CN107831236A - 花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，包括供试样品的制备以及气相色谱检测，所述供试样品的制备包括溶解、皂化、萃取未皂化成分以及甲酯化。本发明花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法具有准确度高的优点。
Description
技术领域
本发明涉及检测领域，特别是涉及一种花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法。
背景技术
花生一直以来都是重要的油料作物和经济作物，在中国其更是重要的食用植物油和食用蛋白来源。从50年代至今，花生的产量、品质、抗性、熟性均有进一步的提高，所以目前的花生品种具备高产、早熟、多抗、高含油量、高蛋白质含量等优良特性，将花生经过压榨处理得到花生油是花生的主要用途之一。
花生油(peanut oil)是一种淡黄透明的植物油，其具有色泽清亮、气味芬芳、滋味可口以及容易消化的优点。花生油中除了含有80％以上的不饱和脂肪酸(油酸41.2％，亚油酸37.6％)以及19.9％的饱和脂肪酸之外，还含有甾醇、麦胚酚、磷脂、维生素E、胆碱等对人体有益的物质，花生油含有的这些成分使其易于被人体消化吸收，且经常食用花生油可以起到降低血中胆固醇、防止皮肤皱裂老化、保护血管壁、防止血栓形成、预防动脉硬化和冠心病的作用。此外，花生油还可以用于预防菌痢、肝炎以及结膜炎等疾病。鉴于花生油具有上述的优点，有必要对花生油中含有的脂肪酸含量进行测定。
传统的方法检测花生油中的脂肪酸时存在供试样品的制备方法有缺陷导致检测准确度差的缺点，所以有必要寻求准确度高的花生油中脂肪酸含量的测定方法。
发明内容
基于此，本发明提供了一种花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，该测定方法具有高准确度的优点。
具体的技术方案如下：
一种花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，包括如下步骤：
供试样品溶液的制备：
溶解：取待测花生油溶于饱和烷烃中，超声处理后，得溶解的花生油；
皂化：向所述溶解的花生油中加入氢氧化钾的甲醇溶液使花生油皂化，得皂化的花生油；
萃取未皂化成分：将所述皂化的花生油用水稀释，再加入正己烷以萃取花生油中未皂化的成分，收集萃取后的水层；
甲酯化：取所述萃取后的水层进行后处理，再加入三氟化硼甲醇溶液以进行甲酯化反应，得供试样品溶液；
气相色谱检测：用气相色谱检测供试样品溶液中的油酸甲酯和亚油酸甲酯的含量。
在其中一些实施中，所述气相色谱检测的条件包括：
色谱柱：DB-FFAP(30m×0.32mm×0.5μm)；
载气：氮气；载气流速：3～5mL/min；
进样口温度：255～265℃；
分流比：6～14:1；
检测器：氢火焰离子化检测器；检测口温度：275～285℃；
进样量：0.8～1.2uL；
柱温：初始温度为138-142℃且保持0.8-1.2min后，以16～24℃/min升温至158-162℃，再以3～5℃/min升温至218-222℃，保持1.8-2.2min。
在其中一些实施例中，所述气相色谱检测的条件包括：
色谱柱：DB-FFAP(30m×0.32mm×0.5μm)；
载气：氮气；载气流速：4mL/min；
进样口温度：260℃；
分流比：8～12:1；
检测器：氢火焰离子化检测器；检测口温度：280℃；
进样量：1.0uL；
柱温：初始温度为140℃且保持1min后，以20℃升温至160℃，再以4℃/min升温至220℃，保持2min。
在其中一些实施例中，所述皂化的温度为40～80℃，皂化的时间为5～20min。
在其中一些实施例中，所述超声处理的时间为5～20min。
在其中一些实施例中，所述饱和烷烃为正己烷和/或异辛烷。
在其中一些实施例中，所述待测花生油与所述饱和烷烃的配比为0.1g:5～20mL。
在其中一些实施例中，所述待测花生油与所述氢氧化钾的甲醇溶液配比为5mg：5.8-6.2mL，所述氢氧化钾的甲醇溶液的浓度为0.48mol/L-0.52mol/L。
在其中一些实施例中，所述甲酯化包括：取所述萃取后的水层，加入硫酸至水层使蓝色石蕊试纸显红色，再加入正己烷萃取，收集萃取后的有机相，在所述有机相中加入三氟化硼甲醇溶液以进行甲酯化反应，得供试样品溶液。
在其中一些实施例中，所述甲酯化反应的时间为5～20min。
与现有技术相比，本发明的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法具有以下有益效果：
本发明对花生油中油酸和亚油酸含量测定前处理方法进行了优化，包括溶解、皂化、萃取除去未皂化成分以及甲酯化的步骤以及对各步骤的具体条件与参数进行了合理的优化，可以快速将花生油中的油酸和亚油酸提取、衍生化，并采用气相色谱对衍生化的油酸和亚油酸进行检测，结果准确，重现性好，能够达到快速、准确检测花生油中油酸和亚油酸含量的目的。
供试样品的制备过程中，通过超声处理溶解的花生油，有助于花生油中油酸和亚油酸的溶出和分散，而油酸和亚油酸的溶出和分散有利于后续的皂化反应和甲酯化反应的充分进行；并且样品使用氢氧化钾甲醇溶液皂化，避免了使用其它皂化试剂进行皂化时引起的结块、流动性差，造成皂化不完全的情况；再配合使用合适的溶剂萃取皂化的花生油可以有效除去花生油中未皂化的成分，避免未皂化成分对检测结果的干扰和影响。通过上述各步的有机结合再结合合适的甲酯化条件，本发明的供试样品的前处理方法可以使油酸和亚油酸充分转化为油酸甲酯和亚油酸甲酯，并且可以有效去除其它干扰成分的甲酯化，去除其它成分对检测结果的影响，从而大大提高了测试结果的准确度和重现性。此外，通过超声处理溶解的花生油，还有利于减少取样量，以降低检测成本。
进一步的，通过对气相色谱检测条件、溶解、皂化以及甲酯化的相关参数的进一步优化，进一步地提高了检测结果的准确度。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的作进一步详细的说明。
以下实施例中所用花生油的样品为金龙鱼花生油(20160525006)，该花生油中油酸的含量为120ppm(以甲酯化后的油酸甲酯计)，亚油酸的含量为244ppm(以甲酯化后的亚油酸甲酯计)。
在本技术领域以及本发明中，所说的油酸和亚油酸实际上主要是以其甘油酯的形式存在于花生油中的，简称为油酸和亚油酸，本发明所述的油酸实际为花生油中油酸和油酸酯的总和，所述的亚油酸实际为亚油酸和亚油酸酯的总和。油酸和亚油酸的含量是将其转化为对应的甲酯后，再以油酸甲酯和亚油酸甲酯的含量计的。
实施例1
本实施例是花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，步骤如下：
对照品溶液的制备：分别取油酸甲酯(批号：U-46M-N19-X，规格1g，99％)、亚油酸甲酯(批号：ZG010080，规格：100mg，99％)加入到正己烷中，制备成92.8mg/mL的油酸甲酯溶液和6.186mg/mL亚油酸甲酯溶液作为对照品溶液。
供试样品溶液的制备：
溶解：精确地称取0.5g花生油置于50mL容量瓶中，向装有花生油的容量瓶中加入40mL正己烷，然后超声10min，再向容量瓶中加入正己烷至50mL刻度线，摇匀，得溶解的花生油。
皂化：精确地吸取0.5mL溶解的花生油置于50mL烧瓶中，再向烧瓶中加入6mL0.5mol/L的氢氧化钾的甲醇溶液，在烧瓶上接冷凝管，在60℃的条件下水浴皂化处理8min，得皂化的花生油。
萃取未皂化成分：向皂化处理的花生油中加入5mL的蒸馏水，再加入10mL正己烷以萃取花生油中未皂化的成分，收集萃取后的水层。
甲酯化：向萃取后的水层中加入硫酸至水层使蓝色石蕊试纸变红，再加入10mL正己烷萃取，收集萃取后的有机相层，向有机相层中加入7mL的三氟化硼甲醇溶液(体积分数为13％)以进行甲酯化反应，甲酯化反应的时间为10min，取2mL甲酯化处理后的有机相并用2g无水硫酸钠除水，得供试样品溶液。
气相色谱检测：
取对照样品溶液和供试样品溶液分别进样，依据以下气相色谱法测定：
色谱柱：DB-FFAP(30m×0.32mm×0.50μm)；
载气:氮气；载气流速：4mL/min；
进样口温度：260℃；
分流比：10:1；
检测器：氢火焰离子化检测器；检测口温度：280℃；
进样量：1.0uL；
柱温：初始温度为140℃且保持1min后，以20℃/min升温至160℃，再以4℃/min升温至220℃，保持2min；
计算脂肪酸甲酯的含量：计算供试品溶液中与油酸甲酯、亚油酸甲酯对照品相应的色谱峰的峰面积，外标法计算油酸甲酯、亚油酸甲酯的含量，即为花生油中油酸和亚油酸的含量。
平行取3份待测花生油，按照实施例1的测定方法测得脂肪酸甲酯(油酸甲酯和亚油酸甲酯)的含量，计算3份待测花生油的测试结果的平均值和RSD。
实施例2
本实施例是花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，步骤同实施例1，不同之处在于，制备供试样品溶液时，超声的时间为10min，皂化处理时是加入8mL0.5mol/L氢氧化钾的甲醇溶液且在60℃的条件下水浴皂化10min，甲酯化时是加入8mL三氟化硼甲醇溶液(体积分数为13％)并甲酯化反应的时间为15min。
实施例3
本实施例是花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，步骤同实施例1，不同之处在于，制备供试样品时，皂化处理时是在20℃条件下皂化处理8min。
实施例4
本实施例是花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，步骤同实施例1，不同之处在于，制备供试样品时，皂化处理时皂化处理的时间为4min。
表1实施例1-4的测试结果
结果：由表1可知，实施例1-4检测的油酸和亚油酸的含量相近，且检测结果的RSD不大于2.5％，表明本发明花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法具有准确度高以及重现性好的优点。
对比例1
本对比例采用GB/T 17376-2008/ISO 5509：2000(《动植物油脂脂肪酸甲酯制备》)和GB/T 17377-2008/ISO 5508：1990(《动植物油脂脂肪酸甲酯的气相色谱分析》)的测定方案，检测金龙鱼花生油中油酸和亚油酸含量的含量，具体如下：
对照品溶液的制备：取实施例1中的对照品溶液作为对照品溶液。
供试品溶液的制备:
取250mg待测花生油置于50mL烧瓶中，向盛有花生油的烧瓶中加入4mL0.5mol/L氢氧化钠甲醇溶液及适量沸石，然后在烧瓶上接上冷凝器，水浴加热回流直至液滴消失，每40s缓慢摇动烧瓶，回流过程需要8min；用移液管从冷凝器顶部加入7mL的三氟化硼甲醇溶液(体积分数为13％)于沸腾的溶液里，继续煮沸3min，从冷凝器顶部加入10mL的异辛烷于沸腾的混合溶液里；
取下冷凝器，取出烧瓶，向烧瓶中加入20mL饱和氯化钠溶液，塞住烧瓶并振摇至少15s，继续加入饱和氯化钠溶液至烧瓶颈部，静置分层，吸取2mL上层有机相于玻璃瓶中，向玻璃瓶中加入适量无水硫酸钠去除有机相剩余的水，得供试品溶液。
取供试样品溶液和对照品溶液，以气相色谱法进行测定，色谱条件如下：
色谱柱：柱长4m、内径4mm，载体粒度160um，固定相质量分数20％；
载气：氦气，若无可含氧量尽可能低的氢气；载气流速60mL/min；
进样口温度：220℃；进样量：1.5uL。
柱温：180℃。
对比例2
此对比例的步骤同对比例1，不同之处在于，供试品溶液制备时，回流时间为10min，气相色谱条件中不同之处在于，柱温为200℃，进样口温度为260℃，载气流速为80mL/min。
对比例3
此对比例同实施例1，不同之处在于，供试样品的制备过程中不进行萃取未皂化成分的操作，即不除去未皂化成分。
对比例4
此对比例同实施例1，不同之处在于，供试样品的制备过程中，皂化处理时是加入6mL0.5mol/L的氢氧化钠的甲醇溶液。
表2对比例1-4的测试结果
结果：对比例1和对比例2都是采用的国标记载的技术方案，不同的是，对比例1和对比例2中的测试参数不同，由表2的测试结果可知，采用国标中的技术方案测定花生油的油酸和亚油酸含量时，测试参数不同会导致测试结果的差异较大，且采用国标记载的技术方案测定油酸甲酯含量和亚油酸甲酯含量的准确度也较差；对比例3由于没有萃取未皂化成分，导致检测结果的准确性明显变差；对比例4由于皂化试剂是氢氧化钠甲醇溶液，皂化过程中出现流动性差以及结块导致皂化不完全，从而使检测结果的准确性变差。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
供试样品溶液的制备：
溶解：取待测花生油溶于饱和烷烃中，超声处理后，得溶解的花生油；
皂化：向所述溶解的花生油中加入氢氧化钾的甲醇溶液使花生油皂化，得皂化的花生油；
萃取未皂化成分：将所述皂化的花生油用水稀释，再加入正己烷以萃取花生油中未皂化的成分，收集萃取后的水层；
甲酯化：取所述萃取后的水层进行后处理，再加入三氟化硼甲醇溶液以进行甲酯化反应，得供试样品溶液；
气相色谱检测：用气相色谱检测供试样品溶液中的油酸甲酯和亚油酸甲酯的含量。
2.根据权利要求1所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述气相色谱检测的条件包括：
色谱柱：DB-FFAP(30m×0.32mm×0.50μm)；
载气：氮气；载气流速：3～5mL/min；
进样口温度：255～265℃；
分流比：6～14:1；
检测器：氢火焰离子化检测器；检测口温度：275～285℃；
进样量：0.8～1.2uL；
柱温：初始温度为138-142℃且保持0.8-1.2min后，以16～24℃/min升温至158-162℃，再以3～5℃/min升温至218-222℃，保持1.8-2.2min。
3.根据权利要求2所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述气相色谱检测的条件包括：
色谱柱：DB-FFAP(30m×0.32mm×0.5μm)；
载气：氮气；载气流速：4mL/min；
进样口温度：260℃；
分流比：8～12:1；
检测器：氢火焰离子化检测器；检测口温度：280℃；
进样量：1.0uL；
柱温：初始温度为140℃且保持1min后，以20℃/min升温至160℃，再以4℃/min升温至220℃，保持2min。
4.根据权利要求1-3任一项所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述皂化的温度为40～80℃，皂化的时间为5～20min。
5.根据权利要求1-3任一项所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述超声处理的时间为5～20min。
6.根据权利要求1-3任一项所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述饱和烷烃为正己烷和/或异辛烷。
7.根据权利要求1-3任一项所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述待测花生油与所述饱和烷烃的配比为0.1g:5～20mL。
8.根据权利要求1-3任一项所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述待测花生油与所述氢氧化钾的甲醇溶液配比为5mg：5.8-8.2mL，所述氢氧化钾的甲醇溶液的浓度为0.48mol/L-0.52mol/L。
9.根据权利要求1-3任一项所述的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述甲酯化包括：取所述萃取后的水层，加入硫酸至水层使蓝色石蕊试纸显红色，再加入正己烷萃取，收集萃取后的有机相，在所述有机相中加入三氟化硼甲醇溶液以进行甲酯化反应，得供试样品溶液。
10.根据权利要求1-3任一项的花生油中油酸和亚油酸含量的测定方法，其特征在于，所述甲酯化反应的时间为5～20min。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20180323 |