CN107929324A - 负载海参水煮液提取物脂质体及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药、化妆品技术领域，公开了一种负载海参水煮液提取物脂质体及其制备方法，所述脂质体载体负载为海参水煮液提取物，其具有抗真菌、抗炎、抗病毒、抗辐射等生物活性以及抗衰老、抗氧化、美白等多重护肤功效，所述脂质体通过薄膜分散联合冻融法由海参水煮液提取物、磷脂材料、胆固醇和乳化剂制备而成。本发明将海参水煮液提取物制备成脂质体，克服了现有海参水煮液提取物在特殊药物和功能性化妆品制备中的不足，提高海参水煮液提取物的稳定性，去除海参水煮液提取物的颜色和气味，该制备方法简单可控、重复性好，使其更有利于工业化生产。

Description

负载海参水煮液提取物脂质体及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药、化妆品技术领域，特别涉及一种海参水煮液提取物的脂质体及其制备方法。
背景技术
海参水煮液是海参加工过程中产生的大量富含海参皂苷、海参多肽、海参多糖等多种活性物质的废弃液，过去常作为废液排放，会造成资源浪费和环境污染。
近年来，海参水煮液的潜在经济价值备受人们的关注，综合开发了其在医药、化妆品、食品等领域中的应用。中国专利201510020329.9公开了一种用海参水煮液制备口服液的方法，采用废弃的海参水煮液为原料，经过除重金属和杂质、浓缩除不溶物、添加中药煎煮液、与海参酶解液相配比等步骤，制成适用于不同人群的口服液。中国专利201510021389.2公开了一种用海参水煮液制备营养剂的方法，以海参水煮液为原料，通过除去重金属和杂质后，经过浓缩除去不溶物，同时添加海参酶解液，制成颗粒、干膏的制剂。中国专利201610136992.X公开了一种含海参水煮液提取物的美白护肤品及其制备方法，开创了海参水煮液提取物在护肤品领域的新用途。海参水煮液提取物是以废弃海参水煮液为原料，经离心、微滤、超滤、树脂吸附、洗脱、旋蒸、干燥等操作制备的干粉状物质，具有抗真菌、抗炎、抗病毒、抗辐射等生物活性以及抗衰老、抗氧化、美白等多重护肤功效，可应用于一些特殊药物和功能性化妆品的制备中，但因海参水煮液提取物有一定颜色和气味，故限制了其在医药、化妆品等领域中的应用。
脂质体是由磷脂双分子层构成的亲水性囊泡，自英国科学家Bangham和Standish于1965年发现以来，以其独特的结构和功能广泛应用于医药和化妆品领域。在医药领域，脂质体能够延长药物的作用时间、降低药物的刺激性、去除药物的颜色和气味，具有给药剂量小、安全性能高等优越特性；在化妆品领域，脂质体作为活性物质的载体，可以提高被包封活性物质的稳定性、延长活性物质的功效时间、降低活性物质的刺激性，以及有效去除活性物质的颜色和气味。目前，国内外对脂质体在医药和化妆品领域中的应用成果已经申请了大量的专利，但负载海参水煮液提取物脂质体的包封国内外尚未见报道。将海参水煮液提取物进行包封，能够提高其稳定性，并有效去除海参水煮液提取物的颜色和气味。
发明内容
本发明目的在于通过将海参水煮液提取物(见中国专利公开号201610136992.X的制备方法)进行包封，提供一种负载量高、稳定性好的医药级和化妆品级负载海参水煮液提取物脂质体制剂，有效解决现有技术中海参水煮液提取物的有色有味、难以直接应用于医药和化妆品领域等问题，实现海参水煮液提取物的深度开发。
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供的技术方案是：
本发明目的在于提供一种负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，包括以下具体步骤：
S1、称取磷脂材料、胆固醇和乳化剂1，将其混合后在30℃～50℃溶于有机溶剂，再去除有机溶剂直至底部形成均匀脂质薄膜；
S2、称取海参水煮液提取物和去离子水，将其混合，在30℃～60℃、速率为150r/min～750r/min下搅拌10～30min，获得澄清透明的海参水煮液提取物水溶液；
S3、称取乳化剂2和缓冲溶液，将乳化剂2、1/3～1/2缓冲溶液和步骤S2获得的海参水煮液提取物水溶液分别加入到步骤S1的底部形成均匀脂质薄膜中，蒸发10～30min、10℃～40℃超声10～40min至形成透明溶液，最后加入剩余缓冲溶液形成混悬液；
S4、将步骤S3获得的混悬液于-40℃～-10℃冷冻6h～24h后，在10℃～25℃超声5～15min即得负载海参水煮液提取物脂质体。
上述原料组分按其质量百分比计为：
优选方式下，上述原料组分按其质量百分比计为：
更为优选方式下，上述原料组分按其质量百分比计为：
优选方式下，所述磷脂材料选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的一种或两种。
优选方式下，所述乳化剂1选自司盘20、司盘60、司盘80的一种或两种；所述乳化剂2选自吐温20、吐温60、吐温80的一种或两种。
优选方式下，所述缓冲溶液为pH值4～8的PBS缓冲溶液。
优选方式下，所述步骤S1有机溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚中的一种或两种。
优选方式下，所述步骤S1去除有机溶剂过程采用旋转蒸发方式，所述旋转蒸发的条件为：真空度-0.05MPa～-0.1Mpa，蒸发温度为20℃～50℃。
本发明的又一目的在于提供利用上文方法得到的负载海参水煮液提取物脂质体。
优选方式下，所述负载海参水煮液提取物脂质体颗粒的平均粒径为200nm～400nm。
本发明的又一目的在于提供一种负载海参水煮液提取物的脂质体在医药和化妆品领域中的应用。
优选方式下，一种负载海参水煮液提取物脂质体用于制备特殊药物制剂或美白抗衰老化妆品。
本发明将纳米脂质体制备技术应用到医药和化妆品领域，并改进了传统制备工艺的缺陷。脂质体是由磷脂双分子层构成的亲水性囊泡。脂质体作为药物的载体，能够提高药物的治疗指数、降低药物的毒性和刺激性、去除药物的颜色和气味；脂质体作为化妆品活性物质的载体，可以提高活性物质的稳定性、延长活性物质的功效时间。因而，利用纳米脂质体技术对海参水煮液提取物进行包封，提高其稳定性，并去除其颜色和气味可有效解决海参水煮液提取物在药品和化妆品制备中有色有味的问题。
相对于现有技术中的方案，本发明的优点和积极效果为：
1、本发明的载体负载为海参水煮液提取物，其具有抗真菌、抗炎、抗病毒、抗辐射等生物活性以及抗衰老、抗氧化、美白等多重护肤功效，将其与磷脂材料、胆固醇和乳化剂通过薄膜分散联合冻融法制备脂质体。
2、本发明的负载海参水煮液提取物脂质体是可控的，可以通过调节磷脂原料与胆固醇的质量比、PBS缓冲溶液的pH值、加水量等条件制备出平均粒径为200nm～400nm的脂质体。
3、本发明制备的负载海参水煮液提取物脂质体提高了海参水煮液提取物的稳定性。脂质体将药物或活性物质包封在磷脂双分子层中，可避免光、氧、酸、碱等因素对被包封物的破坏，从而提高其体内、外的稳定性。
4、本发明制备的负载海参水煮液提取物脂质体有效去除了海参水煮液提取物的颜色和气味，解决了其难以直接应用于医药和化妆品领域等难题，实现了海参水煮液提取物在医药和化妆品领域的深度开发。
5、本发明的负载海参水煮液提取物脂质体制备方法简单可控、重复性好，可将其加入药品和化妆品制剂中或直接进行使用，更有利于工业化生产。
附图说明
图1是负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法流程图；
图2是实施例1中负载海参水煮液提取物脂质体的平均粒径分布。
具体实施方式
以下为本发明的具体实施实例，用于进一步说明本发明的优点和特色，但本发明并不受以下实施实例的限制。
实施例1
原料组分的配方如下：
如图1所示，该实施例的制备具体步骤如下：
1、按配方比例称取大豆卵磷脂、胆固醇和司盘80，将原料混合后在30℃溶于乙醚，旋转蒸发去除乙醚直至蒸发容器底部形成均匀脂质薄膜；
2、按配方比例称取海参水煮液提取物和去离子水，将原料混合、置于搅拌速率为500r/min的恒温搅拌器中30℃搅拌20min，获得澄清透明的海参水煮液提取物水溶液；
3、按配方比例称取吐温80和PBS缓冲溶液(pH值＝7.6)，将吐温80、1/2PBS缓冲溶液和步骤2获得的海参水煮液提取物水溶液分别加入步骤1的底部形成脂质薄膜的蒸发容器，蒸发15min、30℃超声20min至形成透明溶液，最后加入剩余缓冲溶液形成混悬液；
4、将步骤3所述混悬液于-20℃冷冻24h，随后在20℃超声10min即得负载海参水煮液提取物脂质体，该脂质体通过Zetasizer 3000HSA型激光粒度仪测得其平均粒径为277.5nm；包封率的计算：由于海参水煮液提取物中海参皂苷为主要组分，以海参皂苷为检测指标，分离脂质体，测定游离的海参总皂苷含量，根据下式计算负载海参水煮液提取物脂质体包封率(Q)：Q＝(W总-W游)×100％/W总，其中W游是游离海参总皂苷含量，W总是投入的海参总皂苷含量，该脂质体包封率为60.1％。
实施例2
原料组分的配方如下：
如图1所示，该实施例的制备具体步骤如下：
1、按配方比例称取大豆卵磷脂、胆固醇和司盘80，将原料混合后在40℃溶于乙醚，旋转蒸发去除乙醚直至蒸发容器底部形成均匀脂质薄膜；
2、按配方比例称取海参水煮液提取物和去离子水，将原料混合、置于搅拌速率为300r/min的恒温搅拌器中30℃搅拌20min，获得澄清透明的海参水煮液提取物水溶液；
3、按配方比例称取吐温80和PBS缓冲溶液(pH值＝6.5)，将吐温80、1/2PBS缓冲溶液和步骤2获得的海参水煮液提取物水溶液分别加入步骤1的底部形成脂质薄膜的蒸发容器，蒸发15min、30℃超声20min至形成透明溶液，最后加入剩余缓冲溶液形成混悬液；
4、将步骤3所述混悬液于-20℃冷冻12h，随后在20℃超声10min即得负载海参水煮液提取物脂质体，该脂质体通过Zetasizer 3000HSA型激光粒度仪测得其平均粒径为311.1nm；包封率的计算：由于海参水煮液提取物中海参皂苷为主要组分，以海参皂苷为检测指标，分离脂质体，测定游离的海参总皂苷含量，根据下式计算负载海参水煮液提取物脂质体包封率(Q)：Q＝(W总-W游)×100％/W总，其中W游是游离海参总皂苷含量，W总是投入的海参总皂苷含量，该脂质体包封率为52.7％。
实施例3
组合物原料组分的配方如下：
如图1所示，该实施例的制备具体步骤如下：
1、按配方比例称取大豆卵磷脂、胆固醇和司盘80，将原料混合后在40℃溶于乙醚，旋转蒸发去除乙醚直至蒸发容器底部形成均匀脂质薄膜；
2、按配方比例称取海参水煮液提取物和去离子水，将原料混合、置于搅拌速率为600r/min的恒温搅拌器中50℃搅拌15min，获得澄清透明的海参水煮液提取物水溶液；
3、按配方比例称取吐温80和PBS缓冲溶液(pH值＝6.5)，将吐温80、1/3PBS缓冲溶液和步骤2获得的海参水煮液提取物水溶液分别加入步骤1的底部形成脂质薄膜的蒸发容器，蒸发20min、35℃超声20min至形成透明溶液，最后加入剩余缓冲溶液形成混悬液；
4、将步骤3所述混悬液于-40℃冷冻6h，随后在25℃超声10min即得负载海参水煮液提取物脂质体，该脂质体通过Zetasizer 3000HSA型激光粒度仪测得其平均粒径为348.1nm；包封率的计算：由于海参水煮液提取物中海参皂苷为主要组分，以海参皂苷为检测指标，分离脂质体，测定游离的海参总皂苷含量，根据下式计算负载海参水煮液提取物脂质体包封率(Q)：Q＝(W总-W游)×100％/W总，其中W游是游离海参总皂苷含量，W总是投入的海参总皂苷含量，该脂质体包封率为40.2％。
实施例4
原料组分的配方如下：
如图1所示，该实施例的制备具体步骤如下：
1、按配方比例称取大豆卵磷脂、胆固醇和司盘80，将原料混合后在30℃溶于乙醚，旋转蒸发去除乙醚直至蒸发容器底部形成均匀脂质薄膜；
2、按配方比例称取海参水煮液提取物和去离子水，将原料混合、置于搅拌速率为350r/min的恒温搅拌器中30℃搅拌20min，获得澄清透明的海参水煮液提取物水溶液；
3、按配方比例称取吐温80和PBS缓冲溶液(pH值＝4.1)，将吐温80、1/2PBS缓冲溶液和步骤2获得的海参水煮液提取物水溶液分别加入步骤1的底部形成脂质薄膜的蒸发容器，蒸发15min、30℃超声20min至形成透明溶液，最后加入剩余缓冲溶液形成混悬液；
4、将步骤3所述混悬液于-20℃冷冻12h，随后在25℃超声10min即得负载海参水煮液提取物脂质体，该脂质体通过Zetasizer 3000HSA型激光粒度仪测得其平均粒径为358.5nm；包封率的计算：由于海参水煮液提取物中海参皂苷为主要组分，以海参皂苷为检测指标，分离脂质体，测定游离的海参总皂苷含量，根据下式计算负载海参水煮液提取物脂质体包封率(Q)：Q＝(W总-W游)×100％/W总，其中W游是游离海参总皂苷含量，W总是投入的海参总皂苷含量，该脂质体包封率为31.5％。
实施例5
原料组分的配方如下：
如图1所示，该实施例的制备具体步骤如下：
1、按配方比例称取二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇和司盘60，将原料混合后在40℃溶于乙醇，旋转蒸发乙醇直至蒸发容器底部形成均匀脂质薄膜；
2、按配方比例称取海参水煮液提取物和去离子水，将原料混合、置于搅拌速率为750r/min的恒温搅拌器中50℃搅拌25min，获得澄清透明的海参水煮液提取物水溶液；
3、按配方比例称取吐温60和PBS缓冲溶液(pH值＝7.6)，将吐温60、1/2PBS缓冲溶液和步骤2获得的海参水煮液提取物水溶液分别加入步骤1的底部形成脂质薄膜的蒸发容器，蒸发30min、30℃超声30min至形成透明溶液，最后加入剩余缓冲溶液形成混悬液；
4、将步骤3所述混悬液于-20℃冷冻24h，随后在20℃超声15min即得所述负载海参水煮液提取物脂质体，该脂质体通过Zetasizer 3000HSA型激光粒度仪测得其平均粒径为290.1nm；包封率的计算：由于海参水煮液提取物中海参皂苷为主要组分，以海参皂苷为检测指标，分离脂质体，测定游离的海参总皂苷含量，根据下式计算负载海参水煮液提取物脂质体包封率(Q)：Q＝(W总-W游)×100％/W总，其中W游是游离海参总皂苷含量，W总是投入的海参总皂苷含量，该脂质体包封率为44.0％。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：
S1、称取磷脂材料、胆固醇和乳化剂1，将其混合后在30℃～50℃溶于有机溶剂，再去除有机溶剂直至底部形成均匀脂质薄膜；
S2、称取海参水煮液提取物和去离子水，将其混合，在30℃～60℃、速率为150r/min～750r/min下搅拌10～30min，获得澄清透明的海参水煮液提取物水溶液；
S3、称取乳化剂2和缓冲溶液，将乳化剂2、1/3～1/2缓冲溶液和步骤S2获得的海参水煮液提取物水溶液分别加入到步骤S1的底部形成均匀脂质薄膜中，蒸发10～30min、10℃～40℃超声10～40min，最后加入剩余缓冲溶液形成混悬液；
S4、将步骤S3获得的混悬液于-40℃～-10℃冷冻6h～24h后，在10℃～25℃超声5～15min即得负载海参水煮液提取物脂质体；
上述原料组分按其质量百分比计为：
2.根据权利要求1所述的负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，其特征在于，上述原料组分按其质量百分比计为：
3.根据权利要求1所述的负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，其特征在于，所述磷脂材料选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，其特征在于，所述乳化剂1选自司盘20、司盘60、司盘80的一种或两种；所述乳化剂2选自吐温20、吐温60、吐温80的一种或两种。
5.根据权利要求1所述的负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液为pH值4～8的PBS缓冲溶液。
6.根据权利要求1所述的负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1有机溶剂选自甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚中的一种或两种。
7.根据权利要求1所述的负载海参水煮液提取物脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1去除有机溶剂过程采用旋转蒸发方式，所述旋转蒸发的条件为：真空度-0.05MPa～-0.1MPa，蒸发温度为20℃～50℃。
8.如权利要求1-7所述的方法制备的负载海参水煮液提取物脂质体。
9.根据权利要求8所述的负载海参水煮液提取物脂质体，其特征在于，所述负载海参水煮液提取物脂质体颗粒的平均粒径为200nm～400nm。
10.如权利要求9所述负载海参水煮液提取物脂质体在医药和化妆品领域的应用。
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