CN107737097A - 一种含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，本发明利用脂质体载体对菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物进行包载，改善了其对皮肤的渗透性和吸收性，提升活性成分的抗氧化抗衰老效果；脂质体载体对菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物抗衰老活性成分具有保护作用，提高活性成分的稳定性和完整性；脂质体具有缓释效果，能够延长活性成分的功效。

Description

一种含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品及其制备方法
技术领域
本发明涉及护肤品领域，具体涉及一种含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品及其制备方法
背景技术
护肤是全球美容以及个人护理行业中重要的细分市场，而抗衰老护肤品在其中备受关注。自古以来，人类一直致力于寻找具有抗衰老作用的活性物质。造成皮肤衰老的原因主要有：1)紫外线的照射导致胶原蛋白流失，从而加速皮肤老化；2)体内氧自由基的攻击导致皮肤损伤；3)皮肤中的成纤维细胞自然老化。
在市面上的抗衰老护肤品中，主要通过添加激素和植物提取物等对皮肤进行抗皱处理，然而激素的滥用容易导致副作用；天然的植物提取物副作用小，富含抗衰老活性成分，是目前抗衰老产品的研究热点。
菊花细胞具有强大的抗氧化和抗衰老活性，是优异的天然抗氧化剂，为人类抗衰老提供一个新方法。然而他们也存在易被氧化、不容易被皮肤吸收以及生物利用度低等问题，限制其功效的发挥，因此，活性成分的保护与新型剂型研究有待突破，能够最大程度保证功效成分，避免环境因素的影响，方便化妆品配方体系的开发应用，提高皮肤的透皮吸收，延长功效表达时间。
脂质体技术是利用天然的磷脂类化合物，制备出的具有双层分子结构的纳米级囊泡，脂质体安全性和生物降解性良好，具有类似细胞膜结构，可实现对水溶性和脂溶性活性成分的有效包裹，对活性成分具有保护、运载和缓释效果。脂质体主要成分为天然磷脂，是生物细胞膜的基本支架，与细胞有很强的亲和作用，能增强细胞的流动性和通透性，促进表皮细胞的生成和恢复，促进细胞代谢。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，利用脂质体技术对活性成分进行有效的包裹，通过脂质体类生物膜纳米囊泡结构，保护并运载至深层肌肤，保证其活性成分，促进吸收，增加生物利用度。
本发明的另一个目的在于提供含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，由以下重量份数的组分制成：菊花细胞提取物0.75％～3.5％、核桃叶提取物1％～5％、刺五加提取物1.2％～2.8％、磷脂2％～5％、胆固醇5％～14％、液体脂质6％～10％、乳化剂0.25％～1.5％、凝胶材料0.1％～1.8％和去离子水余量。
上述技术方案中菊花细胞提取物含有丰富的黄酮类抗氧化活性成分，具有强大的抗氧化活性，有效促进肌肤细胞的自我分化和新陈代谢，能够增加皮肤弹性，核桃叶提取物和刺五加提取物都具有良好的抗氧化抗衰老效果。脂质体载体对菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物抗衰老活性成分具有保护和缓释作用，提高活性成分的稳定性，且能促进有效成分渗入深层肌肤。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的优选实施方式，由以下重量份数的组分制成：菊花细胞提取物1.5％～2.5％、核桃叶提取物2％～3.5％、刺五加提取物1.8％～2.5％、磷脂2％～5％、胆固醇5％～14％、液体脂质6％～10％、乳化剂0.25％～1.5％、凝胶材料0.1％～1.8％和去离子水余量。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的优选实施方式，由以下重量份数的组分制成：菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、磷脂2％～5％、胆固醇5％～14％、液体脂质6％～10％、乳化剂0.25％～1.5％、凝胶材料0.1％～1.8％和去离子水余量。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的优选实施方式，所述磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂、磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺中的至少一种。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的优选实施方式，所述液体脂质为霍霍巴油、鳄梨油、橄榄油、椰子油和蓖麻油中的至少一种。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的优选实施方式，所述凝胶材料为黄原胶、卡拉胶、果胶或卡波姆。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的优选实施方式，所述乳化剂为吐温-80、吐温-60、硬脂酸、甘油单硬脂酸酯中的至少一种。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的优选实施方式，所述所述菊花细胞为菊花愈伤组织细胞。
本发明还提供上述任一项所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备菊花细胞提取物；
(2)按比例称取各组分原料；
(3)将凝胶材料溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相；
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、磷脂、胆固醇、液体脂质和乳化剂按1:30～40的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在75～95℃下充分搅拌得到油相；
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体；
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在60～70℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品。
作为本发明所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法的优选实施方式，所述步骤(1)中，菊花细胞反复冻融后经冷冻干燥、粉碎得到菊花细胞冻干粉，以乙醇溶液为提取液经提取、超声、浓缩、干燥、粉碎过筛获得的菊花细胞提取物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)菊花细胞提取物含有丰富的黄酮类抗氧化活性成分，具有强大的抗氧化活性，有效促进肌肤细胞的自我分化和新陈代谢，能够增加皮肤弹性，核桃叶提取物和刺五加提取物都具有良好的抗氧化抗衰老效果。
(2)本发明利用脂质体载体对菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物进行包载，改善了其对皮肤的渗透性和吸收性，提升活性成分的抗氧化抗衰老效果；
(3)脂质体载体对菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物抗衰老活性成分具有保护作用，提高活性成分的稳定性和完整性；
(4)脂质体具有缓释效果，能够延长活性成分的功效。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
核桃叶提取物购自西安天瑞生物科技有限公司、刺五加提取物购自湖北巨胜科技有限公司。
实施例1
本发明含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法为：
(1)制备菊花细胞提取物
1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；
其中，诱导培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/L)、蔗糖(20g/L)和琼脂(10g)；
2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；
3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；
其中，增殖培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、激动素(1.5mg/L)、蔗糖(20g/L)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；
4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；
5)将菊花细胞反复冻融后冷冻干燥，获得菊花细胞冻干粉；
6)将菊花细胞冻干粉粉碎，以乙醇为提取液经提取、强超声、浓缩、干燥、粉碎，过200目筛获得菊花细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各组分原料
菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、大豆卵磷脂2％、蛋黄卵磷脂2.5％、胆固醇8％、霍霍巴油5％、鳄梨油5％、硬脂酸0.5％、甘油单硬脂酸酯0.25％、卡拉胶0.75％和去离子水余量。
(3)将卡拉胶溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相。
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、大豆卵磷脂、胆固醇、霍霍巴油、鳄梨油、硬脂酸、甘油单硬脂酸酯按1:35的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在90℃下充分搅拌得到油相。
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体。
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在65℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品。
实施例2
本发明含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法为：
(1)制备菊花细胞提取物
1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；
其中，诱导培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/L)、蔗糖(20g/L)和琼脂(10g)；
2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；
3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；
其中，增殖培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、激动素(1.5mg/L)、蔗糖(20g/L)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；
4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；
5)将菊花细胞反复冻融后冷冻干燥，获得菊花细胞冻干粉；
6)将菊花细胞冻干粉粉碎，以乙醇溶液为提取液经提取、强超声、浓缩、干燥、粉碎，过200目筛获得菊花细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各组分原料
菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、磷脂酰胆碱2％、磷脂酰乙醇胺2％、胆固醇6％、椰子油6％、吐温-80 0.25％、果胶0.1％和去离子水余量。
(3)将果胶溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相。
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、胆固醇、椰子油和吐温-80按1:36的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在85℃下充分搅拌得到油相。
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体。
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在65℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品。
实施例3
本发明含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法为：
(1)制备菊花细胞提取物
1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；
其中，诱导培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/L)、蔗糖(20g/L)和琼脂(10g)；
2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；
3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；
其中，增殖培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、激动素(1.5mg/L)、蔗糖(20g/L)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；
4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；
5)将菊花细胞反复冻融后冷冻干燥，获得菊花细胞冻干粉；
6)将菊花细胞冻干粉粉碎，以乙醇溶液为提取液经提取、强超声、浓缩、干燥、粉碎，过200目筛获得菊花细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各组分原料
菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、氢化卵磷脂2％～5％、胆固醇12％、椰子油3％、蓖麻油4％、吐温-60 1.5％、卡波姆1％和去离子水余量。
(3)将卡波姆溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相。
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、氢化卵磷脂、胆固醇、椰子油、蓖麻油和吐温-60按1:35的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在80℃下充分搅拌得到油相。
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体。
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在75℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品。
实施例4
本发明含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法为：
(1)制备菊花细胞提取物
1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；
其中，诱导培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/L)、蔗糖(20g/L)和琼脂(10g)；
2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；
3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；
其中，增殖培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、激动素(1.5mg/L)、蔗糖(20g/L)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；
4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；
5)将菊花细胞反复冻融后冷冻干燥，获得菊花细胞冻干粉；
6)将菊花细胞冻干粉粉碎，以乙醇溶液为提取液经提取、强超声、浓缩、干燥、粉碎，过200目筛获得菊花细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各组分原料
菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、大豆卵磷脂2％、胆固醇14％、椰子油8％、硬脂酸1％、卡波姆0.5％和去离子水余量。
(3)将卡波姆溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相。
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、大豆卵磷脂、胆固醇、椰子油和硬脂肪酸按1:40的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在95℃下充分搅拌得到油相。
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体。
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在70℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品。
实施例5
本发明含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法的一种实施例，本实施例所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法为：
(1)制备菊花细胞提取物
1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；
其中，诱导培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/L)、蔗糖(20g/L)和琼脂(10g)；
2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；
3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；
其中，增殖培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、激动素(1.5mg/L)、蔗糖(20g/L)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；
4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；
5)将菊花细胞反复冻融后冷冻干燥，获得菊花细胞冻干粉；
6)将菊花细胞冻干粉粉碎，以乙醇溶液为提取液经提取、强超声、浓缩、干燥、粉碎，过200目筛获得菊花细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各组分原料
菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、蛋黄卵磷脂2％、胆固醇5％、霍霍巴油10％、甘油单硬脂酸酯1.5％、黄原胶1.8％和去离子水余量。
(3)将黄原胶溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相。
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、蛋黄卵磷脂、胆固醇、霍霍巴油和甘油单硬脂酸酯按1:30的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在75℃下充分搅拌得到油相。
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体。
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在60℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品。
对比例1
(1)制备菊花细胞提取物
1)取菊花植株上部幼嫩枝段的外植体，清洗、灭菌，接种于愈伤组织诱导培养基上，黑暗条件下诱导，温度为25℃诱导产生愈伤组织细胞；
其中，诱导培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、6-苄氨基嘌呤(3.5mg/L)、蔗糖(20g/L)和琼脂(10g)；
2)将愈伤组织细胞在诱导培养基中连续传代增殖，筛选细胞形态均一、生长稳定的菊花愈伤组织细胞系；
3)将步骤2)得到菊花愈伤组织细胞系转入增殖培养基悬浮培养，摇床培养获得稳定的菊花悬浮细胞培养系；
其中，增殖培养基为MS基础培养基，添加1-萘乙酸(0.1mg/L)、激动素(1.5mg/L)、蔗糖(20g/L)；摇床转速120rpm，温度25℃，光照下培养；
4)将菊花悬浮细胞培养系接种于增殖培养基，扩大培养，获得菊花细胞；
5)将菊花细胞反复冻融后冷冻干燥，获得菊花细胞冻干粉；
6)将菊花细胞冻干粉粉碎，以乙醇为提取液经提取、强超声、浓缩、干燥、粉碎，过200目筛获得菊花细胞提取物。
(2)按比例称取各组分原料
菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、霍霍巴油5％、鳄梨油5％、硬脂酸0.5％、甘油单硬脂酸酯0.25％、卡拉胶0.75％和去离子水余量。
(3)将卡拉胶溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相。
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、鳄梨油、硬脂酸、甘油单硬脂酸酯按1:35的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在90℃下充分搅拌得到油相。
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体。
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在65℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述不含脂质体的抗衰老护肤品。
护肤品功效测定
一、缓释功效测定
以实施例1制备的护肤品作为实验组，以对比例1制备份不含脂质体的护肤品作为对照组。采用透析袋法评价实验组和对照组的缓释功效，以生理盐水作为释放介质，定时取样检测透析袋外的溶液，结果如表1所示。
表1
由表1可知，实验组的释放率明显低于对照组，表明本发明的脂质凝胶对于菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物的活性成分具有缓释作用，能够延长活性成分的作用时间，起到长效抗衰老抗氧化的作用。
二、渗透性实验
以实施例1制备的护肤品作为实验组，以对比例1制备份不含脂质体的护肤品作为对照组进行渗透性实验。渗透性实验方法步骤参照相关文献(陈良红.含乳木果油纳米乳液的制备技术及其应用研究[D].上海应用技术学院,2015.)，实验结果如表2所示。
表2
由表2可知，实施例1的渗透性优于对照组。结果表明，本发明的抗衰老护肤品利用脂质体载体对难溶的菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物进行包载，改善了其对皮肤的渗透性和吸收性，提升活性成分的抗氧化抗衰老效果，使其更容易穿透皮肤表面，增加抗衰老抗氧化活性物质的穿透力，更好发挥菊花细胞提取物抗衰老的功效。
三、活性成分稳定性评价
以实施例1所制备的护肤品作为实验组，以对比例1所制备的护肤品为对照组，分别将实验组和对照组放置6个月后，进行超氧阴离子清除测定。
将实施例1和对比例1所制备的凝胶分别配制成浓度为50mg/mL的水溶液。取0.1mL分别加入1mL含557μmol/L的NaOH的16mmol/L Tris-HCl(pH＝8.0),1mL含45μmol/L PMS的16mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，以及含108μmol/L的NBT的16mmol/L Tris-HCl(pH＝8.0)。25℃温浴5min，在酶标仪560nm下测吸光值，根据公式(1)计算超氧阴离子清除率，结果如表3所示。
超氧阴离子清除率＝(1-样品管A560/对照管A560)×100％ (1)
表3
编号 超氧阴离子清除率(％)
实施例1 67.84±0.55
对比例1 44.68±0.39
超氧阴离子是机体代谢过程产生的一种活性自由基，与皮肤老化有着密切的联系。由表3结果可知，放置6个月后，实施例1制备的护肤品的超氧阴离子清除率明显高于对比例1，表明脂质体对抗衰老抗氧化活性成分具有保护作用，能够将易氧化的菊花细胞提取物、核桃叶提取物和刺五加提取物活性成分包裹在脂质体中，活性成分得到脂质体双层膜的保护，在环境中放置不易被氧化，在很大程度上提高了活性成分的稳定性和完整性。
四、皮肤角质层含水量测定
实施例1～5制得的抗衰老护肤品，每个组分别选50名年龄在35～55岁的女性志愿者，志愿者洁面后在面部肌肤均匀涂抹护肤品，连续使用60天，通过皮肤测试仪(MC750，德国CK)测定志愿者使用前和使用后角质层含水量，测试结果如表4所示。
表4
皮肤角质层中有结合水和游离水两种类型的水分，水分含量会影响角质层中水和油脂皮脂膜的形成，皮脂膜能防止水分过分蒸发，软化皮肤，对皮肤的抗衰老祛皱具有重要意义。由表4可知，志愿者使用本发明制备的抗衰老护肤品后，皮肤角质层含水量明显提高，表明本发明的抗衰老护肤品能够有效减少皮肤水分流失。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，由以下重量份数的组分制成：菊花细胞提取物0.75％～3.5％、核桃叶提取物1％～5％、刺五加提取物1.2％～2.8％、磷脂2％～5％、胆固醇5％～14％、液体脂质6％～10％、乳化剂0.25％～1.5％、凝胶材料0.1％～1.8％和去离子水余量。
2.根据权利要求1所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，由以下重量份数的组分制成：菊花细胞提取物1.5％～2.5％、核桃叶提取物2％～3.5％、刺五加提取物1.8％～2.5％、磷脂2％～5％、胆固醇5％～14％、液体脂质6％～10％、乳化剂0.25％～1.5％、凝胶材料0.1％～1.8％和去离子水余量。
3.根据权利要求1所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，由以下重量份数的组分制成：菊花细胞提取物2.0％、核桃叶提取物3.0％、刺五加提取物2.1％、磷脂2％～5％、胆固醇5％～14％、液体脂质6％～10％、乳化剂0.25％～1.5％、凝胶材料0.1％～1.8％和去离子水余量。
4.根据权利要求1所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，所述磷脂为大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化卵磷脂、磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，所述液体脂质为霍霍巴油、鳄梨油、橄榄油、椰子油和蓖麻油中的至少一种。
6.根据权利要求1所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，所述凝胶材料为黄原胶、卡拉胶、果胶或卡波姆。
7.根据权利要求1所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，所述乳化剂为吐温-80、吐温-60、硬脂酸、甘油单硬脂酸酯中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品，其特征在于，所述菊花细胞为菊花愈伤组织细胞。
9.根据权利要求1～8任一项所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备菊花细胞提取物；
(2)按比例称取各组分原料；
(3)将凝胶材料溶于去离子水中，充分搅拌，得到水相；
(4)将菊花细胞提取物、核桃叶提取物、刺五加提取物、磷脂、胆固醇、液体脂质和乳化剂按1:30～40的质量比溶于三氯甲烷溶液中，在75～95℃下充分搅拌得到油相；
(5)将油相置于容器中，在减压旋转蒸发三氯甲烷，使磷脂在器壁形成薄膜，随后加入磷酸盐缓冲溶液，水化过夜，形成脂质体混悬液，冰浴下超声，得到脂质体；
(6)将脂质体加入步骤(3)得到的水相，在60～70℃下不断搅拌，搅拌均匀，冷却得到所述含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品。
10.根据权利要求9所述的含菊花细胞提取物的抗衰老护肤品的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，菊花细胞反复冻融后经冷冻干燥、粉碎得到菊花细胞冻干粉，以乙醇溶液为提取液经提取、超声、浓缩、干燥、粉碎过筛获得的菊花细胞提取物。
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