CN107739307A - 一种用稀碱溶液提取‑固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法 - Google Patents

一种用稀碱溶液提取‑固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107739307A
CN107739307A CN201711044028.5A CN201711044028A CN107739307A CN 107739307 A CN107739307 A CN 107739307A CN 201711044028 A CN201711044028 A CN 201711044028A CN 107739307 A CN107739307 A CN 107739307A
Authority
CN
China
Prior art keywords
extraction
extracted
phase
solid
protocatechuic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711044028.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107739307B (zh
Inventor
何诚
张家瑚
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Agricultural University
Original Assignee
China Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Agricultural University filed Critical China Agricultural University
Priority to CN201711044028.5A priority Critical patent/CN107739307B/zh
Publication of CN107739307A publication Critical patent/CN107739307A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107739307B publication Critical patent/CN107739307B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C51/47—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用稀碱溶液提取‑固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法，包括以下步骤：(1)将四季青叶原料粉碎，用稀碱溶液浸泡后加热提取，浓缩提取液并调节pH值为酸性，用乙酸乙酯萃取后收集有机相并浓缩，再用碱溶液萃取，收集水相并调节pH值为酸性，再用乙醚萃取后收集有机相并浓缩，得固态提取物；(2)用甲醇水溶液溶解步骤(1)所得提取物，上样于固相萃取柱进行纯化，重结晶，即得原儿茶酸。本发明提供的方法采用稀碱溶液提取，能耗较低，不同pH条件下萃取，除杂效果好；所用有机溶剂回收后可重复利用；固相萃取柱脱色除杂效果好，直接收集流出液，工艺简单；所得产品纯度﹥98％，收率较高，方法简单易于工业化生产。

Description

一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法
技术领域
本发明涉及一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的工艺方法，采用稀碱溶液提取，有机溶剂萃取和固相萃取柱分离等工序制备原儿茶酸的工艺方法。
背景技术
原儿茶酸属酚酸类化合物，用稀碱溶液提取使原儿茶酸成盐，增加其水溶性从而提高转移率；固相萃取(Solid Phase Extraction，简称SPE)基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相的物理萃取过程，也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。填料保留机理分为保留目标化合物和保留杂质，本发明利用HLB填料保留杂质机理，即对原儿茶酸的吸附性差，对杂质的吸附性强。
原儿茶酸(3，4-二羟基苯甲酸)分子式：C7H6O4，分子量：154.12，分子结构如下：
物理性质：白色至褐色结晶性粉末，在空气中变色。密度1.54g/cm3。熔点约200℃(分解)。溶于乙醇、乙醚和乙酸乙酯。
研究表明原儿茶酸有抗菌作用，体外试验时对绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、产碱杆菌及枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑菌作用。在医药领域，原儿茶酸具有祛痰、平喘作用，临床用于治疗慢性气管炎。除此之外，动物实验表明原儿茶酸具有良好的抗癌症、抗氧化、抗病毒、抗细菌、抗炎症等多种药理作用。
目前生产原儿茶酸的方法主要有化学合成法和中药提取法。化学合成法虽然生产成本低产物纯度高，但是化学合成条件较为苛刻，一般需要在强酸(强碱)和高温的条件下进行反应，对设备的耐腐蚀性要求高。例如一种抗病毒化合物原儿茶酸的合成工艺，专利号ZL201410271618.1。中药提取法工艺条件较为温和，例如一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，专利号ZL201410271618.1，此专利利用TLC制备提纯，不适于工业化大生产。本发明一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的工艺方法，工艺条件温和，方法简单易于工业化生产。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的工艺方法，该法纯化出的产品含量高，且便于工业化操作。
具体而言，本发明提供了一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法，包括以下步骤：
(1)将四季青叶原料粉碎，用稀碱溶液浸泡后加热提取，浓缩提取液并调节pH值为酸性，用乙酸乙酯萃取后收集有机相并浓缩，再用碱溶液萃取，收集水相并调节pH值为酸性，再用乙醚萃取后收集有机相并浓缩，得固态提取物；
(2)用甲醇水溶液溶解步骤(1)所得提取物，上样于固相萃取柱进行纯化，重结晶，即得原儿茶酸。
其中，本发明优选所述浸泡使用的稀碱溶液为浓度0.05％～0.2％的NaHCO3水溶液，更优选为浓度0.08％～0.1％的NaHCO3水溶液。浸泡后，所述加热提取的温度优选为90～95℃。
本发明提供的方法需要两次调节pH值为酸性，所述调节pH值均优选调节至pH值1.5～2.5。
用乙酸乙酯萃取可进行多次，以确保目标化合物被充分提出，将多次萃取的有机相合并后进行浓缩即可。
本发明在乙酸乙酯萃取后，用碱液进行萃取。所述萃取用的碱溶液为浓度3～7％、更优选为5％的NaHCO3水溶液。
本发明在对提取步骤进行优化的基础上，对步骤(2)的纯化过程进行进一步优化。具体而言：
用于复溶步骤(1)所述提取物的甲醇水溶液浓度优选为3～7％、更优选为5％。复溶后，可先进性过滤，将滤液上样于萃取柱。
本发明优选采用填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物的固相萃取柱对提取物进行纯化。将提取物上样时，上样的质量优选为所述填料重量的1/8～1/20。为了确保将目标化合物充分提取，提高产率，本发明优选在收集产物后，再另外用相同浓度的甲醇水溶液溶淋洗柱，收集洗脱液并合并。
经过所述固相萃取柱后，可先用乙酸乙酯进行萃取、收集有机相并浓缩后，再进行重结晶。
本发明优选所述重结晶采用的溶剂为水。
作为本发明的一种优选方案，所述方法包括以下具体步骤：
(1)将四季青叶原料粉碎，加入相当于原料体积8～10倍的0.08％～0.1％的NaHCO3水溶液，浸泡后在90～95℃下加热提取1～2h，浓缩提取液并调节pH值为1.5～2.5，用乙酸乙酯萃取后收集有机相并浓缩，再用3～7％的NaHCO3水溶液萃取，收集水相并调节pH值为1.5～2.5，再用乙醚萃取后收集有机相并浓缩，得固态提取物；
(2)用3～7％的甲醇水溶液溶解步骤(1)所得提取物，上样于填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物的固相萃取柱进行纯化，所述上样的质量为所述填料重量的1/8～1/20，收集流出液后用乙酸乙酯进行萃取，收集有机相并浓缩，用水重结晶，即得原儿茶酸。
与现有技术相比，本发明提供的方法采用稀碱溶液提取，能耗较低，不同pH条件下萃取，除杂效果好；所用有机溶剂回收后可重复利用；固相萃取柱脱色除杂效果好，直接收集流出液，工艺简单；用水做溶剂重结晶无毒环保；本发明所得产品纯度﹥98％，收率较高，方法简单易于工业化生产。
附图说明
图1为实施例1所提纯原儿茶酸的紫外扫描图谱；
图2为实施例1所提纯原儿茶酸的红外图谱；
图3为实施例1所提纯原儿茶酸的质谱图；
图4为实施例1所提纯原儿茶酸的H1NMR；
图5为实施例1所提纯原儿茶酸的C13NMR；
图6为原儿茶酸对照品HPLC图；
图7为实施例1所提纯原儿茶酸的HPLC图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
取四季青叶药材，粉碎，投入提取罐，加入8倍体积0.1％NaHCO3溶液浸泡4小时，90℃提取1小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.12(60℃)，调pH2.0，乙酸乙酯萃取5次，合并有机相并浓缩，5％NaHCO3溶液萃取，水相调pH2.0，乙醚萃取，浓缩有机相得黄色粉末，5％甲醇溶液溶解粉末，过滤，滤液注入固相萃取柱，TLC检测，收集流出液，再用5％甲醇溶液溶淋洗柱，收集流出液，合并流出液，乙酸乙酯萃取，浓缩，用水重结晶即得产品，产率为62.5％，原儿茶酸含量99.1％。
本实施例提供产品的紫外扫描图谱如图1所示，红外图谱如图2所示，质谱图如图3所示，H1NMR图谱如图4所示，C13NMR图谱如图5所示，HPLC图谱如图7所示(图6为原儿茶酸对照品HPLC图)。
实施例2
取四季青叶药材，粉碎，投入提取罐，加入8倍体积0.08％NaHCO3溶液浸泡4小时，95℃提取2小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.12(60℃)，调pH2.0，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相并浓缩，5％NaHCO3溶液萃取，水相调pH2.0，乙醚萃取，浓缩有机相得黄色粉末，5％甲醇溶液溶解粉末，过滤，滤液注入固相萃取柱，TLC检测，收集流出液，再用5％甲醇溶液溶淋洗柱，收集流出液，合并流出液，乙酸乙酯萃取，浓缩，用水重结晶即得产品，产率为61.8％，原儿茶酸含量为98.5％。
实施例3
取四季青叶药材，粉碎，投入提取罐，加入10倍体积0.08％NaHCO3溶液浸泡4小时，92℃提取1.5小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.15(60℃)，调pH2.0，乙酸乙酯萃取4次，合并有机相并浓缩，5％NaHCO3溶液萃取，水相调pH2.0，乙醚萃取，浓缩有机相得黄色粉末，5％甲醇溶液溶解粉末，过滤，滤液注入固相萃取柱，TLC检测，收集流出液，再用5％甲醇溶液溶淋洗柱，收集流出液，合并流出液，乙酸乙酯萃取，浓缩，用水重结晶即得产品，产率为63.5％，原儿茶酸含量98.3％。
实施例4
取四季青叶药材，粉碎，投入提取罐，加入10倍体积0.1％NaHCO3溶液浸泡4小时，90℃提取1小时，过滤，滤液浓缩至相对密度1.14(60℃)，调pH2.0，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相并浓缩，5％NaHCO3溶液萃取，水相调pH2.0，乙醚萃取，浓缩有机相得黄色粉末，5％甲醇溶液溶解粉末，过滤，滤液注入固相萃取柱，TLC检测，收集流出液，再用5％甲醇溶液溶淋洗柱，收集流出液，合并流出液，乙酸乙酯萃取，浓缩，用水重结晶即得产品，产率为64.9％，原儿茶酸含量98.6％。
实施例5
比较稀碱溶液提取法与传统提取方法。
表1：比较稀碱溶液提取法与传统提取方法
提取方法 提取液体积 提取温度 提取时间 原儿茶酸转移率
稀碱溶液提取法 10 95℃ 1h 87.63％
水煎煮法 10 95℃ 1h 76.58％
75％乙醇回流法 10 回流 1h 82.35％
取100g四季青叶粉末，加入10倍体积的提取溶剂，浸泡4小时，按表1中的条件进行提取，过滤，HPLC检测提取液中原儿茶酸含量，计算原儿茶酸转移率，见表1，结果表明稀碱溶液提取法优于传统提取方法。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将四季青叶原料粉碎，用稀碱溶液浸泡后加热提取，浓缩提取液并调节pH值为酸性，用乙酸乙酯萃取后收集有机相并浓缩，再用碱溶液萃取，收集水相并调节pH值为酸性，再用乙醚萃取后收集有机相并浓缩，得固态提取物；
(2)用甲醇水溶液溶解步骤(1)所得提取物，上样于固相萃取柱进行纯化，重结晶，即得原儿茶酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浸泡使用的稀碱溶液为浓度0.05％～0.2％的NaHCO3水溶液，优选为浓度0.08％～0.1％的NaHCO3水溶液。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述加热提取的温度为90～95℃。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，所述调节pH值为酸性具体为：调节pH值至1.5～2.5。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的方法，其特征在于，所述萃取用的碱溶液为浓度3～7％的NaHCO3水溶液。
6.根据权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述甲醇水溶液浓度为3～7％。
7.根据权利要求1～6任意一项所述的方法，其特征在于，所述固相萃取柱的填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物。
8.根据权利要求1～7任意一项所述的方法，其特征在于，所述重结晶前，先用乙酸乙酯进行萃取，收集有机相并浓缩。
9.根据权利要求1～8任意一项所述的方法，其特征在于，所述重结晶用的溶剂为水。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将四季青叶原料粉碎，加入相当于原料体积8～10倍的0.08％～0.1％的NaHCO3水溶液，浸泡后在90～95℃下加热提取1～2h，浓缩提取液并调节pH值为1.5～2.5，用乙酸乙酯萃取后收集有机相并浓缩，再用3～7％的NaHCO3水溶液萃取，收集水相并调节pH值为1.5～2.5，再用乙醚萃取后收集有机相并浓缩，得固态提取物；
(2)用3～7％的甲醇水溶液溶解步骤(1)所得提取物，上样于填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物的固相萃取柱进行纯化，所述上样的质量为所述填料重量的1/8～1/20，收集流出液后用乙酸乙酯进行萃取，收集有机相并浓缩，用水重结晶，即得原儿茶酸。
CN201711044028.5A 2017-10-31 2017-10-31 一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法 Active CN107739307B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711044028.5A CN107739307B (zh) 2017-10-31 2017-10-31 一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711044028.5A CN107739307B (zh) 2017-10-31 2017-10-31 一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107739307A true CN107739307A (zh) 2018-02-27
CN107739307B CN107739307B (zh) 2020-12-29

Family

ID=61233716

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711044028.5A Active CN107739307B (zh) 2017-10-31 2017-10-31 一种用稀碱溶液提取-固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107739307B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112142591A (zh) * 2020-10-09 2020-12-29 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种从发酵液中分离提取原儿茶酸的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104098465A (zh) * 2014-06-18 2014-10-15 广西万寿堂药业有限公司 一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法
CN105622388A (zh) * 2016-04-05 2016-06-01 惠州学院 一种碱水-超声波协同提取植物中有机酸的方法
CN107266308A (zh) * 2017-07-20 2017-10-20 广西南宁桂知科技有限公司 一种利用龙眼壳制备原儿茶酸的工艺

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104098465A (zh) * 2014-06-18 2014-10-15 广西万寿堂药业有限公司 一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法
CN105622388A (zh) * 2016-04-05 2016-06-01 惠州学院 一种碱水-超声波协同提取植物中有机酸的方法
CN107266308A (zh) * 2017-07-20 2017-10-20 广西南宁桂知科技有限公司 一种利用龙眼壳制备原儿茶酸的工艺

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
潘长华主编: "《实用小化工生产大全 第1卷 无机化工产品•复混肥料•农药•兽药》", 30 September 1996, 化学工业出版社 *
王媚等: ""中药有机酸类成分的提取分离及测定方法研究进展"", 《南京中医药大学学报》 *
赵子剑等主编: "《植物化学实验》", 30 September 2013, 西安电子科技大学出版社 *
陈友梅主编: "《中药化学》", 31 December 1998, 山东科学技术出版社 *
高雪: ""紫丁香叶提取物HPLC指纹图谱的建立及原儿茶酸含量测定"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112142591A (zh) * 2020-10-09 2020-12-29 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种从发酵液中分离提取原儿茶酸的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107739307B (zh) 2020-12-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103479730B (zh) 一种从鲜荷叶中同步分离荷叶黄酮和叶绿素的方法
CN102351926B (zh) 一种牛蒡子苷的制备方法
CN102464602A (zh) 一种提取5-羟基色氨酸方法
CN102351863A (zh) 一种从菘蓝中提取青黛酮的方法
CN102408415A (zh) 一种芒果苷的制备方法
CN1563073A (zh) 甘草次酸的制备方法
CN107739307A (zh) 一种用稀碱溶液提取‑固相萃取柱纯化原儿茶酸的方法
AU2017416080B2 (en) Method for preparing betanin
CN106831930B (zh) 一种用于熊果酸提取的萃取剂及提取方法
CN102477035B (zh) 一种从伏康树籽中提取纯化它勃宁的清洁化工艺
CN105646519A (zh) 一种超声水溶液提取青蒿素的方法
CN102329209A (zh) 一种从虎杖中提取大黄素的方法
CN101475618A (zh) 注射用黄芩苷的精制方法
CN101759549A (zh) 一种金丝桃素的制备方法
CN108997359A (zh) 一种从甜菊糖生产废渣中提取叶绿素的方法
CN111018929B (zh) 一种异柚皮苷的提取分离工艺
CN101016297A (zh) 从萝芙木中提取利血平的方法
CN102180781B (zh) 从二氧化碳萃取酒花残渣中提取生产高纯度黄腐酚的方法
CN103980333B (zh) 一种盐酸吉西他滨的纯化方法
CN102391278A (zh) 一种萃取苦艾素的方法
CN104744485B (zh) 一种微生物发酵高三尖杉酯碱的提取方法和应用
CN102643317A (zh) 一种制备芝麻素酚三葡萄糖苷的方法
CN109627156B (zh) 一种高纯贝壳杉烯酸提取分离的方法
CN103193750B (zh) 一种利用大孔树脂xad7hp联合分离制备莽草酸和八角黄酮的方法
CN102285954A (zh) 从杨梅果渣中提取表儿茶素的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant