CN104098465A - 一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，属于中药提取工艺技术领域。该方法由以下工艺制得原儿茶酸单体：水提、浓缩、萃取、洗脱、TLC制备提纯，经HPLC法分析测定化合物B为≥99%原儿茶酸，为原儿茶酸单体。本发明从滇桂艾纳香中提取氯原酸的工艺方法，解决制备纯度不高、制备量小、制备过程复杂难于实现工业化生产的问题，通过水提、浓缩、萃取、洗脱等工艺，实现提取纯度高、工艺制备过程简单，适合推广，满足人们对原儿茶酸的需求。

Description

一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法

技术领域

本发明涉及中药提取工艺技术领域，具体涉及一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法。

背景技术

滇桂艾纳香Blumea riparia(BL.)DC，在《中国植物志》里亦有收载，称假东风草[1]，民间习用全草入药。《中华药海》中记载，滇桂艾纳香性味归经:淡、甘平，入肝、肾、膀胱三经；功效主治活血止血——本品甘淡入肝，养肝活血，收敛止血，具有活血不伤血、止血不留淤之功，可用于各种出血症；利水消肿——本品甘淡渗利，可利湿行水，主治小便不利浮肿症，用其性平、无寒热、偏热颇，故寒症、热症可用之，尤对产后浮肿症佳。起活血养血、利水消肿之效[2]。《新华本草纲要》中亦提到其有活血、止血、利水的功能，用于治经期提前，产后血崩，产后浮肿，不孕症。

本单位受广西壮族自治区药品检验所中药室委托，对壮药滇桂艾纳香进行分离，经过预试，对制备的滇桂艾纳香浸膏样品中发现其含有酚类、有机酸类、糖类和氨基酸等成分，根据预试的结果，我们进行了小量分离摸索实验，结果发现浸膏中含有机酸，经鉴定为原儿茶酸。

原儿茶酸，学名3,4-二羟基苯甲酸，其分子结构如下：

它存在于鳞始蕨科植物乌蕨[Stenoloma chusanum(L.)Ching]的叶，冬青科植物冬青(Ilex chi-nensis Sims)的叶等植物中，其单体呈白色至褐色结晶性粉末，现代药理实验表明，其对金色葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌都有明显的抑制作用，并有收敛和促进伤面愈合的作用，故目前在临床上用于烧伤、小儿肺炎、菌痢、急性盂肾炎、急性胰腺炎及某种溃疡病的治疗。同时其平喘、祛痰、解蛇毒等部分功效国内亦有相关报道。原儿茶酸不仅应用于医药中间体、染料等亦作为一种分析试剂。

有过滇桂艾纳香中含有原儿茶酸的相关报道，但从滇桂艾纳香中提取分离原儿茶酸的报道较少，或者从滇桂艾纳香中提取分离得到是原儿茶酸提取物，且收率低，纯度不高，更谈不上提取分离得到高纯度的原儿茶酸单体了。某些实验室的制备方法虽然能获得较高的纯度，却无法进行规模化工业生产。目前提取原儿茶酸的方法普遍存在但是不适合工业化生产，而适于工业化生产的产品纯度较低等问题。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，解决制备纯度不高、制备量小、制备过程复杂难于实现工业化生产的问题，通过水提、浓缩、萃取、洗脱等工艺，实现提取纯度高、工艺制备过程简单，适合推广，满足人们对原儿茶酸的需求。

本发明的技术方案为：

一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，由以下工艺制成：

1)水提：将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，控制温度为60～80℃，用180～230目滤布过滤，合并滤液；

2)浓缩:滤液浓缩至相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至相对密度为1.36～1.38的浸膏；

3)萃取：浸膏溶于水并加热溶解后过滤得浸膏水溶液，调pH值为2～6，采用有机溶剂萃取，萃取3～5次，分离得到水层和有机层；

4)洗脱：取有机层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿-甲醇-水为65:35:10的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；

5)TLC制备提纯：将上步所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿-丙酮-甲醇为6:1:1的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为≥99％原儿茶酸。

作为本发明的优选方案，步骤1)加水煎煮两次为第一次加10～15倍量水煎煮1～2h，第二次加8～10倍量水煎煮1～1.5h。

作为本发明的优选方案，步骤2)是温度控制在58～65℃下进行浓缩。

作为本发明的优选方案，步骤3)中浸膏溶于5～8倍量的水，控制加热温度为60～80℃。

作为本发明的优选方案，步骤3)中所述有机溶剂为丁酮、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚或石油醚中的一种或多种复合物，有机溶剂总量控制为0.2～1倍的浸膏水溶液体积量。

本发明的有益效果为：

1、采用控制植物水提液以及萃取料液的pH在2～6间，使得原儿茶酸处于分子状态，易于吸附和萃取，有效的将原儿茶酸与杂质进行分离，进一步提高了原儿茶酸的纯度。

2、工艺方法中有机溶剂均可回收再次循环使用，对环境无污染，利于降低成本。

3、滇桂艾纳香药材进行加水煎煮，不引入有机溶剂，可省去使用其他溶剂提取而引入杂质。

4、利用原儿茶酸易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂的特性进行萃取，多次萃取，能完全分离得到水层和有机层，水层不含原儿茶酸，可提取其它有用成分，实现药材有效利用分离提取。

5、上硅胶干柱，梯度洗脱，有效分离提取原儿茶酸不含其它杂质，采用薄层层析法、高效液相层析法进一步提纯得到高纯度的原儿茶酸，具有分离能力高,专属性强。

6、本发明所得产品纯度可达99％以上，生产环节少、成本较低，收率高，方法简单，易于工业化生产，且原儿茶酸的提取得率较高。

附图说明

图1为本发明提取原儿茶酸的工艺流程图。

图2为实施例1原儿茶酸对照品的HPLC图谱。

图3为实施例1化合物B的HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合工艺流程图和实施例对本发明做进一步说明。

实施例一：

从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法：

将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮1.5h，第二次加10倍量水煎煮1h，控制温度为60℃，用200目滤布过滤，合并滤液；浓缩:滤液浓缩至58℃相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至58℃相对密度为1.36的浸膏；浸膏溶于5倍量的水并加热至65℃，溶解后过滤得浸膏水溶液，调pH值为6，采用丁酮萃取，丁酮总量控制为0.2～1倍的浸膏水溶液体积量，萃取5次，分离得到水层和丁酮层；取丁酮层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿-甲醇-水为65:35:10的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；将洗脱所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿-丙酮-甲醇为6:1:1的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为≥99％原儿茶酸。

实施例二：

从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法：

将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮1.5h，第二次加8倍量水煎煮1h，控制温度为65℃，用180目滤布过滤，合并滤液；浓缩:滤液浓缩至65℃相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至65℃相对密度为1.38的浸膏；浸膏溶于5-8倍量的水并加热至60℃，溶解后过滤得浸膏水溶液，调pH值为5，采用丁酮萃取，丁酮总量控制为0.2～1倍的浸膏水溶液体积量，萃取3次，分离得到水层和丁酮层；取丁酮层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿-甲醇-水为65:35:10的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；将洗脱所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿-丙酮-甲醇为6:1:1的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为≥99％原儿茶酸。

实施三：

从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法：

将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，第一次加12倍量水煎煮2h，第二次加9倍量水煎煮1.5h，控制温度为80℃，用230目滤布过滤，合并滤液；浓缩:滤液浓缩至58℃相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至58℃相对密度为1.38的浸膏；浸膏溶于8倍量的水并加热至80℃，溶解后过滤得浸膏水溶液，调pH值为2，采用丁酮萃取，丁酮总量控制为0.2～1倍的浸膏水溶液体积量，萃取4次，分离得到水层和丁酮层；取丁酮层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿-甲醇-水为65:35:10的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；将洗脱所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿-丙酮-甲醇为6:1:1的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为≥99％原儿茶酸。

实施例四：

本实施例与上述实施例不同之处为,有机溶剂除了选取丁酮外，还可以为正丁醇、乙酸乙酯、乙醚或石油醚中的一种，有机溶剂总量控制为0.2～1倍的浸膏水溶液体积量。

实施例五：

本实施例与上述实施例不同之处为,有机溶剂还可以为丁酮、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚和石油醚中的两种以上复合物，有机溶剂总量控制为0.2～1倍的浸膏水溶液体积量。

以下以实施例1为例，详述对化合物B的测定方法：

一、TLC法(薄层色谱法)：

1、对照品溶液制备：精密称取原儿茶酸对照品，其纯度为99％以上，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

2、供试品溶液制备：取化合物B，加适量甲醇使溶解，作为供试品溶液。

3、鉴别：参照中国药典2005年版一部附录ⅥB进行试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl,分别点上同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲醇为6:1:1的比例配制的溶液作为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(256nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的斑点。

4、结果：薄层层析检查测定化合物B为原儿茶酸。

二、HPLC法(高效液相层析法)

1、仪器与试剂

高效液相色谱仪：日本岛津LC-6A，高效液相色谱柱：中国科学院大连化学物理研究所产品，Ф4.6×250mm，填料为Nucleosil7C₁₈,紫外256nm检测。

2、方法

(1)色谱条件：高效液相色谱柱Nucleosil7C₁₈(Ф4.6×250mm)，流动相为甲醇-1％冰醋酸溶液(8:95,v/v)，流速为1ml/min，柱温为室温，检测波长256nm下检测，理论板数原儿茶酸峰应不低于4000。

(2)对照品溶液和供试品溶液的制备同TLC法，在此不再赘述。

(3)精密度实验吸取对照品和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定原儿茶酸的含量，测定化合物B为原儿茶酸，其纯度达到99％以上。

3、结果：经HPLC测定与原儿茶酸对照品保留的时间一致，白色晶体，熔点为200～202℃，其图谱见附图2和附图3，根据数据分析与文献结合，确定化合物B为原儿茶酸。

通过实施例1表明，本发明从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，可靠，且提取纯度高，以实施例二～五作同样的试验，也同样达到相近的效果。

Claims (5)

1.一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于由以下工艺制成：

1)水提：将除杂后的滇桂艾纳香药材置提取罐中，加水煎煮二次，控制温度为60～80℃，用180～230目滤布过滤，合并滤液；

2)浓缩:滤液浓缩至相对密度为1.08的浓缩液，移至沉淀罐中，静置8小时，经沉降离心处理，取澄清滤液浓缩至相对密度为1.36～1.38的浸膏；

3)萃取：浸膏溶于水并加热溶解后过滤得浸膏水溶液，调pH值为2～6，采用有机溶剂萃取，萃取3～5次，分离得到水层和有机层；

4)洗脱：取有机层部分，硅胶拌匀后上硅胶干柱，以氯仿-甲醇-水为65:35:10的比例配制的溶液作为洗脱剂进行梯度洗脱，分别收集每个梯度的洗脱液的下层水相；

5)TLC制备提纯：将上步所得进行TLC鉴别，取检测到目标成分的下层水相进行TLC制备，以氯仿：丙酮：甲醇为6:1:1的比例配制的溶液作为展开剂，得到化合物B，结晶干燥后，经HPLC法分析测定化合物B为≥99％原儿茶酸。

2.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于：所述步骤1)加水煎煮两次为第一次加10～15倍量水煎煮1～2h，第二次加8～10倍量水煎煮1～1.5h。

3.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于：所述步骤2)是温度控制在58～65℃下进行浓缩。

4.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于：所述步骤3)中浸膏溶于5～8倍量的水，控制加热温度为60～80℃。

5.如权利要求1所述的一种从滇桂艾纳香中提取原儿茶酸的工艺方法，其特征在于：步骤3)中所述有机溶剂为丁酮、正丁醇、乙酸乙酯、乙醚或石油醚中的一种或多种复合物，有机溶剂总量控制为0.2～1倍的浸膏水溶液体积量。