CN106963688A - 一种含有植物提取物复合多肽脂质体组合物及其制备方法和在祛皱产品的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于个人护理品技术领域，公开了一种含有植物提取物复合多肽脂质体组合物及其制备方法和在祛皱产品的应用。本发明组合物包括以下重量百分数的组分：植物提取物1～15％；复合小分子活性多肽0.1～0.5％；脂质5～20％；乳化剂1～3％；缓冲溶液50～75％；溶剂10～20％；所述的植物提取物为桃花提取物、当归提取物和甘松提取物中的至少一种；所述的复合小分子活性多肽选自乙酰六肽‑8、乙酰谷氨酰七胜肽‑3、乙酰基八肽‑1、棕榈酰六肽‑19、棕榈酰寡肽、棕榈酰三肽‑5和棕榈酰五肽‑3中的至少一种。本发明利用多种提取物有效成分与多肽分子的协同作用，促进分子活性，显著提高皮肤的弹性，可应用于祛皱产品中。

Description

一种含有植物提取物复合多肽脂质体组合物及其制备方法和 在祛皱产品的应用

技术领域

本发明属于个人护理品技术领域，特别涉及一种含有植物提取物复合多肽脂质体组合物及其制备方法和在祛皱产品的应用。

背景技术

皮肤皱纹是皮肤衰老的明显标志及表现形式，是内源性因素和外源性因素共同作用的结果。其中外源性因素包括由于环境因素如日光、环境污染物等接触而产生活性氧自由基，直接伤害皮肤细胞的DNA和细胞外基质的胶原、弹性蛋白或粘多糖分子，从而皮肤变薄、表皮和真皮交织变弱和细胞数量以及供血血管数量减少，导致面部皱纹产生；由于压力、情绪等原因，导致皮肤调节功能受损，从而产生皱纹。内源性因素是指随着年龄的增长，皮肤逐渐老化，表皮角质层中的自然保湿因子不断减少，皮肤水和能力下降，同时皮肤中的蛋白多糖和透明质酸浓度降低，皮肤真皮层的水分减少，真皮成纤维细胞活性减少，合成胶原纤维的能力下降，导致皮肤干燥，皮肤弹性减弱，最后产生皱纹。

目前，市场上主要的祛皱产品主要针对三个方面：1、清除皮肤上的自由基；2、通过添加一些保湿剂或营养物质从外部来补充皮肤流失的水分和蛋白成分；3、促进细胞新陈代谢。虽然通过这三个途径可以解决皮肤皱纹的主要问题，但仍有许多问题需要解决，例如，针对皮肤水分和蛋白成分流失，现在主要采用的方法是从外部摄取小分子量的多肽进行补充。

研究表明，小分子活性多肽的祛皱作用主要通过两个途径，一是与类肉毒素相似，阻断神经递质的传输过程，通过信号调节作用，减少肌肉的收缩，从而达到祛皱的效果，例如乙酰六肽-8，参与竞争SNAP-25在融泡复合体的位点,从而影响SNARE复合体的形成，使其不能有效释放神经递质,从而致使肌肉收缩减弱，防止皱纹的形成，有类似效果的小分子活性多肽还有乙酰谷氨酰七胜肽-3和棕榈酰六肽-19等；二是促进皮肤中蛋白合成，使皮肤恢复弹性和饱满，例如棕榈酰三肽-5，通过组织生长因子(TGF-β)模仿人体自身机理产生胶原蛋白，使皮肤变得饱满，抚平皱纹，有类似效果的小分子活性多肽还有棕榈酰五肽-3。然而皮肤的吸收量有限，很难满足皮肤的需求；而且皮肤皱纹形成的机理比较复杂，虽然针对单一的机制所开发的祛皱产品能够发挥一定的祛皱功效，但总体效果欠佳。因此为了开出功效更为突出的祛皱，需要从多层次、多角度、多途径来进行。

中国自古以来就有使用中药汉方进行外敷达到美容的功效，例如唐代的著名药师孙思邈在他的著作《千金要方》中记载收录了81种“面药”方药，明代李时珍的《本草纲目》收录了168种能用于美容护肤的中药。

本发明使用中药美容汉方中的中药的提取物同时配合小分子活性多肽，既能使面部皮肤短时间内达到快速祛皱的效果，又能在使用过程中调理皮肤，达到改善肤质的效果，而且利用脂质体技术将中药提取物与小分子活性多肽进行包裹传递，使有效物质更好地被皮肤吸收。

桃花提取物中含有山奈酚、香、豆精、三叶豆甙和维生素A、B、C等营养物质，具有扩张血管，疏通脉络，润泽肌肤，改善血液循环，促进皮肤营养和氧供给；当归提取物中含有丰富的维生素A、维生素B12、维生素E、钴胺素、挥发油，可以起到促进血液循环，同时具有抑制酪氨酸酶活性作用，抗氧化和清除自由基作用；甘松提取物中含有丰富的萜类、黄酮类、香豆素类等物质，具有镇静、抗菌和消炎的作用，同时能舒张平肌，改善皮肤微循环。

目前在美容产品和个人护理品中有效成分的添加方式主要还是通过简单与基质混合，由于皮肤具有保护屏障功能，因此产品中的有效物质只能有限地被皮肤所吸收，所以无法达到预计的效果，脂质体是一种具有与生物膜结构类似的小囊，它与皮肤角质层的磷脂双层分子有相似性，利用脂质体对有效成分进行包裹，能够促进有效成分对皮肤的渗透性，提过利用率，同时利用脂质体包裹后能防止有效成分的变质，可以增加有效成分的稳定性，延长保质期，目前利用脂质体作为传递介质主要还是集中药物载体，针对个人护理品中的使用相对较少。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

本发明另一目的在于提供一种上述含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的制备方法。本发明方法简便易行，条件容易控制，设备要求低，易于实现产业化生产。

本发明再一目的在于提供上述含有植物提取物复合多肽脂质体组合物在祛皱产品中的应用。

本发明的目的通过下述方案实现：

一种含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，包括以下重量百分数的组分：植物提取物1～15％；复合小分子活性多肽0.1～0.5％；脂质5～20％；乳化剂1～3％；缓冲溶液50～75％；溶剂10～20％。

所述的植物提取物为桃花提取物、当归提取物和甘松提取物中的至少一种；

所述桃花提取物选自碧桃花、绛桃花、绯桃花和紫叶桃花的提取物中的至少一种，其中优选为绯桃花提取物；

所述的桃花提取物可采用目前任意常规提取方法提取得到，优选为采用亚临界萃取或超声提取得到的提取物；

所述的桃花提取物优选为以绯桃花为原料，采用亚临界萃取或超声提取得到的提取物，为黄色液体；

所述桃花提取物中的总多酚含量应不低于5mg/g。

所述的当归提取物选自东当归、欧当归和云南野当归的提取物中的至少一种，其中优选为云南野当归提取物；

所述的当归提取物可采用目前任意常规提取方法提取得到，优选为采用亚临界萃取或超声提取得到的提取物；

所述的当归提取物优选为以云南野当归为原料，采用亚临界萃取或超声提取得到的提取物，为深紫红色液体；

所述当归提取物的阿魏酸含量应不低于80mg/g。

所述的甘松提取物可采用目前任意常规提取方法提取得到，优选为采用亚临界萃取或水蒸气蒸馏提取得到的提取物；为无色或黄色液体；

所述甘松提取物的总黄酮含量应不低于60mg/g。

所述的复合小分子活性多肽可选自乙酰六肽-8、乙酰谷氨酰七胜肽-3、乙酰基八肽-1、棕榈酰六肽-19、棕榈酰寡肽、棕榈酰三肽-5和棕榈酰五肽-3中的至少一种。

所述的脂质可选自胆固醇、二棕榈酰卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰胆碱和二棕榈酰磷脂酰甘油中的至少一种。

所述的乳化剂可选自吐温80、斯盘80和单硬脂酸甘油酯中的至少一种。

所述的缓冲溶液可选自磷酸盐缓冲溶液、Tris缓冲溶液或甘氨酸-HCl缓冲溶液，优选为磷酸盐缓冲溶液；

所述缓冲溶液的浓度优选为2～5％，更优选为2～3％。

所述的溶剂为一种或多种生理可接受溶剂，可选自乙醇、乙二醇、丙二醇、异丙醇、1,3-丁二醇和甘油中的至少一种。

本发明还提供一种上述含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的制备方法，具体包括以下步骤：

(1)将脂质和溶剂混合均匀，形成脂质溶液；

(2)将植物提取物、复合小分子活性多肽、乳化剂加入缓冲溶液中，溶解完全，加热搅拌下加入脂质溶液，并持续搅拌，冰水浴下超声处理，过微孔滤膜，得到含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

所述加热搅拌优选为30～50℃，搅拌速率为100～600rpm；更优选为30～ 40℃，搅拌速率为100～300rpm。

所述持续搅拌的时间优选为0.5～3h；更优选为0.5～1h。

所述超声处理的时间优选为1～30min；更优选为1～10min。

本发明的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物利用脂质对有效成分进行充分包封，使组合物有效渗透到皮肤中，利用多种提取物有效成分与多肽分子的协同作用，促进分子活性，显著提高皮肤的弹性，可应用于祛皱产品中。

附图说明

图1为透射电镜下脂质体的外观。

图2为含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的透皮吸收测试图。

图3为使用配方产品后皮肤弹性测试结果图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中使用的试剂均可从商业渠道获得。

实施例1

5克二棕榈酰卵磷脂和5克胆固醇加入到20mL乙醇中，分散溶解均匀，得到脂质溶液；

将1克的桃花提取物、0.5克的当归提取物、0.5克的甘松提取物、0.1克乙酰六肽-8和0.1克棕榈酰三肽-5加入到含有2克吐温80的150克浓度为2％的磷酸盐缓冲溶液中，分散溶解均匀；将其置于100rpm的搅拌速度和40℃的水浴中，将脂质溶液缓慢注入，注入完成后，保持相同条件持续搅拌0.5小时；冰水浴超声1分钟，通过微孔滤膜，得到含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

实施例2

5克磷脂酰胆碱、7克胆固醇、8克二棕榈酰卵磷脂加入到26mL乙醇和甘油的混合溶剂中(v/v＝1:1)，分散溶解均匀，得到脂质溶液；

将1克的桃花提取物、3克的当归提取物、2克的甘松提取物、0.2克乙酰六肽-8和0.1克棕榈酰三肽-5加入到含有2克吐温80和2克斯盘80的150克浓度为2.5％的磷酸盐缓冲溶液中，分散溶解均匀；将其置于200rpm的搅拌速度和40℃的水浴中，将脂质溶液缓慢注入，注入完成后，保持相同条件持续搅拌1小时；冰水浴超声1分钟，通过微孔滤膜，得到含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

实施例3

12克胆固醇、12克大豆卵磷脂加入到30mL乙醇和1,3-丁二醇的混合溶剂中(v/v＝1:1)，分散溶解均匀，得到脂质溶液；

将5克的桃花提取物、8克的当归提取物、7克的甘松提取物、0.2克乙酰六肽-8、0.2克棕榈酰三肽-5和0.2克棕榈酰五肽-3加入到含有2克吐温80和 2克斯盘80的150克浓度为3％的磷酸盐缓冲溶液中，分散溶解均匀；将其置于200rpm的搅拌速度和40℃的水浴中，将脂质溶液缓慢注入，注入完成后，保持相同条件持续搅拌1小时；冰水浴超声3分钟，通过微孔滤膜，得到含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

实施例4

15克胆固醇、10克蛋黄卵磷脂和5克大豆卵磷脂加入到33mL乙醇和丙二醇的混合溶剂中(v/v＝2:1)，分散溶解均匀，得到脂质溶液；

将10克的桃花提取物、7克的当归提取物、7克的甘松提取物、0.3克乙酰谷氨酰七胜肽-3、0.3克乙酰基八肽-1和0.2克棕榈酰五肽-3加入到含有2 克吐温80和2克斯盘80的145克浓度为2％的磷酸盐缓冲溶液中，分散溶解均匀；将其置于200rpm的搅拌速度和30℃的水浴中，将脂质溶液缓慢注入，注入完成后，保持相同条件持续搅拌1小时；冰水浴超声4分钟，通过微孔滤膜，得到含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

实施例5

15克胆固醇、15克二棕榈酰磷脂酰甘油和10克蛋黄卵磷脂加入到40mL 乙醇和甘油的混合溶剂中(v/v＝1:1)，分散溶解均匀，得到脂质溶液；

将10克的桃花提取物、15克的当归提取物、5克的甘松提取物、0.3克棕榈酰六肽-19、0.3克棕榈酰寡肽-1和0.4克棕榈酰五肽-3加入到含有4克吐温80和2克斯盘80的100克浓度为2％的磷酸盐缓冲溶液中，分散溶解均匀；将其200rpm的搅拌速度和30℃的水浴中，将脂质溶液缓慢注入，注入完成后，保持相同条件持续搅拌1小时；冰水浴超声4分钟，通过微孔滤膜，得到含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

效果实施例1：性能测试

(1)提质体形态观察

取实施例5样品，使用透射电子显微镜对样品进行观察，脂质体的形态如图1所示。

(2)脂质体包封率测试

取适量的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，置于离心管中，高速离心(15000r/min)15分钟，取上清液，通过HPLC检测上清液中游离物质的含量，通过下列公式进行计算，对实施例1～5的样品进行检测，结果如表1：

表1含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的包封率

样品	包封率％
		实施例1	61.0
实施例2	65.0
		实施例3	69.0
实施例4	72.0
		实施例5	78.0

从上述检测结果可以看出，本发明组合物中的脂质体具有较好的包封率。

(3)透皮吸收性能测试

取健康小鼠的腹部皮肤，剪去毛，除去皮下组织和脂肪，用生理盐水洗净，得到离体小鼠皮肤组织，以磷酸盐缓冲溶液(PBS)作为接收液，将皮肤组织固定在扩散池中，在供药池中加入一定量的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，将接收池置于36℃恒温水浴中，平衡一定时间后，开始计时，分别在1、2、4、8、12小时从扩散池中取样测定并补充等量等温的磷酸盐缓冲溶液(PBS)，通过HPLC简册并计算累积透过量，同时以实施例1和实施例2不进行脂质体化的有效物组合作为对比例1和对比例2，透皮吸收性能测试结果如下表2所示：

表2含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的透皮吸收性能

从上述结果可以看出通过脂质体包裹后，本发明组合物的有效物透皮性能有显著提高。

为了进一步说明本发明的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的透皮吸收性能，使用荧光标记对所属脂质体进行标记，并对试验小鼠进行涂抹测试，对小鼠皮肤进行组织切片，并使用激光共聚焦显微镜观察渗透途径，结果见图2。从观察结果可知，本发明的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物能有效地渗透进皮肤中。

效果实施例2：在祛皱产品中的应用

以实施例5得到的组合物作为原料添加在祛皱产品中应用

(1)添加了本发明包含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的祛皱保湿面霜的制备工艺如下：

表3祛皱保湿面霜的配方

1、预配D相，备用；

2、C相，加热至78～80℃，搅拌熔成液体，加入B相，搅拌熔成液体，保温，备用；

3、A相，均质下，将粉料缓慢地洒入去离子水中，均质至完全分散均匀后，加入预配好的D相，加热至82～85℃，均质1～3min，保温消毒，真空消泡，备用；

4、真空下，边弱均质，边将C+B相缓慢抽入A+D相中，加完后，再提速至中-高速，均质3～8min，至完全乳化均匀，消泡后降温；

5、降温至50℃，用适当的NaOH调节pH至6.00～7.00；

6、降温至45℃，加入F相，充分搅拌均匀；

7、取样，检测合格后，过滤出料。

以不添加含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的配方产品为对照组，以实施例1～5作为F相添加使用作为配方1～5，同时以实施例5中的植物提取成分和多肽成分分别作为F相添加使用作为配方6和配方7。

(2)使用观察

对配方在人群中使用进行功效评价，观察使用者在使用用过程中皮肤各指标的变化情况，选取年龄段在30～40岁的女性，按照规定流程使用配方产品，在0天、7天、14天、28天、对使用者的皮肤进行测试评估。

测试仪器：德国Courage+Khazaka公司制造的皮肤弹性测试仪 ReviscometerRV600。

试验方法：在使用前对使用者的相同脸部区域进行清洗，在脸部左右两侧选定对称约5×5cm²大小区域作为试验区，在脸部左边涂抹效果实施例的祛皱产品，在脸部右边涂抹等量的对照品，对照品与实施例相比，对照品不添加含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，连续每天使用。

通过皮肤弹性测试仪测试试验者脸部皮肤弹性变化如图3所示，由图可知，R2值为一个反映皮肤弹性的参数，R2值越高，皮肤弹性越好，结果显示使用添加含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的祛皱产品，皮肤弹性有显著提高，而且比单独使用植物提取物或单独使用多肽成分具有更好的效果。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，其特征在于包括以下重量百分数的组分：植物提取物1～15％；复合小分子活性多肽0.1～0.5％；脂质5～20％；乳化剂1～3％；缓冲溶液50～75％；溶剂10～20％；

所述的植物提取物为桃花提取物、当归提取物和甘松提取物中的至少一种；

所述的复合小分子活性多肽选自乙酰六肽-8、乙酰谷氨酰七胜肽-3、乙酰基八肽-1、棕榈酰六肽-19、棕榈酰寡肽、棕榈酰三肽-5和棕榈酰五肽-3中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，其特征在于：所述的脂质选自胆固醇、二棕榈酰卵磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰胆碱和二棕榈酰磷脂酰甘油中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，其特征在于：所述桃花提取物选自碧桃花、绛桃花、绯桃花和紫叶桃花的提取物中的至少一种；所述的当归提取物选自东当归、欧当归和云南野当归的提取物中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，其特征在于：所述的桃花提取物为采用亚临界萃取或超声提取得到的提取物；

所述的当归提取物为采用亚临界萃取或超声提取得到的提取物；

所述的甘松提取物为采用亚临界萃取或水蒸气蒸馏提取得到的提取物。

5.根据权利要求1所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，其特征在于：所述桃花提取物中的总多酚含量大于等于5mg/g；所述当归提取物的阿魏酸含量大于等于80mg/g；所述甘松提取物的总黄酮含量大于等于60mg/g。

6.根据权利要求1所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物，其特征在于：所述的乳化剂选自吐温80、斯盘80和单硬脂酸甘油酯中的至少一种；所述的缓冲溶液选自磷酸盐缓冲溶液、Tris缓冲溶液或甘氨酸-HCl缓冲溶液；所述的溶剂选自乙醇、乙二醇、丙二醇、异丙醇、1,3-丁二醇和甘油中的至少一种。

7.一种权利要求1～6任一项所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：

(1)将脂质和溶剂混合均匀，形成脂质溶液；

(2)将植物提取物、复合小分子活性多肽、乳化剂加入缓冲溶液中，溶解完全，加热搅拌下加入脂质溶液，并持续搅拌，冰水浴下超声处理，过微孔滤膜，得到含有植物提取物复合多肽脂质体组合物。

8.根据权利要求7所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的制备方法，其特征在于：所述加热搅拌为30～50℃，搅拌速率为100～600rpm；所述持续搅拌的时间为0.5～3h；所述超声处理的时间为1～30min。

9.根据权利要求7所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物的制备方法，其特征在于：所述加热搅拌为30～40℃，搅拌速率为100～300rpm；所述持续搅拌的时间为0.5～1h；所述超声处理的时间为1～10min。

10.权利要求1～6任一项所述的含有植物提取物复合多肽脂质体组合物在祛皱产品中的应用。