CN104330487A - 乳制品中dha和epa含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
一种乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。所述乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，包括以下步骤：将DHA和EPA标准曲线进行制备，然后将乳制品进行预处理，加入磁力拌子，加入氢氧化钾甲醇溶液，开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持60℃，搅拌回流后冷却至室温，从冷凝管上加入三氟化硼甲醇，加热搅拌回流后冷却，从冷凝管上部加入正己烷继续加热回流，冷至室温移去冷凝管，加入饱和氯化钠水溶液，摇动。分出正己烷溶液于试管，进气相色谱仪进行定量计算。本发明所述检测方法，从乳制品中提取出脂肪经氢氧化钾、三氟化硼/甲醇皂化和酯化后进行有效分离，并进行定量，利用本方法不仅分离完全而且定量准确。
Description
技术领域
本发明涉及一种乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。
背景技术
研究表明，富含于深海鱼油中的脂肪酸DHA(顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸)和EPA(顺式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸)具有调节免疫，增强记忆，改善神经传导的功能和预防中风、心肌梗塞和动脉硬化的作用，并且是婴幼儿大脑发育所必须的物质。因此，在市场上能发现很多乳制品包括婴幼儿奶粉中都不同程度地添加了DHA和EPA。但由于添加量少，不易检测等特点，致使目前市场上的众多产品对添加了DHA和EPA的量参差不齐。
因此研究一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于乳制品中DHA和EPA含量的检测方法很有必要。
发明内容
本发明旨在提供一种准确度高、重复性高、操作简便、检测极限低适用于乳制品中DHA和EPA含量的检测方法。
所述的乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，包括以下步骤：
先进行DHA和EPA标准曲线进行制备与绘制，然后将乳制品进行预处理，再加入磁力拌子，加入4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持60℃，搅拌回流约15min，冷却至室温，从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟。分出上层正己烷溶液于试管中，取1μL进气相色谱仪，使用内标法进行定量计算。
优选的，本发明所述的乳制品预处理方法为：称取5g奶粉于100mL具塞量筒中，加25mL水，摇动分散均匀，加入2mL25％氨水，混匀后放入65℃水浴锅中加热15min后取出冷却，转移至250mL分液漏斗中，移取10ml乙醇倒入分液漏斗，剧烈震摇1min，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，剧烈震摇1min，然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并剧烈震摇1min，静置使之分层，有机层转入150mL圆底烧瓶中，水层再分别用10ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有机层于圆底烧瓶中，移取2mL内标溶液于150mL圆底烧瓶中，最后在80℃水浴锅中蒸去溶剂。
更优选的，本发明所述的内标溶液为三苯乙烯溶液，配制方法为称取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后转移至100mL容量瓶中，并定容。
进一步优选的，本发明所述的色谱条件为色谱柱：HP-23 30m×0.53mm×0.50μm；色谱柱温度：起始温度70℃，保持lmin，然后以20℃/min的速率升至180℃，并继续以3℃/min的速率升至220℃，最后在220℃保持10min；进样口温度：250℃；FID检测器温度：260℃；柱流量：2ml/min；柱流量+尾吹流量=50ml/min；进样方式：分流，分流比为10：1；载气：N2；燃烧气H2：40ml/min；助燃气Air：400ml/min。
本发明所述的检测方法，（1）DHA标准曲线的制备：以A标/A内为横坐标x，以m标/m内(m标、m内均以mg为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00784+1.19498X，R=0.99972。结果表明：在实验浓度范围内m标/m内与A标/A内呈良好的线性关系。（2）EPA标准曲线的制备：以A标/A内为横坐标x，以m标/m内(m标、m内均以mg为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00272+1.19104X，R=0.99983。结果表明：在实验浓度范围内m标/m内与A标/A内呈良好的线性关系。
本发明所述的检测方法，乳制品中DHA和EPA含量的计算公式为：
X=(m样/m内)×m内×100/(1000×m)(％)，其中，m样/m内由A标/A内通过标准曲线方程算得，m为样品质量(g)，m内为2ml内标溶液中三苯乙烯的量(mg)
本发明所述的检测方法中，从乳制品中提取出的脂肪经氢氧化钾、三氟化硼/甲醇皂化和酯化后用气相色谱脂肪酸专用柱进行有效分离，并用氢火焰化检测器检测和使用内标法进行定量，利用本方法不仅分离完全，而且定量准确。
具体实施方式
实施例一：
（1）内标溶液配制：称取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后转移至100mL容量瓶中，并定容。
（2）标准溶液配制：配制DHA标准溶液的浓度为1mg/mL，EPA标准溶液的浓度为0.5mg/mL。
（3）DHA标准曲线的制备：分别从DHA标准溶液中移取0.5mL，1mL，2mL，3mL，4mL于150mL圆底烧瓶中，加入2mL内标溶液并在80℃水浴锅中蒸去溶剂。从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟。分出上层正己烷溶液于试管中，取1μL进气相色谱仪。以A标/A内为横坐标x，以m标/m内(m标、m内均以mg为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00784+1.19498X，R=0.99972。结果表明：在实验浓度范围内m标/m内与A标/A内呈良好的线性关系。
（4）EPA标准曲线的制备：分别从EPA标准溶液中移取0.5mL，1mL，2mL，3mL，4mL于150mL圆底烧瓶中，加入2mL内标溶液并在80℃水浴锅中蒸去溶剂。从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟。分出上层正己烷溶液于试管中，取1μL进气相色谱仪。以A标/A内为横坐标x，以m标/m内(m标、m内均以mg为单位)为纵坐标Y，绘制标准曲线得出线性回归方程为Y=0.00272+1.19104X，R=0.99983。结果表明：在实验浓度范围内m标/m内与A标/A内呈良好的线性关系。
（5）样品预处理：称取5g奶粉于100mL具塞量筒中，加25mL水，摇动分散均匀，加入2mL25％氨水，混匀后放入65℃水浴锅中加热15min后取出冷却，转移至250mL分液漏斗中，移取10ml乙醇倒入分液漏斗，剧烈震摇1min，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，剧烈震摇1min，然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并剧烈震摇1min，静置使之分层，有机层转入150mL圆底烧瓶中，水层再分别用10ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有机层于圆底烧瓶中，移取2mL内标溶液于150mL圆底烧瓶中，最后在80℃水浴锅中蒸去溶剂。
（6）计算：乳制品中DHA和EPA含量的计算公式为：
X=(m样/m内)×m内×100/(1000×m)(％)，其中，m样/m内由A标/A内通过标准曲线方程算得，m为样品质量(g)，m内为2ml内标溶液中三苯乙烯的量(mg)。
实施例二：精密度试验、重复性试验和回收率试验
（1）精密度试验：样品处理后连续进样三次，结果表明DHA和EPA定量结果的变异系数均小于1.5％。
（2）重复性试验：取同一批乳饮料，精确称取3份试样，按所述的检测方法进样分析，结果表明，对同一批样品多次取样分析，DHA和EPA的定量结果的变异系数RSD均小于2.O％，因此，所述的检测方法具有良好的重现性。
（3）回收率试验：采用加标回收法，在已知DHA和EPA含量的样品中加入lml l.0mg/ml DHA溶液和lml0.5mg/ml EPA溶液及2mL内标溶液，然后按所述的检测方法进样分析，结果表明DHA平均回收率为98.50.101.50％，EPA平均回收率为97.34-100.92％。因此，所述的检测方法完全满足分析要求。
Claims (4)
1.乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，包括以下步骤：
先进行DHA和EPA标准曲线进行制备与绘制，然后将乳制品进行预处理，再加入磁力拌子，加入4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持60℃，搅拌回流约15min，冷却至室温，从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，加热、搅拌，回流约5min，冷却，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续加热回流5min，冷至室温，移去冷凝管，加入少量饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟；
分出上层正己烷溶液于试管中，取1μL进气相色谱仪，使用内标法进行定量计算。
2. 如权利要求1所述的乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，其特征在于所述的乳制品预处理方法为：称取5g奶粉于100mL具塞量筒中，加25mL水，摇动分散均匀，加入2mL25％氨水，混匀后放入65℃水浴锅中加热15min后取出冷却，转移至250mL分液漏斗中，移取10ml乙醇倒入分液漏斗，剧烈震摇1min，移取25mL乙醚倒入分液漏斗，剧烈震摇1min，然后移取25mL石油醚倒入分液漏斗，并剧烈震摇1min，静置使之分层，有机层转入150mL圆底烧瓶中，水层再分别用10ml乙醇，25mL乙醚和25mL石油醚萃取一次，合并有机层于圆底烧瓶中，移取2mL内标溶液于150mL圆底烧瓶中，最后在80℃水浴锅中蒸去溶剂。
3. 如权利要求1或2所述的乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，其特征在于所述的内标溶液为三苯乙烯溶液，配制方法为称取0.2g三苯乙烯，用正己烷溶解后转移至100mL容量瓶中，并定容。
4. 如权利要求1或2或3所述的乳制品中DHA和EPA含量的检测方法，其特征在于所述的色谱条件为色谱柱：HP-23 30m×0.53mm×0.50μm；色谱柱温度：起始温度70℃，保持lmin，然后以20℃/min的速率升至180℃，并继续以3℃/min的速率升至220℃，最后在220℃保持10min；进样口温度：250℃；FID检测器温度：260℃；柱流量：2ml/min；柱流量+尾吹流量=50ml/min；进样方式：分流，分流比为10：1；载气：N2；燃烧气H2：40ml/min；助燃气Air：400ml/min。
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