共表达棉子糖合成通路基因GOLS2(肌醇半乳糖苷合成酶)与RS(棉子糖合成酶)基因，提高种子活力及其耐贮性(延长其贮藏寿命)。

其具体技术方案为：

通过在植物中同时过表达Galactinol synthase(GOLS)、Raffinose synthase(RS)基因在提高植物种子活力过程中的应用。

通过在植物中表达Galactinol synthase(GOLS)、Raffinose synthase(RS)基因在调控种子中棉子糖系列寡糖含量及分配过程中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明克隆了玉米棉子糖合成关键酶基因ZmGOLS2(肌醇半乳糖苷合成酶/GRMZM5G872256)、ZmRS(棉子糖合成酶/GRMZM2G150906)，通过构建真核表达载体，利用农杆菌转化法分别获得ZmGOLS2、ZmRS单过表达及ZmGOLS2/ZmRS双过表达转化株系，调控了拟南芥种子中棉子糖系列寡糖(RFOs)的含量及分配，增强了种子活力及其耐贮性。ZmGOLS2单过表达可使拟南芥种子耐贮性提高43％。ZmGOLS2/ZmRS双过表达较ZmGOLS2单过表达相比效果更为优异，可使拟南芥种子耐贮性提高102％。

附图说明

图1pCsGFPBT载体示意图。

图2pBI111L载体示意图。

图3ZmGOLS2、ZmRS单表达及ZmGOLS2/ZmRS双表达拟南芥的分子及种子寡糖组分鉴定。(a)拟南芥转化载体构建示意图。(b)转基因拟南芥分子鉴定。上半部分为RT-PCR检测，鉴定转基因植株目标基因的mRNA表达水平；下半部分为Western blot检测，鉴定转基因植株中ZmRS蛋白表达水平。(c-h)各转基因拟南芥株系种子可溶性糖组分鉴定。(c)蔗糖；(d)肌醇；(e)肌醇半乳糖；(f)棉子糖；(g)水苏糖；(h)毛蕊花糖。图中不同字母表示不同株系之间存在显著差异(Duncan test)。

图4ZmGOLS2、ZmRS单表达及ZmGOLS2/ZmRS双表达拟南芥的种子活力鉴定。收获后经脱水的拟南芥种子在饱和KCl(RH 83％)，42℃条件下人工老化3天，经室温晾晒1天后进行种子活力及耐贮性评测。(a)经人工老化处理或未经处理的拟南芥各株系种子TTC染色情况，着色(红色)越深代表种子活力越高。(b)经人工老化处理或未经处理的拟南芥各株系种子吸胀萌发后120小时表型图。(c)经人工老化处理或未经处理的拟南芥各株系种子萌发(％)速率。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方案对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

1、通过PCR方法克隆了玉米ZmRS基因的编码区，构建了该基因植物表达载体。

对水培的三叶期玉米幼苗进行脱水处理。从脱水处理2小时的叶片提取RNA并将其反转录成cDNA。

以cDNA为模板，用上游引物5’-CGCGGATCCTGGCTCCCAACCTCAGCAAGAAG-3’和下游引物5’-TGCTCTAGAGGTAGACGTACTGGACGCGACACAG-3’对ZmRS的编码区进行PCR扩增。扩增程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min 20s，35个循环；72℃终延伸10min。将扩增产物切胶回收，用BamHI和XbaI酶切片段，后与pCsGFPBT载体(用于拟南芥稳定转化，见下图1)连接。将pCsGFPBT上NcoI与BamHI酶切位点之间的GFP表达框替换为一段短序列，然后将扩增并酶切的ZmRS ORF片段连在BamHI和XbaI位点之间，构建超表达拟南芥载体。载体有植物转化筛选标记潮霉素基因(见图2a)。载体上的ZmRS ORF片段经测序正确后转入农杆菌GV3101，用花序侵染法侵染拟南芥Col0野生型。

构建另一个用于构建ZmGOLS2/ZmRS双表达株系的ZmRS表达载体。以上游引物5’-CGCGGATCCATGGCTCCCAACCTCAGCAAGAAG-3’及下游引物5’-CTAGACTAGTTCAGTAGACGTACTGGACGCGACAC-3’扩增ZmRS编码区。扩增程序同上。将ZmRS ORF区连接于pBI111L载体上的BamHⅠ-SpeⅠ酶切位点之间。经测序正确后转入GV3101农杆菌，通过浸花法在过表达ZmGOLS2遗传背景的株系上进行侵染。

T0代种子经过70％乙醇室温1min，20％次氯酸钠室温5min消毒后，均匀涂布在MS平板上(含潮霉素或卡那霉素25mg/L)。4℃处理3天后转移至22℃培养箱生长。萌发约7-10天，转基因植株的叶深绿，根较长；非转化的植株叶浅绿，根短，不能长期存活。将转化体移入营养土中生长直到收T1代种子。T1代种子按上述方法筛选，收T2代种子(每个株系收多个单株)。每个T2代单株种子分别筛选，种植，收集每个单株的T3代种子，筛选每个单株的T3代种子，后代不分离的(均对潮霉素有抗性)进行下一步鉴定。

2、转基因株系的分子鉴定

通过RT-PCR对转化植株进行mRNA表达水平鉴定。通过Western blot对转化植株进行ZmRS蛋白表达水平鉴定。

RT-PCR扩增程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，28个循环；72℃终延伸8min。

Western blot步骤参照报道[4]。ZmRS一抗为课题组免疫家兔制备，使用稀释倍数为1：5000；二抗(羊抗兔)购于康为公司，使用稀释倍数为1：10000。

3、转基因株系种子中的游离糖组分鉴定。

对各拟南芥株系种子糖组份测定方法如下：使用收获并经脱水的成熟种子0.2g，液氮研磨至粉末后加入5mL 80％乙醇(含200μg/mL乳糖)，继续研磨至匀浆。将匀浆倒入10mL离心管中，再往研钵中加入2mL 80％乙醇(含200μg/mL乳糖)，清洗研钵，合并在离心管中。将样品置于80℃水浴锅中加热30min。室温，12000×g离心20min。将上清转移至另一干净的离心管中。95℃加热，将乙醇蒸发。将样品在-80℃冰箱中冻存24小时。真空抽干。HPLC级双蒸水将样品重悬。12000×g离心20min。上清冻存于-20℃冰箱中。测定前用0.22μm过滤。HPLC检测器为waters2424ELSD，色谱柱为Waters Xbrige氨基柱。上样量为5μL。双过表达ZmGOLS2/ZmRS基因能够提高种子中RFOs总量(图3)。

4、转基因株系种子活力及其耐贮性鉴定。

使用人工老化方法对拟南芥各株系进行种子活力鉴定。使用2mL收纳各株系成熟种子0.05g，放入干燥器中。干燥器中相对空气湿度由饱和KCl控制(83％RH)。将密封好的干燥器放入42℃培养箱中，对种子老化3天。老化结束后将各株系种子从干燥器中拿出，室温晾晒一天。进行TTC染色及萌发实验。

TTC染色对种子活力进行鉴定。经老化或未经老化的各株系拟南芥种子经消毒液(10％次氯酸，0.03％Tween-20)浸泡5min后，以双蒸水洗涤种子5次。加入1mL 1％TTC溶液(50mM磷酸缓冲液，pH-7.0)，黑暗条件下水浴(25℃)染色48小时。着色后的种子以双蒸水洗涤5次，经脱色液(水：苯酚：乳酸：甘油＝1：1：1：2，V/V)脱色4小时后在体式显微镜下拍照记录。红色着色越深代表种子活力越高。

对经老化或未经老化的各株系拟南芥种子进行萌发实验。将种子1/2MS培养板上进行萌发，每12小时对萌发率进行统计(体式显微镜观察)，统计至156小时。种子抗老化能力以老化种子吸胀后84小时的萌发比例(以野生型拟南芥为100％)表示。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

序列表

<110> 西北农林科技大学

<120> 利用植物棉子糖合成通路提高种子活力及耐贮性的应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 2

<211> 1038

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggctcccg agctgatgac agccaagatg accgccaaag ccgcggcggc ggcggcggcg 60

gtgaagcctg ccacgagggc gtacgtgacg ttccttgcgg gcgacggcga ctactggaag 120

ggcgtggtgg ggctggccaa aggcctgcgc aaggtccgct cggcctaccc cctggtggtg 180

gcggtgctgc ccgacgtgcc cgagtcccac cgccgcatcc tcgtctcgca gggctgcgtc 240

gtccgcgaga tcgagcccgt gtacccgcct gagaaccaga cgcagttcgc catggcgtac 300

tacgtcatca actactccaa gctccgcatc tgggagttcg tggagtacga gaggatggtg 360

tacctggacg cggacatcca ggtgttcgag aacatcgacg gcctgttcga gctcgagaag 420

gggtacttct acgcggtgat ggactgcttc tgcgagaaga cgtggagcca caccccgcag 480

tacaggatcg gctactgcca gcagtgcccg gacaaggtgg cgtggccagc ggcgaccgcc 540

gagctgggcc ctccgccgtc gctctacttc aacgccggca tgttcgtgca cgagcccagc 600

gtggccaccg ccaaggcgct cctcgacacc ctccgcgtga ctccgcccac ccccttcgca 660

gagcaggact tcctgaacat gttcttcagg gatcagtaca ggccgatccc caacgtgtac 720

aacctcgtgc tggccatgct ctggaggcac cccgagaacg tgcagctgga gaaggtgaag 780

gtcgtgcact actgcgcggc ggggtccaag ccgtggaggt tcacgggcaa ggaggcgaac 840

atggacaggg aggacatcaa cgccctggtg aacaagtggt gggacatcta caacgacgag 900

acgctggact tgaagggcct gccctcgctc tcgcccgacg acgacgacga ggtggaggcg 960

gtggccaaga agccgcttcg cgcggccctg gcggaggccg gcacggtcaa gtacgtcacc 1020

gcgccctcgg ccgcgtga 1038

<210> 3

<211> 345

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Met Ala Pro Glu Leu Met Thr Ala Lys Met Thr Ala Lys Ala Ala Ala

1 5 10 15

Ala Ala Ala Ala Val Lys Pro Ala Thr Arg Ala Tyr Val Thr Phe Leu

20 25 30

Ala Gly Asp Gly Asp Tyr Trp Lys Gly Val Val Gly Leu Ala Lys Gly

35 40 45

Leu Arg Lys Val Arg Ser Ala Tyr Pro Leu Val Val Ala Val Leu Pro

50 55 60

Asp Val Pro Glu Ser His Arg Arg Ile Leu Val Ser Gln Gly Cys Val

65 70 75 80

Val Arg Glu Ile Glu Pro Val Tyr Pro Pro Glu Asn Gln Thr Gln Phe

85 90 95

Ala Met Ala Tyr Tyr Val Ile Asn Tyr Ser Lys Leu Arg Ile Trp Glu

100 105 110

Phe Val Glu Tyr Glu Arg Met Val Tyr Leu Asp Ala Asp Ile Gln Val

115 120 125

Phe Glu Asn Ile Asp Gly Leu Phe Glu Leu Glu Lys Gly Tyr Phe Tyr

130 135 140

Ala Val Met Asp Cys Phe Cys Glu Lys Thr Trp Ser His Thr Pro Gln

145 150 155 160

Tyr Arg Ile Gly Tyr Cys Gln Gln Cys Pro Asp Lys Val Ala Trp Pro

165 170 175

Ala Ala Thr Ala Glu Leu Gly Pro Pro Pro Ser Leu Tyr Phe Asn Ala

180 185 190

Gly Met Phe Val His Glu Pro Ser Val Ala Thr Ala Lys Ala Leu Leu

195 200 205

Asp Thr Leu Arg Val Thr Pro Pro Thr Pro Phe Ala Glu Gln Asp Phe

210 215 220

Leu Asn Met Phe Phe Arg Asp Gln Tyr Arg Pro Ile Pro Asn Val Tyr

225 230 235 240

Asn Leu Val Leu Ala Met Leu Trp Arg His Pro Glu Asn Val Gln Leu

245 250 255

Glu Lys Val Lys Val Val His Tyr Cys Ala Ala Gly Ser Lys Pro Trp

260 265 270

Arg Phe Thr Gly Lys Glu Ala Asn Met Asp Arg Glu Asp Ile Asn Ala

275 280 285

Leu Val Asn Lys Trp Trp Asp Ile Tyr Asn Asp Glu Thr Leu Asp Leu

290 295 300

Lys Gly Leu Pro Ser Leu Ser Pro Asp Asp Asp Asp Glu Val Glu Ala

305 310 315 320

Val Ala Lys Lys Pro Leu Arg Ala Ala Leu Ala Glu Ala Gly Thr Val

325 330 335

Lys Tyr Val Thr Ala Pro Ser Ala Ala

340 345

<210> 3

<211> 2373

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atggctccca acctcagcaa gaagacgcct gctggcctcc tcggcgacga ggtggccccg 60

gtggagggac tcaagccgtc gcggttcacc cttaagggca aggacctggc cgtggacggg 120

cacccggtcc tgctggacgt gccggccaac atccgtctca ccccggcgtc gacgctcgtg 180

cccgccgcgg acgtccccgc agcgggcggc ggcagcttcc tcggcttcga cgcggcggcg 240

gccgagagcc ggcacgtggt gcccgtcgga aagctccgtg acattcggtt catgagcatc 300

ttccgtttca aggtgtggtg gacgacgcac tgggtggggg acagcggcag ggacgtggag 360

aacgagacgc agatgatggt gctcgaccgc tccgccggcg agcccggcgg cggcggccga 420

ccctacgtgc tgctgctccc catcatcgag ggctcgttcc gggcctgcct cgaggccggg 480

aaggtggaag actacgtgga cctgtgcgtg gagagcgggt cgtcggcggt gcgcggcgcc 540

gcgttccgga gctcgctgta cctgcacgcg ggcgacgacc cgttcgagct cgtcgcggac 600

gccgtcaggg tggtccgtgc gcacctgggc acgttccgga ccatggagga gaagacgccg 660

ccgccgatcg tggacaagtt cgggtggtgc acgtgggacg ccttctacct caaggtgcac 720

ccggagggcg tgtgggaggg cgtgcgccgc ctggcggagg gcggctgccc gccggggctg 780

gtgctcatcg acgacggctg gcagtccatc tgccacgacg aggacgaccc gaacagcggc 840

gaggagggca tgaaccgcac ctccgccggc gagcagatgc cctgccgcct catcaagttc 900

caggagaacc acaagttcag ggagtacaag cagggcggga tgggcgcgtt cgtgcgggag 960

atgaaggcgg cgttccccac cgtggagcag gtgtacgtgt ggcacgcgct gtgcgggtac 1020

tggggcggcc tccgccccgg cgcgcccggc ctgccgcccg ccaaggtggt ggcgcccaag 1080

ctctcccccg gcctgcagcg caccatggag gacctcgccg tcgacaagat cgtcaacaac 1140

ggtgtcggcc tcgtcgaccc caagcgcgcg cacgagctct acgatggttt gcactcccac 1200

ctccaggcct ccggcatcga cggcgtcaag gtcgacgtca ttcacttgct ggagatgctg 1260

tgcgaggagt acggcggccg tgtcgagctg gccaaggcct acttcgccgg gctgacggcg 1320

tcggtgcggc ggcacttcgg cggcaacggc gtgatcgcga gcatggagca ctgcaacgac 1380

ttcatgctgc tgggcacgga ggcggtggcg ctgggccgcg tgggcgacga cttctggtgc 1440

acggacccct ccggcgaccc caacggcacc ttctggctgc aggggtgcca catggtgcac 1500

tgcgcctaca actcgctgtg gatgggcaac ttcatccacc cggactggga catgttccag 1560

tccacgcacc cctgcgccgc cttccacgcc gcgtcccgcg ccatctccgg cgggcccatc 1620

tacgtcagcg actcggtggg gcagcacgac ttcgcgctgc tccgccgcct ggcgctcccc 1680

gacggcaccg tcctccggtg cgagggccac gcgctgccca cgcgcgactg cctcttcgcc 1740

gacccgctcc acgacggccg gaccgtgctc aagatctgga acgtgaaccg cttcgccggc 1800

gtcgtcggcg ccttcaactg ccagggcggc gggtggagcc ccgaggcgcg gcggaacaag 1860

tgcttctcgg agttctccgt gcccctggcc gcgcgcgcct cgccgtccga cgtcgaatgg 1920

aagagcggca aagcgggacc aggcgtcagc gtcaagggcg tctcccagtt cgccgtgtac 1980

gcggtcgagg ccaggacgct gcagctgctg cgccccgacg agggcgtcga cctcacgctg 2040

cagcccttca cctacgagct cttcgtcgtc gcccccgtgc gcgtcatctc gcacgagcgg 2100

gccatcaagt tcgcgcccat cggactcgcc aacatgctca acaccgccgg cgccgtgcag 2160

gcgttcgagg ccaagaaaga tgctagcggc gtcacggcag aggtgttcgt gaagggcgca 2220

ggggagctgg tggcgtactc gtcggcgacg cccaggctct gcaaggtgaa cggcgacgag 2280

gccgagttca cgtacaagga cggcgtggtc accgtcgacg tgccgtggtc ggggtcgtcg 2340

tcgaagctgt gtcgcgtcca gtacgtctac tga 2373

<210> 4

<211> 790

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

Met Ala Pro Asn Leu Ser Lys Lys Thr Pro Ala Gly Leu Leu Gly Asp

1 5 10 15

Glu Val Ala Pro Val Glu Gly Leu Lys Pro Ser Arg Phe Thr Leu Lys

20 25 30

Gly Lys Asp Leu Ala Val Asp Gly His Pro Val Leu Leu Asp Val Pro

35 40 45

Ala Asn Ile Arg Leu Thr Pro Ala Ser Thr Leu Val Pro Ala Ala Asp

50 55 60

Val Pro Ala Ala Gly Gly Gly Ser Phe Leu Gly Phe Asp Ala Ala Ala

65 70 75 80

Ala Glu Ser Arg His Val Val Pro Val Gly Lys Leu Arg Asp Ile Arg

85 90 95

Phe Met Ser Ile Phe Arg Phe Lys Val Trp Trp Thr Thr His Trp Val

100 105 110

Gly Asp Ser Gly Arg Asp Val Glu Asn Glu Thr Gln Met Met Val Leu

115 120 125

Asp Arg Ser Ala Gly Glu Pro Gly Gly Gly Gly Arg Pro Tyr Val Leu

130 135 140

Leu Leu Pro Ile Ile Glu Gly Ser Phe Arg Ala Cys Leu Glu Ala Gly

145 150 155 160

Lys Val Glu Asp Tyr Val Asp Leu Cys Val Glu Ser Gly Ser Ser Ala

165 170 175

Val Arg Gly Ala Ala Phe Arg Ser Ser Leu Tyr Leu His Ala Gly Asp

180 185 190

Asp Pro Phe Glu Leu Val Ala Asp Ala Val Arg Val Val Arg Ala His

195 200 205

Leu Gly Thr Phe Arg Thr Met Glu Glu Lys Thr Pro Pro Pro Ile Val

210 215 220

Asp Lys Phe Gly Trp Cys Thr Trp Asp Ala Phe Tyr Leu Lys Val His

225 230 235 240

Pro Glu Gly Val Trp Glu Gly Val Arg Arg Leu Ala Glu Gly Gly Cys

245 250 255

Pro Pro Gly Leu Val Leu Ile Asp Asp Gly Trp Gln Ser Ile Cys His

260 265 270

Asp Glu Asp Asp Pro Asn Ser Gly Glu Glu Gly Met Asn Arg Thr Ser

275 280 285

Ala Gly Glu Gln Met Pro Cys Arg Leu Ile Lys Phe Gln Glu Asn His

290 295 300

Lys Phe Arg Glu Tyr Lys Gln Gly Gly Met Gly Ala Phe Val Arg Glu

305 310 315 320

Met Lys Ala Ala Phe Pro Thr Val Glu Gln Val Tyr Val Trp His Ala

325 330 335

Leu Cys Gly Tyr Trp Gly Gly Leu Arg Pro Gly Ala Pro Gly Leu Pro

340 345 350

Pro Ala Lys Val Val Ala Pro Lys Leu Ser Pro Gly Leu Gln Arg Thr

355 360 365

Met Glu Asp Leu Ala Val Asp Lys Ile Val Asn Asn Gly Val Gly Leu

370 375 380

Val Asp Pro Lys Arg Ala His Glu Leu Tyr Asp Gly Leu His Ser His

385 390 395 400

Leu Gln Ala Ser Gly Ile Asp Gly Val Lys Val Asp Val Ile His Leu

405 410 415

Leu Glu Met Leu Cys Glu Glu Tyr Gly Gly Arg Val Glu Leu Ala Lys

420 425 430

Ala Tyr Phe Ala Gly Leu Thr Ala Ser Val Arg Arg His Phe Gly Gly

435 440 445

Asn Gly Val Ile Ala Ser Met Glu His Cys Asn Asp Phe Met Leu Leu

450 455 460

Gly Thr Glu Ala Val Ala Leu Gly Arg Val Gly Asp Asp Phe Trp Cys

465 470 475 480

Thr Asp Pro Ser Gly Asp Pro Asn Gly Thr Phe Trp Leu Gln Gly Cys

485 490 495

His Met Val His Cys Ala Tyr Asn Ser Leu Trp Met Gly Asn Phe Ile

500 505 510

His Pro Asp Trp Asp Met Phe Gln Ser Thr His Pro Cys Ala Ala Phe

515 520 525

His Ala Ala Ser Arg Ala Ile Ser Gly Gly Pro Ile Tyr Val Ser Asp

530 535 540

Ser Val Gly Gln His Asp Phe Ala Leu Leu Arg Arg Leu Ala Leu Pro

545 550 555 560

Asp Gly Thr Val Leu Arg Cys Glu Gly His Ala Leu Pro Thr Arg Asp

565 570 575

Cys Leu Phe Ala Asp Pro Leu His Asp Gly Arg Thr Val Leu Lys Ile

580 585 590

Trp Asn Val Asn Arg Phe Ala Gly Val Val Gly Ala Phe Asn Cys Gln

595 600 605

Gly Gly Gly Trp Ser Pro Glu Ala Arg Arg Asn Lys Cys Phe Ser Glu

610 615 620

Phe Ser Val Pro Leu Ala Ala Arg Ala Ser Pro Ser Asp Val Glu Trp

625 630 635 640

Lys Ser Gly Lys Ala Gly Pro Gly Val Ser Val Lys Gly Val Ser Gln

645 650 655

Phe Ala Val Tyr Ala Val Glu Ala Arg Thr Leu Gln Leu Leu Arg Pro

660 665 670

Asp Glu Gly Val Asp Leu Thr Leu Gln Pro Phe Thr Tyr Glu Leu Phe

675 680 685

Val Val Ala Pro Val Arg Val Ile Ser His Glu Arg Ala Ile Lys Phe

690 695 700

Ala Pro Ile Gly Leu Ala Asn Met Leu Asn Thr Ala Gly Ala Val Gln

705 710 715 720

Ala Phe Glu Ala Lys Lys Asp Ala Ser Gly Val Thr Ala Glu Val Phe

725 730 735

Val Lys Gly Ala Gly Glu Leu Val Ala Tyr Ser Ser Ala Thr Pro Arg

740 745 750

Leu Cys Lys Val Asn Gly Asp Glu Ala Glu Phe Thr Tyr Lys Asp Gly

755 760 765

Val Val Thr Val Asp Val Pro Trp Ser Gly Ser Ser Ser Lys Leu Cys

770 775 780

Arg Val Gln Tyr Val Tyr

785 790

Claims

1.通过在植物中同时过表达GOLS、RS基因在提高植物种子活力过程中的应用。

2.通过在植物中表达GOLS、RS基因在调控种子中棉子糖系列寡糖含量及分配过程中的应用。